PT2190469E - Polipéptidos e polinucleótidos, e utilizações dos mesmos como um alvo de fármacos para produzir fármacos e agentes biológicos - Google Patents

Description

DESCRIÇÃO

"POLIPÉPTIDOS E POLINUCLEÓTIDOS, E UTILIZAÇÕES DOS MESMOS COMO UM ALVO DE FÁRMACOS PARA PRODUZIR FÁRMACOS E AGENTES BIOLÓGICOS"

PEDIDOS RELACIONADOS A presente invenção reivindica o beneficio de prioridade de e incorpora por referência em suas totalidades os documentos de pedido provisório dos Estados Unidos com Números de Série: 60/969.865; 60/969.799; 60/969.780, 60/969.806, 60/969.769, e 60/969.788, todos apresentados em 4 de Setembro de 2007.

CAMPO DA INVENÇÃO A presente invenção refere-se à descoberta de certas proteínas que são expressas de forma diferencial em tecidos específicos e a sua utilização como alvos terapêuticos e de diagnóstico. De forma mais específica, a invenção refere-se a uma proteína C10RF32 e suas variantes, que são expressas de forma diferencial por alguns cancros, e portanto são alvos adequados para imunoterapia, terapêutica para o cancro, e desenvolvimento de fármacos. A presente invenção também se refere à descoberta de domínios extracelulares de C10RF32 e suas variantes que são alvos adequados para imunoterapia, terapêutica para o cancro, e desenvolvimento de fármacos.

Além disso, dado que se acredita que as proteínas da presente invenção, com base na sua estrutura de tipo B7, desempenham um papel na co-estimulação imune, a invenção também se refere à utilização destas proteínas, ou a fármacos que modulam estas proteínas (agonistas e antagonistas), como moduladores imunes e para imunoterapia, especialmente para o tratamento de cancro e distúrbios relacionados com o sistema imune tais como cancros e distúrbios autoimunes. Além disso, a invenção refere-se de forma mais específica a anticorpos terapêuticos e de diagnóstico e a terapêuticas e métodos de diagnóstico que usam os mesmos anticorpos e fragmentos de anticorpos que se ligam de forma específica às proteínas da invenção ou a uma porção solúvel ou secretada das mesmas, especialmente ao ectodomínio.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

Os antigénios tumorais posicionam-se idealmente como biomarcadores e alvos de fármacos, e desempenham um papel crítico no desenvolvimento de novas estratégias para agentes de imunoterapia ativa e passiva, que se usam como terapêuticas independentes ou juntamente com terapêuticas convencionais para o cancro. Os antigénios tumorais podem ser classificados como antigénios específicos de tumores (TSA) onde os antigénios se expressam unicamente nas células tumorais e não nos tecidos normais, ou antigénios associados a tumores (TAA) onde os antigénios se sobre-expressam em células tumorais, mas no entanto também estão presentes em níveis baixos nos tecidos normais.

Os TAA e os TSA validam-se como alvos para terapêutica passiva (anticorpos) assim como para imunoterapia ativa usando estratégias para vencer a tolerância imune e estimular o sistema imune. Os epítopos antigénicos que são os alvos destas abordagens terapêuticas estão presentes na superfície celular, sobre-expressos em células tumorais em comparação com as células não tumorais, e são alvos de anticorpos que bloqueiam a atividade funcional, inibem a proliferação celular, ou induzem a morte celular.

Existe um número crescente de antigénios associados a tumores contra os quais anticorpos monoclonais foram submetidos a ensaio ou estão em utilização como tratamento para o cancro. A identificação e caraterização molecular de novos antigénios tumorais expressos por tumores malignos humanos é um campo ativo na imunologia tumoral. Foram usados várias abordagens para identificar antigénios associados a tumores como candidatos alvo para imunoterapia, incluindo abordagens bioinformáticas de alto rendimento, baseadas em genómica e proteómica. A identificação de novos TAA ou TSA expande o espetro de alvos de antigénios tumorais disponível para o reconhecimento imune e proporciona novas moléculas alvo para o desenvolvimento de agentes terapêuticos para imunoterapia passiva, incluindo anticorpos monoclonais, tanto sem modificar como armados. Tais novos antigénios também podem indicar o caminho de vacinas terapêuticas mais eficazes para imunoterapia ativa ou adotiva. A vacinação para o cancro envolve a administração de antigénios tumorais e usa-se para vencer a tolerância imune e induzir a resposta ativa de linfócitos T contra o tumor. A terapêutica de vacinação inclui a utilização de ADN nu, péptidos, proteínas recombinantes, e terapêutica celular completa, onde são usadas as próprias células tumorais do paciente como a fonte da vacina. Com a identificação de antigénios tumorais específicos, as vacinações realizam-se com mais frequência por meio de terapêutica celular dendrítica, na qual as células dendríticas são carregadas com a proteína ou péptido pertinente, ou são trasfetadas com ADN ou ARN vetorial.

As principais aplicações dos anticorpos anti-TAA para o tratamento do cancro são terapêuticas com anticorpos nus, terapêuticas com anticorpos conjugados com fármacos, e terapêuticas de fusão com imunidade celular. Desde a sua descoberta, os anticorpos têm sidos vistos como "balas mágicas" que poderiam fornecer agentes tóxicos, tais como fármacos, toxinas, enzimas e radioisótopos, de forma específica ao local afetado e sem afetar os tecidos normais não alvo. De facto, os anticorpos, e em particular os fragmentos de anticorpo, podem funcionar como veículos de substâncias citotóxicas tais como radioisótopos, fármacos e toxinas. A imunoterapia com tais imunoconjugados é mais eficaz que com os anticorpos nus.

Em contrate ao sucesso avassalador dos anticorpos nus (tais como Rituxan e Campath) e conjugados (tais como Bexxar e Zevalin) no tratamento de tumores malignos hematológicos, somente foram conseguidos sucessos modestos na imunoterapia de tumores sólidos. Uma das limitações principais na aplicação satisfatória da imunoterapia a tumores sólidos é o grande tamanho molecular da imunoglobulina intata que tem como resultado uma semivida sérica prolongada, mas uma má penetração e captação tumoral. De facto, somente uma muito pequena quantidade do anticorpo administrado (tão baixa quanto 0,01 %) alcança o tumor. Além de seu tamanho, os anticorpos encontram outros impedimentos antes de alcançar os seus antigénios alvo expressos sobre a superfície celular dos tumores sólidos. Algumas das barreiras incluem um baixo fluxo sanguíneo nos tumores grandes, permeabilidade do endotélio vascular, elevada pressão do fluido intersticial do estroma tumoral, e expressão antigénica heterogénea.

Com o advento da engenharia de anticorpos, foram gerados fragmentos de anticorpo de baixo peso molecular que exibem uma penetração tumoral melhorada. Tais fragmentos de anticorpo conjugam-se com frequência com moléculas citotóxicas específicas e são concebidos para administrá-las seletivamente às células cancerígenas. Ainda assim, os tumores sólidos continuam a ser um desafio formidável para a terapêutica, inclusive com fragmentos de anticorpo imunoconjugados. A nova vaga de estratégias de otimização envolve a utilização de modificadores biológicos para modular os impedimentos impostos pelos tumores sólidos. Portanto, em combinação com os anticorpos ou seus fragmentos de anticorpo conjugados, estão a ser usados diversos agentes para melhorar o fluxo sanguíneo tumoral, aumentar a permeabilidade vascular, diminuir a pressão do fluido intersticial tumoral por meio da modulação das células de estroma e os componentes da matriz extracelular, regular positivamente a expressão dos antigénios alvo e melhorar a penetração e retenção do agente terapêutico. A imunoterapia com anticorpos representa uma oportunidade entusiasmante para combinar com as modalidades convencionais, tais como quimioterapia, assim como as combinações com diversos agentes biológicos para obter uma atividade sinérgica. De facto, os mAb não conjugados são mais eficazes quando são usados em combinação com outros agentes terapêuticos, incluindo outros anticorpos.

Outro componente da resposta do sistema imune à imunoterapia é a resposta celular, especificamente a resposta de linfócitos T e ativação de linfócitos T citotóxicos (CTL). A eficácia do sistema imune na mediação da regressão tumoral depende da indução das respostas dos linfócitos T especificas a antigénio através da vigilância imune fisiológica, precedida de vacinação, ou seguida de transferência adotiva de linfócitos T. Embora tenha sido identificada uma diversidade de antigénios associados a tumores e tenham sido submetidas a ensaio numerosas estratégias imunoterápicas, são pouco frequentes as respostas clinicas objetivas. As razões disto incluem a incapacidade das abordagens de imunoterapia atuais para gerar respostas eficazes de linfócitos T, a presença de células reguladoras que inibem a resposta dos linfócitos T, e outros mecanismos de escape desenvolvidos pelos tumores, tais como a inativação dos linfócitos T citoliticos através da expressão de moléculas co-estimuladoras negativas. A imunoterapia eficaz para o cancro requererá a utilização de antigénios específicos de tumores apropriados; a otimização da interação entre o péptido antigénico, o APC e o linfócito T; e o bloqueio simultâneo dos mecanismos de regulação negativa que impedem os efeitos imunoterápicos. A ativação dos linfócitos T desempenha um papel principal na consecução de respostas imunes tanto protetoras como patogénicas, e requer a conclusão de uma série de etapas especificas cuidadosamente orquestradas que podem ser impedidas ou interrompidas por meio de qualquer de numerosos eventos críticos. Os linfócitos T naive devem receber dois sinais independentes das células apresentadoras de antigénio (APC) com a finalidade de ativar-se produtivamente. 0 primeiro, o Sinal 1, é específico de antigénio e é produzido quando os recetores antigénicos dos linfócitos T encontram o complexo antigénio-MHC apropriado na APC. Um segundo sinal independente de antigénio (Sinal 2) é fornecido através de uma molécula co-estimuladora de linfócitos T que utiliza seu ligando expresso na APC. Na ausência de um sinal co-estimulador, a ativação dos linfócitos T fica prejudicada ou abortada, o que pode conduzir a um estado sem capacidade de resposta específica de antigénio (conhecido como anergia de linfócitos T) , ou pode ter como resultado a morte apoptótica de linfócitos T.

Os sinais co-estimuladores podem ser estimuladores (co-estimulação positiva) ou inibidores (co-estimulação negativa ou co-inibição). A co-estimulação positiva é requerida para a ativação ótima dos linfócitos T naive, enquanto que a co-estimulação negativa é requerida para a adquisição de tolerância imunológica ao self (ao próprio), assim como para a finalização das funções efetoras dos linfócitos T. Os sinais co-estimuladores, particularmente os sinais co-estimuladores positivos, também desempenham um papel na modulação da atividade dos linfócitos B. Por exemplo, a ativação de linfócitos B e a sobrevivência dos linfócitos B de centros germinais requerem sinais derivados de linfócitos T além da estimulação por meio de antigénio.

Os sinais co-estimuladores tanto positivos como negativos desempenham papéis críticos na regulação das respostas imunes mediadas por células, e as moléculas que medeiam estes sinais provaram ser alvos eficazes para imunomodulação. Com base neste conhecimento, foram desenvolvidas várias abordagens terapêuticas que envolvem ter como alvo as moléculas co-estimuladoras, e que demonstraram ser úteis para a prevenção e o tratamento de cancro e doenças autoimunes, assim como rejeição de transplante alogénico, cada um por meio da ativação, ou a prevenção da inativação, das respostas imunes nos indivíduos com estas patologias.

Os pares de moléculas co-estimuladoras consistem habitualmente em ligandos expressos nas APC e seus recetores aparentados expressos nos linfócitos T. As bem caraterizadas moléculas co-estimuladoras B7/CD28 e CD40/CD40L são críticas na ativação primaria de linfócitos T. Nos últimos anos, foram identificadas várias moléculas co-estimuladoras adicionais, que pertencem à família de genes B7/CD28 ou TNF/TNF-R. Os efeitos dos membros da família co-estimuladora de TNFR com frequência podem ser separados funcional, temporal ou espacialmente dos membros da família CD28 e entre si. A regulação sequencial e transitória dos sinais de ativação/sobrevivência de linfócitos T por meio de diferentes co-estimuladores pode funcionar para permitir a longevidade da resposta enquanto se mantém um controlo restrito da sobrevivência dos linfócitos T. A família B7 consiste em ligandos proteicos de superfície celular relacionados estruturalmente que se ligam a recetores nos linfócitos que regulam as respostas imunes. A interação dos membros da família B7 com seu respetivo recetor co-estimulador, habitualmente um membro da família relacionada com CD28, aumenta as respostas imunes, enquanto que a interação com recetores co-inibidores, tais como CTLA4, atenua as respostas imunes. Os membros da família B7 partilham 20-40 % de identidade de aminoácidos e estão relacionados estruturalmente com os domínios extracelulares que contêm domínios tandem relacionados com os domínios variáveis e constantes de imunoglobulinas.

Existem na atualidade sete membros conhecidos da família: B7,l (CD80), B7,2 (CD86), B7-H1 (PD-Ll), B7-H2 (ICOS-L), B7-DC (PD-L2), B7-H3, e B7-H4, cada um com funções únicas e com frequência sobrepostas. Claramente, cada molécula B7 desenvolveu seu próprio nicho indispensável no sistema imune. A medida que continuam a ser dissecados os nichos dos membros da família B7, seu potencial diagnóstico e terapêutico fica cada vez mais evidente. Numerosos membros da superfamília B7 foram caraterizados inicialmente como moléculas co-estimuladoras de linfócitos T. No entanto, mais recentemente tornou-se evidente que também podem co-inibir as respostas dos linfócitos T. Portanto, os membros da família B7 podem ter efeitos opostos numa resposta imune.

Fundamental para a função normal do sistema imune é a sua capacidade para distinguir entre self (próprio) e não self (próprio), dado que uma falha na mesma poderia provocar o aparecimento de uma doença autoimune. Sabe-se que a maioria dos distúrbios autoimunes envolvem linfócitos T autorreativos e/ou autoanticorpos. Portanto, os agentes que são capazes de inibir ou eliminar os linfócitos autorreativos têm um potencial terapêutico prometedor. Além disso, a utilização de agentes que exibem tal atividade imunossupressora também seria benéfica para inibir as respostas imunes normais a aloantigénios em pacientes que recebem transplantes. Portanto, os novos agentes que sejam capazes de modular sinais co-estimuladores, sem comprometer a capacidade do sistema imune para defender-se contra agentes patogénicos, são enormemente vantajosos para o tratamento e a prevenção de tais patologias. A importância dos membros da família B7 na regulação das respostas imunes a antigénios próprios e aloantigénios foi demonstrada por meio do desenvolvimento de imunodeficiência e doenças autoimunes em ratinhos com mutações nos genes da família B7. Portanto, a manipulação dos sinais enviados pelos ligandos B7 tem mostrado potencial no tratamento de autoimunidade, doenças inflamatórias, e rejeição a transplante. Esta abordagem reside, pelo menos parcialmente, na supressão final de linfócitos T auto ou alorreativos, presumivelmente devido a que na ausência de co-estimulação (que induz genes de sobrevivência celular) os linfócitos T tornam-se altamente suscetíveis à indução da apoptose. A utilização do sistema imune para tratar doenças crónicas é o objetivo principal da imunoterapia. As imunoterapias ativa e passiva mostraram-se como estratégias terapêuticas eficazes. A imunoterapia passiva, que usa anticorpos monoclonais ou proteínas de fusão do- recetor de Fc, atingiu a sua maioridade e tem mostrado um grande sucesso clínico. Aprovou-se um número crescente de tais agentes terapêuticos, ou estão em ensaios clínicos, para evitar a rejeição a aloenxerto ou para tratar doenças autoimunes e cancro. A imunoterapia ativa (isto é, as vacinas) tem sido eficaz contra agentes que normalmente causam doenças infeciosas autolimitantes agudas seguidas de imunidade e tem estado na vanguarda dos esforços para evitar as doenças infeciosas que afetam a humanidade. No entanto, a imunoterapia ativa tem sido muito menos eficaz contra o cancro ou as doenças infeciosas crónicas devido principalmente a que estas desenvolveram estratégias para escapar às respostas imunes normais. Entre estas estão os co-estimuladores negativos da família B7, tais como B7-H1 e B7-H4, que se expressam de forma elevada em certos tumores, e permitem a proteção local contra o ataque mediado por células imunes. A eficácia do sistema imune na mediação da regressão tumoral depende da indução das respostas dos linfócitos T especificas de antigénio através da vigilância imune fisiológica, precedida de vacinação, ou seguido de transferência adotiva de linfócitos T. Embora tenha sido identificada uma diversidade de antigénios associados a tumores e tenham sido submetidas a ensaio numerosas estratégias imunoterápicas, são pouco frequentes as respostas clinicas objetivas. As razões disto incluem a incapacidade das abordagens de imunoterapia atuais para gerar respostas de linfócitos T eficazes, a presença de células reguladoras que inibem a resposta dos linfócitos T, e outros mecanismos de escape que desenvolvem os tumores, tais como a inativação dos linfócitos T citoliticos através da expressão de moléculas co-estimuladoras negativas. A imunoterapia eficaz para o cancro requererá a utilização de antigénios específicos de tumores apropriados; a otimização da interação entre o péptido antigénico, a APC e o linfócito T; e o bloqueio simultâneo dos mecanismos de regulação negativa que impedem os efeitos imunoterápicos.

Os co-estimuladores da família B7 desempenham um papel crítico na ativação e a inibição de respostas imunes antitumorais. Os novos agentes que têm como alvo estas moléculas poderiam encontrar uma utilização significativa na modulação das respostas imunes e o desenvolvimento de imunoterapia para o cancro. Tais agentes poderiam ser administrados juntamente com antigénios específicos de tumores, como adjuvantes que servem para aumentar a resposta imune ao antigénio no paciente. Além disso, tais agentes poderiam encontrar utilização noutros tipos de imunoterapia para o cancro, tais como imunoterapia adotiva, na qual se ampliam as populações de linfócitos T específicos de tumores e controlam-se para atacar e eliminar as células tumorais. Os agentes capazes de aumentar tal resposta antitumoral têm um grande potencial terapêutico e podem ser valiosos na tentativa de superar os obstáculos da imunoterapia tumoral. A imunoterapia tumoral passiva usa a elaborada especificidade ecapacidade litica do sistema imune para ter como alvo antigénios específicos de tumores e tratar doenças malignas com um mínimo de dano para os tecidos normais. Foram usadas várias abordagens para identificar os antigénios associados a tumores como alvos candidatos para a imunoterapia. A identificação de novos antigénios específicos de tumores amplia o espetro de alvos de antigénio tumoral disponíveis para o reconhecimento imune e proporciona novas moléculas alvo para o desenvolvimento de agentes terapêuticos para imunoterapia passiva, incluindo anticorpos monoclonais, tanto sem modificar como armados. Tais novos antigénios também podem indicar o caminho de vacinas terapêuticas mais eficazes para imunoterapia ativa ou adotiva. 0 desenvolvimento clínico do bloqueio da co-estimulação foi conseguido com a aprovação de CTLA4lg (abatacept) para a artrite reumatoide. Esta proteína de fusão solúvel, que atua como inibidor competitivo da via co-estimuladora de B7/CD28, está também em ensaios clínicos para outras doenças imunes tais como psoríase e esclerose múltipla, e para rejeição a transplante. Também foram obtidos resultados prometedores num ensaio clínico em fase II em transplante de rim com belatacept, um CTLA4lg resubmetido a modificação para aumentar a capacidade de ligação a seus ligandos, B7,l e B7,2 (CD80 e CD86, respetivamente). Dois anticorpos monoclonais anti-CTLA4 completamente humanos, Ipilimumab e tremelimumab, anulam a interação inibidora de CTLA4/B7, e estão em fase clínica III para melanoma metastático e outros cancros, assim como para infeção por VIH. Galiximab é um anticorpo monoclonal primatizado que tem como alvo CD80, em fase II para artrite reumatoide, psoríase e linfoma não Hodgkin. É importante indicar que as estratégias que usam agentes individuais para bloquear a co-estimulação com frequência provaram ser insuficientes. Dada a diversidade de moléculas de co-estimulação diferentes, as estratégias futuras podem implicar o bloqueio simultâneo de várias vias selecionadas ou a terapêutica de combinação com fármacos convencionais, tais como imunossupressores para distúrbios relacionados com a imunidade ou fármacos citotóxicos para o cancro.

Apesar do recente progresso na compreensão da biologia do cancro e do tratamento do cancro, assim como de uma melhor compreensão das moléculas envolvidas nas respostas imunes, a taxa de sucesso para a terapêutica de cancro e para o tratamento de doenças autoimunes ainda é baixa. Portanto, existe uma necessidade não satisfeita de novas terapêuticas que possam tratar satisfatoriamente tanto o cancro como as doenças autoimunes.

BREVE SUMARIO DA INVENÇÃO

Um objeto da invenção é proporcionar novas composições terapêuticas e de diagnóstico que contêm pelo menos uma das proteínas C10RF32 ou uma das novas variantes splice que se revelam no presente documento; especificamente as variantes splice de C10RF32, e sequências de ácidos nucleicos que codificam as mesmas ou fragmentos das mesmas especialmente o ectodomínio ou formas secretadas das proteínas e/ou as variáveis splice de C10RF32.

Outro objeto da invenção é usar as ditas proteínas, variantes splice e sequências de ácidos nucleicos como novas alvos para o desenvolvimento de fármacos que se ligam especificamente às proteínas e/ou as variáveis splice de C10RF32, e/ou fármacos que têm uma função agonista ou antagonista em relação à ligação de outros resíduos às proteínas e/ou as variáveis splice de C10RF32.

Ainda outro objeto da invenção é proporcionar fármacos que modulam (de forma agonista ou antagonista) pelo menos uma atividade biológica relacionada com C10RF32. Tais fármacos incluem a titulo de exemplo anticorpos, moléculas pequenas, péptidos, ribozimas, moléculas antisense, ARNsi e similares. Estas moléculas podem ligar-se diretamente ou modular uma atividade provocada pelas proteínas C10RF32 ou o ADN de C10RF32 ou porções ou variantes das mesmas ou podem modular indiretamente uma atividade associada a C10RF32 ou a ligação de moléculas a C10RF32 e porções e variantes das mesmas tais como por meio da modulação da ligação de C10RF32 a sua contrarrecetor ou ligando endógeno. A nova variante splice LOC387597 é um polinucleótido isolado que compreende um ácido nucleico que tem uma sequência de ácido nucleico como se apresenta em qualquer uma de H19011_1_T8 (SEQ ID N° : 45), H19011_1_T9 (SEQ ID N° : 46), ou uma sequência homóloga às mesmas, e o polinucleótido isolado é pelo menos 95, 96, 97, 98 ou 99 % homólogo a qualquer uma de H19911_11_T8 (SEQ ID N° : 45), Hl 9011_1_T9 (SEQ ID N°: 46). A nova variante splice LOC387597 é uma proteína ou

polipéptido isolado que tem uma sequência de aminoácidos como se apresenta em qualquer uma de H19011_1_P8 (SEQ ID N°: 48), H19011 1 P9 (SEQ ID N°: 50) ou uma sequência homóloga às mesmas, e o polipéptido isolado é pelo menos 95, 96, 97, 98 ou 99 % homólogo a qualquer uma de Hl 9 011_1_P8 (SEQ ID N°: 48), H19011_1_P9 (SEQ ID N°: 50).

Outro objeto da invenção é proporcionar moléculas e polipéptidos isolados que compreendem o ectodomínio solúvel (ECD) das proteínas C10RF3 e fragmentos do mesmo assim como sequências de ácido nucleico que codificam o dito ectodomínio solúvel, assim como fragmentos do mesmo e conjugados e a utilização do mesmo como agente terapêutico incluindo sua utilização em imunoterapia (estimulação ou inibição da co-estimulação imune).

De acordo com ainda outras formas de realização da presente invenção existem porções discretas das proteínas C10RF32 que incluem diferentes porções do domínio extracelular que se correspondem aos resíduos 21-186 da sequência H19011_1_P8 (SEQ ID N°: 48), que se correspondem à sequência de aminoácidos representada em SEQ ID N°: 147, ou os resíduos 21-169 da sequência H19011_1_P9 (SEQ ID N° : 50), que se correspondem à sequência de aminoácidos representada em SEQ ID N°: 148, ou os resíduos 1-184 da sequência H19011_1_P8 (SEQ ID N°: 48), que se correspondem à sequência de aminoácidos representada em SEQ ID N° : 299 ou variantes das mesmas que possuem pelo menos 95, 96, 97, 98 ou 99 % de identidade de sequência com as mesmas.

Outro objeto da invenção é proporcionar uma proteína solúvel isolada ou purificada ou sequência de ácido nucleico codificante que tem ou que codifica o domínio extracelular da proteína C10RF3 que opcionalmente pode estar unido direta ou indiretamente a uma proteína ou sequência de ácido nucleico não C10RF3 tal como um domínio ou fragmento de imunoglobulina solúvel.

Outro objeto da invenção é proporcionar uma proteína solúvel isolada ou purificada ou uma sequência de ácido nucleico codificante que tem ou que codifica o domínio celular de qualquer uma das proteínas C10RF32 que opcionalmente pode estar unido direta ou indiretamente a uma proteína ou sequência de ácido nucleico não C10RF32, respetivamente, tal como um domínio ou fragmento de imunoglobulina solúvel.

Outro objeto da invenção é proporcionar moléculas e polipéptidos isolados que compreendem uma porção da borda, porção de cauda ou cabeça, de qualquer uma das novas variantes de C10RF32 da invenção, ou um homólogo ou um fragmento das mesmas assim como sequências de ácido nucleico que codificam a dita porção da borda, porção de cauda ou cabeça, assim como fragmentos dos mesmos e conjugados e a utilização dos mesmos como agentes terapêuticos e/ou para diagnóstico.

Um objeto adicional da invenção é proporcionar moléculas e polipéptidos isolados que compreendem uma ponte, porção da borda, porção de cauda ou cabeça ou um homólogo ou um fragmento dos mesmos assim como sequências de ácido nucleico que codificam a dita porção da borda, porção de cauda ou cabeça, assim como fragmentos dos mesmos e conjugados e a utilização dos mesmos como agentes terapêuticos e/ou para diagnóstico.

Outro objeto da invenção é proporcionar vetores tais como plasmideos e vetores virais recombinantes e células hospedeiras que contêm os vetores que expressam qualquer um do ECD da proteina C10RF32 e variantes do mesmo ou polipéptidos conjugados que contêm qualquer dos anteriores.

Outro objeto da invenção é usar estes vetores tais como plasmideos e vetores virais recombinantes e células hospedeiras que os contêm que expressam qualquer um do ECD da proteina C10RF32 e as variantes do mesmo ou polipéptidos conjugados que contêm qualquer dos anteriores para produzir a dita proteina C10RF32, fragmentos ou variantes da mesma e/ou conjugados que contêm qualquer um dos anteriores.

Outro objeto da invenção é proporcionar composições farmacêuticas ou de diagnóstico que contêm qualquer dos anteriores.

Outro objeto da invenção é proporcionar e usar compostos que são adequados para o tratamento ou a prevenção de cancro, distúrbios autoimunes, rejeição a transplante, doença de enxerto contra o hospedeiro, e/ou para bloquear ou estimular a co-estimulação imune mediada pelo polipéptido C10RF32.

Um objeto especifico da invenção é desenvolver novos anticorpos monoclonais ou policlonais e fragmentos de anticorpo e conjugados que os contêm que se ligam especificamente ao ECD de C10RF32 ou conjugados ou fragmentos do mesmo. Estes anticorpos são potencialmente úteis como agentes terapêuticos e/ou agentes de diagnóstico (métodos de diagnóstico tanto in vitro como in vivo) . Em particular, incluem-se anticorpos e fragmentos que são ativantes imunes ou supressores imunes tais como anticorpos ou fragmentos que têm como alvo células através das atividades ADCC (citotoxicidade celular dependente de anticorpos) ou CDC (citotoxicidade dependente de complemento).

Outro objeto da invenção é proporcionar métodos diagnósticos que incluem a utilização de qualquer dos anteriores incluindo, por meio de exemplo, ensaios imunohistoquimicos, ensaios de radioformação de imagens, formação de imagens in vivo, radioimunoensaio (RIA), ELISA, slot blot, ensaios de ligação competitiva, ensaios de formação de imagens fluorométricos, Western blot, FACS, e similares. Em particular, isto inclui ensaios que usam anticorpos quiméricos ou não humanos ou fragmentos que se ligam especificamente ao ECD de C10RF32 intato, e/ou conjugados, fragmentos ou variantes do mesmo.

Outro objeto da invenção é usar novos anticorpos policlonais ou monoclonais terapeuticamente eficazes contra qualquer um do ECD de C10RF32 e/ou porções ou variantes do mesmo que se expressam diferencialmente incluindo diversos cancros e tumores malignos incluindo tumores não sólidos e sólidos, sarcomas, tumores malignos hematológicos que incluem, mas não se limitam a, leucemia linfocitica aguda, leucemia linfocitica crónica, leucemia mielógena aguda, leucemia mielógena crónica, mieloma múltipla, linfoma de Hodgkin, linfoma não Hodgkin, cancro de mama, próstata, pulmão, ovário, cólon, baço, rim, bexiga, cabeça e pescoço, útero, testículos, estômago, colo uterino, fígado, osso, pele, pâncreas, cérebro e no qual o cancro é não metastático, invasivo ou metastático.

Outro objeto da invenção é usar novos anticorpos policlonais ou monoclonais terapeuticamente eficazes contra fragmentos de C10RF32, conjugados e variantes da mesma para o tratamento de distúrbios não malignos tais como distúrbios imunes que incluem, mas não se limitam a, doenças autoimunes, rejeição a transplante e doença de enxerto contra o hospedeiro.

Um objeto especifico da invenção é usar anticorpos e fragmentos de anticorpo contra o ECD de C10RF32 e/ou variantes, conjugados, ou fragmentos do mesmo e fragmentos e variantes do mesmo para o tratamento e o diagnóstico de cancro de pulmão, particularmente carcinoma de pulmão de pequena célula, no qual este antigénio é expresso diferencialmente.

Outro objeto da invenção é usar anticorpos e fragmentos de anticorpo, e conjugados que os contêm, contra C10RF32 na modulação (potenciação ou inibição) da imunidade incluindo anticorpos que ativam ou suprimem a co-estimulação imune, em particular, a co-estimulação imune relacionada com B7 e são capazes de tratar as aplicações terapêuticas relacionadas, através da estimulação positiva da atividade dos linfócitos T contra as células cancerígenas, e a estimulação negativa da atividade dos linfócitos T para o tratamento de autoimunidade e outros distúrbios imunes.

Outro objeto específico da invenção é produzir anticorpos e fragmentos de anticorpo contra porções discretas das proteínas C10RF32 incluindo diferentes porções do domínio extracelular que se correspondem aos resíduos 21-186 da sequência da proteína C10RF32 contidos na sequência de H19011_1_P8 (SEQ ID N°: 48), que se correspondem à sequência de aminoácidos representada em SEQ ID N° : 147, ou os resíduos 21-169 da sequência da proteína C10RF32 contidos na sequência de H19011 1 P9 (SEQ ID N° : 50), que se correspondem à sequência de aminoácidos representada em SEQ ID N°: 148, ou os resíduos 1-184 da sequência H19011_1_P8 (SEQ ID N°: 48), que se correspondem à sequência de aminoácidos representada em SEQ ID N°: 299.

Um objeto específico da invenção é proporcionar anticorpos policlonais e monoclonais e fragmentos dos mesmos ou um fragmento de ligação a antigénio dos mesmos que compreendem um local de ligação a antigénio que se liga especificamente ao ECD de C10RF32 e/ou variantes e fragmentos do mesmo.

Um objeto específico da invenção é usar tais anticorpos ou fragmentos dos mesmos para o tratamento ou a prevenção de cancro e/ou para a modulação (ativação ou bloqueio) da atividade do alvo no sistema co-estimulador imune.

Um objeto relacionado da invenção é selecionar anticorpos monoclonais e policlonais e fragmentos dos mesmos contra C10RF32 que são adequados para o tratamento ou a prevenção de distúrbios autoimunes, rejeição a transplante, GVHD, e/ou para o bloqueio ou a potenciação da co-estimulação imune mediada pelo polipéptido C10RF32.

Um objeto específico da invenção é usar anticorpos contra qualquer um do ECD de C10RF32 ou um fragmento ou variante do mesmo para o tratamento e o diagnóstico de cancros que incluem por meio de exemplo cancro de pulmão, cancro de ovário, cancro de cólon, assim como outros tumores não sólidos e sólidos, sarcomas, tumores malignos hematológicos que incluem, mas não se limitam a, leucemia linfocítica aguda, leucemia linfocítica crónica, leucemia mielógena aguda, leucemia mielógena crónica, mieloma múltipla, linfoma de Hodgkin, linfoma não Hodgkin, cancro de mama, próstata, baço, rim, bexiga, cabeça e pescoço, útero, testículos, estômago, colo uterino, fígado, osso, pele, pâncreas, cérebro e no qual o cancro é não metastático, invasivo ou metastático.

Com relação ao cancro de pulmão, a doença seleciona-se a partir do grupo que consiste em carcinoma de pulmão de células escamosas, adenocarcinoma de pulmão, carcinoide, cancro de pulmão de pequena célula ou cancro de pulmão de não pequena célula.

Outro objeto da invenção é proporcionar e usar anticorpos e fragmentos de anticorpo contra qualquer um do ECD de C10RF32 e variantes ou fragmentos do mesmo assim como polipéptidos solúveis que contêm o ectodomínio do antigénio C10RF32 ou uma parte do mesmo que são úteis para a modulação imune, incluindo o tratamento de autoimunidade e preferentemente para o tratamento de uma doença autoimune selecionada a partir de doenças autoimunes: Esclerose múltipla; Psoríase; Artrite reumatoide; Lupus eritematoso sistémico; Colite ulcerosa; doença de Crohn; distúrbios imunes associados com rejeição a transplante de enxerto, angeíte linfocítica benigna, lúpus eritematoso, tiroidite de Hashimoto, mixedema primário, doença de Graves, anemia perniciosa, gastrite atrófica autoimune, doença de Addison, diabetes mellitus dependente de insulina, síndrome de Goodpasture, miastenia gravis, pênfigo, oftalmia simpática, uveite autoimune, anemia hemolitica autoimune, trombocitopenia idiopática, cirrose biliar primária, hepatite de ação crónica, colite ulcerosa, sindrome de Sjogren, doença reumática, polimiosite, esclerodermia, doença mista do tecido subjuntivo, reumatismo inflamatório, reumatismo degenerativo, reumatismo extra-articular, doenças do colagénio, poliartrite crónica, psoríase artropática, espondilite anquilosante, artrite reumatoide juvenil, periartrite escapulumeral, panarterite nodosa, esclerodermia sistémica progressiva, artrite urática, dermatomiosite, reumatismo muscular, miosite, miogelose e condrocalcinose.

Outro objeto da invenção é proporcionar e usar compostos que incluem fármacos tais como moléculas pequenas, péptidos, anticorpos e fragmentos que se ligam a C10RF32 assim como ribozimas ou moléculas antissense ou ARNip que têm como alvo a sequência de ácido nucleico de C10RF32 ou fragmentos ou variantes da mesma que são úteis para o tratamento ou a prevenção de cancro, distúrbios autoimunes, rejeição a transplante, GVHD, e/ou para o bloqueio ou a potenciação da co-estimulação imune mediada pelo polipéptido C10RF32.

Outro objeto da invenção é proporcionar e usar compostos que incluem fármacos tais como moléculas pequenas, péptidos, anticorpos e fragmentos que se ligam a C10RF32.

Um objeto preferido é proporcionar anticorpos terapêuticos e diagnósticos e fragmentos e conjugados que os contêm úteis no tratamento ou o diagnóstico de qualquer dos anteriores que se ligam especificamente aos resíduos de aminoácidos 21-186 da sequência da proteína C10RF32 contidos na sequência de H19011_1_P8 (SEQ ID N° : 48), que se correspondem à sequência de aminoácidos representada em SEQ ID N°: 147, ou os resíduos 21-169 da sequência da sequência da proteína C10RF32 contidos na sequência de H19011_1_P9 (SEQ ID N° : 50), que se correspondem à sequência de aminoácidos representada em SEQ ID N°: 149, ou os resíduos 1-184 da sequência H19011_1_P8 (SEQ ID N°: 48), que se correspondem à sequência de aminoácidos representada em SEQ ID N°: 299.

Um objeto preferido também é proporcionar anticorpos e fragmentos dos mesmos que se ligam a C10RF32 e os resíduos específicos identificados anteriormente e fragmentos da mesma, nos quais o anticorpo é um anticorpo quimérico, humanizado, completamente humano e/ou é um anticorpo ou fragmento de anticorpo que tem atividade de CDC ou ADCC nas células alvo.

Um objeto preferido também é proporcionar anticorpos quiméricos e humanos e fragmentos dos mesmos e conjugados que os contêm se unem a C10RF32 e os resíduos específicos identificados anteriormente e fragmentos da mesma.

Outro objeto específico da invenção é proporcionar fragmentos de anticorpo e conjugados que os contêm úteis nas terapêuticas anteriores e métodos diagnósticos relacionados que incluem, mas não se limitam a, os fragmentos Fab, F(ab')2/ Fv ou scFv.

Um objeto da invenção também é unir direta ou indiretamente os anticorpos objeto e seus fragmentos a marcadores ou outros resíduos efetores tais como um marcador detetável, ou a um resíduo efetor tal como uma enzima, uma toxina, um agente terapêutico, ou um agente quimioterápico.

Numa forma de realização preferida, os anticorpos da invenção ou seus fragmentos podem ser unidas direta ou indiretamente a um radioisótopo, um quelante metálico, uma enzima, um composto fluorescente, um composto bioluminescente ou um composto quimiluminescente.

Um objeto da invenção também é proporcionar composições farmacêuticas e de diagnóstico que compreendem uma forma terapêutica ou diagnosticamente eficaz de um anticorpo ou fragmento de anticorpo de acordo com a invenção.

Outro objeto específico da invenção é inibir o crescimento das células que expressam C10RF32 num indivíduo, que compreende: administrar ao dito indivíduo um anticorpo que se liga especificamente a C10RF32.

