PT2741085T

PT2741085T - Método para a deteção de cancro prancreático

Info

Publication number: PT2741085T
Application number: PT128194735T
Authority: PT
Inventors: Ido Takayoshi; Okano Fumiyoshi
Original assignee: Toray Industries
Priority date: 2011-08-04
Filing date: 2012-08-03
Publication date: 2017-06-30
Also published as: WO2013018885A1; MX2014001377A; MX349907B; AU2012290948B2; HUE033628T2; CN103718045B; RU2014108048A; BR112014002616B1; ES2629061T3; RU2624040C2; JP6094220B2; AU2012290948A1; EP2741085B1; US20140179558A1; CA2844033A1; EP2741085A4; CA2844033C; KR20140048318A; US9796775B2; KR101984554B1

Description

DESCRIÇÃO

MÉTODO PARA A DETEÇÃO DE CANCRO PRANCREÁTICO

Campo da Técnica A presente invenção refere-se a um método para a deteção de cancro pancreãtico utilizando CAPRIN-1 como um marcador de tumor. Técnica Anterior É relatado que há mais de 10.000 pacientes com cancro de pâncreas refratária no Japão, cuja ocorrência está a aumentar a cada ano, e presume-se que o número de pacientes continuará a aumentar. Mesmo se o cancro pancreático for removido cirurgicamente, células de cancro pequenas frequentemente se infiltraram e metastatizaram em outros órgãos. Consequentemente, o cancro pancreático frequentemente reincide e a taxa de sobrevivência em 5 anos é de 9%; isto é, o prognóstico do cancro pancreático é muito ruim. Para o propósito de prevenir a recorrência põs-operatõria, Gencitabina, um agente anticancro, tem sido empregue. Contudo, o objetivo principal da administração de Gemcitabina é o alívio da dor e a vantagem de redução de tamanho ou sobrevivência quase não pode ser esperada. Nalguns hospitais, um outro agente anticancro, TS-1, que é atualmente utilizado para cancro gástrico, se for utilizado, embora seja difícil esperar quaisquer efeitos terapêuticos.

Com a finalidade de melhorar o prognóstico para o cancro pancreãtico, a deteção precoce é importante, como o é com outros cancros; contudo, a deteção precoce é difícil porque o cancro pancreãtico não mostra substancialmente nenhum sintoma inicial. Até à data, têm sido empregues métodos de deteção de cancro pancreãtico utilizando o antigénio carcinoembrionãrio (CEA) e glicoproteínas (CA19-9 e Dupàn-2) em amostras biológicas como marcadores de tumor de cancro pancreãtico. Contudo, os níveis de tais marcadores tumorais não se tornam elevados a menos que o cancro pancreãtico avance e tais marcadores ocasionalmente mostram valores normais no estágio progressivos. Consequentemente, tais marcadores tumorais não são considerados suficientes para a deteção precisa de cancro pancreãtico. Adicionalmente, a maioria dos marcadores tumorais que são atualmente conhecidos estão presentes em quantidades muito pequenas nos fluidos corporais (ao nível de pg/ml). Com a finalidade de detetar quantidades tão pequenas de marcadores, consequentemente, são necessárias técnicas de deteção com alta sensibilidade ou técnicas especiais. Sob tais circunstâncias, uma nova técnica para a deteção de cancro pancreãtico de uma maneira simples com alta sensibilidade espera-se que seja aplicável ao diagnóstico de cancro pancreãtico. É necessário passar por exames exaustivos periódicos com a finalidade de detetar cancro pancreãtico em estágio inicial. Consequentemente, um método de deteção de cancro que pode ser levado a cabo de uma maneira simples com a utilização de soro sanguíneo ou amostras de urina sem a imposição de encargos físicos ou financeiros em indivíduos saudãveissem cancro pancreãtico ou doentes com cancro tem sido aguardado.

Igualmente, o cancro pancreãtico é refratário em cães. Embora uma massa informe possa ser observada na região abdominal de um cão afligido com cancro pancreãtico, os principais sintomas são a rápida perda de energia, andadura instável e anomalias ao andar resultando da hipoglicemia. Na maioria dos casos, o desenvolvimento de cancro não seria detetado até tais sintomas serem observados. Adicionalmente, o cancro pancreãtico é frequentemente provável de estar em estádio avançado quando tais sintomas são observados. Além da remoção cirúrgica do cancro pancreãtico, consequentemente, as técnicas terapêuticas são limitadas a terapêutica de apoio e a administração de agentes anticancro. Como com o caso dos pacientes humanos, a deteção precoce é importante para cães afligidos com cancro pancreático com a finalidade de tratar eficazmente tal cancro pancreático. Como com o caso para seres humanos, no passado não existia agentes de diagnóstico para cães que permitissem a deteção de cancro pancreático no estágio inicial de uma maneira simples. No campo da medicina veterinária, as técnicas de deteção tais como técnicas radiográficas por meio de Raios X, CT ou MRI ainda não se tornaram comuns. Na atualidade, a deteção é levada a cabo por palpação, testagem de sangue simples, e fotografias por raios X, e o diagnóstico e altamente dependente da experiência dos médicos veterinários. Se for proporcionado um meio simples para a deteção de cancro com uma sensibilidade elevada que pode ser aplicado ao diagnóstico de cancro em cães, pode ser realizado o tratamento adequado, o que tem vantagens consideráveis para os donos de cães e médicos veterinários. A proteína 1 citoplasmática e associada com a proliferação (CAPRIN-1) é uma proteína intracelular que é expressa quando células normais na fase dormente são ativadas ou passam por divisão celular. CAPRIN-1 é também conhecida por estar envolvida no controlo do transporte e tradução de ARNms através da formação de grânulos de estresse citoplasmático e ARN numa célula. Igualmente, os genes que codificam as proteínas CAPRIN-1 demonstraram que são expressos especificamente em testículos caninos e humanos e células tumorais malignas, a análise FCM de células de cancro de mama com a utilização de anticorpos contra CAPRIN-1 demonstra a expressão de CAPRIN-1 nas superfícies de células de cancro de mama, e a coloração imuno-histoquímica utilizando tecidos de cancro de mama demonstra a expressão de CAPRIN-1 a níveis elevados em células de cancro de mama. Adicionalmente, foi relatado que os anticorpos mencionados acima danificariam as células de cancro de mama através das funções de linfócitos, E que os anticorpos contra CAPRIN-1 exercem efeitos antitumorais potentes em modelos de rato portadores de cancro em que as células de cancro de mama tinham sido transplantadas (Literatura de Patente 1) . Igualmente, tem sido relatado que cancros tais como cancro de mama podem ser diagnosticados medindo quer os anticorpos induzidos no corpo de um indivíduo contra CAPRIN-1 presente no soro sanguíneo ou polipéptidos que sofrem reações antigénio-anticorpo com CAPRIN-1 (Literatura de Patente 2). Até agora, contudo, não houve relatos do fato de que o cancro pancreático pode ser diagnosticado medindo quer os anticorpos contra CAPRIN-1 induzidos no soro sanguíneo de um paciente com cancro pancreático ou polipéptidos que sofrem reações antígeno-anticorpo com a CAPRIN-1. Literaturas da Técnica Anterior Literatura de Patente

Literatura de patente 1: Publicação Internacional N.° WO 2010/016526

Literatura de patente 2: Publicação Internacional N.° WO 2010/016527 Sumário da Invenção

Problema a ser Atingido pela Invenção É um objetivo da presente invenção proporcionar um meio para a deteção de cancro pancreático que seja útil para o diagnóstico de cancro pancreático.

Meios para Resolução do Problema

Os presentes inventores realizaram estudos concentrados. Como um resultado, os presentes inventores descobriram agora que o cancro pancreático pode ser diagnosticado, examinado ou detetado com base na expressão de CAPRIN-1 em cancro pancreático, medição (ou ensaio) de anticorpos contra CAPRIN-1 induzido no soro sanguíneo de um paciente com cancro pancreático com a utilização de uma proteína CAPRIN-1, e a ligação dos anticorpos produzidos com a utilização de tais proteínas contra CAPRIN-1 no tecido de cancro pancreãtico. Isto levou à conclusão da presente invenção.

Especificamente, a presente invenção proporciona um método conforme definido nas reivindicações para a deteção de cancro pancreático que compreende medir uma expressão de CAPRIN-1 numa amostra separada de um indivíduo. 0 termo "detetar" conforme é utilizado no presente documento pode ser utilizado indistintamente com o termo "examinar" ou "avaliar". Igualmente, a presente divulgação proporciona um reagente ou kit para a deteção de cancro pancreãtico que compreende um polipéptido que sofre uma reação antigénio-anticorpo com um anticorpo contra CAPRIN-1 induzido ou provocado no corpo de um indivíduo. Adicionalmente, a presente divulgação proporciona um reagente ou kit para a deteção de cancro pancreãtico que compreende um polipéptido que sofre uma reação antigénio-anticorpo com CAPRIN-1 ou um fragmento de ligação a antigénio do anticorpo. Adicionalmente, a presente divulgação proporciona um reagente ou kit para a deteção de cancro pancreãtico que compreende um polinucleótido que hibridiza especificamente a um sequência parcial que compreende pelo menos 15 a 19 nucleõtidos ou pelo menos 20 a 30 nucleótidos da sequência nucleotídica representada por quaisquer das SEQ ID NOs: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13,...,29. 0 "reagente ou kit para a deteção de cancro pancreãtico" utilizado no presente documento também pode ser referido como "reagente ou kit para detetar cancro pancreãtico".

Especificamente, a presente invenção proporciona métodos, conforme definido nas reivindicações, para a deteção de cancro pancreãtico.

De acordo com a presente invenção, é proporcionado um novo método para a deteção de cancro pancreático. Conforme especificamente descrito nos exemplos abaixo, Um polipéptido recombinante preparado com base na sequência de aminoãcidos de CAPRIN- 1 (ou Caprin-1) é capaz de reagir especificamente com um anticorpo que existe no soro de um paciente com cancro pancreãtico. Como tal, o cancro pancreãtico existente num indivíduo pode ser detetado medindo o anticorpo numa amostra pelo método da presente invenção. Igualmente, o cancro pancreãtico existente num indivíduo pode ser detetado pela medição (ou ensaio) da própria CAPRIN-1. Conforme descrito nos exemplos abaixo, adicionalmente, são observados altos níveis de expressão génica de CAPRIN-1 especificamente nos testículos e células de cancro pancreãtico de indivíduos (a seguir no presente documento, tal produto de expressão é ocasionalmente referido como um "ácido nucleico que codifica uma CAPRIN-1 (proteína)"). Como tal, o cancro pancreãtico também pode ser detetado pela medição do ácido nucleico. Adicionalmente, a presença ou a quantidade de CAPRIN-1 (expressão) no tecido de cancro pancreãtico pode ser medida com a utilização de um anticorpo contra CAPRIN-1. Os pacientes com cancro pancreãtico podem ser submetidos a tal medição com antecedência, de modo que os pacientes a quem o agente terapêutico que tem CAPRIN-1 como alvo (por exemplo, medicamento de anticorpo) é aplicável pode ser selecionado. Formas de Realização para levar a cabo a Invenção

De acordo com o método da presente invenção, a presença ou uma quantidade de CAPRIN-1 (expressão) é medida utilizando uma amostra separada de um indivíduo. Exemplos de métodos para medir a presença ou uma quantidade de CAPRIN-1 (expressão) incluem: um método para a medição imunológica de um anticorpo contra CAPRIN-1 contido numa amostra (o primeiro método); um método para a medição imunológica da própria CAPRIN-1 contida numa amostra (o segundo método) ; e um método para a medição de um ácido nucleico que codifica CAPRIN-1 contida numa amostra, tais como ARNm ou ADNc sintetizado a partir de um ARNm (o terceiro método). Na presente invenção, a presença ou uma quantidade de CAPRIN- 1 (expressão) poder medida por qualquer dos métodos acima. Na presente invenção, o termo "medir" destina-se a incluir qualquer dos seguintes significados: detetar, medir qualitativamente, medir quantitativamente e medir semi-quantitativamente. A sequência de aminoácidos representada pelas SEQ ID NOs: 6, 8, 10, 12, ou 14 é uma sequência de aminoácidos de CAPRIN-1 canina. A CAPRIN-1 canina tendo tal sequência de aminoácidos foi identificada como um polipéptido que se liga a um anticorpo especificamente existente no soro derivado de um cão portador de cancro (veja-se o Exemplo 1) . Um anticorpo contra a CAPRIN-1 tendo a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 6, 8, 10, 12 ou 14 é especificamente induzido ou provocado no corpo de um cão portando cancro. Especificamente, o cancro pancreático canino pode ser detetado pela medição do anticorpo acima contra CAPRIN-1 tendo a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 6, 8, 10, 12 ou 14 pelo primeiro método. Igualmente, o cancro pancreático canino pode ser detetado pela medição da própria CAPRIN-1 como um antigénio tendo a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 6, 8, 10, 12 ou 14 pelo segundo método. Uma vez que o gene de CAPRIN-1 é expresso em níveis significativamente elevados em célula de cancro pancreático, o cancro pancreático canino pode ser detetado pela medição do ácido nucleico de acordo com os terceiro método. 0 termo "tendo a sequência de aminoácidos" utilizado no presente documento refere-se a resíduos de aminoácidos alinhados numa dada ordem. Como tal, por exemplo, a expressão "um polipéptido tendo a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 2" refere-se a um polipéptido tendo 709 resíduos de aminoácidos, que consiste na sequência de aminoácidos de Met Pro Ser Ala (parcialmente omitido) . . . Gin Gin Vai Asn representada pela SEQ ID NO: 2. Igualmente, a expressão "um polipéptido tendo a sequência de aminoãcidos representada pela SEQ ID NO: 2" também pode ser abreviada como "o polipéptido de SEQ ID NO: 2", por exemplo, 0 mesmo se aplica à expressão "tendo uma sequência de nucleótidos". Neste caso, o termo "tendo" pode ser substituído com a expressão "compreendendo" ou "consistindo em".

Igualmente, o termo "polipéptido" utilizado no presente documento refere-se a uma molécula que é formada via uma ligação peptídica de uma pluralidade de aminoãcidos. Exemplos de tais moléculas incluem não apenas molécula de polipéptidos com grandes números de aminoãcidos constituintes, mas também moléculas de baixa massa molecular (oligopéptidos) com pequenos números de aminoãcidos e proteína de comprimento completo. A presente invenção também abrange proteínas CAPRIN-1 de comprimento completo cada uma tendo uma sequência de aminoácidos representada por qualquer das SEQ ID NOs de número par: 2 a 30 (isto é, SEQ ID NOs: 2, 4, 6,...26, 28 e 30). 0 termo "indivíduo" utilizado no presente documento refere-se a vertebrados, incluindo mamíferos e pássaros, preferentemente mamíferos, e mais preferentemente seres humanos, cães, vacas e cavalos. 0 termo "amostra" utilizado no presente documento refere-se a uma amostra biológica submetida a exame com o objetivo na deteção de cancro pancreãtico. Exemplos de amostra incluem fluidos corporais, tecidos e células separados de um indivíduo. Exemplos de fluidos corporais incluem, mas não estão limitados, sangue, soro, plasma sanguíneo, fluido ascítico e derrame pleural. Tecidos ou células do pâncreas que se suspeita de estar afligido com cancro estão dentro do âmbito da "amostra".

No método da presente invenção, os objetivos a ser medidos não são apenas CAPRIN-1 canina da SEQ ID NO: 6, 8, 10, 12 ou 14, mas também CAPRIN-1 de outros mamíferos (a seguir no presente documento, que também podem ser referidos como um "homólogo" (ou "ortólogo") para CAPRIN-1 canina). Quando é simplesmente referido como "CAPRIN-1", CAPRIN-1 de outro mamífero, incluindo um ser humano, é também um alvo a ser medido, para além da CAPRIN-1 de um cão. Conforme especificamente descrito nos exemplos abaixo, o nível de expressão génica de CAPRIN-1 humana é significativamente elevado em células de cancro pancreático humano, enquanto que nenhum anticorpo contra o gene de CAPRIN-1 humana é detetado num corpo humano saudável. Como tal, o cancro pancreático de um mamífero diferente de um cão pode ser detetado pela medição da expressão de CAPRIN-1 no mamífero. Um exemplo de CAPRIN-1 de um mamífero diferente de um cão a ser medida pelo método da presente invenção é, mas não está limitado a, CAPRIN-1 humana. As sequências de nucleótidos que codificam a CAPRIN-1 humana e as sequências de aminoácidos para a mesma são representadas pelas SEQ ID NOs: 1 e 3 e SEQ ID NOs: 2 e 4 na Listagem de Sequências. A identidade de sequência entre CAPRIN-1 humana e CAPRIN-1 canina é de 94% para a sequência de nucleótidos e é de 98% para a sequência de aminoácidos. A identidade de sequência das sequências de aminoácidos de CAPRIN-1 é tão alta como 98% entre mamífero geneticamente distantes, tais como cão e um ser humano. Como tal, considera-se que a identidade da sequência é de cerca de 85% ou superior entre um cão e um mamífero diferente de um ser humano; isto é, CAPRIN-1 canina e seu homólogo. CAPRIN-1, cuja expressão é para ser medida pelo método da presente invenção, preferentemente tem 85% ou mais, mais preferentemente 90% ou mais, e ainda preferentemente 95 % ou mais de identidade de sequência com a sequência de CAPRIN-1 canina representada pelas SEQ ID NO: 6, 8, 10, 12 ou 14, embora as identidades de sequência não estejam limitadas a estas.

No primeiro método, o anticorpo que pode estar presente numa amostra pode ser facilmente medido por imunoensaio utilizando uma substância antigénica que sofre uma reação antigénio-anticorpo com o anticorpo. 0 imunoensaio em si é um método convencional bem conhecido conforme especificamente descrito abaixo. Como uma substância antigénica para o imunoensaio, por exemplo, a proteína CAPRIN-1 canina da SEQ ID NO: 6, 8, 10, 12 ou 14 que induz o anticorpo dentro do corpo de um cão que porta cancro ou um fragmento contendo um epítopo de tal proteína pode ser utilizada. Adicionalmente, o anticorpo tem uma reatividade cruzada. Uma molécula diferente de uma substância antigénica que realmente serve como um imunogénio também pode ligar-se, via uma reação de antigénio-anticorpo, a um anticorpo induzido contra um imunogénio, contanto que a molécula tenha uma estrutura análoga a um epítopo do imunogénio. Entre uma proteína de um certo tipo de mamífero e um homólogo da mesma de outro mamífero, em particular, a identidade das sequências de aminoãcidos é alta, e as estruturas de epítopo são frequentemente análogas entre si. Conforme especificamente descrito nos exemplos abaixo, a CAPRIN-1 canina da SEQ ID NO: 6, 8, 10, 12 ou 14 sofre uma reação antigénio-anticorpo com um anticorpo induzido contra a CAPRIN-1 canina dentro do corpo que um cão que porta cancro. Igualmente, CAPRIN-1 humana sofre uma reação antigénio-anticorpo com o anticorpo induzido dentro do corpo que um cão que porta cancro. Consequentemente, CAPRIN-1 de qualquer mamífero pode ser utilizada como um antigénio para o imunoensaio de acordo com o primeiro método da presente invenção.

Quando uma substância antigénica é uma proteína ou semelhante tendo uma estrutura complicada e uma alta massa molecular, no geral, uma pluralidade de locais tendo diferentes estruturas estão presentes na molécula. Como tal, uma pluralidade de tipos de anticorpos capazes de reconhecer e se ligar a diferentes locais de tais substâncias antigénicas são produzidos no corpo de um indivíduo. Especificamente, um anticorpo que é produzido no indivíduo contra uma substância antigénica tal como uma proteína é um anticorpo policlonal que é uma mistura de uma pluralidade de tipos de anticorpos. Um anticorpo agora encontrado pelos presentes inventores é também um anticorpo policlonal que está especificamente presente no soro obtido a partir de um indivíduo portador de cancro e se liga especificamente, via uma reação de antigénio-anticorpo, a uma proteína CAPRIN-1 recombinante. 0 termo "anticorpo policlonal" utilizado na presente invenção refere-se a um anticorpo que existe no soro obtido de um indivíduo que contém uma substância antigénica e é induzido contra tal substância antigénica.

Nos exemplos abaixo, polipéptidos da SEQ ID NO: 6 e da SEQ ID NO: 8 (ambos, CAPRIN-1 canina) e o polipéptido da SEQ ID NO: 2 (CAPRIN-1 humana) foram preparados como antigénios para imunoensaio de anticorpos específicos nos animais vivos portadores de cancro. A reatividade entre estes polipéptidos e os anticorpos no soro obtido de um indivíduo portador de cancro então foi confirmada. Contudo, os anticorpos mencionados acima são anticorpos policlonais e ligam-se naturalmente a polipéptidos que consistem em homólogos da SEQ ID NO: 6, 8 e 2. Mesmo no caso de um fragmento de tal polipéptido, ele pode se ligar a um anticorpo contido no soro obtido de indivíduo portador de cancro uma vez que alguns anticorpos policlonais são capazes de reconhecer a estrutura do fragmento. Isto é, tanto o polipéptido (isto é, a proteína CAPRIN-1 de comprimento completo) do homólogo da SEQ ID NO: 6, 8 ou 2 como um fragmento do mesmo pode ser utilizado de modo semelhante para o ensaio de um anticorpo policlonal contido especificamente no soro de um indivíduo portador de cancro e podem ser úteis para a deteção de cancro. Consequentemente, um polipéptido a ser utilizado como um antigénio para imunoensaio no primeiro método da presente invenção não se limita a um polipéptido que consiste na região de comprimento completo da proteína CAPRIN-1 (por exemplo, SEQ ID NO: 6, 8 ou 2) . Pode ser um fragmento de polipéptido que consiste em pelo menos 7 a 12, e preferentemente pelo menos 8, 9 ou 10 aminoãcidos contínuos da sequência de aminoácidos de uma proteína CAPRIN-l que passa por uma reação de antigénio-anticorpo contra a proteína CAPRIN-1 (a seguir no presente documento, pode ser referida como um "polipéptido parcial reativo especificamente" para conveniência). É sabido na técnica que um polipéptido que compreende cerca de 7 a 12 ou mais resíduos de aminoácidos pode exercer antigenicidade. Se o número de resíduos de aminoácidos é muito baixo, contudo, tal polipéptido tem alta probabilidade de reagir de forma cruzada com um anticorpo contra uma proteína diferente da proteína CAPRIN-1 que existe na amostra. Em vista da melhora da precisão do imunoensaio, consequentemente, o número de resíduos de aminoácidos de um fragmento de polipéptido é preferentemente de 20 ou mais, 30 ou mais, e 50 ou mais, mais preferentemente 100 ou mais ou 150 ou mais, adicionalmente preferentemente 300 ou mais, e ainda mais preferentemente 600 ou mais. 0 número de resíduos de aminoácidos pode ser 1.000 ou mais ou 1.500 ou mais.

Exemplos preferíveis dos polipéptidos a serem utilizados como antigénios incluem os polipéptidos das SEQ ID NOs de numero par: 2 a 30 ou fragmentos das mesmas que compreendem epítopos (por exemplo, um fragmento de polipéptido que compreende de cerca de 7 a 12 ou mais resíduos de aminoácidos).

As sequências nucleotídicas dos polinucleótidos que codificam proteínas que consistem nas sequências de aminoácidos das SEQ ID NOs de número par: 2 a 30 (isto é, SEQ ID NOs: 2, 4, 6...28, e 30) são representadas pelas SEQ ID NOs de número ímpar: 1 a 29 (isto é, SEQ ID NOs: 1, 3, 5...27 e 29).

No geral, É bem conhecido na técnica que antigénios de proteína retêm antigenicidade quase equivalente a aquela da proteína original mesmo se um pequeno número de resíduos de aminoácidos foi substituído, eliminado, adicionado ou inserido na sequência de aminoácidos da proteína. Como tal, um polipéptido tendo uma sequência derivada da sequência de aminoácidos de uma proteína CAPRIN-1 por meio de substituição, eliminação e/ou inserção de um pequeno número de (preferentemente um ou vários) resíduos de aminoácidos, que tem 80% ou mais, 85-90% ou mais, preferentemente 90% ou mais, mais preferentemente 95% ou mais, ainda preferentemente 98% ou mais, e ainda mais preferentemente 99% ou mais de identidade de sequência com a sequência original, e especif icamente se liga via uma reação de antigénio-anticorpo a um anticorpo contra CAPRIN-1 (a seguir no presente documento, o mesmo pode ser referido como um "polipéptido m especificamente reativo" para conveniência) pode ser utilizado para a deteção de cancro de uma maneira semelhante ao caso dos polipéptidos descritos acima. Preferentemente, um polipéptido modificado especificamente reativo tem uma sequência de aminoácidos derivada da sequência de aminoácidos de uma proteína CAPRIN-1 por meio de substituição, eliminação e/ou inserção de um ou vários resíduos de aminoácidos. 0 termo "vários" utilizado no presente documento refere-se a um número inteiro de 2 a 10, preferentemente um número inteiro de 2 a 6, e ainda preferentemente um número inteiro de 2 a 4. 0 termo "identidade de sequência" utilizado no presente documento com referência a sequências de aminoácidos é determinado por alinhamento de duas sequências de aminoácidos a serem comparadas, de modo que tanto resíduos de aminoácidos correspondam quanto possível, dividindo o número de resíduos de aminoácidos que correspondem ao número total de resíduos de aminoácidos, e depois expressando os resultados em termos de percentagem (%) . Após o alinhamento acima, lacunas são inserida conforme for apropriado numa ou em ambas as sequências a serem comparadas, de acordo com a necessidade. Tal alinhamento de sequência pode ser realizado utilizando um programa ou algoritmo bem conhecido, tal como BLAST, FASTA ou CLUSTAL W (Karlin e Altschul, Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A., 87: 2264-2268, 1993; Altschul et al., Nucleic Acids Res., 25: 3389-3402, 1997).

Vinte tipos de aminoácidos constituindo uma proteína de ocorrência natural podem ser divididos em grupos de aminoácidos tendo propriedades análogas entre si: aminoácidos neutros tendo cadeias laterais com baixa polaridade (Gly, lie, Vai, Leu, Ala, Met e Pro); aminoácidos neutros tendo cadeias laterais hidrofílicas (Asn, Gin, Thr, Ser, Tyr e Cys) ; aminoácidos ácidos (Asp e Glu) ; aminoácidos básicos (Arg, Lys e His) ; e aminoácidos aromáticos (Phe, Tyr, Trp e His) . Sabe-se que a substituição entre estes aminoácidos (isto é, substituição conservativa) raramente altera as propriedades do polipéptido resultante. Quando resíduos de aminoácidos de CAPRIN-1 são para ser substituídos, consequentemente, a substituição é realizada entre membros do mesmo grupo, de modo que a possibilidade de manter a ligação com o anticorpo correspondente se torna maior. Na presente invenção, contudo, o variante acima pode envolver substituição não conservativa, desde que a atividade de indução da imunidade equivalente a ou quase equivalente a aquela de um polipéptido não modificado é conferida.

Um polipéptido (a seguir no presente documento, que pode ser referido como um "polipéptido de adição reativo especificamente" para conveniência) que contém, como uma sequência parcial, o polipéptido acima a ser utilizado na presente invenção (por exemplo, preparado por adição de outro (poli) péptido a uma extremidade ou a ambas as extremidades de um polipéptido a ser utilizado na presente invenção) e se liga especificamente através de uma reação antigénio-anticorpo a um anticorpo contra CAPRIN-1 pode também ser utilizado para a deteção de cancro pancreático de uma maneira semelhante aos casos dos polipéptidos acima.

Os polipéptidos utilizados na presente invenção podem ser sintetizados de acordo com um método de síntese química tal como o método Fmoc (o método de fluorenilmetiloxicarbonilo) ou o método tBoc (o método de t-butiloxicarbonilo) (the Japanese Biochemical Society (ed.), Seikagaku Jikken Koza (Biochemical Experimental Lecture Series) 1, Tanpakushitsu no Kagaku (Protein Chemistry) IV, Kagaku Shushoku to Peptide Gousei (Chemical Modification and Peptide Synthesis), TOKYO KAGAKU DOZIN CO., LTD, Japão, 1981). Igualmente, os polipéptidos podem ser sintetizados por meio de um método convencional utilizando vários sintetizadores de péptido disponíveis comercialmente. Alternativamente, os polipéptidos podem ser facilmente preparados por meio de técnicas de engenharia genética conhecidas (por exemplo, Sambrook et ai., Molecular Cloning, 2a Edição, Current Protocols in Molecular Biology, 1989, Cold Spring Harbor Laboratory Press; Ausubel et al. , Short Protocols in Molecular Biology, 3a edição, A Compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology, 1995, John Wiley & Sons). A partir de um ARN extraído de um tecido que expressa um gene que codifica a CAPRIN-1 humana da SEQ ID NO: 2 ou um homólogo do mesmo, por exemplo, ADNc do gene é preparado por meio de RT-PCR, a sequência de comprimento completo ou uma sequência parcial desejada do ADNc é incorporada num vetor de expressão, e o vetor é posteriormente introduzido numa célula hospedeira. Consequentemente, um polipéptido de interesse pode ser obtido. As sequências de nucleótidos dos ADNc que codificam CAPRIN-1 canina das SEQ ID NOs: 6, 8, 10, 12 e 14 são mostradas nas SEQ ID NOs: 5, 7, 9, 11 e 13, respetivamente. As sequências de nucleótidos dos homólogos humanos dos mesmos; isto é, os ADNc que codificam CAPRIN-1 humana das SEQ ID NOs: 2 e 4, são mostradas nas SEQ ID NOs: 1 e 3, respetivamente. Consequentemente, os iniciadores utilizados para RT-PCR podem ser facilmente concebidos com referência a estas sequências de nucleótidos. Conforme descrito abaixo, além disso, um gene que codifica CAPRIN-1 de um mamífero não-humano pode ser amplificado utilizando iniciadores concebidos com referência às sequências de nucleótidos das SEQ ID NOs de número ímpar: 1 a 29. Consequentemente, o ADNc que codifica, por exemplo, CAPRIN-1 felina pode ser preparado facilmente por meio de técnicas semelhantes às técnicas acima. A extração de ARN, RT-PCR, incorporação de ADNc num vetor e introdução de um vetor numa célula hospedeira pode ser realizada por meio de, por exemplo, métodos bem conhecidos conforme descrito abaixo. Igualmente, vetores e células hospedeiras utilizados no presente documento são bem conhecidos, e vários vetores e células hospedeiras que estão disponíveis comercialmente.

As células hospedeiras acima podem ser quaisquer células, desde que possam expressar os polipéptidos acima. Exemplos de células hospedeiras procarióticas incluem Escherichia coli. Exemplos de células hospedeiras eucarióticas incluem células de mamífero cultivadas, tais como células de rim de macaco (COSI), células de ovário de hamster chinês (CHO), a linha celular de células embrionárias humanas (HEK293), e a linha celular de pele embrionãria de ratinho (NIH3T3), levedura em germinação, levedura em fissão, células de bicho-da-seda, e Xenopusoocytes.

Quando células procarióticas são utilizadas como as células hospedeiras, um vetor de expressão tendo uma origem de replicação em células procarióticas, um promotor, um sítio de ligação a ribossoma, um sítio de clonagem múltipla, um terminador, um gene de resistência a fármacos, um gene complementar auxotrófico, e semelhantes é utilizado. Exemplos de vetores de expressão paira Escherichia coli incluem vetores pUC, pBluescriptII, sistemas de expressão PET e sistemas de expressão pGEX. ADN que codifica o polipéptido acima é incorporado em tal vetor de expressão, as células hospedeiras procarióticas são transformadas com o vetor, e o transformante assim obtido é cultivado. Consequentemente, o polipéptido codificado pelo ADN pode ser expresso nas células hospedeiras procarióticas. Neste momento, o polipéptido também pode ser expresso como uma proteína de fusão com outra proteína. 0 ADN que codifica o polipéptido acima pode ser obtido pela preparação do ADNc por meio de, por exemplo, RT-PCR, conforme descrito acima. Alternativamente, tal ADN pode ser sintetizado por meio de uma técnica convencional utilizando um sintetizador de ácido nucleico disponível comercialmente, conforme descrito abaixo. As sequências de nucleótidos dos ADNc dos genes que codificam CAPRIN-1 das SEQ ID NOs: 2 e 4 são mostradas nas SEQ ID NOs: 1 e 3 na Listagem de Sequências, respetivamente.

Quando células eucarióticas são utilizadas como as células hospedeiras, um vetor de expressão para células eucarióticas tendo um promotor, uma região de splicing, um local adicional poli(A) e semelhantes é utilizado. Exemplos de tal vetor de expressão incluem pKAl, pCDMS, pSVK3, pMSG, pSVL, pBK-CMV, pBK-RSV, um vetor EBV, pRS, pcDNA3 e pYES2. Conforme descrito anteriormente, o ADN que codifica um polipéptido utilizado na presente invenção é incorporado em tal vetor de expressão, as células hospedeiras eucarióticas são transformadas com o vetor, e o transformante assim obtido é cultivado. Consequentemente, o polipéptido codificado pelo ADN acima pode ser expresso nas células hospedeiras eucarióticas. Quando pIND/V5-His, pFLAG-CMV-2, pEGFP-Nl, pEGFP- Cl ou semelhante é utilizado como um vetor de expressão, o polipéptido acima pode ser expresso como uma proteína de fusão com várias etiquetas, tal como θtique1as His (por exemplo, (His) § 3 (His) 10) , unis etiqueta FLAG, uma etiqueta myc, um etiqueta HA ou GFP.

Um vetor de expressão pode ser introduzido numa célula hospedeira de acordo com uma técnica bem conhecida, tais como eletroporação, um método de fosfato de cálcio, um método de lipossomas, um método de DEAE dextrano, microinjeção, infeção virai, lipofeção ou ligação com um péptido permeável a membrana celular.

Um polipéptido de interesse pode ser isolado e purificado a partir de células hospedeiras utilizando técnicas de isolamento conhecidas em combinação. Exemplos de tais técnicas incluem o tratamento utilizando um agente desnaturante, tal como ureia ou um tensioativo, ultrassonicação, digestão enzimática, salificação, fracionamento e precipitação de solvente, diãlise, centrifugação, ultrafiltração, filtração em gel, SDS-PAGE, focagem isoelétrica, cromatografia de permuta iónica, cromatografia hidrofóbica, cromatografia de afinidade e cromatografia de fase reversa.

Os polipéptidos obtidos pelos métodos acima incluem polipéptidos na forma de proteínas de fusão com quaisquer outras proteínas. Exemplos de tais proteínas de fusão incluem uma proteína de fusão com glutationa-S-transferase (GST) e uma proteína de fusão com uma etiqueta His. Polipéptidos sob a forma de proteínas de fusão também estão dentro do âmbito dos polipéptidos de adição especificamente reativos descritos acima, e tais polipéptidos podem ser utilizados para o primeiro método de deteção da presente invenção. Adicionalmente, os polipéptidos expressos em células transformadas podem, ocasionalmente, ser submetidos a vários tipos de modificação dentro das células após tradução. Tal polipéptido modificado pós-traducionalmente pode ser utilizado no primeiro método de deteção da presente invenção, desde que seja capaz de especificamente se ligar, via uma reação de antigénio-anticorpo, a um anticorpo contra uma proteína de CAPRIN-1. Exemplos de tais modificações pós-traducionais incluem remoção da metionina N-terminal, acetilação N-terminal, glicosilação, proteólise limitada por uma protease intracelular, miristoilação, isoprenilação e fosforilação.

