PT92960A - Processo para a preparacao de peptideos com um grupo ester de sulfato(ir 2826c)e de composicoes farmaceuticas que o contem - Google Patents

Description

Descrição referente à patente de invenção de Fisons Corporation, norte-americana, industriai e co merciai, estabelecida em Jeffer-son Road, PO Box 1710, Roehester New York 14663, Estados Unidos da América, (inventor: Dr. James D Rosamond, residente nos E.U. hm), para "PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE PEPTlDEOS COM UM GRUPO SSTER DE SULFATO (IR 28260 E DE COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS QUE OS CONTEM".

DESCRIÇÃO h presente invenção refere-se a novos peptídeos com grupos éster de sulfato, a composições farmacêuticas que os contêm, a processos para a sua preparação e ao uso de tais compostos e composições no tratamento da obesidade. São conhecidos determinados peptídeos que inibem a alimentação, por exemplo, CCK-8, que têm a estrutura Asp-Tir(SOgH)-Met-Gly-Trp-Met-Asp-Phe-NH2 e ceruletide, que tem a estrutura

Glp-Gln-Asp-Tyr(SO^H)-Trr-Gly-Trp-Met-Asp-Phe-NH^. Encontrámos agora um grupo de novos peptídeos que possuem surpreendentemente propriedades vantajosas em comparação com as dos compostos conhe eidos de estrutura semelhante.

De acordo com a presente invenção propor cionam-se compostos da formula I: - 1 -

r

Q-T-M-G-W-X-J-P-Z I em que Q representa H-Asp, H~ (3 Αερ, H-DAsp, For, Suc ou rVchoco, I representa Iyr«S03H), M representa Ile, G representa Gly, D-Ala ou Pro, W representa Trp, X representa Ahx J representa Asp, P representa MePhe, Z representa NR^R*, 12¾ Â R , R , R e R são independentemente uns dos outros B ou alquilo inferior, e adicionalmente a) Q e T podem representar em conjunto Hpp(SO^H), b) quando Q representa fi*^Asp, X pode representar

Ile, c) quando G representa D-Ala, M e X podem ambos repre sentar Met d) quando Q representa H-DAsp, então M e X podem ambos representar Ile conquanto que P represente Phe, e) quando Q representa H-Asp e G representa Pro, M e X podem ambos representar Met, e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis·

De acordo com a invenção proporciona-se também um processo para a preparaçãp de compostos da fórmula I ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável, caracterizado por compreender as fases de

a) sulfatar um composto correspondente da fórmula II

- 3* - M - G - W - X - ar - p - ρλ II

p UH p C em que Qp representa Q, P^-H-Asp, Ρβ- (3 Asp ou P^-DAsp, no qual Pn representa um grupo protector de amina, P_ representa Z ou um grupo protector de carboxilo, | TQH representa tirosina, 1 Jp representa J ou um aspartato com o carboxilo protegido e M, — 2 —

f G, W, X, J e P possuem os significados anteriormente definidos, com um reagente de sulfatação

e, guando pretendido ou necessário, remover quaisquer grupos protectores do composto resultante ou b) remover um ou mais grupos protectores dum composto correspon dente da formula III

Q-T-M~G-W-X-J-P-P„ IXI P P c «a q»e Qp* »ct ** M, G, W, P, e X possuem os significados dej finidos anteriormente, conquanto que pelo menos um dos grupos Qp, Pc ou re presente ou contenha um grupo protector e quando pretendido ou necessário converter o composto resultante da fórmula X num seu sal farmaceuticamente aceitável ou vice-ver sa.

Na variante o processual a), o agente de sulfatação pode ser por exemplo, trióxido de enxofre ou um seu complexo, tal como o complexo de trióxido de enxofre com piridi-na. Nõe preferimos particularmente realizar a sulfatação num sol vente aprótico polar, por exemplo em dimetilformamida ou piridi-na. A reacção é de preferência realizada usando um excesso de agente de sulfatação, por exemplo um excesso molar de 10 a 40 ve zes«

Nas variantes processuais a) e b), os grupos protectores para peptideos e os processos para a sua remo ção são bem conhecidos da especialidade, conforme descrito por exemplo em T. W. Greene, Proteetive Groups in Organic Synthesis,

Wiley-Interscience (1981). A escolha dos grupos protectores e dos processos empregues para a sua remoção vai depender, entre outros, do processo de síntese utilizado para a preparação do peptídeo da fórmula XXX e dos ácidos assinados nos peptideos. Os grupos protectores de carboxilo adequados que P_ pode represen- c tar incluem, por exemplo, metilo, terc-butilo, benzilo e 4-meto-xibenzilo. Preferimos particularmente o grupo terc-butilo (t-Bu), que pode ser rapidamente removido por hidrólise ácida suave. Gru pos semelhantes podem ser usados para proteger o grupo fenol na * tirosina e o grupo carboxilo em aspartato.

^r.-.r.trxnai

Quando o peptídeo ê preparado usando têc nicas de fase sólida# por exemplo, as técnicas nas quais a extre midade do carboxilo do peptídeo estã ligada a uma resina de fase sólida, a ligação do peptídeo â resina aetua como um grupo de protecção de carboxilo* A cisão da ligação peptidilo-resina vai desproteger o terminal carboxilo dos compostos da fórmula 11* Apesar de o éster de sulfato que contém os produtos terminais de peptídeo desta invenção serem amidas de terminal de carboxilo, a ligação química que conecta a cadeia de peptídeo ã resina deve ser tal que a sua cisão com reagentes adequados proporciona rapi damente amidas. Devido ã labilidade do grupo éster de sulfato pe rante ácidos fortes (por exemplo ácido fluorídrico líquido), a ligação peptidilo-resina pode ser cindível quer com ácidos fracos (por exemplo, tratamento rápido com ácido trifluoroacético, TFA) e/ou nucleõfilos (por exemplo, amónia, aminas, hidróxidos e alcõxidos)*