Outro objeto específico da invenção é proporcionar métodos para o tratamento ou a prevenção de cancro, que compreende administrar a um paciente uma quantidade eficaz de um anticorpo monoclonal se une especificamente a C10RF32.

Um objeto mais preferido da invenção é usar estes anticorpos para o tratamento de cancros selecionados a partir do grupo que consiste em cancro de pulmão, particularmente carcinoma de pequena célula de pulmão, e no qual o cancro de pulmão é não metastático, invasivo ou metastático, no qual preferentemente o anticorpo tem uma região de ligação a antigénio especifica para o domínio extracelular de H19011_1_P8 (SEQ ID N° : 48), H19011_1_P9 (SEQ ID N°: 50).

Outro objeto especifico da invenção é usar parte ou a totalidade do ectodominio de C10RF32 ou suas variantes e conjugados que o contêm para a administração como vacina anticancerigena, para imunoterapia de cancro, que inclui, mas não se limita a, cancro de ovário.

Noutra forma de realização da invenção o cancro seleciona-se a partir do grupo que consiste em tumores não sólidos e sólidos, sarcoma, tumores malignos hematológicos que incluem, mas não se limitam a, leucemia linfocitica aguda, leucemia linfocitica crónica, leucemia mielógena aguda, leucemia mielógena crónica, mieloma múltipla, linfoma de Hodgkin, linfoma não Hodgkin, cancro de pulmão, ovário, mama, próstata, cólon, baço, rim, bexiga, cabeça e pescoço, útero, testículos, estômago, colo uterino, fígado, osso, pele, pâncreas, cérebro e no qual o cancro pode ser não metastático, invasivo ou metastático.

Numa forma de realização preferida as doenças autoimunes incluem Esclerose múltipla; Psoríase; Artrite reumatoide; Lúpus eritematoso sistémico; Colite ulcerosa; doença de Crohn; distúrbios imunes associados com rejeição a transplante de enxerto, angeíte linfocitica benigna, lúpus eritematoso, tiroidite de Hashimoto, mixedema primário, doença de Graves, anemia perniciosa, gastrite atrófica autoimune, doença de Addison, diabetes mellitus dependente de insulina, síndrome de Goodpasture, miastenia gravis, pênfigo, oftalmia simpática, uveíte autoimune, anemia hemolítica autoimune, trombocitopenia idiopática, cirrose biliar primária, hepatite de ação crónica, colite ulcerosa, síndrome de Sjogren, doença reumática, polimiosite, esclerodermia, doença mista do tecido subjuntivo, reumatismo inflamatório, reumatismo degenerativo, reumatismo extra-articular, doenças do colagénio, poliartrite crónica, psoríase artropática, espondilite anquilosante, artrite reumatoide juvenil, periartrite escapulumeral, panarterite nodosa, esclerodermia sistémica progressiva, artrite urática, dermatomiosite, reumatismo muscular, miosite, miogelose e condrocalcinose.

Um objeto especifico da invenção é proporcionar métodos para o tratamento ou a prevenção de rejeição de qualquer transplante de órgão e/ou doença de enxerto contra o hospedeiro, que compreende administrar a um paciente uma quantidade eficaz de um anticorpo. Também é preferido nos métodos anteriores que os anticorpos possuam uma região de ligação a antigénio especifica para o domínio extracelular de H19011_1_P8 (SEQ ID N°: 48), H19011_1_P9 (SEQ ID N° : 50) .

De acordo com a presente invenção, cada um dos seguintes: o ectodomínio de C10RF32 da presente invenção, os anticorpos e fragmentos que se ligam a C10RF32, os compostos que incluem fármacos tais como moléculas pequenas, péptidos, assim como ribozimas ou ARNip ou antissense que têm como alvo a sequência de ácido nucleico de C10RF32 ou fragmentos ou variantes da mesma que são úteis para o tratamento ou a prevenção de cancro, distúrbios autoimunes, rejeição a transplante, GVHD, e/ou para o bloqueio ou a potenciação da co-estimulação imune mediada pelo polipéptido C10RF32, podem ser usados com o bloqueio simultâneo de várias vias co-estimuladoras ou em terapêutica de combinação com fármacos convencionais, tais como imunossupressores ou fármacos citotóxicos para cancro.

Outro objeto da invenção é proporcionar ensaios para detetar a presença da proteína H19011 1 P8 (SEQ ID N°: 48) ou H19011_1_P9 (SEQ ID N° : 50) in vitro ou in vivo numa amostra biológica ou individual que compreendem colocar em contato a amostra com um anticorpo que tem especificidade pelos polipéptidos H19011_1_P8 (SEQ ID N° : 48) ou H19011 1 P9 (SEQ ID N°: 50), ou uma combinação dos mesmos, e detetar a união da proteína H19011_1_P8 (SEQ ID N° : 48) ou H19011_1_P9 (SEQ ID N°: 50) na amostra.

Outro objeto da invenção é proporcionar métodos para detetar uma doença, diagnosticar uma doença, monitorizar o desenvolvimento de uma doença ou a eficácia de um tratamento ou a recaída de uma doença, ou selecionar uma terapêutica para uma doença, que compreendem detetar a expressão de um H19011 1 P8 (SEQ ID N°: 48) ou H19011 1 P9 (SEQ ID N°: 50).

Num objeto relacionado, as doenças detetadas incluirão cancros tais como cancro de pulmão, cancro de ovário, cancro de cólon, assim como outros tumores não sólidos e sólidos, sarcomas, tumores malignos hematológicos que incluem, mas não se limitam a, leucemia linfocítica aguda, leucemia linfocítica crónica, leucemia mielógena aguda, leucemia mielógena crónica, mieloma múltipla, linfoma de Hodgkin, linfoma não Hodgkin, cancro de mama, próstata, baço, rim, bexiga, cabeça e pescoço, útero, testículos, estômago, colo uterino, fígado, osso, pele, pâncreas, cérebro e no qual o cancro é não metastático, invasivo ou metastático.

Com relação ao cancro de pulmão, a doença seleciona-se a partir do grupo que consiste em cancro de pulmão não metastático, invasivo ou metastático; carcinoma de pulmão de células escamosas, adenocarcinoma de pulmão, carcinoide, cancro de pulmão de pequena célula ou cancro de pulmão de não pequena célula; deteção de sobre-expressão em metástase de pulmão (contra o tumor primário); deteção de sobre-expressão em cancro de pulmão, por exemplo cancro de pulmão de não pequena célula, por exemplo adenocarcinoma, cancro de células escamosas ou carcinoide, ou carcinoma de grande célula; identificação de uma metástase de origem desconhecida proveniente de um cancro de pulmão primário; avaliação de um tecido maligno que reside no pulmão que é de origem não pulmonar, que inclui, mas não se limita a: sarcomas osteogénicos e de tecido mole; tumores colorretais, uterinos, de pescoço e corpo uterino; cancros de cabeça e pescoço, mama, testículos e glândulas salivares; melanoma; e tumores de bexiga e rim; distinção entre diferentes tipos de cancro de pulmão, que portanto afeta potencialmente à seleção do tratamento (por exemplo, tumores de pequenas células contra de não pequenas células); análise de dispneia e/ou tosse crónica e/ou hemoptise sem explicar; diagnóstico diferencial da origem de uma efusão pleural; diagnóstico de afeções que têm sintomas, sinais e complicações similares ao cancro de pulmão e onde o diagnóstico diferencial entre estas e o cancro de pulmão é de importância clínica que incluem, mas não se limitam a: causas não malignas de sintomas e sinais de pulmão, que incluem, mas não se limitam a: lesões e infiltrados pulmonares, sibilâncias, estridor, obstrução traqueal, compressão esofágica, disfagia, paralisia do nervo laríngeo recorrente, ronqueira, paralisia do nervo frénico com elevação do hemidiafragma e síndrome de Horner; ou deteção de uma causa de qualquer afeção sugestiva de um tumor maligno que inclui, mas não se limita a, anorexia, caquexia, perda de peso, febre, hipercalcemia, hipofosfatemia, hiponatremia, síndrome de secreção inapropriada de hormona antidiurética, ANP elevado, ACTH elevada, hipopotassemia, hipocratismo digital, síndromes neurológicos-miopáticos e tromboflebite.

Com relação ao cancro de ovário, os compostos da presente invenção podem ser usados no diagnóstico, tratamento ou avaliação do pronóstico de cancro de ovário não metastático, invasivo ou metastático; estágio correspondente e potencial maligno; identificação de uma metástase de origem desconhecida proveniente de um cancro de ovário primário; diagnóstico diferencial entre cistos de ovário benignos e malignos; diagnóstico de uma causa de infertilidade, por exemplo diagnóstico diferencial de diversas causas da mesma; deteção de uma ou mais afeções distintas ao cancro de ovário que podem elevar os níveis em soro dos marcadores relacionados com o ovário, que incluem, mas não se limitam a: cancros de endométrio, colo uterino, tubos de Falópio, pâncreas, mama, pulmão e cólon; afeções não malignas tais como gravidez, endometriose, doença inflamatória pélvica e miomas; diagnóstico de afeções que têm sintomas, sinais e complicações similares ao cancro de ovário e onde o diagnóstico diferencial entre estas e o cancro de ovário é de importância clínica que incluem, mas não se limitam a: causas não malignas de massas pélvicas, que incluem, mas não se limitam a: cistos de ovário benignos (funcionais), miomas, endometriose, neoplasias de ovário benignas e lesões inflamatórias do intestino; determinação de uma causa de qualquer afeção sugestiva de um tumor maligno que inclui, mas não se limita a, anorexia, caquexia, perda de peso, febre, hipercalcemia, dor esquelético ou abdominal, síndrome paraneoplásico, ou ascite.

Noutro objeto relacionado, as doenças detetadas incluirão distúrbios autoimunes e neoplásicos selecionados a partir do grupo que consiste em Esclerose múltipla; Psoríase; Artrite reumatoide; Lúpus eritematoso sistémico; Colite ulcerosa; doença de Crohn; distúrbios imunes associados com rejeição a transplante de enxerto, angeíte linfocítica benigna, lúpus eritematoso, tiroidite de Hashimoto, mixedema primário, doença de Graves, anemia perniciosa, gastrite atrófica autoimune, doença de Addison, diabetes mellitus dependente de insulina, síndrome de Goodpasture, miastenia gravis, pênfigo, oftalmia simpática, uveíte autoimune, anemia hemolítica autoimune, trombocitopenia idiopática, cirrose biliar primária, hepatite de ação crónica, colite ulcerosa, sindrome de Sjogren, doença reumática, polimiosite, esclerodermia, doença mista do tecido subjuntivo, reumatismo inflamatório, reumatismo degenerativo, reumatismo extra-articular, doenças do colagénio, poliartrite crónica, psoríase artropática, espondilite anquilosante, artrite reumatoide juvenil, periartrite escapulumeral, panarterite nodosa, esclerodermia sistémica progressiva, artrite urática, dermatomiosite, reumatismo muscular, miosite, miogelose e condrocalcinose.

Noutro objeto relacionado, as doenças detetadas incluirão rejeição de qualquer transplante de órgão e/ou Doença de enxerto contra o hospedeiro.

Num aspeto relacionado, os ensaios anteriores detetarão as células afetadas pela doença usando o anticorpo que se liga especificamente à proteína Hl 9 011_1_P8 (SEQ ID N°: 48) ou H19011_1_P9 (SEQ ID N°: 50), no qual os ensaios podem ser efetuados in vitro ou in vivo, e incluem RIA, ELISA, ensaios fluorométricos, FACS, slot blot, Western blot, ensaios imunohistoquímicos, ensaios de radioformação de imagens e similares. Em algumas formas de realização, a presente invenção proporciona um método para diagnosticar uma doença num indivíduo, que compreende detetar no indivíduo ou numa amostra obtida a partir do dito indivíduo pelo menos um polipéptido ou polinucleótido selecionado a partir do grupo que consiste em: um polipéptido que compreende uma sequência de aminoácidos como se apresenta em qualquer uma das SEQ ID N° : 147.148 e 299; um oligonucleótido que tem uma sequência de ácido nucleico como se expõe nas SEQ ID N°: 235, 238, 241, 244.

De acordo com uma forma de realização, a deteção da presença do polipéptido ou polinucleótido é indicativa da presença da doença e/ou sua gravidade e/ou seu desenvolvimento. De acordo com outra forma de realização, uma alteração na expressão e/ou no nível do polinucleótido ou polipéptido em comparação com sua expressão e/ou nível num indivíduo saudável ou uma amostra obtida a partir do mesmo é indicativa da presença da doença e/ou sua gravidade e/ou seu desenvolvimento. De acordo com uma forma de realização adicional, uma alteração na expressão e/ou no nível do polinucleótido ou polipéptido em comparação com seu nível e/ou expressão no dito indivíduo ou numa amostra obtida a partir do mesmo num estágio anterior é indicativa do desenvolvimento da doença. De acordo com outra forma de realização adicional, a deteção da presença e/ou a alteração relativa na expressão e/ou no nível do polinucleótido ou polipéptido é útil para selecionar um tratamento e/ou monitorizar um tratamento da doença.

De acordo com uma forma de realização, a deteção de um polinucleótido da invenção compreende utilizar um par de iniciadores, que compreende um par de oligonucleótidos isolados capazes de hibridar especificamente pelo menos uma porção de um polinucleótido que tem uma sequência de ácido nucleico como se apresenta nas SEQ ID N° : 235, 238, 241, 244 ou polinucleótidos homólogos às mesmas.

De acordo com outra forma de realização, a deteção de um polinucleótido da invenção compreende utilizar um par de iniciadores, que compreende um par de oligonucleótidos isolados como se apresenta nas SEQ ID N° : 233-234, 236-237.239-240.242-243.

Noutra forma de realização, a invenção inclui um polipéptido do ectodomínio de C10RF32 isolado, ou um fragmento ou conjugado do mesmo.

Noutra forma de realização, a invenção inclui qualquer dos polipéptidos anteriores, que compreende uma sequência de resíduos de aminoácido que tem pelo menos 95, 96, 97, 98 ou 99 % de identidade de sequência com os resíduos de aminoácido 21-186 de H19011_1_P8 (SEQ ID N° : 48), que se correspondem à sequência de aminoácidos representada em SEQ ID N° : 147, ou os resíduos 21-169 de H19011_1_P9 (SEQ ID N° : 50), que se correspondem à sequência de aminoácidos representada em SEQ ID N° : 148, ou os resíduos 1-184 a sequência H19011_1_P8 (SEQ ID N°: 48), que se correspondem à sequência de aminoácidos representada em SEQ ID N°: 299.

Noutra forma de realização, a invenção inclui qualquer dos polipéptidos anteriores, que compreende o domínio extracelular de H19011_1_P8 (SEQ ID N°: 48) ou H19011_1_P9 (SEQ ID N°: 50).

Noutra forma de realização, a invenção inclui qualquer dos polipéptidos anteriores, unido a um resíduo detetável ou terapêutico.

Noutra forma de realização, a invenção inclui qualquer das sequências de ácido nucleico anteriores que codificam qualquer um dos polipéptidos do ectodomínio de C20RF32 e conjugados que os contêm.

Noutra forma de realização, a invenção inclui um vetor de expressão que contém qualquer das sequências de ácido nucleico anteriores.

Noutra forma de realização, a invenção inclui uma célula hospedeira que compreende o vetor de expressão anterior ou um vírus que contém uma sequência de ácido nucleico que codifica o polipéptido do ectodomínio de CIORF32, ou um fragmento ou conjugado do mesmo, no qual a célula expressa o polipéptido codificado pelo segmento de ADN.

Noutra forma de realização, a invenção inclui um método de produção de qualquer um dos polipéptidos do ectodomínio de CIORF32, ou um fragmento ou conjugado do mesmo, que compreende cultivar a célula hospedeira anterior, no qual a célula expressa o polipéptido codificado pelo segmento de ADN ou ácido nucleico e recuperar o dito polipéptido.

Noutra forma de realização, a invenção inclui qualquer ectodomínio de C10RF32 solúvel isolado anterior na qual o dito polipéptido bloqueia ou inibe a interação de H19011_1_P8 (SEQ ID N° : 48), H19011_1_P9 (SEQ ID N° : 50), ou um fragmento ou variante das mesmas com uma contraparte funcional correspondente.

Noutra forma de realização, a invenção inclui os ectodomínios C10RF32 solúveis isolados anteriores, na qual o dito polipéptido substitui ou aumenta a interação de Hl 9 011_1_P8 (SEQ ID N° : 48), H19011_1_P9 (SEQ ID N° : 50), ou um fragmento ou variante ou conjugado das mesmas com uma contraparte funcional correspondente.

Noutra forma de realização, a invenção inclui uma proteína de fusão que compreende qualquer ectodomínio de C10RF32 solúvel isolado anterior unido a uma sequência de proteína não C10RF32, correspondentemente.

Noutra forma de realização, a invenção inclui qualquer das proteínas de fusão anteriores, nas quais a proteína não C10RF32 é pelo menos uma porção de uma molécula de imunoglobulina.

Noutra forma de realização, a invenção inclui qualquer das proteínas de fusão anteriores, nas quais um resíduo de óxido de polialquilo tal como polietileno glicol está unido ao polipéptido.

Noutra forma de realização, a invenção inclui qualquer das proteínas de fusão anteriores, nas quais a região constante da cadeia pesada da imunoglobulina é um fragmento Fc.

Noutra forma de realização, a invenção inclui qualquer uma das sequências de proteínas dos ECD de C10RF32 fusionados a Fc de ratinho, como se apresenta em qualquer uma das sequências de aminoácidos que se representam em SEQ ID N°: 105, ou as sequências de ácido nucleico que codificam os ECD de C10RF32 fusionados a Fc de ratinho. A invenção inclui além disso as sequências de ácido nucleico que codificam os ECD de C10RF32 fusionados a Fc de ratinho, como se apresenta em qualquer uma das sequências de ácido nucleico representadas em SEQ ID N°: 99.

Noutra forma de realização, a invenção inclui qualquer das proteínas de fusão anteriores nas quais a região constante da cadeia pesada da imunoglobulina é um isotipo selecionado a partir do grupo que consiste numa IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgE, IgA e IgD.

Noutra forma de realização, a invenção inclui qualquer das proteínas de fusão anteriores, nas quais o polipéptido está fusionado a um domínio VASP.

Noutra forma de realização, a invenção inclui qualquer das proteínas de fusão anteriores, nas quais a proteína de fusão modula a ativação de linfócitos.

Noutra forma de realização, a invenção inclui uma composição farmacêutica que compreende qualquer das sequências de polinucleótidos anteriores e que compreende ainda um diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável.

Noutra forma de realização, a invenção inclui uma composição farmacêutica que compreende o vetor anterior e que compreende ainda um diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável.

Noutra forma de realização, a invenção inclui uma composição farmacêutica que compreende a célula hospedeira anterior e que compreende ainda um diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável.

Noutra forma de realização, a invenção inclui uma composição farmacêutica que compreende qualquer dos ectodomínios de C10RF32 anteriores e que compreende ainda um diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável.

Noutra forma de realização, a invenção inclui uma composição farmacêutica que compreende qualquer dos polipéptidos anteriores e que compreende ainda um diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável.

Noutra forma de realização, a invenção inclui uma composição farmacêutica que compreende a proteína de fusão anterior e que compreende ainda um diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável.

Noutra forma de realização, a invenção inclui um método para o tratamento ou a prevenção de cancro, que compreende administrar a um indivíduo em necessidade do mesmo uma composição farmacêutica que compreende: uma molécula solúvel que tem o domínio extracelular do polipéptido C10RF32, ou um fragmento ou conjugado do mesmo; ou um polipéptido, que compreende uma sequência de resíduos de aminoácido que tem pelo menos 95, 96, 97, 98 ou 99 % de identidade de sequência com os resíduos de aminoácido 21-186 de Hl9011_l_P8 (SEQ ID N° : 48), que se correspondem à sequência de aminoácidos representada em SEQ ID N°: 147, ou os resíduos 21-169 de H19011_1_P9 (SEQ ID N° : 50), que se correspondem à sequência de aminoácidos representada em SEQ ID N°: 148, ou os resíduos 1-184 da sequência H19011_1_P8 (SEQ ID N°: 48), que se correspondem à sequência de aminoácidos representada em SEQ ID N°: 299 ou uma sequência de ácido nucleico que codifica os mesmos.

Noutra forma de realização, a invenção inclui o método anterior, no qual o cancro é selecionado a partir de um grupo que consiste em tumores malignos hematológicos tais como leucemia linfocítica aguda, leucemia linfocítica crónica, leucemia mielógena aguda, leucemia mielógena crónica, mieloma múltipla, linfoma de Hodgkin, linfoma não Hodgkin, e tumores moles ou sólidos tais como cancro de mama, próstata, pulmão, ovário, cólon, baço, rim, bexiga, cabeça e pescoço, útero, testículos, estômago, colo uterino, fígado, osso, pele, pâncreas, cérebro e no qual o cancro é não metastático, invasivo ou metastático.

Noutra forma de realização, a invenção inclui o método anterior no qual o cancro é selecionado a partir do grupo que consiste em cancro de pulmão, cancro de ovário ou cancro de cólon, e no qual o cancro de pulmão, o cancro de ovário ou o cancro de cólon é não metastático, invasivo ou metastático.

Noutra forma de realização, a invenção inclui um método para o tratamento ou a prevenção de afeções relacionadas com a imunidade, tais como doenças autoimunes ou rejeição a transplante, que compreende administrar a um indivíduo em necessidade do mesmo uma composição farmacêutica que compreende: uma molécula solúvel que tem o domínio extracelular do polipéptido C10RF32, ou um fragmento ou conjugado do mesmo; ou um polipéptido, que compreende uma sequência de resíduos de aminoácido que tem pelo menos 95, 96, 97, 98 ou 99 % de identidade de sequência com os resíduos de aminoácido 21-186 de H19011_1_P8 (SEQ ID N° : 48), que se correspondem à sequência de aminoácidos representada em SEQ ID N°: 147, ou os resíduos 21-169 de H19011_1_P9 (SEQ ID N°: 50), que se correspondem à sequência de aminoácidos representada em SEQ ID N°: 148, ou os resíduos 1-184 da sequência H19011_1_P8 (SEQ ID N°: 48), que se correspondem à sequência de aminoácidos representada em SEQ ID N° : 299, ou uma sequência de ácido nucleico que codifica os mesmos.

Noutra forma de realização, a invenção inclui o método anterior, no qual as doenças autoimunes são selecionadas a partir de um grupo que consiste em esclerose múltipla; psoríase; artrite reumatoide; lúpus eritematoso sistémico; colite ulcerosa; doença de Crohn; distúrbios imunes associados com rejeição a transplante de enxerto; angeíte linfocítica benigna, lúpus eritematoso, tiroidite de Hashimoto, mixedema primário, doença de Graves, anemia perniciosa, gastrite atrófica autoimune, doença de Addison, diabetes mellitus dependente de insulina, síndrome de Goodpasture, miastenia gravis, pênfigo, oftalmia simpática, uveíte autoimune, anemia hemolítica autoimune, trombocitopenia idiopática, cirrose biliar primária, hepatite de ação crónica, colite ulcerosa, sindrome de Sjogren, doença reumática, polimiosite, esclerodermia, doença mista do tecido subjuntivo, reumatismo inflamatório, reumatismo degenerativo, reumatismo extra-articular, doenças do colagénio, poliartrite crónica, psoríase artropática, espondilite anquilosante, artrite reumatoide juvenil, periartrite escapulumeral, panarterite nodosa, esclerodermia sistémica progressiva, artrite urática, dermatomiosite, reumatismo muscular, miosite, miogelose e condrocalcinose.

Noutra forma de realização, a invenção inclui o método anterior, no qual os distúrbios relacionados com a imunidade são selecionadas a partir de rejeição a transplante ou doença de enxerto contra o hospedeiro.

Noutra forma de realização, a invenção inclui um anticorpo policlonal ou monoclonal que se liga especificamente e/ou modula uma atividade provocada por qualquer um dos polipéptidos C10RF32, selecionado a partir de Hl 9 011_1_P8 (SEQ ID N°: 48), H19011_1_P9 (SEQ ID N°: 50), ou um fragmento ou uma variante do mesmo e os conjugados que o contêm.

Noutra forma de realização, a invenção inclui um anticorpo monoclonal ou policlonal ou um fragmento de ligação a antigénio do mesmo que compreende um local de ligação a antigénio que se liga especificamente a qualquer um dos polipéptidos C10RF32 compreendidos em H19011_1_P8 (SEQ ID N°: 48), H19011_1_P9 (SEQ ID N°: 50), ou um fragmento ou uma variante do mesmo que é pelo menos 80 % idêntico ao mesmo.

Noutra forma de realização, a invenção inclui qualquer dos anticorpos anteriores ou os fragmentos dos mesmos, nos quais o dito anticorpo bloqueia ou inibe a interação de um de Hl 9 011_1_P8 (SEQ ID N°: 48), H19011_1_P9 (SEQ ID N° : 50), ou um fragmento ou variante do mesmo com uma atividade ou função de contraparte.

Noutra forma de realização, a invenção inclui qualquer dos anticorpos ou fragmentos anteriores nos quais o dito anticorpo substitui ou aumenta a interação de H19011_1_P8 (SEQ ID N°: 48), H19011_1_P9 (SEQ ID N°: 50), ou um fragmento ou variante do mesmo com uma função ou atividade de contraparte.

Noutra forma de realização, a invenção inclui um método para modular a atividade de linfócitos, que compreende colocar em contato um linfócito positivo Hl 9 011_1_P8 (SEQ ID N° : 48), H19011_1_P9 (SEQ ID N° : 50) com um agente bioativo capaz de modular a sinalização mediada por C10RF32 numa quantidade eficaz para modular pelo menos uma atividade de linfócitos.

Noutra forma de realização, a invenção inclui o método anterior, no qual o dito agente compreende um antagonista da sinalização mediada por C10RF32 e no qual o dito contato inibe a atenuação da atividade de linfócitos mediada por tal sinalização.

Noutra forma de realização, a invenção inclui o método anterior, no qual o dito contato aumenta a atividade de linfócitos.

Noutra forma de realização, a invenção inclui o método anterior no qual o dito antagonista compreende um agente bloqueante capaz de interferir com a interação funcional do antigénio C10RF32 e sua contraparte.

Noutra forma de realização, a invenção inclui o anticorpo ou fragmento anterior que é adequado para o tratamento ou a prevenção de cancro por meio da modulação da atividade de qualquer uma das proteínas C10RF32 num sistema co-estimulador de tipo B7.

Noutra forma de realização, a invenção inclui o método anterior no qual o anticorpo ou fragmento administrado inibe a estimulação negativa da atividade de linfócitos T contra as células cancerígenas.

Noutra forma de realização, a invenção inclui qualquer dos anticorpos ou fragmentos anteriores, na qual o cancro é selecionado a partir do grupo que consiste em tumores malignos hematológicos tais como leucemia linfocítica aguda, leucemia linfocítica crónica, leucemia mielógena aguda, leucemia mielógena crónica, mieloma múltipla, linfoma de Hodgkin, linfoma não Hodgkin, e tumores de tecido mole ou sólidos tais como cancro de mama, próstata, pulmão, ovário, cólon, baço, rim, bexiga, cabeça e pescoço, útero, testículos, estômago, colo uterino, fígado, osso, pele, pâncreas, cérebro e na qual o cancro é não metastático, invasivo ou metastático.

Noutra forma de realização, a invenção inclui qualquer dos anticorpos ou fragmentos anteriores, que são adequados para o tratamento ou a prevenção de distúrbios relacionados com a imunidade, tais como doenças autoimunes ou rejeição a transplante, por meio da modulação da atividade de qualquer uma das proteínas C10RF32 num sistema co-estimulador de tipo B7.

Noutra forma de realização, a invenção inclui qualquer dos anticorpos ou fragmentos anteriores, que são adequados para o tratamento de uma doença autoimune selecionada a partir de esclerose múltipla; psoríase; artrite reumatoide; Lúpus eritematoso sistémico; colite ulcerosa; doença de Crohn, distúrbios imunes associados com rejeição a transplante de enxerto, angeíte linfocítica benigna, lúpus eritematoso, tiroidite de Hashimoto, mixedema primário, doença de Graves, anemia perniciosa, gastrite atrófica autoimune, doença de Addison, diabetes mellitus dependente de insulina, síndrome de Goodpasture, miastenia gravis, pênfigo, oftalmia simpática, uveíte autoimune, anemia hemolítica autoimune, trombocitopenia idiopática, cirrose biliar primária, hepatite de ação crónica, síndrome de Sjogren, doença reumática, polimiosite, esclerodermia, doença mista do tecido subjuntivo, reumatismo inflamatório, reumatismo degenerativo, reumatismo extra-articular, doenças do colagénio, poliartrite crónica, psoríase artropática, espondilite anquilosante, artrite reumatoide juvenil, periartrite escapulumeral, panarterite nodosa, esclerodermia sistémica progressiva, artrite urática, dermatomiosite, reumatismo muscular, miosite, miogelose e condrocalcinose.

Noutra forma de realização, a invenção inclui qualquer dos anticorpos ou fragmentos anteriores, adequados para o tratamento de rejeição a transplante ou doença de enxerto contra o hospedeiro.

Noutra forma de realização, a invenção inclui qualquer dos anticorpos ou fragmentos anteriores, que se liga especificamente a aminoácidos: os residuos de aminoácido 21-186 de H19011_1_P8 (SEQ ID N°: 48), que se correspondem à sequência de aminoácidos representada em SEQ ID N° : 147, ou os residuos 21-169 de H19011_1_P9 (SEQ ID N°: 50), que se correspondem à sequência de aminoácidos representada em SEQ ID N° : 148, ou os residuos 1-184 da sequência H19011_1_P8 (SEQ ID N°: 48), que se correspondem à sequência de aminoácidos representada em SEQ ID N°: 299, ou uma variante ou fragmento ou um epitopo dos mesmos.

Noutra forma de realização, a invenção inclui qualquer dos anticorpos ou fragmentos anteriores, nos quais o local de ligação a antigénio contém de aproximadamente 3-7 aminoácidos contíguos ou não contíguos, mais habitualmente pelo menos 5 aminoácidos contíguos ou não contíguos. Estes locais de ligação incluem epítopos conformacionais e não conformacionais.

Noutra forma de realização, a invenção inclui qualquer dos anticorpos ou fragmentos anteriores, nos quais o anticorpo é um anticorpo completamente humano.

Noutra forma de realização, a invenção inclui qualquer dos anticorpos ou fragmentos anteriores, nos quais o anticorpo é um anticorpo quimérico.

Noutra forma de realização, a invenção inclui os anticorpos ou fragmentos anteriores nos quais o anticorpo é um anticorpo humanizado ou primatizado.

Noutra forma de realização, a invenção inclui qualquer dos anticorpos ou fragmentos anteriores, nos quais o fragmento é selecionado a partir do grupo que consiste nos fragmentos Fab, Fab', F(ab')2, F(ab'), F(ab), Fv ou scFv e unidade de reconhecimento mínima.

Noutra forma de realização, a invenção inclui qualquer dos anticorpos ou fragmentos anteriores, nos quais o anticorpo ou fragmento está acoplado a um marcador detetável, ou a um resíduo efetor.

Noutra forma de realização, a invenção inclui qualquer dos anticorpos ou fragmentos anteriores, nos quais o resíduo efetor é uma enzima, uma toxina, um agente terapêutico, ou um agente quimioterápico.

Noutra forma de realização, a invenção inclui qualquer dos anticorpos ou fragmentos anteriores, nos quais o marcador detetável é um radioisótopo, um quelante metálico, uma enzima, um composto fluorescente, um composto bioluminescente ou um composto quimiluminescente.

Noutra forma de realização, a invenção inclui uma composição farmacêutica que compreende qualquer dos anticorpos anteriores ou um fragmento dos mesmos.

Noutra forma de realização, a invenção inclui uma composição farmacêutica que compreende os anticorpos anteriores ou um fragmento dos mesmos.

Noutra forma de realização, a invenção inclui um método de indução ou potenciação da resposta imune, que compreende administrar a um paciente em necessidade do mesmo qualquer dos anticorpos ou fragmentos anteriores e detetar a indução ou potenciação da dita resposta imune.

Noutra forma de realização, a invenção inclui um método para potenciar a resposta imune secundaria contra um antigénio num paciente, em que o método compreende administrar quantidades eficazes de qualquer dos anticorpos ou fragmentos anteriores.

Noutra forma de realização, a invenção inclui o método anterior, no qual o antigénio é preferentemente um antigénio cancerígeno, um antigénio virai ou um antigénio bacteriano, e o paciente recebeu preferentemente um tratamento com uma vacina anticancerígena ou uma vacina virai.

Noutra forma de realização, a invenção inclui um método de tratamento de um paciente com um tumor maligno positivo a C1CRF32, que compreende administrar ao paciente uma quantidade eficaz de qualquer dos anticorpos ou fragmentos anteriores.

Noutra forma de realização, a invenção inclui o método anterior que compreende ainda administrar conjuntamente um agente quimioterápico.

Noutra forma de realização, a invenção inclui o método anterior, no qual o dito tumor maligno é selecionado a partir de um grupo que consiste em tumores malignos hematológicos tais como leucemia linfocítica aguda, leucemia linfocítica crónica, leucemia mielógena aguda, leucemia mielógena crónica, mieloma múltipla, linfoma de Hodgkin, linfoma não Hodgkin, e tumores moles ou sólidos tais como cancro de mama, próstata, pulmão, ovário, cólon, baço, rim, bexiga, cabeça e pescoço, útero, testículos, estômago, colo uterino, fígado, osso, pele, pâncreas, cérebro e no qual o cancro é não metastático, invasivo ou metastático.

Noutra forma de realização, a invenção inclui o método anterior, no qual o dito tumor maligno é selecionado a partir do grupo que consiste em cancro de pulmão, cancro de ovário, cancro de cólon, e no qual o cancro de pulmão, o cancro de ovário ou o cancro de cólon é não metastático, invasivo ou metastático.

Noutra forma de realização, a invenção inclui um ensaio para detetar a presença de H19011_1_P8 (SEQ ID N° : 48), H19011_1_P9 (SEQ ID N° : 50), ou um fragmento ou variante dos mesmos numa amostra biológica que compreende colocar em contato a amostra com um anticorpo de qualquer um dos anteriores, e detetar a união de H19011_1_P8 (SEQ ID N° : 48), H19011_1_P9 (SEQ ID N° : 50), ou um fragmento ou variante dos mesmos na amostra.

Noutra forma de realização, a invenção inclui um método para detetar uma doença, diagnosticar uma doença, monitorizar o desenvolvimento de uma doença ou a eficácia do tratamento ou a recaída de uma doença, ou selecionar uma terapêutica para uma doença, que compreende detetar a expressão de um Hl9011_l_P8 (SEQ ID N° : 48), Hl9011_l_P9 (SEQ ID N°: 50), ou um fragmento ou uma variante dos mesmos.

Noutra forma de realização, a invenção inclui o método anterior no qual a deteção da expressão de H19011_1_P8 (SEQ ID N° : 48), H19011_1_P9 (SEQ ID N°: 50), ou um fragmento ou variante dos mesmos se realiza in vivo ou in vitro.

Noutra forma de realização, a invenção inclui o método anterior, no qual a doença é selecionada a partir de cancro de pulmão, cancro de ovário, ou cancro de cólon, e no qual o cancro de pulmão, o cancro de ovário ou o cancro de cólon é não metastático, invasivo ou metastático.

Noutra forma de realização, a invenção inclui o método anterior, no qual a doença é esclerose múltipla; psoríase; artrite reumatoide; Lúpus eritematoso sistémico; colite ulcerosa; doença de Crohn; distúrbios imunes associados com rejeição a transplante de enxerto, angeíte linfocítica benigna, lúpus eritematoso, tiroidite de Hashimoto, mixedema primário, doença de Graves, anemia perniciosa, gastrite atrófica autoimune, doença de Addison, diabetes mellitus dependente de insulina, síndrome de Goodpasture, miastenia gravis, pênfigo, oftalmia simpática, uveíte autoimune, anemia hemolitica autoimune, trombocitopenia idiopática, cirrose biliar primária, hepatite de ação crónica, colite ulcerosa, sindrome de Sjogren, doença reumática, polimiosite, esclerodermia, doença mista do tecido subjuntivo, reumatismo inflamatório, reumatismo degenerativo, reumatismo extra-articular, doenças do colagénio, poliartrite crónica, psoríase artropática, espondilite anquilosante, artrite reumatoide juvenil, periartrite escapulumeral, panarterite nodosa, esclerodermia sistémica progressiva, artrite urática, dermatomiosite, reumatismo muscular, miosite, miogelose ou condrocalcinose.

Noutra forma de realização, a invenção inclui um método de inibição do crescimento de células que expressam um polipéptido selecionado a partir de H19011_1_P8 (SEQ ID N° : 48), H19011_1_P9 (SEQ ID N° : 50), ou um fragmento ou variante dos mesmos num indivíduo, que compreende: administrar ao dito indivíduo qualquer dos anticorpos ou fragmentos anteriores.

Noutra forma de realização, a invenção inclui um método de tratamento ou prevenção de cancro que compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo ou fragmento de ligação que se liga especificamente a H19011_1_P8 (SEQ ID N° : 48), H19011_1_P9 (SEQ ID N°: 50), ou um fragmento ou variante dos mesmos que possui pelo menos 80 % de identidade de sequência com os mesmos.

Noutra forma de realização, a invenção inclui o método anterior, no qual o cancro é selecionado a partir de um grupo que consiste em tumores malignos hematológicos tais como leucemia linfocítica aguda, leucemia linfocítica crónica, leucemia mielógena aguda, leucemia mielógena crónica, mieloma múltipla, linfoma de Hodgkin, linfoma não Hodgkin, e tumores moles ou sólidos tais como cancro de mama, próstata, pulmão, ovário, cólon, baço, rim, bexiga, cabeça e pescoço, útero, testículos, estômago, colo uterino, fígado, osso, pele, pâncreas, cérebro e no qual o cancro é não metastático, invasivo ou metastático.