Um anticorpo numa amostra pode ser facilmente medido por meio de imunoensaio utilizando o polipéptido acima como um antigénio. 0 imunoensaio em si é bem conhecido na técnica. 0 imunoensaio é classificado no método sanduíche, o método de competição, o método de aglutinação, método de Western blot e semelhantes com base nos tipos de reações. Igualmente, o imunoensaio é classificado com base nas etiquetas em radioimunoensaio, imunoensaio de fluorescência, imunoensaio por enzima e imunoensaio de biotina, por exemplo. Os métodos imunoensaio do anticorpo acima pode ser realizado utilizando quaisquer destes métodos. ELISA sanduíche ou o método de aglutinação são preferentemente empregues como uma técnica de imunoensaio para o anticorpo acima no método da presente invenção, uma vez que os procedimentos destes métodos são convenientes e não precisam de grandes aparelhos e semelhantes, embora as técnicas não estejam limitadas a estas. Quando uma enzima é utilizada como uma etiqueta para um anticorpo, tal enzima não é particularmente limitada, contanto que satisfaça condições tais que: o número de renovação é alto; permanece estável mesmo quando está ligada a um anticorpo; e especificamente causa o desenvolvimento de cor do substrato. As enzimas que podem ser utilizadas para o imunoensaio de enzima geral, tais como peroxidase, β-galactosidase, fosfatase alcalina, glucose oxidase, acetilcolina esterase, glicose-6-fosforilação desidrogenase e ácido málico desidrogenase, podem ser utilizadas. Adicionalmente, substância de inibição de enzima, coenzimas e semelhantes, podem ser utilizadas. A ligação destas enzimas com anticorpos pode ser realizada por meio de métodos conhecidos envolvendo a utilização de um agente de reticulação, tal como um composto de maleimida, o sistema de biotina-(estrept)avidina, ou semelhante. Como substrato, uma substância conhecida pode ser utilizada dependendo do tipo de uma enzima a ser utilizada. Quando e utilizada a peroxidase como uma enzima, por exemplo, pode ser utilizada 3,3',5,5'-tetrametilbenzidina. Quando é utilizada fosfatase alcalina, por exemplo, para~nitro£enos pode ser utilizado. Um radioisótopo que é em geral utilizado para o radioimunoensaio, tal como ~25I ou 3H, pode ser utilizado. Um corante fluorescente que é utilizado para técnicas de anticorpo fluorescente em geral, tais como fluorescência de isotiocianato (FITC), tetrametilrodamina isotiocianato (TRITC) ou um corante de fluorescência de cianina (por exemplo, Cy3 ou Cy5), pode ser utilizado. Não há necessidade de explicar as técnicas de imunoensaio acima no presente documento uma vez que estás técnicas são bem conhecidas; contudo, brevemente, por exemplo, o método sanduíche compreende a imobilização do polipéptido acima utilizado como um antigénio numa fase sólida, permitindo que o polipéptido reaja com uma amostra tal como soro, lavagem, permitindo que um anticorpo secundário apropriado reaja com um anticorpo da amostra, lavagem novamente e depois medição do anticorpo secundário ligado à fase sólida. Pela imobilização de um polipéptido antigénico numa fase sólida, um anticorpo secundário pode ser facilmente removido. Consequentemente, é preferível como uma forma de realização do método para a deteção de cancro da presente invenção. Como um anticorpo secundário, um anticorpo anti-IgG canina, por exemplo, pode ser utilizado se a amostra é de um cão. Um anticorpo secundário é marcado com antecedência com uma substância de marcação exemplificada acima, de modo que o anticorpo secundário ligado a uma fase sólida possa ser medido. A quantidade de anticorpo secundário assim medida corresponde à quantidade do anticorpo acima na amostra de soro. Quando uma enzima é utilizada como uma substância de marcação, a quantidade do anticorpo pode ser medida por adição de um substrato que é degradado com a finalidade de desenvolver cor pela ação enzimática e depois medir oticamente a quantidade do substrato degradado. Quando é utilizado um radioisótopo como uma substância de marcação, a quantidade de radiação do radioisótopo pode ser medida utilizando um contador de cintilação ou semelhante.

No segundo método da presente invenção, CAPRIN-1 que pode estar contida numa amostra obtida de um indivíduo é medida. Conforme descrito anteriormente, a quantidade de um anticorpo que passa por uma reação antigénio-anticorpo com CAPRIN-1 de um cão, um ser humano ou semelhante, é significativamente mais elevada em indivíduos com cancro pancreãtico, em comparação com indivíduos saudáveis. Isto indica que a quantidade de CAPRIN-1 acumulada como um antigénio é significativamente elevada em células de cancro pancreático. No caso de indivíduos saudáveis, o nível de expressão de CAPRIN-1 é abaixo do limite de deteção, ou a expressão de CAPRIN-1 no tecido é fraca e pode ocorrer meramente dentro das células. 0 cancro pancreãtico também pode ser detetado pela medição direta de CAPRIN-1, conforme especificamente descrito nos exemplos abaixo. Como tal, o cancro pancreático pode ser detetado num indivíduo pela medição da própria CAPRIN-1, como no caso do primeiro método.

Um polipéptido numa amostra pode ser facilmente medido por meio de técnicas de imunoensaio bem conhecidas. Especificamente, um anticorpo que passa por uma reação antigénio-anticorpo com CAPRIN-1 ou um fragmento de ligação a antigénio da mesma é preparado, e um imunoensaio é levado a cabo utilizando o mesmo. Consequentemente, a presença de CAPRIN-1 na amostra pode ser medida. Conforme descrito anteriormente, um anticorpo tem reatividade cruzada. Com a utilização de um anticorpo que passa por uma reação antigénio-anticorpo com CAPRIN-1 canina da SEQ ID NO: 6 ou fragmento de ligação a antigénio do mesmo, consequentemente, não somente a CAPRIN-1 canina da SEQ ID NO: 6, mas também seus homólogos em outros mamíferos (por exemplo, a CAPRIN-1 humana da SEQ ID NO: 2 ou 4) pode ser medida. A técnica de imunoensaio em si é uma técnica convencional bem conhecida, conforme descrito acima.

Este estudo revela que CAPRIN-1 é uma proteína da membrana celular que é expressa na superfície de células de cancro pancreático. Um indivíduo com cancro contém muitas proteases em tecidos de cancro. Consequentemente, uma porção da sequência de CAPRIN- 1 expressa fora das células de cancro é degradada e separada das células de cancro, e tal porção é maior em quantidade que a porção da sequência de CAPRIN-1 expressa nas células de cancro. Se um anticorpo capaz de se ligar às superfícies de células de cancro pancreático for utilizado como o anticorpo contra CAPRIN-1 na medição, ou se um fragmento de ligação a antigénio do mesmo for utilizado, consequentemente, uma maior quantidade de CAPRIN-1 pode ser detetada, e o cancro pancreático pode ser diagnosticado com maior sensibilidade.

Na presente invenção, consequentemente, a utilização de um anticorpo que se liga a uma porção expressa na superfície de uma célula de cancro pancreático de uma molécula de proteína CAPRIN-1 é preferível. Um exemplo de um péptido parcial de uma proteína CAPRIN-1 expressa na superfície de uma célula de cancro pancreático é um polipéptido que consiste numa sequência de aminoácidos de 7 a 12 ou mais resíduos de aminoácidos contínuos dentro da região de resíduos de aminoácidos (aa) 50 a 98 ou resíduos de aminoácidos (aa) 233 a 305 em quaisquer das sequências de aminoácidos representadas pelas SEQ ID NOs de número par: 2 a 30 na Listagem de Sequências, excluindo a SEQ ID NO: 6 e a SEQ ID NO: 18. Um exemplo específico do mesmo e", mas não está limitado a, a sequência de aminoãcidos representada pela SEQ ID NO: 43 ou SEQ ID NO: 61 (na sequência de aminoãcidos representada pela SEQ ID NO: 61, uma região da sequência de aminoãcidos representada pela SEQ ID NO: 62 ou SEQ ID NO: 63 é preferível) ou uma sequência de aminoãcidos tendo 80 % ou mais, preferentemente 85% ou mais, mais preferentemente 90% ou mais, e mais preferentemente 95% ou mais de identidade de sequência com a sequência aminoãcidos relevante. Adicionalmente, todos os anticorpos de ligação a estes polipéptidos estão dentro do âmbito dos anticorpos utilizados na presente invenção. Exemplos específicos incluem um anticorpo que se liga a um polipéptido que compreende uma sequência de aminoãcidos representada pela SEQ ID NO: 43 ou fragmento de ligação a antigénio do mesmo, um anticorpo monoclonal tendo as sequências de aminoãcidos representadas pelas SEQ ID NOs: 44 e 45 ou fragmento de ligação a antigénio do mesmo, um anticorpo monoclonal tendo as sequências de aminoãcidos representadas pelas SEQ ID NOs: 44 e 46 ou fragmento de ligação a antigénio do mesmo, um anticorpo monoclonal tendo as sequências de aminoãcidos representadas pelas SEQ ID NOs: 44 e 47 ou fragmento de ligação a antigénio do mesmo, um anticorpo monoclonal tendo as sequências de aminoãcidos representadas pelas SEQ ID NOs: 44 e 48 ou fragmento de ligação a antigénio do mesmo, um anticorpo monoclonal tendo as sequências de aminoãcidos representadas pelas SEQ ID NOs: 4 9 e 50 ou fragmento de ligação a antigénio do mesmo, um anticorpo monoclonal tendo as sequências de aminoãcidos representadas pelas SEQ ID NOs: 51 e 52 ou fragmento de ligação a antigénio do mesmo, um anticorpo monoclonal tendo as sequências de aminoãcidos representadas pelas SEQ ID NOs: 53 e 54 ou fragmento de ligação a antigénio do mesmo, um anticorpo monoclonal tendo as sequências de aminoãcidos representadas pelas SEQ ID NOs: 55 e 56 ou fragmento de ligação a antigénio do mesmo, um anticorpo monoclonal tendo as sequências de aminoãcidos representadas pelas SEQ ID NOs: 57 e 58 ou fragmento de ligação a antigénio do mesmo, e um anticorpo monoclonal tendo as sequências de aminoãcidos representadas pelas SEQ ID NOs: 59 e 60 ou fragmento de ligação a antigénio do mesmo. O termo "fragmento de ligação a antigénio" utilizado no presente documento refere-se a um fragmento de anticorpo capaz de se ligar a um antigénio, tal como um fragmento Fab, um fragmento F(ab')2 ou um fragmento Fv, contido numa molécula de anticorpo. Um anticorpo pode ser um anticorpo policlonal ou anticorpo monoclonal. Para o imunoensaio, é preferível um anticorpo monoclonal com alta reprodutibilidade. Métodos para a preparação de um anticorpo policlonal e um anticorpo monoclonal utilizando um polipéptido como um imunogênio são bem conhecidos e podem ser facilmente realizados de uma maneira convencional. Por exemplo, um animal é imunizado com CAPRIN-1 ou um fragmento da mesma só ou CAPRIN-1 ou um fragmento da mesma ligado a uma proteína portadora, tal como hemocianina de lapa californiana (KLH), caseína ou albumina sérica, como um imunogênio, juntamente com um adjuvante, e um anticorpo contra CAPRIN-1 pode então ser induzido. Células produtoras de anticorpo, tais como esplenócitos ou linfócitos, recolhidas do animal imunizado são fundidas a células de mieloma para preparar hibridomas, e os hibridomas que produzem um anticorpo que se liga CAPRIN-1 são selecionados e depois crescidos. Consequentemente, um anticorpo monoclonal cujo antigénio correspondente é CAPRIN-1 pode ser obtido a partir do sobrenadante da cultura. 0 método acima descrito é um método convencional bem conhecido.

No terceiro método da presente invenção, um ácido nucleico que codifica CAPRIN-1 (por exemplo, ARNm ou ADNc sintetizado a partir de ARNm) que pode estar contido numa amostra obtida de um organismo vivo é medido. Conforme especificamente descrito nos exemplos abaixo, um ácido nucleico que codifica a CAPRIN-1 canina da SEQ ID NO: 6, 8, 10, 12 ou 14 ou CAPRIN-1 humana da SEQ ID NO: 2 ou 4 é expresso a um nível significativamente elevado em células de cancro pancreático. Como tal, um cancro existente num organismo vivo pode ser detetado através da medição de tal ácido nucleico numa amostra. ARNm numa amostra pode ser quantitativamente medido por, por exemplo, um método convencional, tal como RT-PCR com deteção em tempo real utilizando o ARNm como molde. Tal ARNm pode geralmente ser quantitativamente medido com base na intensidade de coloração ou semelhante no método de Northern Blot convencional. As sequências de ADNc que codificam CAPRIN-1 das SEQ ID NOs de número par: 2 a 30 são representadas pelas SEQ ID NOs de número ímpar: 1 a 29, respetivamente. Consequentemente, um polinucleótido que especificamente hibrida a uma região parcial na sequência de nucleõtidos representadas pelas SEQ ID NOs de número ímpar: 1 a 29 (a seguir no presente documento, referidas como um "polinucleótido para a deteção de cancro") é preparado com base nessas sequências, e tal polinucleótido é utilizado como uma sonda ou um iniciador para a amplificação de ácido nucleico para determinar a quantidade do ARNm na amostra. Se um polinucleótido é capaz de especificamente hibridar a uma região parcial na sequência de nucleótidos representadas pelas SEQ ID NOs de número ímpar: 1 a 29, o ARNm que codifica CAPRIN-1 em mamíferos diferentes de cães e seres humanos também pode ser medido, conforme descrito posteriormente. Na presente invenção, um polinucleótido pode ser ARN ou ADN. 0 termo "hibridar especificamente a" utilizado no presente documento refere-se a uma situação em que o dito polinucleótido hibrida apenas com a região parcial alvo e substancialmente não hibridam com nenhuma outra região em condições de hibridação restringentes. 0 termo "sob condições de hibridação restringentes" utilizado no presente documento refere-se a condições empregues para anelamento em PCR geral ou deteção utilizando sonda. No caso de PCR utilizando Taq polimerase, por exemplo, é realizada uma reação a uma temperatura de anelamento apropriada variando desde cerca de 54°C até 60°C utilizando um tampão geral, tal como um tampão KC1 a 50 mM, Tris-HCl a 10 mM, (pH 8,3 a 9,0) e MgCl2 a 1,5 mM. No caso de hibridação Northern, por exemplo, a reação é realizada utilizando solução de hibridação geral tal como 5x SSPE, formamida a 50%, solução de Denhardt 5x, e SDS a 0,1-0,5%, ou SSC a 0,l-5x e SDS a 0,1--0,5% a uma temperatura de hibridação apropriada variando desde cerca de 42-65°C. Após a hibridação, a lavagem é realizada com, por exemplo, SSC a 0,1-0,2X e SDS a 0,1%. As temperaturas de anelamento ou temperaturas de hibridação apropriadas não são limitadas aos exemplos acima, e tais temperaturas são determinadas com base no valor de Tm para um polinucleótido para a deteção de cancro que é utilizado como um iniciador ou uma sonda e as regras empíricas da pessoa que conduz a experiência. Um perito na especialidade pode facilmente determinar tal intervalo de temperatura. A expressão "não híbrida substancialmente a" utilizada no presente documento refere-se uma situação em que o dito polinucleótido não híbrida a uma região parcial alvo em absoluto ou uma quantidade extremamente baixa do polinucleótido se híbrida a uma região parcial alvo, isto é, numa quantidade relativamente desprezível, mesmo quando hibrida a uma região parcial alvo. Um exemplo do polinucleótido que especificamente hibrida sob tais condições é um polinucleótido tendo um certo nível ou mais de uma identidade de sequência com a sequência de nucleõtidos de uma região parcial alvo. Por exemplo, tal polinucleótido tem 70% ou mais, preferentemente 80% ou mais, mais preferentemente 85% ou mais, ainda preferentemente 90% ou mais, ainda mais preferentemente 93% ou mais, ainda mais preferentemente 95% ou mais, e particularmente preferentemente 98% ou mais de identidade de sequência. O mais preferentemente, o polinucleótido tem uma sequência de nucleótidos idêntica à sequência de nucleótidos de uma região parcial alvo. A identidade de sequência é definida da mesma maneira que a identidade de sequência da sequência de aminoãcidos descrita acima. Mesmo se uma terminação de um polinucleótido para a deteção de cancro contém uma região que não híbrida ao mesmo, no caso de uma sonda, pode ser utilizado para a deteção jã que uma região de hibridação ocupa cerca de metade ou mais da sonda inteira. No caso de um iniciador, pode ser utilizado para a deteção já que uma região de hibridação ocupa cerca de metade ou mais do iniciador inteiro e está situado no lado 3' terminal, jã que isto permite um anelamento normal e a reação de extensão ocorre. Quando uma terminação de um polinucleótido para a deteção de cancro contém uma região que não híbrida, conforme descrito anteriormente, a identidade de sequência com uma sequência de nucleótidos alvo é calculada focando apenas na região de hibridação sem levar em consideração uma região não hibridizante.

Na presente invenção, o termo "sequência parcial" (ou "região parcial") refere-se a uma parte de uma sequência de nucleótidos representada por quaisquer das SEQ ID NOs de número ímpar: 1 a 29. Especificamente, a sequência parcial compreende pelo menos de 15 a 19 nucleótidos contínuos, preferentemente 18 ou mais nucleótidos contínuos, mais preferentemente pelo menos 20 ou 25 nucleótidos contínuos e ainda mais preferentemente cerca de 30, 40 ou 50 nucleótidos contínuos. A expressão "a sequência de nucleótidos representada pela SEQ ID NO: 5" utilizada no presente documento refere-se a, além da sequência de nucleótidos realmente mostrada na SEQ ID NO: 5, uma sequência complementar à mesma. Consequentemente, a expressão "um polinucleótido tendo a sequência de nucleótidos representada pela SEQ ID NO: 5" refere-se a, por exemplo, um polinucleótido de cadeia simples tendo a sequência de nucleótidos realmente representada pela SEQ ID NO: 5, um polinucleótido de cadeia simples tendo uma sequência de nucleótidos complementar à sequência de nucleótidos representada pela SEQ ID NO: 5, ou um polinucleótido de cadeia dupla que consiste nos dois polinucleótidos de cadeia simples. Quando um polinucleótido a ser utilizado na presente invenção é preparado ou um polinucleótido que codifica um polipéptido a ser utilizado na presente invenção é preparado, quaisquer das sequências de nucleótidos é selecionada apropriadamente e um perito na especialidade pode prontamente realizar tal seleção. 0 número de nucleótidos num polinucleótido para a deteção de cancro é de preferentemente IS ou mais em vista de assegurar a especificidade. Quando o polinucleótido é utilizado como uma sonda, preferentemente compreende 18 ou mais nucleótidos, e mais preferentemente compreende desde 20 nucleótidos até o comprimento completo da região codificante. Quando o polinucleótido é utilizado como um iniciador, preferentemente compreende de 18 a 50 nucleótidos. Um exemplo preferível do polinucleótido para a deteção de cancro é um polinucleótido que compreende 18 ou mais nucleotídeos contínuos numa sequência de nucleótidos representada por quaisquer das SEQ ID NOs de número ímpar: 1 a 2 9. É aparente para um perito na especialidade que se refere à descrição da presente invenção que: o polinucleótido que híbrida especificamente a uma região parcial da SEQ ID NO: 5, 7, 9, 11 ou 13 é utilizado para medir a quantidade de um ácido nucleico (por exemplo, ARNm ou ADNc sintetizado a partir de ARNm) que codifica a proteína CAPRIN-1 canina da SEQ ID NO: 6, 8, 10, 12 ou 14, respetivamente; e um polinucleõtido que híbrida especificamente a uma região parcial na SEQ ID NO: 1 ou 3 é utilizado para medir a quantidade de um ácido nucleico (por exemplo, ARNm ou ADNc sintetizado a partir de ARNm) que codifica a proteína CAPRIN-1 humana da SEQ ID NO: 2 ou 4, respetivamente. Contudo, a proteína de um dado mamífero e um homólogo da mesma de outro mamífero geralmente compartilham uma elevada identidade de sequência mesmo ao nível de sequência nucleotídica. Consequentemente, a identidade de sequência entre as sequências nucleotídicas das SEQ ID NOs: 1 a 13 também é tão elevada como de 94% a 100%. Consequentemente, um polinucleótido híbrida especificamente a uma região parcial da sequência da SEQ ID NO: 5 também pode especificamente hibridar a uma região parcial correspondente à região parcial de quaisquer das SEQ ID NOs de número ímpar: 1 a 29.

De facto, um par de iniciadores tendo as sequências de nucleótidos representadas pelas SEQ ID NO: 33 e 34 especificamente hibridam a tanto uma região parcial de quaisquer das SEQ ID NOs de número ímpar: 1 a 29 e uma região parcial da sequência da SEQ ID NO: 5, conforme descrito nos exemplos abaixo. Consequentemente, tanto o ARNm que codifica a CAPRIN-1 canina da SEQ ID NO: 6 como o ARNm que codifica um homólogo da mesma podem ser medidos. Com a utilização de um polinucleótido que híbrida especificamente a uma região parcial da sequência da SEQ ID NO: 5, consequentemente, não somente o ARNm que codifica a CAPRIN-1 canina da SEQ ID MO: 6 mas também o ARNm que codifica a CAPRIN-1 humana da SEQ ID NO: 2 ou 4 podem ser medidos. De forma semelhante, o ARNm que codifica CAPRIN-1 de outro mamífero tal como um gato também pode ser medido. Quando um polinucleõtido para a deteção de cancro é concebido, é mais desejável selecionar regiões parciais tendo identidade de sequência particularmente elevada de entre as SEQ ID NOs de número ímpar: 1 a 29 (e sequências de nucleótidos idênticas são preferíveis). Se existir uma região parcial tendo identidade de sequência particularmente elevada entre CAPRIN-l canina e CAPRIN-l humana, espera-se que uma região mostrando identidade de sequência muito elevada com tal região também esteja presente num gene homólogo de outras espécies de animais. Através da seleção de tal região parcial, a precisão para medir o ARNm que codifica CAPRIN-l de uma espécie de animal diferente de cães ou seres humanos pode ser aumentada.

Um método para a medição de um ácido nucleico no objeto de teste utilizando um polinucleótido que híbrida especificamente com uma região parcial do ácido nucleico, tal como uma sonda ou um iniciador (es) para o método de amplificação de ácido nucleico tal como a PCR é bem conhecido. Exemplos de tal método incluem, para além da RT-PCR conforme especificamente descrito nos exemplos abaixo, Northern blot e hibridação in situ . Quando a quantidade de ARNm é medida na presente invenção, qualquer método de medição bem conhecido pode ser empregue.

Um método de amplificação de ácido nucleico tal como PCR é bem conhecido na técnica e kits de reagente e aparelhos utilizados para isso estão comercialmente disponíveis, de modo que o método pode ser facilmente realizado. Especificamente, as etapas de desnaturação, anelamento e extensão são cada uma realizada utilizando um ácido nucleico no objeto de teste (por exemplo, o ADNc de um gene que codifica uma proteína tendo a sequência de aminoácidos representada por qualquer das SEQ ID NOs de número par: 2 a 30) como um molde e um par de polinucleótidos (iniciadores) para a deteção de cancro num tampão conhecido na presença de ADN polimerase termoestãvel tal como Taq polimerase ou Pfu polimerase e dNTPs (aqui, N = A, T, C e G) variando a temperatura da solução de reação em cada etapa. No geral, a etapa de desnaturação é realizada a 90 a 95 °C, a etapa de anelamento é realizada a ou próximo Tm do molde e os iniciadores (preferentemente dentro de ± 4°C), e a etapa de extensão é realizada a 72°C, que é a temperatura ótima para a ADN polimerase termoestável tal como Taq polimerase ou Pfu polimerase, ou uma temperatura próxima à temperatura ótima. A duração de cada etapa é adequadamente ajustada a entre cerca de 30 segundos e 2 minutos. Este ciclo de aquecimento é repetido cerca de 2 5 a 4 0 vezes, por exemplo, de modo que a região de ácido nucleico molde intercalada entre um par de iniciadores é amplificada. O método de amplificação de ácido nucleico não é limitado a PCR e quaisquer outros métodos de amplificação de ácido nucleico bem conhecidos na técnica podem ser empregues. Quando um método de amplificação de ácido nucleico é realizado utilizando um par de polinucleótidos para a deteção de cancro como iniciadores e um ácido nucleico de no objeto de teste como um molde, conforme descrito anteriormente, o ácido nucleico é amplificado. Se a amostra não contém o ácido nucleico de teste, contudo, a amplificação não ocorre. Consequentemente, o produto de amplificação pode ser detetado de modo a determinar a presença ou ausência de ácido nucleico na amostra. Um produto de amplificação pode ser detetado por um método que compreende submeter uma solução de reação após amplificação a eletroforese e, em seguida, uma coloração da banda com brometo de etídio ou semelhante ou um método que compreende a imobilização de um produto de amplificação após eletroforese sobre uma fase sólida tal como uma membrana de náilon, realizando a hibridação com uma sonda de marcação que híbrida especificamente com um ácido nucleico, lavagem e depois deteção da etiqueta. Igualmente, a denominada PCR de deteção em tempo real é realizada utilizando um corante fluorescente extintor e um corante fluorescente repórter, e a quantidade de um ácido nucleico num espécime pode, assim, ser quantificado. Uma vez que os kits para a PCR de deteção em tempo real estão comercialmente disponíveis, a PCR de deteção em tempo real pode ser realizada facilmente. Adicionalmente, a medição semiquantitativa de um ácido nucleico no objeto de teste pode ser levada a cabo com base na intensidade da banda de eletroforese. Um ácido nucleico num objeto de teste pode ser ARNm ou ADNc transcrito de forma reversa do ARNm, Quando ARNm é amplificado como um ácido nucleico, um método NASBA (o método 3SR ou método TMA) utilizando o par de iniciadores acima também pode ser empregue. 0 método NASBA é bem conhecido e kits para o mesmo também estão comercialmente disponíveis, de modo que o método de pode ser realizado facilmente utilizando o par de iniciadores acima.

Como uma sonda, uma sonda marcada que é preparada pela marcação de um polinucleótido para a deteção do cancro com um marcador fluorescente, um radiomarcador, marcador de biotina ou semelhantes pode ser usada. Método para a marcação de um polinucleótido são bem conhecidos. A presença ou ausência de um ácido nucleico numa amostra pode ser examinada pela imobilização de um ácido nucleico ou um produto de amplificação do mesmo, realização da hibridação com uma sonda marcada, lavagem e depois medição do marcador ligado à fase sólida. Alternativamente, um polinucleótido para a deteção de cancro é imobilizado, um ácido nucleico num objeto de teste é hibridado ao mesmo, e o ácido nucleico de teste ligado à fase sólida depois pode ser detetado utilizando a sonda marcada ou semelhante. Num tal caso, um polinucleótido para a deteção de cancro ligado à fase sólida é também referido como uma "sonda". Os métodos para a medição de um ácido nucleico utilizando uma sonda de polinucleótido também são bem conhecidos na técnica. Tal método pode ser realizado, num tampão, colocando uma sonda de polinucleótido em contacto com um ácido nucleico num objeto de teste a Tm ou próximo a Tm (preferentemente, ± 4°C) para a hibridação, lavando e, em seguida, medindo a sonda marcada hibridada ou o ácido nucleico de molde ligado à sonda de fase sólida. Exemplos de tal método incluem métodos bem conhecidos tais como transferência Northern, hibridaçãoín situ e transferência Southern. Na presente invenção, qualquer método bem conhecido é aplicável.

De acordo com o método de deteção da presente invenção, avalia-se se um animal (ou indivíduo) está ou não afligido com cancro pancreãtico com base na presença ou quantidade de expressão de CAPRIN-1 medida conforme descrito acima. Embora o cancro pancreático possa ser detetado apenas medindo a presença ou quantidade de expressão de CAPRIN-1 num animal, é preferível que os níveis de expressão (o nível de anticorpo, nível de polipéptido ou nível de ARNm) de CAPRIN-1 em uma ou mais amostras de indivíduos saudáveis e o valor determinado de um animal é comparado com o valor padrão obtido de indivíduos saudáveis, em vista da melhora da precisão da deteção. A melhorar mais a precisão da deteção, os níveis de expressão de CAPRIN-1 são medidos para as amostras obtidas de muitos pacientes que se encontrou que têm cancro pancreãtico, de modo a obter um valor padrão para os pacientes com cancro pancreático, e o valor determinado de um animal depois pode ser comparado com tanto o valor padrão para indivíduos saudáveis como o valor padrão para pacientes com cancro pancreático. Os valores padrão acima podem ser determinados por, por exemplo, quantificação do nível de expressão de CAPRIN-1 em cada amostra e cálculo do valor médio do mesmo. 0 valor padrão para indivíduos saudáveis e o mesmo para pacientes com cancro pancreático podem ser determinados com antecedência medindo os níveis de expressão de CAPRIN-1 em muitos indivíduos saudáveis e pacientes com cancro pancreãtico. Quando a comparação com o valor padrão é realizada no método da presente invenção, consequentemente, um valor padrão determinado com antecedência pode ser utilizado. 0 método de deteção da presente invenção pode compreender o diagnóstico com base em outros antigénios de cancro ou marcadores de cancro em combinação. Isto pode ainda melhorar a precisão da deteção de cancro pancreático. Quando um anticorpo especificamente existente em pacientes com cancro pancreático é medido pelo método da presente invenção, por exemplo, um outro polipéptido que é frequentemente expresso num tecido de cancro pode ser utilizado em combinação como um antigénio de uma maneira semelhante a aquela utilizada para os polipéptidos descritos acima. Igualmente, o método da presente invenção pode ser realizado em combinação com o diagnóstico utilizando um marcador de cancro conhecido anteriormente. 0 cancro pancreático a ser submetido ao método para a deteção de cancro pancreático da presente invenção é cancro pancreático que expressa CAPRIN-1. Exemplos de tal cancro incluem, mas não estão limitados a, carcinoma ductal pancreático, carcinoma ductal pancreático invasivo, adenocarcinoma, carcinoma das células acinares, carcinoma adenosquamoso, tumor de células gigantes, neoplasma mucino papilar intraductal (IPMN), neoplasma cístico mucino (MCN), pancreatoblastoma, cistadenocarcinoma seroso, tumor pseudopapilar-sólido (SPT), gastrinomas (síndrome de Zollinger-Ellison), glucagonomas, insulinomas, neoplasia endócrina múltipla de Tipo 1 (MEN1) (síndrome de Wermer), tumor de células de ilhotas não funcionais, somatostatinomas e VIPomas. Um indivíduo no método da presente invenção é um mamífero, preferentemente um ser humano ou um cão.

Exemplos de amostras a serem submetidas ao método da presente invenção incluem fluidos corporais, tais como sangue, soro, plasma sanguíneo, fluido ascítico e efusão pleural, tecidos e células. No primeiro método e no segundo método, em particular, soro, plasma sanguíneo, fluido ascítico, efusão pleural, tecido e amostras de células podem ser preferentemente utilizados. No terceiro método que compreende medir um ácido nucleico tal como ARNm, tecido e amostras de células são preferíveis.

Um ou mais polipéptidos a serrem utilizados como antigénios para imunoensaio no primeiro método descrito acima (isto é, a CAPRIN-1 canina da SEQ ID NO: 2 e um homólogo do mesmo, um polipéptido parcial especificamente reativo, um polipéptido modificado especificamente reativo e um polipéptido de adição especificamente reativo) podem ser proporcionados como reagentes ou kits para a deteção de cancro pancreático, tal reagente pode consistir no polipéptido acima, ou pode conter vários aditivos úteis para a estabilização do polipéptido, um tampão necessário para o ensaio, anticorpos secundários, substratos para enzimas ou semelhante, separadamente. Alternativamente, tal reagente pode ser imobilizado numa fase sólida tal como uma placa ou membrana. Exemplos preferíveis de tais polipéptidos são dados acima.

Um anticorpo ou um fragmento de ligação a antigénio do mesmo, que passa por uma reação antigénio-anticorpo com CAPRIN-1, utilizado para imunoensaios de CAPRIN-1 pelo segundo método também podem ser proporcionados na forma de um reagente para a deteção de cancro pancreático. 0 reagente para a deteção de cancro pancreático pode consistir no anticorpo acima ou um fragmento de ligação a antigénio do mesmo. 0 reagente pode conter vários aditivos úteis para a estabilização de tal anticorpo ou um fragmento de ligação a antigénio do mesmo. Alternativamente, um metal, tal como manganês ou ferro, podem ser ligados ao anticorpo ou um fragmento de ligação a antigénio do mesmo. Quando tal anticorpo ligado a metal ou um fragmento de ligação a antigénio é administrado a um organismo vivo, o anticorpo ligado a metal ou fragmento de ligação a antigénio do mesmo é acumulado a um nível aumentado num local em que a proteína de antigénio está presente a um maior nível. Quando tal anticorpo ligado a metal ou fragmento de ligação a antigénio é administrado a um organismo vivo, o anticorpo ligado a metal ou fragmento de ligação a antigénio do mesmo é acumulado a um nível aumentado num local em que a proteína de antigénio está presente a um maior nível. Como tal, o metal é medido por MRI ou semelhante e a presença de células de cancro que produzem a proteína de antigénio pode assim ser detetada.

Adicionalmente, um ou mais dos polinucleótidos acima para a deteção de cancro pancreático a ser utilizado para medir um ácido nucleico tal como ARNm no terceiro método também pode ser proporcionado como um reagente ou kit para a deteção de cancro pancreático. Num tal caso, o reagente para a deteção de cancro pancreático pode consistir no polinucleótido, ou pode conter vários aditivos úteis para a estabilização do polipéptido, um tampão necessário para o ensaio (por exemplo, uma etiqueta fluorescente) e semelhantes, separadamente. 0 polinucleótido para a deteção do cancro pancreático contido no reagente é preferentemente um iniciador ou uma sonda. As condições e os exemplos preferíveis do polinucleótido para a deteção de cancro pancreático são como descrito acima.

Exemplos A presente invenção será descrita em mais detalhe com referência aos seguintes exemplos, embora o âmbito técnico da presente invenção não seja limitado aos exemplos.

[Exemplo 1] Obtenção de proteína antigénica de cancro pancreático pelo método SEREX (1) Construção de biblioteca de ADNc 0 ARN total foi extraído de um tecido de testículo de um cão saudável através do método de guanidínio ácido-fenol-clorofórmio, e poli A-ARN foi purificado utilizando um kit de purificação de ARNm 01igotex-dT30 (Takara Shuzo Co., Co., Ltd.) de acordo com os protocolos incluídos no kit.

Uma biblioteca de fagos de ADNc de testículos caninos foi sintetizada utilizando o ARNm assim obtido (5 ug) . A biblioteca de fagos de ADNc foi construída utilizando o Kit cDNA Synthesis, o kit ZAP-cDNA Synthesis e o Kit ZAP-cDNA Gigapack III Gold Cloning (STRATAGENE) de acordo com os protocolos incluídos nos kits. 0 tamanho da biblioteca de fagos de ADNc assim construída foi de 7,73 x 10b pfu/ml. (2) Rastreio da biblioteca de ADNc utilizando soro 0 imunorastreio foi realizado utilizando a biblioteca de fagos de ADNc de testículos caninos preparada acima. Especificamente, E. coli hospedeira (XLl-Blue MRF') foi infetada com o fago numa placa de agarose NZY (Φ90 x 15 mm) de modo a obter 2.210 clones. As células de E. coli foram cultivadas a 42 °C durante 3 a 4 horas para formar placas. A placa foi coberta com uma membrana de nitrocelulose (Hybond C Extra: GE Healthcare Bio-Science) impregnada com IPTG (isopropil-3-D-tiogalactósido) a 37°C durante 4 horas, de modo que a proteína foi induzida para se expressar e depois foi transferida à membrana. Posteriormente, a membrana foi recolhida e depois embebida em TBS (Tris-HCl a 10 mM, NaCl a 150 mM, pH 7,5) contendo 0,5% de leite em pó magro, seguido por agitação a 4 °C durante a noite, de modo a suprimir as reações não específicas. 0 filtro foi submetido a unia reação com o soro diluído 500 vezes de um cão afetado à temperatura ambiente durante 2 a 3 horas.