Entre os derivados de resinas adequados podem ser mencionados oximetil-poliestireno, 4-(oximetilfenil)-- (CH2) n-aminometil-poliestireno (n= 0 a 3) e 4- (oximetilfenil) --oximetil-poliestireno* Dum modo semelhante as resinas de poli-acrilamida substituídas são igualmente bem adaptadas como as citadas resinas baseadas em poliestireno, Ό termo "poliestirenol inclui copolímeros com quantidades minoritárias, usualmente 1%, de monômeros não-saturados tal como divinilbenzeno* O 4-(oximetilfenil)-C^CO-aminometil-po-liestireno (aqui referido como 4-(oximetilfenil)-acetamidometil--poliestireno ou OCI^-Pam-resina] é particularmente preferido pa ra a geração de amidas de peptídeos. Esta ligação pode rapidamen te ser cindida para dar os peptídeos da fórmula I por reacção com soluções metanõlicas de amónia, alquilaminas ou dialquilami-nas conforme pretendido.

Entre os grupos protectores de araina ade quados que Pn pode representar incluem-se, por exemplo, benzilo-xicarbonilo, que pode rapidamente ser removido por hidrogenólise ou por ácido bromldrico em ácido acético; t-butiloxicarbonilo, (Boc), que é removido deixando o peptídeo em repouso em acido ! trifluoroacético frio; Fmoc, que pode ser removido por tratamen-1 to com piperidina diluída (20% em DMF); (4-metoxibenzil)-oxicar- 4

< t bonilo e 2-nitrofenilsulfenilo· Os grupos Boc e Fmoc são particularmente preferidos*

Os peptídeos da formula III podem ser preparados por sulfatação dum peptideo protegido correspondente da fórmula XI*

Os peptídeos não-protegidos da fórmula IX podem ser preparados por desprotecgão dum peptideo correspondente da fórmula II*

Os novos peptídeos protegidos da fórmula II e os seus novos intermediários podem ser preparados por processos bem conhecidos na especialidade, por exemplo, podem ser preparados combinando ácidos aminados individuais numa resina de fase sólida por meio de uma técnica de passo a passo, ou em alternativa, combinando grupos de ácidos aminados numa resina de fase sólida para dar o intermediário de peptidil-resina desejado, Tais adições, como é sabido, são realizadas protegendo o grupo amina do ácido aminado ou grupo de ácidos aminados, convertendo--o, por exemplo, no seu terc-butiloxiearbonilo (Boc) ou no derivado 9-fluorenilmetiloxicarbonilo (Fmoc), e depois activando o grupo carboxílico desse ácido aminado ou grupo de ácidos aminados convertendo-os, por exemplo, no respectivo 1-hidroxibenzo-triazol (HQBt) ou derivado do éster de N-hidroxissucciniraida (HOSu)· Este intermediário protegido activado é então deixado a reagir com um ácido aminado ligado a uma resina ou um peptidil--resina com um grupo amina livre, prolongando deste modo a cadeia de peptideo para proporcionar a peptidil-resina da fórmula II, em que Qp possui um grupo protector adequado, por exemplo, Boc ou Fmoc* 0 ácido aminado definido pelo grupo P da fórmula II pode ser ligado ao OCH^-pam-resina de vários modos* (a) For exemplo, pode fazer-se reagir N-metilfenilalanina protegida por Boc com um éster 4-(bromometil)-fenilacetato adequado (por exemplo, éster de fenacilo) e processar-se posteriormente para proporcionar o ácido Boc-MePhe-(4-oximetilfenil)-acético que pode acoplar-se a aminometil-poliestireno para proporcionar

Boc-HePhe-(oximetilfenil)-acetamidometilpoliestireno-(Boc-MePhe--OCH2-Fam-resina)* (b) Em alternativa, é possível acoplar o ácido 4-bromometil) -fenilacético a aminometilpoliestireno para pro- — 5 —

porcionar 4- (bromo-metil) -fenilacetamidometilpoliestireno-- (BrCH^-Pam-resina) que pode reagir com o sal de oésio de Boc--MePhe-OH para dar Boc-Phe-OC^-Pam-resina,.

Entre os grupos de activação adequados pode ser mencionada qualquer combinação de grupos os quais possuem a capacidade de tornar menos reactiva a função ácido do ãci do assinado, tal como cloretos de ácido, anidridos mistos e simétricos, o produto da reacção com uma carbodiimida (por exemplo, diciclo-hexilcarbodiimida, DCC), e ésteres activos (por exemplo, esteres derivados de HOBt, HOSu, 2- ou 4-nitrofenol e 2,4,5-tri-clorofenol). 0 uso de DCC e de ésteres de HOBt e HOSu ê especial mente preferido do ponto de vista do rendimento, da ausência de produtos secundários e da consequente facilidade de purificação·

Foi usado para a síntese da fase solida das amidas de peptideo sulfatadas da presente invenção um sinte-tizador automático de peptídeos. 0 protocolo de acoplamento ã aninometilresina ou â poptidU-OCHj-Eam-resina (1 «mole de azoto disponível), desprotecção, sulfatação, cisão e purificação do produto apresentado no Quadro 1.

Quadro 1, Protocolo para síntese da fase sólida de amidas de peptideo sulfatado (escala de 1 irnnole). O volume de cada fase é de 50 ml na ausência de qualquer outra indicação. Todas as fases de lavagem são repetidas três vezes. Abreviaturas; DCC, diciclo-hexilcarbo-diimida; DCM, diclorcmetanc; DIEÃ, N,N-diisopropiletilamina, DMF, dimetilformamida; HOBt, 1-hidroxibenzotriazolo; TFA, ácido trifluoxoacêtico.