Noutra forma de realização, a invenção inclui o método anterior, no qual o cancro é selecionado a partir do grupo que consiste em cancro de pulmão, cancro de ovário, ou cancro de cólon, e no qual o cancro de pulmão, o cancro de ovário ou o cancro de cólon é não metastático, invasivo ou metastático.

Noutra forma de realização, a invenção inclui o método anterior no qual o anticorpo é um anticorpo ou um fragmento de ligação a antigénio humano, humanizado ou quimérico.

Noutra forma de realização, a invenção inclui o método anterior no qual o anticorpo ou fragmento está unido direta ou indiretamente a um resíduo efetor.

Noutra forma de realização, a invenção inclui o método anterior, no qual o efetor é selecionado a partir de um fármaco, toxina, radionúclido, fluoróforo e uma enzima.

Noutra forma de realização, a invenção inclui um método para tratar ou prevenir um distúrbio imune, tal como uma doença autoimune ou relacionada com um transplante, que compreende administrar a um paciente uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo que se liga especificamente a H19011_1_P8 (SEQ ID N°: 48), H19011_1_P9 (SEQ ID N°: 50), ou um fragmento ou variante dos mesmos que possui pelo menos 80 % de identidade de sequência com os mesmos.

Noutra forma de realização, a invenção inclui o método anterior, no qual o anticorpo tem uma região de ligação a antigénio específica para o domínio extracelular de qualquer um dos ditos polipéptidos CTORF32.

Noutra forma de realização, a invenção inclui o método anterior, no qual o anticorpo ou fragmento modula o sistema B7/co-estimulador de forma que inibe a estimulação positiva da atividade de linfócitos T que criou um efeito autoimune.

Noutra forma de realização, a invenção inclui o método anterior, no qual o tratamento é combinado com um resíduo útil para tratar afeções autoimunes ou de rejeição a transplante.

Noutra forma de realização, a invenção inclui o método anterior, no qual o resíduo é um anticorpo de citocina, anticorpo de recetor de citocina, fármaco, ou outro agente imunomodulador.

Noutra forma de realização, a invenção inclui o método anterior, no qual as doenças autoimunes são selecionadas a partir de um grupo que consiste em esclerose múltipla; psoríase; artrite reumatoide; lúpus eritematoso sistémico; colite ulcerosa; doença de Crohn; distúrbios imunes associados com rejeição a transplante de enxerto, angeíte linfocítica benigna, lúpus eritematoso, tiroidite de Hashimoto, mixedema primário, doença de Graves, anemia perniciosa, gastrite atrófica autoimune, doença de Addison, diabetes mellitus dependente de insulina, síndrome de Goodpasture, miastenia gravis, pênfigo, oftalmia simpática, uveíte autoimune, anemia hemolítica autoimune, trombocitopenia idiopática, cirrose biliar primária, hepatite de ação crónica, colite ulcerosa, síndrome de Sjogren, doença reumática, polimiosite, esclerodermia, doença mista do tecido subjuntivo, reumatismo inflamatório, reumatismo degenerativo, reumatismo extra-articular, doenças do colagénio, poliartrite crónica, psoríase artropática, espondilite anquilosante, artrite reumatoide juvenil, periartrite escapulumeral, panarterite nodosa, esclerodermia sistémica progressiva, artrite urática, dermatomiosite, reumatismo muscular, miosite, miogelose e condrocalcinose.

Noutra forma de realização, a invenção inclui o método anterior no qual o distúrbio imune é rejeição a transplante ou doença de enxerto contra o hospedeiro.

Noutra forma de realização, a invenção inclui um método de utilização de um anticorpo ou um fragmento de ligação a antigénio que se liga especificamente a H19011_1_P8 (SEQ ID N° : 48), H19011_1_P9 (SEQ ID N° : 50), ou um fragmento ou variante dos mesmos para a formação de imagens in vivo de tumores ou locais inflamatórios caraterizado pela expressão diferencial de H19011_1_P8 (SEQ ID N°: 48), H19011_1_P9 (SEQ ID N°: 50), ou um fragmento ou variante dos mesmos.

Noutra forma de realização, a invenção inclui o método anterior o qual é usado na avaliação de prognóstico de cancro ou de um protocolo de tratamento.

Noutra forma de realização, a invenção inclui um método para a identificação sistemática de uma doença do indivíduo, que compreende detetar no indivíduo ou numa amostra obtida a partir do dito indivíduo um polipéptido que tem uma sequência pelo menos 85 % homóloga à sequência de aminoácidos que se apresenta em qualquer uma de Hl 9 011_1_P8 (SEQ ID N° : 48), H19011_1_P9 (SEQ ID N° : 50), ou com um polipéptido que tem uma sequência que compreende o domínio extracelular de qualquer uma de H19011_1_P8 (SEQ ID N°: 48), H19011_1_P9 (SEQ ID N°: 50)

Noutra forma de realização, a invenção inclui o método anterior no qual a identificação sistemática para uma doença compreende detetar a presença ou a gravidade da doença, distúrbio ou afeção, ou o prognóstico do indivíduo, ou a seleção de tratamento para o dito indivíduo, ou a monitorização de tratamento do dito indivíduo.

Noutra forma de realização, a invenção inclui o método anterior, no qual a doença é um cancro, selecionado a partir do grupo que consiste em cancro de pulmão, cancro de ovário, cancro de cólon, e no qual o cancro de pulmão, o cancro de ovário e o cancro de cólon é não metastático, invasivo ou metastático.

Noutra forma de realização, a invenção inclui o método anterior no qual a doença é uma doença autoimune e é selecionada a partir de esclerose múltipla; psoríase; artrite reumatoide; lúpus eritematoso sistémico; colite ulcerosa; doença de Crohn; distúrbios imunes associados com rejeição a transplante de enxerto; angeíte linfocítica benigna, lúpus eritematoso, tiroidite de Hashimoto, mixedema primário, doença de Graves, anemia perniciosa, gastrite atrófica autoimune, doença de Addison, diabetes mellitus dependente de insulina, síndrome de Goodpasture, miastenia gravis, pênfigo, oftalmia simpática, uveíte autoimune, anemia hemolítica autoimune, trombocitopenia idiopática, cirrose biliar primária, hepatite de ação crónica, colite ulcerosa, síndrome de Sjogren, doença reumática, polimiosite, esclerodermia, doença mista do tecido subjuntivo, reumatismo inflamatório, reumatismo degenerativo, reumatismo extra-articular, doenças do colagénio, poliartrite crónica, psoríase artropática, espondilite anquilosante, artrite reumatoide juvenil, periartrite escapulumeral, panarterite nodosa, esclerodermia sistémica progressiva, artrite urática, dermatomiosite, reumatismo muscular, miosite, miogelose e condrocalcinose.

Noutra forma de realização, a invenção inclui o método anterior, no qual a deteção se realiza por meio de imunoensaio.

Noutra forma de realização, a invenção inclui o método anterior, no qual o imunoensaio utiliza um anticorpo que interage especificamente com o polipéptido que tem uma sequência pelo menos 85 % homóloga à sequência de aminoácidos que se apresenta em qualquer uma de H19011_1_P8 (SEQ ID N° : 48), H19011_1_P9 (SEQ ID N° : 50), ou com um polipéptido que tem uma sequência que compreende o domínio extracelular de qualquer uma de H19011 1 P8 (SEQ ID N°: 48), Hl 9 011_1_P9 (SEQ ID N°: 50),

Noutra forma de realização, a invenção inclui um anticorpo específico contra H19011_1_P8 (SEQ ID N° : 48), H19011_1_P9 (SEQ ID N° : 50), ou um fragmento ou variante das mesmas que provoca a apoptose ou a lise das células cancerígenas que expressam a dita proteína.

Noutra forma de realização, a invenção inclui qualquer dos anticorpos ou fragmentos anteriores, nos quais a dita atividade de apoptose ou lise envolve uma atividade CDC ou ADCC do anticorpo.

Noutra forma de realização, a invenção inclui qualquer dos anticorpos ou fragmentos anteriores, nos quais as células cancerígenas são selecionadas a partir de um grupo que consiste em tumores malignos hematológicos tais como leucemia linfocítica aguda, leucemia linfocítica crónica, leucemia mielógena aguda, leucemia mielógena crónica, mieloma múltipla, linfoma de Hodgkin, linfoma não Hodgkin, e tumores moles ou sólidos tais como cancro de mama, próstata, pulmão, ovário, cólon, baço, rim, bexiga, cabeça e pescoço, útero, testículos, estômago, colo uterino, fígado, osso, pele, pâncreas, e cérebro.

Noutra forma de realização, a invenção inclui qualquer dos anticorpos ou fragmentos anteriores, nos quais as células cancerígenas são células de cancro de pulmão, ovário ou cólon.

Noutra forma de realização, a invenção refere-se a qualquer dos polipéptidos de ectodomínio de C10RF32 solúveis isolados anteriores, nos quais o dito polipéptido ou fragmento ou variante do mesmo usa-se como vacina anticancerígena para imunoterapia do cancro.

Noutra forma de realização, a invenção refere-se a qualquer polinucleótido isolado, que compreende um amplicão que tem uma sequência de ácido nucleico selecionada a partir do grupo que consiste em 235, 238, 241, 244, ou polinucleótidos homólogos às mesmas.

Noutra forma de realização, a invenção refere-se a qualquer par de iniciadores, que compreende um par de oligonucleótidos isolados capaz de amplificar o amplicão mencionado anteriormente. 0 par de iniciadores, que compreende um par de oligonucleótidos isolados tem uma sequência selecionada a partir do grupo que consiste nas SEQ ID N° : 233-234, 236-237, 239-240, 242-243.

Um método para a identificação sistemática de uma doença, distúrbio ou afeção num indivíduo, que compreende detetar no indivíduo ou numa amostra obtida a partir do dito indivíduo um polinucleótido que tem uma sequência pelo menos 85 % homóloga à sequência de ácido nucleico que se apresenta em qualquer uma das SEQ ID N° : 235, 238, 241, 244 . O método indicado anteriormente, no qual a identificação sistemática de uma doença compreende detetar a presença ou gravidade da doença, distúrbio ou afeção, ou o prognóstico do indivíduo, ou a seleção do tratamento para o dito indivíduo, ou a monitorização do tratamento. O método indicado anteriormente, no qual a doença é um cancro, selecionado a partir do grupo que consiste em cancro de pulmão, cancro de cólon e cancro de ovário, e no qual o cancro de pulmão, o cancro de cólon e o cancro de ovário é não metastático, invasivo ou metastático. O método indicado anteriormente, no qual a doença é uma doença autoimune. O método indicado anteriormente, no qual a deteção se realiza usando um par de oligonucleótidos capaz de hibridar pelo menos uma parte de uma sequência de ácido nucleico pelo menos 85 % homóloga à sequência de ácido nucleico que se expõe em SEQ ID N°: 235, 238, 241, 244. O método indicado anteriormente no qual a deteção se realiza usando um par de oligonucleótidos como se apresenta em qualquer uma das SEQ ID N°: 233-234, 236-237, 239-240, 242-243.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS A Figura 1 apresenta um resumo esquemático de uma análise de PCR quantitativo em tempo real.

As Figuras 38A-38B mostram a comparação de alinhamento das proteínas H19011_1_P8 (Figura 38A) e H19011_1_P9 (Figura 38B) com as proteínas C10RF32 conhecidas Q71H61_HUMANA e NP_955383 (SEQ ID N°: 47). A Figura 39 apresenta um histograma que mostra a expressão de transcritos de H19011 de C10RF32, grelha de leitura aberta 32 do cromossoma 1, que são detetáveis por meio de amplicão como se representa na sequência de nome Hl9011_segl3F2R2 (SEQ ID N°: 235) em tecidos de cólon normais e cancerígenos. A Figura 40 apresenta um histograma que mostra a expressão de transcritos de H19011 de C10RF32, grelha de leitura aberta 32 do cromossoma 1, que são detetáveis por meio de amplicão como se representa na sequência de nome Hl9011_segl3F2R2 (SEQ ID N°: 235) em tecidos de pulmão normais e cancerígenos.

As Figuras 41A-41B apresentam um histograma que mostra a expressão de transcritos de H19011 de C10RF32, grelha de leitura aberta 32 do cromossoma 1, que são detetáveis por meio de amplicão como se representa na sequência de nome Hl9011_segl3F2R2 (SEQ ID N°: 235) em diversos tecidos normais. A Figura 41A mostra a expressão de cada amostra com relação à mediana das amostras de cólon; a Figura 41B mostra a expressão de cada amostra com relação à mediana das amostras de pulmão. A Figura 42 apresenta um histograma que mostra a expressão de transcritos de H19011 de C10RF32, grelha de leitura aberta 32 do cromossoma 1, que são detetáveis por meio de amplicão como se representa na sequência de nome Hl9011_seg8-13FlRl (SEQ ID N° : 238) em tecidos de pulmão normais e cancerígenos. A Figura 43 apresenta um histograma que mostra a expressão de transcritos de H19011 de C10RF32, grelha de leitura aberta 32 do cromossoma 1, que são detetáveis por meio de amplicão como se representa na sequência de nome Hl9011-junc8-10segl3 (SEQ ID N°: 241) em tecidos de pulmão normais e cancerígenos. A Figura 44 apresenta um histograma que mostra a expressão de transcritos de H19011 de C10R2F32, grelha de leitura aberta 32 do cromossoma 1, que são detetáveis por meio de amplicão como se representa na sequência de nome Hl9011_junc8-10segl3 (SEQ ID N°: 241) em tecidos de cólon normais e cancerígenos.

As Figuras 45A-45B apresentam um histograma que mostra a expressão de transcritos de H19011 de C10RF32, grelha de leitura aberta 32 do cromossoma 1, que são detetáveis por meio de amplicão como se representa na sequência de nome Hl9011_junc8-10segl3 (SEQ ID N°: 241) em diversos tecidos normais. A Figura 45A mostra a expressão de cada amostra com relação à mediana das amostras de cólon; a Figura 45B mostra a expressão de cada amostra com relação à mediana das amostras de pulmão. A Figura 46 apresenta um histograma que mostra a expressão de transcritos de H19011 de C10RF32, grelha de leitura aberta 32 do cromossoma 1, que são detetáveis por meio de amplicão como se representa na sequência de nome Hl9011_junc8-10segl3 (SEQ ID N°: 241) num painel específico de sangue. A Figura 47 apresenta um histograma que mostra a expressão de transcritos de H19011 de C10RF32, grelha de leitura aberta 32 do cromossoma 1, que são detetáveis por meio de amplicão como se representa na sequência de nome Hl9011_junc6-10FlRl (SEQ ID N° : 244) em tecidos de pulmão normais e cancerígenos. A Figura 48 apresenta um histograma que mostra a expressão de transcritos de H19011 de C10RF32, grelha de leitura aberta 32 do cromossoma 1, que são detetáveis por meio de amplicão como se representa na sequência de nome Hl9011_junc6-10FlRl (SEQ ID N° : 244) em tecidos de cólon normais e cancerígenos. A Figura 56A-56J apresenta as sequências de nucleótidos das ORF de comprimento completo_EGFP recombinantes: a sequência específica do gene correspondente à sequência de comprimento completo do candidato está marcada em negrito, a sequência de EGFP está em itálico não negrito e os SNP conhecidos/mutações silenciosas estão sublinhados. A Figura 56A apresenta a sequência de ácido nucleico de ORF de comprimento completo_EGFP do ADN de FXYD3_T0_P0_EGFP (996 pb) (SEQ ID N° : 77); a Figura 56B apresenta a sequência de ácido nucleico de ORF de comprimento completo_EGFP do ADN de FXYD3_T2 5_P14_EGFP (1083 pb) (SEQ ID N° : 78); a Figura 56C apresenta a sequência de ácido nucleico de ORF de comprimento completo_EGFP do ADN de AI216611_T0_P0_EGFP (1371 pb) (SEQ ID N°: 79); a Figura 56D apresenta a sequência de ácido nucleico de ORF de comprimento completo_EGFP do ADN de AI2lb61l_Tl_Pl_EGFP (1332 pb) (SEQ ID N°: 80); a Figura 56E apresenta a sequência de ácido nucleico de ORF de comprimento completo_EGFP do ADN de C10RF32_T8_P8_EGFP (1533 pb) (SEQ ID N°: 81); a Figura 56F apresenta a sequência de ácido nucleico de ORF de comprimento completo_EGFP do ADN de LOC253012_T4_P5_EGFP (2085 pb) (SEQ ID N° : 82); a Figura 56G apresenta a sequência de ácido nucleico de ORF de comprimento completo_EGFP do ADN de ILDR1_T0_P3_EGFP (2373 pb) (SEQ ID N° : 83); a Figura 56H apresenta a sequência de ácido nucleico de ORF de comprimento completo_EGFP do ADN de ILDR1_T2_P5_EGFP (2241 pb) (SEQ ID N°: 84); a Figura 561 apresenta a sequência de ácido nucleico de ORF de comprimento completo_EGFP do ADN de VSIG1_T6_P5_EGFP (2082 pb) (SEQ ID N°: 85); a Figura 56J apresenta a sequência de ácido nucleico de ORF de comprimento completo_EGFP do ADN de VSIG1_T5_P4_EGFP (2004 pb) (SEQ ID N°: 86).

A Figura 57A-57J apresenta as sequências das proteínas de fusão de comprimento completo_EGFP. A sequência específica do candidato que corresponde à sequência de comprimento completo da proteína está marcada em negrito, a sequência de EGFP está em itálico não negrito e os aminoácidos modificados devido a SNP conhecidos estão sublinhados. A Figura 57A apresenta a sequência de aminoácidos de ORF de comprimento completo_EGFP da proteína FXYD3 P0_EGFP (331 aa) (SEQ ID N°: 87); a Figura 57B apresenta a sequência de aminoácidos de ORF de comprimento completo_EGFP da proteína FXYD3_P14_EGFP (360 aa) (SEQ ID N° : 88); a Figura 57C apresenta a sequência de aminoácidos de ORF de comprimento completo_EGFP da proteína AI216 611_P0_EGFP (456 aa) (SEQ ID N°: 89); a Figura 57D apresenta a sequência de aminoácidos de ORF de comprimento completo_EGFP da proteína AI216611_P1_EGFP (443 aa) (SEQ ID N° : 90); a Figura 57E apresenta a sequência de aminoácidos de ORF de comprimento completo_EGFP da proteína C10RF32_P8_EGFP (510 aa) (SEQ ID N°: 91); a Figura 57F apresenta a sequência de aminoácidos de ORF de comprimento completo_EGFP da proteína LOC253012_P5_EGFP (694 aa) (SEQ ID N° : 92); a Figura 57G apresenta a sequência de aminoácidos de ORF de comprimento completo_EGFP da proteína ILDRl_P3_EGFP (790 aa) (SEQ ID N° : 93); a Figura 57H apresenta a sequência de aminoácidos de ORF de comprimento completo_EGFP da proteína ILDRl_P5_EGFP (746 aa) (SEQ ID N°: 94); a Figura 571 apresenta a sequência de aminoácidos de ORF de comprimento completo_EGFP da proteína VSIG1_P5_EGFP (693 aa) (SEQ ID N° : 95); a Figura 57J apresenta a sequência de aminoácidos de ORF de comprimento completo_EGFP da proteína VSIG1_P4_EGFP (667 aa) (SEQ ID N°: 96) .

As Figuras 58A-58F demonstram a localização das proteínas da membrana celular: a Figura 58A mostra a localização celular das proteínas AI216611-EG_FP_T0_P0 e AI216611-EGFP_T1_P1. A Figura 58B mostra a localização celular das proteínas FXYD3-EGFP_T0_P0 e FXYD3-EGFP T25 P14. A Figura 58C mostra a localização celular da proteína C10RF32-EGFP_T8_P8. A Figura 58D mostra a localização celular da proteína LOC253012-EGFP_T4_P5. A Figura 58E mostra a localização celular das proteínas VSIG1-EGFP_T6_P5 e VSIG1-EGFP_T5_P4. A Figura 58F mostra a localização celular das proteínas ILDR1-EGFP_T0_P3 e ILDRl-EGFP_T2_P5. Todas as imagens foram obtidas usando a objetiva 40x do microscópio confocal.

As Figuras 59A-59F apresentam as sequências de nucleótidos dos domínios extracelulares das proteínas, fusionadas a Fc de ratinho: ORF de ECD mFc. A sequência específica da proteína que corresponde à sequência de ECD está marcada em negrito, a sequência do local de clivagem de TEV está sublinhada, a sequência de mFc está em itálico não negrito e a sequência de IL6sp está em itálico negrito. A Figura 59A mostra a sequência de ADN de FXYD3_T25_Pl4_ECD-_mFc (924 pb) (SEQ ID N°: 97); a Figura 59B mostra a sequência de ADN de Al216611_T0_P0_ECD_mFc (1170 pb) (SEQ ID N° : 98), a Figura 59C mostra a sequência de ADN de C10RF32_T8_P8_ECD_mFc (1287 pb) (SEQ ID N°: 99); a Figura 59D mostra a sequência de ADN de LOC253012_T4_P5_ECD_mFc (1740 pb) (SEQ ID N° : 100), a

Figura 59E mostra a sequência de ADN de ILDRl_T0_P3_ECD_mFc (1167 pb) (SEQ ID N° : 101), e a Figura 59F mostra a sequência de ADN de VSIGl_T6_P5_ECD_mFc (1641 pb) (SEQ ID N°: 102).

As Figuras 60A - 60F apresentam a sequência de aminoácidos das proteínas de fusão ECD_mFc. A sequência específica da proteína que corresponde à sequência de ECD está marcada em negrito, a sequência do local de clivagem de TEV está sublinhada, a sequência de mFc está em itálico não negrito e a sequência de IL6sp está em itálico negrito. A Figura 60A mostra a sequência de aminoácidos de FXYD3 T25 P14 ECD- mFc (307 aa) (SEQ ID N° : 103); a Figura 60B mostra a sequência de aminoácidos de AI21661l_T0_P0_ECD_mFc (389 aa) (SEQ ID N° : 104), a Figura 60C mostra a sequência de aminoácidos de C10RF32_T8_P8_ECD_mFc (428 aa) (SEQ ID N°: 105); a Figura 60D mostra a sequência de aminoácidos de LOC253012_T4_P5_ECD_mFc (579 aa) (SEQ ID N° : 106), a Figura 60E mostra a sequência de aminoácidos de ILDRl_T0_P3_ECD_mFc (388 aa) (SEQ ID N° : 107), e a Figura 60F mostra a sequência de aminoácidos de VSIGl_T6_P5_ECD_mFc (546 aa) (SEQ ID N°: 108). A Figura 61 mostra os resultados de uma análise de Western blot das FXYD3_ECD_mFc (SEQ ID N° : 103), AI216611 ECD_mFc (SEQ ID N°: 104), C10RF32_ECD_mFc (SEQ ID N° : 105), LOC253012_ECD_mFc (SEQ ID N° : 106), ILDRl_ECD_mFc (SEQ ID N°: 107), VSIGl_ECD_mFc (SEQ ID N°: 108) expressas. As pistas são como se segue: pista 1 marcadores de peso molecular (Amersham, arco-íris de amplo espetro, número de catálogo RPN800); pista 2-LOC253012_ECD_mFc; pista 3-FXYD3_ECD_mFc; pista 4-AI216611 ECD_mFc; pista 5- C10RF32_ECD_mFc; pista 6-ILDRl_ECD_mFc; pista 7- VSIGl_ECD_mFc.

As Figuras 62A-62E apresentam a união dos ECD das proteínas de tipo B7 fusionadas a Fc aos linfócitos T em repouso ou os linfócitos T ativados com Con A para diferentes períodos de tempo. A Figura 62A mostra os resultados de união para o ECD de VSIG1 fusionada a Fc; a Figura 62B mostra os resultados de união para o ECD de LOC253012 fusionada a Fc; a Figura 62C mostra os resultados de união para o ECD de C10RF3 fusionada a Fc; e Figura 62D mostra os resultados de união para o ECD de AI216611 fusionada a Fc. A Figura 62E mostra os resultados de união para o ECD de FXYD3 fusionada a Fc. A Figura 63 apresenta a resposta a dose da ligação das proteínas de tipo B7 fusionadas a Fc aos linfócitos T ativados. Os linfócitos T purificados foram cultivados durante 48 horas. Adicionou-se Con A durante as últimas 24 horas. A seguir as células foram colhidas e coradas com concentrações crescentes (3, 6, 12, 25 e 50 yg/ ml) dos ECD de VSIG1, LOC253012, C10RF32, AI216611, ILDRl ou FXYD3 fusionadas a Fc. Como controlos negativos, foi usada IgG2a de ratinho nas mesmas concentrações.

As Figuras 64A-64B apresentam o efeito das proteínas fusionadas ECD-Fc na proliferação de linfócitos T pela secreção de IL-2, após a ativação com Ab anti-CD3. A Figura 64A mostra os níveis de incorporação de BrdU. A Figura 64B mostra os níveis de secreção de IL-2. A Figura 65 ilustra a união dos ECD fusionados a Fc das VSIG1, ILDRl, LOC253012, AI216611, FXYD3 ou C10RF32 a linfócitos. A Figura 66 ilustra a união dos ECD fusionados a Fc das ILDRl, C10RF32 e AI216611 a linfócitos T CD4+. A Figura 67 amostra o efeito das proteínas de tipo B7 na ativação de linfócitos T. "CD3" significa CD3 somente sem a presença de uma molécula co-estimuladora; "CDR3 + B7,2" significa CD3 + um controlo co-estimulador B7 conhecido, B7,2; "CD3 + B7H4" significa CD3 e B7H4, um controlo inibidor B7 conhecido; "CD3 + B7H3" significa CD3 e B7H3, uma proteína estimuladora B7 conhecida; "CD3 + 702" significa CD3 + LOC253012-ECD-fusionado a Fc (SEQ ID N°: 106); "CD3 + 721" significa CD3 + Al216611-ECD-fusionado a Fc (SEQ ID N° : 104); "CD3 + 754" significa CD3 + C10RF32-ECD-fusionado a F (SEQ ID N° : 105); "CD3 + 768" significa CD3 + VSIG1-ECD-fusionado a Fc (SEQ ID N°: 108) "CD3 + 770" significa CD3 + ILDIRl-ECD-fusionado a Fc (SEQ ID N° : 107); "CD3 + 789" significa CD3 + FXYD3-ECD-fusionado a Fc (SEQ ID N°: 103). As Figuras 67A, B e C apresentam 3 experiências diferentes de 3 dadores diferentes. A Figura 68A apresenta os resultados de FACS da união de ILDRl-ECD-Fc (SEQ ID N°: 107), C10RF32-ECD-F (SEQ ID N°: 105), AI216611-ECD-FC (SEQ ID N° : 104), LOC253012-ECD-Fc (SEQ ID N°: 106), FXYD3-ECD-FC (SEQ ID N°: 103), e VSIGl-ECD-Fc (SEQ ID N° : 108) a linfócitos B em repouso. A Figura 68B apresenta os resultados de FACS da união de ILDRl-ECD-Fc (SEQ ID N°: 107), C10RF32-ECD-F (SEQ ID N°: 105), AI216611-ECD-FC (SEQ ID N° : 104), LOC253012-ECD-Fc (SEQ ID N°: 106), FXYD3-ECD-FC (SEQ ID N°: 103), e VSIGl-ECD-Fc (SEQ ID N° : 108) a linfócitos B ativados. A Figura 68C apresenta os resultados de FACS da união de IL DRl-ECD-Fc (SEQ ID N°: 107), C10RF32-ECD-Fc (SEQ ID N°: 105), AI216611-ECD-FC (SEQ ID N° : 104), LOC253012-ECD-FC (SEQ ID N° : 106), FXYD3-ECD-Fc (SEQ ID N°: 103), e VSIGl-ECD-Fc (SEQ ID N°: 108) e linhas celulares de linfoma B.

DESCRIÇÃO PORMENORIZADA DA INVENÇÃO A presente invenção refere-se a C10RF32, e sua correspondente sequência de ácido nucleico, e porções e variantes do mesmo e conjugados que o contêm e a utilização do mesmo como um alvo terapêutico ou de diagnóstico. Em particular, a invenção usa este antigénio e porções discretas do mesmo como um alvo de fármaco para moléculas pequenas terapêuticas, péptidos, anticorpos, ARN antissense, ARNip, ribozimas, e similares. Mais particularmente a invenção refere-se aos anticorpos policlonais e monoclonais de diagnóstico e terapêuticos e fragmentos dos mesmos que se ligam a C10RF32 e porções e variantes do mesmo, especialmente os que têm como alvo o ectodomínio ou porções ou variantes do mesmo particularmente anticorpos monoclonais humanos ou quiméricos, que se ligam especificamente ao antigénio Hl 9 011_1_P8 (SEQ ID N°: 48), H19011_1_P9 (SEQ ID N°: 50), e variantes do mesmo incluindo os que estimulam ou inibem atividades provocadas por C10RF32, incluindo as relacionadas com a modulação da co-estimulação imune, por exemplo a co-estimulação relacionada com B7.

Em certas formas de realização, os anticorpos da invenção derivam de sequências de linha germinal de cadeia pesada e leve particulares e/ou compreendem caraterísticas estruturais particulares tais como regiões CDR que compreendem sequências de aminoácidos particulares. A invenção proporciona anticorpos isolados, métodos de fabrico de tais anticorpos, imunoconjugados e moléculas biespecíficas que compreendem tais anticorpos e composições farmacêuticas e de diagnóstico que contêm os anticorpos, imunoconjugados ou moléculas biespecíficas da invenção. A invenção também se refere a métodos in vitro e in vivo de utilização dos anticorpos e fragmentos, para detetar C10RF32, assim como para tratar doenças associadas com a expressão de C10RF32. A invenção também se refere a métodos de utilização dos anticorpos e fragmentos, específicos para C10RF32 para tratar distúrbios autoimunes e de transplante e doença de enxerto contra o hospedeiro. Portanto, a invenção também proporciona métodos de utilização dos anticorpos anti-C10RF32 da invenção e outros fármacos que modulam C10RF32 para tratar tumores malignos por exemplo, no tratamento de cancro de pulmão, cancro de ovário, cancro de cólon, tumores não sólidos e sólidos, sarcomas, tumores malignos hematológicos que incluem, mas não se limitam a, leucemia linfocitica aguda, leucemia linfocitica crónica, leucemia mielógena aguda, leucemia mielógena crónica, mieloma múltipla, linfoma de Hodgkin, linfoma não Hodgkin, cancro de mama, próstata, baço, rim, bexiga, cabeça e pescoço, útero, testículos, estômago, colo uterino, fígado, osso, pele, pâncreas, cérebro e nos quais o cancro pode ser não metastático, invasivo ou metastático. A invenção também proporciona métodos de utilização dos anticorpos anti-ClORF32 da invenção e outros fármacos que modulam C10RF32 para tratar distúrbios não malignos tais como distúrbios imunes que incluem, mas não se limitam a, doenças autoimunes, rejeição a transplante e doença de enxerto contra o hospedeiro. Preferentemente estes anticorpos possuirão atividade de ADCC ou CDC contra as células alvo tais como células cancerígenas.

Além disso, a invenção refere-se ao antigénio C10RF32 e porções do mesmo que incluem conjugados de polipéptido solúveis que contêm o ectodomínio de C10RF32 e/ou os correspondentes ADN ou vetores ou células que expressam o mesmo para sua utilização em imunoterapia. Além disso, a invenção proporciona vetores, células que os contêm e a utilização dos mesmos para a expressão do antigénio C10RF32, assim como porções discretas e variantes do mesmo. Além disso, a invenção proporciona agentes moduladores de C10RF32 não baseados em anticorpo tais como péptidos, ARN antissense, ARNip, hidratos de carbono, e outras moléculas pequenas que se ligam especificamente e/ou modulam uma atividade relacionada com C10RF32.

Com a finalidade de que a presente invenção seja entendida com maior facilidade, definem-se em primeiro lugar certos termos. Expõem-se definições adicionais na descrição pormenorizada. 0 termo C10RF32 refere-se à proteína codificada por qualquer um dos transcritos de H19011 1 T8 (SEQ ID N° : 45), H19011_1_T9 (SEQ ID N° : 46) que se apresentam no presente documento, particularmente a proteínas como se apresentam em qualquer uma de H19011_1_P8 (SEQ ID N°: 48), H19011_1_P9 (SEQ ID N° : 50), e variantes das mesmas que se expressam diferencialmente, por exemplo, em cancros tais como cancro de pulmão, particularmente carcinoma de pulmão de pequena célula, no qual o cancro pode ser não metastático, invasivo ou metastático assim como distúrbios não malignos tais como distúrbios imunes que incluem, mas não se limitam a, doenças autoimunes, rejeição a transplante e doença de enxerto contra o hospedeiro.

Preferentemente, tais variantes de C10RF32 possuirão pelo menos 80 % de identidade de sequência com a mesma, mais preferentemente pelo menos 90 % de identidade de sequência com a mesma e inclusive mais preferentemente pelo menos 95 % de identidade de sequência com a mesma.

Prediz-se que qualquer uma das proteínas C10RF32 baseadas nesta estrutura de domínio é uma proteína co-estimuladora imune, por exemplo, um membro da família de proteínas B7 que está envolvido na co-estimulação imune por meio de B7 que inclui, por exemplo, respostas de linfócitos T provocadas contra células cancerígenas e que provoca efeitos na imunidade tais como desencadear os efeitos autoimunes. A expressão "ectodomínio (ECD) solúvel" ou "ectodomínios" de C10RF32 refere-se às seguintes sequências de polipéptidos e as sequências de ácido nucleico correspondentes (que não compreendem o péptido de sinal e a TM da proteína C10RF32): >Hl9011_1_P8 (SEQ ID N°: 48) resíduos 21 a 186 (SEQ ID N°: 147)

LQVTVPDKKKVAMLFQPTVLRCHFSTSSHQPAWQWKFKSYCQDRMG

ESLGMSSTRAQSLSKRNLEWDFYLDCLDSRRTVRVVASKQCSTVTLGDFYRGREITI

VHDADLQIGKLMWGDSGLYYaiTTFDDLEGKNEGSLGLLVLGRTGLLADLLPSF

AVEIMPE >Hl9011_1_P9 (SEQ ID N°: 50) resíduos 21 a 169 (SEQ ID N° : 148)

LQVTVPDKKKVAMLFQPTVLRCHFSTSSHQPAWQWKFKSYCQDRMG

ESLGMSSTRAQSLSKRNLEWDPYLDCLDSRRTVRVVASKQGSTVTLGDFYRGREITI VPÍDADLQIGKLMWGDSGLYYCUTTPDDLEGKNEGSLGLLVLEWV, >Hl9 011_1_P8 (SEQ ID N° : 48) resíduos 1 a 184 (SEQ ID N°: 299)

MDRVLLRWISLFWLTAMVEGLQVTVPDKKKVAMLFQFTVLRCHFSTSS

HQPAVVQVVKFKSYCQDRMGESLCMSSTRAQSLSKRNLEWDPYLDCLDSRRTVRV

VASKQGSTVTLGDFYRGREmVHDADLQIGKLMWGDSGLYYCIITTPDDLEGKNE DSVELLVLGRTGLLADLLPSFAVEIM, e variantes das mesmas que possuem pelo menos 95, 96, 97, 98 ou 99 % de identidade de sequência com as mesmas. A expressão "resposta imune" refere-se à ação de, por exemplo, linfócitos, células apresentadoras de antigénio, células fagocíticas, granulocitos, e as macromoléculas solúveis produzidas pelas células anteriores ou as células produzidas pelo fígado ou o baço (incluindo anticorpos, citocinas, e complemento) que têm como resultado um dano seletivo a, a destruição de, ou a eliminação do corpo humano de agentes patogénicos invasores, células ou tecidos infetados com agentes patogénicos, células cancerígenas ou, em casos de autoimunidade ou inflamação patológica, células ou tecidos humanos normais.

Uma "via de transdução de sinal" refere-se à relação bioquímica entre uma diversidade de moléculas de transdução de sinal que desempenha um papel na transmissão de um sinal desde uma porção de uma célula a outra porção de uma célula.

Como é usado no presente documento, a expressão "recetor de superfície celular" inclui, por exemplo, moléculas e complexos de moléculas capazes de receber um sinal e a transmissão de tal sinal através da membrana plasmática de uma célula. 0 termo "anticorpo", como é feita referência no presente documento, inclui anticorpos policlonais e monoclonais completos e qualquer fragmento de ligação a antigénio (isto é, "porção de ligação a antigénio") ou cadeias simples dos mesmos. Um "anticorpo" refere-se a uma glicoproteína que compreende pelo menos duas cadeias pesadas (H) e duas cadeias leves (L) interligadas por ligações dissulfureto, ou uma porção de ligação a antigénio das mesmas. Cada cadeia pesada está compreendida por uma região variável de cadeia pesada (abreviada no presente documento como VH) e uma região constante de cadeia pesada. A região constante de cadeia pesada está compreendida por três domínios, CHI, CH2 e CH3. Cada cadeia leve está compreendida por uma região variável de cadeia leve (abreviada no presente documento como VL) e uma região constante de cadeia leve. A região constante de cadeia leve está compreendida por um domínio, CL. As regiões VH e VL podem estar subdivididas ainda em regiões de hipervariabilidade, denominadas regiões determinantes da complementaridade (CDR), intercaladas com regiões mais conservadas, denominadas regiões estruturais (FR) . Cada VH e VL está composta por três CDR e quatro FR, dispostas desde a extremidade amino terminal até a extremidade carboxi terminal na seguinte ordem: FRl, CDRl, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. As regiões variáveis das cadeias pesada e leve contêm um domínio de união que interage com um antigénio. As regiões constantes dos anticorpos podem mediar a união da imunoglobulina a tecidos ou fatores do hospedeiro, incluindo diversas células do sistema imune (por exemplo, células efetoras) e o primeiro componente (Clq) do sistema do complemento clássico. A expressão "porção de ligação a antigénio" de um anticorpo (ou simplesmente "porção de anticorpo"), como é usado no presente documento, refere-se a um ou mais fragmentos de um anticorpo que retêm a capacidade de ligar-se especificamente a um antigénio (por exemplo, proteínas C10RF32 ou C10RF32). Mostrou-se que a função de ligação a antigénio de um anticorpo pode ser realizada por meio de fragmentos de um anticorpo de comprimento completo. Alguns exemplos de fragmentos de união incluídos no termo "porção de ligação a antigénio" de um anticorpo incluem (i) um fragmento Fab, um fragmento monovalente que consiste nos domínios V leve, V pesado, constante leve (CL) e CHI; (ii) um fragmento F(ab')2, um fragmento divalente que compreende dois fragmentos Fab unidos por meio de uma ponte dissulfureto na região de dobradiça; (iii) um fragmento Fd que consiste nos domínios VH e CHI; (iv) um fragmento Fv que consiste nos domínios VL e VH de um braço único de um anticorpo, (v) um fragmento dAb (Ward et al., (1989) Nature 341:544-546), que consiste num domínio VH; e (vi) uma região determinante da complementaridade (CDR) isolada. Além disso, embora os dois domínios do fragmento Fv, VL e VH, estejam codificados por genes separados, podem ser unidos, usando métodos recombinantes, por meio de um ligante sintético que permite que os mesmos se preparem como uma cadeia de proteína única na qual as regiões VL e VH são emparelhadas para formar moléculas monovalentes (conhecidas como Fv de cadeia simples (scFv); veja-se, por exemplo, Bird et al. (1988) Science 242:423-426; e Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 85:5879-5883). Também pretende-se que tais anticorpos de cadeia simples estejam incluídos no termo "porção de ligação a antigénio" de um anticorpo. Estes fragmentos de anticorpo são obtidos usando técnicas convencionais conhecidas pelos peritos na especialidade, e os fragmentos são identificados sistematicamente para sua utilidade da mesma maneira que os anticorpos intatos.