Como o soro acima do cão afetado, um soro recolhido de um cão afetado com cancro pancreático foi utilizado. 0 soro foi armazenado a -80 °C e posteriormente foi submetido a pré-tratamento imediatamente antes da sua utilização. Um método para o pré-tratamento do soro é como se segue. Especificamente, E. coli hospedeira (XLl-Blure MRF') foi infetada com o fago λ ZAP Express no qual não tinha sido introduzido nenhum gene exógeno, e a cultura foi conduzida durante a noite num meio da placa NZY a 3 7 °C. Subsequentemente, tampão (NAHC03 a 0,2 M, pH 8,3) contendo

NaCl a 0,5 M foi adicionado à placa, foi permitido à placa permanecer a 4 °C durante 15 horas, e um sobrenadante foi depois recolhido como um extrato de E. coli/fago. 0 extrato de E. coli/fago assim recolhido foi depois aplicado a uma coluna NHS (GE Healthcare Bio-Science) , de modo que uma proteína derivada de E. coli/fago foi imobilizada. 0 soro do cão afetado foi aplicado à coluna de proteína imobilizada para a reação e a Escherichia coli e o soro adsorvido ao fago foram depois removidos do soro. A fração de soro que fluiu através da coluna foi diluída 500 vezes com TBS contendo leite magro em pó a 0,5%. A fração de soro diluído foi utilizada como um material de imunorrastreio. A membrana sobre a qual o soro tratado e proteína de fusão acima foram transferidos foi lavada 4 vezes com TBS-T (Tween 20 a 0,05%/TBS), e a membrana depois foi deixada a reagir com IgG de cabra anti-cão (IgG de cabra anti-cão-h+I HRP conjugados, BETHYL Laboratories) diluído 5000 vezes com TBS contendo 0,5% de leite magro em pó como um anticorpo secundário à temperatura ambiente durante 1 hora. A deteção foi realizada através da reação de desenvolvimento de cor enzimãtica utilizando a solução de reação NBT/BCIP (Roche). As colónias que correspondiam com o locais positivos para a reação de desenvolvimento de cor foram recolhidas da placa de agarose NZY (Φ90 x 15 mm) e depois dissolvidas em 500 μΐ de um tampão SM (NaCl a 100 mM, MgClS04 a 10 mM, Tris-HCl a 50 mM, gelatina a 0,01%, pH 7,5) . Até que as colónias positivas para a reação de desenvolvimento de cor foram unificadas, repetiram-se rastreios secundários e terciários através de um método semelhante ao descrito acima, de modo que 30.940 clones de fagos que reagem com a IgG de soro foram rastreados. Consequentemente, 5 clones positivos foram isolados. (3) Pesquisa de homologia para gene de antigénio isolado

Para a análise de sequência de nucleótidos dos 5 clones positivos isolados pelo método acima, um procedimento para a conversão dos vetores de fagos a vetores de plasmídeos foi realizado. Especificamente, 200 μΐ de uma solução contendo Escherichia coli hospedeira (XLl-Blue MRF') na absorvância (DO 600) de 1,0 foi preparada. A solução foi misturada com 250 μΐ de uma solução de fagos purificada e 1 μΐ de fago auxiliar ExAssist (STRATAGENE), a mistura foi submetida a uma reação a 37°C durante 15 minutos, 3 ml de meio LB foram adicionados aí, e a cultura foi depois realizada a 37°C durante 2,5 a 3 horas. Imediatamente depois disso, a temperatura da solução foi mantida num banho de água a 70°C durante 20 minutos, a centrifugação foi realizada a 4 °C e 1000 x g durante 15 minutos, e o sobrenadante foi depois recolhido como uma solução de fagemídeo. Subsequentemente, 200 μΐ de uma solução contendo Escherichia coli hospedeira fagemídeo (SOLR) na absorvância DO600 de 1,0 foi preparada. A solução resultante foi misturada com 10 μΐ de uma solução de fagos purificada, seguida por uma reação a 37°C durante 15 minutos. 0 produto de reação (50 ml) foi semeado em meio de agar LB contendo ampicilina (concentração final: 50 pg/ml) e a cultura foi levada a cabo a 37 °C durante a noite. Uma colónia isolada de SOLR transformada foi recolhida e cultivada posteriormente em meio LB contendo ampicilina (concentração final: 50 pg/ml) a 37°C. Depois disso, o ADN de plasmídeo contendo um inserto de interesse foi purificado utilizando o Kit Miniprep plasmid QIAGEN (QIAGEN). 0 plasmídeo purificado foi submetido a análise da sequência de comprimento completo do inserto através do método de primer walking utilizando o iniciador T3 representado pela SEQ ID NO: 31 e o iniciador T7 representado pela SEQ ID NO: 32. Como resultado da análise de sequência, as sequências génicas representadas pelas SEQ ID NOs: 5, 7, 9, 11 e 13 foram obtidas. Um programa de

pesquisa de homologia, pesquisa BLAST (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/), foi realizada utilizando as sequências de nucleótidos e as sequências de aminoácidos (SEQ ID NOs: 6, 8, 10, 12 e 14) dos genes. Como um resultado desta pesquisa de homologia com genes conhecidos, descobriu-se que todos os 5 genes obtidos codificavam CAPRIN-1. A identidade de sequência entre os 5 genes foi de 100 % para a sequência de nucleótidos e de 99 % para a sequência de aminoácidos nas regiões traduzidas em proteínas. Igualmente, a identidade de sequência entre o gene canino (quaisquer das SEQ ID NO: 5, 7, 9. 11 ou 13) e um gene que codifica um homólogo humano do mesmo foi de 94% para a sequência de nucleótidos e de 98 % para a sequência de aminoácidos nas regiões traduzidas em proteínas. As sequências nucleotídicas do homólogo humano são representadas pelas SEQ ID NOs: 1 e 3 e as sequências de aminoácidos dos mesmos são representadas pelas SEQ ID NOs: 2 e 4. Igualmente, a identidade de sequência entre o gene canino obtido e o gene que codifica um homólogo de gado foi de 94% para a sequência de nucleótidos e de 97% para a sequência de aminoácidos nas regiões traduzidas em proteínas. A sequência nucleotídica do homólogo de gado é representada pela SEQ ID NO: 15 e a sequência de aminoácidos do mesmo é representada pela SEQ ID NO: 16. A identidade de sequência entre o gene que codifica o homólogo humano e o gene que codifica um homólogo de gado foi de 94% para a sequência de nucleótidos e variou de 93% a 97% para a sequência de aminoácidos nas regiões traduzidas em proteínas. Igualmente, a identidade de sequência entre o gene canino obtido e o gene que codifica um homólogo de equino foi de 93% para a sequência de nucleótidos e de 97% para a sequência de aminoácidos nas regiões traduzidas em proteínas. A sequência nucleotídica do homólogo equino é representada pela SEQ ID NO: 17 e a sequência de aminoácidos do mesmo é representada pela SEQ ID NO: 18. A identidade de sequência entre o gene que codifica o homólogo humano e o gene que codifica um homólogo de equino foi de 93% para a sequência de nucleótidos e de 96% para a sequência de aminoãcidos nas regiões traduzidas em proteínas. Igualmente, a identidade de sequência entre o gene canino obtido e o gene que codifica um homólogo de ratinho foi de 87% a 89% em termos de sequência de nucleótidos e variou desde 95% até 97% para a sequência de aminoãcidos nas regiões traduzidas em proteínas. As sequências nucleotídicas dos homólogos de ratinho são representadas pelas SEQ ID NOs: 19, 21, 23, 25

e 27 e as sequências de aminoãcidos dos mesmos são representadas pelas SEQ ID NOS: 20, 22, 24, 26 e 28. A identidade de sequência entre o gene que codifica o homólogo humano e o gene que codifica um homólogo de ratinho variou desde 89% até 91% para a sequência de nucleótidos e variou desde 95% até 96% para a sequência de aminoãcidos nas regiões traduzidas em proteínas.

Igualmente, a identidade de sequência entre o gene canino obtido e o gene que codifica um homólogo de galinha foi de 82% para a sequência de nucleótidos e de 87% para a sequência de aminoãcidos nas regiões traduzidas em proteínas. A sequência nucleotídica do homólogo de galinha é representada pela SEQ ID NO: 2 9 e a sequência de aminoãcidos do mesmo é representada pela SEQ ID NO: 30. A identidade de sequência entre o gene que codifica o homólogo humano e o gene que codifica um homólogo de galinha variou desde 81% até 82% para a sequência de nucleótidos e de 86% para a sequência de aminoãcidos nas regiões traduzidas em proteínas. (4) Análise de expressão génica em linhas celulares de cancro pancreãtico humano A expressão dos genes obtidos pelo método acima em tecidos humanos normais (isto é, glândulas mamárias, cérebro, medula óssea, pulmão, esófago, pâncreas e testículos) e 4 tipos de linhas celulares de cancro pancreãtico (isto é, Capan-2, MIAPaCa- 2, PANC-1 e BxPC-3) foi examinada por meio de RT-PCR (PCR de transcrição reversa). Uma reação da transcriptase reversa realizou-se conforme segue. Especificamente, o ARN total foi extrato a partir de cada tecido (de 50 mg a 100 mg) e cada linha celular (5-10 x 1Q6 células) utilizando o reagente TRIZOL (Invitrogen) de acordo com os protocolos anexos, o ADNc foi sintetizado utilizando o ARM total e o sistema de síntese de primeira cadeia Superscript para RT-PCR (Invitrogen) de acordo com os protocolos anexos. A PCR foi realizada utilizando iniciadores específicos para os genes obtidos (representados pelas SEQ ID NOs: 33 e 34). Especificamente, a PCR foi realizada preparando uma solução de reação para completar uma quantidade total da mesma a 2 5 μΐ com a adição de reagentes e um tampão incluído (isto é, 0,25 of de uma amostra preparada pela reação de transcrição reversa, os iniciadores acima (2 μΜ cada), dNTPs (0,2 mM cada), 0,65 U de ExTaq polimerase (Takara Shuzo, Co. , Ltd.)), a solução resultante foi submetida a um ciclo a 94°C durante 30 segundos, 60 °C durante 30 segundos, e 72 °C durante 30 segundos utilizando um aparelho Thermal Cycler (BIO RAD), e este ciclo foi repetido 30 vezes. Os iniciadores específicos do gene mencionados acima foram utilizados para amplificar a região entre o nucleótido N° 698 e o nucleótido N° 1124 na sequência nucleotídica representada pela SEQ ID NO: 1 (o gene da CAPRIN-1 humana). Para comparação, os iniciadores específicos de GAPDH (representados pelas SEQ ID NOS: 35 e 36) foram utilizados ao mesmo tempo. Como um resultado da inspeção da expressão génica de CAPRIN-1 humana, observou-se a expressão da mesma apenas nos testículos no caso de tecidos saudáveis de cão, embora a expressão tenha sido observada nas células de cancro pancreático. Os resultados demonstram que a expressão de CAPRIN-1 não foi observada em tecidos normais diferentes daqueles dos testículos, enquanto a expressão de CAPRIN-1 foi observada nas células de cancro pancreático. (5) Expressão de CAPRIN-1 em tecidos de ratinho e caninos normais

Ratinhos (Balb/c, fêmeas) e cães (cães beagle, fêmeas) foram exanguinados sob anestesia por éter e anestesia por cetamina/isoflurano. Após laparatomia, órgãos (estômago, fígado, globo ocular, timo, músculo, medula óssea, útero, intestino delgado, esófago, coração, rim, glândulas salivares, intestino grosso, glândulas mamárias, cérebro, pulmão, pele, glândulas supra-renais, ovário, pâncreas, baço e bexiga) foram, cada um, transferidos a uma placa de 10 cm contendo PBS. Cada órgão foi aberto em PBS e posteriormente fixo por perfusão durante a noite em tampão fosfato a 0,1 M (pH 7,4) contendo paraformaldeído (PFA) a 4 %. 0 perfusato foi descartado, a superfície de tecido de cada órgão foi lavada com PBS, e uma solução de PBS contendo 10% de sacarose foi posteriormente introduzida num tubo de centrifugação de 50 ml. Cada tecido foi posteriormente introduzido em cada tubo, seguida por agitação utilizando um rotor a 4°C durante 2 horas. Cada solução foi substituída por uma solução de PBS contendo sacarose a 20% e posteriormente deixou-se repousar a 4 °C até que os tecidos precipitaram. Cada solução foi substituída por uma solução de PBS contendo sacarose a 30% e posteriormente deixou-se repousar a 4 °C até que os tecidos precipitaram. 0 tecido foi removido e uma porção necessária foi excisada com um bisturi cirúrgico. Subsequentemente, o composto OCT (Tissue Tek) foi aplicado a espalhado sobre a superfície de cada tecido e os tecidos foram então colocados em Cryomold. Colocou-se o Cryomold em gelo seco para congelamento rápido. Os tecidos foram fatiados em peças de 10 pm a 20 pm de comprimento utilizando um criostato (LEICA), as peças de tecido fatiado foram posteriormente secas ao ar em lâminas de vidro durante 30 minutos utilizando um secador de cabelo, e as lâminas de vidro sobre as quais as peças de tecido fatiado foram aplicadas foram assim preparadas. Subsequentemente, cada lâmina de vidro foi introduzida numa garrafa de coloração preenchida com PBS-T (solução salina contendo 0,05% de Tween 20), um procedimento envolvendo trocar PBS-T com PBS-T fresco foi realizado a cada 5 minutos, e este procedimento foi repetido 3 vezes. A água em excesso ao redor de cada espécime foi removida utilizando Kimwipes e cada secção foi depois circundada utilizando DAKOPEN (DAKO). Como soluções de bloqueio, Foi aplicado um reagente de bloqueio de Ig de ratinho MOM (VECTASTAIN) sobre tecido de ratinho e uma solução de PBS-T contendo soro de vitelo fetal a 10% foi aplicada sobre tecido canino. Os resultantes deixaram-se repousar numa câmara húmida à temperatura ambiente durante 1 hora. Subsequentemente, uma solução preparada com a solução de bloqueio para um anticorpo monoclonal anti-CAPRIN-1 a 10 pg/ml (anticorpo monoclonal n.° 8) tendo a região variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 55 e a região variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 56, que reage com as superfícies de células de cancro preparadas no Exemplo 3, foi aplicada sobre cada lâmina de vidro e depois deixou-se repousar dentro de uma câmara húmida a 4°C durante a noite. Após 3 ocasiões de lavagem de 10 minutos com PBS-T, Um anticorpo anti-IgG marcado com biotina MOM (VECTASTAIN) diluído 250 vezes com a solução de bloqueio foi aplicado sobre cada lâmina de vidro e depois deixado em repouso dentro de uma câmara húmida à temperatura ambiente durante 1 hora. Após 3 ocasiões de lavagem de 10 minutos com PBS-T, foi aplicado um reagente ABC de avidina-biotina (VECTASTAIN) e depois deixou-se em repouso dentro de uma câmara húmida à temperatura ambiente durante 5 minutos. Após 3 vezes de lavagem de 10 minutos com PBS-T, uma solução de coloração DAB (10 mg de DAB + 10 μΐ de H202 a 30% e 50 ml de Tris-HCl a 0,05 M, pH 7,6) foi aplicado e as lâminas de vidro depois foram deixadas em repouso dentro de uma câmara húmida à temperatura ambiente durante 30 minutos. As lâminas de vidro foram enxaguadas com água destilada e foi aplicado um reagente de hematoxilina (DAKO). Após ter sido deixada a repousar à temperatura ambiente durante 1 minuto, as lâminas de vidro foram enxaguadas com água destilada. As lâminas de vidro foram colocadas em soluções de etanol a 70%, 80%, 90%, 95% e 100% em tal ordem durante 1 minuto cada e posteriormente deixou-se repousar durante a noite em xileno. As lâminas de vidro foram removidas, cobertas com uma lamela com meio de montagem Glycergel (DAKO) e depois observadas. Como um resultado, observou-se a expressão de CAPRIN-1 a um ligeiro grau dentro das células em todos os tecidos de glândulas salivares, rim, cólon e estômago, mas não foi observada nenhuma expressão de CAPRIN-1 nas superfícies celulares. Igualmente, não se observou nenhuma expressão de CAPRIN-1 em tecidos de outros órgãos.

[Exemplo 2] Preparação de proteínas CAPRIN-1 canina e humana (1) Preparação de proteína recombinante

Uma proteína recombinante foi preparada pelo seguinte método com base no gene da SEQ ID NO: 5 obtido no Exemplo 1. A PCR foi realizada preparando uma solução de reação para completar uma quantidade total da mesma a 50 μΐ com a adição de reagentes e um tampão incluído (isto é, 1 μΐ de um vetor preparado a partir da solução de fagemídeo obtida no Exemplo 1 e pois submetido a análise de sequência, 2 tipos de iniciadores contendo sequências de clivagem de enzima de restrição Ndel e Kpnl (0,4 μΜ cada; SEQ ID NOs: 37 e 38), 0,2 mM de dNTPs e 1,25 U de polimerase PrimeSTAR HS (Takara Shuzo Cg., Co., Ltd.)), a solução resultante foi submetida a um ciclo a 98°C durante 10 segundos e 68°C durante 1,5 minutos utilizando um aparelho Thermal Cycler (BIO RAD), e este ciclo foi repetido 30 vezes.

Os 2 tipos de iniciadores acima foram utilizados para amplificar a região que codifica a sequência de aminoãcidos de comprimento completo de SEQ ID NO: 6 (CAPRIN-1 canina). Após a PCR, o ADN amplificado foi submetido a eletroforese em gel de agarose a 1 %, e um fragmento de ADN de cerca de 1,4 kpb depois foi purificado utilizando o QIAquick Gel Extraction Kit (QIAGEN). 0 fragmento de ADN purificado foi ligado a um vetor de clonagem pCR-Blunt (Invitrogen). 0 vetor foi transformado em E. coli, o plasmídeo foi recolhido, e o fragmento de gene amplificado foi confirmado como correspondendo à sequência alvo através de sequenciação. 0 plasmídeo coincidente com a sequência alvo foi tratado com enzimas de restrição Ndel e Kpnl, o produto resultante foi purificado utilizando um QIAquick Gel Extraction Kit, e a sequência génica alvo foi inserida num vetor de expressão pET30b (Novagen) para Escherichia coli tratados com as enzimas de restrição Ndel e Kpnl. Com a utilização do vetor resultante, uma proteína recombinante fundida com etiqueta His pode ser produzida. 0 plasmídeo foi transformado em Escherichia coli BL21 (DE3) para expressão, e a proteína alvo foi induzida para expressar em Escherichia coli com o auxílio de IPTG a 1 mM.

Separadamente, a proteína recombinante de um gene homólogo canino foi preparada pelo seguinte método com base no gene da SEQ ID NO: 7. A PCR foi realizada preparando uma solução de reação para completar uma quantidade total da mesma a 50 μΐ com a adição de reagentes e um tampão incluído (isto é, 1 μΐ de ADNc, cuja expressão foi confirmada através de RT-PCR, selecionados dentre os vários tecidos e ADNcs celulares preparados no Exemplo 1, 2 tipos de iniciadores contendo sequências de clivagem de enzima de restrição Ndel e Kpnl (0,4 μΜ cada; SEQ ID NOs: 39 e 40), 0,2 mM de dNTPs e 1,25 U de polimerase PrimeSTAR HS (Takara Shuzo Co., Co., Ltd.)), a solução resultante foi submetida a um ciclo a 98°C durante 10 segundos e 68°C durante 2,5 minutos utilizando um aparelho Thermal Cycler (BIO RAD), e este ciclo foi repetido 30 vezes. Os 2 tipos de iniciadores acima foram utilizados para amplificar a região que codifica a sequência de aminoácidos de comprimento completo de SEQ ID MO: 8. Após a PCR, o ADN amplificado foi submetido a eletroforese em gel de agarose a 1 %, e um fragmento de ADN de cerca de 2,2 kpb depois foi purificado utilizando o QIAquick Gel Extraction Kit (QIAGEN). 0 fragmento de ADN purificado foi ligado a um vetor de clonagem pCR-Blunt (Invitrogen). 0 vetor foi transformado em E. coli, o plasmídeo foi recolhido, e o fragmento de gene amplificado foi confirmado como correspondendo à sequência alvo através de sequenciação. 0 plasmídeo coincidente com a sequência alvo foi tratado com enzimas de restrição Ndel e Kpnl, o produto resultante foi purificado utilizando um QIAquick Gel Extraction Kit, e a sequência génica alvo foi inserida num vetor de expressão pET30b (Novagen) para Escherichia coli tratados com as enzimas de restrição Ndel e Kpnl. Com a utilização do vetor resultante, uma proteína recombinante fundida com etiqueta His pode ser produzida. 0 plasmídeo foi transformado em Escherichia coli BL21 (DE3) para expressão, e a proteína alvo foi induzida para expressar em Escherichia coli com o auxílio de IPTG a 1 mM,

Separadamente, a proteína recombinante de um gene homólogo humano foi preparada pelo seguinte método com base no gene da SEQ ID NO: 1. A PCR foi realizada preparando uma solução de reação para completar uma quantidade total da mesma a 50 μΐ com a adição de reagentes e um tampão incluído (isto é, 1 μΐ de ADNc, cuja expressão foi confirmada através de RT-PCR, selecionados dentre os vários tecidos e ADNcs celulares preparados no Exemplo 1,2 tipos de iniciadores contendo sequências de clivagem de enzima de restrição Saci e Xhol (0,4 μΜ cada; SEQ ID NOs: 41 e 42), 0,2 mM de dNTPs e 1,25 U de polimerase PrimeSTAR HS (Takara

Shuzo Co., Co., Ltd.)), a solução resultante foi submetida a um ciclo a 98°C durante 10 segundos e 68°C durante 2,5 minutos utilizando um aparelho Thermal Cycler (BIO RAD), e este ciclo foi repetido 30 vezes. Os 2 tipos de iniciadores acima foram utilizados para amplificar a região que codifica a sequência de aminoãcidos de comprimento completo de SEQ ID NO: 2. Após a PCR, o ADN amplificado foi submetido a eletroforese em gel de agarose a 1 %, e um fragmento de ADN de cerca de 2,1 kpb depois foi purificado utilizando o QIAquick Gel Extraction Kit (QIAGEN). 0 fragmento de ADN purificado foi ligado a um vetor de clonagem pCR-Blunt (Invitrogen). 0 vetor foi transformado em E. coli, o plasmídeo foi recolhido, e o fragmento de gene amplificado foi confirmado como correspondendo à sequência alvo através de sequenciação. 0 plasmídeo coincidente com a sequência alvo foi tratado com enzimas de restrição Saci e Xhol, o produto resultante foi purificado utilizando um QIAquick Gel Extraction Kit, e a sequência génica alvo foi inserida num vetor de expressão pET30a (Novagen) para Escherichia coli tratados com as enzimas de restrição Saci e Xhol. Com a utilização do vetor resultante, uma proteína recombinante fundida com etiqueta His pode ser produzida. 0 plasmídeo foi transformado em Escherichia coli BL21 (DE3) para expressão, e a proteína alvo foi induzida para expressar em Escherichia coli com o auxílio de IPTG a 1 mM. (2) Purificação de proteína recombinante A estirpe de Escherichia coli recombinante obtida acima que expressa as SEQ ID NO: 1, 5 ou 7 foi cultivada a 3 7 °C em meio LB contendo canamicina a 3 0 pg/ml até a absorvância a 600 nm ter alcançado cerca de 0,7. Posteriormente, isopropil- β-D-l-tiogalactopiranósido foi adicionado até uma concentração final de 1 mM, e a cultura foi levada a cabo a 37 °C durante 4 horas. Subsequentemente, a cultura foi centrifugada a 4800 rpm durante 10 minutos para recolher células, o sedimento celular foi suspenso em solução salina tamponada com fosfato e depois centrifugado a 4800 rpm durante 10 minutos para lavar as células.

As células foram suspensas em solução salina tamponada com fosfato e posteriormente submetidas a ultrassonicação em gelo. A solução de Escherichia coli ultrassonicada foi centrifugada a 6000 rpm durante 20 minutos, o sobrenadante resultante foi designado como uma fração solúvel, e o precipitado resultante foi designado como uma fração insolúvel.

A fração solúvel foi adicionada a uma coluna de quelato de níquel (veículo: Chelating Sepharose™ Fast Flow (GE Healthcare), capacidade de coluna: 5 ml, tampão de ácido clorídrico a 50 mM (pH 8,0) como tampão de equilíbrio)) preparado de acordo com um método convencional. A fração não adsorvida foi lavada com 10 volumes de coluna de tampão de ácido clorídrico a 50 mM (pH

8.0) e tampão de fosfato a 20 mM (pH 8,0) contendo imidazol a 20 mM. Imediatamente depois disso, eluíram-se 6 leitos com tampão fosfato a 20 mM (pH 8,0) contendo imidazol a 100 mM. Após a eluição da proteína de interesse ter sido confirmada através da coloração de Coomassie, uma fração de eluição de tampão de fosfato a 20 mM (pH 8,0) contendo imidazol a 10 0 mM foi adicionada a uma coluna de permuta aniónica forte (veículo: Q Sepharose™ Fast Flow (GE Healthcare), volume da coluna: 5 ml, e tampão de fosfato a 20 mM (pH 8,0) como tampão de equilíbrio) . A fração não adsorvida foi lavada com 10 volumes de coluna de tampão de fosfato a 20 mM (pH 7,0) e tampão de fosfato a 20 mM (pH

7.0) contendo cloreto de sódio a 200 mM. Imediatamente depois disso, eluíram-se 5 leitos utilizando tampão de fosfato a 20 mM (pH 7,0) contendo cloreto de sódio a 400 mM. Consequentemente, as frações purificadas de proteínas tendo a sequência de aminoácidos representada pelas SEQ ID NO: 2, 6 e 8 foram obtidas, e estas frações purificadas foram posteriormente utilizadas como materiais para testes de administração.

Cada uma das preparações purificadas obtidas através do método acima (200 μΐ cada) foi dispensada em 1 ml de um tampão de reação (Tris-HCl a 20 mM, NaCl a 50 mM, CaCl2 a 2 mM, pH 7,4) e 2 μΐ de enteroquinase (Novagen) depois foi adicionado. A preparação foi deixada em repouso à temperatura ambiente durante a noite para reação, uma etiqueta His foi clivada, e depois a purificação foi realizada de acordo com os protocolos incluídos no Enterokinase Cleavage Capture Kit (Novagen).

Subsequentemente, 1,2 ml da preparação purificada obtida pelo método acima foi substituído com tampão fosfato fisiológico (Nissui Pharmaceutical Co., Ltd.) utilizando NANOSEP 10K OMEGA (PALL) de ultrafiltraçâo. A filtração esterilizada foi realizada utilizando um HT Tuffryn

Acrodisc de 0,22 pm (PALL) , e os resultantes foram utilizados para as seguintes experiências.

[Exemplo 3] Preparação de anticorpo contra CAPRIN-l (1) Preparação de anticorpo policlonal contra péptido derivado de CAPRIN-l

Com a finalidade de obter um anticorpo que se liga a CAPRIN-l, um péptido derivado de CAPRIN-l (Arg-Asn-Leu-Glu-Lys-Lys- Lys-Gly-Lys-Leu-Asp-Asp-Tyr-Gln; SEQ ID NO: 43) foi sintetizado. 0 péptido como um antigénio (1 mg) foi misturado com um volume equivalente de uma solução de adjuvante de Freund incompleto (IFA) e a mistura foi administrada por via subcutânea a coelhos 4 vezes a cada 2 semanas. Posteriormente, foi recolhido sangue e um anti-soro contendo um anticorpo policlonal foi obtido. Adicionalmente, o anti-soro foi purificado utilizando um veículo de proteína G (GE Healthcare Bio-Sciences) e um anticorpo policlonal contra o péptido derivado de CAPRIN-l foi obtido. Subsequentemente, a reatividade do anticorpo policlonal resultante contra CAPRIN-1 na superfície de células de cancro foi examinada utilizando células de cancro de mama. Especificamente, 10s células da linha celular de cancro da mama humano MDA-MB-231 V foram submetidas a centrifugação num tubo de microcentrífuga de 1,5 ml, uma solução de PBS suplementada com soro bovino fetal a 0,1% (FBS) contendo o anticorpo policlonal foi adicionada ai e o resultante foi, então, deixado em repouso em gelo durante 1 hora. Após lavagem com PBS, um anticorpo de cabra anti-IgG de ratinho marcado com FITC (Invitrogen) diluído 500 vezes com PBS contendo FBS a 0,1 % foi adicionado e o resultante foi, então, deixado em repouso em gelo durante 1 hora. Após lavagem com PBS, mediu-se a intensidade de fluorescência utilizando um FACS Calibur (Becton, Dickinson and Company). Separadamente, um controlo foi preparado de acordo com um procedimento semelhante ao acima, exceto que PBS contendo FBS a 0,1% foi adicionado em vez do anticorpo policlonal. Como um resultado, encontrou-se que a intensidade de fluorescência nas células tratadas com o anticorpo policlonal era mais forte que nas células de controlo, e assim encontrou-se que o anticorpo policlonal obtido liga-se a superfície das células de cancro de mama. (2) Preparação de anticorpo monoclonal contra proteína CAPRIN-1 A proteína antigénica (CAPRIN-1 humana) (100 pg) representada pela SEQ ID NO: 2 preparada no Exemplo 2 foi misturada com uma quantidade equivalente de um adjuvante MPL+TDM (Sigma) e a mistura foi utilizada como uma solução de antigénio por ratinho. A solução de antigénio foi administrada por via intraperitoneal a um ratinho Balb/c de 6 semanas de idade (Japan SLC Inc.) e ainda administrada 3 vezes por semana. Removeu-se o baço 3 dias após a imunização final, triturou-se entre duas lâminas de vidro esterilizadas, lavou-se com PBS(-) (Nissui) e posteriormente centrifugou-se a 1500 rpm durante 10 minutos para remover os sobrenadantes. Este procedimento foi repetido 3 vezes para obter células de baço. As células de baço assim obtidas foram misturadas com células de mieloma de ratinho SP2/0 (adquiridas de ATCC) a uma razão de 10:1. Uma solução de PEG preparada misturando 200 μΐ de meio RPMI1640 contendo FBS a 10% aquecido até 37 °C e 800 μΐ de PEG1500 (Boehringer) foi adicionada às células. A solução foi deixada em repouso durante 5 minutos para a fusão celular. A centrifugação foi realizada a 1700 rpm durante 5 minutos para remover sobrenadantes, as células foram suspensas em 150 ml de um meio RPM11640 (meio seletivo HAT) contendo 15% de FBS suplementado com 2% equivalente de uma solução de HAT (Gibco), e a suspensão depois foi semeada sobre quize placa de 96 poços (Nunc) a 100 μΐ/poço. As células foram cultivadas durante 7 dias a 37 °C na presença de C02 a 5 %. Consequentemente, foram obtidos os hibridomas resultantes da fusão de células de baço com células de mieloma.

Os hibridomas foram selecionados utilizando, como um indicador, a afinidade de ligação do anticorpo produzido pelos hibridomas preparados para a proteína CAPRIN-1. A solução de proteína CAPRIN-1 (1 pg/ml) preparada no Exemplo 2 foi adicionada a uma placa de 96 poços a 100 μΐ/poço e o resultante foi deixado em repouso a 4 °C durante 18 horas. Cada poço foi lavado 3 vezes com PBS-T, uma solução a 0,5% de albumina sérica bovina (BSA) (Sigma) foi adicionada a 400 μΐ/poço e a placa deixou-se em repouso à temperatura ambiente durante 3 horas. A solução foi removida e cada poço foi lavado 3 vezes com 400 μΐ de PBS-T. Depois disso, cada sobrenadante da cultura dos hibridomas obtidos foi adicionada a 100 μΐ/poço e o resultante deixou-se em repouso à temperatura ambiente durante 2 horas. Cada poço foi lavado 3 vezes com PBS-T, um anticorpo anti-IgG de ratinho marcado com HRP (H+L) (Invitrogen) diluído 5000 vezes com PBS foi adicionado aí a 100 μΐ/poço e o resultante deixou-se em repouso à temperatura ambiente durante 1 hora. Após cada poço ter sido lavado 3 vezes com PBS-T, uma solução de substrato de TMB (Thermo) foi adicionada a 100 μΐ/poço e o resultante deixou-se em repouso durante 15 a 3 0 minutos, de modo a permitir o desenvolvimento da cor. Posteriormente, ácido sulfúrico a 1 N foi adicionado a 100 μΐ/poço para terminar a reação. A absorvância foi medida a 450 nm e 595 nm utilizando um espetrofotómetro. Como um resultado, uma pluralidade de hibridomas que produzem anticorpos que exibem elevados valores de absorvância foram selecionados.

Os hibridomas assim selecionados foram adicionados a uma placa de 96 poços a 0,5 hibridomas por poço e posteriormente cultivados. Após 1 semana, os hibridomas que formam colónias individuais nos poços foram observados. As células nestes poços foram adicionalmente cultivadas e os hibridomas foram selecionados utilizando, como um indicador, a afinidade de ligação do anticorpo produzido pelos hibridomas clonados para a proteína CAPRIN-l. A solução de proteína CAPRIN-1 (1 pg/ml) preparada no Exemplo 2 foi adicionada a uma placa de 96 poços a 100 ul/poço e o resultante foi deixado em repouso a 4 °C durante 18 horas. Cada poço foi lavado 3 vezes com PBS-T, uma solução a 0,5% de BSA foi adicionada a 400 μΐ/poço e a placa deixou-se em repouso à temperatura ambiente durante 3 horas. A solução foi removida e cada poço foi lavado 3 vezes com 400 μΐ de PBS-T. Depois disso, cada sobrenadante da cultura dos hibridomas obtidos foi adicionada a 100 μΐ/poço e o resultante deixou-se em repouso à temperatura ambiente durante 2 horas. Cada poço foi lavado 3 vezes com PBS-T, um anticorpo anti-IgG de ratinho marcado com HRP (H+L) (Invitrogen) diluído 5000 vezes com PBS foi adicionado aí a 100 μΐ/poço e o resultante deixou-se em repouso à temperatura ambiente durante 1 hora. Após cada poço ter sido lavado 3 vezes com PBS-T, uma solução de substrato de TMB (Thermo) foi adicionada a 100 μΐ/poço e deixou-se em repouso durante 15 a 3 0 minutos, de modo a permitir o desenvolvimento da cor. Posteriormente, ácido sulfúrico a 1 N foi adicionado a 100 μΐ/poço para terminar a reação e a absorvância foi medida a 450 nm e 595 nm utilizando um espetrofotómetro. Como um resultado, uma pluralidade de hibridomas que produzem anticorpos monoclonais que exibem reatividade com a proteína CAPRIN-1 foram selecionados, o sobrenadante de cultura de hibridomas foi purificado utilizando um portador de proteína G e foram obtidos 150 anticorpos monoclonais que se ligam à proteína CAPRIN-l.

Subsequentemente, os anticorpos monoclonais que exibem reatividade às superfícies de células de cancro que expressam CAPRIN- 1 foram selecionados a partir destes anticorpos monoclonais utilizando células de cancro de mama. Especificamente, 106 células da linha celular de cancro da mama humano MDA-MB-231 V foram submetidas a centrifugação num tubo de microcentrífuga de 1,5 ml, 100 μΐ do sobrenadante de cultura dos hibridomas foi adicionado aí e o resultante deixado em repouso durante 1 hora em gelo. Após lavagem com PBS, um anticorpo de cabra anti-IgG de ratinho marcado com FITC (Invitrogen) diluído 500 vezes com PBS contendo FBS a 0,1 % foi adicionado e o resultante foi, então, deixado em repouso em gelo durante 1 hora. Após lavagem com PBS, mediu-se a intensidade de fluorescência utilizando um FACS Calibur (Becton, Dickinson and Company). Separadamente, um controlo foi preparado de acordo com um procedimento semelhante ao acima, exceto que um meio foi adicionado em vez do anticorpo. Como um resultado, 10 anticorpos monoclonais exibindo uma intensidade de fluorescência mais forte que aquela do controlo; isto é, 10 anticorpos monoclonais exibindo reatividade às superfícies de células de cancro de mama (n° 1 a n° 10) , foram selecionados. As regiões variáveis de cadeia pesada e as regiões variáveis de cadeia leve destes anticorpos monoclonals são mostradas nas SEQ ID NOs: 44 a 60. O anticorpo monoclonal acima n° 1 compreende a região variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 44 e a região variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 45, o anticorpo monoclonal n° 2 compreende a região variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 44 e a região variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 46, o anticorpo monoclonal n° 3 compreende a região variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 44 e a região variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 47, o anticorpo monoclonal n° 4 compreende a região variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 44 e a região variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 48, o anticorpo monoclonal n° 5 compreende a região variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 49 e a região variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 50, o anticorpo monoclonal n° 6 compreende a região variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 51 e a região variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 52, o anticorpo monoclonal n° 7 compreende a região variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 53 e a região variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 54, o anticorpo monoclonal n° 8 compreende a região variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 55 e a região variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 56, o anticorpo monoclonal n° 9 compreende a região variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 57 e a região variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 58 e o anticorpo monoclonal n° 10 compreende a região variável de cadeia pesada da SEQ ID NO: 59 e a região variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 60. (3) Identificação de péptidos na proteína CAPRIN-1 ao qual anticorpos contra CAPRN-l que reagem com a superfície das células de cancro ligam-se

Com a utilização de anticorpos monoclonais n° 1 a n° 10 contra CAPRIN-1 que regem com as superfícies de células de cancro de mama obtidos acima, as sequências parciais na proteína CAPRIN-1 reconhecida por estes anticorpos monoclonais foram identificadas. A 100 μΐ de uma solução de proteína CAPRIN-1 recombinante ajustada a uma concentração de 1 pg/μΐ com PBS, em primeiro lugar, DTT (Fluka) foi adicionado para resultar numa concentração final de 10 mM na mesma, e foi permitido à reação proceder a 95°C durante 5 minutos, de modo a reduzir as ligações dissulfureto dentro da proteína CAPRIN-1. Subsequentemente, iodoacetamida (concentração final: 2 0 mM; Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) foi adicionada, e os grupos tiol foram submetidos a alquilação a 37°C durante 30 minutos sob condições de sombra. Os anticorpos monoclonais n° 1 a n° 10 contra CAPRIN-1 (50 pg cada) foram adicionados a 40 pg da proteína CAPRIN-1 alquilada reduzida, 0 volume da mistura foi ajustado para 1 ml com tampão de fosfato a 20 mM (pH 7,0), e foi permitido à reação proceder a 4 °C durante a noite com agitação e mistura.