QUADRO 1

Fase Reagente ou solvente Finalidade Tempo de mistura 1 DCM Lavagem 1 ain 2 Ir para Fase 3, 5 ou 8 - mm 3 Adicionar mistura filtrada pre--activada (0oc, 1 h) de acido aminado protegido (ou dipeptídeo protegido, HOBt (4,5 amole), e DCC (3 mmole) em DMF/DCM ls4 Acoplamento de DCC/HOBt pré-activado 2-15 h 4 Ir para Fase 10, 16, 21 ou 26 - - 5 Adicionar ácido aminado protegido (ou dipeptídeo protegido, 3 mmole) e HOBt (4,5 mmole) em 30 ml de DMF/DCM 1:2 e em seguida DCC (3 mole) em àl de DCM Acoplamento de DCC/HOBt pré-activado in situ 2-15 h 6 2-propanol Lavagem 1 min 7 Ir para Fase 4 - tm 8 Adioionar éster aetivado ou anidrido (3 mmole) em DCM, DMF ou mistura destes Acoplamento DCC/HOBt não aetivado 2-15 h 9 Ir para Fase 4 - - 10 DCM Lavagem 1 min 11 Tratar com TFA/anisolo/DCM 49:1:50 Eliminação de BOC e tBU 30 min 12 DCM Lavagem 1 min 13 Tratar com DIEA/DCM 1:19 Neutralizar 1 min 14 DCM Lavagem 1 min 15 ir para Fases 1, 16, 21 ou 26 - - 16 DCM Lavagem 1 min 17 Tratar com piperidina/DMF 1:4 Remoção de Fmcc 3 min 18 Tratar com piperidina/DMF 1:4 Remoção de Fmoc 7 min 19 DMF - em 20 Ir para Fase 15 - - 21 DMF Lavagem 1 min 22 Piridina/DMF 1:2 Lavagem 1 min 23 Adicionar complexo trióxido de enxofre piridina (40 mmole) em 60 ml de piridina/DMF 1:2 Sulfatação 20-24 h - 7 -

Pase Reagente ou solvente

Finalidade Tempo de mistara lavagem 1 min lavagem 1 min Cisão da resina 2-5 dia lavagem 1 min Isolamento - Purificação

24 DMF 25 Ir para Fase 4 26 Metanol 27 Metanol saturado (-20CC) com amónia ou amina xaetanôlica a 20 « (250 ml) 28 Metanol 29 Combinar e concentrar os filtrados das Fases 27 a 28 30 Cromatografar o resíduo em colu na(s) de Amberlite XAD-2 (Rohm and Haas, 2,5x60 cm, gradiente de metanol 0,1 M em amónia), Trisacryl M MEÃS (1KB Inc., 2,5x47 cm, gradiente de bicarbonato de amónio), e/ou P-40 ODS-3 (Whatman, 4,8x50 cm, gradiente de metanol a 0,2% em acetato de amónio) O éster de sulfato que contém peptideos da fórmula (1) preparado deste modo pode ser desmineralizado e purificado pelos métodos usuais· Por exemplo, o produto pode ser purificado por cromatografia de permuta iónica mediante o uso de Trisacryl M DEAE, DEAE-celulose ou semelhantes, cromatografia de partigão com o uso de Sephadex LH-20, Sephadex 6-25 ou semelhantes, cromatografia de fase inversa com o uso de Amberlite XAD-2, ODS-sllica gel ou semelhantes, cromatografia de fase normal com o uso de sílica gel ou semelhantes, ou cromatografia líquida de alta resolução (HPLC).

Procedimentos análogos, em que as reac-ções são realizadas sem a componente da fase sólida (resina), são bem conhecidas na especialidade e bem adaptados â produção , em larga escala· (ver por exemplo, Patente dos E.Q* 3 892 726!« * Os sais dos compostos da fórmula 1 farma — 8 «·

ceuticaraente aceitáveis que podeis ser mencionados incluem sais de bases farmaceuticamente aceitáveis. Os sais de bases incluem os derivados quer de bases orgânicas quer inorgânicas, tal como por exemplo, amónia, hidróxido de sódio, hidróxido de cálcio, hi dróxido de bãrio, hidróxido de tetraetilamónio, etilamina, die-tilamina, trietilamina e semelhantes. 12 3

Quando um ou raais dos grupos R , R , R e R* representam alquilo, estes grupos contem de preferência atê seis átomos de carbono, de modo especialmente preferido atê quatro átomos de carbono. Grupos particulares que podem ser meneio- 1 2 nados incluem metilo e etilo. Om grupo particular que R R CHOCO pode representar ê BuOCO.

Preferimos compostos da fõimula X em que G representa Gly.

Preferimos compostos da fórmula X em que Z representa NH^.

Preferimos compostos da fórmula X em que Q representa (5Asp, For e particularraente Suc.

Om composto da fórmula X particularmente preferido e Suc-Tyr(SO^H)-Ile-Gly-Trp-Ahx-Asp-MePhe-NB^.

Os peptxdecs da fórmula I e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis, são úteis porque possuem activida-de farmacológica em animais; em particular são úteis porque têm a capacidade de inibir a actividade da alimentação nos mamíferos Como um dos resultados eles têm utilidade na prevenção e tratamento da obesidade. A actividade da inibição da alimentação pode ser demonstrada em rates como se segue:

Ratos machos Sprague-Dawley (pesando 300 a 350 g) são engaiolados individualmente e mantidos num ciclo de 12 horas de luz e de escuridão em alternância g são treinados du rante pelo menos 14 dias a alimentarem-se durante um período de três horas no cicio de escuridão mas não nas 21 horas que precedem aquele período de três horas. Ho dia do estudo, ê administra da aos ratos intraperitonealmente uma dose de salina (grupo de comparação) ou de composto em análise (dissolvido em salina; usualmente numa concentração de 0,3 a 300 jug de composto em analise por kg de peso de rato). 0 alimento ê introduzido 10 minutos depois da administração da salina ou do composto em análise. - 3 - -- -* 3~jr

K •aí*

Os compostos em analise são considerados como sendo activos se o grupo em analise consome significafcivamente menos comida que o grupo de comparação de salina durante o período de alimentação, o qual termina quer 0,5 horas quer 3 horas depois da apresentação da comida.