Um "anticorpo isolado", como é usado no presente documento, pretende referir-se a um anticorpo que está substancialmente isento de outros anticorpos que têm diferentes especificidades antigénicas (por exemplo, um anticorpo isolado que se liga especificamente a proteínas C10RF32 ou C10RF32 está substancialmente isento de anticorpos que se ligam especificamente a antigénios distintos de proteínas C10RF32 ou C10RF32, respetivamente). Um anticorpo isolado que se liga especificamente a proteínas ou C10RF32 pode, no entanto, ter reatividade cruzada com outros antigénios, tais como proteínas C10RF32 ou moléculas C10RF32 de outras espécies, respetivamente. Além disso, um anticorpo isolado pode estar substancialmente livre de outros materiais celulares e/ou produtos químicos.

As expressões "anticorpo monoclonal" ou "composição de anticorpo monoclonal", como são usados no presente documento, referem-se a uma preparação de moléculas de anticorpo de composição molecular única. Uma composição de anticorpo monoclonal apresenta uma especificidade de ligação e uma afinidade únicas por um epítopo particular. A expressão "anticorpo humano", como é usado no presente documento, pretende incluir anticorpos que têm regiões variáveis nas quais tanto a região estrutural como a região CDR derivam de sequências de imunoglobulina de linha germinal humanas. Além disso, se o anticorpo contiver uma região constante, a região constante também deriva de sequências de imunoglobulina de linha germinal humana. Os anticorpos humanos da invenção podem incluir resíduos de aminoácido não codificados por sequências de imunoglobulina de linha germinal humana (por exemplo, mutações introduzidas por meio de mutagénese aleatórias ou de local especifico in vitro ou por meio de mutação somática in vivo) . No entanto, a expressão "anticorpo humano", como é usado no presente documento, não pretende incluir os anticorpos nos quais as sequências CDR derivadas da linha germinal de outras espécies de mamíferos, tais como ratinhos, foram enxertadas nas sequências estruturais humanas. A expressão "anticorpo monoclonal humano" refere-se a anticorpos que apresentam uma especificidade de ligação única que têm regiões variáveis nas quais tanto a região estrutural como a região CDR derivam de sequências de imunoglobulina de linha germinal humana. Numa forma de realização, os anticorpos monoclonais humanos são produzidos por meio de um hibridoma que inclui um linfócito B obtido a partir de um animal não humano transgénico, por exemplo, um ratinho transgénico, que tem um genoma que compreende um transgene de cadeia pesada e um transgene de cadeia leve humanos fusionados a uma célula imortalizada. A expressão "anticorpo humano recombinante", como é usado no presente documento, inclui todos os anticorpos humanos que se preparam, expressam, criam ou isolam por meio de meios recombinantes, tais como (a) anticorpos isolados a partir de um animal (por exemplo, um ratinho) que é transgénico ou transcromossómico para os genes de imunoglobulina humana ou um hibridoma preparado a partir do mesmo (que se descreve adicionalmente posteriormente), (b) anticorpos isolados a partir de uma célula hospedeira transformada para expressar o anticorpo humano, por exemplo, a partir de um transfetoma, (c) anticorpos isolados a partir de uma biblioteca combinatória de anticorpos humanos recombinantes, e (d) anticorpos preparados, expressos, criados ou isolados por meio de qualquer outro meio que implique splicing de sequências de genes de imunoglobulina humana a outras sequências de ADN.

Tais anticorpos humanos recombinantes têm regiões variáveis nas quais as regiões estruturais e CDR derivam de sequências de imunoglobulinas de linha germinal humana. Em certas formas de realização, no entanto, tais anticorpos humanos recombinantes podem ser submetidos a mutagénese in vitro (ou, quando é usado um animal transgénico para as sequências de Ig humana, mutagénese somática in vivo) e portanto as sequências de aminoácidos das regiões VH e VL dos anticorpos recombinantes são sequências que, embora derivam de e estão relacionadas com as sequências de VH e VL de linha germinal humana, podem não existir de forma natural dentro do repertório de linha germinal de anticorpo humano in vivo.

Como é usado no presente documento, "isotipo" refere-se à classe de anticorpo (por exemplo, IgM ou IgGl) que está codificada pelos genes da região constante de cadeia pesada.

As expressões "um anticorpo que reconhece um antigénio" e "um anticorpo especifico para um antigénio" são usados de forma intercambiável no presente documento com a expressão "um anticorpo que se liga especificamente a um antigénio".

Como é usado no presente documento, um anticorpo que se liga especificamente a proteínas C10RF32 ou C10RF32 pretende referir-se a um anticorpo que se liga a proteínas C10RF32 ou C10RF32, respetivamente, preferentemente com uma KD de 5 x 10~8 M ou inferior, mais preferentemente 3 x 10~8 M ou inferior, e inclusive mais preferentemente 1 x 10~9 M ou inferior. 0 termo "K-assoc" ou "Ka", como é usado no presente documento, pretende referir-se à taxa de associação de uma interação anticorpo-antigénio particular, enquanto que o termo "Kdiss" ou "Kd", como é usado no presente documento, pretende referir-se à taxa de dissociação de uma interação anticorpo-antigénio particular. 0 termo "KD", como é usado no presente documento, pretende referir-se à constante de dissociação, que é obtida a partir da proporção entre Kd e Ka (isto é, Kd/Ka) e expressa como concentração molar (M) . Os valores de KD para os anticorpos podem ser determinados usando métodos bem estabelecidos na técnica. Um método preferido para determinar a KD de um anticorpo é por meio da utilização de ressonância de plasmão de superfície, preferentemente usando um sistema biossensor tal como um

i i TM sistema Biacore .

Como é usado no presente documento, a expressão "alta afinidade" por um anticorpo IgG refere-se a um anticorpo que tem uma KD de 10~8 ou inferior, mais preferentemente 10" 9 M ou inferior e inclusive mais preferentemente 10_1° M ou inferior para um antigénio alvo. No entanto, a "alta afinidade" de união pode variar para outros isotipos de anticorpo. Por exemplo, "alta afinidade" de ligação para um isotipo IgM refere-se a um anticorpo que tem uma KD de 10~7 M ou inferior, mais preferentemente 10~8 M ou inferior.

Como é usado no presente documento, o termo "indivíduo" inclui qualquer animal humano ou não humano. A expressão "animal não humano" inclui todos os vertebrados, por exemplo, mamíferos e não mamíferos, tais como primatas não humanos, ovelhas, cães, gatos, cavalos, vacas, galinhas, anfíbios, répteis, etc.

Como é usado no presente documento, o termo "cauda" refere-se a uma sequência peptídica ao final de uma sequência de aminoácidos que é única para uma variante splice de acordo com a presente invenção. Portanto, uma variante splice que tem tal cauda pode ser considerada opcionalmente como uma quimera, na qual pelo menos uma primeira porção da variante splice é, em geral, altamente homóloga (com frequência 100 % idêntica) à porção da correspondente proteína conhecida, enquanto que pelo menos uma segunda porção da variante compreende a cauda.

Como é usado no presente documento, o termo "cabeça" refere-se a uma sequência peptídica no começo de uma sequência de aminoácidos que é única para uma variante splice de acordo com a presente invenção. Portanto, uma variante splice que tem a cabeça pode ser considerada opcionalmente como uma quimera, na qual pelo menos uma primeira porção da variante splice compreende a cabeça, enquanto que pelo menos uma segunda porção é, em geral, altamente homóloga (com frequência 100 % idêntica) a uma porção da correspondente proteína conhecida.

Como é usado no presente documento, a expressão "uma porção de borda" refere-se a uma ligação entre duas porções de uma variante splice de acordo com a presente invenção que não estão unidas na proteína natural ou conhecida. Uma borda pode surgir opcionalmente devido a uma união entre a porção de "proteína conhecida" anterior de uma variante e a cauda, por exemplo, e/ou pode ser produzida se uma porção interna da sequência natural já não estiver presente, de modo que duas porções da sequência, que não eram contíguas na proteína conhecida, são agora contíguas na variante splice. Uma "ponte" pode ser opcionalmente uma porção de borda de uma variante, ou uma união entre uma cauda e uma porção de "proteína conhecida" de uma variante, ou uma união entre uma inserção e uma porção de "proteína conhecida" de uma variante.

Em algumas formas de realização, uma ponte entre uma cauda ou uma cabeça ou uma inserção única, e uma porção de "proteína conhecida" de uma variante, compreende pelo menos aproximadamente 10 aminoácidos, ou em algumas formas de realização pelo menos aproximadamente 20 aminoácidos, ou em algumas formas de realização pelo menos aproximadamente 30 aminoácidos, ou em algumas formas de realização pelo menos aproximadamente 40 aminoácidos, no qual pelo menos um aminoácido provém da cauda/cabeça/inserção e pelo menos um aminoácido provém da porção de "proteína conhecida" de uma variante. Em algumas formas de realização, a ponte pode compreender qualquer número de aminoácidos de aproximadamente 10 a aproximadamente 40 aminoácidos (por exemplo, 10, 11, 12, 13... 37, 38, 39, 40 aminoácidos de comprimento, ou qualquer número entre os mesmos).

Deveria ser observado que uma ponte não se prolonga mais além do comprimento da sequência em qualquer direção, e deveria ser suposto que qualquer descrição da ponte será lida de maneira tal que o comprimento da ponte não se prolonga mais além da própria sequência.

Além disso, as pontes são descritas com relação a uma janela deslizante em certos contextos posteriormente. Por exemplo, certas descrições das pontes apresentam o seguinte formato: uma ponte entre duas bordas (em que uma parte da proteína conhecida não está presente na variante) pode ser descrita opcionalmente como se segue: uma porção da ponte de CONTIG-NOME_Pl (representando o nome da proteína), que compreende um polipéptido que tem um comprimento "n", no qual n é pelo menos aproximadamente 10 aminoácidos de comprimento, opcionalmente pelo menos aproximadamente 20 aminoácidos de comprimento, preferentemente pelo menos aproximadamente 30 aminoácidos de comprimento, mais preferentemente pelo menos aproximadamente 40 aminoácidos de comprimento e o mais preferentemente pelo menos aproximadamente 50 aminoácidos de comprimento, no qual pelo menos dois aminoácidos compreendem XX (2 aminoácidos no centro da ponte, um de cada extremidade da borda), que tem uma estrutura como se segue (numeração de acordo com a sequência de CONTIG-NOME_Pl): uma sequência que parte de qualquer número de aminoácidos de 49 - x a 49 (por exemplo); e que termina em qualquer número de aminoácidos 50 + ((n - 2) - x) (por exemplo), no qual x varia de 0 a n - 2. Neste exemplo, também deveria ser lido como incluindo as pontes nos quais n é qualquer número de aminoácidos entre 10-50 aminoácidos de comprimento. Além disso, o polipéptido ponte não se prolonga mais além da sequência, de modo que deveria ser lido de modo que 4 9 - x (por exemplo) não seja menor que 1, nem 50 + ((n - 2) - x) (por exemplo) maior que o comprimento total da sequência.

Nas seguintes subseções são descritos com mais detalhes diversos aspetos de invenção.

ÁCIDOS NUCLEICOS

Um "fragmento de ácido nucleico" ou um "oligonucleótido" ou um "polinucleótido" são usados no presente documento de forma intercambiável para referir-se a um polímero de resíduos de ácido nucleico. Uma sequência de polinucleótido da presente invenção refere-se a uma sequência de ácido nucleico de cadeia simples ou dupla que se isola e proporciona em forma de uma sequência de ARN, uma sequência de polinucleótido complementar (ADNc), uma sequência de polinucleótido genómica e/ou sequências de polinucleótido compostas (por exemplo, uma combinação das anteriores).

Portanto, a presente invenção inclui as sequências de ácido nucleico que foram descritas anteriormente no presente documento; fragmentos das mesmas, sequências hibridáveis com as mesmas, sequências homólogas às mesmas [por exemplo, pelo menos 90 %, pelo menos 95, 96, 97, 98 ou 99 % ou mais idênticas às sequências de ácido nucleico que se apresentam no presente documento] , sequências que codificam polipéptidos similares com diferentes utilizações de codão, sequências alteradas caraterizadas por mutações, tais como supressão, inserção ou substituição de um ou mais nucleótidos, de origem natural ou induzidas pelo homem, de forma aleatória ou dirigida. A presente invenção também inclui sequências de ácido nucleico homólogas (isto é, que formam parte de uma sequência de polinucleótido da presente invenção), que incluem regiões de sequências únicas aos polinucleótidos da presente invenção.

Nos casos nos quais as sequências de polinucleótido da presente invenção codifiquem polipéptidos sem identificar previamente, a presente invenção também inclui novos polipéptidos ou porções dos mesmos, que estão codificados pelo polinucleótido isolado e os respetivos fragmentos de ácido nucleico dos mesmos descritos anteriormente no presente documento.

Portanto, a presente invenção também inclui polipéptidos codificados pelas sequências de polinucleótido da presente invenção. A presente invenção também inclui homólogos destes péptidos, tais como homólogos que podem ser pelo menos 90 %, pelo menos 95, 96, 97, 98 ou 99 % ou mais homólogos com as sequências de aminoácidos que se apresentam posteriormente, como pode ser determinado usando o software BlastP do Centro Nacional de Informação Biotecnológica (NCBI) usando os parâmetros padrão. Finalmente, a presente invenção também inclui fragmentos dos polipéptidos descritos anteriormente e polipéptidos que têm mutações, tais como supressões, inserções ou substituições de um ou mais aminoácidos, de origem natural ou induzidas pelo homem, de forma aleatória ou dirigida.

Como foi mencionado anteriormente no presente documento, as sequências biomoleculares da presente invenção podem ser utilizadas eficazmente como marcadores patológicos ou de tecidos e como fármacos putativos ou alvos de fármaco para tratar ou prevenir uma doença.

Os oligonucleótidos projetados para realizar os métodos da presente invenção para qualquer das sequências que se proporcionam no presente documento (designadas como foi descrito anteriormente) podem ser gerados de acordo com qualquer método de síntese de oligonucleótidos conhecido na técnica tal como síntese enzimática ou síntese em fase sólida. O equipamento e os reagentes para a execução de síntese em fase sólida estão disponíveis no mercado, por exemplo, em Applied Biosystems. Também pode ser utilizado qualquer outro meio para tais sínteses; a síntese real dos oligonucleótidos está dentro das capacidades do perito na especialidade.

Os oligonucleótidos usados de acordo com este aspeto da presente invenção são os que têm um comprimento selecionado a partir de um intervalo de aproximadamente 10 aproximadamente 200 bases, preferentemente de aproximadamente 15 a aproximadamente 150 bases, mais preferentemente de aproximadamente 20 a aproximadamente 100 bases, o mais preferentemente de aproximadamente 20 a aproximadamente 50 bases.

Os oligonucleótidos da presente invenção podem compreender nucleósidos heterocíclicos que consistem nas bases de purina e pirimidina, ligadas numa ligação fosfodiéster 3' a 5'.

Os oligonucleótidos preferidos são os modificados na cadeia principal, ligações ou bases internucleósido, como é descrito com mais detalhes posteriormente no presente documento. Tais modificações podem facilitar a maioria das vezes a captação de oligonucleótido e a resistência às condições intracelulares.

Alguns exemplos específicos de oligonucleótidos preferidos úteis de acordo com este aspeto da presente invenção incluem oligonucleótidos que contêm cadeias principais modificadas ou ligações internucleósido não naturais. Os oligonucleótidos que têm cadeias principais modificadas incluem os que retêm um átomo de fósforo na cadeia principal, como é revelado nos documentos de Patente dos Estados Unidos com números: 4.469.863; 4.476.301; 5.023.243; 5.177.196; 5.188.897; 5.264.423; 5.276.019; 5.278.302; 5.286.717; 5.321.131; 5.399.676; 5.405.939; 5.453.496; 5.455.233; 5.466.677; 5.476.925; 5.519.126; 5.536.821; 5.541.306; 5.550.111; 5.563.253; 5.571.799; 5.587.361; e 5.625.050.

As cadeias principais de oligonucleótido modificadas preferidas incluem, por exemplo, fosforotioatos, fosforotioatos quirais, fosforoditioatos, fosfotriésteres, aminoalquil fosfotriésteres, metilo e outros alquil fosfonatos incluindo 3'-alquileno fosfonatos e fosfonatos quirais, fosfinatos, fosforamidatos incluindo 3'-amino fosforamidato e aminoalquilfosforamidatos, tionofosforamidatos, tionoalquilfosfonatos, tionoalquilfosfotriésteres, e boranofosfatos que têm ligações 3'-5' normais, análogos unidos 2'-5' destes, e os que têm polaridade invertida nos quais as pares adjacentes de unidades de nucleósido estão unidas 3'-5' a 5'-3' ou 2'-5' a 5'-2' . Também podem ser usados diversos sais, sais misturados e formas de ácido livres.

Alternativamente, as cadeias principais de oligonucleótido modificadas que não incluem um átomo de fósforo nas mesmas têm cadeias principais que estão formadas por ligações internucleósido de cicloalquilo ou alquilo de cadeia curta, ligações internucleósido misturadas de heteroátomo e alquilo ou cicloalquilo, ou uma ou mais ligações internucleósido heteroaromática ou heterocíclica de cadeia curta. Estas incluem as que têm ligações morfolino (formadas em parte a partir da porção de açúcar de um nucleósido); cadeias principais de siloxano; cadeias principais de sulfuro, sulfóxido e sulfona; cadeias principais de formacetilo e tioformacetilo; cadeias principais de metileno formacetilo e tioformacetilo; cadeias principais que contêm alcenos; cadeias principais de sulfamato; cadeias principais de metilenoimino e metilenohidrazino; cadeias principais de sulfonato e sulfonamida; cadeias principais de amida; e outras que têm partes componentes misturadas de N, 0, S e CH2, como as que se revelam nos documentos de Patente dos Estados Unidos com números 5.034.506; 5.166.315; 5.185.444; 5.214.134; 5.216.141; 5.235.033; 5.264.562; 5.264.564; 5.405.938; 5.434.257; 5.466.677; 5.470.967; 5.489.677; 5.541.307; 5.561.225; 5.596.086; 5.602.240; 5.610.289; 5.602.240; 5.608.046; 5.610.289; 5.618.704; 5.623.070; 5.663.312; 5.633.360; 5.677.437; e 5.677.439.

Outros oligonucleótidos que podem ser usados de acordo com a presente invenção são os modificados tanto na ligação ao açúcar como na ligação internucleósido, isto é, a cadeia principal das unidades de nucleótido é substituída com grupos novos. As unidades de base são mantidas para a complementaridade com o alvo de polinucleótido apropriado. Um exemplo de tal mimético de oligonucleótido inclui um ácido nucleico peptídico (PNA). Um oligonucleótido PNA refere-se a um oligonucleótido no qual a cadeia principal de açúcar está substituída com uma cadeia principal que contém amida, em particular, uma cadeia principal de aminoetilglicina. As bases são retidas e ligam-se direta ou indiretamente aos átomos aza de azoto da porção de amida da cadeia principal. Os documentos de Patente dos Estados Unidos que ensinam a preparação dos compostos PNA incluem, mas não se limitam a, os documentos de Patente dos Estados Unidos com números 5.539.082; 5.714.331; e 5.719.262, cada um dos quais se incorpora no presente documento por referência. Outras modificações da cadeia principal, que podem ser usadas na presente invenção são reveladas no documento de Patente dos Estados Unidos N° 6.303.374.

Os oligonucleótidos da presente invenção também incluem as substituições ou modificações de bases. Como é usado no presente documento, as bases "sem modificar" ou "naturais" incluem as bases púricas adenina (A) e guanina (G) , e as bases pirimidínicas timina (T) , citosina (C) e uracilo (U). As bases modificadas incluem, mas não se limitam a, outras bases sintéticas e naturais tais como 5-metilcitosina (5-me-C), 5-hidroximetil citosina, xantina, hipoxantina, 2-aminoadenina, 6-metil e outros alquil derivados de adenina e guanina, 2-propil e outros alquil derivados de adenina e guanina, 2-tiouracilo, 2-tiotimina e 2-tiocitosina, 5-halouracilo e citosina, 5-propinil uracilo e citosina, 6-azo uracilo, citosina e timina, 5-uracilo (pseudouracilo), 4-tiouracilo, 8-halo, 8-amino, 8-tiol, 8-tioalquil, 8-hidroxil e outras adeninas e guaninas 8-substituídas, 5-halo particularmente 5-bromo, 5-trifluorometilo e outros uracilos e citosinas 5-substituídos, 7-metilguanina e 7-metiladenina, 8-azaguanina e 8-azaadenina, 7-desazaguanina e 7-desazaadenina e 3-desazaguanina e 3-desazaadenina. Outras bases incluem as que se revelam no documento de Patente dos Estados Unidos N° 3.687.808, as que se revelam em The Concise Enciclopédia Of Polymer Science and Engineering, páginas 858-859, Kroschwitz, J. I., ed. John Wiley & Sons, 1990, as que se revelam em Englisch et ai., Angewandte Chemie, International Edition, 1991, 30, 613, e as que se revelam em Sanghvi, E. S., capitulo 15, Antisense Research and Applications, páginas 289-302, Crooke, S. T. e Lebleu, B., ed., CRC Press, 1993. Tais bases são particularmente úteis para aumentar a afinidade de ligação dos compostos oligoméricos da invenção. Estas incluem pirimidinas 5-substituídas, 6-azapirimidinas e purinas N-2, N-6 e 0-6 substituídas, incluindo 2-aminopropiladenina, 5-propiniluracilo e 5-propinilcitosina. Mostrou-se que as substituições com 5-metilcitosina aumentam a estabilidade de dúplex de ácido nucleico em 0,6-1,2 °C [Sanghvi YS et ai. (1993) Antisense Research and Applications, CRC Press, Boca Raton 276-278] e são substituições de bases particularmente preferentes, inclusive mais particularmente quando se combinam com modificações de açúcar de 2'-0-metoxietilo.

Outra modificação dos oligonucleótidos da invenção envolve ligar quimicamente ao oligonucleótido um ou mais resíduos ou conjugados, que aumentam a atividade, distribuição celular ou captação celular de oligonucleótido. Tais resíduos incluem, mas não se limitam a, resíduos lipídicos tais como um resíduo do colesterol, ácido eólico, um tioéter, por exemplo, hexil-S-tritiltiol, um tiocolesterol, uma cadeia alifática, por exemplo, resíduos de dodecandiol ou undecilo, um fosfolípido, por exemplo, di-hexadecil-rac-glicerol ou 1,2-di-0-hexadecil-rac-glicero-3-H-fosfonato de trietilamónio, uma poliamina ou uma cadeia de polietileno glicol, ou ácido adamantano acético, um resíduo palmitilo, ou um resíduo octadecilamino ou hexilamino-carbonil-oxicolesterol, como é revelado no documento de Patente dos Estados Unidos N° 6.303.374. Não é necessário que todas as posições de uma molécula de oligonucleótido determinada sejam modificadas uniformemente, e de facto mais de uma das modificações mencionadas anteriormente podem ser incorporadas a um composto individual ou inclusive a um nucleósido individual dentro de um oligonucleótido.

PÉPTIDOS

Os termos "polipéptido", "péptido" e "proteína" são usados de forma intercambiável no presente documento para referir-se a um polímero de resíduos de aminoácidos. Os termos são aplicados a polímeros de aminoácidos nos quais um ou mais resíduos de aminoácidos são um análogo ou mimético de um aminoácido de origem natural correspondente, assim como a polímeros de aminoácidos de origem natural. Os polipéptidos podem ser modificados, por exemplo, por meio da adição de resíduos de hidrato de carbono para formar glicoproteínas. Os termos "polipéptido", "péptido" e "proteína" incluem glicoproteínas, assim como não glicoproteínas.

Os produtos de polipéptido podem ser sintetizados bioquimicamente tal como utilizando técnicas convencionais em fase sólida. Tais métodos incluem síntese em fase sólida exclusiva, métodos de síntese em fase sólida parcial, condensação de fragmentos, síntese clássica em solução.

Estes métodos são usados preferentemente quando o péptido é relativamente curto (isto é, 10 kDa) e/ou quando não pode ser produzido por meio de técnicas recombinantes (isto é, não se codifica por uma sequência de ácido nucleico) e portanto envolve uma química diferente.

Os métodos de síntese de polipéptidos em fase sólida são bem conhecidos na técnica e são descritos além disso em John Morrow Stewart e Janis Dillaha Young, Solid Phase Peptide Syntheses (2a Ed., Pierce Chemical Company, 1984).

Os polipéptidos sintéticos podem ser purificados por meio de cromatografia líquida de alto rendimento preparativa [Creighton T. (1983) Proteins, structures and molecular principles. WH Freeman e Co. N.E.] e a composição dos mesmos pode ser confirmada através de sequenciação de aminoácidos.

Nos casos em que se desejem grandes quantidades de um polipéptido, este pode ser gerado usando técnicas recombinantes tais como as descritas por Bitter et al., (1987) Methods in Enzymol. 153:516-544, Studier et al. (1990) Methods in Enzymol. 185:60-89, Brisson et al. (1984) Nature 310:511-514, Takamatsu et al. (1987) EMBO J. 6:307-311, Coruzzi et al. (1984) EMBO J. 3:1671-1680 e Brogli et al., (1984) Science 224:838-843, Gurley et al. (1986) Mol. Cell. Biol. 6:559-565 e Weissbach & Weissbach, 1988, Methods for Plant Molecular Biology, Academic Press, NY, seção VIII, pp 421-463.

Será entendido que os péptidos identificados de acordo com os ensinamentos da presente invenção podem ser produtos de degradação, péptidos sintéticos ou péptidos recombinantes assim como peptidomiméticos, em geral, péptidos sintéticos e peptoides e semipeptoides que são análogos de péptidos que podem ter, por exemplo, modificações que tornam os péptidos mais estáveis enquanto estão no corpo ou mais capazes de penetrar nas células. Tais modificações incluem, mas não se limitam a, modificação em N-terminal, modificação em C-terminal, modificação da ligação peptídico, que inclui, mas não se limita a, CH2-NH, CH2-S, CH2-S=0, 0=C-NH, CH2-0, CH2-CH2, S=C-NH, CH=CH ou CF=CH, modificações da cadeia principal, e modificação de resíduos. Os métodos para preparar compostos peptidomiméticos são bem conhecidos na técnica e são especificados, por exemplo, em Quantitative Drug Design, C.A. Ramsden Gd., capítulo 17.2, F. Choplin Pergamon Press (1992), que se incorpora por referência como se fosse apresentado completamente no presente documento. São proporcionados detalhes adicionais a este respeito posteriormente no presente documento.

As ligações peptídicas (-CO-NH-) do péptido podem estar substituídas, por exemplo, por meio de ligações N-metilados (-N (CH3)-C0-) , ligações éster (-C(R)H-C-O-O-C(R)-N-), ligações cetometileno (-CO-CH2-) , ligações α-aza (-NH-N(R)-CO-), nos quais R é qualquer alquilo, por exemplo, metilo, ligações carba (-CH2-NH-), ligações hidroxietileno (-CH(OH)-CH2-) , ligações tioamida (-CS-NH-), dobles ligações olefínicos (-CH=CH-), ligações retro amida (-NH-C0-), derivados peptídicos (-N(R)-CH2-CO-) , nos quais R é a cadeia lateral "normal", apresentada naturalmente no átomo de carbono.

Estas modificações podem ser produzidas em qualquer das ligações ao longo da cadeia peptídica e inclusive em várias (2-3) ao mesmo tempo.

Os aminoácidos aromáticos naturais, Trp, Tyr e Phe, podem ser substituídos por aminoácidos sintéticos não naturais tais como Fenilglicina, TIC, naftilelartina (Nol), derivados metilados no anel de Phe, derivados halogenados de Phe ou o-metil-Tyr.

Além do exposto anteriormente, os péptidos da presente invenção também podem incluir um ou mais aminoácidos modificados ou um ou mais monómeros não aminoácido (por exemplo, ácidos gordos, hidratos de carbono complexos, etc.).

Como é usado no presente documento na memória descritiva e na posterior seção de reivindicações, o termo "aminoácido" ou "aminoácidos" entende-se como incluindo os 20 aminoácidos de origem natural; os aminoácidos modificados in vivo de forma posterior à tradução, que incluem, por exemplo, hidroxiprolina, fosfoserina e fosfotreonina; e outros aminoácidos não habituais que incluem, mas não se limitam a, ácido 2-aminoadípico, hidroxilisina, isodesmosina, nor-valina, nor-leucina e ornitina. Além disso, o termo "aminoácido" inclui tanto D-como L-aminoácidos.

Dado que os péptidos da presente invenção são usados preferentemente em terapêutica que requer que os péptidos estejam em forma solúvel, os péptidos da presente invenção incluem preferentemente um ou mais aminoácidos polares naturais ou não naturais, que incluem, mas não se limitam a, serina e treonina que são capazes de aumentar a solubilidade do péptido devido a sua cadeia lateral que contém hidroxilo.

Os péptidos da presente invenção são usados preferentemente em forma linear, embora será entendido que nos casos nos quais a ciclação não interfira gravemente com as caraterísticas do péptido, também podem ser usadas formas cíclicas do péptido.

Os péptidos da presente invenção podem ser sintetizados bioquimicamente tal como por meio da utilização de técnicas em fase sólida convencionais. Estes métodos incluem síntese em fase sólida exclusiva, métodos de síntese em fase sólida parcial, condensação de fragmentos, síntese clássica em solução. Estes métodos são usados preferentemente quando o péptido é relativamente curto (isto é, 10 kDa) e/ou quando não pode ser produzido por meio de técnicas recombinantes (isto é, não se codifica por uma sequência de ácido nucleico) e portanto envolve uma química diferente.

Os métodos de síntese de péptidos em fase sólida são bem conhecidos na técnica e são descritos além disso em

John Morrow Stewart e Janis Dillaha Young, Solid Phase Peptide Syntheses (2a Ed., Pierce Chemical Company, 1984) .

Os péptidos sintéticos podem ser purificados por meio de cromatografia líquida de alto rendimento preparativa [Creighton T. (1983) Proteins, structures and molecular principles. WH Freeman e Co. N.E.] e a composição dos mesmos pode ser confirmada através de sequenciação de aminoácidos.

Nos casos em que se desejem grandes quantidades de péptidos da presente invenção, este pode ser gerado usando técnicas recombinantes tais como as descritas por Bitter et ai., (1987) Methods in Enzymol. 153:516-544, Studier et al. (1990) Methods in Enzymol. 185:60-89, Brisson et al. (1984) Nature 310:511-514, Takamatsu et al. (1987) EMBO J. 6:307-311, Coruzzi et al. (1984) EMBO J. 3:1671-1680 e Brogli et al., (1984) Science 224:838-843, Gurley et al. (1986) Mol. Cell. Biol. 6:559-565 e Weissbach & Weissbach, 1988, Methods for Plant Molecular Biology, Academic Press, NY, seção VIII, pp 421-463.

SISTEMAS DE EXPRESSÃO

Para permitir a expressão celular dos polinucleótidos da presente invenção, podem ser usados uma construção de ácido nucleico de acordo com a presente invenção, que inclui pelo menos uma região codificante de uma das sequências de ácido nucleico anteriores, e inclui além disso pelo menos um elemento regulador de ação cis. Como é usado no presente documento, a expressão "elemento regulador de ação cis" refere-se a uma sequência de polinucleótido, preferentemente um promotor, que se liga a um regulador de ação trans e regula a transcrição de uma sequência codificante localizada a jusante do mesmo. A construção de ácido nucleico da presente invenção pode usar qualquer sequência de promotor adequada.

Preferentemente, o promotor usado pela construção de ácido nucleico da presente invenção é ativo na população celular especifica transformada. Alguns exemplos de promotores específicos de tipo celular e/ou específicos de tecido incluem promotores tais como albumina que é específica de fígado [Pinkert et al., (1987) Genes Dev. 1:268-277], promotores específicos linfoides [Calame et al. , (1988) Adv. Immunol. 43:235-275]; em particular, os promotores de recetores de linfócitos T [Winoto et al., (1989) EMBO J. 8:729-733] e imunoglobulinas; [Banerji et al. (1983) Cell 33729-740], promotores específicos de neurónios tais como o promotor de neurofilamentos [Byrne et al. (1989) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 86:5473-5477], promotores específicos de pâncreas [Edlunch et al. (1985) Science 230:912-916] ou promotores específicos de glândulas mamárias tais como o promotor de soro de leite (documento de Patente dos Estados Unidos N° 4.873.316 e documento de Publicação de Pedido Europeia N° 264.166). A construção de ácido nucleico da presente invenção inclui preferentemente além disso um marcador selecionável apropriado e/ou uma origem de replicação. Preferentemente, a construção de ácido nucleico usada é um vetor transportador, que pode ser propagado tanto em E. coli (em que a construção compreende um marcador selecionável apropriado e uma origem de replicação) como pode ser compatível para propagação em células, ou interação num gene e um tecido de escolha. A construção de acordo com a presente invenção pode ser, por exemplo, um plasmídeo, um bácmido, um fagomídeo, um cósmido, um fago, um vírus ou um cromossoma artificial.

Alguns exemplos de construções adequadas incluem, mas não se limitam a, pcDNA3, pcDNA3.1 (+/-), pGL3, PzeoSV2 (+/-), pDisplay, pEF/myc/cyto, pCMV/myc/cyto, cada um dos quais está disponível no mercado em Invitrogen Co. (www.invitro-gene.com). Alguns exemplos de vetor retroviral e sistemas de empacotamento são os comercializados por Clontech, San Diego, Calif., incluindo os vetores Retro-X pLNCX e pLXSN, que permitem a clonagem em múltiplos locais de clonagem e o transgene é transcrito a partir do promotor CMV. Também se incluem vetores derivados de Mo-MuLV tais como pBabe, onde o transgene será transcrito a partir do promotor 5'LTR.

Na atualidade, as técnicas de transferência de ácido nucleico in vivo preferidas incluem transfeção com construções virais ou não virais, tais como adenovirus, lentivírus, vírus do Herpes simples I, ou vírus adeno-associados (AAV) e sistemas baseados em lípidos. Alguns lípidos úteis para transferência do gene mediada por lípidos são, por exemplo, DOTMA, DOPE, e DC-Chol [Tonkinson et al., Cancer Investigation, 14(1): 54-65 (1996)]. As construções mais preferidas para sua utilização em terapêutica génica são vírus, o mais preferentemente adenovirus, AAV, lentivírus, ou retrovirus. Uma construção virai tal como uma construção retroviral inclui pelo menos um promotor/potenciador transcricional ou elementos definidores de lugar, ou outros elementos que controlam a expressão génica por meio de outros meios tais como splicing alternativo, exportação de ARN nuclear, ou modificação posterior à tradução do mensageiro. Tais construções de vetor também incluem um sinal de empacotamento, repetições terminais longas (LTR) ou porções das mesmas, e locais de ligação de iniciador de cadeia positiva e negativa apropriados para os vírus usados, a não ser que já estejam presentes na construção virai. Além disso, tal construção inclui em geral uma sequência de sinal para a secreção do péptido da célula hospedeira na qual está situado. Preferentemente, a sequência de sinal para esta finalidade é uma sequência de sinal de mamífero ou a sequência de sinal dos polipéptidos da presente invenção. Opcionalmente, a construção também pode incluir um sinal que dirige a poliadenilação, assim como um ou mais locais de restrição e uma sequência de determinação da tradução. Por meio de exemplo, tais construções incluirão em geral uma 5' LTR, um local de ligação a ARNt, um sinal de empacotamento, uma origem de síntese da segunda cadeia de ADN, e uma 3' LTR ou uma porção da mesma. Podem ser usados outros vetores que não são virais, tais como lípidos catiónicos, polilisina, e dendrímeros.

VETORES DE EXPRESSÃO RECOMBINANTE E CÉLULAS HOSPEDEIRAS

Outro aspeto da invenção refere-se a vetores, preferentemente vetores de expressão, que contêm um ácido nucleico que codifica uma proteína da invenção, ou derivados, fragmentos, análogos ou homólogos da mesma. Como é usado no presente documento, o termo "vetor" refere-se a uma molécula de ácido nucleico capaz de transportar outro ácido nucleico ao que foi unida. Um tipo de vetor é um "plasmídeo", que se refere a uma alça de ADN de cadeia dupla circular no qual podem ser ligados segmentos adicionais de ADN. Outro tipo de vetor é um vetor virai, no qual podem ser ligados segmentos adicionais de ADN ao genoma virai. Certos vetores são capazes de replicação autónoma na célula hospedeira na qual se introduzem (por exemplo, vetores bacterianos que têm uma origem bacteriano de replicação e vetores de mamífero epissomais). Outros vetores (por exemplo, vetores de mamífero não epissomais) são integrados no genoma da célula hospedeira após a introdução na célula hospedeira, e replicam-se deste modo juntamente com o genoma hospedeiro. Além disso, certos vetores são capazes de dirigir a expressão dos genes aos que estão ligados operativamente. Tais vetores denominam-se no presente documento "vetores de expressão". Em geral, os vetores de expressão de utilidade em técnicas de ADN recombinante estão com frequência em forma de plasmídeos.