Subsequentemente, tripsina (Promega) foi adicionada até uma concentração final de 0,2 pg. Após à reação foi permitido proceder a 37 °C durante 1 hora, 2 horas, 4 horas e depois 12 horas, os resultantes foram misturados com esferas de vidro de proteína A (GE), que foram submetidas a bloqueio com PBS contendo BSA a 1% (Sigma) e lavagem com PBS com antecedência, em carbonato de cálcio a 1 mM e tampão NP-40 (tampão de fosfato a 20 mM (pH 7,4), EDTA a 5 mM, NaCl a 150 mM e NP-40 a 1%) , e foi permitido à reação proceder ainda durante 30 minutos.

As soluções de reação foram, cada uma, lavadas com tampão de carbonato de amónio a 25 mM (pH 8,0), os complexos de antigénio-anticorpo depois foram eluídos utilizando 100 pl de ácido fórmico a 0,1 %, e os eluatos foram submetidos a análise de LC-MS utilizando Q-TOF Premier (Waters-MicroMass) de acordo com os protocolos incluídos no instrumento.

Como um resultado, o polipéptido da SEQ ID NO: 61 foi identificado como uma sequência parcial de CAPRIN-1, que foi reconhecido pela totalidade dos anticorpos monoclonais n° 1 a n° 10 contra CAPRIN-1. Adicionalmente, o péptido da SEQ ID NO: 62 foi identificado como uma sequência parcial no polipéptido da SEQ ID NO: 61 acima, que foi reconhecido pelos anticorpos monoclonais n° 1 a n° 4, n° 5 a n° 7 e n° 9. Adicionalmente, os anticorpos monoclonais n° 1 a n° 4 foram encontrados que reconhecem o péptido da SEQ ID NO: 63, que era uma sequência de péptido parcial dos mesmos. [Exemplo 4] Diagnóstico de cancro pancreático utilizando polipéptido de CAPRIN-1 1) Diagnóstico de cancro pancreático canino

Como um resultado do diagnóstico patológico utilizando as amostras de tecidos removidos, amostras de sangue foram recolhidas de cães afetados confirmados de ter carcinoma ductal pancreático maligno e os soros foram separados. Com a utilização da proteína CAPRIN-1 canina (SEQ ID NO: 8) preparada no Exemplo 2 e o anticorpo anti-IgG canino, o título do anticorpo IgG de so que reage especificamente com a proteína CAPRIN-1 canina foi medido por meio de um método ELISA. A proteína CAPRIN-1 canina preparada foi imobilizada pela adição de uma solução de proteína recombinante diluída a 5 pg/ml com solução salina tamponada com fosfato a uma placa de 96 poços Immobilizer Amino (Nunc) a 100 μΐ/poço e depois deixar a placa em repouso a 4°C durante a noite, o bloqueio foi realizado pela adição de solução tampão de bicarbonato de sódio a 50 mM (pH 8,4) (a seguir no presente documento, referido como uma "solução de bloqueio") contendo BSA a 0,5% (albumina sérica bovina, Sigma Aldrich Japan) a 100 μΐ/poço, seguido por agitação à temperatura ambiente durante 1 hora. Soro diluído 1000 vezes com a solução de bloqueio foi adicionado a 100 μΐ/poço e a mistura depois foi submetida a uma reação via agitação à temperatura ambiente durante 3 horas. 0 produto de reação foi lavado 3 vezes com solução salina tamponada com fosfato contendo 0,05% de Tween 20 (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.; esta solução é referida como "PBS-T" no presente documento), o anticorpo IgG canino modificado com HRP (conjugado HRP de cabra anti-IgG de cão-h+I: BETHYL Laboratories) diluído 3000 vezes com a solução de bloqueio foi adicionado a 100 μΐ/poço e a mistura foi submetida a uma reação via agitação à temperatura ambiente durante 1 hora. Após o produto de reação ter sido lavado 3 vezes com PBS-T, substrato de HRP TMB (1-Etapa Turbo TMB (tetrametilbenzidina), PIERCE) foi adicionado a 100 μΐ/poço, e uma reação de enzima-substrato depois foi conduzida à temperatura ambiente durante 30 minutos. Posteriormente, uma solução de ácido sulfúrico a 0,5 M (Sigma Aldrich Japan) foi adicionada a 100 μΐ/poço para terminar a reação, e a absorvãncia a 450 nm foi medida utilizando um leitor de microplacas. Como controlos, um espécime sobre o qual nenhuma proteína recombinante preparada foi imobilizada e um espécime ao qual o soro de um cão portador de cancro não foi permitido que reagisse foram submetidos ao tratamento e comparação da mesma maneira como descrita acima.

Como um resultado, encontrou-se que o título do anticorpo contra proteína CAPRIN-1 canina dos soros derivados de cães portadores de cancro é mais elevado que os dos controlos. (2) Diagnóstico de cancro pancreático canino utilizando proteína CAPRIN-1 humana

Com a utilização da proteína CAPRIN-1 humana (SEQ ID NO: 2) preparada no Exemplo 2, o título de anticorpo IgG do soro de canino que reage com a proteína CAPRIN-1 humana foi medido da mesma maneira como descrito acima. Quando as amostras de soro obtidas de cães saudáveis foram submetidas à mesma medição, a absorvãncia a 4 50 nm não foi substancialmente observada conforme descrito acima. As amostras de soro obtidas de cães pacientes de cancro pancreático de (1) exibiram um título mais elevado do anticorpo contra a proteína CAPRIN-1 humana que o do controlo. (3) Diagnóstico de cancro pancreático humano

Com a utilização da proteína CAPRIN-l humana (SEQ ID NO: 2) preparada no Exemplo 2 e o anticorpo anti-IgG humano, o título de anticorpo IgG das amostras de soro obtido de indivíduos saudáveis que reagem com o polipéptido foi medido. A proteína CAPRIN-1 humana foi imobilizada pela adição de uma solução de proteína recombinante diluída a 100 pg/ml com solução salina tamponada com fosfato a uma placa de 96 poços Immobilizer Amino (Nunc) a 100 μΐ/poço e depois deixar a placa em repouso a 4°C durante a noite. 0 bloqueio foi realizado da seguinte maneira. Isto é, 4 g de pó de Block Ace (DS PHARMA BIOMEDICAL Co., Ltd.) foi dissolvido em 100 ml de água purificada, a solução foi diluída 4 vezes com água purificada (a seguir no presente documento, referida como uma "solução de bloqueio"), a solução de bloqueio foi adicionada a 100 μΐ/poço e a mistura foi submetida a agitação à temperatura ambiente durante 1 hora. Soro diluído 1000 vezes com a solução de bloqueio foi adicionado a 100 μΐ/poço e depois foi submetido a uma reação via agitação à temperatura ambiente durante 3 horas. Após lavar o resultante 3 vezes com solução salina tamponada com fosfato contendo 0,05% de Tween 20 (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.; esta solução é referida como "PBS-T" no presente documento), um anticorpo anti-IgG humana modificado com HRP (conjugado de cabra anti-IgG humana-HRP (H+L): Zymed Laboratories) diluído 10000 vezes com a solução de bloqueio foi adicionado a 100 μΐ/poço e depois foi submetido a uma reação via agitação à temperatura ambiente durante 1 horas. Após o produto de reação ter sido lavado 3 vezes com PBS-T, substrato de HRP TMB (1-Etapa Turbo TMB (tetrametilbenzidina), PIERCE) foi adicionado a 100 μΐ/poço e uma reação de enzima-substrato depois foi realizada à temperatura ambiente durante 30 minutos. Posteriormente, uma solução de ácido sulfúrico a 0,5 M (Sigma Aldrich Japan) foi adicionada a 100 μΐ/poço para terminar a reação, e a absorvância a 450 nm depois foi medida utilizando um leitor de microplacas. Um antigénio de ovalbumina ajustado a 50 pg/ml com solução salina tamponada com fosfato foi imobilizado e depois utilizado como um controlo positivo. Como um resultado, encontrou-se que a absorvância a 450 nm é alta no caso do antigénio de ovalbumina, embora nenhuma absorvância (0) tenha sido detetada no caso da proteína CAPRIN-1 humana.

Adicionalmente, as amostras de soro obtidas de pacientes com carcinoma ductal pancreãtico foram submetidas a medição do título do anticorpo IgG de soro que reage especificamente com a proteína CAPRIN-1 humana (a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 2) da mesma maneira como descrito acima. Como um resultado, encontrou-se que a absorvância a 450 nm é inferior ao menor limite de deteção no caso de indivíduos saudáveis, embora tenha sido encontrado que é alta no caso de pacientes com cancro pancreático. Com a utilização da proteína CAPRIN-1 canina (SEQ ID NO: 8) preparada no Exemplo 2 e o anticorpo anti-IgG humano, o título de anticorpo IgG no soro de ser humano que reage especificamente com a proteína CAPRIN-1 canina foi medido da mesma maneira como descrito acima. Como um resultado, encontrou-se que os pacientes com cancro pancreãtico exibiram títulos mais elevados que os indivíduos saudáveis.

Consequentemente, foi demonstrado que o cancro pancreãtico humano poderia ser detetado pelo método da presente invenção.

[Exemplo 5] Diagnóstico de cancro pancreático utilizando anticorpo contra CAPRIN-1 (1) Diagnóstico de cancro pancreãtico medindo a proteína CAPRIN-1

Com a utilização do anticorpo policlonal contra o péptido derivado de CAPRIN-1 (SEQ ID NO: 43) obtido no Exemplo 3 (1) em combinação com cada anticorpo monoclonal contra a proteína CAPRIN-1 obtida no Exemplo 3 (2), foi levado a cabo ELISA de tipo sanduíche com a finalidade de detetar a proteína CAPRIN-1 (soro derivado de indivíduo portador de cancro) que reagiu positiva após o diagnóstico de cancro utilizando a proteína CAPRIN-1 no Exemplo 4 (!) -(3). 0 anticorpo policlonal foi utilizado como um anticorpo primário e cada anticorpo monoclonal foi utilizado como um anticorpo secundário. A quantidade das proteínas que reagem especificamente com cada um dos anticorpos acima nos soros foi medida. 0 anticorpo primário foi imobilizado pela adição de uma solução de anticorpo policlonal diluída a 5 pg/ml com solução salina tamponada com fosfato a uma placa de 96 poços Immobilizer Amino (Nunc) a 100 μΐ/poço e agitação da placa à temperatura ambiente durante 2 horas. o bloqueio foi realizado pela adição de solução tampão de bicarbonato de sódio a 50 mM (pH 8,4) (a seguir no presente documento, referido como uma "solução de bloqueio") contendo BSA a 0,5% (albumina sérica bovina, Sigma Aldrich Japan) a 100 μΐ/poço, seguido por agitação à temperatura ambiente durante 1 hora. Posteriormente, as amostras de soro obtidas de indivíduos portadores de cancro diluídas com uma solução de bloqueio foram adicionadas a 100 μΐ/poço e depois foram submetidas a uma reação via agitação à temperatura ambiente durante 3 horas. A taxa de diluição neste momento foi ajustada com séries de diluição de 10 vezes (isto é, diluições de 10-1000 vezes). 0 produto de reação foi lavado 3 vezes com solução salina tamponada com fosfato contendo 0,05% de Tween 20 (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.; esta solução é referida como "PBS-T" no presente documento), cada anticorpo monoclonal como um anticorpo secundário diluído a uma concentração de 1 pg/ml com a solução de bloqueio foi adicionado a 100 μΐ/poço, e o resultante depois foi submetido a agitação à temperatura ambiente durante 1 hora para reação, 0 produto de reação foi lavado 3 vezes com PBS-T, um anticorpo anti-IgG de ratinho marcado com HRP (H+L) (Invitrogen) como um anticorpo terciário diluído 5000 vezes com solução de bloqueio foi adicionado a 100 μΐ/poço e o resultante deixou-se em repouso à temperatura ambiente durante 1 hora. Após cada poço ter sido lavado 3 vezes com PBS-T, uma solução de substrato de TMB (Thermo) foi adicionada a 100 μΐ/poço e o resultante deixou-se em repouso durante 15 a 30 minutos, de modo a permitir o desenvolvimento da cor. Posteriormente, ácido sulfúrico a 1 N foi adicionado a 100 μΐ/poço para terminar a reação. A absorvância foi medida a 450 nm utilizando um espetrofotómetro.

Quando os anticorpos monoclonais n° 1 a n° 10 que reagem com as superfícies de células de cancro foram utilizados como anticorpos secundários, como um resultado, valores de absorvância elevados foram detetados em todos os cães com carcinoma ductal pancreático, não obstante nenhuma absorvância foi detetada em cães saudáveis. Quando anticorpos monoclonais que reagem com as proteínas CAPRIN-1 mas que não reagem com as superfícies de células de cancro foram utilizados como anticorpos secundários, os valores de polipéptido foram detetados em todos os espécimes. Contudo, a totalidade dos valores de absorvância foram inferiores ao limite de deteção, que forams inferiores aos resultados para as combinações de anticorpos que reagem com as superfícies de células de cancro.

Como tal, o cancro também pode ser diagnosticado ou examinado por meio desta técnica que compreende a deteção das proteínas CAPRIN- 1 utilizando anticorpos contra CAPRIN-1. (2) Diagnóstico ou exame de cancro medindo polipéptido antigénico em tecido de cancro pancreático por meio de coloração imunohistoquímica A coloração imunohistoquímica foi realizada utilizando uma matriz (BIOMAX) tendo 101 espécimes de tecido de cancro pancreático humano incorporado em parafina. A matriz de tecidos de cancro pancreático humano foi tratada a 60°C durante 3 horas, o resultante foi colocado numa garrafa de coloração preenchida com xileno, o xileno foi substituído com xileno fresco a cada 5 minutos, e este procedimento foi repetido 3 vezes. Subsequentemente, um procedimento semelhante foi levado a cabo utilizando etanol e PBS-T em vez de xileno. A matriz de tecidos de cancro da pancreático humano foi colocada numa garrafa de coloração preenchida com tampão citrato a 10 mM (pH 6,0) contendo 0,05% de Tween 20, tratada a 125°C durante 5 minutos e depois deixada em repouso à temperatura ambiente durante 40 minuto ou mais. Removeu-se o excesso de água ao redor de cada espécime utilizando KimWipes, cada secção foi circundada com DAKOPEN (DAKO), e uma quantidade apropriada de Peroxidase Block (DAKO) depois foi adicionada gota a gota sobre a matriz. A matriz foi deixada em repouso à temperatura ambiente durante 5 minutos, a matriz foi colocada numa garrafa de coloração preenchida com PBS- T, e PBS-T foi substituído com PBS-T fresco a cada 5 minutos. Este procedimento foi realizado 3 vezes. Como uma solução de bloqueio, uma solução de PBS-T contendo FBS a 10% foi aplicada sobre a matriz, e a matriz foi deixada em repouso numa câmara húmida à temperatura ambiente durante 1 hora. Subsequentemente, os anticorpos monoclonais n° 1 a n° 10 preparados no Exemplo 3 ajustados a 10 pg/ml com uma solução de PBS-T contendo FBS a 5% foram aplicados sobre a matriz, e a matriz foi deixada em repouso numa câmara húmida a 4 °C durante a noite. Após a matriz ter sido lavada PBS-T durante 10 minutos 3 vezes, adicionou-se uma quantidade apropriada de conjugado de polímero marcado com peroxidase (DAKO) gota a gota sobre a matriz e posteriormente deixou-se em repouso a matriz numa câmara húmida à temperatura ambiente durante 30 minutos. Após a matriz ter sido lavada PBS-T durante 10 minutos 3 vezes, uma solução de desenvolvimento de cor DAB (DAKO) foi aplicada sobre a matriz e a matriz posteriormente deixou-se em repouso à temperatura ambiente durante cerca de 10 minutos. Depois da solução de desenvolvimento de cor ser descartada, a matriz foi lavada PBS-T durante 10 minutos 3 vezes, enxaguada com água destilada, sucessivamente colocada em soluções de etanol a 70%, 80%, 90%, 95% e 100% durante 1 minuto cada, e posteriormente deixou-se em repouso em xileno durante a noite. As lâminas de vidro foram removidas, cobertas com uma lamela com meio de montagem Glycergel (DAKO) e depois observadas. Como um resultado, a expressão de CAPRIN-1 foi observada em membranas de células de cancro pancreãtico e em celular de cancro pancreático nas amostras de tecido de cancro pancreático com a utilização de quaisquer anticorpos. Quando a coloração imunohistoquímica foi levada a cabo com a utilização de anticorpo n° 8, por exemplo, a expressão forte de CAPRIN-1 foi observada em 54 espécimes de tecido de tecido de cancro pancreãtico (101 espécimes) (isto é, 54%) .

De forma semelhante, a coloração imunohistoquímica foi levada a cabo utilizando uma matriz (ΒΙ0ΜΆΧ) de tecidos humanos normais incorporados em parafina incluindo tecidos pancreáticos humanos normais. Removeu-se o excesso de água ao redor de cada espécime utilizando KimWipes, cada secção foi circundada com DAKOPEN (DAKO), e uma quantidade apropriada de Peroxidase Block (DAKO) depois foi adicionada gota a gota sobre a matriz. A matriz foi deixada em repouso à temperatura ambiente durante 5 minutos, a matriz foi colocada numa garrafa de coloração preenchida com PBS-T, e PBS-T foi substituído com PBS-T fresco a cada 5 minutos.

Este procedimento foi realizado 3 vezes. Como uma solução de bloqueio, uma solução de PBS-T contendo FBS a 10% foi aplicada sobre a matriz e a matriz posteriormente deixou-se em repouso numa câmara húmida à temperatura ambiente durante 1 hora. Subsequentemente, os anticorpos monoclonais n° 1 a n° 10 preparados no Exemplo 3 ajustados a 10 pg/ml numa solução de PBS-T contendo FBS a 5% foram aplicados sobre a matriz, e a matriz depois foi deixada em repouso numa câmara húmida a 4 °C durante a noite. Após a matriz ter sido lavada PBS-T durante 10 minutos 3 vezes, adicionou-se uma quantidade apropriada de conjugado de polímero marcado com peroxidase (DAKO) gota a gota sobre a matriz e posteriormente deixou-se em repouso a matriz numa câmara húmida à temperatura ambiente durante 30 minutos. Após a matriz ter sido lavada PBS-T durante 10 minutos 3 vezes, uma solução de desenvolvimento de cor DAB (DAKO) foi aplicada sobre a matriz e a matriz posteriormente deixou-se em repouso à temperatura ambiente durante cerca de 10 minutos. Depois da solução de desenvolvimento de cor ser descartada, a matriz foi lavada PBS-T durante 10 minutos 3 vezes, enxaguada com água destilada, sucessivamente colocada em soluções de etanol a 70%, 80%, 90%, 95% e 100% durante 1 minuto cada, e posteriormente deixou-se em repouso em xileno durante a noite. As lâminas de vidro foram removidas, cobertas com uma lamela com meio de montagem Glycergel (DAKO) e depois observadas. Como um resultado, nenhuma das amostras de tecido normal derivado de pâncreas foram coradas e nenhuma expressão de CAPRIN-1 foi observada, não importa qual anticorpo foi utilizado. Aplicabilidade Industrial A presente invenção é industrialmente útil para o diagnóstico ou deteção de cancro pancreático. Texto livre da Listagem de Sequências

SEQ ID NOs: 31 a 42: iniciadores LISTA DE SEQUÊNCIAS <110> Toray Industries, Inc.

<120> Método para a Deteção de Cancro Pancreãtico <130> PH-5297-PCT <150> JP2011-171364 <151> 04-08-2011 <160> 63 <17G> Patentln versão 3.1

<210> 1 <211> 5562 < 212 > ADN <213> Homo sapiens <220>

<221 > CDS <222> (190) . . (2319) <223 > <400> 1 cagagggctg ctggctggct aagtccctce cgctcccggc tctcgcctca ctaggagcgg 60 ctctcggtgc agcgggacag ggcgaagcgg cctgcgccca cggagcgcgc gacactgccc 120 ggaagggacc gccacccttg ccccctcagc tgcccactcg tgatttecag cggcctccgo 180 gcgcgcacg atg ccc teg gee ace age cac age ggg age gge ago aag teg 231

Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser 15 10 tee gga ccg cca ccg ccg teg ggt tee tee ggg agt gag geg gee geg 279

Ser Gly Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala 15 20 25 30 gga gee ggg gee gee geg ccg get tet cag cac ccc gea ace gge aec 327

Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Ala Thr Gly Thr 35 40 45 gge get gtc cag aec gag gee atg aag cag att etc ggg gtg ate gac 375

Gly Ala Val Gin Thr Glu Ala Met Lys Gin lie Leu Gly Val lie Asp 50 55 60 aag aaa ett egg aac ctg gag aag aaa aag ggt aag ett gat gat tac 423

Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr 65 70 75 cag gaa ega atg aac aaa ggg gaa agg ett aat caa gat cag ctg gat 471

Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp 80 85 90 gee gtt tet aag tac cag gaa gtc aca aat aat ttg gag ttt gea aaa 519

Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys 95 100 105 110 gaa tta cag agg agt ttc atg gea eta agt caa gat att cag aaa aca 567

Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr 115 120 125 ata aag aag aca gea cgt egg gag cag ett atg aga gaa gaa get gaa 615 lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu 130 135 140 cag aaa cgt tta aaa act gta ctt gag eta cag tat gtt ttg gac aaa 663

Gin Lys Arg Leu Lys r;'iϊ" val Leu Glu Leu Gin Tyr val Leu Asp Lys 145 150 155 ttg gga gat gat gaa gtg egg act gac ctg aaa caa ggt ttg aat gga 711

Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Asn Gly 160 165 170 gtg cca ata ttg tcc gaa gag gag ttg tea ttg ttg gat gaa ttc tat 753

Val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr 175 180 185 190 aag eta gta gac cct gaa egg gac atg age ttg agg ttg aat gaa cag 807

Lys Leu Val Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin 195 200 205 tat gaa cat gcc tcc att cac ctg tgg gac ctg ctg gaa ggg aag gaa 855

Tyr Glu His Ala Ser He His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu 210 215 220 aaa cct gta tgt gga acc ace tat aaa gtt eta aag gaa att gtt gag 903

Lys Pro Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Val Leu Lys Glu He Val Glu 225 230 235 cgt gtt ttt cag tea aac tac ttt gac age acc cac aac cac cag aat 951

Arg Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn 240 245 250 ggg ctg tgt gag gaa gaa gag gca gcc tea gca cct gca gtt gaa gac 999

Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Ala Val Glu Asp 255 260 265 270 cag gta cct gaa get gaa cct gag cca gca gaa gag tac act. gag caa 1047

Gin Val Pro Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin 275 230 285 agt gaa gtt gaa tea aca gag tat gta aat aga cag ttc atg gca gaa 1095

Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu 290 295 300 aca cag ttc acc agt ggt gaa aag gag cag gta gat gag tgg aca gtt 1143

Thr Gin Phe Thr Ser Gly Glu Lys Glu Gin Val Asp Glu Trp Thr Val 305 310 315 gaa aeg gtt gag gtg gta aat tea etc cag eag eaa eet eag get gca 1191

Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala 320 325 330 tcc cct tea gta cca gag ccc cac tet ttg act cca gtg get cag gca 1239

Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gin Ala 335 340 345 350 gat ccc ctt gtg aga aga cag ega gta caa gac ctt atg gca caa atg 1287

Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala Gin Met 355 360 365 cag ggt ccc tat aat ttc ata cag gat tea atg ctg gat ttt gaa aat 1335

Gin Gly Pro Tyr Asn Phe He Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn 370 375 380 cag aca ctt gat cct gcc att gta tet gca cag cct atg aat cca aca 1383

Gin Thr Leu Asp Pro Ala He val Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Thr 385 390 395 caa aac atg gac atg ccc cag etg gtt tgc cct oca gtt oat tot gaa 1431

Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Val Cys Pro Pro Val His Ser Glu 400 405 410 tct aga ctt get cag cct aat caa gtt cct gta caa cca gaa geg aca 1479

Ser Arg Leu Ale Gin Pro Asn Gin Val Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr 415 420 425 430 cag gtt cct ttg gta tea tcc aca agt gag ggg tac aca gca tct caa 1527

Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin 435 440 445 ccc ttg tac cag cct tct cat get aca gag caa ega cca cag aag gaa 1575

Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu 450 455 460 cca att gat cag att cag gca aca ate tct tta aat aca gac cag act 1623

Pro lie Asp Gin lie Gin Ala Thr lie Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr 465 470 475 aca gca tea tea too ctt cct get geg tct cag cct caa gta ttt cag 1671

Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin 480 485 490 get ggg aca age aaa cct tta cat age agt gga ate aat gta aat gca 1719

Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser Gly He Asn Val Asn Ala 495 500 505 510 get cca ttc caa tcc atg caa aeg gtg ttc aat atg aat gee cca gtt 1767

Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val 515 520 525 cct cct gtt. aat gaa cca gaa act tta aaa cag caa aat. cag tac cag 1815

Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Asn Gin Tyr Gin 530 535 540 gcc agt tat aac cag age ttt tct agt cag cct esc caa gta gaa caa 1863

Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val Glu Gin 545 550 555 aca gag ctt cag caa gaa cag ctt caa aca gtg gtt ggc act tac cat 1911

Thr Glu Leu Gin Gin Glu Gin leu Gin Thr Val Val Gly Thr Tyr His 560 565 570 ggt tcc cca gac cag tcc cat caa gtg act ggt aac cac cag cag cct 1959

Gly Ser Pro Asp Gin ser His Gin val Thr Gly Asn His Gin Gin Pro 575 580 585 590 cat sag cag aac act gga ttt cca cgt age aat cag ccc tat tac aat 2007

Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser Asn Gin Pro Tyr Tyr Asn 595 600 605 agt cgt. ggt gtg tct cgt gga ggc tcc cgt ggt get aga ggc ttg atg 2055

Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met 610 615 620 aat gga tac egg ggc cct gcc aat gga ttc aga gga gga tat gat ggt 2103

Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly 625 630 635 tac ege cct tea ttc tct aac act cca aac agt ggt tat aca cag tct 2151

Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Thr Gin Ser 640 645 650 cag ttc agt get ccc egg gat tac tet ggc tat caa egg gat gga tat 2199

Gin Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr 655 660 665 670 cag cag aat ttc aag ega ggc tet ggg cag agt gga cca egg gga gee 2247

Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin. Ser Gly Pro Arg Gly Ala 675 680 685 cca ega ggt cgt gga ggg ccc cca aga ccc aac aga ggg atg ccg caa 2295

Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly Met Pro Gin 690 695 700 atg aac act cag caa gtg aat taa tctgattcac aggattatgt ttaatcgcca 2349 Met Asn Thr Gin Gin Val Asn 705 aaaacacact ggccagtgta ccataatatg ttaccagaag agttattatc tatttgttct 240 9 ccctttcagg aaacttattg taaagggact gttttcatcc cataaagaca ggactacaat 2469 tgtcagcttt ctattacctg gatatggaag g&aactattt ttactctgea tgttctgtcc 2529 taagegteat ettgageett gcacatgata ctcagattcc tcacccttgc ttaggagtaa 2589 aacaatatac tttacagggt gataataate tccatagtta tttgaagtgg cttgaaaaag 2649 geaagattga cttttatgac attggataaa atctacaaat cagccctcga gtt.att.caat 270 9 gataactgac aaactaaatt atttccctag aaaggaagat gaaaggagtg gagtgtggtt 2769 tggcagaaca actgeatttc acagcttttc cagttaaatt ggagcactga acgttcagat 2829 gcataccaaa ttatgcatgg gtcctaatea eacatataag getggctacc agctttgaca 2889 cagcactgtt catctggcca aacaactgtg grttaaaaaca eatgtaaaat getttttaac 2949 agctgatact gtataagaca aagccaagat gcaaaattag gctttgattg gcactttttg 3009 aaaaatatgc aacaaatatg ggatgrtaatc cggatggecg cttctgrtact taatgtgaaa 3069 tatitagata cctttttgaa cacttaacag tttctttgag acaatgactt ttgtaaggat 3129 tggtactate tatcattcct tatgacatgt acattgtctg tcactaatcc ttggattttg 3189 ctgtattgtc aectaaattg gtacaggtac tgatgaaaat ctctagtgga taatcataac 3249 actctcggtc acatgttttt ccttcagctt gaaagctttt ttttaaaagg aaaagatacc 3309 aaatgcctgc tgctaccacc cttttcaatt gctatctttt gaaaggcacc agtatgtgtt 3369 ttagattgat ttccctgttt cagggaaatc acggacagta gtttcagttc tgatggtata 3429 ageaaaacaa ataaaacgtt tataaaagtt gtatettgaa acaetggtgt tcaacagcta 3489 gcagcttatg tgattcaccc catgccacgt tagtgtcaca aattttatgg tttatctcca 3549 gcaacatttc tetagtaett gcacttatta tcttttgtct aatttaacct taactgaatt 3609 ctccgtttct cctggaggca tttatattca gtgataattc cttcccttag atgeataggg 3669 agagteteta aatttgatgg aaatggacac ttgagtagtg aettageett atgtactctg 3729 ttggaatttg tgctagcagt ttgagcacta gttctgtgtg cctaggaagt. taatgctgct 3789 tattgtctca ttcfcgacttc atggagaafct aatcccacct ttaagcaaag getactaagt 3849 taatggtatt ttctgtgcag aaattaaatt ttattttcag catttagccc aggaattctt 3909 ceagtaggtg eteagetatt taaaaacaaa actattctca aacattcatc attagacaac 3969 tggagttttt gctggttttg taacctacca aaatggatag gctgttgaac attccacatt 4029 caaaagtttt gtagggtggt gggaaatggg ggatcttcaa tgtttatttt aaaataaaafc 4089 aaaataagtfc cttgactttt ctcatgfcgtg gttgtggfcac atcatattgg aagggttaac 4149 ctgttacttt ggoaaatgag tatttttttg ctagcacctc cccttgcgtg ctttaaatga 4209 catctgcctg ggatgtacca caaccatatg ttacctgtat cttaggggaa tggataaaat 4269 atttgtggtt tactgggtaa tccctagatg atgtatgctt gcagtcctat ataaaactaa 4329 atttgctatc tgtgtagaaa ataatttcat gacatttaca atcaggactg aagtaagttc 4389 ttcacacagt gacctctgaa tcagtttcag agaagggatg ggggagaaaa tgccttctag 4449 gttttgaact tctatgcatt agtgcagatg ttgtgaatgt. g-taaaggtgt tcatagtttg 450 9 actgtttcta tgtatgtttt tteaaagaat tgttcctttt tttgaactat aatttttctt 4569 tttttggtta ttttaccatc acagtttaaa tgtatatctt ttatgtctct acteagacca 4629 tatttttaaa ggggtgcctc attatggggc agagaacttt tcaataagtc tcattaagat 4689 ctgaatcttg gttctaagca ttctgtataa tatgtgattg cttgtcctag ctgcagaagg 4749 ccttttgttt ggtcaaatgc atattttagc agagtttcaa ggaaatgatt gfccacacatg 4809 tcactgtagc etcttggtgt ageaagetca catacaaaat acttttgtat atgcataata 4869 taaateatct catgtggata tgaaacttct tttttaaaac ttaaaaaggt agaatgttat 4929 tgattacctt gatfeagggca gttttatttc cagatcctaa taattcctaa aaaatatgga 4989 aaagtttttt fctcaatcatt gtaccttgat attaaaacaa atatccttta agtatttcta 5049 atcagttagc ttctacagtt cttttgtctc cttttatatg cagctcttac gtgggagact 5109 tttccactta aaggagacat agaatgtgtg cttattctca gaaggttcat taactgaggt 5169 gatgagttaa caactagttg agcagtcagc tteetaagtg ttttaggaca tttgtteatt 5229 atattttccg fccafcataact agaggaagtg gaatgcagat aagtgccgaa ttcaaaccct 5289 teattttatg tttaagetec tgaatetgca ttccaattgg gttgttttta ageattetaa 5349 attttagttg attataagtt agatttcaca gaatcagtat tgcccttgat cttgtccttt 5409 ttatggagtt aacggggagg aagacccctc aggaaaacga aagtaaattg ttaaggctca 5469 tcttcatacc tttttccatt ttgaatccta caaaaatact gcaaaagact agtgaatgtt 5529 taaaattaca etagattaaa taatatgaaa gfec 5562

<210>2 <211> 709 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2

Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 1 5 10 15

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Gly Ala 20 25 30

Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala 35 40 45

Val Gin Thr Glu Ala Met Lys Gin He Leu Gly Val He Asp Lys Lys 50 55 60

Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu 65 70 75 80

Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val 85 90 95

Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu 100 105 110

Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp He Gin Lys Thr lie Lys 115 120 125

Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys 130 135 140

Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly 145 150 155 160

Asp Agp Glu val Arg rhr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Asn Gly val Pro 165 170 175

He Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu 180 185 190

Val Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu 195 200 205

His Ala Ser lie His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro 210 215 220

Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Val Leu Lys Glu lie Val Glu Arg Val 225 230 235 240

Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu 245 250 255

Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Ala Vai Glu Asp Gin Vai 260 265 270

Pro Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu 275 280 285

Vai Glu Ser Thr Glu Tyr Vai Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin 290 295 300

Phe Thr Ser Gly Glu Lys Glu Gin Vai Asp Glu Trp Thr Vai Glu Thr 305 310 315 320

Vai Glu Vai Vai Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro 325 330 335

Ser Vai Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Vai Ala Gin Ala Asp Pro 340 345 350

Leu Vai Arg Arg Gin Arg Vai Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly 355 “ 360 365

Pro Tyr Asn Phe Ile Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr 370 375 330

Leu Asp Pro Ala Ile Vai Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn 385 390 395 400

Met Asp Met Pro Gin Leu vai Cys Pro Pro vai His Ser Glu Ser Arg 405 410 415

Leu Ala Gin Pro Aan Gin Vai Pro Vai Gin Pro Glu Ala Thr Gin Vai 420 425 430

Pro Leu Vai Ser Ser Thr’ Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu 435 440 445

Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro lie 450 455 460

Asp Gin Ile Gin Ala Thr lie Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala 465 470 475 480

Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly 485 490 495

Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro 500 505 510

Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro 515 520 525

Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser 530 535 540

Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val Glu Gin Thr Glu 545 550 555 560

Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser 565 570 575

Pro Asp Gin Ser His Gin Val Thr Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin 580 585 590

Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser Asn Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg 595 600 605

Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly 610 615 620

Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg 625 630 635 640

Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe 645 650 655

Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin 660 665 670

Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg 675 680 685

Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn 690 695 700

Thr Gin Gin Val Asn 705

<210>3 <211> 3553 <212> ADN <213> Homo sapiens <220>

<221 > CDS 222> (190) . . (2274) <223 > <400> 3 cagagggctg ctggctggct aagtcccfccc cgctcccggc tctcgectca ctaggagcgg 60 ctctcggtgc agcgggacag ggcgaagcgg cctgcgccca cggagcgcgc gacactgocc 120 ggaagggace gccacccttg ccccctcagc tgcccactcg tgatttccag cggcctccgc 180 gcgcgcacg atg ccc teg gee acc age cac age ggg age ggc age aag teg 231

Met. Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser 15 10 tee gga ecg cca ccg ccg teg ggt tee tee ggg agt gag geg gee geg 279

Ser Gly Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala 15 20 25 30 gga gee ggg gee gee geg ecg get tot eag cac ccc gca acc ggc ace 327

Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Ala Thr Gly Thr 35 40 45 ggc get gtc eag acc gag gee atg aag eag att etc ggg gtg ate gac 375

Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr 65 70 75 eag gaa ega atg aac aaa ggg gaa agg ett aat caa gat eag ctg gat 471

Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp

80 85 SO gee gtt tet aag tac eag gaa gtc aca aat. aat ttg gag ttt gca aaa 519

Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Pha Ala Lys 95 100 105 110 gaa tta eag agg agt ttc atg gca eta agt caa gat att eag aaa aca 567

Glu Lau Gin Arg Ser Phe Mat Ala Leu Sar Gin Asp lie Gin Lys Thr 115 120 125 ata aag aag aca gca cgt egg gag eag ett atg aga gaa gaa get gaa 615 lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu 130 135 140 eag aaa cgt. tta aaa act gta ett gag eta eag tat gtt ttg gac aaa 663

Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys 145 150 155 ttg gga gat gat gaa gtg egg act gac ctg aaa caa ggt ttg aat gga 711

Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Asn Gly 160 165 170 gtg cea ata ttg tee gaa gag gag ttg tea ttg ttg gat gaa ttc tat 753

Val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr 175 180 185 190 aag eta gta gac cct gaa egg gac atg age ttg agg ttg aat gaa eag 807

Lys Leu Val Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin 195 200 205 tat gaa cat gee tee att cac ctg tgg gac ctg ctg gaa ggg aag gaa 855

Tyr Glu His Ala Ser lie His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu 210 215 220 aaa cct gta tgt gga acc acc tat aaa gtt eta aag gaa att gtt gag 903

Lys Pro Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Val Leu Lys Glu lie Val Glu 225 230 235 cgt gtt ttt cag tea aac tac ttt gac age ace cac aac cac cag aat 951

Arg Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn 240 245 250 ggg ctg tgt gag gaa gaa gag gca gcc tea gca cct gca gtt gaa gac 399

Gly Leu Cys Glu Gin Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Ala Val Glu Asp 255 260 265 270 cag gta cct gaa get gaa cct gag cca gca gaa gag tac act gag caa 1047

Gin Val Pre Glu Ala Glu Fro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin 275 280 285 agt gaa gtt gaa tea aea gag tat gta aat aga cag ttc atg gca gaa 1035

Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu 290 235 300 aea cag ttc see agt ggt gaa aag gag cag gta gat gag tgg aea gtt 1143

Thr Gin Phe Thr Ser Gly Glu Lys Glu Gin Val Asp Glu Trp Thr Val 305 310 315 gaa aeg gtt gag gtg gta aat tea etc cag cag caa cct cag get gca 1191

Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala 320 325 330 tee cct tea gta cca gag ccc cac tet ttg act cca gtg get cag gca 1239

Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gin Ala 335 340 345 350 gat ccc ett gtg aga aga cag ega gta caa gac ett atg gca caa atg 1287

Gin Gly Pro Tyr Asn Phe lie Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn 370 375 380 cag aea ett gat cct gcc att gta tet gca cag act atg aat cca aea 1383

Gin Thr Leu Asp Pro Ala He Val Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro The 385 390 395 caa aac atg gac atg ccc cag ctg gtt tgc cct cca gtt cat tet gaa 1431

Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Val Cys Pro Pro Val His Ser Glu 400 405 410 tet aga ett get cag cct aat caa gtt cct gta caa cca gaa geg aea 1479

Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr 415 420 425 430 cag gtt cct ttg gta tea tee aea agt gag ggg tac aea gca tet caa 1527

Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin 435 440 445 ccc ttg tac cag cct tet cat get aea gag caa ega cca cag aag gaa 1575

Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu 450 455 460 cca att gat cag att cag gca aea ate tet tta aat aea gac cag act 1623

Pro lie Asp Gin lie Gin Ala Thr lie Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr 465 470 475 aea gca tea tea tee ett cct get geg tet cag cct caa gta ttt cag 1671

Thr Ala Ser Ser Ser Leu Fro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin 480 485 490 get ggg aea age aaa cct tta cat age agt gga ate aat gta aat gca 1719

Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser Gly lie Asn Val Agn Ala 495 500 505 510 get cca ttc caa tcc atg caa aeg gtg ttc aat atg aat gee cca gtt 1767

Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val 515 520 525 cct cct gtt aat gaa cca gaa act tta aaa cag caa aat cag tac cag 1815

Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Asn Gin Tyr Gin 530 535 540 gcc agt tat aac cag age ttt tet agt cag cct cac caa gta gaa caa 1863

Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val Glu Gin 545 550 555 aaa gag c.tt cag caa gaa cag ett caa aca gtg gtt ggc act tac cat 1911

Gly Ser Pro Asp Gin Ser His Gin Val Thr Gly Asn His Gin Gin Pro 575 580 585 590 cct cag cag aac act gga ttt cca cgt age aat cag ccc tat tac aat 2007

Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser Asn Gin Pro Tyr Tyr Asn 595 600 605 agt cgt ggt gtg tet cgt gga ggc tcc cgt ggt get aga ggc ttg atg 2055

Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met 610 615 620 aat gga tae egg ggc cct gcc aat gga ttc aga gga gga tat gat ggt 2103

Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly 625 630 635 tac ege cct tea ttc tet aac act. cca aac agt ggt tat aca cag tet 2151

Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Thr Gin Ser 640 645 650 cag ttc. agt get ccc egg gat tac tet ggc tat caa egg gat gga tat 2199

Gin Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr 655 660 665 670 cag cag aat ttc aag ega ggc tet ggg cag agt gga cca egg gga gcc 2247

Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala 675 680 685 cca ega ggt aat att ttg tgg tgg tga tcctagctcc taagtggagc 2234

Pro Arg Gly Asn lie Leu Trp Trp 690 ttctgttctg geettggaag agctgttaat agtctgcatg ttaggaatac atttatcctt 2354 tccagacttg ttgctaggga ttaaatgaaa tgctctgttt ctaaaactta atcttggacc 2414 caaattttaa tttttgaatg atttaatttt ccctgttact atataaactg tcttgaaaac 2474 tagaacatat tctcttctca gaaaaagtgt. ttttccaact gaaaattatt tttcaggtcc 2534 taaaacctgc taaatgtttt taggaagtac ttactgaaac atttttgtaa gacatttttg 2594 gaatgagatt gaacatttat ataaatttat tattcctctt tcattttttt gaaacatgcc 2654 tattatattt tagggccaga caccctttaa tggeeggata agccatagtt aacatttaga 2714 gaaccattta gaagtgatag aactaatgga atttgcaatg ccttttggac ctctattagt 2774 gatataaata tcaagttatt totgactttt aaacaaaact cccaaattcc taacttattg 2834 agctatactt aaaaaaaatt acaggtttag agagtttttt gtttttcttt tactgttgga 2894 aaactacttc ccattttggc aggaagttaa cctatttaac aattagagct agcatttcat 2954 gtagtctgaa attctaaatg gttctctgat ttgagggagg ttaaacatca aacaggtttc 3014 ctctattggc cataacatgt ataaaatgtg tgttaaggag gaattacaac gtactttgat 3074 ttgaatacta gtagaaactg gccaggaaaa aggtacattt ttctaaaaat taatggatca 3134 cttgggaatt actgacttga crtagaagtat eaaaggatgt ttgeatgtga atgtgggtta 3194 tgttctttcc caccttgtag catattcgat gaaagttgag ttaactgata gctaaaaatc 3254 tgttttaaca gcatgtaaaa agttatttta tctgttaaaa gtcattatao agttttgaat 3314 gttatgtagt ttctttttaa cagtttaggt aataaggtct gttttcattc tggtgctttt 3374 attaattttg atagtatgat gttacttact actgaaatgt aagctagagt gtacactaga 3434 atgtaagete catgagagea ggtacettgt etgtettctc tgctgtatct attcccaacg 3494 cttgatgatg gtgcctggea catagtaggc actcaataaa tatttgttga atgaafcgaa 3553

<210>4 <211> 694 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4

Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 15 10 15

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Gly Ala 20 25 30

Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala 35 40 45

Val Gin Thr Glu Ala Met Lys Gin lie Leu Gly Val lie Asp Lys Lys 50 55 60

Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu 65 70 75 80

Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val 85 90 95

Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu 100 105 110

Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr He Lys 115 120 125

Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys 130 135 140

Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly 145 150 155 160

Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Asn Gly Val Pro 165 170 175

He Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu 180 185 190

Val Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu 195 200 205

His Ala Ser lie His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro 210 215 220

Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Val Leu Lys Glu lie Val Glu Arg Val 225 230 235 240

Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu 245 250 255

Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Ala Val Glu Asp Gin Val 260 265 270

Pro Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu 275 280 285

Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin 290 295 300

Phe Thr Ser Gly Glu Lys Glu Gin Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr 305 310 315 320

Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gin Glr. Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro 325 330 335

Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gin Ala Asp Pro 340 345 350

Leu Val Arg Arg Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly 355 360 365

Pro Tyr Asn Phe lie Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr 370 375 380

Leu Asp Pro Ala Ele Vai Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asa 385 390 395 400

Met Asp Met Pro Gin Leu Val Cys Pro Pro Val His Ser Glu Ser Arg 405 410 415

Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val 420 425 430

Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu 435 440 445

Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro lie 450 455 460

Asp Gin lie Gin Ala Thr lie Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala 465 470 475 480

Ser Ser Ser Leu. Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly 485 490 495

Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro 500 505 510

Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro 515 520 525

Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser 530 535 540

Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val Glu Gin Thr Glu 545 550 555 560

Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser 565 570 575

Pro Asp Gin Ser His Gin Val Thr Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin 580 505 590

Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser Asn Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg 595 600 605

Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly 610 615 620

Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg 625 630 635 640

Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe 645 650 655

Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin 660 665 670

Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg 675 680 685

Gly Asn lie Leu Trp Trp 690

<210>5 < 211> 1605 <212> ADN <213> Canis familiaris <220>

<221 > CDS <222> (46) . . (1392) <223 > <400> 5 gtcacaaata acttggagtt tgcaaaagaa ttacagagga gtttc atg gca tta agt 57

Met Ala Leu Ser 1 caa gat att cag aaa aca ata aag aag act gca cgt egg gag cag ett 105

Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu 5 10 15 20 atg aga gag gaa geg gaa caa aaa cgt tta aaa act gta ett gag etc 153

Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu 25 30 35 cag tat gtt ttg gac aaa ttg gga gat gat gaa gtg aga act gac ctg 201

Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu 40 45 50 aag caa ggt ttg aat gga gtg cca ata ttg tet gaa gaa gaa ttg teg 249

Lys Gin Gly Leu Asn Gly Val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser 55 60 65 ttg ttg gat gaa ttc tac aaa tta gca gac cct gaa egg gac atg age 297

Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser 70 75 80 ttg agg ttg aat gag cag tat gaa cat get tcc att cac ctg tgg gac 345

Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tvr Glu His Ala Ser lie His Leu Trp Asp 65 90 95 100 ttg ctg gaa gga aag gaa aag tet gta tgt gga aca acc tat aaa gca 393

Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala 105 110 115 eta aag gaa att gtt gag cgt gtt ttc cag tea aat tac ttt gac age 441

Leu Lys Glu lie Val Glu Arg Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser 120 125 130 act cac aac cac cag aat ggg eta tgt gag gaa gaa gag gca gcc tea 439

Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser 135 140 145 gca cct aca gfct gaa gac cag gta get gaa get gag cct gag cca gca 537

Ala Pro Thr Val Glu Asp Gin V&l Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala

150 155 16C gaa gaa tac act gaa caa agt gaa gtt gaa tea aca gag tat gta aat. 585

Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn 165 170 175 180 aga caa ttt atg gca gaa aca cag ttc age agt. ggfc gaa aag gag cag 633

Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser Ser Gly Glu Lys Glu Gin 185 190 135 gta gat gag tgg aeg gtc gaa aca gtg gag gtg gtg aat tea etc cag 681

Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val. Val Asn Ser Leu Gin 200 205 210 cag caa cct cag get geg tet cat tea gta cca gag ccc cac tet ttg 729

Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu 215 220 225 act ccg gtg get cag gca gat ccc ett gtg aga aga cag ega gtc cag 777

Thr Pro Val Ala Gin Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val Gin. 230 235 240 gac ett atg geg cag atg cag ggg ccc tat aat ttc ata cag gat tea 825

Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe lie Gin Asp Ser 245 250 " 255 260 atg ctg gat ttt gaa aac cag aca etc gat cct gee att gta tet gca 873

Met Leu Asp phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser Ala 265 270 275 cag cct atg aat ccg aca caa aac atg gac atg ccc cag ctg gtt tgc 921

Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Val Cys 280 285 290 cct cca gtt cat tet gaa tet aga ett get caa cct aat caa gtt cct 969

Pro Pro Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val Pro 295 300 305 gta caa cca gaa get aca cag gtt cct ttg gtt tea tee aca agt gag 1017

Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu 310 315 320 ggg tat aca gca tet caa ccc ttg tac cag cct tet cat get aca gag 1065

Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu 325 330 335 340 caa ega cca caa aag gaa cca att gac cag att cag gca aca ate tet 1113

Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro lie Asp Gin lie Gin Ala Thr lie Ser 345 350 355 tta aat aca gac cag act aca geg tea tea tee ett ccg get get tet 1161

Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser 360 365 370 cag cct cag gta ttc cag get ggg aca age aaa cca tta cat age agt 1209

Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser 375 380 385 gga ate aat gta aat gca get cca ttc caa tee atg caa aeg gtg ttc 1257

Gly He Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe 390 395 400 aat atg aat gcc cca gtt cat cct gtt aat gaa cca gaa act ttg aaa 1305

Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asπ Glu Pro Glu Thr Leu Lys 405 410 415 420 caa caa aat cag tac cag gcc agt tat aac cag age ttt tet agt cag 1353

Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Fhe Ser Ser Gin 425 430 435 cct cac caa gta gaa caa aca gag gga tgc ege aaa tga acactcagca 1402

Pro His Gin Val Glu Gin Thr Glu Gly Cys Arg Lys 440 445 agtgaattaa tctgattcac aggattatgt ttaaacgcca aaaacacact ggccagtgta 1462 ccataatatg ttaccagaag agttattatc tatttgttct eccttteagg aaacttattg 1522 taaagggact gttttcatcc cataaagaca ggactacaat tgtcagcttt atattacetg 1582 gaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaa 1605

<210>6 <211> 448 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 6

Met Ala Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg 15 10 15

Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr 20 25 30

Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val 35 40 45

Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Asn Gly Val Pro lie Leu Ser Glu 50 55 60

Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu 65 70 75 80

Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser He 85 90 95

His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser Val Cys Gly Thr 100 105 110

Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu He Val Glu Arg Val Phe Gin Ser Asn 115 120 125

Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu 130 135 140

Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Val Glu Asp Gin Val Ala Glu Ala Glu 145 150 155 160

Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gift Ser Glu Val Glu Ssr Thr 165 170 175

Glu Tyr Val Aan Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser Ser Gly 180 185 190

Glu Lys Glu Gin Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val 195 200 205

Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu 210 215 220

Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gin Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg 225 230 235 240

Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe 245 250 255 lie Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Glu Thr Leu Asp Pro Ala 260 265 270 lie Val Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp Met Pro 275 280 235

Gin Leu Val Cys Pro Pro Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro 290 295 300

Asn Gin Val Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser 305 310 315 320

Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser 325 330 335

His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro lie Asp Gin lie Gin 340 345 350

Ala Thr lie Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu 355 360 365

Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro 370 375 380

Leu His Ser Ser Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met 385 390 395 400

Gin Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro 405 410 415

Glu Thr Leu Lys Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser 420 425 430

Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val Glu Gin Thr Glu Gly Cys Arg Lys 435 440 445

<210>7 <211> 4154 <212> ADN <213> Canis familiaris <220>

<221 > CDS <222> (1) . . (2154) <223 > <400> 7 atg ccg teg gee acc age etc age gga age ggc age. aag teg teg ggc 48

Met Pro Ser Ala Thr Ser Leu Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 15 10 15 ccg ccg ccc ccg teg ggt tee tee ggg age gag geg geg geg geg geg 96

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Ala Ala 20 25 30 ggg geg geg ggg geg geg ggg geo ggg geg get geg ccc gee tee cag 144

Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin 35 40 45 cae eec geg ace ggc ace ggc get gfcc eag acc gag gee atg aag cag 192

His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Val Gin Thr Glu Ala Met Lys Gin 50 55 60 ate etc ggg gtg ate gac aag aaa etc egg aac etg gag aag aaa aag 240 lie Leu Gly Val lie Asp Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys

65 70 75 SO ggc aag ett gat gat tac cag gaa ega atg aac aaa ggg gaa agg ett 288

Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu 85 90 95 aat caa gat cag etg gat gee gta tet aag tac eag gaa gtc aca aat 336

Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr Asn 100 105 110 aac ttg gag ttt gca aaa gaa tta cag agg agt ttc atg gea tta agt 384

Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser 115 120 125 caa gat att cag aaa aca ata aag aag act gca cgt egg gag eag ett 432

Gin Asp He Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu 130 135 140 atg aga gag gaa geg gaa caa aaa cgt tta aaa act gta ett gag etc 480

Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu 145 150 155 160 cag tat gtt ttg gac aaa ttg gga gat gat gaa gtg aga act gac etg 528

Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu 165 170 175 aag caa ggt ttg aat gga gtg cca ata ttg tet gaa gaa gaa ttg teg 57 6

Lye Gin Gly Leu Asn Gly Val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser ISO 185 190 ttg ttg gat gaa ttc tac aaa tta gca gac cat gaa egg gac atg age 624

Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser 195 200 205 ttg agg ttg aat gag cag tat gaa cat get tcc att cac ctg tgg gac 672

Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser He His Leu Trp Asp 210 215 220 ttg ctg gaa gga aag gaa aag tet gta tgt gga aca acc tat aaa gca 720

Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala 225 230 235 240 eta aag gaa att gtt gag cgt gtt ttc cag tea aat tac ttt gac age 768

Leu Lys Glu He Val Glu Arg Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser 245 250 255 act cac aac cac cag aat ggg eta tgt gag gaa gaa gag gca gcc tea SI6

Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser 260 265 270 gca cct aca gtt gaa gac cag gta get gaa get gag cct gag cca gca 864

Ala Pro Thr Val Glu Asp Gin Val Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala 275 280 285 gaa gaa tac act gaa caa agt gaa gtt gaa tea aca gag tat gta aat 912

Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn 230 295 300 aga caa ttt atg gca gaa aca cag ttc age agt ggt gaa aag gag cag 960

Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser Ser Gly Glu Lys Glu Gin 305 310 315 320 gta gat gag tgg aeg gtc gaa aca gtg gag gtg gtg aat tea etc cag 1008

Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gin 325 330 335 cag caa cct cag get geg tet cct tea gta cca gag ccc cac tet ttg 1056

Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu 340 345 350 act ccg gtg get cag gca gat ccc ett gtg aga aga cag ega gtc cag 1104

Thr Pro Val Ala Gin Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val Gin 355 360 ’ 365 gac ett atg geg cag atg cag ggg ccc tat aat ttc ata cag gat tea 1152

Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe lie Gin Asp Ser 37 Q 375 380 atg ctg gat ttt gaa aac cag aca etc gat cct gcc att gta tet gca 1200

Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser Ala 385 390 395 400 cag cct atg aat ccg aca caa aac atg gac atg ccc cag ctg gtt tgc 1248

Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Val Cys 405 410 415 cct cca gtt cat tet gaa tet aga ett get caa cct aat caa gtt cct 1296

Pro Pro Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val Pro 420 425 430 gta caa cca gaa get aca cag gtt cct ttg gtt tea tee aca agt gag 1344

Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu 435 440 445 ggg tat aca gca tet caa ccc ttg tac cag cct tet cat get aca gag 1392

Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu 450 455 460 caa ega cca caa aag gaa cca att gac cag att cag gca aca ate tet 1440

Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro lie Asp Gin lie Gin Ala Thr lie Ser 465 470 475 480 tta aat aca gac cag act aca geg tea tea tee ett ccg get get tet 1488

Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser 485 490 495 cag cct cag gta ttc cag get ggg aca age aaa cca tta cat age agt 1536

Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser 500 505 510 gga ate aat gta aat gca get cca ttc caa tee atg caa aeg gtg ttc 1584

Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe 515 520 525 aat atg aat gee cca gtt cct cct gtt aat gaa cca gaa act ttg aaa 1632

Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys 530 535 540 caa caa aat cag tac cag gee agt tat aac cag age ttt tet agt cag 1680

Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin 545 550 555 560 cct cac caa gta gaa caa aca gac ett cag caa gaa cag ett caa aca 1728

Pro His Gin Val Glu Gin Thr Asp Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin Thr 565 570 575 gtg gtt ggc act tac cat ggt tee cag gac cag ccc cac caa gtg act 1776

Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp Gin Pro His Gin Val Thr 580 585 590 ggt aac cat cag cag cct ccc cag cag aac act gga ttt cca cgt age 1824

Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser 595 600 605 agt cag ccc tat tac aat agt cgt ggt gtg tet cgt ggt ggt tee cgt 1872

Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg 610 615 620 ggt get aga ggc tta atg aat gga tac agg ggc cct gee aat gga ttc 1920

Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe 625 630 ~ 635 640 aga gga gga tat gat ggt tac ege cct tea ttc tet aac act cca aac 1960

Axg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn 645 650 655 agt ggt tat aca cag tet. cag ttc agt get. ccc egg gac tac tet ggc 2016

Ser Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly 660 665 670 tat cag egg gat gga tat cag cag aat ttc aag ega ggc tet ggg cag 2064

Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin 675 680 685 agt gga cca egg gga gee eca ega ggt cgt gga ggg cec cca aga ccc 2112

Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro 690 695 " 700 aac aga ggg atg ccg caa atg aac act cag caa gtg aat taa 2154

Asn Arg Gly Met. Pro Gin Met Asn Thr Gin Gin Val Asn 705 710 715 tctgattcac aggattatgt ttaaacgeca aaaacacact ggecagtgta ceataatatg 2214 ttaccagaag agttattatc tatttgttct ccctttcagg aaacttattg taaagggact 2274 gttttcatcc cataaagaca ggactacaat tgtcagcttt atattacctg gatatggaag 2334 gaaactattt ttattctgca tgttcttcct aagegteate ttgagcettg eacatgatac 2334 tcagattcct cacccttgct taggagtaaa acataataca ctttacaggg tgatatctcc 2454 atagttattt gaagtggctt ggaaaaagca agattaaett ctgacattgg ataaaaatca 2514 acaaateagc cctagagtta ttcaaatggt aattgacaaa aacfcaaaata tttcccttcg 2574 agaaggagtg gaatgtggtt tggeagaaca actgeatttc acagcttttc cggtfcaaatfc 2634 ggagcactaa acgtttagat gcataccaaa ttatgcatgg gcccttaata taaaaggctg 2634 getaccagct ttgacacagc aetattcatc ctetggccaa acaactgtgg ttaaacaaca 2754 catgtaaatt gctttttaac agctgatact ataataagac aaagccaaaa tgcaaaaatt 2814 gggctttgat tggcactttt tgaaaaatat gcaacaaata tgggatgtaa tctggatggc 2374 cgcttctgta cttaatgtga agtatttaga tacctttttg aacacttaac agtttcttct 2934 gacaatgact tttgtaagga ttggtactat ctatcattcc ttataatgta cattgtctgt 2994 cactaatect cagatcttgc tgtattgtca cctaaattgg tacaggtact gatgaaa&ta 3054 tetaatggat aatcataaca ctcttggtca catgtttttc ctgcagcctg aaggttttta 3114 aaagaaaaag atatcaaatg cctgctgcta ccaccctttt aaafctgctat ettttgaaaa 3174 gcaccagtat gtgttttaga ttgatttccc tattttaggg aaatgacaga cagtagtttc 3234 agttctgatg gtataagcaa aacaaataaa acatgtttat aaaagttgta tettgaaaca 3234 ctggtgttca acagctagca gettatgtgg tteaccecat geattgttag tgtttcagat 3354 tttatggtta tctccagcag ctgtttctgt agtaettgea tttatctttt gtctaaccct 3414 aatattetea eggaggeatt tatattcaaa gtggtgatco ettoaettag acgcataggg 3474 agagtcacaa gtttgatgaa gaggacagtg tagtaattta tatgctgttg gaatttgtgc 3534 tagcagtttg agcactagtt ctgtgtgcet atgaacfctaa tgctgcttgfc catattccac 3594 tttgaettea tggagaatta atcocatcta ctcagcaaag gctatactaa tactaagtta 3654 atggtatttt ctgtgcagaa attgaatttt gttttattag catttageta aggaattttt 3714 ccagtaggtg etcagetact aaagaaaaac aaaaacaaga cacaaaacta ttctcaaaca 3774 ttcattgtta gaeaactgga gtttttgctg gttttgtaae ctaetaaaat ggataggetg 3834 ttgaacattc cacattcaaa agttttttgt agggfcggtgg ggaagggggg gtgtcttcaa 3894 fcgfctfcafctfcfe aaaafeaaaat aagtfccfcfcga ctttfcctcat gtgtggtfcgt ggtscatcat 3954 attggaaggg ttatctgttt acttttgcaa atgagtattt ctcttgctag caactcccgt 4014 tgtgcgcttt aaatgacatc tgcctgggat gtaccacaac oatatgttag ctgtatttta 4074 tggggaatag ataaaatatt cgtggtttat tgggtaatcc ctagatgtgt atgcttacaa 4134 tcctatatat aaaactaaat 4154

<210>8 <211> 717 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 8

Met Pro Ser Ala Thr Ser Leu Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 15 10 15

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Ala Ala 20 25 30

Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin 35 40 45

His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Val Gin Thr Glu Ala Met Lys Gin 50 55 60 lie Leu Gly Val lie Asp Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys 65 70 75 80

Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu 85 90 95

Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr Asn 100 105 110

Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser 115 120 125

Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu 130 135 140

Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu 145 150 155 160

Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu 165 170 175

Lys Gin Gly Leu Asn Gly Val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser 180 185 190

Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser 195 200 205

Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser lie His Leu Trp Asp 210 215 220

Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala 225 230 235 240

Leu Lys Glu lie Val Glu Arg Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser 245 250 255

Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser 260 265 270

Ala Pro Thr Val Glu Asp Gin Val Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala 275 280 285

Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn 290 295 300

Arg Gin Phe Met. Ala Glu Thr Gin Phe Ser Ser Gly Glu Lys Glu Gin 305 310 315 320

Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gin 325 330 335

Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu 340 345 350

Thr Pro Val Ala Gin Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val Gin 355 360 365

Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe He Gin Asp Ser 370 375 3B0

Met Leu Aap Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala He Val Ser Ala 385 390 395 400

Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Val Cys 405 410 415

Pro Pro val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin val Pro 420 425 430

Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu 435 440 445

Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu 450 455 460

Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro lie Asp Gin Tie Gin Ala Thr lie Ser 465 470 475 480

Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser 485 490 495

Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser 500 505 510

Gly Tie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met. Gin Thr Val Phe 515 520 525

Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys 530 535 540

Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin 545 550 555 560

Pro His Gin Val Glu Gin Thr Asp Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin Thr 565 570 575

Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp Gin Pro His Gin Val Thr 580 585 590

Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser 595 600 605

Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg 610 615 620

Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe 625 630 635 640

Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn 645 650 655

Ser Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly 660 665 670

Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin 675 680 685

Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro 690 695 700

Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Thr Gin Gin Val Asn 705 710 715

<210>9 <211> 4939 <212> DN <213> Canis familiaris <220>

<221 > CDS <222 > (1) .. (2109) <223 > <400> 9 atg ccg teg gee acc age etc age gga age ggc age aag teg teg ggc 48

Met Pro Ser Ala Thr Ser Leu Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 15 10 15 ceg ccg ccc ccg teg ggt tee tee ggg age gag geg geg geg geg geg 96

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Ala Ala 20 25 30 ggg geg geg ggg geg geg ggg gee ggg geg get geg ccc gee tee cag 144

Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin. 35 40 45 cac ccc geg acc ggc acc ggc get gtc cag acc gag gee atg aag cag 192

His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Val Gin Thr Glu Ala Met Lys Gin 50 55 60 ate etc ggg gtg ate gac aag aaa etc egg aac ctg gag aag aaa aag 240

He Leu Gly Val He Asp Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys 65 70 75 80 ggc aag ett gat gat tac cag gaa ega atg aac aaa ggg gaa agg ett 288

Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu 85 90 95 aat caa gat cag ctg gat gee gta tet aag tac cag gaa gtc aca aat 336

Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr Asn 100 105 110 aac ttg gag ttt gca aaa gaa tta cag agg agt ttc atg gca tta agt 384

Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg Ser Fhe Met Ala Leu Ser 115 120 125 caa gat att cag aaa aca ata aag aag act gca cgt egg gag cag ett 432

Gin Asp He Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu 130 135 140 atg aga gag gaa geg gaa caa aaa cgt tta aaa act gta ett gag ete 480

Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lye Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu 145 150 155 160 cag tat gtt ttg gac aaa ttg gga gat gat gaa gtg aga act gac ctg 528

Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu 165 170 175 aag caa ggt ttg aat gga gtg cca ata ttg tet gaa gaa gaa ttg teg 576

Lys Gin Gly Leu Asn Gly Val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser 180 185 190 ttg ttg gat gaa ttc tac aaa tta gca gac ect gaa egg gac atg age 624

Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser 195 200 205 ttg agg ttg aat gag cag tat gaa cat get tee att cac ctg tgg gac 672

Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser lie His Leu Trp Asp 210 215 220 ttg ctg gaa gga aag gaa aag tet gta tgfc gga aca acc tat aaa gca 720

Leu Lye Glu lie Val Glu Arg Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser 245 250 255 act cac aac cac cag aat ggg eta tgt gag gaa gaa gag gca gee tea 816

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Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn 290 295 300 aga caa ttt atg gca gaa aca cag ttc age agt ggt gaa aag gag cag 960

Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser Ser Gly Glu Lys Glu Gin 305 310 315 320 gta gat gag tgg aeg gte gaa aca gtg gag gtg gtg aat tea etc cag 1008

Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gin ooft ooe cag caa cct cag get geg tet cct tea gta cca gag ccc cac tet ttg 1056

Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu 340 345 350 act ccg gtg get cag gca gat ccc ett gtg aga aga cag ega gte eag 1104

Thr Pro Val Ala Gin Ala Asp Pro Leu val Arg Arg Gin Arg val Gin 355 360 365 gac ett atg geg cag atg cag ggg ccc tat aat ttc ata cag gat tea 1152

Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe Tie Gin Asp Ser 370 375 380 atg ctg gat ttt gaa aac cag aca etc gat cct gee att gta tet gca 1200

Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu 450 455 460 caa cga cca caa aag gaa cca att gac cag att cag gca aca ate tet 1440

Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro lie Asp Gin He Gin Ala Thr lie Ser 465 470 475 480 tta aat aca gac cag act aca geg tea tea tee ett ccg get get tet 1488

Gly He Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe 515 520 525 aat atg aat gee cca gtt cct cct gtt aat gaa cca gaa act ttg aaa 1632

Pro His Gin Val Glu Gin Thr Asp Leu Gin Sin Glu Gin Leu Gin Thr 565 570 575 gtg gtt ggc act tac cat ggt tee cag gac cag ccc cac caa gtg act 1776

Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe 625 630 635 640 aga gga gga tat gat ggt tac ege cct tea ttc tet aac act cca aac 1968

Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn 645 650 655 agt ggt tat aca cag tet cag ttc agt get ccc egg gac tac tet ggc 2016

Ser Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly 660 665 670 tat cag egg gat gga tat cag cag aat ttc aag cga ggc tet ggg cag 2064

Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin 675 680 685 agt gga cca egg gga gee cca cga ggt aat att ttg tgg tgg tga 2109

Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Asn He Leu Trp Trp 690 695 700 tcctagctcc taagtggagc ttctgttctg geettggaag agctgttcca tagtetgeat 2169 gtaggttaca tgttaggaat acatttatca ttaccagact tgttgctagg gattaaatga 2229 aatgctctgt ttctaaaact tctcttgaac ccaaatttaa ttttttgaat gactttccct 2289 gttactatat aaattgtctt gaaaactaga acatttctcc tcctcagaaa aagtgttttt 2349 ccaactgcaa attatttttc aggtcctaaa acctgctaaa tgtttttagg aagtacttac 2409 tgaaacattt ttgtaagaaa tttttggaat gagattgaac atttatataa atttattatt 2469 attcctcttt catttttgaa catgcatatt atattttagg gtcagaaatc ctttaatggc 2529 caaataagcc atagttacat ttagagaacc atttagaagt gatagaacta actgaaattt 2589 caatgccttt ggatcattaa tagcgatata aatttcaaat tgtttctgac ttttaaataa 2649 aacatccaaa atcctaacta acttcctgaa ctatatttaa aaattacagg tttaaggagt 2709 ttctggtttt ttttctctta ccataggaaa actgtttcct gtttggccag gaagtcaacc 2769 tgtgtaataa ttagaagtag catttcatat gatctgaagt tctaaatggt tctctgattt 2829 aagggaagtt aaattgaata ggtttcctct agttattggc cataacatgt ataaaatgta 2889 tattaaggag gaatacaaag tactttgatt tcaatgctag tagaaactgg ccagcaaaaa 2949 ggtgcatttt atttttaaat taatggatca cttgggaatt actgacttga agtatcaaag 3009 gatatttgca tgtgaatgtg ggttatgttc tttctcacct tgtagcatat tctatgaaag 3069 ttgagttgae fcggtagctaa aaatctgttt taaeagcafcg taaaaagtta ttfctatctgt 3129 taeaagtcat tatacaattt tgaatgttat gtagtttctt tttaacagtt taggtaacaa 3189 ggtctgtttt tcattctggt gcttttatta attttgatag tatgatgtta cttactactg 3249 aaatgtaagc tagagtgtac actagaatgt aagctccatg agagcaggta ccttgtctgt 3309 cttcactgct gtatctattt ccaacgcctg atgacagtgc ctgacacata gtaggcactc 3369 aataaatact tgttgaatga atgaatgaat gagtactggt ggaatactcc attagctcta 3429 ctct.tctt.tt agctagagaa catgagcaaa tttgcgcatg acaacttcca ggacaggtga 34 89 acactgaaga attgacctct taaacctaat aatgtggtga caagctgccc acatgcttct 3549 tgacttcaga tgaaaatctg cttgaaggca aagcaaataa tatttgaaag aaaaaccaaa 3609 tgccattttt gtcttctagg tcgtggaggg cccccaagac ccaacagagg gatgccgcaa 3669 atgaacactc agcaagtgaa ttaatctgat tcacaggatt atgtttaaac gccaaaaaca 3729 cactggccag tgtaccataa tatgttacca gaagagttat tatctatttg ttctcccttt 3789 caggaaactt attgtaaagg gactgttttc atcccataaa gacaggacta caattgtcag 3849 ctttatatta cctggatatg gaaggaaact atttttattc tgcatgttct tcctaagcgt 3909 catcttgagc cttgcacatg atactcagat tcctcaccct tgcttaggag taaaacataa 3969 tacactttac agggtgatat ctccatagtt atttgaagtg gcttggaaaa agcaagatta 4029 acttctgaca ttggataaaa atcaaaaaat cagccctaga gttattcaaa tggtaattga 4089 caaaaactaa aatatttccc ttcgagaagg agtggaatgt ggtttggcag aacaactgca 4149 tttcacagct tttccggtta aattggagca ctaaacgttt agatgcatac caaattatgc 4209 atgggecctt aatataaaag gctggctacc agctttgaca cagcactatt catcctctgg 4269 ccaaacaaet gtggttaaac aacacatgta aattgctttt taacagctga tactataata 4329 agacaaagcc aaaatgcaaa aattgggctt tgattggcac tttttgaaaa atatgoaaca 43 S 9 aatatgggat gtaatctgga tggccgcttc tgtacttaat gtgaagtatt tagatacctt 4449 tttgaacact taacagtttc ttctgacaat gacttttgta aggattggta ctatctatca 4509 ttccttataa tgtacattgt ctgtcactaa tocteagatc ttgctgtatt gtcacctaaa 4569 ttggtacagg tactgatgaa aatatctaat ggataatcat aacactcttg gtcacatgtt 4629 tttcctgcag cctgaaggtt tttaaaagaa aaagatatca aatgcctgct gctaccaccc 4689 ttttaaattg ctatcttttg aaaagcacca gtatgtgttt tagattgatt tccctatttt 4749 agggaaatga cagacagtag tttcagttct gatggtataa gcaaaacaaa taaaacatgt 4809 ttataaaagt tgtatcttga aacactggtg ttcaacagct ageagcttat gtggtteace 4869 ccatgeattg ttagtgtttc agattttatg gttatcteca geagctgttt ctgtagtaet 4929 fcgcafctfcafcc 4939