Os peptldeos da presente invenção têm a capacidade de estimular a eontracção da vesícula biliar dos iramí feros. Deste modo, eles também te® utilidade como auxiliares de diagnóstico no exame de raios X da vesícula biliar. O uso dos agentes de eontracção como auxiliares de diagnóstico ê um procedimento médico bem estabelecido.

Os compostos da fórmula I e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis possuem a vantagem de que em certos modelos farmacológicos eles são mais eficazes, mais potentes, ac tuam durante mais tempo, são mais estãveis, particularmente perante a degradação enzimãtica, mais selectivos, menos tóxicos, dão lugar a menos efeitos laterais, por exemplo ausência de eme-se, são mais rapidamente absorvidos, actuam mais depressa ou têm outros efeitos vantajosos comparados com os compostos de estrutu ra similar aos compostos da fórmula 1.

De acordo com a presente invenção propor ciona-se também o uso dos compostos da fórmula 1 e dos seus sais farmaceuticamente aceitáveis na fabricação dum medicamento para uso no tratamento da obesidade.

De acordo com a invenção nós também proporcionamos uma combinação farmacêutica que compreende (de prefe rencia menos de 80%, e ainda de modo especialmente preferido menos de 50% em peso de) um composto da fórmula I ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável, em combinação com um adjuvante, di-luente ou veículo farmaceuticamente aceitável.

As composições podem ser formuladas para administração intraperitoneal, intravenosa, intramuscular, subcu tãnea ou intranasal.

De acordo com a presente invenção, também se proporciona um método âe tratamento da obesidade que compreende administrar uma quantidade eficaz dum composto da fórmu-. la I ou um seu sal farmaceuticamente aceitável a um mamífero com 1 necessidade de um tratamento para a obesidade ou de prevenção da - 10 obesidade. Uma quantidade de composto da fórmula I que pode ser mencionado é a dose de cerca de 0,03 g atê 3 mg por kg de peso corpóreo por dia, quer como dose simples ou dividida por duas a quatro doses* A dose pode variar, dependendo principajL mente das necessidades do paciente e do composto que estã sendo empregue.

Numa representação alternativa para a fórmula X, usada com intuito de abreviatura, os peptideos são também representados de acordo com a representação convencional, por exemplo,

Suc-Tyr (SO^H) -Ile-Gly-Trp-Ahx-Asp-MePhe-NE^, que repre senta o composto da fórmula (1) em que Q é Sue, T é Tyr(SQ^H), H é Xle, G i Gly. W ê Trp, X ê &hxf J ê Asp, P é MePhe e Z é ML,

Todos os ácidos aminados opticamente ac-tivos são da configuração I* na ausência de qualquer outra indica ção.

Quando se representam ácidos aminados, peptideos, grupos protectores, grupos activos, etc. por símbolos na presente memória descritiva e nas reivindicações em anexo, usam-se os símbolos habituais conforme definidos pela IUPAC e IUB ou como são usados na especialidade. Dão-se a seguir exemplos de símbolos.

Ahx acido 2-amino-hexanõico

Ala alanina

Arg arginina

Asn asparagina

Asp ácido aspârtico ^Asp ácido beta-aspãrtico

Boc terc-butiloxicarbonilo DAla D-alanina

Fmoc 9-fluorenilmetiloxicarbonilo

For formilo

Gin glutamina

Glp piroglutamilo

Gly glicina

Hpp 3-(4-hidroxifenil)-propionilo 11

Hpp(SOjH) 3-(O-sulfo-4-oxifenil)-propionilo iBuOCÓ isobutiloxicarbonilo Ile isoleucina Leu leucina Lis lisina MePhe N-metilfenilalanina MePhe-NH: amida de N-metilfenilalanina Met metionina OBt éster de l-benzotriazolilo OCK2-Pam 4- (oximetilfenilí -acetamidometilo OSu éster de succinimidiloxi OtBu éster de terc-butilo Phe fenilalanina Pro prolina resina poliestireno Suc HOOC(CH2)2C0- tBu terc-butilo Thr treonina frp triptofano l?yr tirosina XJyr-NHs amida de tirosina Tyr(S03H) O-sulfotirosina Tyr(S03H)-NH2 amida de O-sulfotirosina

EXEMPLOS A invenção pode ser adicionaImente ilustrada pelos exemplos que se sequem· A síntese de peptídeos, se nada em contrário seja indicado, foi iniciada com 1 miliequivalente de resi na de aminometilo, sendo a resina um copolimero 99:1 em peso de estireno:divinilbenzeno. As reaeções foram realizadas â temperatura ambiente sempre que nada em contrario seja indicado· As fases de lavagem foram realizadas três vezes com 56 ml do solvente especificado se nada em contrário for indicado X. Preparação de intermediários 12 -

Intermediário A

Acido Boe-MePhe-(4-oximetilf enil)-acético A «ma solução de Boc-MePhe-OH (27,93 g) e éster de fenacilo do ácido 4-(bromometilo)-fenilacêtico (33,32 g) em 1000 ml de acetonitrilo adicionou-se fluoreto de potássio di-hidrato (18,28 g). A suspensão foi agitada toda a noite e fil trada e o filtrado foi evaporado ã secura. 0 resíduo, éster de fenacilo do ácido Boc-MePhe-(4-oximetilf enil)-acético, foi dissoj_ vido em ácido acético a 85% (1200 ml), tratado com enxofre em pó (128 g), e agitado durante 2 a 4 horas. Por concentração da mistura reacional filtrada até cerca de 400 ml e diluição com cerca de 3200 ml de água obteve-se um óleo o qual foi dissolvido em EtOAc e tratado com diciclo-hexilamina (DCHA) para dar 41,31 g de sal de DCHA do composto em epígrafe, p.f. 120-122BC.