Na presente memória descritiva, "plasmídeo" e "vetor" podem ser usados de forma intercambiável já que o plasmídeo é a forma de vetor usada mais habitualmente. No entanto, a invenção pretende incluir outras formas de vetores de expressão, tais como vetores virais (por exemplo, retrovirus, adenovirus e vírus adeno-associados de replicação defetuosa), que realizam funções equivalentes.

Os vetores de expressão recombinantes da invenção compreendem um ácido nucleico da invenção numa forma adequada para a expressão do ácido nucleico numa célula hospedeira, o que significa que os vetores de expressão recombinantes incluem uma ou mais sequências reguladoras, selecionadas com base na célula hospedeira a usar para a expressão, que estão ligadas operativamente à sequência de ácido nucleico a expressar. Num vetor de expressão recombinante, "ligada operativamente" pretende indicar que a sequência de nucleótidos de interesse está unida às sequências reguladoras de modo que permite a expressão da sequência de nucleótidos (por exemplo, num sistema de transcrição/tradução in vitro ou numa célula hospedeira quando o vetor é introduzido na célula hospedeira). A expressão "sequência reguladora" pretende incluir promotores, potenciadores e outros elementos de controlo de expressão (por exemplo, sinais de poliadenilação). Tais sequências reguladoras são descritas, por exemplo, em Goeddel, Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, Calif. (1990). As sequências reguladoras incluem as que dirigem a expressão constitutiva de uma sequência de nucleótidos em numerosos tipos de célula hospedeira e as que dirigem a expressão da sequência de nucleótidos somente em certas células hospedeiras (por exemplo, sequências reguladoras específicas de tecido). Os peritos na especialidade entenderão que o projeto do vetor de expressão pode depender de fatores tais como a escolha da célula hospedeira a transformar, o nível de expressão de proteína desejada, etc. Os vetores de expressão da invenção podem ser introduzidos em células hospedeiras para produzir deste modo proteínas ou péptidos, incluindo proteínas ou péptidos de fusão, codificadas por ácidos nucleicos como é descrito no presente documento.

Os vetores de expressão recombinantes da invenção podem ser projetados para a produção de proteínas variantes em células procariotas ou eucariotas. Por exemplo, as proteínas da invenção podem ser expressas em células bacterianas tais como Escherichia coli, células de inseto (usando vetores de expressão de baculovírus) células de levedura ou células de mamífero. As células hospedeiras adequadas são discutidas adicionalmente em Goeddel, Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, Calif. (1990). Alternativamente, o vetor de expressão recombinante pode ser transcrito e traduzido in vitro, por exemplo usando as sequências reguladoras do promotor T7 e polimerase T7. A expressão de proteínas em procariotas é realizada com maior frequência em Escherichia coli com vetores que contêm promotores constitutivos ou induzíveis que dirigem a expressão de proteínas de fusão ou proteínas de não fusão. Os vetores de fusão adicionam certos aminoácidos a uma proteína codificada na mesma, às extremidades amino terminal ou C-terminal da proteína recombinante. Tais vetores de fusão servem em geral para três finalidades: (i) aumentar a expressão de proteína recombinante; (ii) aumentar a solubilidade da proteína recombinante; e (iii) ajudar na purificação da proteína recombinante atuando como um ligando em purificação por afinidade. Com frequência, nos vetores de expressão de fusão é introduzido um local de clivagem proteolítica na ligação do resíduo de fusão e a proteína recombinante para permitir a separação da proteína recombinante do resíduo de fusão posterior à purificação da proteína de fusão. Tais enzimas, e suas sequências de reconhecimento cognadas, incluem Fator Xa, trombina, PreScission, TEV e enteroquinase. Os vetores de expressão de fusão habituais incluem pGEX (Pharmacia Biotech Inc; Smith e Johnson, 1988. Gene 67: 31-40), pMAL (New England Biolabs, Beverly, Mass.) e pRIT5 (Pharmacia, Piscataway, N.J.) que fusionam glutatião S-transferase (GST), proteínas de ligação a maltose E, ou proteína A, respetivamente, à proteína recombinante alvo.

Alguns exemplos de vetores de expressão de E. coli de não fusão induzíveis adequados incluem pTrc (Amrann et ai., (1988) Gene 69:301-315) e pET lld (Studier et ai., Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, Calif. (1990) 60-89)- não preciso, pETlla-d tem uma etiqueta T7 N-terminal.

Uma estratégia para maximizar a expressão de proteína recombinante em E. coli é expressar a proteína numa bactéria hospedeira com uma capacidade diminuída de clivar proteoliticamente a proteína recombinante. Veja-se, por exemplo, Gottesman, Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, Calif. (1990) 119-128. Outra estratégia é alterar a sequência de ácido nucleico do ácido nucleico ao insertar num vetor de expressão de modo que os codões individuais para cada aminoácido sejam os usados de forma preferente em E. coli (veja-se, por exemplo, Wada, et al., 1992. Nucl. Acids Res. 20: 2111-2118). Tal alteração das sequências de ácido nucleico da invenção pode ser realizada por meio de técnicas de síntese de ADN convencionais. Outra estratégia para solucionar a influência do codão é usar estirpes bacterianas BL21-codon plus (Invitrogen) ou a estirpe bacteriana Rosetta (Novagen), dado que estas estirpes contêm cópias extra de genes de ARNt de E. coli raros.

Noutra forma de realização, o vetor de expressão que codifica a proteína da invenção é um vetor de expressão de levedura. Alguns exemplos de vetores para expressão na levedura Saccharomyces cerevisiae incluem pYepSecl (Baldari, et al., 1987. EMBO J. 6: 229-234), pMFa (Kurjan e Herskowitz, 1982. Cell 30: 933-943), pJRY88 (Schultz et al., 1987. Gene 54: 113-123), pYES2 (Invitrogen Corporation, San Diego, Calif.), e picZ (InVitrogen Corp, San Diego, Calif.).

Alternativamente, os polipéptidos da presente invenção podem ser produzidos em células de inseto usando vetores de expressão de baculovírus. Os vetores de baculovírus adequados para a expressão de proteínas em células de inseto cultivadas (por exemplo, células SF9) incluem a série pAc (Smith, et al. , 1983. Mol. Cell. Biol. 3: 2156-2165) e a série pVL (Lucklow e Summers, 1989. Virology 170: 31-39).

Noutra forma de realização adicional, um ácido nucleico da invenção é expresso em células de mamífero usando um vetor de expressão de mamífero. Alguns exemplos de vetores de expressão de mamífero incluem pCDM8 (Seed, 1987. Nature 329: 840) e pMT2PC (Kaufman, et al., 1987. EMBO J. 6: 187-195), pIRESpuro (Clontech), pUB6 (Invitrogen), pCEP4 (Invitrogen) pREP4 (Invitrogen), pcDNA3 (Invitrogen). Quando são usadas células de mamífero, as funções de controlo do vetor de expressão com frequência são proporcionadas por meio de elementos reguladores virais. Por exemplo, os promotores usados habitualmente derivados de poliama, adenovirus 2, citomegalovírus, Rous Sarcoma Vírus, e vírus de símio 40. Para outros sistemas de expressão adequados para células tanto procariotas como eucariotas vejam-se, por exemplo, os capítulos 16 e 17 de Sambrook, et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual. 2a ed., Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.E., 1989.

Noutra forma de realização, o vetor de expressão de mamífero recombinante é capaz de dirigir a expressão do ácido nucleico de forma preferente num tipo de célula particular (por exemplo, são usados elementos reguladores específicos de tecido para expressar o ácido nucleico) . Os elementos reguladores específicos de tecido são conhecidos na técnica. Alguns exemplos não limitativos de promotores específicos de tecido adequados incluem o promotor de albumina (especifico de fígado; Pinkert, et al., 1987. Genes Dev. 1: 268-277), promotores específicos linfoides (Calame e Eaton, 1988. Adv. Immunol. 43: 235-275), em particular, promotores de recetores dos linfócitos T (Winoto e Baltimore, 1989. EMBO J. 8: 729-733) e imunoglobulinas (Banerji, et al., 1983. Cell 33: 729-740; Queen e Baltimore, 1983. Cell 33: 741-748), promotores específicos de neurónios (por exemplo, o promotor neurofilamento; Byrne e Ruddle, 1989. Proc. Natl. Acad. Sei. USA 86: 5473-5477), promotores específicos de pâncreas (Edlund, et al., 1985. Science 230: 912-916), e promotores específicos de glândulas mamárias (por exemplo, promotor de soro de leite; documento de Patente dos Estados Unidos N° 4.873.316 e documento de Publicação de Pedido Europeia N° 264.166) . Também se incluem os promotores regulados por desenvolvimento, por exemplo, os promotores murinos hox (Kessel e Gruss, 1990. Science 249: 374-379) e o promotor alfa-fetoproteína (Campes e Tilghman, 1989. Genes Dev. 3: 537-546). A invenção também proporciona um vetor de expressão recombinante que compreende uma molécula de ADN da invenção clonada no vetor de expressão numa orientação antissense. Isto é, a molécula de ADN está ligada operativamente a uma sequência reguladora de forma que permite a expressão (por meio da transcrição da molécula de ADN) de uma molécula de ARN que é antissense com relação ao ARNm que codifica a proteína da invenção. As sequências reguladoras ligadas operativamente a ácido nucleico clonadas em orientação antissense podem ser selecionadas para dirigir a expressão contínua da molécula de ARN antissense numa diversidade de tipos de células, por exemplo promotores e/ou potenciadores virais, ou as sequências reguladoras podem ser selecionadas para dirigir a expressão constitutiva, específica de tecido ou específica de tipo celular do ARN antissense. 0 vetor de expressão antissense pode estar em forma de um plasmídeo, fagomídeo ou vírus atenuados recombinantes nos quais os ácidos nucleicos antissense são produzidos por meio do controlo de uma região reguladora de alta eficácia, a atividade da qual pode ser determinada por meio do tipo de célula na qual é introduzido o vetor. Para uma discussão da regulação da expressão génica usando genes antissense veja-se, por exemplo, Weintraub, et ai., "Antisense RNA as a molecular tool for genetic analysis, " Reviews-Trends in Genetics, Vol. 1(1) 1986.

Outro aspeto da invenção refere-se a células hospedeiras nas quais foi introduzido um vetor de expressão recombinante da invenção. As expressões "célula hospedeira" e "célula hospedeira recombinante" são usadas de forma intercambiável no presente documento. Entende-se que tais expressões referem-se não somente à célula objeto particular, mas também à progénie ou à progénie potencial de tal célula. Devido a que são produzidas certas modificações em gerações satisfatórias devido a mutações ou influências ambientais, tal progénie pode não ser, de facto, idêntica à célula progenitora, mas ainda está incluída dentro do alcance da expressão como é usado no presente documento.

Uma célula hospedeira pode ser qualquer célula procariota ou eucariota. Por exemplo, a proteína da invenção pode ser produzida em células bacterianas tais como E. coli, células de inseto, levedura, plantas ou células de mamíferos (tais como células de ovário de hámster chinês (CHO) ou COS ou células 293). Os peritos na especialidade conhecem outras células hospedeiras adequadas. 0 ADN vetorial pode ser introduzido em células procariotas ou eucariotas através de técnicas de transformação ou transfeção convencionais. Como é usado no presente documento, os termos "transformação" e "transfeção" pretendem se referir a uma diversidade de técnicas reconhecidas na especialidade para introduzir ácido nucleico exógeno (por exemplo, ADN) numa célula progenitora, incluindo coprecipitação com fosfato de cálcio ou cloreto de cálcio, transfeção mediada por DEAE-dextrano, lipofeção, ou eletroporação. Podem ser encontrados métodos adequados para transformar ou transfetar as células hospedeiras em Sambrook, et al. (Molecular Cloning: A Laboratory Manual. 2a ed., Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.E., 1989), e outros manuais de laboratório.

Para a transfeção estável de células de mamífero, sabe-se que, dependendo do vetor de expressão e da técnica de transfeção usados, somente uma pequena fração das células pode integrar o ADN exógeno em seu genoma. Com a finalidade de identificar e selecionar estes integrantes, é introduzido geralmente um gene que codifica um marcador selecionável (por exemplo, resistência a antibióticos) nas células hospedeiras juntamente com o gene de interesse. Diversos marcadores selecionáveis incluem os que conferem resistência a fármacos, tais como G418, higromicina, puromicina, blasticidina e metotrexato. Os ácidos nucleicos que codificam um marcador selecionável podem ser introduzidos numa célula hospedeira no mesmo vetor que o que codifica a proteína da invenção ou podem ser introduzidos num vetor separado. As células transfetadas de forma estável com o ácido nucleico introduzido podem ser identificadas por meio de seleção com fármacos (por exemplo, as células que incorporaram o gene marcador selecionável sobreviverão, enquanto que se eliminarão as demais células).

Uma célula hospedeira da invenção, tal como uma célula hospedeira procariota ou eucariota em cultivo, pode ser usada para produzir (isto é, expressar) a proteína da invenção. Portanto, a invenção também proporciona métodos para produzir proteínas da invenção usando as células hospedeiras da invenção. Numa forma de realização, o método compreende cultivar a célula hospedeira da presente invenção (na qual foi introduzido um vetor de expressão recombinante que codifica a proteína da invenção) num meio adequado de modo que se produza a proteína de invenção. Noutra forma de realização, o método compreende ainda isolar a proteína da invenção do meio ou da célula hospedeira.

Para a produção eficaz da proteína, prefere-se colocar as sequências de nucleótidos que codificam a proteína da invenção sob o controlo de sequências de controlo de expressão otimizadas para a expressão num hospedeiro desejado. Por exemplo, as sequências podem incluir sequências reguladoras transcricionais e/ou traducionais otimizadas (tais como sequências Kozak alteradas). MODIFICAÇÕES DE PROTEÍNAS PROTEÍNAS DE FUSÃO

De acordo com a presente invenção, uma proteína de fusão pode ser preparada a partir de uma proteína da invenção por meio de fusão com uma porção de uma imunoglobulina que compreende uma região constante de uma imunoglobulina. Mais preferentemente, a porção da imunoglobulina compreende uma região constante de cadeia pesada que é opcionalmente e mais preferentemente uma região constante de cadeia pesada humana. A região constante de cadeia pesada é o mais preferentemente uma região constante de cadeia pesada de IgG, e opcionalmente e o mais preferentemente é uma cadeia Fc, o mais preferentemente um fragmento Fc de IgG que compreende os domínios CH2 e CH3. Embora possa ser usado opcionalmente qualquer subtipo de IgG, prefere-se o subtipo IgGl. A cadeia de Fc pode ser opcionalmente uma cadeia de Fc conhecida ou "natural", ou alternativamente pode estar mutada. São descritos alguns tipos de mutações ilustrativas não limitativas por meio de exemplo no documento de Pedido de Patente dos Estados Unidos N° 20060034852, publicado em 16 de Fevereiro de 2006, que se incorpora pela presente por referência como se fosse apresentada completamente no presente documento. A expressão "cadeia de Fc" também compreende opcionalmente qualquer tipo de fragmento Fc.

Foram identificados vários resíduos de aminoácido específicos que são importantes para a atividade mediada pela região constante do anticorpo na subclasse IgG. A inclusão, substituição ou exclusão destes aminoácidos específicos permite, portanto a inclusão ou exclusão da atividade específica mediada pela região constante da imunoglobulina. Além disso, as alterações específicas podem ter como resultado, por exemplo, aglicosilação e/ou outras alterações desejadas na cadeia de Fc. Podem ser realizadas opcionalmente pelo menos alguns alterações para bloquear uma função de Fc que se considere indesejável, tal como um efeito do sistema imune indesejável, como é descrito com mais detalhes posteriormente.

Alguns exemplos ilustrativos não limitativos de mutações que podem ser realizadas em Fc para modular a atividade da proteína de fusão incluem as seguintes alterações (dadas com relação à nomenclatura de sequência de Fc dada por Rabat, em Rabat EA et al. : Sequences of Proteins of Immunological Interest. US Department of Health and Human Services, NIH, 1991): 220C - > S; 233-238 ELLGGP - > EAEGAP; 265D - > A, preferentemente juntamente com 434N -> A; 297N - > A (por exemplo para bloquear a N-glicosilação); 318-322 EYRCR - > AYACA; 330-331AP - > SS; ou uma combinação dos mesmos (veja-se, por exemplo M. Clark, "Chemical Immunol and Antibody Engineering", pp 1-31 para uma descrição destas mutações e seus efeitos) . A construção para a cadeia de Fc que carateriza as alterações anteriores compreende opcional e preferentemente uma combinação da região de dobradiça com os domínios CH2 e CH3 .

As mutações anteriores podem ser colocadas em prática opcionalmente para potenciar as propriedades desejadas ou alternativamente para bloquear propriedades não desejadas. Por exemplo, mostrou-se que a aglicosilação de anticorpos mantinha a funcionalidade de união desejada enquanto que bloqueava a depleção de linfócitos T ou o desencadeamento da libertação de citocinas, que podem ser opcionalmente funções não desejadas (veja-se M. Clark, "Chemical Immunol and Antibody Engineering", pp 1-31). A substituição da prolina 331 por serina pode bloquear a capacidade de ativar o complemento, que pode ser considerada opcionalmente uma função não desejada (veja-se M. Clark, "Chemical Immunol and Antibody Engineering", pp 1-31). A alteração da alanina 330 por serina juntamente com esta alteração também pode potenciar o efeito desejado de bloqueio da capacidade de ativar o complemento.

Mostrou-se que os resíduos 235 e 237 estão envolvidos na citotoxicidade mediada por células dependente de anticorpos (ADCC), de modo que alterar o bloqueio de resíduos de 233-238 como é descrito também pode bloquear a atividade se a ADCC for considerada que é uma função não desej ada. O resíduo 220 é normalmente uma cisteína para Fc de IgGl, que é o local no qual a cadeia pesada forma uma ligação covalente com a cadeia leve. Opcionalmente, este resíduo pode ser alterado por uma serina, para evitar qualquer tipo de ligação covalente (veja-se M. Clark, "Chemical Immunol and Antibody Engineering", pp 1-31) .

As alterações anteriores nos resíduos 265 e 434 podem ser colocadas em prática opcionalmente para reduzir ou bloquear a ligação ao recetor de Fc, que pode bloquear opcionalmente a funcionalidade não desejada de Fc relacionada com suas funções no sistema imune (veja-se "Binding site on Human IgGl for Fc Recetors", Shields et al.r Vol 276, pp 6591-6604, 2001).

Pretende-se que as alterações anteriores sejam ilustrações unicamente de alterações opcionais e não se pretende que sejam limitativas de nenhuma maneira. Além disso, a explicação anterior é proporcionada unicamente com finalidades descritivas, sem desejar estar vinculado a nenhuma hipótese individual.

ADIÇÃO DE GRUPOS

Se uma proteína de acordo com a presente invenção for uma molécula linear, é possível colocar diversos grupos funcionais em diversos pontos na molécula linear que são suscetíveis para ou adequados para modificação química. Podem ser adicionados grupos funcionais nas extremidades das formas lineares da proteína da invenção. Em algumas formas de realização, os grupos funcionais aumentam a atividade da proteína com relação a uma ou mais caraterísticas, que incluem, mas não se limitam a, aumento de estabilidade, penetração (através de membranas celulares e/ou barreiras teciduais), localização do tecido, eficácia, diminuição da eliminação, diminuição da toxicidade, aumento da seletividade, aumento da resistência à expulsão por meio de bombas celulares, e similares. Por razões de conveniência e sem desejar ser limitativo, a extremidade N livre de uma das sequências contidas nas composições da invenção será denominada extremidade N da composição, e o C terminal livre da sequência será considerada a extremidade C da composição. A extremidade C ou a extremidade N das sequências, ou ambas, pode ser unida a um grupo funcional de ácido carboxílico ou um grupo funcional de amina, respetivamente.

Os exemplos não limitativos de grupos funcionais adequados são descritos em Green e Wuts, "Proteting Groups in Organic Synthesis", John Wiley & Sons, Capítulos 5 e 7, 1991, cujos ensinamentos são incorporados no presente documento por referência. Os grupos protetores preferidos são os que facilitam o transporte do princípio ativo unido aos mesmos numa célula, por exemplo, por redução da hidrofilia e aumentando a lipofilia do princípio ativo, sendo estes um exemplo para "um resíduo para transporte através de membranas celulares".

Estes resíduos podem ser clivados opcional e preferentemente in vivo, por hidrólise ou de forma enzimática, dentro da célula. (Ditter et ai., J. Pharm. Sei. 57: 783 (1968); Ditter et ai., J. Pharm. Sei. 57: 828 (1968); Ditter et ai., J. Pharm. Sei. 58: 557 (1969); King et ai., Biochemistry 26: 2294 (1987); Lindberg et ai., Drug Metabolism and Disposition 17: 311 (1989); e Tunek et al. , Biochem. Pharm. 37: 3867 (1988), Anderson et al., Arch. Biochem. Biophys. 239: 538 (1985) e Singhal et al. , FASEB J. 1: 220 (1987)). Os grupos protetores de hidroxilo incluem grupos protetores de ésteres, carbonatos e carbamato. Os grupos protetores de amina incluem grupos alcoxi e ariloxi carbonilo, como foi descrito anteriormente para os grupos protetores N-terminais. Os grupos protetores de ácido carboxílico incluem ésteres alifáticos, benzílicos e arilo, como foi descrito anteriormente para grupos protetores C-terminais. Numa forma de realização, o grupo ácido carboxílico na cadeia lateral de um ou mais resíduos de ácido glutâmico ou ácido aspártico numa composição da presente invenção protege-se, preferentemente com um éster de metilo, etilo, benzilo ou benzilo substituído, mais preferentemente como um éster de benzilo.

Os exemplos ilustrativos não limitativos de grupos protetores N-terminais incluem grupos acilo (-C0-R1) e grupos alcoxi carbonilo ou ariloxi carbonilo (-C0-0-R1), nos quais Rl é um grupo alifático, alifático substituído, benzilo, benzilo substituído, aromático ou um aromático substituído. Os exemplos específicos de grupos acilo incluem, mas não se limitam a, acetilo, (etil)-CO-, n-propil-CO-, iso-propil-CO-, n-butil-CO-, sec-butil-CO-, t-butil-CO-, hexilo, lauroilo, palmitoilo, miristoilo, estearilo, oleoil fenil-CO-, fenilo substituído-CO-, benzil-CO- e (benzilo substituído)-C0-. Os exemplos de grupos alcoxi carbonilo e ariloxi carbonilo incluem CH3-0-C0-, (etil)-0-C0-, n-propil-O-CO-, iso-propil-O-CO-, n-butil-O-CO-, sec-butil-O-CO-, t-butil-O-CO-, fenil-O- C0-, fenilo substituído-O-CO- e benzil-O-CO-, (benzilo substituído)-O-CO-, Adamantano, naftaleno, miristoleilo, tolueno, bifenilo, cinamoilo, nitrobenzoilo, toluoilo, furoilo, benzoilo, ciclohexano, norbornano, ou Z-caproico. Com a finalidade de facilitar a N-acilação, de um a quatro resíduos de glicina podem estar presentes na extremidade N da molécula. 0 grupo carboxilo na extremidade C do composto pode ser protegido, por exemplo, por meio de um grupo que inclui, mas não se limita a, uma amida (isto é, o grupo hidroxilo na extremidade C se substitui com -NH2, -NHR2 e -NR2R3) ou éster (isto é, o grupo hidroxilo na extremidade C se substitui com -OR2) . R2 e R3 são opcionalmente de forma independente um grupo alifático, alifático substituído, benzilo, benzilo substituído, arilo ou um arilo substituído. Além disso, tomados juntamente com o átomo de azoto, R2 e R3 podem formar opcionalmente um anel heterocíclico C4 a Cs com aproximadamente 0-2 heteroátomos adicionais tais como azoto, oxigénio ou enxofre. Os exemplos adequados não limitativos de anéis heterocíclicos incluem piperidinilo, pirrolidinilo, morfolino, tiomorfolino ou piperazinilo. Os exemplos de grupos protetores C-terminais incluem, mas não se limitam a, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -NH(etilo), -N (etil) 2, -N(metil) (etilo) , -NH(benzilo) , -N (alquil C1-C4) (benzilo), -NH(fenilo), N (alquil C1-C4) (fenilo) , -OCH3, -0-(etilo) , -0-(n-propilo) , -0- (n-butilo), -0-(iso-propilo), -0- (sec-butilo), -0- (t-butilo), -0-benzilo e -0-fenilo.

SUBSTITUIÇÃO COM RESÍDUOS PEPTIDOMIMÉTICOS

Um "resíduo orgânico peptidomimético" pode ser substituído opcionalmente por resíduos de aminoácido na composição da presente invenção tanto em forma de substituições conservativas como não conservativas. Estes resíduos também se denominam "aminoácidos não naturais" e podem substituir opcionalmente resíduos de aminoácidos, aminoácidos ou atuar como grupos espaçadores dentro dos péptidos no lugar dos aminoácidos suprimidos. Os resíduos orgânicos peptidomiméticos têm opcional e preferentemente propriedades estéricas, eletrónicas ou de configurações similares às do aminoácido substituído e tais peptidomiméticos são usados para substituir aminoácidos nas posições essenciais, e considera-se substituições conservativas. No entanto, tais similaridades não se requerem necessariamente. De acordo com formas de realização preferidas da presente invenção, são selecionados um ou mais peptidomiméticos de modo que a composição retém pelo menos substancialmente sua atividade fisiológica em comparação com a proteína nativa de acordo com a presente invenção.

Os peptidomiméticos podem ser usados opcionalmente para inibir a degradação dos péptidos por meio de métodos enzimáticos ou outros métodos de degradação. Os peptidomiméticos podem ser produzidos opcional e preferentemente por meio de técnicas de síntese orgânica. Os exemplos não limitativos de peptidomiméticos adequados incluem D aminoácidos dos L aminoácidos correspondentes, tetrazol (Zabrocki et al., J. Am. Chem. Soc. 110: 5875-5880 (1988)); isoésteres de ligações amida (Jones et al., Tetrahedron Lett. 29: 3853-3856 (1988)); ácido LL-3-amino- 2- propenidona-6-carboxilico (LL-Acp) (Kemp et al. , J. Org. Chem. 50: 5834-5838 (1985)). Se mostram análogos similares em Kemp et al., Tetrahedron Lett. 29: 5081-5082 (1988) assim como em Kemp et al., Tetrahedron Lett. 29: 5057-5060 (1988), Kemp et al., Tetrahedron Lett. 29: 4935-4938 (1988) e Kemp et al., J. Org. Chem. 54: 109-115 (1987) . Outros peptidomiméticos adequados, mas por meio de exemplo são mostrados em Nagai e Sato, Tetrahedron Lett. 26: 647-650 (1985); Di Maio et al., J. Chem. Soc. Perkin Trans., 1687 (1985); Kahn et al. , Tetrahedron Lett. 30: 2317 (1989); Olson et al., J. Am. Chem. Soc. 112: 323-333 (1990); Garvey et al. , J. Org. Chem. 56: 436 (1990). Os peptidomiméticos por meio de exemplo adequados adicionais incluem hidroxi- I, 2,3,4-tetrahidroisoquinolina-3-carboxilato (Miyake et al., J. Takeda Res. Labs 43: 53-76 (1989)); 1,2,3,4-tetrahidro- isoquinolina-3-carboxilato (Kazmierski et al., J. Am. Chem. Soc. 133: 2275-2283 (1991)); ácido histidina isoquinolona carboxilico (HIC) (Zechel et al., Int. J. Pep. Protein Res. 43 (1991)); (2S, 3S)-metil-fenilalanina, (2S, 3R)-metil-fenilalanina, (2R, 3S)-metil-fenilalanina e (2R, 3R)-metil-fenilalanina (Kazmierski e Hruby, Tetrahedron Lett. (1991)).

Os aminoácidos não naturais ilustrativos, mas não limitativos, por meio de exemplo incluem beta-aminoácidos (beta3 e beta2), homo-aminoácidos, aminoácidos cíclicos, aminoácidos aromáticos, derivados de Pro e Pyr, derivados 3- excluidos de alanina, derivados de glicina, derivados de Phe e Tyr substituídos no anel, aminoácidos ou diaminoácidos de núcleo linear. Estão disponíveis numa diversidade de provedores, tais como Sigma-Aldrich (USA) por exemplo.

MODIFICAÇÕES QUÍMICAS

Na presente invenção, qualquer parte de uma proteína da invenção pode ser modificada quimicamente de forma opcional, isto é alterada por meio da adição de grupos funcionais. Por exemplo, os resíduos de aminoácido lateral que aparecem na sequência nativa podem ser modificados opcionalmente, embora, tal como é descrito a seguir e, como alternativa, outras partes da proteína podem ser modificadas opcionalmente, além de ou em lugar dos resíduos de aminoácido lateral. A modificação pode ser realizada opcionalmente durante a síntese da molécula se um processo de síntese química for seguido, por exemplo da adição de um aminoácido modificado quimicamente. No entanto, também é possível a modificação química de um aminoácido quando já está presente na molécula (modificação "in situ"). 0 aminoácido de qualquer das regiões da sequência da molécula pode ser modificado opcionalmente de acordo com qualquer um dos seguintes tipos de modificação por meio de exemplo (no péptido visualizado de forma conceituai como "modificado quimicamente"). Os tipos de modificação por meio de exemplo não limitativos incluem carboximetilação, acilação, fosforilação, glicosilação ou acilação gorda. Opcionalmente podem ser usadas ligações de éter para unir o hidroxilo da serina ou treonina ao hidroxilo de um açúcar. Opcionalmente podem ser usadas ligações de amida para unir os grupos carboxilo de glutamato ou aspartato a um grupo amino num açúcar (Garg e Jeanloz, Advances in Carbohydrate Chemistry and Biochemistry, Vol. 43, Academic Press (1985); Kunz, Ang. Chem. Int. Ed. English 26: 294-308 (1987)). Opcionalmente, também podem ser formadas ligações de acetal e cetal entre aminoácidos e hidratos de carbono. Opcionalmente podem ser preparados derivados de acilo de ácido gordo, por exemplo, por acilação de um grupo amino livre (por exemplo, lisina) (Toth et ai., Peptides: Chemistry, Structure and Biology, Rivier e Marshal, eds. , ESCOM Publ., Leiden, 1078-1079 (1990)).

Como é usado no presente documento, a expressão "modificação química", quando se refere a uma proteína ou péptido de acordo com a presente invenção, refere-se a uma proteína ou péptido nos quais pelo menos um de seus resíduos de aminoácidos é modificado por meio de métodos naturais, tais como processamento ou outras modificações posteriores à tradução, ou por meio de técnicas de modificação química que são bem conhecidas na especialidade. Os exemplos das numerosas modificações conhecidas incluem em geral, mas não se limitam a: acetilação, acilação, amidação, ADP-ribosilação, glicosilação, formação de âncora de GPI, ligação covalente de um lípido ou derivado de lípido, metilação, miristilação, pegilação, prenilação, fosforilação, ubiquitinação, ou qualquer processo similar.

Outros tipos de modificações incluem opcionalmente a adição de um resíduo de cicloalcano a uma molécula biológica, tal como uma proteína, como é descrito no Pedido PCT N° WO 2006/050262, que se incorpora pela presente por referência como se fosse apresentado totalmente no presente documento. Estes resíduos projetam-se para utilização com biomoléculas e podem ser usados opcionalmente para transmitir diversas propriedades às proteínas.

Além disso, opcionalmente pode ser modificado qualquer ponto numa proteína. Por exemplo, opcionalmente pode ser realizada a pegilação de um resíduo de glicosilação numa proteína, tal como é descrito no Pedido PCT N° WO 2006/050247, que se incorpora na presente por referência como se fosse apresentado totalmente no presente documento. Opcionalmente pode ser adicionado um ou mais grupos de polietileno glicol (PEG) à glicosilação unida a O e/ou unida a N. O grupo PEG pode ser opcionalmente ramificado ou linear. Opcionalmente, qualquer tipo de polímero solúvel em água pode ser unido a um local de glicosilação numa proteína através de um ligante de glicosilo.

GLICOSILAÇÃO ALTERADA

As proteínas da invenção podem ser modificadas para que tenham um padrão de glicosilação alterado (isto é, alterado a partir do padrão de glicosilação original ou nativo). Como é usado no presente documento, "alterado" significa ter um ou mais resíduos de hidrato de carbono suprimidos, e/ou tem pelo menos um local de glicosilação adicionado à proteína original. A glicosilação de proteínas em geral está unida a N ou unida a 0. Unida a N refere-se à união do resíduo de hidrato de carbono à cadeia lateral de um resíduo de asparagina. As sequências tripeptídicas, asparagina-X-serina e asparagina-X-treonina, nas quais X é qualquer aminoácido exceto prolina, são as espécies de reconhecimento para união enzimática do resíduo de hidrato de carbono à cadeia lateral de asparagina. Portanto, a presença de qualquer destas sequências tripeptídicas num polipéptido cria um local de glicosilação potencial. Glicosilação unida a 0 refere-se à união de um dos açúcares N-acetilgalactosemina, galactose, ou xilose a um hidroxiaminoácido, o mais habitualmente serina ou treonina, embora também possam ser usadas 5-hidroxiprolina ou 5-hidroxilisina. A adição de locais de glicosilação a proteínas da invenção é conseguida de forma conveniente por meio da alteração da sequência de aminoácidos da proteína de modo que contenha uma ou mais das sequências tripeptídicas que foram descritas anteriormente (para locais de glicosilação unidos a N). A alteração também pode ser realizada por meio da adição de, ou substituição com, um ou mais resíduos de serina ou treonina na sequência da proteína original (para locais de glicosilação unidos a 0). A sequência de aminoácidos da proteína também pode ser alterada por meio da introdução de alterações ao nível do ADN.

Outros meios para aumentar o número de resíduos de hidrato de carbono nas proteínas são através de acoplamento químico ou enzimático de glucósidos aos resíduos de aminoácido da proteína. Dependendo do modo de acoplamento usado, os açúcares podem ser unidos a (a) arginina e histidina, (b) grupos carboxilo livre, (c) grupos sulfidrilo livre tais como os de cisteína, (d) grupos hidroxilo livre tais como os de serina, treonina, ou hidroxiprolina, (e) resíduos aromáticos tais como os de fenilalanina, tirosina, ou triptofano, ou (f) o grupo amida da glutamina. Estes métodos são descritos no documento de patente WO 87/05330, e em Aplin e Wriston, CRC Crit. Rev. Biochem., 22: 259-306 (1981). A retirada de qualquer resíduo de hidrato de carbono presente nas proteínas da invenção pode ser conseguida por via química ou por via enzimática. A desglicosilação química requer a exposição da proteína a ácido trifluorometanosulfónico, ou um composto equivalente. Este tratamento tem como resultado a clivagem da maioria ou todos os açúcares exceto o açúcar de união (N-acetilglucosamina ou N-acetilgalactosemina), deixando a sequência de aminoácidos intata. A desglicosilação química é descrita em Hakimuddin et ai., Arch. Biochem. Biophys., 259: 52 (1987); e em Edge et ai., Anal. Biochem., 118: 131 (1981). A clivagem enzimática de resíduos de hidrato de carbono nas proteínas pode ser conseguida por meio da utilização de uma diversidade de endo- e exo-glicosidases tal como é descrito em Thotakura et ai., Meth. Enzymol., 138: 350 (1987).

MÉTODOS DE TRATAMENTO

Tal como foi mencionado anteriormente no presente documento, as proteínas de C10RF32 ou proteínas e polipéptidos de C10RF32 da presente invenção ou sequência de ácidos nucleicos ou fragmentos dos mesmos, especialmente o ectodomínio ou formas segregadas de proteínas de C10RF32, assim como fármacos que se ligam especificamente às proteínas de C10RF32 e/ou variantes splice, e/ou fármacos que agonizam ou antagonizam a união de outros resíduos às proteínas de C10RF32 e/ou variantes splice, e/ou fármacos que modulam (agonizam ou antagonizam) pelo menos uma atividade biológica relacionada com C10RF2 (tais fármacos incluem por meio de exemplo anticorpos, moléculas pequenas, péptidos, ribozimas, moléculas antissense, ARNip e similares), podem ser usados para tratar cancro, que inclui, mas não se limita a tumores não sólidos e sólidos, sarcomas, neoplasias hematológicas que incluem, mas não se limitam a leucemia linfocítica aguda, leucemia linfocítica crónica, leucemia linfocítica crónica, leucemia mielógena crónica, mieloma múltipla, linfoma de Hodgkin, linfoma não Hodgkin, cancro de mama, próstata, pulmão, ovário, cólon, baço, rim, bexiga, cabeça e pescoço, útero, testículos, estômago, colo uterino, fígado, ossos, pele, pâncreas, cérebro e nas quais o cancro pode ser não metastático, invasivo ou metastático.

As proteínas de C10RF32 ou proteínas e polipéptidos de C10RF32 da presente invenção ou sequência de ácidos nucleicos ou fragmentos dos mesmos especialmente o ectodomínio ou formas segregadas de C10RF32, proteínas, assim como fármacos que se ligam especificamente às proteínas de C10RF32 e/ou variantes splice, e/ou fármacos que agonizam ou antagonizam a união de outros resíduos às proteínas de C10RF32 e/ou variantes splice, e/ou fármacos que modulam (agonizam ou antagonizam) pelo menos uma atividade biológica relacionada com C10RF2 (tais fármacos incluem por meio de exemplo anticorpos, moléculas pequenas, péptidos, ribozimas, moléculas antissense, ARNip e similares), podem ser usados para tratar distúrbios não malignos tais como distúrbios imunes que incluem, mas não se limitam a doenças autoimunes, rejeição a transplante e doença de enxerto contra hospedeiro, e/ou para bloquear ou estimular a co-estimulação imune mediada pelo polipéptido de C10RF32.