<210> 10 <211> 702 <212> PRT <213> Canis famiiiairis <4QQ> 10

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Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Ala Ala 20 25 30

Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin 35 40 45

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Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu S5 90 95

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Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser 115 120 125

Gin Asp lie Gin Lys rhr He Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu 130 135 140

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Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser 195 200 205

Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu Pis Ala Ser He His Leu Trp Asp 210 215 220

Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala 225 230 235 240

Leu Lye Glu He Val Glu Arg Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser 245 250 255

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Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn 290 295 300

Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser Ser Gly Glu Lys Glu Gin 305 310 315 320 val Asp Glu Trp Thr val Glu Thr val Glu val val Asn Ser Leu Gin 325 330 335

Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu 340 345 350

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Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe He Gin Asp Ser 370 375 380

Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Set Ala 385 390 395 400

Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Val Cys 405 410 415

Pro Pro Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val Pro 420 425 430

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Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro lie Asp Gin rie Gin Ala Thr lie Ser

465 470 475 4BQ

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Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser 500 505 510

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Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin 545 550 555 560

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<212> ADN <213> Canis familiaris <220>

<221 > CDS <222> (1) . . (2040) <223 > <400> 11 atg ccg teg gee acc age etc age gga age ggc age aag teg teg ggc 48

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Asn Leu Glu Phe Ala Lya Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser 115 120 125 caa gat att cag aaa aca ata aag aag act gca cgt egg gag cag ett 432

Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu 130 135 140 atg aga gag gaa geg gaa caa aaa cgt tta aaa act gta ett gag etc 480

Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr val Leu Glu Leu 145 150 155 160 cag tat gtt ttg gac aaa ttg gga gat gat gaa gtg aga act gac ctg 528

Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu 165 170 175 aag caa ggt ttg aat gga gtg cca ata ttg tct gaa gaa gaa ttg teg 576

Lys Gin. Gly Leu Asn Gly Val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser 180 185 190 ttg ttg gat gaa ttc tac aaa tta gca gac cct gaa egg gac atg age 624

Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser 195 200 205 ttg agg ttg aat gag cag tat gaa cat gat tcc att cac ctg tgg gac 672

Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser He His Leu Trp Asp 210 215 220 ttg ctg gaa gga aag gaa aag tct gta tgt gga aca acc tat aaa gca 720

Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala 225 230 235 240 eta aag gaa att gtt gag cgt gtt ttc cag tea aat tac ttt gae age 768

Leu Lys Glu lie Val Glu Arg Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser 245 250 255 act cac aac cac cag aat ggg eta tgt gag gaa gaa gag gca gcc tea 816

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<210> 12 <211> 679 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 12

Met Pro Ser Ala Thr Ser Leu Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 1 5 10 15

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Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu 165 170 175

Lys Gin Gly Leu Asn Gly Val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser 180 185 190

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Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser lie His Leu Trp Asp 210 215 220

Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala 225 230 235 240

Leu Lys Glu lie Val Glu Arg Val Phe Sin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser 245 250 255

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Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu 340 345 350

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Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Se: 595 €00 €05

Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Ari 610 615 620

Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Pht 625 €30 €35 641

Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asi €45 €50 €55

Ser Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gl; 660 665 670

Tyr Gin Arg Gly Cys Arg Lys 675

<210> 13 <211> 2281 <212> ADN <213> Canis familiairis <220>

<221 > CDS <222> (1)., (2154) < 2 2 3 > < 4 0 0 > 13 atg ccg teg gee acc age etc age gga age ggc age aag teg teg ggc 48

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Ala Ala 20 25 30 ggg geg geg ggg geg geg ggg gee ggg geg get geg coo geo tee cag 144

Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin 35 40 45 cac ccc geg acc ggc acc ggc get gte cag ace gag gee atg aag cag 192

His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Val Gin Thr Glu Ala Met Lys Gin 50 55 60 ate etc ggg gtg ate gae aag aaa etc egg aae etg gag aag aaa aag 240 lie Leu Gly Val He Asp Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys 65 70 75 80 ggc aag ett gat gat tae eag gaa ega atg aae aaa ggg gaa agg ett 288

Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu 85 90 95 aat caa gat cag ctg gat gcc gta tet aag tac cag gaa gtc aca aat 336

Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser 115 120 125 caa gat att cag aaa aca ata aag aag act gca cgt egg gag cag ett 432

Lys Gin Gly Leu Asn Gly Val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser 180 185 190 ttg ttg gat gaa ttc tac aaa tta gca gac cct gaa egg gac atg age 624

Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser 195 200 205 ttg agg ttg aat gag cag tat gaa cat get. tcc att cac ctg tgg gac 672

Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser lie His Leu Trp Asp 210 215 220 ttg ctg gaa gga aag gaa aag tet gta tgt gga aca acc tat aaa gca 720

Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser 260 265 270 gca cct. aca gtt gaa gac cag gta get gaa get gag cct. gag cca gca 864

Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser Ser Gly Glu Lys Glu Gin 305 310 315 320 gta gat gag tgg aeg gtc gaa aca gtg gag gtg gtg aat. tea etc cag 1008

Thr Pro Val Ala Gin Ala Asp Pro leu Val Arg Arg Gin Arg Val Gin 355 360 365 gac ett. atg geg cag atg cag ggg ccc tat aat ttc ata cag gat tea 1152

Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Glv Pro Tyr Aan Phe lie Gin Asp Ser 370 375 380 atg ctg gat ttt gaa aac cag aca etc gat act gee att gta tet gca 1200

Met Leu Asp Phe Glu Asti Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser Ala 385 390 395 400 cag cct atg aat ccg aca caa aac atg gac atg ccc cag ctg gtt tgc 1248

Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asm Met Asp Met Pro Gin Leu Val Gys 405 410 415 cct cca gtt cat tet gaa tet aga ett get caa cct aat caa gtt cct 1296

Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser 435 490 495 cag cct cag gta ttc cag get ggg aca age aaa cca tta cat age agt 1536

Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin 545 550 555 560 cct cac caa gta gaa caa aaa gac efct cag caa gaa cag ett caa aca 1728

Pro His Gin Val Glu Gin Thr Asp Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin Thr 565 570 575 gtg gtt ggc act tac cat. ggt tee cag gac cag ccc cac caa gtg act 1776

Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp Gin Pro His Gin Val Thr 580 585 590 ggt aac cat cag cag ccfc ccc cag cag aac act gga ttt cca cgt age 1824

Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser 595 600 605 agt cag ccc tat tac aat agt cgt ggt. gtg tet cgt ggt ggt tee cgt 1872

Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val $«r Arg Gly Gly Ser Arg 610 615 620 ggt get &ga ggc tta atg aat gga tac agg ggc cot gee aat gga ttc 1920

Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe 625 630 635 640 aga gga gga tat gat ggt tac ege cct tea ttc tot aac act cca aac 1968

Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin 675 680 685 agt gga cca egg gga gee cca ega gçrt cgt gga ggg ccc cca aga ccc 2112

Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro 690 695 700 aac aga ggg atg ccg caa atg aac act cag caa gtg aat taa 2154

Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Thr Gin Gin Val Asn 705 710 715 tctgattcac aggattatgt ttaaacgcca aaaacacact ggccagtgta ccataat&tg 2214 tt&ccaga&g agttattatc tatttggact gttttcatcc cataaagaca ggactacaat 2274 tgteage 2281

<210> 14 <211> 717 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 14

Met Pro Ser Ala Thr Ser Leu Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 1 5 10 15

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Ala Ala 20 25 30

Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin 35 40 45

Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu 85 90 95

Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr Asn 100 105 110

Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser 1.15 120 125

Gin Asp He Gin Lye Thr He Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu 130 135 140

Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu 145 150 155 160

Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu 165 170 175

Lys Gin Gly Leu Asn Gly Val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser ISO 185 190

Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser 195 200 205

Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser lit His Leu Trp Asp 210 215 220

Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala 225 230 235 240

Leu Lys Glu lie Val Glu Arg Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser 245 250 255

Thr Eis Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser 260 265 270

Ala Pro Thr Val Glu Asp Gin Val Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala 275 280 285

Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn 230 235 300

Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser Ser Gly Glu Lys Glu Gin 305 310 315 320

Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gin 325 330 335

Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu 340 345 350

Thr Pro Val Ala Gin Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val Gin 355 360 365

Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Glv Pro Tyr Asn Phe lie Gin. Asp Ser 370 375 * 330

Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser Ala 3S5 390 395 400

Gin Pro Met Asn Pro Ihr Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Val Cys 405 410 415

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Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu 435 440 445

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Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro lie Asp Gin lie Gin Ala Thr lie Ser 465 470 475 430

Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser 485 490 495

Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser 500 505 510

Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe 515 520 525

Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys 530 535 540

Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin 545 550 555 560

Pro His Gin Val Glu Gin Thr Asp Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin Thr 565 570 575

Val val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp Gin Pro His Gin val Thr 530 585 590

Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser 595 600 605

Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg 610 615 620

Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe 625 630 635 640

Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn 645 650 655

Ser Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly 660 665 670

Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin 675 680 685

Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro 690 695 700

Asn Arg Sly Met Pro Sin Met Asn Thr Gin Gin Yai Asn 70S 710 715 < 210 > 15 <211> 3386 <212> ADN <213> Bos taurus < 2 2 0 >

<221 > CDS <222> (82) , . (2208) < 2 2 3 > <400> 15 cgcgtctcgc eccgtccacc gattgactcg ccgctcttgt ccttcctccc gc.tcttt.ctt 60 ctctcccctt acggtttcaa g atg cct teg gee acc age cae age gga age ill

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Leu Asp Ala val Ser Lys Tyr Gin Glu val Thr Asn Asn. Leu Glu. Phe 95 100 105 gca aaa gaa tta cag agg agt ttc atg gca tta age caa gat att cag 447

Ala Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp He Gin. 110 115 120 aaa aca ata aag aag aca gca cgt egg gag cag cfct atg aga gag gaa 495

Lys Thr IIs Lys Lys Ihr Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu 125 130 135 get gaa cag aaa cgt tta aaa aca gta ett gag ctg cag tat gtt ttg 543

Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu 140 145 150 gac aaa eta gga gat gat gaa gtg aga act gac ctg aag caa ggt ttg 591

Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu 155 160 165 170 aat gga gtg cca ata ttg tefc gaa gag gag ttg teg ttg tta gat gag 639

Asn Gly Val Pro He Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu 175 130 185 ttc tac aaa tta gca gac cct gaa ega gac atg age ttg agg ttg aat 637

Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn 190 195 200 gag cag tat gaa cat gcc tcc att cac ctg tgg gac ttg ctg gaa gga 735

Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser lie His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly 205 210 215 aag gaa aaa cct gta tgt gga aca act tat aaa get eta aag gaa att 733

Lys Glu Lys Pro Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu lie 220 225 230 gtt gag cgt gtt ttc cag tea aac tac ttt gac age aec cac aac cac 831

Val Glu Arg Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His 235 240 245 250 cag aat ggt ctg tgt gag gaa gag gag gca gcc tea gca cct aca gtt S79

Gin Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr val 255 260 265 gaa gac cag gca get gaa get gaa cct gag cca gtg gaa gaa tat act 927

Glu Asp Gin Ala Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro Val Glu Glu Tyr Thr 270 275 280 gaa caa aat gag gtt gaa tea aca gag tat gta aat aga caa ttt atg 975

Glu Gin Asn Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gin Phe Met 285 290 295 gca gaa aca cag ttc age agt ggt gaa aag gag cag gta gat gat tgg 1023

Ala Glu Thr Gin Phe Ser Ser Gly Glu Lys Glu Gin Val Asp Asp Trp 300 305 310 aca gtt gaa aca gtt gag gtg gta aat tea etc cag cag caa cct cag 1071

Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Sar Leu Gin Gin Gin Pro Gin 315 320 325 330 get gca tet cct tea gta cca gaa ccc cac tet ttg acc cca gtg get 1119

Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala 335 340 345 caa gcc gat ccc etc gtg aga aga cag ega gta cag gac ett atg gca 1167

Gin Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala 350 355 360 caa atg cag ggg ccc tat aat ttc ata cag gat tea atg ttg gat ttt 1215

Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe lie Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe 365 370 375 gaa aac cag aca ett gat cct gcc att gta tet gca cag ccg atg aat 1.263

Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser Ala Gin Pro Met Asn 380 385 390 cca gca cag aac atg gac ata ccc cag cfcg gtt tgc cct cca gtt cat 1311

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Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Asp Gin Arg Pro Gin 445 450 455 aag gaa ccg att gat cag att cag geg aeg ate tet tta aat aca gac 1503

Lys Glu Pro lie Asp Gin lie Gin Ala Thr lie Ser Leu Asn Thr Asp 460 465 470 cag act aca gca tea tea tee ett cct get get tet cag cct caa gtg 1551

Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val 475 480 435 490 ttc cag get ggg aca age aaa cat tta eat age agt gga ate aat gta 1539

Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser Gly lie Asn val 495 500 505 aat gca get cea tte caa tee atg caa aeg gta ttc aat atg aat gcc 1647

Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr val Phe Asn Met Asn Ala 510 515 520 cca gtt cct cct gtt aat gaa cea gaa act tta aaa cag caa aat cag 1695

Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Asn Gin 525 530 535 tac cag gcc agt tac aac cag age ttt tee agt cag cct cac caa gta 1743

Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin val 540 545 550 gaa caa aca gag ett cag caa gaa cag ett caa aca gtg gtt ggc act L791

Glu Gin Thr Glu Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin Thr Val Val Gly Thr 555 560 565 570 tat cat ggt tet cag gac cag ccc cat caa gtg act ggt aac cac cag 1839

Tyr His Gly Ser Gin Asp Gin Pro His Gin Val Thr Gly Asn His Gin 575 580 585 cag cct cct cag cag aac act gga ttt cca cgt age aat cag ccc tat 1887

Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser Asn Gin Pro Tyr 590 595 600 tac aac agt cgt ggt gtg tet cgt gga ggt tee cgt ggt get aga ggc 1935

Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly 605 610 615 ttg atg aat gga tac aga gga cct get aat gga ttc aga gga gga tat 1983

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Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Thr Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr 635 640 645 650 aca caa tet caa ttc agt get ccc egg gac tac tet ggc tat cag egg 2079

Thr Gin Ser Gin Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg 655 660 665 gat gga tat cag cag aat ttc aag ega ggc tet ggg cag agt gga cca 2127

Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro 670 675 680 egg gga gee cca ega ggt cgt gga ggg ccc cca aga ccc aac aga ggg 2175

Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly 685 690 695 atg ccg caa atg aac act cag caa gtg aat taa tctgattcac aggattatgt 2228

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Glu Val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Asn Gly Val Pro lie Leu 165 170 175

Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp 180 185 190

Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala 195 200 205

Ser lie His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro Val Cys 210 215 220

Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu lie Val Glu Arg Val Phe Gin 225 230 235 240

Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin. Asn Gly Leu Cys Glu 245 250 255

Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Val Glu Asp Gin Ala Ala Glu 260 265 270

Ala Glu Pro Glu Pro Val Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Asn Glu Val Glu 275 280 285

Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser 290 295 300

Ser Gly Glu Lys Glu Gin Val Asp Asp Trp Thr Val Glu Thr Val Glu 305 310 315 320

Val Val Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val 325 330 335

Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gin Ala Asp Pro Leu Val 340 345 350

Arg Arg Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr 355 360 365

Asn Phe lie Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp 370 375 380

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He Pro Gin Leu Val Cys Pro Pro Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala 405 410 415

Gin Pro Asn Gin Val Ser Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu 420 425 430

Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin 435 440 445

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Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser 485 490 495

Lys Pro Leu His Ser Ser Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Fhe Gin 500 505 510

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Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn 530 535 540

Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val Glu Gin Thr Glu Leu Gin 545 550 555 560

Gin Glu Gin Leu Gin Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp 565 570 575

Gin Pro His Gin Val Thr Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn 580 585 590

Thr Gly Phe Pro Arg Ser Asn Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val 595 600 605

Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg 610 615 620

Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser 625 630 635 640

Phe Ser Thr Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe Ser 645 650 655

Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn 660 665 670

Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly 675 680 685

Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Thr 690 695 700

Gin Gin Val Asn 705

<210> 17 <211> 3150 <212> ADN <213> Equus caballus <220>

<221> CDS <222 > (1)..( 1917) <223 > <400> 17 atg gag ggc aag etc gat gat tac caa gag ega atg aac aaa gga gaa 48

Met Glu Gly Lys Leu Asp Asp ryr Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu 15 10 15 agg ett aat cag gat cag ctg gat get gtg tet aag tac cag gaa gtc 96

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Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu 50 55 60 cag ett atg aga gaa gaa get gaa cag aaa cgt tta aaa act gta att 240

Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu lys Thr Val Leu

65 70 75 GO gag ctg cag tat gtt ttg gac aaa ttg gga gat gaa gaa gtg ega act 288

Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp lys Leu Gly Asp Glu Glu Val Arg Thr 85 90 95 gac ctg aaa caa ggt ttg aat gga gtg cca ata etc tet gaa gaa gag 336

Asp Leu Lys Gin Gly Leu Asn Glv val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu 100 105 110 ttg teg ctg ttg gat gag ttc tac aag tta gca gac cct gta egg gac 384

Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Val Arg Asp 115 120 125 atg age ttg agg ttg aat gag cag tat gag cat gcc tee att cac ctg 432

Met Ser leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser lie His Leu 130 135 140 tgg gac ttg ctg gaa ggg aag gaa aaa tet gtc tgt gga aca acc tat 480

Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser Val Cy s Gly Thr Thr Tyr 145 150 155 160 aaa get ctg agg gaa att gtt gag cgt gtt ttc cag tcc aac tac ttt 528

Lys Ala Leu Arg Glu lie Val Glu Arg Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe 165 170 175 gac age acc cac aac cac cag aat ggg etc tgt gag gag gaa gag get 576

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Thr Ser Ala Pro Thr Ala Glu Asp Gin Gly Ala Glu Ala Glu Pro Glu 195 200 205 cca gca gaa gaa tac act gaa caa agt gaa gtt gaa tea aca gag tat 672

Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr 210 215 220 gta aat aga cag ttt atg gca gaa geg cag ttc agt ggt gag aag gag 720

Val Aan Arg Gin Phe Met Ala Glu Ala Gin Phe Ser Gly Glu Lys Glu 225 230 235 240 cag gtg gat gag tgg aca gtc gag aeg gtc gag gtg gta aat tea ate 768

Gin Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu 245 250 255 cag cag caa cct cag get gca tet cct tea gta ccg gag ccc cac tet 815

Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser 260 265 270 ttg act cca gtg get cag gca gat ccc ett gtg aga aga cag ega gta 864

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Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser 305 310 315 320 gca cag cct atg aat cca gca cag aat atg gac atg ccc cag ctg gtt 1008

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Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser 355 360 365 gag ggg tat aca gca tet cag ccc ttg tac cag cct tet cat get aca 1152

Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr •1*?^ οι t gori

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Ser Gly He Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val 435 440 445 ttc aac atg aat gee ccg gtt cct cct gtt aat gaa cca gaa act tta 1392

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Ser Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser 530 535 540 cgt ggt get aga ggc ttg atg aat gga tac agg ggc act gee aat gga 1680

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Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg 610 ' 615 " 620 ccc aac aga ggg atg ccg caa atg aac act cag caa gtg aat taa 1917

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<210> 18 <211> 638 <212> PRT <213> Equus caballus < 4 0 0 > 18

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Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu Val 20 25 30

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Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu 50 55 60

Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu

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Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser 355 360 365

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Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro Thr Asp Gin lie Gin Ala Thr lie 385 390 395 400

Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala 405 410 415

Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser 420 425 430

Ser Gly lie Asn val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr val 435 440 445

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Lys Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser 465 470 475 480

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Ser Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arq Gly Gly Ser 530 535 540

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Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg 610 615 620

Pro Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Thr Gin Gin val Asn 625 630 635 <210> 19 <211> 6181

< 212 > ADN <213> Mus musculus <220>

<221 > CDS <222> (179) . . (2302) <223 > <4QG> 19 gcfcggetggc taagtccctc ccgcgccggc tcttgtccca ctaggageag ctcagagccg 60 cggggacagg gcgaagcggc ctgcgcccac ggagcgcacg fcctctgttct caacgcagca 120 ccacccttgc cococtcggc tgcccactcc agacgtocag cggctccgcg cgcgcacg 178 atg ccc teg gee aec age cac age gga age ggc age aaa teg teg gga 226

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Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Val Gin 35 40 45 aec gag gee atg aag cag att etc ggc gta ate gac aag aaa ett egg 370

Thr Glu Ala Met Lys Gin lie Leu Gly Val lie Asp Lys Lys Leu Arg 50 55 60 aac ctg gag aag aaa aag ggt aaa ett gat gat tac cag gaa ega atg 418

Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met 65 70 75 80 aat aaa ggg gaa agg etc aat caa gac cag ctg gat gee gta tet aag 466

Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys 85 30 95 tac cag gaa gtc aca aat aat ttg gag ttt gca aag gaa tta cag agg 514

Tyr Gin Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg 100 105 110 agt ttc atg gca tta agt eaa gat att cag aaa aca ata aag aag aca 562

Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp He Gin Lys Thr Tie Lys Lys Thr 115 120 125 gca cgt egg gaa cag ett atg aga gaa gaa gca gaa cag aag ege tta 610

Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu 130 135 140 aaa act gta ett gag tta cag tat gta ttg gat aag ctg gga gat gat 658

Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp 145 150 155 160 gat gtg aga aca gat ctg aaa caa ggt ttg agt gga gtg cca ata ttg 706

Asp Val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Ser Gly Val Pro He Leu 165 170 175 tet gag gag gag ttg tea ttg ctg gat gag ttc tac aag etc gta gat 754

Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Val Asp 180 185 130 cct gag cgt gac atg agt tta agg tta aat gag cag tat gaa cat gee 802

Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala 195 200 205 tea att cac ttg tgg gat ttg ctg gaa ggg aaa gaa aag cct gtg tgt 850

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Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu 245 250 255 gag gaa gag geg get tea geg ccc aca gtg gag gac cag gta get gaa 994

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Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg 675 680 685 gga ggg ccc cca aga ccc aac aga ggg atg ccg caa atg aac act cag 2290

Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Thr Gin

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Gin Val Asn 705 ggccagtgta ccataatatg ttaccagaag agttattatc tatttgttct ccctttcagg 2402 aaacttattg taaagggact gttttcatcc cataaagaca ggactgcaat tgtcagcttt 2462 acattacctg gatatggaag gaaactattt ttattctgca tgttctgtcc taagegteat 2522 ettgageett gcacacaata caatactcag attcctcacc ettgettagg agtaaaacat 2582 tatataetta tggggtgata atatctecat agttagttga agtggcttgg aaaaaaaatg 2642 caagattgaa tttttgacct tggataaaat ctacaatcag ccctagaact attcagtggt 2702 aattgacaaa gttaaagcat tttctttgaa aggaagatgg aaggagtgga gtgtggttta 2762 gcaaaactgc atttcatagc tttcccatta aattggagca ccgacagatt aaaagcatac 2822 caaattatgc atgggtcctt actcacacaa gtgaggctgg ctaccagcct tgacatagca 2882 ctcactagtc ttctggcaaa acgactgtga ttaaaacaca tgtaaattgc tctttagtag 2942 tggatactgt gtaagacaaa gccaaattgc aaatcaggct ttgattggct cttctggaaa 3002 atatgcatca aatatggggg ataatctgga tgggctgctg ctgtgctcaa tgtgaactat 3062 ttagatacct fctggaacact taacagtttc tctgaacaat gacfctacatg gggattggtc 3122 ctgtttgtca ttcotcacca taattgcatt gtcatcacta atccttggat cttgctgtat 3182 tgttactcaa attggtaata ggtactgatg gaaatcgcta atggatggat aatcataaca 3242 cttttggtca catgttttct cctgcagcct gaaagttctt aaagaaaaag atatcaaatg 3302 cctgctgcta ccaccctttt aaattgctat ctttagaaaa gcaccggtat gtgttttaga 3362 ttcatttccc tgttttaggg aaatgacagg cagtagtttc agttctgatg gcaaaacaaa 3422 taaaaacatg tttctaaaag ttgtatcttg aaacactggt gttcaacagc tagcagctaa 3482 agtaattcaa cccatgcatt gctagtgtca cagcctttgg ttatgtctag tagctgtttc 3542 tgaagtattt tcatttatct tttgtcaaat ttaaccctgfc ttgaattctc tcctttcctc 3602 aaggagacac ttatgttcaa agtgttgatt ctttgcctta ggtgcataga gagtagacag 3662 tttggagatg gaaaggttag cagtgactta gccatatgtt ctgtgttgga atfctgtgcta 3722 gcagtttgag cactagctct gcgtgcctat gaacfcgaatg ctgcttgtcc cattccattt 3782 tatgtcatgg agaaataatt ccacttggta acacaaaggc taagttaatg ttattttctg 3842 tacagaaatt aaattttact tttagccttt tgtaaacttt tttttttttt ttccaagccg 3902 gtatcagcta ctcaaaacaa ttctcagata ttcatcatta gacaactgga gtttttgctg 3962 gttttgtagc ctactaaaac tgctgaggct gttgaacatt ccacattcaa aagttttgta 4022 gggtggtgga taatggggaa gcttcaatgt ttattttaaa ataaataaaa taagttcttg 4082 acttttctca tgtgtggtta tggtacatca tattggaagg gttatctgtt tacttttgcc 4142 aagactattt tgccagcacc tacacttgtg tgctttaaaa gacaactacc tgggatgtac 4202 cacaaccafca fcgttaatfcgt afctttatfcgg gatggataaa atgtttgtgg tttattggat 4262 aatccctaga tggtgtgtta cgtgtgtaga atataatttt atgatagtaa gaaagcaaaa 4322 ttgaagaaaa taagtttagt attgaatttg agttctgaag tgaattcagg gaatgtctca 4382 cgtttcgggc ttctacccaa agtgtagggc agaaggtgta aaagttgttt gtagtttgac 4442 ttgtttattt tttaagttgc ttattccttt caacagcaac atatcattag ctgtcattct 4502 accattgcag ttctagtgag ttttaacgtc tgcattcaag actgttttaa aagcaacctc 4562 actggacaga gaactgctaa agtcttttcc ttaagatctg agtctttgtt actcagtatc 4622 ttctataata tgcaaatgct tgtctagagg cagaagacct tttgtttggt caagtgtgta 4682 ttttaccaga gtacagggaa ctgatggtcc tacatgtctc ttagtgtagt aagactataa 4742 aatcttttgt acatgcacaa ttcacagtat gtttagatac cacgtgtata atgccccccc 4802 ctcocccagg tagcatgcca ttgatgactt tttgcttagg gccattttat taccagggcc 4862 ttaatattcc taaaaagatg attttttttc atcctttctc ctcttttgat cattgtatct 4922 tgatattaaa aacatgacct tccaatgatt gtagtaaatt aacttctata gttcttttgt 4 982 ctctatatgt attcatatat atgctattgt atagagactt aaaggagaca tggagatgoa 5042 tgcttattct caggttcatt cactaaggtg cttggcagac aaccagtttc taagtgcaga 5102 atgtagttaa gcagcttcat atatgtgcca ggcaatttgt tttgttaaat tttcatctac 5162 ttaaggaaat agggtattgt agcttaggct gatcataccc ttcatttcaa ccttaagctc 5222 tcaacctgca tccatccgac ttgagctatt aagtacttta gttttatcga gtataagtta 5282 acagaaaaag taaattaagc tttgccttta ctattttgaa tttatataca ttctggaaaa 5342 acttagaaac tgttgtatat ttcattagat taaattatat gaaaatgtga ttgtttatag 5402 caaagcctgt gagttgcata caccctaagg aaaactcctt aagtgctcct tgaagagaga 5462 agaaaeaatt ctgggtctgg tctttttaag aacaaagcta gactactgta tgttageaet 5522 gtaeattaat agtctgttgt gaagcttgag eagtttectg catagecttg atccttcacc 5582 gttggcattg aaaatagcag tatccctgat gtacttaaaa cttaaagtca ggttttggta 5642 tatttatttg taagtcttaa tttcctctaa atactatatc tctttagcga gacaacctga 5702 aatttattag cacatttggg tatctcttgc ttggcattat ggccagtgtt aactattcag 5762 tggtgaaaaa attacccctc aagacactgg agtgacccca gatgtgtgta gtaagtggca 5822 tggttcaact gtgtggttaa tgataaatat atgacttagt aggtatgate tggaaagact 5882 tgattgaaag ataafctcagc tgacataagg atgagtgagg agfcggcaaac tggataaaag 5942 agtcaagaga cctgtattcc agtgactcct gttttgttta agcattagca agatctgtct 6002 ggggaaactg gatagggcag ttttcttcca tgtttagttt ttgtctcaac atttggaagc 6062 tattgaaggt tttaaaatgg tgtgtattgt ttttttttgg ggggggggtg gccagaatag 6122 tgggfceatct aataaaactg eeatttaaaa gatcaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaa 6181

<210> 20 <211> 707 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 20

Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly See Gly Ser Lye Ser Ser Gly 15 10 15

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Gly Ala 20 25 30

Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala val Gin 35 40 45

Thr Gin Alã Met LyS Gift lie Lêu Gly Vãl lie Asp LyS LyS Lêu Arg 50 55 60

Asn leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met 65 70 75 80

Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys 85 90 95

Tyr Gin Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg 100 105 110

Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr 115 120 125

Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu 130 135 140

Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp 145 150 155 160

Asp Val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Ser Gly Val Pro lie Leu 165 170 175

Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Val Asp 180 185 190

Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala 195 200 205

Ser Ile His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro Val Cys 210 215 220

Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu lie Val Glu Arg Val Phe Gin 225 230 235 240

Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu 245 250 255

Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Val Glu Asp Gin Val Ala Glu 260 265 270

Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu 275 280 285

Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser 290 295 300

Ser Gly Glu Lys Glu Gin Vai Asp Glu Trp Thr Vai Glu Thr Vai Glu 305 310 315 320

Vai Vai Asm Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Vai 325 330 335

Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro vai Ala Gin Ser Asp Pro Leu vai 340 345 350

Arg Arg Gin Arg vai Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr 355 350 365

Asn Phe Ile Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp 370 375 380

Pro Ala Ile Vai Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp 385 390 395 400

Met Pro Gin Leu Vai Cys Pro Gin Vai His Ser Glu Ser Arg Leu Ala 405 410 415

Gin Ser Asn Gin vai Pro vai Gin Pro Glu Ala Thr Gin vai Pro Leu 420 425 430

Vai Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin 435 440 445

Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro Met Asp Gin 450 455 460 lie Gin Ala Thr lie Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser 465 470 475 480

Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser 485 490 495

Lys Pro Leu His Ser Ser Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin 500 505 510

Ser Met Gin Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Ala Asn 5L5 520 525

Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Ser Gin Tyr Gin Ala Thr Tyr Asn 530 535 540

Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro Kis Gin Val Glu Gin Thr Glu Leu Gin 545 550 555 560

Gin Asp Gin Leu Gin Thr val val Gly Thr Tvr His Glv Ser Gin Asp 565 570 " 575

Gin Pro His Gin Val Pro Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn 580 585 590

Thr Gly Phe Pro Arg Ser Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val 595 600 605

Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg 610 615 620

Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser 625 630 635 640

Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr S®r Gin Ser Gin Phe Thr Ala 645 650 655

Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe 660 665 670

Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg 675 680 685

Gly Gly Pro Pro Area Pro Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Thr Gin 690 ' 695 700

Gin Val Asn 705

< 210 >21 <211> 6141 <212> ADN <213> Mus musculus < 2 2 0 >

<221 > CDS <222> (139) . . (2262) <223 > <400> 21 cccaccgcgc gcgcgcgtag ccgcctgccc gcccgcccgc tgcgcgtttt gtcccgcgtc 60 tctccccgtc cgtctcctga cttgctggtc ttgtccttcc ctcecgcttt tttcctetcc 120 tctcttctcg gtctaaag atg ccc tag gaa acc age cac age gga age gge 171

Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly 15 10 age aaa teg teg gga eeg ccg ecg ccg tec ggt tec tec ggg agt gag 219

Ser Lys Ser Ser Gly Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu 15 20 25 geg geg gee ggg gca get geg ccg get tet cag cat ccg gca acc ggc 267

Ala Ala Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Ala Thr Gly 30 35 40 acc ggc gee gtc cag acc gag gcc atg aag cag att etc gge gta ate 315

Thr Gly Ala Val Gin Thr Glu Ala Met Lye Sin lie Leu Gly Val lie 45 50 55 gac sag aaa ett egg sac ctg gag aag aaa aag ggt aaa ett gat gat 363

Asp Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp 6C 65 70 75 tac cag gaa ega atg aat aaa ggg gaa agg etc aat caa gac cag ctg 411

Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu 80 85 30 gat gcc gta tet aag tac cag gaa gtc aca aat aat ttg gag ttt gca 453

Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala 35 100 105 aag gaa tta cag agg agt ttc atg gca tta agt caa gat att cag aaa 507

Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp He Gin Lys 110 115 120 aca ata aag aag aca gca cgt egg gaa cag ctfc atg aga gaa gaa gca 555

Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala 125 130 135 gaa cag aag ege tta aaa act gta ett gag tta cag tat gta ttg gat 603

Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp 140 ” 145 150 155 aag ctg gga gat gat gat gtg aga aca gat ctg aaa caa ggt ttg agt 651 T .1 res T H R cu» T7a1 Τι ΐ’ΠΤην'· 'ftov'v T.i&n Tire <?.*!»> i'll τ» T an Cta Va iHjrfl mw Ό * j; rw* v*i* 160 165 170 gga gtg cca ata ttg tet gag gag gag ttg tea ttg ctg gat gag ttc 699

Gly Val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe 175 180 185 tac aag etc gta gat cct gag cgt gac atg agt tta agg tta aat gag 747

Tyr Lys Leu Val Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu 190 195 200 cag tat gaa cat gcc tea att cac ttg tgg gat ttg ctg gaa ggg aaa 795

Gin Tyr Glu Hie Ala Ser He His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys 205 210 215 gaa aag cct gtg tgt gga aca acc tat aaa get eta aag gaa att gtt 843

Glu Lys Pro Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu He Val 220 2Ξ5 230 235 gag cgt gtt ttc cag tea aac tac ttt gat age act cac aat cat caa 831

Glu Arg Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin 240 245 250 aat ggg ttg tgt gag gag gaa gag geg get tea geg cec aca gtg gag 333

Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Val Glu 255 260 265 gac cag gta get gaa get gaa cct gag cca geg gaa gaa tac aca gag 987

Asp Gin Val Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu 270 275 280 caa agt gag gtt gaa tea aca gag tat gtc aat agg cag ttc atg gca 1035

Gin Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gin Phe Met Ala 285 290 295 gaa aca cag tte age agt ggt gag aag gag caa gtg gat gag tgg aca L0S3

Glu Thr Gin Phe Ser Ser Gly Glu Lys Gin Gin Val Asp Glu Trp Thr 300 305 310 315 gtt gaa aca gtt gag gtt gta aac tea etc cag cag eaa oet cag get 1131

Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala 320 325 330 geg tee cct tea gtc cca gag ccc cac tet ttg act cca gtg get cag 1179

Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Vai Ala Gin 335 340 345 tea gat cca ett gtg aga agg cag cgt gta caa gat ett atg gca caa 1227

Ser Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala Gin 350 355 360 atg caa ggg ccc tat aat tte ata cag gat tea atg ttg gat ttt gaa 1275

Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe lie Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu 365 370 375 aat cag aeg ett gat act gca att gta tee gca cag cct atg aac cat 1323

Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro 380 385 390 395 acc cag aac atg gat atg cct cag ctg gtt tgc cct cag gtt cat tet 1371

Thr Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Val Cys Pro Girt Val His Ser 400 405 410 gaa tet aga ett gee eaa tet aat caa gtt cct gta caa cca gaa gee 1419

Glu Ser Arg Leu Ala Gin Ser Asn Gin Val Pro Val Gin Pro Glu Ala 415 420 425 aca cag gtt cct ttg gtt tea tee aca agt gag ggg tat aca gca tet 1467

Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser 430 435 440 cag ccc ttg tac cag cca tet cat get aeg gag cag egg ccg cag aaa 1515

Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys 445 450 455 gag cca atg gat cag att cag gca aca ata tet ttg aat aca gac cag 1563

Glu Pro Met Asp Gin. lie Gin Ala Thr lie Ser Leu Asn Thr Asp Gin 460 465 470 475 act aca gca tee tea tee ett cct get get tet cag cct caa gtg tte 1611

Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val Phe 480 485 490 cag get ggg aca agt aaa cct ttg cac age agt gga ate aat gta aat 1659

Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser Gly lie Asn Val Asn 495 500 505 gca get cca tte cag tee atg caa aeg gtg tte aat atg aat get cca 1707

Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe Asn Met. Asn Ala Pro 510 515 520 gtc cct cct get aat gaa cca gaa aeg tta aaa caa cag agt cag tac 1755

Val Pro Pro Ala Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Ser Gin Tyr 525 530 535 cag gee act tat aac cag agt ttt tee agt cag cct cae caa gtg gaa 1803

Gin Ala Thr Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val Glu 540 545 550 555 caa aca gag ctt caa caa gac caa ctg caa acg gtg gtt ggc act tac 1851

Gin Thr Glu Leu Gin Gin Asp Gin Leu Gin Thr Val Val Gly Thr Tyr 560 565 570 cat gga tcc cag gac cag cct cat caa gtg cct ggt aac cac cag caa 1899

His Gly Ser Gin Asp Gin Pro His Gin Val Pro Gly Asn His Gin Gin 575 580 585 ccc cca cag cag aac act ggc ttt cca cgt age agt cag cct tat tac 1947

Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser Ser Gin Pro Tyr Tyr 590 595 600 aac agt cgt ggg gta tet ega gga ggg tet cgt ggt gee aga ggc ttg 1995

Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu 605 610 615 atg aat gga tac agg ggc cct gee aat gga ttt aga gga gga tat gat 2043

Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp 620 €25 630 635 ggt tac ege cct tea ttc teg aac act cca aac agt ggt tat tea cag 2091

Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Gin 640 645 650 tet cag ttc act get ccc egg gac tac tet ggt tac cag egg gat gga 2139

Ser Gin Phe Thr Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly 655 660 665 tat cag cag aat ttc aag ega ggc tet ggg cag agt gga cca egg gga 2187

Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly 670 675 680 gee cca ega ggt cgt gga ggg ccc cca aga eec aac aga ggg atg ceg 2235

Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly Met Pro 685 690 695 caa atg aac act cag caa gtg aat taa tgtgatacac aggattatgt 2282

Gin Met Asn Thr Gin Gin Val Asn 700 705 ttaatcgcoa aaaacacact ggccagtgta ceataatatg ttaccagaag agttattatc 2342 tatttgttct ccctttcagg aaacttattg taaagggact gttttcatcc cataaagaca 2402 ggactgcaat tgtcagcttt acattacctg gatatggaag gaaactattt ttattctgca 2462 tgttctgtcc taagegteat ettgageett gcacacaata caatactcag attcctcacc 2522 ettgettagg agtaaaacat tatataetta tggggtgata atatctccat agttagttga 2582 agtggcttgg aaaaaaaatg caagattgaa tttttgacct tggataaaat ctacaatcag 2642 cccfcagaact attcagtggt aattgacaaa gttaaagcah tttctttgaa aggaagatgg 2702 aaggagtgga gtgtggttta gcaaaaetgc atttcatagc ttteccatta aattggagca 2762 ccgacagatt aaaagcatac caaattatgc atgggtcctt actcacacaa gtgaggctgg 2822 ctaccagcct tgacatagca ctcactagtc ttctggccaa acgactgtga ttaaaacaca 2882 tgtaaattgc tetttagtag tggatactgt gtaagaeaaa gccaaattgc aaatcaggct 2942 ttgattggct cttctggaaa atatgeatea aatatggggg ataatctgga tgggetgctg 3002 ctgtgctcaa tgtgaactat ttagatacct ttggaacact taaoagtttc tctgaacaat 3062 gacttacatg gggattggtc ctgtttgtca ttcctcacca taattgcatt gtcatcacta 3122 atccttggat cttgctgtat tgttactcaa attggtaata ggtactgatg gaaatcgcta 3162 atggatggat aatcataaca cttttggtca catgttttct cctgcagcct gaaagttctt 3242 aaagaaaaag atatcaaatg cctgctgcta ccaccctttt aaattgctat ctttagaaaa 3302 gcaccggtat gtgttttaga ttcatttccc tgttttaggg aaatgacagg cagtagtttc 3362 agttctgatg gcaaaacaaa taaaaacatg tttctaaaag ttgtatcttg aaacaciggt 3422 gttcaacagc tagcagctaa agtaattcaa eccatgcatt gctagtgtca cagcctttgg 3482 ttatgtctag tagctgtttc tgaagtattt tcatttatct tttgtcaaat tt.aacc.ctgt 3542 ttgaattctc tcctttcctc aaggagacac ttatgttcaa agtgttgatt ctttgcctta 3602 ggtgcataga gagtagacag tttggagatg gaaaggttag cagtgactta gccatatgtt 3662 ctgtgttgga atttgtgcta gcagtttgag cactagctct gcgtgccstat ga&ctga&tg 3722 ctgcttgtcc cattccattt tatgtcatgg agaaataatt ccacttggta acacaaaggc 3782 taagttaatg ttattttctg tacagaaatt aaattttact tttagcettt tgtaaacttt 3842 tttttttttt ttccaagceg gtatcagcta ctcaaaacaa ttctcagata ttcatcatta 3902 gacaactgga gtttttgctg gttttgtagc ctactaaaac tgct.gaggct. gtfcgaacatt 3962 ccacattcaa aagttttgta gggtggtgga taatggggaa gcttcaatgt ttattttaaa 4022 ataaataaaa taagttcttg acttttctca tgtgtggtta tggtacatca tattggaagg 4082 gttatctgtt tacttttgcc aagactattt tgccagcacc tacacttgtg tgctttaaaa 4142 gacaactacc fcgggatgtac cacaaccata tgrttaattgt attttattgg gatgg&taaa 4202 atgtttgtgg tttatfcggat aatccctaga tggtgtgtta cgtgtgtaga atataatttt 4262 atgatagtaa gaaagcaaaa ttgaagaaaa taagtttagt attgaatttg agttctgaag 4322 tgaattcagg gaatgtctca cgtttcgggc ttctacccaa agtgtagggc agaaggtgta 4382 aaagttgttt gtagtttgac ttgtttattt tttaagttgc ttattcottt caacagcaac 4442 atatcattag ctgtcattct accattgcag ttctagtgag ttttaacgtc tgcattcaag 4502 actgttttaa aagcaacctc actggacaga gaactgctaa agtcttttcc ttaagatctg 4562 agtctttgtt actcagtatc ttctataata tgcaaatgct tgtctagagg cagaagaoct 4622 tttgtttggt caagtgtgta ttttaccaga gtacagggaa ctgatggtcc tacatgtctc 4682 ttagtgtagt aagactataa aatcttttgt acatgcacaa ttcacagtat gtttagatac 4742 cacgtgtata atgcccecco ctcccccagg tagcatgcca ttgatgactt tttgcttagg 4802 gccattttat taccagggcc ttaatattcc taaaaagatg attttttttc atcctttctc 4862 ctcttttgat cattgtatct tgatattaaa aacatgacct tccaatgatt gtagtaaatt 4922 aacttctata gttcttttgt ctctatatgt attcatatat atgctattgt atagagactt 4982 caaggagaca tggagatgca tgcttattct caggttcatt cactaaggtg cttggcagac 5042 aaccagtttc taagtgcaga atgtagttaa gcagcttcat atatgtgcca ggcaatttgt 5102 tttgttaaat tttcatctac ttaaggaaat agggtattgt agcttaggct gatcataccc 5162 ttcatttcaa ccttaagctc tcaacctgca tccatccgac ttgagctatt aagtacttta 5222 gttttatcga gtataagtta acagaaaaag taaattaagc tttgccttta ctattttgaa 5282 tttatataca ttctggaaaa acttagaaac tgttgtatat ttcattagat taaattatat 5342 gaaaatgtga ttgtttatag caaagcctgt gagttgcata caccctaagg aaaactcctt 5402 aagtgctcct tgaagagaga agaaacaatt ctgggtctgg tctttttaag aacaaagcta 5462 gactactgta tgttagcact gtacattaat agtctgttgt gaagcttgag cagtttootg 5522 catagccttg atccttcacc gttggcattg aaaatagcag tatccctgat gtacttaaaa 5582 cttaaagtca ggttttggta tatttafcttg taagtcttaa tttactctaa atactatatc 5642 tctttagcga gacaacctga aatttattag cacatfctggg tatctcttgc ttggcattat 5702 ggccagtgtt aactattcag tggtgaaaaa attacccatc aagacaatgg agtgacccca 5762 gatgtgtgta gtaagtggca tggttcaact gtgtggttaa tgataaatat atgacttagt 5822 eggtatgatc tgg&aagact tgattgaaag ataattcagc tgacataagg atgagtgagg 5882 agtggcaaac tggataaaag agtcaagaga cctgtattcc agtgactcct gttttgttta 5942 agcattagca agatctgtct ggggaaactg gatagggcag ttttcttcca tgtttagttt 6002 ttgtcfccaac atfctggaagc tattgaaggt tttaaaatgg tgtgtattgt tfcttttttgg 6062 ggggggggtg gccagaatag tgggtcatct aataaaactg ccatttaaaa gatcaaaaaa 6122 aaaaaaaaaa aaaaaaaaa 6141

<210> 22 <211> 707 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 22

Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 1 5 10 15

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Gly Ala 20 25 30

Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Val Gin 35 40 45

Thr Glu Ala Met Lys Gin lie Leu Gly Val lie Asp Lys Lys Leu Arg 50 55 60

Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met 65 70 75 80

Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Vai Ser Lys 85’ 90 95

Tyr Gin Glu Vai Th r Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg 100 105 110

Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr Ile lys Lys Thr 115 120 125

Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu 130 135 140

Lys Thr Vai Leu Glu Leu Gin Tyr vai Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp 145 150 155 160

Asp Vai Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Ser Gly Vai Pro lie Leu 165 170 175

Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Vai Asp 180 185 190

Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala 195 200 205

Ser lie His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro Vai Cys 210 215 220

Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu lie Vai Glu Arg Vai Phe Gin 225 230 235 240

Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu 245 250 255

Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Vai Glu Asp Gin Vai Ala Glu 260 265 270

Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Vai Glu 275 280 285

Ser Thr Glu Tyr Vai Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser 290 295 300

Ser Gly Glu Lys Glu Gin Vai Asp Glu Trp Thr Vai Glu Thr Vai Glu 305 310 315 320

Vai Val Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Vai 325 330 335

Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gin Ser Asp Pro Leu Val 340 345 350

Arg Arg Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr 355 360 365

Asn Phe lie Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp 370 375 380

Pro Ala lie Val Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp 385 390 395 400

Met Pro Gin Leu Val Cys Pro Gin Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala 405 410 415

Gin Ser Asn Gin Val Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu 420 425 430

Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin 435 440 445

Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser 485 490 495

Lys Pro Leu His Ser ser Gly lie Asn val Asn Ala Ala Pro Phe Gin 500 505 510

Ser Met Gin Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Ala Asn 515 520 525

Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Ser Gin Tyr Gin Ala Thr Tyr Asn 530 535 540

Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val Glu Gin Thr Glu Leu Gin 545 550 555 560

Gin Asp Gin Leu Gin Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp 565 570 575

Gin Pro His Gin Val Pro Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn 580 585 590

Thr Gly Phe Pro Arg Ser Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val 595 600 605

Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg 610 615 620

Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser 625 630 635 640

Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Gin Ser Gin Phe Thr Ala 645 650 655

Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe 660 665 670

Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg 675 680 685

Gly Gly Pro Pro Arg Pro Aan Arg Gly Met Pro Gin Met Aan Thr Gin 690 695 700

Gin Val Asn

70S

< 210 > 2 3 <211> 6114 <212> ADN <213> Mus musculus <220>

<221 > CDS <222> (139) . . (2235) <223 > <400> 23 cccaccgcgc gcgcgcgtag ccgcctgccc gcccgcccgc tgcgcgtttt gtcccgcgtc 60 tctccccgte cgtctcctga cttgctggtc ttgtccttcc ctcccgcttt tttcctctcc 120 tctcttctcg gtctaaag at.g ccc teg gee acc age cae age gga age gge 171

Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly 15 10 age aaa teg teg gga ccg ccg ccg ccg tee ggt tec tee ggg agt gag 219

Ser Lys Ser Ser Gly Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu 15 20 25 geg geg gee ggg gca get geg ccg get tet cag cat ccg gea acc gge 267

Ala Ala Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Ala Thr Gly 30 35 40 aec gge gee gte cag ace gag gee atg aag cag att etc gge gta ate 315

Thr Gly Ala Val Gin Thr Glu Ala Met Lys Gin lie Leu Gly Val lie 45 50 55 ijη γ1 aag *3 31 ά !~11 ^ j** pt ^ g1 rj 3 a ^ (¾¢3.3 ϊ_\y '_*' ^ j l— 3 31 h c^t't i* - tj3 ΐ* 363

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Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu SO 85 90 gat gcc gfca tet aag tac cag gaa gtc aca aat aat ttg gag ttt gca 459

Asp Ala Val Sar Lys Tyr Gin Glu Val Ihr Asn Asn Leu Glu Fhe Ala 95 100 105 aag gaa tta cag agg agt ttc atg gca tta agt caa gat att cag aaa 507

Lys Glu Leu Gin Arg Ser Fhe Met Ala Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys 110 115 120 aca ata aag aag aca gca cgt egg gaa cag ett atg aga gaa gaa gca 555

Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp 140 145 150 155 aag ctg gga gat gat gat gtg aga aca gat ctg aaa caa ggt ttg agt 651

Lys Leu Gly Asp Asp Asp Val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Ser 160 165 170 gga gtg cca ata ttg tet gag gag gag ttg tea ttg ctg gat gag ttc 699

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Glu Lys Pro Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu lie Val 220 225 230 235 gag cgt gtt ttc cag tea aac tac ttt gat age act cac aat cat caa 891

Glu Arg Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin 240 245 250 aat ggg ttg tgt gag gag gaa gag geg get tea geg cec aca gtg gag 939

Gin Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gin Phe Met Ala 285 290 295 gaa aca cag ttc age agt ggt gag aag gag caa gtg gat gag tgg aca 1083

Glu Thr Gin Phe Ser Ser Gly Glu Lys Glu Gin Val Asp Glu Trp Thr 300 305 310 315 gtt gaa aca gtt gag gtt gta aac tea etc cag cag caa cct cag get 1131

Vai Glu Thr Vai Glu Vai Vai Asn Ser Leu Gin Gin Gin. Pro Gin Ala 320 325 330 gcg tcc cct tea gtc cca gag ccc cac tet ttg act cca gtg get cag 11.7 9

Ala Ser Pro Ser Vai Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Vai Ala Glu 335 340 345 tea gat cca ctt gtg aga agg cag cgt gta caa gat ctt atg gea caa 1227

Ser Asp Pro Leu Vai Arg Arg Gin Arg Vai Gin Asp Leu Met Ala Gin 350 355 360 atg caa ggg ccc fcat aat ttc ata cag aeg ctt gat cct gee att gta 1275

Met Gin Gly Pro Tyr Asn Pile lie Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val 365 370 375 tec gca cag cct atg aac cct acc cag aac atg gat atg cct cag ctg 1323

Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu 300 385 390 395 gtt tgc cct cag gtt cat tet gaa tet aga ctt gee caa tet aat caa 1371

Val Cys Pro Gin Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin Ser Asn Gin 400 405 410 gtt cct gta caa cca gaa gee aca cag gtt cct ttg gtt tea tec aca 1419

Val Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr 415 420 425 agt gag ggg tat aca gca tet cag ccc ttg tac cag cca tet cat get 1467

Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Girt Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala 430 435 440 aeg gag cag egg ccg cag aaa gag cca atg gat cag att cag gca aca 1515

Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro Met Asp Gin He Gin Ala Thr 445 450 455 ata tet ttg aat aca gac cag act aca gca tee tea tec ctt cct get 1563

He Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala 460 465 470 475 get tet cag cct caa gtg tte cag get ggg aca agt aaa cct ttg cac 1611

Ala Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His 480 485 490 age agt gga ata aat gta aat gca get cca ttc cag tec atg caa aeg 1659

Ser Ser Gly He Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr 495 500 505 gtg ttc aat atg aat get cca gtc cct cct get aat gaa cca gaa aeg 1707

Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Ala Asn Glu Pro Glu Thr 510 515 520 tta aaa caa cag agt cag tac cag gee act tat aac cag agt ttt tec 1755

Leu Lys Gin Gin Ser Gin Tyr Gin Ala Thr Tyr Asn Gin Ser Phe Ser 525 530 535 agt cag cct cac caa gtg gaa caa aca gag ctt caa caa gac caa ctg 1803

Ser Gin Pro Els Gin Val Glu Gin Thr Glu Leu Gin Gin Asp Gin Leu 540 545 550 555 caa aeg gtg gtt ggc act tac cat gga tec cag gac cag cct cat caa 1851

Gin Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp Gin Pro His Gin 560 565 570 gtg cct ggt aac cac. cag caa ccc cca cag cag aac act ggc ttt cca 1899

Val Pro Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro 575 580 585 cgfc age agt eag cct tat tac aac agt cgt ggg gta tet cga gga ggg 1947

Arg Ser Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Vai Ser Arg Gly Gly 590 595 600 tet cgt ggt gee aga ggc ttg atg aat gga tac agg ggc cct gee aat 1995

Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn 605 610 615 gga ttt aga gga gga tat gat ggt tac age act toa ttc teg aac act 2043

Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr 620 625 630 635 cca aac agt ggt tat tea eag tet eag ttc act get ccc egg gac tac 2091

Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Gin Ser Gin Phe Thr Ala Pro Arg Asp Tyr 640 645 ’ 650 tet ggt tac eag cgg gat gga tat cag cag aat ttc aag cga ggc tet 2139

Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser 655 660 665 ggg cag agt gga cca cgg gga gee cca cga ggt cgt gga ggg ccc cca 2187

Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro 670 675 680 aga ccc aac aga ggg atg ccg caa atg aac act cag caa gtg aat taa 2235

Arg Pro Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Thr Gin Gin Val Asn 685 690 695 tgtgatacac aggattatgt ttaatcgcca aaaacacact ggccagtgta ccataatatg 2295 ttaccagaag agttattate tatttgttct cectttcagg aaacttattg taaagggact 2355 gttttcatcc cataaagaca ggactgcaat tgtcagcttt acattacctg gatatggaag 2415 gaaactattt ttattctgca tgttctgtcc taagegteat ettgageett gcacacaata 2475 caatactcag attcctcacc ettgettagg agtaaaacat tatataetta tggggtgata 2535 atatctccat agttagttga agtggcttgg aaaaaaaatg caagattgaa tttttgacct 2595 tggataaaat ctacaatcag ccctagaact attcagtggt aattgacaaa gttaaagcat 2655 tttctttgaa aggaagatgg aaggagtgga gtgtggttta gcaaaactgc atttcatagc 2715 tttcccatta aattggagca ccgacagatt aaaagcatac caaattatgc atgggtcctt 2775 actcacacaa gtgaggctgg ctaccagcct tgacatagca ctcactagtc ttctggccaa 2835 acgactgtga ttaaaacaca tgtaaattgc tetttagtag tggatactgt gtaagacaaa 2895 gccaaattgc aaatcaggct ttgattggct cttctggaaa atatgeatea aatatggggg 2955 ataatctgga tgggctgctg ctgtgctcaa tgtgaactat ttagatacct ttggaacact 3015 taacagtttc tctgaacaat gacttacatg gggattggtc ctgtttgtca ttcctcacca 3075 taattgeatt gtcatcacta atccttggat cttgctgtat tgttactcaa attggtaata 3135 ggtactgatg gaaatcgcta atggatggat aatcataaca cttttggtca catgttttct 3195 ccfcgcagecfc gaaagttctt aaagaaaaag atatcaaatg cctgctgcta ccaccctttt 3255 aaattgetat ctttagaaaa gcaccggtat gtgttttaga ttcatttccc tgttttaggg 3315 aaatgacagg cagtagtttc agttctgatg gcaaaacaaa taaaaacatg tttctaaaag 3375 ttgtatcttg aaacactggt gttcaacagc tagcagctaa agtaattcaa cccatgcatt 3435 gctagtgtca cagcctttgg ttatgtctag tagctgtfctc tgaagtattt tcatttatct 3495 tttgtcaaat ttaaccctgt ttgaattctc tcctttcctc aaggagacac ttatgttcaa 3555 agtgttgatt ctttgcctta ggtgcataga gagtagacag tttggagatg gaaaggttag 3615 cagtgactta gccatatgtt ctgtgttgga atttgtgcta gcagtttgag cactagctct 3675 gcgtgcctat gaacfcgaatg ctgcttgtcc cattccafctt tatgtcatgg agaaataatt 3735 ccacttggta acacaaaggc taagttaatg ttattttctg tacagaaatt aaattttact 3795 tttagccttt tgtaaacttt tttttttttt ttccaagccg gtatcagcta ctcaaaacaa 3355 ttctcagata ttcatcatta gacaactgga gtttttgctg gttttgtagc ctactaaaac 3915 tgctgaggct gttgaacatt ccacattcaa aagttttgta gggtggtgga taatggggaa 3975 gcttcaatgt ttattttaaa ataaataaaa taagttcttg acttttctca tgtgtggtta 4035 tggtacatca tattggaagg gttatctgtt tacttttgcc aagactattt tgccagcacc 4095 tacacttgtg tgctttaaaa gacaactacc tgggatgtac cacaaccata tgttaattgt 4155 attttattgg gatggataaa atgtttgtgg tttattggat aatccctaga tggtgtgtta 4215 cgtgtgtaga atataatttt atgatagtaa gaaagcaaaa ttgaagaaaa taagtttagt 4275 attgaatttg agttctgaag tgaattcagg gaatgtctca cgtttcgggc ttctacccaa 4335 agtgtagggc agaaggtgta aaagttgtfct gtagtttgac ttgtttattt tttaagttgc 4395 ttattccttt caacagcaac atatcattag ctgtcattct accattgcag ttctagtgag 4455 ttttaacgtc tgcattcaag actgttttaa aagcaacctc actggacaga gaactgctaa 4515 agtcttttcc ttaagatctg agtctttgtt actcagtatc ttctataata tgcaaatgct 4575 tgtcfcagagg cagaagaccfc tttgtttggt caagtgtgta ttttaccaga gtacagggaa 4635 ctgatggtcc tacatgtctc ttagtgtagt aagactataa aatcttttgt acatgcacaa 4695 ttcacagtat gtttagatac cacgtgtata atgccccccc ctcccccagg tagcatgcca 4755 ttgatgactt tttgcttagg gccattttat. taccagggcc ttaatattcc taaaaagatg 4315 atttttttte atcetttctc ctcttttgat cattgtatct tgatattaaa aacatgacct 4375 tccaatgatt gtagtaaatt aacttctafca gttctttfcgt ctctatatgt attcatatat 4935 atgctattgt atagagactt caaggagaca tggagatgca tgcttattct caggttcatt 4995 cactaaggtg cttggcagac aaccagtttc taagtgcaga atgtagttaa gcagcttcat 5055 atatgtgcca ggcaatttgt tttgttaaat tttcatctac ttaaggaaat agggtattgt 5115 agcttaggct gatcataccc ttcatttcaa ccttaagctc tcaacctgca tccatccgac 5175 ttgagctatt aagtacttta gttttatcga gtataagtta acagaaaaag taaattaagc 5235 tttgccttta ctattttgaa tttatataca ttotggaaaa acttagaaac tgttgtatat 5295 ttcattagat taaattatat gaaaatgtga ttgtttatag caaagcctgt gagttgcata 5355 caccctaagg aaaactcctt aagtgctcct tgaagagaga agaaacaatt ctgggtctgg 5415 tctttttaag aacaaagcta gactactgta tgttagcact gtacattaat agtctgttgt 5475 gaagcttgag cagtttcctg catagccttg atccttcaoc gttggcattg aaaatagcag 5535 tatccotgat gtacttaaaa cttaaagtca ggttttggta tatttatttg taagtcttaa 5595 ttfccctctaa atactatatc totfctagcga gacaacctga aatttatfeag cacatttggg 5655 tatctcttgc ttggcattat ggccagtgtt aactattcag tggtgaaaaa attacccctc 5715 aagacactgg agtgacccca gatgtgtgta gtaagtggca tggttcaact gtgtggttaa 5775 tgataaatat atgacttagt cggtatgatc tggaaagact tgattgaaag ataattcagc 5335 tgacataagg atgagtgagg agtggcaaac tggataaaag agteaagaga ectgtattcc 5395 agtgactcct gttttgttta agcattagca agatctgtct ggggaaactg gatagggcag 5S55 ttttcttcca tgtttagttt ttgtctcaac atttggaagc tattgaaggt tttaaaatgg 6015 tgtgtattgt ttttttttgg ggggggggtg gccagaatag tgggtcatct aataaaactg 6075 ccatttaaaa gatcaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaa 6114

<210> 24 <211> 698 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 24

Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 15 10 15

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Gly Ala 20 25 30

Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Val Gin 35 40 45

Thr Glu Ala Met Lys Gin lie Leu Gly Val lie Asp Lys Lys Leu Arg 50 55 60

Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met

65 70 75 SO

Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys 85 90 95

Tyr Gin Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg 100 105 110

Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr 115 120 125

Ala Arg Arg Glu Sin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu 130 135 140

Lys Thr val Leu Glu Leu Gin Tyr val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp 145 150 155 160

Asp Val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Ser Gly Val Pro lie Leu 165 170 175

Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Val Asp 180 185 190

Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala 195 200 205

Ser lie His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro Val Cys 210 215 220

Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lya Glu lie Val Glu Arg Val Phe Gin 225 230 235 240

Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr Eis Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu 245 250 255

Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Val Glu Asp Gin Val Ala Glu 260 265 270

Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu 275 280 285

Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser 290 295 300

Ser Gly Glu Lys Glu Gin val Asp Glu Trp Thr val Glu rhr val Glu 305 310 315 320

Val Val Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val 325 330 335

Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gin Ser Asp Pro Leu Val 340 345 350

Arg Arg Gin Arg Val Gin Asp Leu Met. Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr 355 360 365

Asn Phe lie Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser Ala Gin Pro Met 370 375 380

Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp Mat Pro Gin Leu Val Cys Pro Gin Val 385 390 395 400

His Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin Ser Asn Gin Val Pro Val Gin Pro 405 410 415

Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr 420 425 430

Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro 435 440 445

Gin Lys Glu Pro Met Asp Gin He Gin Ala Thr lie Ser Leu Asn Thr 450 455 460

Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin 465 470 475 480

Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser Gly lie Asn 485 490 495

Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe Asn Met Asn 500 505 510

Ala Pro Val Pro Pro Ala Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Ser 515 520 525

Gin Tyr Gin Ala Thr Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin 530 535 540

Val Glu Gin Thr Glu Leu Gin Gin Asp Gin. Leu Gin Thr Val Val Gly 545 550 555 560

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Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser Ser Gin Pro 580 585 590

Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg 595 600 605

Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly 610 615 620

Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr 625 630 635 640

Ser Gin Ser Gin Phe Thr Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg 645 650 655

Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro 660 665 670

Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly 675 680 685

Met Pro Gin Met Asn Thr Gin Gin Val Asn 690 695 < 210 > 2 5 <211> 3548

< 212 > ADN <213> Mus musculus <220>

<221 > CDS <222> (179) . . (2257) <223 > <400> 25 gctggctggc taagtccctc ccgcgccggc tcttgtccca ctaggagcag ctcagagceg 60 cggggacagg gcgaagcggc ctgegceeac ggagcgcacg tctctgttct caacgcagca 120 ccacccttgc ccccctcggc tgeccactcc agacgtccag cggctccgcg cgcgcacg 178 atg ccc teg gee* see age eac age gga age gge age aaa teg teg gga 226

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Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met €5 70 75 80 aat aaa ggg gaa agg cte aat eaa gae eag etg gat gee gta tet aag 466

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Pro Glu Arg Aap Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala 195 200 205 tea att cac ttg tgg gat ttg ctg gaa ggg aaa gaa aag cct gtg tgt 850

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Asn Phe lie Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp 370 375 380 cct gcc att gta tcc gca cag cct atg aac cct acc cag aac atg gat 1378

Pro Ala lie Val Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Ihr Gin Asn Met Asp 385 390 395 400 atg cct cag ctg gtt tgc cct cag gtt cat tct gaa tct aga ctt gcc 1426

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Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro Met Asp Gin 450 455 460 att eag gca aca ata tct ttg aat aca gac cag act aea gca tee tea 1618

He Gin Ala Thr lie Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser 465 470 475 480 tcc ctt cct get get tct cag cat caa gtg ttc cag get ggg aca agt 1666

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Lys Pro Leu His Ser Ser Gly He Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin e rt Λ e λ e “i λ juy v -j ja v tcc atg caa aeg gtg ttc aat atg aat get cca gtc cct cct get aat 1762

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Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val Glu Gin Thr Glu Leu Gin 545 550 555 560 caa gac caa ctg caa aeg gtg gtt ggc act tac cat gga tcc cag gac 1906

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Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg 61C 615 620 ggc cct gcc aat gga ttt aga gga gga tat gat ggt tac ege cct tea 2098

Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser 625 630 635 640 ttc teg sac act cca aac agt ggt tat tea cag tet cag ttc act get 2146

Phe Ssr Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Sar Gin Ser Gin Phe Thr Ala 645 650 655 cce egg gac tae tet ggt tac cag egg gat gga tat cag cag aat ttc 2194

Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe 660 665 670 aag ega ggc tet ggg cag agt gga cca egg gga gee cca ega ggt aat 2242

Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Asn 675 680 685 ata ttg tgg tgg tga tcctagctcc tatgtggagc ttctgttctg geettggaag 2297 lie Leu Trp Trp 690 aactgttcat agtccgcatg taggttacat gttaggaata catttatctt ttccagactt 2357 gttgctaaag attaaatgaa atgctctgtt tctaaaattt catcttgaat ccaaatttta 2417 atttttgaat gactttccct gctgtfcgfcct tcaaaatcag aacattttct ctgcctcaga 2477 aaagcgtttt tccaactgga aatttatttt teaggtetta aaacctgcta aatgttttta 2537 ggaagtacct actgaaactt tttgtaagac atttttggaa egagettgaa catttatata 2597 aatttattac cctctttgat ttttgaaaca tgcatattat atttaggctg agaagccctt 2657 caaatggcca gataagccac agttttagct agagaaccat ttagaattga cataactaat 2717 ctaaacttga acacttttag gaccaatgtt agtgttctaa ataccaacat atttctgatg 2777 tttaaacaga tctcccaaat tcttaggacc ttgatgtcat fcaaaattfcag aatgac&agc 2837 ttaagagget ttagtttcat ttgtttttca agtaatgaaa aataatttct tacatgggca 2897 gatagttaat ttgttgaaca attacaggta gcatttcatg taatctgatg ttctaaatgg 2957 ttetettatt gaaggaggtt aaagaattag gtttcttaca gtttttggct ggccatgaca 3017 tgtataaaat gtatattaag gaggaattat aaagtacttt aatttgaatg ctagtggcaa 3077 ttgatcatta agaaagtact ttaaagcaaa aggttaatgg gtcatctggg aaaaatactg 3137 aagtatcaaa ggtafettgea tgtgaatgtg ggttatgttc ttctatccca ccttgtagea 3197 tattetatga aagttgagtt aaatgatage taaaatatct gtttcaacag catgtaaaaa 3257 gttattttaa ctgttacaag tcattataca attttgaatg ttctgtagtt tctttttaac 3317 agtttaggta caaaggtctg ttttcattct gqrtgcttttt attaattttg atagtatgat 3377 gtcacttcct attgaaatgt aagctagcgt gtaccttaga atgtgagctc catgagagca 3437 ggtaccttgt ttgtcttcac tgctgtatct attcccaacg cctcatgaca gtgcctggca 3497 catagtaggc actcaataaa tacttgttga atgaatg&aa aaaaaaaaaa a 3548

<210> 26 <211> 692 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 26

Met Pro Ser Ala rhr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 15 10 15

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Gly Ala 20 25 30

Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Val Gin 35 40 45

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Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys 35 30 35

Tyr Gin Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg 100 105 110

Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp He Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr 115 120 125

Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu 130 135 140

Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp 145 150 155 160

Asp Val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Ser Gly Val Pro He Leu 165 170 175

Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Val Asp 180 185 190

Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala 195 200 205

Ser He His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro Val Cys 210 215 220

Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu He Val Glu Arg Val Phe Gin 225 230 235 240

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Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Vai Glu Asp Gin Vai Ala Glu 260 265 270

Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Vai Glu 275 280 285

Ser Thr Glu Tyr vai Asn Arg Gin Phe Met. Ala Glu Thr Gin Phe Ser 290 295 300

Ser Gly Glu Lya Glu Gin Vai Asp Glu Trp Thr Vai Glu Thr Vai Glu 305 310 315 320 val vai Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser vai 325 330 335

Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gin Ser Asp Pro Leu Val 340 345 350

Arg Arg Gin Arg val Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr 355 3S0 365

Asn Phe ILe Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp 370 375 380

Pro Ala Ile Val Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp 385 390 395 400

Met Pro Gin Leu Val Cys Pro Gin Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala 405 410 415

Gin Ser Asn Gin Val Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu 420 425 430

Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin 435 440 445

Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro Met Asp Gin 450 455 460

Ile Gin Ala Thr lie Ser Leu Asn Thr Asp Gin The Thr Ala Ser Ser 465 470 475 480

Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin val Phe Gin Ala Gly Thr Ser 485 490 495

Lys Pro Leu Hia Ser Ser Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin 500 505 510

Ser Met Gin Thr val Phe ash Met Asn Ala Pro val Pro Pro Ala ash 515 520 525

Glu Pro Gin Thr Leu Lys Gin Gin Ser Gin Tyr Gin Ala Thr Tyr Asn 530 535 540

Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin. Val Glu Gin Thr Glu Leu Gin 545 550 555 560

Gin Asp Gin Leu Gin Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp 565 570 575

Gin Pro His Gin Val Pro Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn 580 585 590

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Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg 610 615 620

Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser 625 630 * 635 640

Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Gin Ser Gin Phe Thr Ala 645 650 655

Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe 660 665 670

Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Asn 675 680 685 lie Leu Trp Trp 690

<210> 27 <211> 3508 < 212 > ADN <213> Mus musculus <220>

<221 > CDS <222> (139) . . (2217) <223 > <4QG> 27 cccaccgcgc gcgcgcgfcag ccgccfegccc gcccgcccgc fcgegcgfcfefct. gfccccgcgtc €0 tctcccegtc cgtctcctga cttgetggtc ttgtccttcc ctcccgcttt tttcctctcc 120 tctcttetcg gtctaaag atg ccc teg gee acc age cac age gga age gge 171

Met Pro Ser Ala Thr 5er His Ser Gly Ser Gly 15 10 age aaa teg teg gga ceg ceg ecg ceg tee ggt tee tee ggg agt gag 219

Ser Lys Ser Ser Gly Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu 15 20 25 geg geg gee ggg gca get geg ceg get tet cag cat ceg gca aec ggc 267

Ala Ala Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Ala Thr Gly 30 35 40 acc ggc gee gtc cag acc gag gee atg aag cag att etc ggc gta ate 315

Thr Gly Ala Val Gin Thr Glu Ala Met Lys Gin lie Leu Gly Val lie 45 50 55 gae aag aaa ett egg aac ctg gag aag aaa aag ggt aaa ett gat gat 363

Asp Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp 60 65 70 75 tac cag gaa ega atg aat aaa ggg gaa agg etc aat caa gae cag ctg 411

Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu 80 82 90 gat gee gta tet aag tac cag gaa gtc aca aat aat tfcg gag fctt gca 459

Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala 95 100 105 aag gaa tta cag agg agt ttc atg gca tta agt caa gat att cag aaa 507

Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys 110 115 120 aca ata aag aag aca gca cgt egg gaa cag ett atg aga gaa gaa gca 555

Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin. Tyr Val Leu Asp 140 145 150 155 aag ctg gga gat gat gat gtg aga aca gat ctg aaa caa ggt ttg agt 651

Gly Val Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe 175 180 185 tac aag etc gta gat cct gag cgt gae atg agt tta agg tta aat gag 747

Tyr Lys Leu Val Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu L90 195 200 cag tat gaa cat gee tea att cac ttg tgg gat ttg ctg gaa ggg aaa 795

Glu Lys Pro Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu He Val 220 225 230 235 gag cgt gtt ttc cag tea aac tac ttt gat age act cac aat cat caa 891

Glu Arg Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin 240 245 250 aat ggg ttg tgt gag gag gaa gag geg get tea geg ccc aca gtg gag 939

Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala 320 325 330 geg tee cct tea gtc cca gag ccc cae tet ttg act cca gtg get cag 1179

Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gin 335 340 345 tea gat cca ett gtg aga agg cag cgt gta caa gat ett atg gca caa 1227

Ser Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala Gin 350 355 360 atg caa ggg ccc tat aat ttc ata cag gat tea atg ttg gat ttt gaa 1275

Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe lie Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu 365 370 375 aat cag aeg ett gat cct gee att gta tee gca cag cct atg aac cct 1323

Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Val Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro 380 385 390 395 acc cag aac atg gat atg cct cag ctg gtt tge cct cag gtt cat tet 1371

Thr Gin Aan Met Asp Met Pro Gin Leu val Cys Pro Gin val His See 400 405 410 gaa tet aga ett gee caa tet aat caa gtt cct gta caa cca gaa gee 1419

Gin Pro Leu ryr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys 445 450 455 gag cca atg gat cag att cag gca aca ata tet ttg aat aca gac cag 1563

Glu Pro Met Asp Gin lie Gin Ala Thr Tie Ser Leu Asn Thr Asp Gin 46Q 465 470 475 act aca gca tee tea tee ett cct get get tet cag cct caa gtg ttc 1611

Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Sec See Gly lie Asn Val Asn 495 500 505 gca get cca ttc cag tee atg caa aeg gtg ttc aat atg aat get cca 1707

Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro 510 515 520 gtc cct act get aat gaa cca gaa aeg tta aaa caa cag agt cag tac 1755

Fal Pro Pro Ala Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Set Gin Tyr 525 530 535 cag gee act tat aac cag agt. ttt tee agt cag cct cac caa gtg gaa 1803

Gin Ala Thr Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Set Gin Pro His Gin Val Glu 540 545 550 555 caa aca gag ett caa caa gac caa ctg caa aeg gtg gtt ggc act tac 1351

Gin Thr Glu Leu Gin Gin Asp Gin Leu Gin Thr Val Val Gly Thr Tyr 560 565 570 cat gga tee cag gac cag cct cat caa gtg cct ggt aac cac cag caa 1899

Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp 620 625 630 635 ggt tac ege cct tea ttc teg aac act cca aac agt ggt tat tea cag 2091

Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Gin 640 645 650 tet cag ttc act get ccc egg gac tac tet ggt tac c.ag egg gat gga 2139

Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin ser Gly Pro Arg Gly 670 675 680 gee cca ega ggt aat ata ttg tgg tgg tga tcetagctcc tatgtggagc 2237

Ala Pro Arg Gly Asn He Leu Trp Trp 685 690 ttetgttctg geettggaag aactgttcat agtccgcatg taggttacat gttaggaata 2297 catttatctt ttccagactt gttgctaaag attaaatgaa atgctetgtt tetasaattt 2357 catcttgaat ccaaatttta atttttgaat gactttccct gctgttgtct tcaaaatcag 2417 aacattttct ctgcctcaga aaagcgtttt tccaactgga aatttatttt teaggtetta 2477 aaacctgcta aatgttttta ggaagtacct actgaaactt tttgtaagac atttttggaa 2537 egagettgaa catttatata aatttattac cctctttgat ttttgaaaca tgcatattat 2597 atttaggctg agaagccctt caaatggcca gataagccac agttttagct agagaaccat 2657 ttagaattga cataactaat ctaaacttga acacttttag gaccaatgtt agtgttctaa 2717 ataccaacat atttctgatg tttaaacaga tctcccaaat tcttaggacc ttgatgtcat 2777 taaaatttag aafcgacaagc ttaagagget ttagtttcat ttgtttttca agtaatgaaa 2337 aataatttct tacatgggca gatagttaat ttgttgaaca attaeaggta gcatttcatg 2897 taatctgatg tfccfcaaafcgg ttctctfcafct gaaggaggfct aaagaattag gtttcttaca 2957 gtttttggct ggccatgaca tgtataaaat gtatattaag gaggaattat aaagtacttt 3017 aatttgaatg ctagtggcaa ttgatcatta agaaagtaot ttaaagcaaa aggttaafcgg 3077 gtcatctggg aaaaatactg aagtatcaaa ggtatttgca tgtgaatgtg ggttatgttc 3137 ttctatccca octtgtagca tafctctatga aagttgagtt aaatgafcagc taaaatatct 3197 çtttcaacag catg^aaaaa gttatíttaa ctgfctacaag t^cafct^ati-aca afcfcl^-fcgaafcg 3257 ttctgtagtt tctttttaac agtttaggta caaaggtctg ttttcattct ggtgcttttt 3317 attaattttg atagtatgat gtoacttcct attgaaatgt aagctagcgt gtaccttaga 3377 atgtgagctc catgagagca ggtaccttgt ttgtcttcao tgctgtatct attcccaacg 3437 cctcatgaca gtgcctggca catagtaggc actcaataaa tacttgttga atgaatgaaa 3497 aa&aaaaaaa a 3508

<210> 28 <211> 692 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 28

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Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Gly Ala 20 25 30

Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Val Gin 35 40 45

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Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met 65 70 75 80

Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Val Ser Lys 85 90 95

Tyr Gin Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg 100 105 110

Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr 115 120 125

Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu 130 135 140

Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp 145 150 155 160

Asp val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Ser Gly val Pro He Leu 165 170 175

Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Val Asp 180 185 190

Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala 195 200 205

Ser He His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro Val Cys 210 215 " 220

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Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu 245 250 255

Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr val Glu Asp Gin val Ala Glu 260 265 270

Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu 275 280 285

Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser 290 295 300

Ser Gly Glu Lys Glu Gin Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu 305 310 315 320

Val Val Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val 325 330 335

Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gin Ser Asp Pro Leu Val 340 345 350

Arg Arg Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr 355 360 365

Asn Phe He Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp 370 375 * 380

Pro Ala He Val Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp 385 390 395 400

Met. Pro Gin Leu Val Cys Pro Gin Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala 405 410 415

Gin Ser Asn Gin Val Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu 420 425 430

Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin 435 440 445

Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro Met Asp Gin 450 455 460

He Gin Ala Thr Tie Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser 465 470 475 480

Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin val Fhe Gin Ala Gly Thr Ser 485 490 495

Lys Pro Leu His Ser Ser Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin 500 505 510

Ser Met Gin Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Ala Asn 515 520 525

Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Ser Gin Tyr Gin Ala Thr Tyr Asn 530 535 540

Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val Glu Gin Thr Glu Leu Gin 545 550 555 560

Gin Asp Gin Leu Gin Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp 565 570 575

Gin Pro His Gin Val Pro Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn 580 585 590

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Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg 610 615 620

Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser 625 630 635 640

Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Gin Ser Gin Phe Thr Ala 645 650 655

Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Ph· 660 665 670

Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Asn 675 680 685

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<210> 29 <211> 2109 < 212 > ADN <213> Gallus gallus <220>

<221 > CDS <222 > (1) ., (2109) <223 > <400> 29 atg ccc teg get ace aac ggc acc atg geg age age age ggg aag geg 48

Met Pro Ser Ala Thr Asn Gly Thr Met Ala Ser Ser Ser Gly Lys Ala 15 10 15 ggc ccg ggc ggc aac gag cag gcc ccg geg geg gca geg geg gee ccg 96

Gly Pro Gly Gly Asn Glu Gin Ala Pro Ala Ala Ala Ala Ala Ala Pro 20 25 30 cag geg teg ggc ggc age ate aec teg gtt cag aec gag gee atg aag 144

Gin Ala Ser Gly Gly Ser lie Thr Ser Val Gin Thr Glu Ala Met Lys 35 40 45 cag ate ttg gga gtg ate gac aaa aag etc ege aac etc gag aag aaa 192

Gin lie Leu Gly Val lie Asp Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys 50 55 60 aag age aaa ett gac gat tac cag gaa ega atg aac aag ggg gaa cgt 240

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Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu 100 105 110 age caa gat ate cag aaa aca ata aaa aag aeg get ege agg gag cag 384

Ser Gin Asp He Gin Lys Thr lie Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin 115 120 125 ctg atg aga gaa gag get gag cag aag cgt tta aag act gtg eta gag 432

Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr val Leu Glu 130 135 140

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Asn Met Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu Gin Ala Ser Vai His Leu Trp 195 200 205 gac tta ctg gaa ggg aag gaa aaa ccc gtt tgt gga aca acc tat aaa 672

Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro Vai Cys Gly Thr Thr Tyr Lys 210 215 220 gcc ctg aag gag gtt gtt gaa cgt att ctt caa act agt tac ttt gat 720

Ala Leu Lys Glu Vai Vai Glu Arg Ile Leu Gin Thr Ser Tyr Phe Asp 225 230 235 240 age acc cat aac cat cag aac ggg tta tgt gag gaa gaa gag gca gca 768

Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala 245 250 255 ccc aca cct gca gta gaa gac act gta gca gaa get gag cct gat cca 616

Pro Thr Pro Ala Vai Glu Asp Thr Vai Ala Glu Ala Glu Pro Asp Pro 260 265 270 gca gaa gaa ttt act gaa cct act gaa gtt gaa teg act gag tat gta 864

Ala Glu Glu Phe Thr Glu Pro Thr Glu Vai Glu Ser Thr Glu Tyr Vai 275 280 285 aac aga caa ttc atg gca gag act cag ttc age agt. agt gag aag gaa 912

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Gin Val Asp Glu Trp Thr Vai Glu Thr Vai Glu Vai Vai Asn Ser Leu 305 310 315 320 cag caa caa aca caa get aca tct cct cca gtt cct gaa cct cat aca 1008

Gin Gin Gin Thr Gin Ala Thr ser Pro Pro val Pro Glu Pro His Thr 325 330 335 etc act act gtg get caa gca gat cct ctt gtt aga aga cag aga gta 1056

Leu Thr Thr Val Ala Gin Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val 340 345 350 cag gac ctt atg gcc cag atg cag ggt cca tat aac ttc atg cag gac 1104

Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe Met Gin Asp 355 360 365 tct atg ctg gag ttt gag aac cag aca ctt gat cct gcc att gta tct 1152

Ser Met Leu Glu Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala Ile Val Ser 370 375 380 gca cag ccc atg aat cca gca cag aat ttg gac atg ccg caa atg gtc 1200

Ala Gin Pro Met Asn Pro Ala Gin Asn Leu Asp Met Pro Gin Met Val 385 390 395 400 tgc cct cca gtt cat act gag tea aga ctfc gcc cag cct aat caa gtt 1248

Cys Pro Pro Val His Thr Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val 405 410 415 cct gtg caa cca gaa get aeg cag gtt ccc ttg gtt tea tct aca agt 1296

Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser 420 425 430 gag gga tat aca gcc tcc cag ccc atg tat cag cct tct cat ace aca 1344

Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Met Tyr Gin Pro Ser His Thr Thr 435 440 445 gag caa egg cca cag aag gaa tcc att gac cag att cag get tea atg 1392

Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Ser lie Asp Gin He Gin Ala Ser Met 450 455 460 tea ctg aat gca gac cag acc ccg tea tea tea tea ett ccc act gca 1440

Ser Leu Asn Ala Asp Gin Thr Pro Ser Ser Ser Ser Leu Pro Thr Ala 465 470 475 480 tcc cag ccg caa gtt ttc caa get gga tct age aaa cct ttg cat age 1488

Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Ser Ser Lys Pro Leu His Ser 485 490 495 age gga ate aat gtt aat gea get cca ttc caa tec atg caa aca gta 1536

Ser Gly He Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val 500 505 510 ttc aac atg aat gca cct gtt cct cct gtt aat gag cca gaa gcc ett 1584

Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Ala Leu 515 520 525 aag caa caa aat cag tac cag gcc agt tac aac cag agt ttc tcc aat 1632

Lys Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Asn 530 535 540 cag cca cac caa gta gaa caa tea gat ett cag caa gaa cag etc cag 1680

Gin Pro His Gin val Glu Gin Ser Asp Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin 545 550 555 560 aca gtg gtt ggt act tac cat ggt tct ccg gac cag acc cat caa gtg 1728

Thr Val val Gly Thr Tyr His Gly Ser Pro Asp Gin Thr His Gin Val 565 570 575 gca gga aac cac cag caa cct ccc cag cag aat act gga ttt cca ege 1776

Ala Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg 580 585 590 aac agt cag cct tat tac aac agt egg gga gtg tct cgt ggt gga tea 1824

Asn Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser 595 600 605 cgt ggg act cgt gga ttg atg aat ggt tac agg gga cct gca aat gga 1872

Arg Gly Thr Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly 610 615 620 ttt aga gga gga tat gat ggc tac cgt cct tea ttt tcc aac act ccg 1920

Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro 625 630 635 640 aac agt ggt tac aeg cag ccc caa ttt aat get cat ega gat tat tea 1968

Asn Ser Gly Tyr Thr Gin Pro Gin Phe Asn Ala Pro Arg Asp Tyr Ser 645 650 655 aac tac cag egg gat gga tat cag cag aac ttc aaa cgt ggt tct gga 2016

Asn Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly 660 665 670 caa agt ggg cct egg gga get cct ega ggt cgt gga ggg ccc cca aga 2064

Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg 675 680 685 cca aac aga ggg atg cct caa atg aac get cag caa gtg aat taa 2109

Pro Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Ala Gin Gin Val Asn 690 695 700 <210> 30 <211> 702

<212> PRT <213> Gallus gallus <400> 30

Met Pro Ser Ala Thr Asn Gly Thr Met Ala Ser Ser Ser Gly Lys Ala 15 10 15

Gly Pro Gly Gly Asn Glu Gin Ala Pro Ala Ala Ala Ala Ala Ala Pro 20 25 30

Gin Ala Ser Gly Gly Ser xie Thf Ser vsl Gin Thr Gin Ala Met Lys 35 40 45

Gin He Leu Gly Val He Asp Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys 50 55 60

Lys Ser Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg 65 70 75 80

Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala val Ser Lys Tyr Gin Glu val Thr 85 90 95

Asn Asn Leu Glu Fhe Ala Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu 100 105 110

Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr He Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin 115 120 125

Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr val Leu Glu 130 135 140

Leu Sin Phe He Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Ser Asp 145 150 155 160

Leu Lys Gin Gly Ser Asn Gly Val Pro Val Leu Thr Glu Glu Glu Leu 165 170 175

Thr Met Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Val Tyr Pro Glu Arg Asp Met 180 185 190

Asn Met Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu Gin Ala Ser Val His Leu Trp 195 200 205

Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys 210 215 220

Ala Leu lys Glu val· val Glu Arg lie Leu Gin Thr ser Tyr Phe Asp 225 230 235 240

Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Gys Glu Glu Glu Glu Ala Ala 245 25Q 255

Pro Thr Pro Ala Val Glu Asp Thr Val Ala Glu Ala Glu Pro Asp Pro 260 265 270

Ala Glu Glu Phe Thr Glu Pro Thr Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val 275 280 285

Asa Arg Glu Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser Ser Ser Glu Lys Glu 230 235 300

Gin val Asp Glu Trp Thr val Glu Thr val Glu val val Asn ser Leu 305 310 315 320

Gin Gin. Gin Thr Gin Ala Thr Ser Pro Pro Val Pro Glu Pro His Thr 325 330 335

Leu Thr Thr Val Ala Gin Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val 340 345 350

Gin Asp leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe Met Gin Asp 355 360 365

Ser Met leu Glu Phe Glu Asn Gin Thr leu Asp Pro Ala lie Val Ser 370 375 380

Ala Gin Pro Met Asn Pro Ala Gin Asn leu Asp Met Pro Gin Met Val 385 390 395 400

Cys Pro Pro Val His Thr Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Val 405 410 415

Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser 420 425 430

Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Met Tyr Gin Pro Ser His Thr Thr 435 440 445

Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Ser Tie Asp Gin Tie Gin Ala Ser Met 450 455 460

Ser Leu Asn Ala Asp Gin Thr Pro Ser Ser Ser Ser Leu Pro Thr Ala 465 470 475 480

Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Ser Ser Lys Pro Leu His Ser 485 490 495

Ser Gly lie Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val 500 505 510

Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Ala Leru 515 520 525

Lys Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Asn 530 535 540

Gin Pro His Gin Val Glu Gin Ser Asp Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin 545 550 555 560

Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Pro Asp Gin Thr His Gin Val 565 570 575

Ala Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg 580 585 590

Asn Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser 595 600 605

Arg Gly Thr Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly 610 615 620

Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro 625 630 635 640

Asn Ser Gly Tyr Thr Gin Pro Gin Phe Asn Ala Pro Arg Asp Tyr Ser 645 650 655

Asn Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly 660 665 670

Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg 675 680 685

Pro Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Ala Gin Gin Val Asn 690 695 700 <210> 31 <211> 20 <212> ADN <213> Artificial < 2 2 Ο > <223> iniciador Τ3 <400> 31 aattaaccct cactaaaggg 20 <210> 32 < 211> 19 <212> ADN <213> Artificial <220> <223> iniciador Τ7 <400> 32 taatacgact cactatagg 19 <210> 33 <211> 18 < 212 > ADN <213> Artificial <220> <223> iniciador <400> 33 aaggtttgaa tggagtgc 18 <210> 34 <211> 18 <212> ADN <213> Artificial <220> <223> iniciador <400> 34 tgctcctttt caccactg 18 <210> 35 <211> 18

< 212 > ADN <213> Artificial <220> <223> iniciador GAPDH <400> 35 gggctgcttt taactctg 18 <210> 36 <211> 18 <212> ADN <213> Artificial <220> <223> iniciador GAPDH <400> 36 ccaggaaatg agcttgac 18 <210> 37 <211> 27 < 212 > ADN <213> Artificial <220> <223> iniciador <400> 37 catatggcat taagtcaaga tattcag 27 <210> 38 <211> 23 <212> ADN <213> Artificial <220> <223> iniciador <400> 38 ggtacctttg cggcatccct ctg 23 < 210 > 3 9 <211>21 <212> ADN <213> Artificial < 2 2 Ο > <223> iniciador <400> 39 catatgccgt cggccaccag c 21 <210> 40 < 211> 22 <212> ADN <213> Artificial <220> 2 ^ 3 ^ r n íc ι a do r <400> 40 ggtaccattc acttgctgag tg 22 <210> 41 <211> 23 < 212 > ADN <213> Artificial <220> <223> iniciador <400> 41 gagctcatgc cctcggccac cag 23 < 210 > 4 2 <211> 23 <212> ADN <213> Artificial <220> <223> iniciador < 4 0 0 > 4 2 ctcgagttaa ttcacttgct gag 23 <210> 43

< 211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 43

Arg A®n Leu 01¾ Lys Ly® lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin 1 5 ID

<210> 44 <211> 148 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 44

Met Glu Trp Ser Gly Val Ph« lie Phe Lea Leu Ser Gly Thr Ala Gly 15 10 15

Val Leu Ser Glu Val Gin Leu His Gin Phe Gly Ala Glu Leu Val Lys 20 25 30

Pro Gly Ala Ser Val Lys lie Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 40 45

Thr Asp Tyr Asn Met Asp Trp Val Lys Gin Ser His Gly Lys Ser Leu 50 55 60

Glu Trp lie Gly Asp lie Asn Pro Asn Tyr Asp Ser Thr Ser Tyr Asn 65 70 75 80

Gin Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser 85 90 95

Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Arg Ser Tyr Asp Tyr Glu Gly Phe Ala Tyr 115 120 125

Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Lys Thr Thr Pro 130 135 140

Pro Ser Val Tyr 145

<210> 45 <211> 132 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 45

Ala Val Leu Arg Cys Ser Arg Gly Leu Leu Val lie Trp lie Ser Asp 15 10 15

He Gin Leu Thr Gin Ser* Pro Sen Sen Leu Ala Val Thr Ala Grly Glu 20 25 30

Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gin Ser Leu Leu Trp Ser Val 35 40 45

Asn Gin Lys Asn Tyr Leu Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Gin Arg Gin Pro 50 55 60

Pro Lys Leu Leu lie Tyr Gly Ala Ser lie Arg Glu Ser Trp Val Pro

65 70 75 SO

Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr He 85 90 95

Ser Asn Val His Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gin His Asn 100 105 110

His Gly Ser Phe Leu Pro Ser Arg Ser Glu Gin Val Pro Ser Trp Arg 115 120 125

Ser Asn Asn Arg 130

<210> 46 <211> 117 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 46

Arg Thr Thr Ser His Met Asp Ser Asp lie Gin Leu Thr Gin Ser Pro 15 10 15

Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Glu Thr Val Thr lie Thr Cys Arg 20 25 30

Ala Ser Gly Asn lie His Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lye Gin 35 40 45

Gly Lys Ser Pro Gin Leu Leu Val Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Asp 50 55 60

Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gin Tyr Ser

65 70 75 SO

Leu Lys lie Asn Ser Leu Gin Pro Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys 85 90 95

Gin His Phe Trp Ser Thr Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu 100 105 110 lie Lys Gin Ser Asp 115

<210> 47 <211> 94 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 47

Ser Sly Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser 1 S 10 15

Asn Tyr Leu His Trp Tyr Gin Gin Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu 20 25 30

Leu lie Lys Tyr Ala Ser Gin Ser lie Ser Gly lie Pro Ser Arg Phe 35 40 45

Ser Sly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Tie Asa Ser Val 50 55 69

Glu Thr Glu Asp Phe Gly Met Tyr Phe Cys Gin Gin Ser Asn Ser Trp S5 70 75 SO

Pro Tyr Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lye Leu Glu lie Lys Gin 85 30

< 210 > 4 8 <211> 105 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 48

Gly Leu Phe Cys Ser Vai Glu Arg Cys His Tyr Gin Leu Gin. Ser Ser 1 5 10 15

Gin Asn Leu Leu Ser lie Vai Asn Arg Tyr His Tyr Met Ser Gly Asn 20 25 30

Pro Pro Lys Leu Leu Vai Tyr Pro Ala Leu Leu lie Tyr Glu Ala Ser 35 40 45 lie Thr Lys Ser Cys Vai Pro Asp Arg Phe Thr Arg Ser Gly Ser Gly 50 55 60

Thr Asn Phe Thr Leu Thr lie Asn Phe Vai His Ala Asp Asp Leu lie 65 70 75 80

Phe Tyr Tyr Cys Gin His Asn Arg Gly Ser Phe Leu Pro Ser Ser Ser 85 90 95

Vai Gin Vai Pro Arg Arg Arg Ser Asn 100 105

< 210 > 4 9 <211> 100 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 4 9

Asp He Leu Gin Ala Ser Gly Tyr Sen Fhe Thr Gly Tyr Thr Met Asn 15 10 15

Trp Val Lys Gin Ser His Gly Lys Asn Leu Glu Trp lie Gly Leu lie 20 25 30

Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gin Lys Phe Lye Gly Lys 35 40 45

Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu 50 55 60

Leu Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Trp 65 70 75 80

Gly Val Trp Ser Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr 85 90 95

Val Ser Ser Lys 100

<210> 50 <211> 90 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 50

Asp Acer Val Ser He Thr Cys Lys Ala Ser Gin Asn Val Arg Thr Ala 1*5 10 15

Val Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Arg Gin Ser Pro Lys Ala Lea Sis 20 25 30

Tyr Leu Ala Ser Asn Arg Asp Thr Gly Leu Pro Asp Arg Phe Pro Gly 35 40 45

Arg Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn He Thr Asn Val Sirs Ser SO 55 60

Glu Asp Leu Glu Asp Tyr phe Cys Leu Gin His Cys Asn Tyr Pro Asn 65 70 75 80

Glu Phe Arg Gly Cys Thr Lys Val Pro He 85 90

<21G>51 <211> 116 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 51

Leu Gin Glu Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala Ser Val Lys 1 5 10 15

Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Trp Met Gin 20 25 30

Trp Val Lys Gin Arg Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie Gly Ala lie 35 40 45

Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Arg Tyr Thr Gin Lys Phe Lys Gly Lys 50 55 60

Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gin Leu 65 70 75 80

Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly 85 90 95

Glu Tyr Gly Asn Tyr Phe Ala Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr 100 105 110

Val Ser Ser Asn 115

<210> 52 <211> 100 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 52

Thr Ser Asp Ala Ser Leu Gly Glu Arg Val Thr lie Thr Cys Lys Ala 15 10 15

Ser Gin Asp lie Asn Ser Tyr Leu Ser Trp Phe Gin Gin Lys Pro Gly 20 25 30

Lys Ser Pro Lys Thr Leu lie Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly 35 40 45

Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gin Asp Tyr Ser Leu 50 55 60

Thr lie Ser Ser Leu Glu Tyr Glu Asp Met Gly lie Tyr Tyr Cys Leu 65 70 75 80

Gin Tyr Asp Glu Phe Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu 85 90 95 lie Lys Gin Lys 100

<210> 53 <211> 108 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 53

Ala Trp Leu Ser Gin Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn lie Lys 15 10 15

Asp Thr Tyr Met His Trp Val Lys Gin Arg Pro Glu Gin Gly Leu Glu 20 25 30

Trp lie Gly Arg lie Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Asp Pro 35 40 45

Lys Phe Gin Gly Lys Ala Thr lie Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr 50 55 60

Ala Tyr Leu Gin Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr 65 70 75 80

Tyr Cys Ala Arg Pro lie His Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ser Leu Ala Tyr 85 90 95

Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Lys 100 105

<210> 54 <211> 104 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 54

Gin Gin Lvs Pro Gly Gin Pro Pro Lye Lew Law lie Tyr Arg Ala Ser 35 40 45

Aen .leu Gly Ser Sly 11« Pro Ala Ara Ph« Ser Glv Ser Gly Ser Arg 50 55 ” 60

Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ãs» Pro Val Glu Ãla Asp Asp Val Ala 65 70 75 ' 80 17s.r Tyr Tyr Cys Sirs Gin S©r Asn Glu Asp .Pro Gly Arg Ser Glu Val 85 90 ' 95

Val Pro Ser Trp Arg Bar Asn Lys 100

<210> 55 <211> 109 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 55

Pro Arg Ala Ser Leu Gly Val Ser Glu Thr Leu Leu Cys Thr Ser Gly 15 10 15

Phe Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr Met Ser Trp Val Arg Gin Pro Pro Gly 20 25 30

Lys Ala Leu Glu Trp Leu Gly Phe lie Arg Asn Lys Ala Aan Gly Tyr 35 40 45

Thr Thr Glu Tyr Ser Ala Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg 50 55 60

Asp Asn Ser Gin Ser lie Leu Tyr Leu Gin Met Asn Thr Leu Arg Ala 65 70 75 80

Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Ala Asn Trp Ala Phe Asp 85 90 95

Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Lys 100 105 <210> 56 <211> 94

<212> PRT <213> Mus musculus <400> 56

Ser Gly Asp Arg Vai Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser 15 10 15

Asn Tyr Leu His Trp Tyr Gin Gin Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu 20 25 30

Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Gin Ser Zle Ser Gly lie Pro Ser Arg Phe 35 40 45

Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser lie Asn Ser Vai 50 55 60

Glu Thr Glu Asp Phe Gly Met Tyr Phe Cys Gin Gin Ser Asn Ser Trp 65 70 75 80

Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Zle Lys Gin 85 90

<210> 57 <211> 111 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 57

Pro Ala Cys Leu Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser 1 5 10 15

Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr Met Ser Trp Vai Arg Gin Pro Pro 20 25 30

Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu Gly Phe lie Arg Asn Lys Ala Asn Gly 35 40 45

Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala Ser Vai Lys Gly Arg Phe Thr Zle Ser 50 55 60

Arg Asp Asn Ser Gin Ser lie Leu Tyr Leu Gin Met Asn Thr Leu Arg 65 70 75 80

Ala Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Ala Pro Leu Leu Tyr 85 90 95

Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Thr Vai Thr Vai Ser 100 105 110

< 210 > 58 <211> 102 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 58

Arg Leu Pro Phe Tyr Ser Leu Glu Gin Arg Ala Thr lie Ser Tyr Arg 15 10 15

Ala Ser Lys Asn Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Asn 20 25 30

Gin Gin Lys Pro Gly Gin Pro Pro Lys Leu Leu lie Tyr Leu Val Ser 35 40 45

Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly 50 55 60

Thr Asp Phe Thr Leu Asn lie His Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala 65 70 75 80

Thr Tyr Tyr Cys Gin His lie Arg Glu Leu Thr Arg Ser Glu Leu Val 85 90 95

Pro Ser Trp Lys Ser Asn 100

<210> 59 <211> 101 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 59

Vai Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Trp Met His 15 10 15

Trp Vai Lys Gin Arg Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie Gly Met lie 20 25 30

Asp Pro Ser Asn Ser Glu Thr Arg Leu Asn Gin Lys Phe Lys Asp Lys 35 40 45

Ala Thr Leu Asn vai Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr Met Gin Leu 50 55 60

Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Vai Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly 65 70 75 80

Leu Arg His Tyr Trp Tyr Phe Asp Vai Trp Gly Gin Gly Thr Thr Vai 65 90 95

Thr Vai Ser Ser Lys 100

<210> 60 <211> 99 <212> PRT <213> Mus musculus < 4 0 0 > 6 0

Xhr He Leu Trp Arg Glu Gly Bvo Phe Ser Tyr Arg Ala Sec Xys Sec 1 3 ' 10 15

Vel Ser Xhr Ser Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Asn Gin Gin iys Pro 20 25 30

Gly Gin Pro Pro Arg Leu Leu lie Tyr Leu Val Ser Asn Leu Gly Ser 35 40 45

Gly Val Pro Ala Arg Aha Ser Gly Ser Gly Ser Gly Xhr Asp Phe Xhr 50 ' 55 60

Leu Asn lie His Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys 65 70 75 80

Gin His Tie Arg Glu Leu Thr Arg Ser Glu Glu Val Pro Ser Trp Arg 85: 30 95

Ser Asn Lye <210>61

< 211> 58 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 61

Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly 15 10 15

Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Ala Val Glu Asp Gin 20 25 30

Val Pro Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser 35 40 45

Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr val Asn Arg 50 55

<210> 62 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens < 4 0 0 > 62

Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg 15 10 15

<210> 63 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 63

Ser Glu ¥&1 Gita Ssr Thr Gits Tyr Val Asn Arg 1 5 10

DOCUMENTOS REFERIDOS NA DESCRIÇÃO

Esta lista de documentos referidos pelo autor do presente pedido de patente foi elaborada apenas para informação do leitor. Não é parte integrante do documento de patente europeia. Não obstante o cuidado na sua elaboração, ο IEP não assume qualquer responsabilidade por eventuais erros ou omissões.

Documentos de patente referidos na descrição • WO 2010016526 A [0006] • PH 5297 W [0106] • WO 2010016527 A [0006] • JP 2011171364 A [0106]

Documentos de não patente citados na descrição • KARLIN; ALTSCHUL. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 19 93, vol. 87, 2264-2268 [0025] • ALTSCHUL et al. Nucleic Acids Res., 1997, vol. 25, 3389-3402 [0025] • Seikagaku Jikken Koza (Biochemical Experimental Lecture Series) 1, Tanpakushitsu no Kagaku (Protein Chemistry). Kagaku Shushoku to Peptide Gousei. TOKYO KAGAKU DOZIN CO. , LTD, 1981, vol . IV [0028] • Molecular Cloning. SAMBROOK et al. Current Protocols in Molecular Biology. Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989 [0028] • Compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology. AUSUBEL et al. Short Protocols in Molecular Biology. John Wiley & Sons, 1995 [0028]

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Um método para a deteção de cancro pancreático, que compreende medir, numa amostra separada de um indivíduo: (i) a presença ou uma quantidade de um polipéptido tendo uma reatividade de ligação específica a um anticorpo contra uma proteína de CAPRIN-1 via uma reação de antigénio-anticorpo, ou (ii) um anticorpo contra proteína CAPRIN-1, ou (iii) a presença ou uma quantidade de ácido nucleico que codifica a proteína CAPRIN-1, em que a dita proteína CAPRIN-1 consiste numa sequência de aminoãcidos representada por qualquer das SEQ ID Nos de número par: 2 a 30.

2. 0 método de acordo com a reivindicação 1, em que o dito polipéptido é uma proteína CAPRIN-1 consiste numa sequência de aminoãcidos representada por qualquer das SEQ ID NOs de número par: 2 a 30, ou um polipéptido que consistindo numa sequência de aminoãcidos tendo 85-90% ou mais de identidade de sequência com a proteína CAPRIN-1.

3. 0 método de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que o indivíduo é um ser humano ou um cão.

4. 0 método de acordo com a reivindicação 3, em que o indivíduo é um cão e a proteína CAPRIN-1 compreende a sequência de aminoãcidos representada pela SEQ ID NO: 6, 8, 10, 12 ou 14.

5. 0 método de acordo com a reivindicação 3, em que o indivíduo é um ser humano e a proteína CAPRIN-1 compreende a sequência de aminoãcidos representada pela SEQ ID NO: 2 ou 4 .

6. 0 método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, em que a presença ou quantidade do ácido nucleico na amostra é medidas utilizando um polinucleótido que híbrida especificamente com uma sequência parcial que compreende 15-19 ou mais nucleótidos ou 20-30 ou mais nucleótidos na sequência de nucleótidos do ácido nucleico ou uma sequência complementar à mesma.

7. 0 método de acordo com a reivindicação 6, em que o indivíduo é um cão e o polinucleótido híbrida especificamente com uma sequência parcial que compreende 15-19 ou mais nucleótidos ou 20-30 ou mais nucleótidos na sequência de nucleótidos representada pela SEQ ID NO: 5, 7, 9, 11 ou 13 ou uma sequência complementar à mesma.

8. 0 método de acordo com a reivindicação 6, em que o indivíduo é um ser humano e o polinucleótido híbrida especificamente com uma sequência parcial que compreende 15-19 ou mais nucleótidos ou 20-30 ou mais nucleótidos na sequência de nucleótidos representada pela SEQ ID NO: 1 ou 3 ou uma sequência complementar à mesma.

9. 0 método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, em que a presença ou quantidade do polipéptido é determinada medindo o polipéptido contido numa amostra num ensaio imunolõgico.

10. 0 método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, em que a amostra é sangue, soro, plasma sanguíneo, fluido ascítico, efusão pleural, tecidos ou células.

11. 0 método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, em que o anticorpo que é passa por uma reação antigénio-anticorpo com o polipéptido é um anticorpo que se liga à superfície de uma célula de cancro pancreãtico.

12. 0 método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, em que o anticorpo que passa por uma reação antigénio-anticorpo com o polipéptido compreende um anticorpo tendo uma reatividade imunológica com um polipéptido que consiste numa sequência de aminoãcidos que compreende pelo menos 7 a 12 resíduos de aminoãcidos contínuos dentro da região de resíduos de aminoãcidos n° 50 a 98 ou resíduos de aminoãcidos n° 233 a 344 da sequência de aminoãcidos representada pela SEQ IDS NO: 2 a 30 exceto para as SEQ ID NOs: 6 e 18.

13. 0 método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, em que o anticorpo que passa por uma reação antigénio-anticorpo com o polipéptido é um ou mais anticorpos selecionado a partir do grupo que consiste em: um anticorpo que se liga a um polipéptido que compreende a sequência de aminoãcidos representada pela SEQ ID NO: 43; um anticorpo monoclonal que compreende as sequências de aminoãcidos representadas pelas SEQ ID NOs: 44 e 45; um anticorpo monoclonal que compreende as sequências de aminoãcidos representadas pelas SEQ ID NOs: 44 e 46; um anticorpo monoclonal que compreende as sequências de aminoãcidos representadas pelas SEQ ID NOs: 44 e 47; um anticorpo monoclonal que compreende as sequências de aminoãcidos representadas pelas SEQ ID NOs: 44 e 48; um anticorpo monoclonal que compreende as sequências de aminoãcidos representadas pelas SEQ ID NOs: 4 9 e 50; um anticorpo monoclonal que compreende as sequências de aminoãcidos representadas pelas SEQ ID NOs: 51 e 52; um anticorpo monoclonal que compreende as sequências de aminoãcidos representadas pelas SEQ ID NQs: 53 e 54; um anticorpo monoclonal que compreende as sequências de aminoãcidos representadas pelas SEQ ID NOs: 55 e 56; um anticorpo monoclonal que compreende as sequências de aminoãcidos representadas pelas SEQ ID NOs: 57 e 58; e um anticorpo monoclonal que compreende as sequências de aminoácidos representadas pelas SEQ ID NOs: 59 e 60.

14. O método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, que utiliza um reagente ou kit que compreende um ou mais polinucleótidos que hibridam especificamente com uma sequência parcial que compreende 15 a 19 ou mais nucleótidos ou 20 a 30 ou mais nucleótidos na sequência de nucleótidos representadas por quaisquer das SEQ ID NO de número ímpar: 1 a 29 e que codificam uma proteína CAPRIN- 1 ou numa sequência complementar à sequência de nucleótidos.