Intermediário B

Fmoc-Met-Asp(OtBu)-OH

Preparou-se Fmoc-Met-OSu, in situ, pela reacção de Fmoc-Met-OH (14,87 g) HOSu (5,52 g), e diciclo-hexil--carbodiimida (DCC, 8,26 g) era tetra-hidrofurano (THF, 200 ml) a 0QC durante 3,5 horas. A diciclo-hexilureia precipitada (DC0) foi removida por filtração e o filtrado de THF foi adicionado a uma solução fria de H-Asp- (OtBu) -OH em 220 ml de água/TBF 10:1 à qual tinham sido adicionados 40 ml de hidróxido de sódio N. Depois de agitar a mistura reacional â temperatura ambiente durante toda a noite, adicionou-se ácido cítrico sólido (20 g) junto com BtOAc (600 ml). Separou-se a camada de EtOAc, lavou-se com ácido cítrico a 10% e solução de cloreto de sódio, e secou-se (sulfato de magnésio). Por evaporação da solução de EtOAc obteve -se um resíduo que foi dissolvido em 200 ml de EtOAc e tratado com DCHA (7,84 ml) para precipitar 17,93 g de sal de DCHA do pro duto pretendido, p.f. 159-162BC*

Intermediário C H-Phe-QCH2 -Pam-resina fenil)-acético (0,83

Dissolveram-se ácido Boc-Phe-(4-oximetil g, 2 mmole), 1-hidroxibenzotriazolo (HOBt, - 13 -

0,46 g, 3 mmole) e DCC (0,41 g, 2 mole) em 50 ml de DCM/DMF 4:1 e agitou-se a OCC durante uma hora. Suspendeu-se aminometil-resi_ na (1,34 g, 1 mmole de azoto disponível) na mistura reaccional filtrada (removido o DCU precipitado) e agitou-se durante 2 a 15 horas. 0 produto, Boc-Phe-0CH2-Pam-resina, foi isolado por filtração e tratado de acordo com o Quadro 1 (Fases 10 a 14) para dar a base pretendida, H-Phe-OCE^-Pam-resina.

Intermediário D M-MePhe-OC^-Pam-resina

Adicionaram-se ácido Boc-MePhe-(4-oxime-tilfenil)-acético (a partir de 1,82 g, 3 mmole, do seu sal de DCHA, intermediário Â) e HOBT (0,69 g, 4,5 mmole) em 40 ml de DMFíDCM 1:3 e em seguida DCC (0,62 g 3 mmole) em 20 ml de DCM a aminometil-resina (1,34 g, 1 mmole de azoto disponível) para dar uma suspensão que foi agitada durante 2 a 15 horas. O produto pretendido, Boc-MePhe-OCH2-Pam-resina, foi isolado por filtração lavado com 2-propanol e DCM e tratado de acordo com o Quadro 1 (Fases 10 a 14) para dar a base livre pretendida, fi-MePhe-OCH^--Pam-resina.

Intermediário B

Carbonato de isobutil-succinimidilo (iBuOCO-OSu)

Adicionou-se a uma solução de clorofor-raiato de isobutilo (26 ml, 200 mmole) em 600 ml de clorofórmio, em porções o sal de diciclo-hexilamina de N-hidroxiεsuccinimida (HOSu, 49,28 g, 200 mmole). Depois de agitar a suspensão resultante durante toda a noite, filtrou-se o precipitado de cloridra to de DCHA e lavou-se com clorofórmio. Diluiu-se o filtrado concentrado (cerca de 50 ml) e as lavagens com 400 ml de acetato de etilo (EtOAc) e lavou-se com 10% de ácido cítrico (4 x 100 ml), salmoura (2 x 100 ml), bicarbonato de sódio a 10% (3 x 100 ml) e salmoura (4 x 106 ml) e em seguida secou-se (sulfato de magnésio), £iltrou-se e concentrou-se até cerca de 100 ml. Por diluição com éter e precipitação com hexano, obtiveram-se 26,6 g (62% • de rendimento) de iBuOCO-OSu, p.f. 33-3SQC.

* 2. Preparação de Exemplos de Compostos da Fórmula I 14

EXEMPLO 1 H-DAsp-Tyr (S03H) -Xle-Gly-Trp-Ile-Asp-Phe-HH2

Acoplou-se sequencialmente H-Phe-0CH2--Pam-resina (Intermediário Ç) com Fmoc-Ile-Asp(OtBu)-OH (Interme diário B, Fmoc-Met-OH substituído por Fmoc-Ile-OH), Fmoc-Trp-QH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Ile-QH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH e Fmoc-DAsp(OtBu)-OH de acordo com o Quadro 1 (Fases de acoplamento 5 a 7 seguidas das Fases de remoção de Fmoc 16 a 20) para dar origem a Fmoc--DAsp (OtBu) -Tyr (tBu) -Ile-Gly-Trp-I le-Asp (OtBu) -Phe-OC^-Pain-resÍ na que foi desprotegido, sulfatado, desprotegido e cindido a par tir da resina de acordo com o Quadro 1 (Fases 10 a 15, Fases 21 a 25, Fases 16 a 20 e em seguida Fases 26 a 29 com amónia) para dar o composto em epígrafe que foi purificado por cromatografia através de Amberlite XAD-2 e QDS-3 P-40, sequencialmente, de acordo com o Quadro 1 (Fase 38) para dar 270 mg de sal de amónio do composto em epígrafe· A analise de ácidos aminados após a decomposição por ácido deu Tyr 1,00 (1), Ile 1,94 (2), Gly 0,98 (1), Asp 2,14 (2) e Fen 6,94 (1)* G espectro de absorção de infravermelho mostrou um pico forte típico dum éster de ácido sul-furico a 1050 cm"1. O Bf de CCF foi de 0,41. EXEMPLO 2 H-Asp-Tyr(S03H)-Met-Pro-Trp-Met-Asp-MePhe-MH^