Portanto, de acordo com um aspeto adicional da presente invenção é proporcionada um método para tratar o cancro, que inclui, mas não se limita a tumores não sólidos e sólidos, sarcomas, neoplasias hematológicas que incluem, mas não se limitam a leucemia linfocitica aguda, leucemia linfocitica crónica, leucemia linfocitica crónica, leucemia mielógena crónica, mieloma múltipla, linfoma de Hodgkin, linfoma No Hodgkin, cancro de mama, próstata, pulmão, ovário, cólon, baço, rim, bexiga, cabeça e pescoço, útero, testículos, estômago, colo uterino, fígado, ossos, pele, pâncreas, cérebro e no qual o cancro pode ser não metastático, invasivo ou metastático assim como distúrbios não malignos tais como distúrbios imunes que incluem, mas não se limitam a doenças autoimunes, rejeição a transplante e doença de enxerto contra hospedeiro, e/ou para bloquear ou estimular a co-estimulação imune mediada pelo polipéptido de C10FR32 num indivíduo. 0 indivíduo de acordo com a presente invenção é um mamífero, preferentemente um ser humano que se diagnostica com um de a doença, distúrbio ou afeções que foram descritos anteriormente no presente documento, ou como alternativa está predisposto pelo menos um tipo de cancro, que inclui, mas não se limita a tumores não sólidos e sólidos, sarcomas, neoplasias hematológicas que incluem, mas não se limitam a leucemia linfocitica aguda, leucemia linfocitica crónica, leucemia linfocitica crónica, leucemia mielógena crónica, mieloma múltipla, linfoma de Hodgkin, linfoma não Hodgkin, cancro de mama, próstata, pulmão, ovário, cólon, baço, rim, bexiga, cabeça e pescoço, útero, testículos, estômago, colo uterino, fígado, ossos, pele, pâncreas, cérebro, assim como distúrbios não malignos tais como distúrbios imunes que incluem, mas não se limitam a doenças autoimunes, rejeição a transplante e doença de enxerto contra hospedeiro.

Como é usado no presente documento, o termo "tratar" refere-se a prevenir, curar, inverter, atenuar, aliviar, minimizar, suprimir ou deter os efeitos prejudiciais das doenças, distúrbios ou afeções que foram descritas anteriormente. 0 tratamento, de acordo com a presente invenção, pode ser realizado por meio de regulação positiva de forma especifica da expressão de pelo menos um dos polipéptidos da presente invenção no indivíduo.

Opcionalmente, a regulação positiva pode ser realizada por meio da administração ao indivíduo de pelo menos um dos polipéptidos da presente invenção (por exemplo, recombinantes ou sintéticos) ou uma parte ativa dos mesmos, tal como é descrito no presente documento. No entanto, dado que a biodisponibilidade de polipéptidos grandes pode ser potencialmente relativamente pequena devido à taxa de degradação elevada e à taxa de penetração baixa, a administração de polipéptido é limitada preferentemente a fragmentos de péptidos pequenos (por exemplo, de aproximadamente 100 aminoácidos) . O polipéptido ou péptido pode ser administrado opcionalmente como parte de uma composição farmacêutica, que se descreve com mais detalhes a seguir.

Será observado que o tratamento das doenças que foram descritas anteriormente de acordo com a presente invenção pode ser combinado com outros métodos de tratamento conhecidos na técnica (isto é, terapêutica de combinação). Portanto, o tratamento de neoplasias usando os agentes da presente invenção pode ser combinado, por exemplo, com terapêutica de radiação, terapêutica de anticorpos e/ou quimioterapia.

Como alternativa ou adicionalmente, opcionalmente pode ser realizado um método de regulação positiva por meio de regulação positiva de forma específica da quantidade (opcionalmente expressão) no indivíduo de pelo menos um dos polipéptidos da presente invenção ou porções ativas dos mesmos.

Tal como foi mencionado anteriormente no presente documento e na seção de Exemplos que se segue, as sequências biomoleculares deste aspeto da presente invenção podem ser usados como ferramentas terapêuticas valiosas no tratamento de doenças, distúrbios ou afeções nos quais sabe-se que a atividade alterada ou a expressão do produto genético de tipo silvestre (proteína conhecida) contribui ao início ou progressão da doença, distúrbio ou afeção. Por exemplo, no caso de que uma doença esteja causada pela sobre-expressão de um recetor unido à membrana, pode ser usada uma variante solúvel do mesmo como um antagonista que compete com o recetor para a união do ligando, para terminar deste modo com a sinalização do recetor.

Anticorpos anti-C10RF32

Os anticorpos da invenção incluindo em particular, os que têm as sequências da linha germinal, anticorpos homólogos, anticorpos com modificações conservativas, anticorpos submetidos a engenharia e modificados são caraterizados por caraterísticas ou propriedades funcionais em particular, dos anticorpos. Por exemplo, os anticorpos ligam-se de forma específica a C10RF32 humano. Preferentemente, um anticorpo da invenção liga-se ao C10RF32 correspondente com alta afinidade, por exemplo com uma KD de 10~8 M ou inferior ou 10~9 M ou inferior ou inclusive IO-10 M ou inferior. Os anticorpos anti-C10RF32 da invenção apresentam preferentemente uma ou mais das seguintes caraterísticas: (i) liga-se ao C10RF32 humano correspondente com uma KD de 5. X 10~8 M ou inferior; (ii) modula (aumenta ou inibe) a co-estimulação imune de B7 e atividades e funcionar relacionadas tais como resposta de linfócitos T envolvidos em imunidade e autoimunidade em antitumoral, e / ou (iii) liga-se ao antigénio de C10RF32 expresso por meio de células cancerígenas que incluem, por exemplo, cancro de pulmão, cancro de ovário, cancro de cólon, mas substancialmente não se liga a células normais. Além disso, estes anticorpos e conjugados dos mesmos serão eficazes preferentemente para provocar a eliminação seletiva de tais células cancerígenas e para modular respostas imunes envolvidas em autoimunidade e cancro.

Mais preferentemente, o anticorpo liga-se ao antigénio de C10RF32 humano correspondente com uma KD de 3 X 10~8 M ou inferior, ou com uma KD de 1 X 10~9 M ou inferior, ou com uma KD de 0,1. X 10”9 M ou inferior, ou com uma KD de 0,05. X 10~9 M ou inferior ou com uma KD entre 1 X 10~9 e 1 X 10 -11 M.

Na técnica são conhecidos ensaios convencionais para avaliar a capacidade de união dos anticorpos para C10RF32, incluindo por exemplo, ELISA, Western blots e RIA. Nos Exemplos são descritos com detalhes ensaios adequados. A cinética de ligação (por exemplo, afinidade de ligação) dos anticorpos também pode ser avaliada por meio de ensaios convencionais conhecidos na técnica, tal como a análise de Biacore.

Depois da produção de anticorpo anti-C10RF32, as sequências de anticorpos podem ser unidas a C10RF32 e as sequências de VH e VL "podem ser misturadas e emparelhadas" para criar outras moléculas de ligação a C10RF32 da invenção. A ligação a C10RF32 de tais anticorpos "misturados e emparelhados" pode ser submetida a ensaio usando os ensaios de ligação que foram descritos anteriormente (por exemplo, ELISA). Preferentemente, quando se misturam e emparelham cadeias de VH e VL, uma sequência de VH a partir de um emparelhamento de VH/VL em particular, substitui-se com uma sequência de VH estruturalmente similar. De forma análoga, preferentemente uma sequência de VL de um emparelhamento de VH/VL em particular, substitui-se com uma sequência de VL estruturalmente similar. Por exemplo, as sequências de VH e VL de anticorpos homólogos são particularmente suscetíveis de mistura e emparelhamento.

ANTICORPOS QUE TÊM SEQUÊNCIAS DA LINHA GERMINAL PARTICULAR

Em certas formas de realização, um anticorpo da invenção compreende uma região variável de cadeia pesada de um gene de imunoglobulina de cadeia pesada da linha germinal particular e/ou uma região variável de cadeia leve de um gene de imunoglobulina de cadeia leve da linha germinal particular.

Como é usado no presente documento, um anticorpo humano compreende regiões variáveis de cadeia pesada ou leve que é "o produto de" ou "derivadas de" uma sequência da linha germinal particular se as regiões variáveis do anticorpo forem obtidas a partir de um sistema que usa genes de imunoglobulinas da linha germinal humana. Tais sistemas incluem a imunização de um ratinho transgénico que portam genes de imunoglobulina humana com o antigénio de interesse ou a identificação sistemática de uma biblioteca de genes de imunoglobulina humana apresentada em fagos com o antigénio de interesse. Um anticorpo humano que é "o produto de" ou "derivado de" uma sequência de imunoglobulina da linha germinal humana pode ser identificado como tal por comparação da sequência de aminoácidos do anticorpo humano às sequências de aminoácidos das imunoglobulinas da linha germinal humana e selecionando a sequência de imunoglobulina da linha germinal humana que tem a sequência mais próxima (isto é, a % de identidade mais elevada) à sequência do anticorpo humano.

Um anticorpo humano que é "o produto de" ou "derivado de" uma sequência de imunoglobulina da linha germinal humana particular, pode conter diferentes aminoácidos em comparação com a sequência da linha germinal, devido a, por exemplo, mutações somáticas de origem natural ou introdução intencionada de mutação dirigida ao local. No entanto, um anticorpo humano selecionado em geral pode ter uma sequência de aminoácidos idêntica em pelo menos 90 % a uma sequência de aminoácidos codificada por um gene de imunoglobulina da linha germinal humana e contém resíduos de aminoácidos que identificam o anticorpo humano como sendo humano quando se compara com as sequências de aminoácidos de imunoglobulina da linha germinal amino de outras espécies (por exemplo, sequências da linha germinal de murino). Em certos casos, um anticorpo humano pode ter uma sequência de aminoácidos idêntica em pelo menos 95, 96, 97, 98 ou 99 %, ou inclusive pode ter uma sequência de aminoácidos idêntica em pelo menos 96 %, 97 %, 98 %, ou 99 % à sequência de aminoácidos codificada pelo gene de imunoglobulina da linha germinal. Em geral, um anticorpo humano derivado de uma sequência da linha germinal humana particular, apresentará não mais de 10 aminoácidos diferentes da sequência de aminoácidos codificada pelo gene de imunoglobulina da linha germinal humana. Em certos casos, o anticorpo humano pode apresentar não mais de 5, ou inclusive não mais de 4, 3, 2, ou 1 aminoácidos diferentes da sequência de aminoácidos codificada pelo gene de imunoglobulina da linha germinal.

ANTICORPOS HOMÓLOGOS

Noutra forma de realização adicional, um anticorpo da invenção compreende regiões variáveis de cadeia pesada e leve que compreendem sequências de aminoácidos que são homólogas às sequências de aminoácidos de antiC10RF32 isolado de anticorpos anti-C10RF32 preferidas, respetivamente, nas quais os anticorpos mantêm as propriedades funcionais desejadas dos anticorpos anti-C10RF32 precursores.

Como é usado no presente documento, a percentagem de homologia entre duas sequências de aminoácidos é equivalente à percentagem de identidade entre as duas sequências. A percentagem de identidade entre as duas sequências é uma função do número de posições idênticas compartidas pelas sequências (isto é, % de homologia = N° de posições idênticas/ N° de posições totais X 100), tendo em conta o número de espaços, e do tamanho de cada espaço, que é necessário introduzir o alinhamento ótimo das duas sequências. A comparação de sequências e a determinação da percentagem de identidade entre sequências podem ser realizadas usando um algoritmo matemático, tal como é descrito nos exemplos não limitativos que se seguem. A percentagem de identidade entre duas sequências de aminoácidos pode ser determinada usando o algoritmo de E. Meyers e W. Miller (Comput. Appl. Biosci., 4: 11-17 (1988)) que foi incorporado no programa ALIGN (versão 2.0), usando um quadro de resíduo de peso de PAM120, uma penalização do tamanho do espaço de 12 e uma penalização do espaço de 4. Além disso, a percentagem de identidade entre duas sequências de aminoácidos pode ser determinada usando o algoritmo de Needleman e Wunsch (J. Mol. Biol. 48: 444-453 (1970)) que foi incorporado no programa GAP e no pacote de software de GCG (disponível no mercado), usando qualquer de uma matriz Bloss62 ou uma matriz PAM250, e um peso de espaço de 16, 14, 12, 10, 8, 6, ou 4 e um peso do tamanho 1, 2, 3, 4, 5 ou 6.

Além disso ou como alternativa, as sequências de proteínas da presente invenção podem ser usadas adicionalmente como uma "sequência de consulta" para realizar uma consulta contra bases de dados públicas, por exemplo, para identificar sequências relacionadas. Tais consultas podem ser realizadas usando o programa XBLAST (versão 2.0) de Altschul, et al. (1990) J Mol. Biol. 215: 403-10. Podem ser realizadas consultas de proteínas com BLAST com o programa XBLAST, pontuação = 50, comprimento da palavra = 3 para obter sequências de aminoácidos homologadas às moléculas de anticorpo da invenção. Para obter alinhamentos com espaços com finalidades de comparação, podem ser usados BLAST com Espaços tal como é descrito em Altschul et ai., (1997) Nucleic Acids Res. 25(17): 3389-3402. Quando são usados os programas BLAST e BLAST com Espaços, podem ser usados os parâmetros padrão dos respetivos programas (por exemplo, XBLAST e NBLAST). Anticorpos com modificações conservativas

Em certas formas de realização, um anticorpo da invenção compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende sequências de CDRl, CDR2 e CDR3 e uma região variável de cadeia leve que compreende sequências de CDRl, CDR2 e CDR3, nas quais uma ou mais destas sequências de CDR compreendem sequências de aminoácidos especificadas com base em anticorpos anti-C10RF32 deferentes isolados e produzidos usando métodos no presente documento, ou modificações conservativas das mesmas, e nas quais os anticorpos mantêm as propriedades funcionais desejadas dos anticorpos antiC10RF32 da invenção, respetivamente.

Em diversas formas de realização, os anticorpos anti-C10RF32 podem ser, por exemplo, anticorpos humanos, anticorpos humanizados ou anticorpos quiméricos.

Como é usado no presente documento, a expressão "modificações conservativas de sequência" pretende fazer referência a modificações em aminoácidos que não afetam de forma significativa nem alteram as caraterísticas de ligação do anticorpo que contém a sequência de aminoácidos. Tais modificações conservativas incluem substituições, adições e supressões de aminoácidos. Podem ser introduzidas modificações num anticorpo da invenção por meio de técnicas convencionais conhecidas na especialidade, tais como mutagénese dirigida ao local e mutagénese mediada por PCR. As substituições conservativas de aminoácidos são aquelas nas quais o resíduo de aminoácido é substituído com um resíduo de aminoácido que tem uma cadeia lateral similar. Na técnica foram definidas famílias de resíduos de aminoácidos que têm cadeias laterais similares. Estas famílias incluem aminoácidos com cadeias laterais básicas (por exemplo, lisina, arginina, histidina), cadeias laterais ácidas (por exemplo, ácido aspártico, ácido glutâmico), cadeias laterais polares sem carga (por exemplo, glicina, asparagina, glutamina, serina, treonina, tirosina, cisteína, triptofano), cadeias laterais não polares (por exemplo, alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, metionina), cadeias laterais beta-ramificadas (por exemplo, treonina, valina, isoleucina) e cadeias laterais aromáticas (por exemplo, tirosina, fenilalanina, triptofano, histidina). Portanto, um ou mais resíduos de aminoácidos dentro das regiões de CDR de um anticorpo da invenção podem ser substituídos com outros resíduos de aminoácidos da mesma família de cadeia lateral e o anticorpo alterado pode ser submetido a ensaio para a função retida (isto é, as funções que se estabelecem em (c) a (j) mencionados anteriormente) usando os ensaios funcionais que são descritos no presente documento.

Anticorpos que se ligam ao mesmo epítopo como anticorpos anti-C10RF32 da invenção

Noutra forma de realização, a invenção proporciona anticorpos que se ligam a epítopo preferidos em C10RF32 humano que possuem propriedades funcionais desejadas tais como modulação da co-estimulação de B7 e funções relacionadas. Podem ser selecionados outros anticorpos com especificidade desejada para o epítopo e terão a capacidade de competir de forma cruzada para a ligação ao antigénio de C10RF32 com os anticorpos desejados.

ANTICORPOS MODIFICADOS POR ENGENHARIA E MODIFICADOS

Um anticorpo da invenção pode ser preparado adicionalmente usando um anticorpo que tem uma ou mais das sequências de VH e/ou VL derivadas de um material de partida de anticorpo anti-C10RF32 para modificar por engenharia um anticorpo modificado, cujo anticorpo modificado pode ter propriedades alteradas com relação ao anticorpo de partida. Um anticorpo pode ser modificado por engenharia modificando um ou mais resíduos dentro de uma ou ambas as regiões variáveis (isto é, VH e/ou VL) , por exemplo dentro de uma ou mais regiões de CDR e/ou dentro de uma ou mais regiões estruturais. Além disso ou como alternativa, um anticorpo pode ser modificado por engenharia modificando resíduos dentro das regiões constantes, por exemplo para alterar as funções efetoras do anticorpo.

Um tipo de modificação por engenharia de região variável que pode ser realizado é enxerto de CDR. Os anticorpos interagem com antigénios alvo predominantemente através de resíduos de aminoácidos que se encontram nas seis regiões que determinam a complementaridade de cadeia pesada e leve (CDR) . Por esta razão, as sequências de aminoácidos dentro das CDR são mais diversas entre anticorpos individuais que as sequências fora das CDR. Dado que as sequências de CDR são responsáveis pela maioria das interações de anticorpo-antigénio, é possível expressar anticorpos recombinantes que imitam as propriedades de anticorpos de origem natural específicos por meio da construção de vetores de expressão que incluem sequências de CDR a partir do anticorpo de origem natural específico enxertado em sequências estruturais a partir de um anticorpo diferente com propriedades diferentes (veja-se, por exemplo, Riechmann, L. et ai. (1998) Nature 332: 323-327; Jones, P. et al. (1986) Nature 321: 522-525; Queen, C. et al. (1989) Proc. Natl. Acad. See. U.S.A. 86: 10029-10033; documento de Patente dos Estados Unidos N° 5.225.539 de Winter, e os documentos de Patente dos Estados Unidos com números 5.530.101; 5.585.089; 5.693.762 e 6.180.370 de Queen et al.)

Podem ser obtidas sequências estruturais adequadas a partir de bases de dados públicas de ADN ou referências publicadas que incluem sequências de genes de anticorpos da linha germinal. Por exemplo, as sequências de ADN da linha germinal para genes de região variável de cadeia pesada e leve humana podem ser encontradas na base de dados de sequências da linha germinal humana "VBase" (disponível em Internet), assim como em Rabat, E. A., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Quinta Edição, Departamentode Saúde e Serviços Humanos dos Estados Unidos, Publicação de NIH N° 91-3242; Tomlinson, I. M., et al. (1992) "The Repertoire of Human Germline VH Sequences Reveals about Fifty Groups of VH Segments with Different Hypervariable Loops" J. Mol. Biol. 227: 776-798; e Cox, J. P. L. et al. (1994) "A Diretory of Human Germ-line VH Segments Reveals a Strong Bias in their Usage" Eur. J Immunol. 24: 827-836; cujos conteúdos são incorporados de forma expressamente no presente documento por referência.

Outro tipo de modificação da região variável é mutar resíduos de aminoácidos dentro das regiões CDR 1, CDR2 e/ou CDR3 de VH e/ou VL para melhorar, deste modo, as propriedades de ligação (por exemplo, afinidade) do anticorpo de interesse. Pode ser realizada a mutagénese dirigida ao local ou mutagénese mediada por PCR para introduzir as mutações e o efeito na ligação ao anticorpo, ou outra propriedade funcional de interesse, pode ser avaliada em ensaios apropriados in vitro ou in vivo. São introduzidas modificações preferentemente conservativas (tal como foi discutido anteriormente). As mutações podem ser substituições, adições ou supressões de aminoácidos, mas são preferentemente substituições. Além disso, em geral, altera-se não mais de um, dois, três, quatro ou cinco resíduos dentro de uma região de CDR.

Os anticorpos modificados por engenharia da invenção incluem aqueles nos quais foram realizadas modificações a resíduos estruturais dentro de VH e/ou VL, por exemplo para melhorar as propriedades do anticorpo. Em geral, tais modificações estruturais realizam-se para diminuir a imunogenicidade do anticorpo. Por exemplo, uma abordagem é realizar a "retromutação" de um ou mais resíduos estruturais à correspondente sequência da linha germinal. Mais especificamente, um anticorpo que tenha passado por mutação somática pode conter resíduos estruturais que diferem da sequência de linha germinal a partir da qual se deriva o anticorpo. Tais resíduos podem ser identificados por comparação das sequências estruturais do anticorpo com as sequências da linha germinal a partir das quais se deriva o anticorpo.

Além disso ou como alternativa às modificações realizadas dentro das regiões estruturais ou de CDR, os anticorpos da invenção podem ser modificados por engenharia para que incluam modificações dentro da região de Fc, em geral, para alterar uma ou mais propriedades funcionais do anticorpo, tais como semivida em soro, fixação de complementos, ligação do recetor de Fc, e/ou citotoxicidade celular dependente de antigénio. Além disso, um anticorpo da invenção pode ser modificado quimicamente (por exemplo, um ou mais resíduos químicos podem ser unidos ao anticorpo) ou modificados para alterar sua glicosilação, de novo para alterar uma ou mais propriedades funcionais do anticorpo. Tais formas de realização são descritas adicionalmente a seguir. A numeração dos resíduos na região de Fc é a do índice EU de Rabat.

Numa forma de realização, a região de dobradiça de CHI é modificada de modo que se altere o número de resíduos de cisteína na região de dobradiça, por exemplo, aumente ou diminua. Esta abordagem é descrita adicionalmente no documento de Patente dos Estados Unidos N° 5.677.425 de

Bodmer et al. o número de resíduos de cisteína na região de dobradiça de CHI altera-se, por exemplo, para facilitar a montagem das cadeias leve e pesada ou para aumentar ou diminuir a estabilidade do anticorpo.

Noutra forma de realização, a região de dobradiça de Fc de um anticorpo está mutada para diminuir a semivida biológica do anticorpo. Mais especificamente, é introduzida uma ou mais mutações de aminoácidos na região de superfície de contato do domínio CH2-CH3 do fragmento de Fc-dobradiça de modo que o anticorpo tem ligação a proteína A de Staphylococcyl (SpA) alterada com relação à união de SpA do domínio de Fc-dobradiça nativo. Esta abordagem é descrita com detalhes adicionais no documento de Patente dos Estados Unidos N° 6.165.745 de Ward et al.

Noutra forma de realização, o anticorpo é modificado para aumentar sua semivida biológica. São possíveis diversas abordagens. Por exemplo, pode ser introduzida uma ou mais das seguintes mutações: T252L, T254S, T256F, tal como é descrito no documento de Patente dos Estados Unidos N° 6.277.375 de Ward. Como alternativa, para aumentar a semivida biológica, o anticorpo pode ser alterado dentro da região CHI ou CL um epítopo de ligação ao recetor de recuperação tomado a partir de duas alças de um domínio de CH2 de uma região de Fc de uma IgG, tal como se descreve nos documentos de Patente dos Estados Unidos com números 5.869.046 e 6.121.022 de Presta et al.

Além disso, noutras formas de realização, a região de Fc altera-se por substituição de pelo menos um resíduo de aminoácido com um resíduo de aminoácido diferente para alterar as funções efetoras do anticorpo. Por exemplo, um ou mais aminoácidos selecionados a partir dos resíduos de aminoácidos 234, 235, 236, 237, 297, 318, 320 e 322 podem ser substituídos com um resíduo de aminoácido diferente de modo que o anticorpo tem uma afinidade alterada para um ligando efetor, mas mantém a capacidade de ligação ao antigénio do anticorpo precursor. 0 ligando efetor ao qual pode ser alterada a afinidade pode ser, por exemplo, um recetor de Fc ou o componente Cl do complemento. Esta abordagem é descrita com detalhes adicionais nos documentos de Patente dos Estados Unidos com números 5.624.821 e 5.648.260, ambos de Winter et al.

Noutro exemplo, um ou mais aminoácidos selecionados a partir dos resíduos de aminoácidos 329, 331 e 322 podem ser substituídos com um resíduo de aminoácido diferente de modo que o anticorpo tem a ligação a Clq alterada e/ou reduzida ou citotoxicidade dependente do complemento suprimida (CDC) . Esta abordagem é descrita com detalhes adicionais nos documentos de Patente dos Estados Unidos com números 6.194.551 de Idusogie et al.

Noutro exemplo, um ou mais resíduos de aminoácidos dentro das posições dos aminoácidos 231 e 239 são alterados para alterar deste modo a capacidade do anticorpo para fixar-se ao complemento. Esta abordagem é descrita adicionalmente na Publicação PCT do documento de patente WO 94/29351 de Bodmer et al.

Além disso, noutro exemplo, a região de Fc é modificada para aumentar a capacidade do anticorpo para mediar a citotoxicidade celular dependente de anticorpo (ADCC) e/ou para aumentar a afinidade do anticorpo para um recetor de Fcy por modificação de um ou mais aminoácidos nas seguintes posições: 238, 239, 248, 249, 252, 254, 255, 256, 258, 265, 267, 268, 269, 270, 272, 276, 278, 280, 283, 285, 286, 289, 290, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 301, 303, 305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 324, 326, 327, 329, 330, 331, 333, 334, 335, 337, 338, 340, 360, 373, 376, 378, 382, 388, 389, 398, 414, 416, 419, 430, 434, 435, 437, 438 ou 439. Esta abordagem é descrita adicionalmente na Publicação PCT do documento de patente WO 00/42072 de Presta. Além disso, foram realizados mapas dos locais de ligação na IgGl humana para Fc gama, Fc gama RII, Fc gama RIII e FcRn e foram descritas variantes com aumento da união (veja-se Shields, R. L. et al. (2001) J. Biol. Chem. 276: 6591-6604) . São mostradas mutações especificas nas posições 256, 290, 298, 333, 334 e 339 para aumentar a ligação a FcyRIII. Além disso, são mostrados os seguintes mutantes de coordenação para melhorar a ligação a Fc gama. RIII: T256A/S298A, S298A/E333A, S298A/K224A e S298A/E333A/K334A.

Além disso, noutra forma de realização, é modificada a glicosilação do anticorpo. Por exemplo, pode ser preparado um anticorpo aglicoslado (isto é, o anticorpo carece de glicosilação). A glicosilação pode ser alterada, por exemplo, para aumentar a afinidade do anticorpo para o antigénio. Tais modificações de hidratos de carbono podem ser realizadas, por exemplo, alterando um ou mais locais de glicosilação dentro da sequência do anticorpo. Por exemplo, pode ser realizada uma ou mais substituições de aminoácidos que têm como resultado a eliminação de um ou mais locais de glicosilação estruturais da região variável para eliminar deste modo a glicosilação neste local. Tal glicosilação pode aumentar a afinidade do anticorpo para o antigénio. Tal abordagem é descrita com detalhes adicionais nos documentos de Patente dos Estados Unidos com números 5.714.350 e 6.350.861 de Co et al.

Além disso ou como alternativa, pode ser preparado um anticorpo que tem algum tipo de glicosilação alterada, tal como um anticorpo hipofucosilado que tem quantidades reduzidas de resíduos de fucosilo ou um anticorpo que tem aumento de estruturas de GlcNac de bisseção. Demonstrou-se que tais padrões de glicosilação aumentam a capacidade de ADCC dos anticorpos. Tais modificações de hidratos de carbono podem ser realizadas, por exemplo, por meio da expressão do anticorpo numa célula hospedeira com maquinaria de glicosilação alterada. Na técnica foram descritas células com maquinaria de glicosilação alterada e podem ser usadas como células hospedeiras nas quais expressar anticorpos recombinantes da invenção para produzir deste modo um anticorpo com glicosilação alterada. Por exemplo, as linhas celulares Ms704, Ms705, e Ms709 carecem do gene da fucosiltransferase, FUT8 (alfa (1,6) fucosiltransferase), de modo que os anticorpos expressos nas linhas celulares de Ms704, Ms705, e Ms709 carecem de fucose em seus hidratos de carbono. As linhas celulares Ms704, Ms705, e Ms709 FUT8.-/- são criadas por meio de alteração fixa como alvo do gene FUT8 em células CHO/DG44 usando dois vetores de substituição (veja-se a Publicação de Patente dos Estados Unidos N° 20040110704 de Yamane et al. e Yamane-Ohnuki et ai. (2004) Biotechnol Bioeng 87: 614-22) . Como outro exemplo, o documento de patente EP 1.176.195 de Hanai et al. descreve uma linha celular com um gene de FUT8 alterado funcionalmente, que codifica uma fucosil transferase, de modo que os anticorpos expressos em tal linha celular apresentam hipofucosilação por meio de redução ou eliminação da enzima relacionada com a ligação alfa 1,6. Hanai et al. também descrevem linhas celulares que têm uma atividade enzimática baixa para adicionar fucose à N-acetilglucosamina que se liga à região Fc do anticorpo ou não tem atividade enzimática, por exemplo a linha celular YB2/0 de mieloma de rato (ATCC CRL 1662) . A Publicação PCT do documento de patente WO 03/035835 de Presta descreve uma linha celular de CHO variável, células Lecl3, com capacidade reduzida para unir fucose a hidratos de carbono unidos a Asn (297), dando também como resultado a hipofucosilação de anticorpos expressos nessa célula hospedeira (veja-se também Shields, R. L. et al. (2002) J. Biol. Chem. 277: 26733-26740) . A Publicação PCT do documento de patente WO 99/54342 de Umana et al. descreve linhas celulares modificadas por engenharia para expressar glicosil transferases que modificam glicoproteinas (por exemplo, beta(1,4)-N-acetilglucosaminiltransferase III (GnTIII)) de modo que os anticorpos expressos nas linhas celulares modificadas por engenharia apresentam aumento de estruturas de GlcNac de bisseção que têm como resultado um aumento da atividade de ADCC dos anticorpos (veja-se também Umana et al. (1999) Nat. Biotech. 17: 176-180) . Como alternativa, os resíduos de fucose do anticorpo podem ser retirados por clivagem usando uma enzima fucosidase. Por exemplo, a fucosidase alfa-L-fucosidase retira resíduos de fucosilo dos anticorpos (Tarentino, A. L. et al. (1975) Biochem. 14: 5516-23).

Outra modificação dos anticorpos no presente documento que se contempla na invenção é a pegilação. Um anticorpo pode ser pegilado, por exemplo, para aumentar a semivida biológica (por exemplo, soro) do anticorpo. Para pegilar um anticorpo, o anticorpo, ou fragmento do mesmo, em geral, faz-se reagir com polietileno glicol (PEG), tal como um éster reativo ou derivado de aldeído de PEG, sob condições nas quais um ou mais grupos de PEG começam a ficar unidos ao anticorpo ou fragmento de anticorpo. Preferentemente, a pegilação é realizada através de uma reação de acilação ou uma reação de alquilação com uma molécula de PEG reativa (ou um polímero solúvel em água reativo análogo). Como é usado no presente documento, o termo "polietileno glicol" pretende incluir qualquer das formas de PEG que foram usadas para derivatizar outras proteínas, tal como mono alcoxi (Ci-Cio) - ou ariloxi-polietileno glicol ou polietileno glicol-maleimida. Em certas formas de realização, o anticorpo a pegilar é um anticorpo aglicosilado. Na técnica são conhecidos métodos para pegilar proteínas e podem ser aplicadas aos anticorpos da invenção. Veja-se por exemplo, o documento de patente EP 0 154 316 de Nishimura et al. e o documento de patente EP 0 401 384 de Ishikawa et al.

MÉTODOS PARA MODIFICAR ANTICORPOS POR ENGENHARIA

Como foi discutido anteriormente, os anticorpos anti-C10RF32 que têm sequências de VH e VK que se revelam no presente documento podem ser usados para criar novos anticorpos anti-C10RF32, respetivamente, por modificação das sequências de VH e/ou VL, ou as regiões constantes unidas aos mesmos. Portanto, noutro aspeto da invenção, as caraterísticas estruturais de um anticorpo anti-C10RF32, da invenção, são usados para criar anti-C10RF32 relacionados de forma estrutural; os anticorpos que retêm pelo menos uma propriedade funcional dos anticorpos da invenção, tal ligação a C10RF32 humano. Por exemplo, uma ou mais regiões de CDR de um anticorpo C10RF32 ou mutações do mesmo, podem ser combinadas de forma recombinante com regiões estruturais conhecidas e/ou outras CDR para criar anticorpos anti-C10RF32 adicionais, modificados por engenharia de forma recombinante da invenção, tal como foi discutido anteriormente. Outros tipos de modificações incluem as que são descritas na seção anterior. 0 material de partida para o método de modificação por engenharia é uma ou mais das sequências de VH e/ou VK proporcionadas no presente documento, ou uma ou mais regiões de CDR das mesmas. Para criar o anticorpo modificado por engenharia, realmente não é necessário preparar (isto é, expressar como uma proteína) um anticorpo que têm uma ou mais das sequências de VH e/ou VK proporcionadas no presente documento, ou uma ou mais as regiões de CDR das mesmas. Ao invés disso, a informação contida nas sequências é usada como o material de partida para criar uma sequência de "segunda geração" derivada das sequências originais e a seguir a sequência de "segunda geração" é preparada e expressa como uma proteína.

Podem ser usadas técnicas convencionais de biologia molecular para preparar e expressar a sequência de anticorpo alterado.

Preferentemente, o anticorpo codificado pelas sequências de anticorpo alterado é um que mantém uma, algumas ou todas as propriedades funcionais dos anticorpos anti-C10F32; produzido com métodos e com sequências proporcionadas no presente documento, cujas propriedades funcionais incluem ligação ao antigénio de C10RF32 com um nivel de KD especifico ou inferior e/ou a modulação da co-estimulação de B7 e/ou união de forma seletiva a células alvo desejadas tais como cancro de pulmão, cancro de ovário, cancro de cólon, que expressam o antigénio de C10RF32.

As propriedades funcionais dos anticorpos alterados se podem avaliar usando ensaios convencionais disponíveis na técnica e/ou que são descritas no presente documento.

Em certas formas de realização dos métodos de modificação por engenharia dos anticorpos da invenção, podem ser introduzidas mutações de forma aleatória ou de forma seletiva ao longo de toda ou parte de uma sequência que codifica o anticorpo anti-C10RF32 e os anticorpos anti-C10RF32 modificados resultantes podem ser identificados sistematicamente para atividade de ligação e/ou outras propriedades funcionais desejadas.

Foram descritos na técnica métodos de mutação. Por exemplo, a Publicação PCT do documento de patente WO 02/092780 de Short descreve métodos para criar e identifica sistematicamente mutações de anticorpos usando mutagénese de saturação, montagem de ligação sintética, ou uma combinação dos mesmos. Como alternativa, a Publicação PCT do documento de patente WO 03/074679 de Lazar et al. descreve métodos para usar métodos de identificação sistemática computacional para otimizar as propriedades físico-químicas dos anticorpos.

MOLÉCULAS DE ÁCIDO NUCLEICO QUE CODIFICAM ANTICORPOS DA INVENÇÃO

Outro aspeto da invenção refere-se a moléculas de ácido nucleico que codificam os anticorpos da invenção. Os ácidos nucleicos podem estar presentes em células completas, num lisado celular, ou numa forma parcialmente purificada ou substancialmente pura. Um ácido nucleico está "isolado" ou "tornado substancialmente puro" quando se purifica mais além de outros componentes celulares ou outros contaminantes, por exemplo, outros ácidos nucleicos ou proteínas celulares, por meio de técnicas convencionais, incluindo tratamento alcalino/SDS, formação de bandas de CsCl, cromatografia em coluna, eletroforese em gel de agarose e outras técnicas bem conhecidas na especialidade. Veja-se, F. Ausubel, et al., ed. (1987) Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing and Wiley Interscience, Nova York. Um ácido nucleico da invenção pode ser, por exemplo, ADN ou ARN e pode conter ou não sequências intrónicas. Numa forma de realização preferida, o ácido nucleico é uma molécula de ADNc.

Os ácidos nucleicos da invenção podem ser obtidos usando técnicas convencionais de biologia molecular. Para anticorpos expressos por meio de hibridomas (por exemplo, hibridomas preparados a partir de ratinhos transgénicos que portam genes de imunoglobulina humana tal como é descrito adicionalmente a seguir), podem ser obtidos ADNc que codificam as cadeias leve e pesada do anticorpo preparado por meio do hibridoma por meio de amplificação convencional de PCR ou técnicas de clonagem de ADNc. Para anticorpos obtidos a partir de uma biblioteca de genes de imunoglobulina (por exemplo, usando técnicas de apresentação de fagos), o ácido nucleico que codifica o anticorpo pode ser recuperado a partir da biblioteca.