Acoplou-se H-MePhe-OCH2-Pam-resina (Intermediário D) sequencialmente com Fmoc-Met-Asp(OtBu)-OH (Intermediário B), Fmoc-Trp-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Met-OH, Fmoe-Tyr-OH e Boc-Αερ (OtBu) -OH de acordo com o Quadro 1 (Fases de acoplamento 3 e 4 seguidas da remoção de Fmoc Fases 16 a 20) para dar ori gem a Boc-Αερ(OtBu)-Tyr-Met-Pro-Trp-Met-Asp(OtBu)-MePhe-OCH2-Pam -resina que foi sulfatado, desprotegido e cindido da resina de acordo com o Quadro 1 (Fases 21 a 25, Fases 10 a 15 e depois Fases 26 a 29 com amónia) para dar o composto em epígrafe que foi purificado por cromatografia através de Trisacryl M DAEA e QDS--3 P-40, sequencialmente, de acordo com o Quadro 1 (Fase 30) pa-* ra dar 83 mg do sal de amónio do composto em epígrafe, A análise - 15

( * I

de ácidos aminados após decomposição por ácido deu Asp 1,99 (2), Tyr 1,00 (1), Met 1,91 (2) e Pro 1,11 (1). 0 espectro de absorção de infravermelho mostrou um pico forte típico de um éster de ácido sulfúrico a 1050 cm”*1. 0 Rf de CCf foi 0,34. EXEMPLO 3 iBuOCO-Tyr (SO^H) -Met-DAla-Trp-Met-Asp-MePhe-NH2

Acoplou-se sequencialmente H-MePhe-OCH2--Pam-resina (Intermediário B) com Fmoc-Met-Asp(OtBu)-OH (Exemplo B), Fmoc-Trp-OH, Fmoc-DAla-OH, Fmoc-Met-OH e Fmoc-Tyr(tBu)-OH de acordo com o Quadro 1 (Fases de acoplamento 5 a 7 seguidas pelas Fases de remoção de Fmoc de 16 a 20) para dar origem a H-Tyr(tBu] -Met-DAla-Trp-Met-AspíOtBuJ-MePhe-OCHg-Pam-resina que foi acopla da com iBuOCOOSu (Intermediário E) em DMF de acordo com o Quadro 1 (Fases 8 e 9) para dar iBuOCO-Tyr(tBu)-Met-DAla-Trp-Met-Asp(OtBu)-MePhe-OCHjPam-resina que foi desprotegido, sulfatado e separado da resina de acordo com o Quadro 1 (Fases 10 a 15, Fases 21 a 25 e depois Fases 26 a 29 com amónia) para dar o composto em epígrafe que foi purificado por cromatografia através de Amberlite XAD-2 e ODS-3 P-40, se quencialmente, de acordo com o Quadro 1 (Fase 30) para dar 80 mg de sal de amónio do composto em epígrafe. A análise por ácidos aminados após decomposição por ácido deu Tyr 1,02 (1), Met 1,84 (2), Ala 1,05 (1), Asp 1,05 (1) e MePhe 1,04 (1). O espectro de absorção de infravermelho mostrou um pico forte típico dum éster de ácido sulfúrico a 1050 cm**1, O Rf de CCF foi de 0,95. EXEMPLO 4 H-fAsp-Tyr (S03H) -Ile-Gly-Trp-Ile-Asp-MePhe-NH2

Acoplou-se sequencialmente H-MePhe-0CH2--Pam-resina (Intermediário D) com Fmoc-Ile-Asp(OtBu)-OH (Interne diário B, Fmoc-Met-OH substituído por Fmoc-Ile-OB), Fmoc-Trp-OH, Fmoc-Gly-OH, ítooc-Ile-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH e Boc-^Asp(OtBu)-OH • de acordo com o Quadro 1 (Fases de acoplamento 5 a 7 seguidas de ______ - 16 -

Fases de remoção de Fmoc 16 a 20) para dar origem a Boc-^Asp-(OtBu) -Tyr (tBu) -Ile-Gly-Trp-Ile-Asp (OtBu) -MePhe-QCH2-Pam-resina que foi desprotegido de acorde com o Quadro 1 (Fases 10 a 15) e acoplada com Fmoc-OSu de acordo com o Quadro 1 (Fases 8 a 9) para dar Fmoc-pAsp-Tyr-Ile-Gly-Trp-Ile-Asp-MePhe-OCí^-Pam-resina que foi sulfatado, desprotegido e separado da resina de acordo com o Quadro 1 (Fases 21 a 25, Fases 16 a 20 e em seguida Fases 26 a 29 com amónia) para dar o composto em epígrafe que foi puri ficado por cromatografía através de Amberlite XAD-2 e OBS-3 P-40, sequencialmente, de acordo com o Quadro 1 (Fase 30) para dar 100 mg do sal de amónio do composto em epígrafe, A análise de ácidos aminados que se seguiu â decomposição por acido deu Asp 2,01 (2), Tyr 1,00 (1), Ile 1,98 (2), Gly 1,02 (1) e MePhe 0,95 (1), O espectro de infravermelho mostrou um pico forte típico dum éster de ácido sulfurico a 1050 cnT1. O Hf de CCF foi de 0,47. EXEMPLO 5

For-Tyr(SO^H)-Ile-Gly-Trp-Ahx-Asp~MePhe-NH2

Acoplou-se sequencialmente H-MePhe-OCH2--Pam-resina (Intermediário D) com Fmoc-Ahx-Asp(OtBu)-OH (Interne diário B, Fmoc-Met-OH substituído por Fmoc Ahx-OH), Fmoc-Trp-OH, Ftooc-Gly-GH e Fmoc-Ile-OH de acordo com o Quadro 1 (Fases de aco plamento 5 a 7 seguidas de Fases de remoção de Fmoc 16 a 20) para dar origem a H-Ile-Gly-Trp-Ahx-Asp(OtBu)-MePhe-OCH2-Pam-resi-na que foi desprotegido de acordo com o Quadro 1 (Fases 10 a 15) para dar origem a E-Ile-Giy-Trp-Ahx-Asp-KePhe-OCELj-Pam-resina que foi acoplado com For-Tyr-OH de acordo com o Quadro 1 (Fases 3 a 4) para dar For-Tyr-Ile-Gly-Trp~Ahx-Asp“MePhe-0CH2-Pam-resi-na que foi sulfatado e separado da resina de acordo com o Quadro 1 (Fases 21 a 25 e em seguida Fases 26 a 29 com amónia para dar o composto em epígrafe que foi purificado por cromatografia atra vés de Amberlite XAD-2 e ODS-3 P-40, sequencialmente, de acordo com o Quadro 1 (Fase 30) para dar 60 mg de sal de amónio do composto em epígrafe. A análise de ácidos aminados que se seguiu ã • decomposição por ácido deu Tyr 0,99 (1), Ile 1,01 (1), Ahx 1,05 . (1), Gly 1,04 (1), Asp 1,05 (1) e MePhe 0,86 (1). O espectro de 17 .

absorção de infravermelho mostrou to pico forte típico dum éster de ácido sulfurico a 10SO cm*’1. 0 Rf de CCP foi de 0,51. EXEMPLO 6

Suc-Tyr (SO^H) -Ile-Gly-Trp-Ahx-Asp-MePhe-N^

Acoplou-se sequencialmente H-HePhe-0CH2--Pam-resina (Intermediário D) com Fmoc-Ahx-Asp(OtBu)-OH (Interme diário B, Fmoc-Met-OK substituído por Fmoc-Ahx-OH), Fmoc-Trp-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Ile-OH e Fmoe-Tyr(tBu)-OH de acordo com o Quadro 1 (Fases de acoplamento 5 a 7 seguidas das Fases de remoção de Fraoc 16 a 20) para dar origem a H-Tyr(tBu)-Ile-Gly-Trp-Ahx--Asp(OtBu)-MePhe-OCH^-Pam-resina que foi acoplado com anidrido succínico em DMF de acordo com o Quadro 1 (Fases 8 a 9) para dar Suc-Tyr (tBu) -Ile-Gly-Trp-Ahx-Asp (OtBu) -MePhe-OCHg-Fam-resina que foi desprotegido, sulfatado e separado da resina de acordo com o Quadro 1 (Fases 10 a 15, Fases 21 a 25, e em seguida Fases 26 a 29 com amónia) para dar o composto em epígrafe que foi putificado por cromatografia através de Amberlite XAD-2 e ODS-3 P-40, se quencialmente, de acordo com o Quadro 1 (Fase 30) para dar 130 mg de sal de amónio do composto em epígrafe. A análise de ácidos aminados que se seguiu ã decomposição por ácido deu Tyr 0,99 (1), Ile 0,94 (1), Ahx 0,S6 (l), Gly 1,02 (1), Asp 1,00 (1) e MePhe 1,09 (1) , O espectro de absorção de infravermelho mostrou um pico forte típico dum éster de ácido sulfurieo a 1050 cm"1. O Rf de CCF foi de 0,65. EXEMPLO 7 iBuOCO-Tyr(SO^H)-Ile-Gly-Trp-Ahx-MePhe-NH^

Acoplou-se sequencialmente H-MePhe-QC^--Pam-resina (Intermediário D) com Fmoc-Ahx-Asp(OtBu)-OH (Interme diário B, Fmoc-Met-OH substituído por Fmoc-Ahx-OH), Fmoc-Trp-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Ile-OH e Fmoc-Tyr(tBu)-OH de acordo com o Quadro 1 (Fases de acoplamento 5 a 7 seguidas de Fases de remoção de Fmoc 16 a 20) para dar origem a H-Tyr(tBu)-Ile-Gly-Trp-Ahx--Asp(OtBu)-MePhe-OCH2 -Pam-resina que foi acoplada com iBuOCO- - 18

-OSu (Intermediário 1) era DS3F de acordo com o Quadro 1 (Fases 8 e 9} para dar iBuOCO-Tyr(tBu)-Ile-Gly-Trp-Ahx-Asp(OtBu)-MePhe--OCH^-Pam-resina que foi desprotegido, sulfatado, e separado da resina de acordo com o Quadro 1 (Fases 10 a 15, Fases 21 a 25 e em seguida Fases 26 a 29 com amónia) para dar o composto em epígrafe que foi purificado por cromatografia através de Amberlite XAD-2 e ODS-3 P-40, sequencialmente, de acordo cora o Quadro 1 (Fase 30) para dar 140 mg do sal de amónio do composto em epígra £e. A analise de ácidos aminados que se seguiu à decomposição por ácido deu Tyr 1,05 (1), Ile 1,04 (1), Ah:: 1,03 (1), gly 1,06 (1), Asp 1,07 (1) e MePhe 0,76 (1). O espectro de absorção de in fraverraelho mostrou um pico forte típico dum éster de ácido sul-furico a 1050 cm"1. 0 M de CGF foi de 0,93. SXEMPLO 8