Uma vez que tenham sido obtidos fragmentos de ADN que codificam segmentos de VH e VL, estes fragmentos de ADN podem ser manipulados adicionalmente por meio de técnicas convencionais de ADN recombinante, por exemplo para converter os genes da região variável em genes de cadeia de anticorpo de comprimento completo, em genes de fragmento de Fab ou para um gene de scFv. Nestas manipulações, um fragmento de ADN que codifica VL ou VH liga-se de forma operativa a outro fragmento de ADN que codifica outra proteína, tal como uma região constante de anticorpo ou um ligante flexível. A expressão "ligado de forma operativa", tal como se usa neste contexto, pretende indicar que os dois fragmentos de ADN se ligam de modo que as sequências de aminoácidos codificadas pelos dois fragmentos de ADN permanece em estrutura. 0 ADN isolado que codifica a região VH pode ser convertido num gene de cadeia pesada de comprimento completo ligando de forma operativa o ADN que codifica a VH com outra molécula de ADN que codifica regiões constantes de cadeia pesada (CHI, CH2 e CH3) . As sequências de genes de região constante de cadeia pesada humana são conhecidas na técnica (veja-se por exemplo, Rabat, E. A., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Quinta Edição, Departamento de Saúde e Serviços Humanos dos Estados Unidos, Publicação de NIH N° 91-3242) e fragmentos de ADN que incluem estas regiões podem ser obtidos por meio de amplificação de PCR convencional. A região constante de cadeia pesada pode ser uma região constante de IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgE, IgM ou IgD, mas o mais preferentemente é uma região constante de IgGl ou IgG4. Para um gene de cadeia pesada de fragmento de Fab, o ADN que codifica a VH pode ser ligado de forma operativa a outra molécula de ADN que codifica somente a região constante CHI de cadeia pesada. 0 ADN isolado que codifica a região VL pode ser convertido num gene de cadeia leve de cadeia completa (assim como um gene de cadeia leve de Fab) ligando de forma operativa o ADN que codifica a VL noutra molécula de ADN que codifica a região constante de cadeia leve, CL. As sequências de genes de região constante de cadeia leve humana são conhecidos na técnica (veja-se por exemplo, Rabat, E. A., et al. (1991) Sequences of Proteins of

Immunological Interest, Quinta Edição, Departamento de Saúde e Serviços Humanos dos Estados Unidos, Publicação de NIH N° 91-3242) e fragmentos de ADN que incluem estas regiões podem ser obtidas por meio de amplificação de PCR convencional. A região constante e cadeia leve pode ser uma região constante capa ou lambda, mas o mais preferentemente é uma região constante capa.

Para criar um gene de scFv, os fragmentos de ADN que codificam VH e VL ligam-se de forma operativa a outro fragmento que codifica um ligante flexível, por exemplo, que codificam a sequência de aminoácidos (Gly4-Ser)3, de modo que as sequências de VH e VL podem ser expressas como uma proteína contígua de cadeia simples, com as regiões VL e VH unidas pelo ligante flexível (veja-se por exemplo, Bird et al. (1988) Science 242: 423-426; Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 85: 5879-5883; McCafferty et al., (1990) Nature 348: 552-554).

Produção de Anticorpos Monoclonais Anti-VSIGl, Anti-ILDRl, AntÍ-LOC253012 , Anti-Al216611, Anti-C10RF32 , ou Anti-FXYD3 da Invenção

Os anticorpos monoclonais (mAb) da presente invenção podem ser produzidos por meio de uma diversidade de técnicas, que incluem metodologia convencional de anticorpo monoclonal por exemplo, a técnica convencional de hibridação de células somáticas de Kohler e Milstein (1975) Nature 256: 495. Embora, em princípio, sejam precedentes os métodos de hibridação de células somáticas, podem ser usadas outras técnicas para produzir anticorpos monoclonais por exemplo, transformação virai ou oncogénica de linfócitos B.

Um sistema animal preferido para preparar hibridomas é o sistema murino. A produção de hibridoma no ratinho é um método muito bem estabelecido. Na técnica são conhecidos protocolos e técnicas de imunização para isolamento de esplenócitos imunizados para fusão. Também são conhecidos parceiros de fusão (por exemplo, células de mieloma murino) e procedimentos de fusão.

Podem ser preparados anticorpos quiméricos ou humanizados da presente invenção com base na sequência de um anticorpo monoclonal murino preparado tal como foi descrito anteriormente. 0 ADN que codifica as imunoglobulinas de cadeia pesada e leve pode ser obtido a partir do hibridoma murino de interesse e modifica por engenharia para conter sequências de imunoglobulina não murina (por exemplo, humana) usando técnicas convencionais de biologia molecular. Por exemplo, para criar um anticorpo quimérico, as regiões variáveis de murino podem ser unidas a regiões constantes humanas usando métodos conhecidos na técnica (veja-se por exemplo, documento de Patente dos Estados Unidos N° 4.816.567 de Cabilly et al.) . Para criar um anticorpo humanizado, as regiões de CDR murino podem ser inseridas numa estrutura humana usando métodos conhecidos na técnica (veja-se por exemplo, o documento de Patente dos Estados Unidos N° 5.225.539 de Winter, e os documentos de Patente dos Estados Unidos com números 5.530.101; 5.585.089; 5.693.762 e 6.180.370 de Queen et al.).

Numa forma de realização preferida, os anticorpos da invenção são anticorpos monoclonais humanos. Tais anticorpos monoclonais humanos dirigidos contra VSIG1 podem ser gerados usando ratinhos transgénicos ou transcromossómicos que portam partes do sistema imune humano em lugar do sistema de ratinho. Estes ratinhos transgénicos e transcromossómicos incluem ratinhos denominados no presente documento RTM de Ratinho HuMAb e RTM de Ratinho KM., respetivamente, e no presente documento denominam-se de forma coletiva "ratinhos Ig humanos". O TM. de Ratinho HuMAb (Medarex. Inc.) contém minilocais de gene de imunoglobulina humana que codificam sequências de imunoglobulina sem reorganizar de cadeia pesada (mu e gama) e leve capa humanas, juntamente com mutações fixas como alvo que inativam os locais endógenos de cadeia mu e capa (veja-se por exemplo, Lonberg, et al. (1994) Nature 368 (6474) : 856-859) . Por conseguinte, os ratinhos apresentam expressão reduzida de IgM ou capa de ratinho, e como resposta a imunização, os transgenes de cadeia pesada e leve introduzidos passam por permuta de classes e mutação somática para gerar IgG capa monoclonal humana de alta afinidade (Lonberg, N. et al. (1994), mencionado anteriormente; revisado em Lonberg, N. (1994) Handbook of Experimental Pharmacology 113: 49-101; Lonberg, N. e Huszar, D. (1995) Intern. Rev. Immunol. 13: 65-93, e Harding, F. e Lonberg, N. (1995) Ann. N.E. Acad. Sei. 764: 536-546) . A preparação e utilização do TM. de Ratinho HuMAb., e as modificações genómicas que portam tais ratinhos, são descritas adicionalmente em Taylor, L. et al. (1992) Nucleic Acids Research 20: 6287-6295; Chen, J. et al. (1993) International Immunology 5: 647-656; Tuaillon et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 90: 3720-3724; Choi et al. (1993) Nature Genetics 4: 117-123; Chen, J. et al. (1993) EMBO J. 12: 821-830; Tuaillon et al. (1994) J. Immunol. 152: 2912-2920; Taylor, L. et al. (1994) International Immunology 6: 579-591; e Fishwild, D. et al. (1996) Nature Biotechnology 14: 845-851, cujos conteúdos são incorporados especificamente pela presente por referência em sua totalidade. Vejam-se adicionalmente, os documentos de Patente dos Estados Unidos com números 5.545.806; 5.569.825; 5.625.126; 5.633.425; 5.789.650; 5.877.397; 5.661.016; 5.814.318; 5.874.299; e 5.770.429; todos de Lonberg e Kay; documento de Patente dos Estados Unidos N° 5.545.807 de Surani et al. ; Publicações PCT dos documentos de patente com números WO 92/03918, WO 93/12227, WO 94/25585, WO 97/13852, WO 98/24884 e WO 99/45962, todas de Lonberg e Kay; e Publicação PCT do documento de patente N° WO 01/14424 de Korman et al.

Noutra forma de realização, os anticorpos humanos da invenção podem ser aumentados usando um ratinho que porta sequências de imunoglobulina humana em transgenes e transcromossomas, tal como um ratinho que porta um transgene de cadeia pesada humana e um transcromossoma de cadeia leve humana. Tais ratinhos, denominados no presente documento "TM. de ratinhos KM", são descritos com detalhes na Publicação PCT do documento de patente WO 02/43478 de Ishida et al.

Além disso, adicionalmente, na técnica estão disponíveis sistemas alternativos de animais transgénicos que expressam genes de imunoglobulina humana e podem ser usados para aumentar os anticorpos anti-VSIGl da invenção. Por exemplo, pode ser usado um sistema transgénico alternativo denominado Xenomouse (Abgenix, Inc.); tais ratinhos são descritos, por exemplo, nos documentos de Patente dos Estados Unidos com números 5.939.598; 6.075.181; 6.114.598; 6.150.584 e 6.162.963 de Kucherlapati et al.

Além disso, na técnica estão disponíveis sistemas alternativos de animais transcromossómicos que expressam genes de imunoglobulina humana e podem ser usados para aumentar os anticorpos anti-C10RF32 da invenção. Por exemplo, podem ser usados ratinhos que portam tanto um transcromossoma de cadeia pesada humana como um transcromossoma de cadeia leve humana, denominados "ratinhos TC"; tais ratinhos são descritos em Tomizuka et al. (2000) Proc. Natl. Acad Sei. USA 97: 722-727 . Além disso, na técnica foram descritas vacas que portam transcromossomas de cadeia pesada e leve (Kuroiwa et al. (2002) Nature Biotechnology 20: 889-894) e podem ser usados para aumentar os anticorpos anti-VSIGl.

Também podem ser preparados anticorpos monoclonais da invenção usando métodos de apresentação de fagos para bibliotecas de identificação sistemática de genes de imunoglobulina humana. Na técnica são estabelecidos tais métodos de apresentação de fagos para isolar anticorpos humanos. Veja-se por exemplo: documentos de Patente dos Estados Unidos com números 5.223.409; 5.403.484; e 5.571.698 de Ladner et al.; documentos de Patente dos Estados Unidos com números 5.427.908 e 5.580.717 de Dower et al.; documentos de Patente dos Estados Unidos com números 5.969.108 e 6.172.197 de McCafferty et al.; e documentos de Patente dos Estados Unidos com números 5.885.793; 6.521.404; 6.544.731; 6.555.313; 6.582.915 e 6.593.081 de Griffiths et al.

Os anticorpos monoclonais humanos da invenção também devem ser preparados usando ratinhos SCID nos quais foram reconstituídas células imunes humanas tal que uma resposta ao anticorpo humano pode ser gerada depois da imunização. Tais ratinhos são descritos, por exemplo, nos documentos de Patente dos Estados Unidos com números 5.476.996 e 5.698.767 de Wilson et al.

IMUNIZAÇÃO DE RATINHOS IG HUMANOS

Quando são usados ratinhos Ig humanos para aumentar os anticorpos humanos da invenção, tais ratinhos podem ser imunizados com uma preparação purificada ou enriquecida de antigénio de C10RF32 e/ou C10RF32 recombinante, ou proteína de fusão de C10RF32, tal como é descrito em Lonberg, N. et al. (1994) Nature 368 (6474): 856-859; Fishwild, D. et al. (1996) Nature Biotechnology 14: 845-851; e na Publicação PCT do documento de patente WO 98/24884 e no documento de patente WO 01/14424. Preferentemente, os ratinhos terão 6-16 semanas de idade depois da primeira infusão. Por exemplo, pode ser usada uma preparação purificada ou recombinante (5-50 yg) de antigénio C10RF32 para imunizar aos ratinhos Ig humanos por via intraperitoneal. A experiência anterior com diversos antigénios por outros tem mostrado que os ratinhos transgénicos respondem quando se imunizam inicialmente por via intraperitoneal

(IP) com antigénio em adjuvante completo de Freund, seguido de imunizações IP cada duas semanas (até um total de 6) com antigénio em adjuvante incompleto de Freund. No entanto, também se encontrou que outros adjuvantes que não o adjuvante de Freund são eficazes. Além disso, encontrou-se que as células completas na ausência de adjuvantes são altamente imunogénicas. A resposta imune pode ser controlada durante o transcurso do protocolo de imunização com amostras de plasma que são obtidas por meio de sangramentos retroorbitais. 0 plasma pode ser identificado sistematicamente por meio de ELISA (como é descrito a seguir), e para as fusões podem ser usados ratinhos com suficientes títulos de imunoglobulina humana anti-C10RF32. Os ratinhos podem ser estimulados por via intravenosa com antigénio 3 dias antes de serem sacrificados e o baço extraído. Espera-se que possa ser necessário realizar 2-3 fusões para cada imunização. Em geral, imunizam-se entre 6 e 24 ratinhos para cada antigénio. Normalmente usaram-se estirpes tanto de HCo7 como de HCol2. Além disso, podem ser cruzados transgene tanto de HCo7 como de HCol2 em conjunto num único ratinho que tem dois transgenes de cadeia pesada humana diferentes (HCo7/HCol2). Como alternativa ou adicionalmente, pode ser usada a estirpe de Ratinho KM RTM. GERAÇÃO DE HIBRIDOMAS QUE PRODUZEM ANTICORPOS MONOCLONAIS HUMANOS DA INVENÇÃO

Para gerar hibridomas que produzem anticorpos monoclonais humanos da invenção, esplenócitos e/ou células dos nódulos linfáticos podem ser isolados a partir de ratinhos imunizados e podem ser fusionados com uma linha celular imortalizada apropriada, tal como uma linha celular de mieloma de ratinho. Os hibridomas resultantes podem ser identificados sistematicamente para a produção de anticorpos específicos de antigénio. Por exemplo, podem ser fusionadas suspensões de células individuais de linfócitos esplénicos de ratinhos imunizados com uma sexta parte do número de células P3X63-Ag8,653 de mieloma de ratinho de não secreção (ATCC, CRL 1580) com PEG a 50 %. As células são cultivadas a aproximadamente 2 X 10~5 em placa de microtitulação de fundo plano, seguido de uma incubação de duas semanas num meio seletivo que contém Soro de Clone fetal a 20 %, meios acondicionados "653" a 18 %, origem a 5 % (IGEN), L-glutamina 4 mM, piruvato de sódio 1 mM, HEPES 5 mM, 2-mercaptoetanol 0,055 mM, 50 unidades/ml de penicilina, 50 mg/ml de estreptomicina, 50 mg/ml de gentamicina e IX HAT (Sigma; o HAT adiciona-se 24 horas depois da fusão). Depois de aproximadamente duas semanas, as células podem ser cultivadas no meio no qual HAT é substituído com HT. A seguir, os poços individuais podem ser identificados sistematicamente por meio de ELISA para anticorpos monoclonais humanos IgM e IgG. Uma vez que é produzido crescimento extenso de hibridoma, o meio pode ser observado normalmente depois de 10-14 dias. Os hibridomas que segregam anticorpos podem ser cultivados de novo, podem ser identificados sistematicamente de novo, e se ainda são positivos para IgG humana, os anticorpos monoclonais podem ser subclonados pelo menos duas vezes por meio da limitação da diluição. A seguir, os subclones estáveis podem ser cultivados in vitro para gerar quantidades pequenas de anticorpo em meio de cultivo de tecido para caraterização.

Para purificar anticorpos monoclonais humanos, podem ser cultivados hibridomas selecionados em balões com agitação de dois litros para purificação de anticorpo monoclonal. Os sobrenadantes podem ser filtrados e concentrados antes da cromatografia por afinidade com proteína A-Sepharose (Pharmacia, Piscataway, N.J.). A IgG eluída pode ser comprovada por meio de eletroforese em gel e cromatografia líquida de alto rendimento para assegurar a pureza. A solução tampão pode ser permutada em PBS, e a concentração pode ser determinada por meio de DO 280 usando

o coeficiente de extinção 1,43. Alíquotas dos anticorpos monoclonais podem ser tomadas e armazenadas a -80 graus C. GERAÇÃO DE TRANSFETOMAS QUE PRODUZEM ANTICORPOS MONOCLONAIS DA INVENÇÃO

Os anticorpos da invenção também podem ser produzidos num transfetoma de célula hospedeira usando, por exemplo, uma combinação de técnicas de ADN recombinante e métodos de transfeção genética tal como é bem conhecido na técnica (por exemplo, Morrison, S. (1985) Science 229: 1202).

Por exemplo, para expressar os anticorpos, ou fragmentos de anticorpo dos mesmos, podem ser obtidos ADN que codificam cadeias leve e pesada de comprimento parcial ou completa, por meio de técnicas convencionais de biologia molecular (por exemplo, amplificação de PCR ou clonagem de ADNc usando um hibridoma que expressa o anticorpo de interesse) e os ADN podem ser inseridos em vetores de expressão de modo que os genes se ligam de forma operativa a sequências de controlo da transcrição e a tradução. Neste contexto, a expressão "ligado de forma operativa" pretende indicar que um gene do anticorpo se liga num vetor de modo que as sequências de controlo da transcrição e a tradução dentro do vetor servem para sua função pretendida de regular a transcrição e a tradução do gene do anticorpo. O vetor de expressão e as sequências de controlo da expressão são escolhidos para que sejam compatíveis com a célula hospedeira de expressão usada. O gene de cadeia leve de anticorpo e o gene de cadeia pesada de anticorpo podem ser inseridos num vetor separado ou, mais habitualmente, ambos genes são inseridos no mesmo vetor de expressão. Os genes do anticorpo são inseridos no vetor de expressão por meio de métodos convencionais (por exemplo, ligamento de locais de restrição complementares no fragmento do gene do anticorpo e vetor, ou ligamento de extremidade cega se não estão presentes locais de restrição). As regiões variáveis de cadeia leve e pesada dos anticorpos que são descritas no presente documento podem ser usadas para criar genes de anticorpo de comprimento completo de qualquer isotipo de anticorpo inserindo-os em vetores de expressão que já codificam regiões constantes de cadeia pesada e regiões constantes de cadeia leve do isotipo desejado de modo que o segmento de VH se liga de forma operativa aos segmentos de CH dentro do vetor e o segmento de VK liga-se de forma operativa ao segmento de CL dentro do vetor. Além disso ou como alternativa, o vetor de expressão recombinante pode codificar um péptido de sinal que facilita a secreção da cadeia do anticorpo desde uma célula hospedeira. 0 gene da cadeia do anticorpo pode ser clonado no vetor de modo que o péptido de sinal se liga em estrutura com a extremidade amino do gene da cadeia do anticorpo. 0 péptido de sinal pode ser um péptido de sinal de imunoglobulina ou um péptido de sinal heterólogo (isto é, um péptido de sinal de uma proteína que não é imunoglobulina).

Além dos genes de cadeia do anticorpo, os vetores de expressão recombinantes da invenção portam sequências reguladoras que controlam a expressão dos genes de cadeia de anticorpo numa célula hospedeira. A expressão "sequência reguladora" pretende incluir promotores, potenciadores e outros elementos para o controlo da expressão (por exemplo, sinais de poliadenilação) que controlam a transcrição à tradução dos genes da cadeia do anticorpo. Tais sequências reguladoras são descritas, por exemplo, em Goeddel (Gene Expression Technology. Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, Calif. (1990)). Os peritos na especialidade observarão que o projeto do vetor de expressão, incluindo a seleção de sequências reguladoras, pode depender de fatores tais como a escolha da célula hospedeira a transformar, o nível de expressão da proteína desejada, etc. As sequências reguladoras preferidas para expressão de célula hospedeira de mamífero incluem elementos virais que dirigem níveis elevados de expressão de proteína em células de mamífero, tais como promotores e/ou potenciais derivados de citomegalovírus (CMV) , Vírus 40 de Símio (SV40), adenovirus, (por exemplo, o promotor tardio principal de adenovirus (AdMLP) e polioma. Como alternativa, podem ser usadas sequências ou reguladoras não virais, tais como o promotor de ubiquitina ou o promotor de beta-globina. Além disso, adicionalmente, os elementos reguladores formados por sequências de diferentes fontes, tais como o sistema de promotor SR alfa, que contém sequências do promotor precoce de SV40 e a repetição terminal longa do tipo ou 1 do vírus de leucemia de linfócitos T humanos (Takebe, E. et al. (1988) Mol. Cell. Biol. 8: 466-472).

Além dos genes de cadeia do anticorpo e sequências reguladoras, os vetores de expressão recombinante da invenção podem portar sequências adicionais, tais como sequências que regulam a replicação do vetor em células hospedeiras (por exemplo, origens de replicação) e genes marcadores que podem ser selecionados. O gene marcador que pode ser selecionado facilita a seleção de células hospedeiras nas quais foi introduzido o vetor (veja-se, por exemplo, documentos de Patente dos Estados Unidos com números 4.399.216, 4.634.665 e 5.179.017, todos de Axel et al.) . Por exemplo, em geral, o gene marcador que pode ser selecionado confere resistência a fármacos, tais como G418, higromicina ou metotrexato, numa célula hospedeira na qual foi introduzido o vetor. Os genes marcadores preferidos que podem ser selecionados incluem o gene da dihidrofolato redutase (DHFR) (para utilização em células hospedeiras de dhfr com seleção/amplificação de metotrexato) e o gene neo (para seleção de G418).

Para expressão das cadeias leve e pesada, os vetores de expressão que codificam as cadeias pesadas e leves se transfeta numa célula hospedeira por meio de técnicas convencionais. As diversas formas do termo "transfeção" pretendem incluir uma grande diversidade de técnicas usadas normalmente para a introdução de ADN exógeno numa célula hospedeira procariota ou eucariota, por exemplo, eletroporação, precipitação com fosfato cálcico, transfeção de DEAE-dextrano e similares. Embora teoricamente seja possível expressar os anticorpos da invenção em qualquer célula hospedeira procariota ou eucariota, a expressão de anticorpos em células eucariotas, e o mais preferentemente em células hospedeiras de mamífero, é o mais preferido porque em tais células eucariotas, e em particular, células de mamífero, é mais provável que as células procariotas se montem e segreguem um anticorpo dobrado adequadamente e imunologicamente ativo. Relatou-se que a expressão procariota de genes de anticorpo é ineficaz para a produção de altos rendimentos de anticorpo ativo (Boss, Μ. A. e Wood, C. R. (1985) Immunology Today 6: 12-13) .

As células hospedeiras de mamíferos preferidas para a expressão dos anticorpos recombinantes da invenção incluem Ovário de Hámster Chinês (células CHO) (incluindo cédulas de CHO de dhfr, que são descritas em Urlaub e Chasin, (1980) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 77: 4216-4220, usadas com um marcador selecionável de DHFR, por exemplo, tal como é descrito em R. J. Kaufman e P. A. Sharp (1982) Mol. Biol. 159: 601-621), células de mieloma de NSO, células COS e células SP2. Em particular, para utilização com células de mieloma de NSO, outro sistema de expressão preferido é o sistema de expressão genética GS que se revela no documento de patente WO 87/04462, o documento de patente WO 89/01036 e o documento de patente EP 338.841. Quando são introduzidos vetores de expressão recombinante que codificam genes de anticorpo em células hospedeiras de mamífero, os anticorpos são produzidos por cultivo das células hospedeiras durante um período de tempo suficiente para permitir a expressão do anticorpo nas células hospedeiras ou, mais preferentemente, secreção do anticorpo no meio de cultivo no qual estão a crescer as células hospedeiras. Os anticorpos podem ser recuperados do meio de cultivo usando métodos convencionais de purificação de proteínas.

CARATERIZAÇÃO DE LIGAÇÃO DE ANTICORPO A ANTIGÉNIO

Os anticorpos podem ser submetidos a ensaio para ligação a VSIG1, ILDRl, LOC253012, AI216611, C10RF32, ou FXYD3, por exemplo, por meio de ELISA convencional. Em resumo, as placas de microtitulação são revestidas com VSIG1 purificado a 0,25 yg/ ml em PBS, e a seguir bloqueadas com albumina de soro bovino a 5 % em PBS. Adicionam-se diluições de anticorpo (por exemplo, diluições de plasma de ratinhos imunizados com VSIG1, ILDRl, LOC253012, AI216611, C10RF32, ou FXYD3) a cada poço e incubam-se durante 1-2 horas a 37 graus C. As placas são lavadas com PBS/Tween e a seguir incubadas com reagente secundário (por exemplo, para anticorpos humanos, um reagente policlonal específico para Fc de IgG anti-humano de cabra) conjugado com fosfatase alcalina durante 1 hora a 37 graus C. Depois da lavagem, as placas desenvolvem-se com substrato de pNPP (1 mg/ml), e analisam-se a DO de 405-650. Preferentemente, os ratinhos que desenvolvem os títulos mais elevados serão usados para fusões.

Também pode ser usado um ensaio de ELISA tal como foi descrito anteriormente para identificar sistematicamente hibridomas que mostram reatividade positiva com o imunogénio de C10RF32. Um clone de cada hibridoma, que retém a reatividade das células precursoras (por meio de ELISA), pode ser escolhido para fabricar uma referência de 5-10 viais de células armazenadas a -140 graus C., e para purificação de anticorpos.

Para purificar anticorpos antiC10RF32, os hibridomas selecionados podem ser cultivados em balões de agitação de 2 litros para purificação de anticorpo monoclonal. Os sobrenadantes podem ser filtrados e concentrados antes da cromatografia por afinidade com proteína A-Sepharose (Pharmacia, Piscataway, N.J.)· A igG eluída pode ser comprovada por meio de eletroforese em gel e cromatografia líquida de alto rendimento para assegurar a pureza. A solução de tampão pode ser permutada em PBS, e a concentração pode ser determinada por meio de DO 280 usando um coeficiente de extinção de 1,43. Alíquotas dos anticorpos monoclonais podem ser tomadas e armazenadas a -80 graus C.

Para determinar se os anticorpos monoclonais anti-C10RF32 selecionados ligam-se a epítopos únicos, cada anticorpo pode ser biotinilado usando reagentes disponíveis no mercado (Pierce, Rockford, III.) . Estudos de competição que usam anticorpos monoclonais sem marcar e anticorpos monoclonais biotinilados usando placas para ELISA revestidas com C10RF32 podem ser realizados tal como foi descrito anteriormente. A ligação de mAb biotinilado pode ser detetada com uma sonda de estreptavidina e fosfatase alcalina.

Para determinar o isotipo dos anticorpos purificados, podem ser realizadas ELISA de isotipo usando reagentes específicos para anticorpos de um isotipo em particular. Por exemplo, para determinar o isotipo de um anticorpo monoclonal humano, podem ser revestidos poços de placas de microtitulação com 1 yg/ml de imunoglobulina anti-humana durante a noite a 4 graus C. Depois de bloquear com BSA a 1 %, as placas são colocadas para reagir com 1 yg/ml ou menos de anticorpos monoclonais de ensaio ou controlos de isotipo purificado, a temperatura ambiente durante uma a duas horas. A seguir, os poços podem ser feitos reagir com qualquer de IgGl humana ou sondas conjugadas a fosfatase alcalina específica para IgM humana. As placas desenvolvem-se e analisam-se tal como foi descrito anteriormente.

As IgG humanas anti-C10RF32 podem ser submetidas ao ensaio adicionalmente para reatividade com antigénio de C10RF32 por meio de Western blot. Em resumo, pode ser preparado o antigénio de C10RF32 e submetido a eletroforese em gel de poliacrilamida e dodecil sulfato de sódio. Depois da eletroforese, os antigénios separados são transferidos a membranas de nitrocelulose, bloqueados com soro bovino fetal a 10 %, e submetidos a sonda com os anticorpos monoclonais a submeter a ensaio. A ligação da IgG humana pode ser detetada usando fosfatase alcalina de IgG anti-humana e desenvolvida com comprimidos de substrato de BCIP/NBT (Sigma Chem. Co., St. Louis, Mo.) .

CONJUGADOS OU IMUNOCONJUGADOS A presente invenção refere-se a conjugados para utilização em imunoterapia que compreendem o antigénio C10RF32 e porções solúveis do mesmo que incluem o ectodominio ou porções ou variantes do mesmo. Por exemplo, a invenção refere-se a conjugados nos quais o ECD do antigénio C10RF32 se liga a uma imunoglobulina ou fragmento da mesma. A invenção contempla a utilização dos mesmos para estimular ou inibir atividades de antigénio C10RF32 tais como co-estimulação imune e a utilização dos mesmos no tratamento de indicações de transplantes, autoimunes, e cancro que são descritas no presente documento.

Noutro aspeto, a presente invenção refere-se a imunoconjugados que compreendem um anticorpo antiC10RF32, ou um fragmento do mesmo, conjugado a um residuo terapêutico, tal como uma citotoxina, um fármaco (por exemplo, um imunossupressor) ou uma radiotoxina. No presente documento, tais conjugados denominam-se "imunoconjugados". Os imunoconjugados que incluem uma ou mais citotoxinas denominam-se "imunotoxinas". Uma citotoxina ou agente citotóxico inclui qualquer agente que é prejudicial (por exemplo, elimina) para as células. Os exemplos incluem taxol, citocalasina B, gramicina D, bromuro de etidio, emetina, mitomicina, etopósido, tenopósido, vincristina, vinblastina, colchicina, doxorrubicina, daunorrubicina, dihidroxi antracin diona, mitoxantrona, mitramicina, actinomicina D, 1-deshidrotestosterona, glucocorticoides, procaina, tetracaina, lidocaina, propranolol, e puromicina e análogos ou homólogos dos mesmos. Os agentes terapêuticos também incluem, por exemplo, antimetabolitos (por exemplo, metotrexato, 6-mercaptopurina, 6-tioguanina, citarabina, 5-fluorouracil decarbazina), agentes alquilantes (por exemplo, mecloretamina, tioepa clorambucilo, melfalan, carmustina (BSNU) e lomustina (CCNU), ciclotosfamida, busulfan, dibromomanitol, estreptozotocina, mitomicina C, e cis-diclorodiamina platino (II) (DDP) cisplatina), antraciclinas (por exemplo, daunorrubicina (antes daunomicina) e doxorrubicina), antibióticos (por exemplo, dactinomicina (antes actinomicina), bleomicina, mitramicina, e antramicina (AMC)), e agentes antimitóticos (por exemplo, vincristina e vinblastina).

Outros exemplos preferidos de citotoxinas terapêuticas que podem ser conjugadas a um anticorpo da invenção incluem duocarmicinas, caliqueamicinas, maitansinas e auristatinas, e derivados das mesmas. No mercado (Mylotarg.TM.; Wyeth) está disponível um exemplo de um conjugado de anticorpo de caliqueamicina.

As citotoxinas podem ser conjugadas a anticorpos da invenção usando tecnologia de ligantes disponível na técnica. Os exemplos de tipos de ligantes que foram usados para conjugar uma citotoxina a um anticorpo incluem, mas não se limitam a, hidrazonas, tioéteres, ésteres, dissulfuretos e ligantes que contêm péptidos. Pode ser escolhido um ligante, isto é, por exemplo, suscetível a clivagem a pH baixo dentro do compartimento lisossomal ou suscetível a clivagem com proteases, tal como proteases que se expressam preferentemente em tecido tumoral tais como catepsinas (por exemplo, as catepsinas B, C, D).

Para análise adicional de tipos de citotoxinas, ligantes e métodos para conjugar agentes terapêuticos a anticorpos, veja-se também Saito, G. et al. (2003) Adv. Drug Deliv. Inv. 55: 199-215; Trail, P. A. et al. (2003) Cancer Immunol. Immunother. 52: 328-337; Payne, G. (2003) Cancer Cell 3: 207-212; Allen, T. Μ. (2002) Nat. Inv. Cancer 2: 750-763; Pastan, I. e Kreitman, R. J. (2002) Curr. Opin. Investig. Drugs 3: 1089-1091; Senter, P. D. e Springer, C. J. (2001) Adv. Drug Deliv. Inv. 53: 247-264.

Os anticorpos da presente invenção também podem ser conjugados a um isótopo radiativo para gerar agentes radiofarmacêuticos citotóxicos, também denominados radioimunoconjugados. Os exemplos de isótopos radiativos que podem ser conjugados a anticorpos ou para utilização de forma diagnóstica ou terapêutica incluem, mas não se limitam a, iodo 131, índio 111, ítrio 90 e lutécio 177. Na clínica são estabelecidos métodos para preparar radioimunoconjugados. No mercado estão disponíveis exemplos de radioimunoconjugados, que incluem Zevalin.TM. (IDEC Pharmaceuticals) e Bexxar.TM. (Corixa Pharmaceuticals), e podem ser usados métodos similares para preparar radioimunoconjugados usando os anticorpos da invenção.

Os conjugados de anticorpo da invenção podem ser usados para modificar uma dada resposta biológica, e o resíduo de fármaco não é para ser interpretado como limitado a agentes terapêuticos químicos clássicos. Por exemplo, o resíduo de fármaco pode ser uma proteína ou polipéptido que possui uma atividade biológica desejada. Tais proteínas podem incluir, por exemplo, uma toxina enzimaticamente ativa, ou fragmento ativo da mesma, tal como abrina, ricina A, exotoxina de pseudomonas, ou toxina de difteria; uma proteína tal como fator de necrose tumoral ou interferão-gama; ou, modificadores da resposta biológica tais como, por exemplo, linfomaquinas, interleuquina-1 ("IL-1"), interleuquina-2 ("IL-2"), interleuquina-6 ("IL- 6")/ fator de estimulação de colonias de macrófagos e granulócitos ("GM-CSF"), fator de estimulação de colónias de granulócitos ("G-CSF"), ou outros fatores de crescimento.

As técnicas para conjugar tal resíduo terapêutico a anticorpos são bem conhecidas, vejam-se, por exemplo, Arnon et ai., "Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy", em Monoclonal Antibodies And Cancer

Therapy, Reisfeld et al. (eds.), pp. 243-56 (Alan R. Liss, Inc. 1985); Hellstrom et al., "Antibodies For Drug Delivery", em Controlled Drug Delivery (2a Ed.), Robinson et al. (eds.), pp. 623-53 (Marcel Dekker, Inc. 1987);

Thorpe, "Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review", em Monoclonal Antibodies '84:

Biological And Clinical Applications, Pinchera et al. (eds.), pp. 475-506 (1985); "Analysis, Results, And Future

Prospective Of The Therapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy", em Monoclonal Antibodies For Cancer

Detetion And Therapy, Baldwin et al. (eds.), pp. 303-16 (Academic Press 1985), e Thorpe et al., "The Preparation And Cytotoxic Properties Of Antibody-Toxin Conjugates", Immunol. Inv., 62: 119-58 (1982).

MOLÉCULAS BIESPECÍFICAS

Noutro aspeto, a presente invenção refere-se a moléculas biespecíficas que compreendem um anticorpo antiC10RF32, ou um fragmento do mesmo, da invenção. Um anticorpo da invenção, ou porções de ligação a antigénios do mesmo, pode ser derivatizado ou ligado a outra molécula funcional, por exemplo, outro péptido ou proteína (por exemplo, outro anticorpo ou ligando para um recetor) para gerar uma molécula biespecífica que se liga a pelo menos dois locais de ligação ou moléculas alvo diferentes. De facto, o anticorpo da invenção pode ser derivatizado ou ligado a mais de uma molécula funcional para gerar moléculas mui tiespecí ficas que se ligam a mais de dois locais de ligação e/ou moléculas alvo diferentes; também é pretendido que tais moléculas multiespecíficas estejam incluídas na expressão "molécula biespecífica" tal como é usado no presente documento. Para criar uma molécula biespecífica da invenção, um anticorpo da invenção pode ser ligado funcionalmente (por exemplo, por meio de acoplamento químico, fusão genética, associação não covalente ou de outro modo) a uma ou outras moléculas de ligação mais, tal como outro anticorpo, fragmento de anticorpo, péptido ou mimético de ligação, de modo que é obtida uma molécula biespecífica.

Por conseguinte, a presente invenção inclui moléculas biespecíficas que compreendem pelo menos uma primeira especificidade de ligação para C10RF32 e uma segunda especificidade de ligação para um segundo epítopo alvo. Numa forma de realização da invenção em particular, o segundo epítopo alvo é um recetor de Fc, por exemplo, RI Fc gama humano (CD64) ou um recetor Fc alfa humano (CD89) . Portanto, a invenção inclui moléculas biespecíficas capazes de ligarem-se tanto a R Fc gama, R Fc alfa ou R Fc épsilon que expressam células efetoras (por exemplo, monócitos, macrófagos ou células polimorfonucleares (PMN)), e as células alvo que expressam C10RF32. Estas moléculas biespecíficas dirigem células que expressam C10RF32 a células efetoras e desencadeiam atividades de células recetoras mediadas pelo recetor Fc, tais como fagocitose de uma célula que expressa C10RF32, citotoxicidade mediada por células dependentes de anticorpos (ADCC), libertação de citocinas, ou geração de anião superóxido.

Numa forma de realização da invenção na qual a molécula biespecífica é multiespecífica, a molécula pode incluir adicionalmente uma terceira especificidade de ligação, além de uma especificidade de ligação anti-Fc e uma especificidade de ligação anti-6f. Numa forma de realização, a terceira especificidade de ligação é uma porção do fator anti-potenciação (EF), por exemplo, uma molécula que se liga a uma proteína de superfície envolvida em atividade citotóxica e deste modo aumenta a resposta imune contra a célula alvo. A "porção do fator anti-potenciação" pode ser um anticorpo, fragmento de anticorpo funcional ou um ligando que se liga a uma molécula dada, por exemplo, um antigénio ou um recetor, e deste modo tem como resultado um aumento do efeito dos determinantes de união para o recetor Fc ou antigénio de célula alvo. A "porção do fator anti-potenciação" pode ser unido a um recetor Fc ou a um antigénio de célula alvo. Como alternativa, a porção de fator anti-potenciação pode ser ligada a uma entidade que é diferente da entidade à qual se ligam a primeira e segunda especificidades de ligação. Por exemplo, a porção do fator anti-potenciação pode ser unida a um linfócito T citotóxico (por exemplo, através de CD2, CD3, CD8, CD28, CD4, CD40, ICAM-1 ou outra célula imune que tem como resultado um aumento da resposta imune contra a célula alvo).

Numa forma de realização, as moléculas biespecíficas da invenção compreendem, como uma especificidade de ligação, pelo menos um anticorpo, ou um fragmento de anticorpo do mesmo, que inclui, por exemplo, um Fab, Fab', F(ab')2, Fv, ou uma única cadeia de Fv. 0 anticorpo também pode ser um dímero de cadeia leve ou de cadeia pesada, ou qualquer fragmento mínimo do mesmo tal como um Fv ou uma construção de cadeia simples tal como é descrito em Ladner et al. documento de Patente dos Estados Unidos N° 4.946.778, cujos conteúdos são incorporados expressamente por referência.