Hpp(S03H)-Ile-Gly-Trp-Ahx-Asp-MePhe-NH2

Acoplou-se sequencialmente H-MePhe-OCE^--Pam-resina (Intermediário D) com Fmoe-Ahx-Asp(OtBu)-OH (Interme diário B, Fraoc-Met-OB substituído por Fmoe-Ahx-OH), Fmoc-Trp-OH, Fmoc-61y-QH e Fmoc-Ile-OH de acordo com o Quadro 1 (Fases de aco plamento 5 a 7 seguidas por Fases de remoção de Fraoc 16 a 20) pa ra dar origem a H-Ile-Gly-Trp-Ahx-Asp(OtBu)-MePhe-OCH^-Pam-resi-na que foi acoplado com Hpp-OSu de acordo com o Quadro 1 (Fases de acoplamento 8 a 9) para dar Bpp-Ile-Gly-Trp-Ahx-Asp (OtBu) --MePhe—OCH^-Pam-resina que foi desprotegido, sulfatado e separa do da resina de acordo com o Quadro 1 (Fases 10 a 15, Fases 21 a 25 e em seguida Fases 26 a 29 com amónia) para dar o composto em epígrafe que foi purificado por cromatografia através de Amberli te XAD-2 e ODS-3 P-40, sequencialmente, de acordo com o Quadro 1 (Fase 30) para dar 30 mg do sal de amónio do composto em epígrafe. A análise de ácidos aminados que se seguiu ã decomposição por ácido deu Ile 0,86 (1), Ahx 0,82 (1), Gly 1,16 (1) e Asp 1,17 (1). O espectro de absorção de infravermelho mostrou um pico fo£ te típico dum éster de ácido sulfurico a 1050 cm"1. O Rf da CCF • foi de 0,64. - 19

Claims (1)

1. ^ h

   RBIVIBBICaçflSS Processo para a preparação de compostos da fórmula X: I

   Q-ÍP-M-G-W-X-J-P-S em que T representa Tyr(SO^H), M representa Ile, G representa Gly, D-Ala ou Pro, W representa Trp, X representa Ahx, J representa Asp, P representa MePhe, 3 4 Z representa NE R , 12 3 a ^ R , R , R e R são independentemente uns dos ou tros H ou alquilo inferior, e adicionalmente a) Q e T podem representar em conjunto Hpp (SO^H), b) quando Q representa H-^3 -Asp, X pode representar Ile, C) quando G representa D-Ala, M e X podem ambos representar Met d) quando Q representa H-BAsp, então M e X podem am bos representar Ile conquanto que P represente Phe, e) quando Q representa H-Asp e G representa Pro, M e X podem ambos representar Ket. e dos seus sais farmaceuticamente aceitáveis, caracterizado por compreender as fases de a) sulfatar um composto correspondente da fórmula IX “ ΤΛ. - M - G - W - X - J. p on P P - P c II - 20 - em que Q representa Qt P^-H-Asp, P^-^Asp ou P^-DAsp, no qual P representa ura grupo protector de «reina , XJt P representa Z ou um grupo protector de carboxilo, v *«* representa tirosina, Jp representa J ou um aspartato com o carfooxilo protegido e M, 6, W, X, J e P possuem os significados anteriormente defi nidos, com um reagente de sulfataçao e, quando pretendido ou necessário, remover quaisquer grupos protectores do composto resultante ou b) remover um ou mais grupos protectores dum composto eorrespon dente da fórmula XXX <5 * T - M - G - W - X - J - P - ΡΛ III p p 0 em que Q , P r T, J , M, 6, W, P, e X possuem os significa- Xr ^ ir dos definidos anteriormente, conquanto que pelo menos um dos grupos Q , P ou J represen |jr W P ^ te ou contenha um grupo protector e quando pretendido ou necessário converter o composto resultante da fórmula I num sal farmaceuticanente aceitável ou vi ce-versa. - 29 - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por se obter um composto da fórmula I em que G representa Gly. - 33 - Processo de acordo com qualquer das reivindicações 1 ou 2, caracterizado por se obter um composto da fórmula X em que Z representa - 21 - 4ô - Processo de acordo com qualquer das reivindicações anteriores, earacterizad© por se obter um composto da fórmula I em que Q representa βΜρ, Por ou Sue. 5§ — Processo de acorde coe qualquer das reivindicações anteriores, earacterizado por © composto da fórmula geral I obtido ter a fórmula Suc-Tyr(SO^H)-Ile-Gly-Trp-Ahx-Asp--MePhe-NH2 ou ser um sal farmaceuticamente aceitável deste composto. - 6§ - Processo de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 5, caracterizado por o composto da fórmula geral x obtido ter uma das fórmulas H-D&sp-Tyr (SOgE) -Ile-Gly-Trp-Ile-âcp-Phe-H^ , H-Asp-Tyr (SO^h) -Met-Pro-Trp-Met-Asp-MePhe-ííí^f iBuOCO-Tyr(S03H)-Met-DAla-Trp-Met-Asp-MePhe-NH2 # H- ^3 Αερ-Tyr (SG^íI) -Ile-Gly-Trp-Ile-Asp-MePhe-NH2 , For-Tyr<S03H)-lle-Ôly-Trp~Afex-Asp-MePhe-KH2, iBuOCG-Tyr(S03H)-Ile-Gly-Trp-Ahx-Asp-MePhe-NH2, Hpp (S03H) -He-Gly-í‘rp“Ãhx-Asp-MePhe-HE2, ou ser um sal farmaceuticamente aceitável de qualquer dos compos tos referidos* 22 - # V Processo para a preparaçao de ama compo-sigão farmacêutica, euracterizado por se incorporar como ingreái ente activo um composto da formula £ quando obtido de acordo com qualquer das reivindicações anteriores em conjunto com um adjuvante, um diluente ou uma substância veicular farmaceuticamente aceitável. & requerente reivindica a prioridade do pedido norte-americano apresentado em 26 de «Janeiro de 1909, sob o número de série 303,425#

   23 -