Numa forma de realização, a especificidade de ligação para um recetor Fcy é proporcionada por meio de um anticorpo monoclonal, cuja ligação não está bloqueada por uma imunoglobulina G humana (IgG). Como é usado no presente documento, a expressão "recetor de IgG" refere-se a qualquer dos oito genes de cadeia gama localizados no cromossoma 1. Estes genes codificam um total de doze isoformas de recetor transmembrana ou solúvel que se agrupam em três classes de recetores Fc gama: Rl de Fc gama (CD64), RII de Fc gama (CD32), e RIII de Fc gama (CD 16). Numa forma de realização preferida, o recetor Fc gama é um RI Fc gama humano de alta afinidade. 0 humano RI Fc gama é uma molécula de 72 kDa, que amostra alta afinidade para a IgG monomérica (10~8-10~9 M_1) . A produção e caraterização de determinados anticorpos monoclonais gama anti-Fc preferidas são descritas em Fanger et al. na Publicação PCT do documento de patente WO 88/00052 e no documento de Patente dos Estados Unidos N° 4.954.617, cujos ensinamentos são incorporados totalmente no presente documento por referência. Estes anticorpos ligam-se a um epítopo de Rl Fc gama, RII Fcy ou RIII Fcy num local que é distinto do local de ligação de Fc gama do recetor e, deste modo, sua ligação não se bloqueia substancialmente por meio de níveis fisiológicos de IgG. Os anticorpos RI anti-Fc gama específicos úteis na presente invenção são mAb 22, mAb 32, mAb 44, mAb 62 e mAb 197. O hibridoma que produz mAb 32 está disponível na Coleção Americana de Culturas Celulares, N° de Referência de ATCC HB9469. Noutras formas de realização, o anticorpo do recetor anti-Fcy é uma forma humanizada do anticorpo 22 monoclonal (H22). A produção e caraterização do anticorpo H22 são descritas em Graziano, R.F. et al. (1995) J. Immunol. 155 (10): 4996-5002 e na Publicação PCT do documento de patente WO 94/10332. A linha celular que produz o anticorpo H22 está depositada na Coleção Americana de Culturas Celulares com a denominação HA022CLI e tem o número de acesso CRL 11177.

Além disso, noutras formas de realização preferidas, a especificidade de ligação para um recetor Fc é proporcionada por meio de um anticorpo que se liga a um recetor de IgA humana, por exemplo, um recetor Fc-alfa (RI de Fc alfa (CD89)), cuja ligação não se bloqueia preferentemente com uma imunoglobulina A humana (IgA). A expressão "recetor de IgA" pretende incluir o produto genético de um gene alfa (RI de Fc alfa) localizado no cromossoma 19. Sabe-se que este gene codifica várias isoformas de transmembrana submetidas a splicing alternativo de 55 a 10 kDa. RI de Fc alfa (CD89) é expresso de forma constitutiva em monócitos/macrófagos, granulócitos eosinófilos e neutrófilos, mas não em populações de células não efetoras. O RI de Fc alfa tem afinidade média (aproximadamente 5 X 10~7 M-l) tanto para IgAl como para IgA2, que aumenta depois da exposição a citocinas tais como G-CSF ou GM-CSF (Morton, H. C. et ai. (1996) Critical Reviews in Immunology 16: 423-440). Foram descritos quatro anticorpos monoclonais específicos para FcaRI, identificados como A3, A59, A62 e A77, que ligam Fc.alfa.RI fora do domínio de ligação a ligandos de IgA (Monteiro, R. C. et ai. (1992) J. Immunol. 148 : 1764) . RI de Fc alfa e RI de Fc gama são recetores de acionamento preferidos para utilização nas moléculas biespecíficas da invenção porque (1) são expressos principalmente em células efetoras imunes, por exemplo, monócitos, PMN, macrófagos e células dendríticas; (2) são expressos a níveis elevados (por exemplo, 5.000-100.000 por célula); (3) são mediadores de atividades citotóxicas (por exemplo, ADCC, fagocitose); (4) medeiam o aumento da apresentação antigénica de antigénios, incluindo autoantigénios, dirigidos aos mesmos.

Embora sejam preferidos os anticorpos monoclonais humanos, outros anticorpos que podem ser usados nas moléculas biespecíficas da invenção são anticorpos monoclonais de murino, quiméricos e humanizados.

As moléculas biespecíficas da presente invenção podem ser preparadas por meio de conjugação das especificidades de ligação constitutivas, por exemplo, as especificidades de ligação de anti-FcR e anti-C10RF32, usando métodos conhecidos na técnica. Por exemplo, cada especificidade de ligação da molécula biespecífica pode ser gerada em separado e a seguir conjugada uma com a outra. Quando as especificidades de ligação são proteínas ou péptidos, pode ser usada uma diversidade de agentes de acoplamento ou de reticulação para conjugação covalente. Exemplos de agentes de reticulação incluem proteína A, carbodiimida, N-sucinimidil-S-acetil-tioacetato (SATA), 5,5'-ditiobis(ácido 2-nitrobenzoico) (DTNB), o-fenilendimaleimida (oPDM), N-sucinimidil-3-(2-piridilditio)propionato (SPDP), e 4-(N-maleimidometil)ciclohexano-l-carboxilato de sulfosucinimidilo (sulfo-SMCC) (vejam-se por exemplo, Karpovsky et al. (1984) J. Exp. Med. 160: 1686; Liu, M A et al. (1985) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 82: 8648) . Outros métodos incluem os que são descritos em Paulus (1985) Bering Ins. Mitt. N° 78, 118-132; Brennan et al. (1985) Science 229: 81-83), e Glennie et al. (1987) J. Immunol. 139: 2367-2375). Os agentes de conjugação preferidos são SATA e sulfo-SMCC, ambos disponíveis em Pierce Chemical Co. (Rockford, III.).

Quando as especificidades de ligação são anticorpos, eles podem ser conjugados através de ligação de sulfidrilo das regiões de dobradiça da extremidade C das duas cadeias pesadas. Numa forma de realização particularmente preferida, a região de dobradiça é modificada para que contenha um número ímpar de resíduos de sulfidrilo, preferentemente um, antes da conjugação.

Como alternativa, ambas as especificidades de ligação podem ser codificadas no mesmo vetor e expressas e montadas na mesma célula hospedeira. Este método é particularmente útil quando a molécula biespecífica é uma proteína de fusão mAbXmAb, mAbXFab, FabXF(ab')2 ou ligandoXFab. Uma molécula biespecífica da invenção pode ser uma molécula de cadeia simples que compreende um anticorpo de cadeia simples e um determinante de ligação, ou uma molécula biespecífica de cadeia simples que compreende dois determinantes de união. As moléculas biespecíficas podem compreender pelo menos duas moléculas de cadeia simples. Os métodos para preparar moléculas biespecíficas são descritos por exemplo no documento de Patente dos Estados Unidos N° 5.260.203; documento de Patente dos Estados Unidos N° 5.455.030; documento de Patente dos Estados Unidos N° 4.881.175; documento de Patente dos Estados Unidos N° 5.132.405; documento de Patente dos Estados Unidos N° 5.091.513; documento de Patente dos Estados Unidos N° 5.476.786; documento de Patente dos Estados Unidos N° 5.013.653; documento de Patente dos Estados Unidos N° 5.258.498; e documento de Patente dos Estados Unidos N° 5.482.858. A ligação das moléculas biespecíficas a seus alvos específicos pode ser confirmada, por exemplo, por meio de ensaio de imunoabsorção unido a enzimas (ELISA), radioimunoensaio (RIA), análise de FACS, bioensaio (por exemplo, inibição do crescimento), ou ensaio de Western blot. Em geral, cada um destes ensaios deteta a presença de complexos de proteína-anticorpo de interesse particular, por meio da utilização de um reagente marcado (por exemplo, um anticorpo) específico para o complexo de interesse. Por exemplo, os complexos de FcR-anticorpo podem ser detetados usando por exemplo, um anticorpo ou fragmento de anticorpo unido a enzimas que reconhece e se liga de forma específica aos complexos de anticorpo e FcR. Como alternativa, os complexos podem ser detetados usando qualquer de uma diversidade de outros imunoensaios. Por exemplo, o anticorpo pode ser marcado de forma radiativa e podem ser usados num radioimunoensaio (RIA) (veja-se, por exemplo, Weintraub. B. Principles of Radioimmunoassays, Seventh

Training Course on Radioligand Assay Techniques, The Endocrine Society, Março de 1986, que se incorpora por referência no presente documento). 0 isótopo radiativo pode ser detetado por tais meios como a utilização de um contador gama ou um contador de cintilação ou por meio de autorradiografia.

COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS

Noutro aspeto, a presente invenção proporciona uma composição, por exemplo, uma composição farmacêutica, que contém um ou uma combinação de anticorpos monoclonais, ou porções de ligação ao antigénio dos mesmos, da presente invenção, formulada juntamente com um veiculo farmaceuticamente aceitável. Tais composições podem incluir um ou uma combinação de (por exemplo, dois ou mais diferentes) anticorpos, ou imunoconjugados ou moléculas biespecificas da invenção. Por exemplo, uma composição farmacêutica da invenção pode compreender uma combinação de anticorpos (ou imunoconjugados ou biespecificos) que se ligam a diferentes epítopos no antigénio alvo ou que têm atividades complementares.

Como foi discutido anteriormente, o C10RF32 da invenção inclui adicionalmente a identificação de outras moléculas tais como moléculas orgânicas pequenas, péptidos, ribozimas, hidratos de carbono, glicoproteinas, ARNip, ARN antissense e similares que se ligam e/ou modulam (aumentam ou inibem) de forma especifica uma atividade provocada pelo antigénio C10RF32. Estas moléculas podem ser identificadas por meio de métodos conhecidos de identificação sistemática tais como ensaios de ligação. Em geral, estes ensaios serão de alto rendimento e identificarão sistematicamente uma grande biblioteca de compostos sintetizados ou nativos com a finalidade de identificar supostos candidatos a fármaco que de acordo com em e/ou modulam atividades relacionadas com C10RF32.

De forma específica, a invenção inclui o desenvolvimento de fármacos que contêm o ectodomínio do antigénio C10RF32 ou um fragmento ou variante do mesmo ou uma sequência de ácidos nucleicos correspondente de codificação. Estes conjugados podem conter um resíduo de fixação como alvo ou outro resíduo tal como um domínio de imunoglobulina. Estes conjugados podem ser expressos em sistemas de vetor conhecidos ou podem ser usados células ou vetores que contêm as correspondentes sequências de ácidos nucleicos para o tratamento de cancro e em terapêutica imune tal como no tratamento de autoimunidade, transplante, GVHD, cancro, e outros distúrbios ou afeções imunes.

Portanto, a presente invenção apresenta uma composição farmacêutica que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de um agente terapêutico de acordo com a presente invenção. De acordo com a presente invenção, o agente terapêutico poderia ser qualquer um do ectodomínio de C10RF32, ou um fragmento ou variante do mesmo, ou uma sequência de ácidos nucleicos correspondente de codificação. A composição farmacêutica de acordo com a presente invenção usa-se preferentemente para o tratamento de cancros que incluem, por meio de exemplo, tumores não sólidos e sólidos, sarcomas, neoplasias hematológicas que incluem, mas não se limitam a leucemia linfocítica aguda, leucemia linfocítica crónica, leucemia mielógena aguda, leucemia mielógena crónica, mieloma múltipla, linfoma de Hodgkin, linfoma não Hodgkin, cancro de mama, próstata, pulmão, ovário, cólon, baço, rim, bexiga, cabeça e pescoço, útero, testículos, estômago, colo uterino, fígado, ossos, pele, pâncreas, cérebro e no qual o cancro pode ser não metastático, invasivo ou metastático. A composição farmacêutica de acordo com a presente invenção usa-se adicionalmente para o tratamento de autoimunidade e preferentemente para tratar uma doença autoimune selecionada a partir de: Esclerose múltipla; Psoríase; Artrite reumatoide; lúpus eritematoso sistémico; colite ulcerosa; doença de Crohn; distúrbios imunes associados com rejeição a transplante de enxerto, angeíte linfocítica benigna, lúpus eritematoso, tiroidite de Hashimoto, mixedema primário, doença de Graves, anemia perniciosa, gastrite atrófica autoimune, doença de Addison, diabetes mellitus dependente de insulina, síndrome de Goodpasture, miastenia gravis, pênfigo, oftalmia simpática, uveíte autoimune, anemia hemolítica autoimune, trombocitopenia idiopática, cirrose biliar primária, hepatite de ação crónica, colite ulcerosa, síndrome de Sjogren, doença reumática, polimiosite, esclerodermia, doença mista do tecido subjuntivo, reumatismo inflamatório, reumatismo degenerativo, reumatismo extra-articular, doenças do colagénio, poliartrite crónica, psoríase artropática, espondilite anquilosante, artrite reumatoide juvenil, periartrite escapulumeral, panarterite nodosa, esclerodermia sistémica progressiva, artrite urática, dermatomiosite, reumatismo muscular, miosite, miogelose e condrocalcinose. A composição farmacêutica de acordo com a presente invenção usa-se preferentemente para o tratamento de rejeição de qualquer transplante de órgão e/ou doença de enxerto contra o hospedeiro que poderia ser desenvolvida depois do transplante de médula óssea. "Tratamento" refere-se tanto a tratamento terapêutico como a medidas profiláticas ou preventivas. Os que se encontram em necessidade de tratamento incluem os que já têm o distúrbio assim como aqueles nos quais o distúrbio está a ser evitado. Portanto, poderia ter sido diagnosticado que o mamífero a tratar no presente documento padece o distúrbio ou pode estar predisposto ou ser suscetível ao distúrbio. "Mamífero", com finalidades de tratamento, refere-se a qualquer animal classificado como mamífero, incluindo seres humanos, animais domésticos e de granja, e animais de zoo, deportes, ou mascota, tais como cães, cavalos, gatos, vacas, etc. Preferentemente, o mamífero é um ser humano. A expressão "quantidade terapeuticamente eficaz" refere-se a uma quantidade de agente de acordo com a presente invenção que é eficaz para tratar uma doença ou distúrbio num mamífero.

Os agentes terapêuticos da presente invenção podem ser proporcionados ao indivíduo somente, ou como parte de uma composição farmacêutica na qual se misturam com um veículo farmaceuticamente aceitável.

As composições farmacêuticas da invenção também podem ser administradas em terapêutica de combinação, isto é, combinadas com outros agentes. Por exemplo, a terapêutica de combinação pode incluir um anticorpo antiC10RF32 ou agente de modulação de C10RF32 de acordo com a presente invenção tal como um conjugado de péptido solúvel que contém o ectodomínio do antigénio CLORF32 ou uma molécula pequena tal como um péptido, ribozima, ARNip, outro fármaco que se liga a C10RF32 combinado com pelo menos outro agente modulador terapêutico ou imune. Exemplos de agentes terapêuticos que podem ser usados em terapêutica de combinação são descritos com mais detalhes a seguir na seção de utilizações dos anticorpos da invenção.

Como é usado no presente documento, "veículo farmaceuticamente aceitável" inclui todos e cada um dos solventes, meios de dispersão, revestimentos, agentes antibacterianos e antifúngicos, agentes isotónicos e para atraso da absorção, e similares que são fisiologicamente compatíveis. Preferentemente, o veículo é adequado para administração intravenosa, intramuscular, subcutânea, parentérica, espinal ou epidérmica (por exemplo, por meio de injeção ou infusão). Dependendo da via de administração, o composto ativo, isto é, anticorpo, imunoconjugado, ou molécula biespecífica, pode ser revestido num material para proteger o composto da ação de ácidos e outras condições naturais que podem inativar o composto. Os compostos farmacêuticos da invenção podem incluir um ou mais sais farmaceuticamente aceitáveis. Uma "sal farmaceuticamente aceitável" refere-se a um sal que mantém a atividade biológica desejada do composto precursor e não transmite nenhum efeito toxicológico não desejado (veja-se por exemplo, Berge, S. M., et al. (1977) J. Pharm. Sei. 66: 1-19) . Os exemplos dos ditos sais incluem sais de adição ácida e sais de adição básica. Os sais de adição ácida incluem os obtidos a partir de ácidos inorgânicos não tóxicos, tais como ácido clorídrico, nítrico, fosfórico, sulfúrico, bromídrico, iodídrico, fosforoso e similares, assim como a partir de ácidos orgânicos não tóxicos tais como ácidos a linfáticos mono- e dicarboxílicos, ácidos alcanoicos substituídos com fenilo, ácidos hidroxi alcanoicos, ácidos aromáticos, ácidos sulfónicos alifáticos e aromáticos e similares. Os sais de adição básica incluem as obtidas a partir de metais alcalinos terrosos, tais como sódio, potássio, magnésio, cálcio e similares, assim como a partir de aminas orgânicas não tóxicas, tais como N,N'-dibenziletilenodiamina, N-metilglucamina, cloroprocaína, colina, dietanolamina, etilenodiamina, procaína e similares.

Uma composição farmacêutica da invenção também pode incluir um antioxidante farmaceuticamente aceitável. Exemplos de antioxidantes farmaceuticamente aceitáveis incluem: (1) antioxidantes solúveis em água, tais como ácido ascórbico, cloridrato de cisteína, bissulfato de sódio, metabissulfito de sódio, sulfito de sódio e similares; (2) antioxidantes solúveis em óleo, tal como palmitato de ascorbilo, hidroxianisol butilado (BHA), hidroxitolueno butilado (BHT), lecitina, gaiato de propilo, alfa-tocoferol, e similares; e (3) agentes quelantes de metal, tais como ácido cítrico, ácido etilenodiamino tetra-acético (EDTA), sorbitol, ácido tartárico, ácido fosfórico, e similares.

Uma composição farmacêutica da invenção também pode incluir um antioxidante farmaceuticamente aceitável. Exemplos de antioxidantes farmaceuticamente aceitáveis incluem: (1) antioxidantes solúveis em água, tais como ácido ascórbico, cloridrato de cisteína, bissulfato de sódio, metabissulfito de sódio, sulfito de sódio e similares; (2) antioxidantes solúveis em óleo, tal como palmitato de ascorbilo, hidroxianisol butilado (BHA), hidroxitolueno butilado (BHT), lecitina, gaiato de propilo, alfa-tocoferol, e similares; e (3) agentes quelantes de metal, tais como ácido cítrico, ácido etilenodiamino tetra-acético (EDTA), sorbitol, ácido tartárico, ácido fosfórico, e similares. Exemplos de veículos aquosos e não aquosos adequados que podem ser usados nas composições farmacêuticas da invenção incluem água, etanol, polióis (tais como glicerol, propileno glicol, polietileno glicol, e similares), e misturas adequadas dos mesmos, óleos vegetais, tais como azeite, e ésteres orgânicos injetáveis, tais como oleato de etilo. A fluidez apropriada pode ser mantida, por exemplo, por meio da utilização de materiais de revestimento, tais como lecitina, por meio da manutenção do tamanho de partícula necessária no caso das dispersões, e por meio da utilização de tensioativos.

Estas composições também podem conter adjuvantes tais como conservantes, agentes humectantes, agentes emulgentes e agentes de dispersão. A prevenção da presença de micro-organismos pode ser assegurada tanto com métodos de esterilização, mencionados anteriormente, como por meio da inclusão de diversos agentes antibacterianos e antifúngicos, por exemplo, parabenos, clorobutanol, fenol ácido sórbico, e similares. Também pode ser desejável incluir agentes isotónicos, tais como açúcares, cloreto de sódio, e similares nas composições. Além disso, a absorção prolongada da forma farmacêutica injetável pode ser provocada por meio da inclusão de agentes que atrasam a absorção tais como monoestearato de alumínio e gelatina.

Os veículos farmaceuticamente aceitáveis incluem soluções ou dispersões aquosas estéreis e pós estéreis para a preparação extemporânea de soluções ou dispersões injetáveis estéreis. A utilização de tais meios e agentes para substâncias farmaceuticamente ativas é conhecida na técnica. Exceto na medida em que qualquer meio ou agente convencional seja incompatível com o composto ativo, contempla-se a utilização do mesmo nas composições farmacêuticas da invenção. Nas composições também podem ser incorporados compostos ativos complementares.

As composições terapêuticas, em geral, devem ser estéreis e estáveis nas condições de fabrico e armazenamento. A composição pode ser formulada como uma solução, microemulsão, lipossoma, ou outra estrutura ordenada adequada para concentração elevada do fármaco. 0 veículo pode ser um solvente ou meio de dispersão que contém, por exemplo, água, etanol, poliol (por exemplo, glicerol, propileno glicol, e polietileno glicol líquido, e similares), e misturas adequadas dos mesmos. A fluidez apropriada pode ser mantida, por exemplo, por meio da utilização de um revestimento tal como lecitina, por meio da manutenção do tamanho de partícula necessário no caso de dispersão e por meio da utilização de tensioativos. Em muitos casos, será preferido incluir na composição agentes isotónicos, por exemplo, açúcares, poliálcoois tais como manitol, sorbitol, ou cloreto de sódio. A absorção prolongada das composições injetáveis pode ser provocada por meio da inclusão na composição de um agente que atrase a absorção, por exemplo, sais de monoestearato e gelatina. As soluções injetáveis estéreis podem ser preparadas por meio da incorporação do composto ativo na quantidade necessária num solvente apropriado com um ou uma combinação de ingredientes que foram enumerados anteriormente, se for necessário, seguido de microfiltração com esterilização. Geralmente, as dispersões são preparadas por meio da incorporação do composto ativo num veiculo estéril que contém um meio de dispersão básico e os outros ingredientes necessários que foram enumerados anteriormente. No caso de pós estéreis para a preparação de soluções injetáveis estéreis, os métodos de preparação preferidos são secagem a vácuo e secagem por congelação (liofilização) que proporcionam um pó do principio ativo além de qualquer ingrediente adicional desejado a partir de uma solução filtrada previamente de forma estéril do mesmo.

As soluções injetáveis estéreis podem ser preparadas por meio da incorporação do composto ativo na quantidade necessária num solvente apropriado com um ou uma combinação de ingredientes enumerados anteriormente, se for necessário, seguido de microfiltração com esterilização. Geralmente, as dispersões são preparadas por meio da incorporação do composto ativo num veiculo estéril que contém um meio de dispersão básico e os outros ingredientes necessários que foram enumerados anteriormente. No caso de pós estéreis para a preparação de soluções injetáveis estéreis, os métodos de preparação preferidos são secagem a vácuo e secagem por congelação (liofilização) que proporcionam um pó do principio ativo além de qualquer ingrediente adicional desejado a partir de uma solução filtrada previamente de forma estéril do mesmo. A quantidade de principio ativo que pode ser combinada com um material veiculo para produzir uma forma farmacêutica unitária variará dependendo do indivíduo que se está a tratar, e o modo particular de administração. A quantidade de princípio ativo que pode ser combinada com um material veículo para produzir uma forma farmacêutica unitária será geralmente a quantidade da composição que produza um efeito terapêutico. Geralmente, de cada cem por cento, esta quantidade variará de aproximadamente 0,01 por cento a aproximadamente um noventa e nove por cento de principio ativo, preferentemente de aproximadamente 0,1 por cento a aproximadamente 70 por cento, o mais preferentemente de aproximadamente 1 por cento a aproximadamente 30 por cento de principio ativo em combinação com um veiculo farmaceuticamente aceitável.

Os regimes de dosagem ajustam-se para proporcionar a resposta desejada ótima (por exemplo, uma resposta terapêutica) . Por exemplo, pode ser administrado um único bolus, podem ser administradas várias doses divididas no tempo ou a dose pode ser reduzida ou aumentada de forma proporcional tal como for indicada pelas exigências da situação terapêutica. É especialmente vantajoso formular composições parentéricas em forma farmacêutica unitária para facilitar a administração e a uniformidade da dosagem. A forma farmacêutica unitária, como é usado no presente documento, refere-se a unidades fisicamente separadas adequadas para dosagens unitárias para os indivíduos a tratar; cada unidade contém uma quantidade predeterminada de composto ativo calculada para produzir o efeito terapêutico desejado em associação com o veículo farmacêutico desejado. A especificação para as formas farmacêuticas unitárias da invenção são ditadas por e dependem diretamente de (a) as caraterísticas únicas do composto ativo e o efeito terapêutico em particular, a conseguir, e (b) as limitações inerentes na técnica de formação de compostos tais como um composto ativo para o tratamento da sensibilidade em indivíduos.

Para a administração do anticorpo, os intervalos de dosagem variam de aproximadamente 0,0001 a 100 mg/kg, e mais normalmente de 0,01 a 5 mg/kg, do peso corporal do hospedeiro. Por exemplo as dosagens podem ser de 0,3 mg/kg de peso corporal, 1 mg/kg de peso corporal, 3 mg/kg de peso corporal, 5 mg/kg de peso corporal ou 10 mg/kg de peso corporal ou estarão dentro do intervalo de 1-10 mg/kg. Um regime de tratamento por meio de exemplo envolve a administração uma vez por semana, uma vez a cada duas semanas, uma vez a cada três semanas, uma vez a cada quatro semanas, uma vez ao mês, uma vez a cada 3 meses e uma vez a cada três a 6 meses. Os regimes de dosagem preferidos para um anticorpo anti-VSIGl da invenção incluem 1 mg/kg de peso corporal ou 3 mg/kg de peso corporal através de administração intravenosa, com o anticorpo sendo proporcionado usando um dos seguintes programas de dosagem: (i) cada quatro semanas para seis dosagens, a seguir cada três meses; (ii) cada três semanas; (iii) 3 mg/kg de peso corporal uma vez seguido de 1 mg/kg de peso corporal cada três semanas.

Em alguns métodos, são administrados de forma simultânea dois ou mais anticorpos monoclonais com diferentes especificidades de ligação, em cujo caso a dosagem de cada anticorpo administrado entra dentro dos intervalos indicados. O anticorpo é administrado normalmente em múltiplas ocasiões. Os intervalos entre dosagens individuais podem ser, por exemplo, semanalmente, mensalmente, cada três meses ou anualmente. Os intervalos também podem ser irregulares conforme indicado medindo os níveis sanguíneos de anticorpo ao antigénio alvo no paciente. Em alguns métodos, a dosagem é ajustada para conseguir uma concentração de anticorpo em plasma de aproximadamente 1-1000 yg/ml e em alguns métodos de aproximadamente 25-300 yg/ml.

Como alternativa, o anticorpo pode ser administrado como uma formulação de libertação sustentada, em cujo caso é necessária uma administração menos frequente. A dosagem e a frequência variarão dependendo da semivida do anticorpo no paciente. Em geral, os anticorpos humanos apresentam uma semivida mais longa, seguido de anticorpos humanizados, anticorpos quiméricos, e anticorpos não humanos. A dosagem e a frequência de administração podem variar dependendo de se o tratamento for profilático ou terapêutico. Em aplicações profiláticas, é administrada uma dosagem relativamente baixa a intervalos relativamente infrequentes durante um longo período de tempo. Alguns pacientes continuam a receber o tratamento durante o fim de suas vidas. Em aplicações terapêuticas, em ocasiões é necessária uma dosagem relativamente alta em intervalos de tempo relativamente curtos até que se reduza ou termine a evolução da doença, e preferentemente até que o paciente mostre melhora parcial ou completa dos sintomas da doença. A partir deste momento, pode ser administrado ao paciente um regime profilático.

Os níveis reais de dosagem dos princípios ativos nas composições farmacêuticas da presente invenção podem variar com a finalidade de obter uma quantidade do princípio ativo que é eficaz para conseguir a resposta terapêutica desejada para um paciente, composição, e modo de administração em particular, sem que sejam tóxicos para o paciente. 0 nível de dosagem selecionado dependerá de uma diversidade de fatores farmacocinéticos que incluem a atividade das composições em particular, da presente invenção usadas, ou o éster, sal ou amida das mesmas, a via de administração, o tempo de administração, a taxa de excreção ou do composto que se está a usar em particular, a duração do tratamento, outros fármacos, compostos e/ou materiais usados em combinação com as composições usadas em particular, a idade, sexo, peso, afeção, saúde geral e histórico médico anterior do paciente que se está a tratar, e fatores similares bem conhecidos nas especialidades médicas.

Uma "dosagem terapeuticamente eficaz" de um anticorpo anti-C10RF32 da invenção tem como resultado preferentemente uma diminuição da gravidade dos sintomas da doença, um aumento da frequência e duração de períodos livres de sintomas da doença, um aumento da esperança de vida, remissão da doença, ou uma prevenção da alteração ou a incapacidade devido ao sofrimento pela doença. Por exemplo, para o tratamento de tumores positivos para C10RF32, por exemplo, tumores de pulmão, tumores de ovários, e tumores de cólon, uma "dosagem terapeuticamente eficaz" inibe preferentemente o crescimento celular ou o crescimento tumoral em pelo menos aproximadamente 20 %, mais preferentemente em pelo menos aproximadamente 40 %, inclusive mais preferentemente em pelo menos aproximadamente 60 %, e todavia mais preferentemente em pelo menos aproximadamente 80 % com relação aos indivíduos sem tratar. A capacidade de um composto para inibir o crescimento tumoral pode ser avaliada num sistema de modelo animal preditivo da eficácia de tumores humanos. Como alternativa, esta propriedade de uma composição pode ser avaliada por meio do exame da capacidade do composto para inibir tal inibição in vitro por meio de ensaios conhecidos pelo perito na especialidade. Uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto terapêutico pode diminuir o tamanho do tumor, ou de outro modo melhorar os sintomas num indivíduo. Um perito ordinário na especialidade seria capaz de determinar tais quantidades com base em fatores tais como o tamanho do indivíduo, a gravidade dos sintomas do indivíduo, e a composição ou via de administração selecionadas em particular.

Uma composição da presente invenção pode ser administrada através de uma ou mais vias de administração usando um ou mais de uma diversidade de métodos conhecidos na técnica. Tal como observará o perito na especialidade, a via e/ou modo de administração variará dependendo dos resultados desejados. As vias de administração preferidas para anticorpos da invenção incluem intravenosa, intramuscular, intradérmica, intraperitoneal, subcutânea, espinal ou outras vias de administração parentérica, por exemplo por meio de injeção ou infusão. A expressão "administração parentérica" tal como é usado no presente documento refere-se a modos de administração distintos da administração entérica e tópica, normalmente por meio de injeção, e inclui, sem limitação, injeção e infusão intravenosa, intramuscular, intra-arterial, intratecal, intracapsular, intraorbital, intracardíaca, intradérmica, intraperitoneal, transtraqueal, subcutânea, subcuticular, intra-articular, subcapsular, subaracnoidea, intraespinal, epidural e intraesternal.

Como alternativa, um anticorpo ou outro fármaco ou molécula de C10RF32 e suas conjugados e combinações dos mesmos que modula uma atividade de antigénio C10RF32 de acordo com a invenção pode ser administrado através de uma via não parentérica, tal como via de administração tópica, epidérmica ou mucosal, por exemplo, por via intranasal, por via oral, por via vaginal, por via rectal, por via sublingual ou por via tópica.

Os compostos ativos podem ser preparados com veículos que protegerão ao composto contra uma libertação rápida, tal como formulação de libertação controlada, que inclui implantes, sistemas transdérmicos, e sistemas de administração microencapsulada. Podem ser usados polímeros biodegradáveis, biocompatíveis, tais como acetato de etileno e vinilo, polianídridos, ácido poliglicólico, colagénio, poliortoésteres, e ácido polilático. Muitos métodos para a preparação de tais formulações são patenteados ou, em geral, são conhecidos pelos peritos na especialidade. Veja-se, por exemplo, Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J. R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., Nova York, 1978.

As composições terapêuticas podem ser administradas com dispositivos médicos conhecidos na técnica. Por exemplo, numa forma de realização preferida, uma composição terapêutica da invenção pode ser administrada com um dispositivo de injeção com agulhas hipodérmicas, tais como os dispositivos que se revelam nos documentos de Patente dos Estados Unidos com números 5.399.163; 5.383.851; 5.312.335; 5.064.413; 4.941.880; 4.790.824; ou 4.596.556. Exemplos de implantes e módulos bem conhecidos úteis na presente invenção incluem: documento de Patente dos Estados Unidos N° 4.487.603, que revela uma bomba de microinfusão implantável para administrar medicação a uma taxa controlada; documento de Patente dos Estados Unidos N° 4.486.194. que revela um dispositivo terapêutico para administrar medicamentos através da pele; documento de Patente dos Estados Unidos N° 4.447.233, que revela uma bomba de infusão de medicação para administrar medicação a uma taxa de infusão precisa; documento de Patente dos Estados Unidos N° 4.447.224, que revela um aparelho de infusão implantável de fluxo variável para administração continua do fármaco; documento de Patente dos Estados Unidos N° 4.439.196, que revela um sistema de administração osmótica do fármaco que tem compartimentos com múltiplas câmaras; e documento de Patente dos Estados Unidos N° 4.475.196, que revela um sistema de administração osmótica do fármaco. Estas patentes são incorporadas no presente documento por referência. Os peritos na especialidade conhecem outros muitos de tais implantes, sistemas de administração, e módulos.

Os anticorpos ou outros fármacos relacionados com VSIG1 podem ser formulados para assegurar a distribuição apropriada in vivo. Por exemplo, a barreira hematoencefálica (BBB) exclui muitos compostos altamente hidrófilos. Para assegurar que os contextos terapêuticos cruzem a BBB (se for desejado), podem ser formulados, por exemplo, em lipossomas. Para métodos de fabrico de lipossomas, vejam-se, por exemplo, os documentos de Patente dos Estados Unidos com números 4.522.811; 5.374.548; e 5.399.331. Os lipossomas podem compreender um ou mais resíduos que se transportam de forma seletiva em células ou órgãos específicos, aumentando deste modo a administração dirigida do fármaco (veja-se, por exemplo, V. V. Ranade (1989) J. Clin. Pharmacol. 29: 685). Os resíduos de fixação como alvo por meio de exemplo incluem folato ou biotina (veja-se, por exemplo, o documento de Patente dos Estados Unidos N° 5.416.016 de Low et al.); manósidos (Umezawa et ai., (1988) Biochem. Biophys. Res. Commun. 153: 1038); anticorpos (P. G. Bloeman et al. (1995) FEBS Lett. 357: 140; M. Owais et al. (1995) Antimicrob. Agents Chemother. 39: 180); recetor tensioativo da proteína A (Briscoe et al. (1995) Am. J Physiol. 1233: 134); p 120 (Schreier et al. (1994) J. Biol. Chem. 269: 9090); veja-se também K.

Keinanen; M. L. Laukkanen (1994) FEBS Lett. 346:123; J. J. Killion; I. J. Fidler (1994) Immunomethods 4: 273. UTILIZAÇÕES PARA DIAGNÓSTICO DO ANTIGÉNIO C10RF32 E POLINUCLEÓTIDOS CORRESPONDENTES

De acordo com algumas formas de realização, a amostra tomada de um indivíduo (paciente) para realizar ensaios de diagnóstico de acordo com a presente invenção seleciona-se a partir do grupo que consiste num fluido ou secreção corporal que inclui, mas não se limita a, sangue, soro, urina, plasma, fluido prostático, fluido seminal, sémen, as secreções externas da pele, tratos respiratório, intestinal, e geniturinário, lágrimas, fluido cérebroespinal, esputo, saliva, leite, fluido peritoneal, fluido pleural, fluido de cisto, secreções de sistema dutal da mama (e/ou lavagem dos mesmos), lavagem bronco alveolar, lavagem do sistema reprodutor e lavagem de qualquer outra parte do organismo ou sistema no organismo; amostras de qualquer outro órgão que incluem células ou tecidos isolados, nas quais a célula ou tecido pode ser obtida de um órgão selecionado a partir de, mas não limitado a, tecido de pulmão, cólon, ovário e/ou mama; fezes ou uma amostra de tecido, ou qualquer combinação dos mesmos. Em algumas formas de realização, o termo inclui amostras de componentes de cultivo celular in vivo. Antes de submetê-la ao ensaio de diagnóstico, a amostra pode ser diluída opcionalmente com um eluente adequado.

Em algumas formas de realização, o termo "marcador" no contexto da presente invenção refere-se a um fragmento de ácido nucleico, um péptido, ou um polipéptido, que está presente de forma diferencial numa amostra tomada de pacientes (indivíduos) que têm uma das doenças ou afeções que são descritas no presente documento, em comparação com uma amostra comparável tomada de indivíduos que não têm uma das doenças ou afeções descritas anteriormente.

Em algumas formas de realização, é para ser entendido que o termo "polipéptido" se refere a uma molécula que compreende pelo menos de 2 a vários milhares ou mais aminoácidos. É para ser entendido que o termo "polipéptido" inclui, entre outros, péptidos nativos (produtos de degradação, péptidos sintetizados de forma sintética ou péptidos recombinantes), peptidomiméticos, tais como peptoides e semipeptoides ou análogos de péptido, que podem compreender, por exemplo, qualquer modificação desejável, que inclui, entre outras, modificações que fazem com que os péptidos sejam mais estáveis quando estão num organismo ou sejam mais capazes de penetrar nas células, ou outras tais como observará um perito na especialidade. Tais modificações incluem, mas não se limitam a, modificação da extremidade N, modificação da extremidade C, modificação de ligação peptídico, modificações na estrutura principal, modificação de resíduos, ou outras. A inclusão de tais péptidos dentro dos polipéptidos da presente invenção pode produzir um polipéptido que partilha sua identidade com os polipéptidos que são descritas no presente documento, por exemplo, os que são proporcionados na lista de sequências.

Em algumas formas de realização, a expressão "presente de forma diferencial" refere-se a diferenças na quantidade ou qualidade de um marcador presente numa amostra tomada de pacientes que têm uma das doenças ou afeções que são descritas no presente documento em comparação com uma amostra comparável tomada de pacientes que não têm uma das doenças ou afeções que são descritas no presente documento. Por exemplo, um fragmento de ácido nucleico pode estar presente opcionalmente de forma diferencial entre as duas amostras se a quantidade do fragmento de ácido núcleo numa amostra for significativamente diferente da quantidade do fragmento de ácido nucleico na outra amostra, por exemplo tal como se mede por meio de hibridação e/ou ensaios baseados em NAT. Um polipéptido está presente de forma diferencial entre as duas amostras se a quantidade do polipéptido numa amostra for significativamente diferente da quantidade de polipéptido na outra. Deveria ser indicado que se o marcador for detetável numa amostra e não for detetável na outra, então pode ser considerado que tal marcador está presente de forma diferencial. Opcionalmente, uma quantidade relativamente baixa de regulação positiva pode servir como o marcador, tal como é descrito no presente documento. Um perito ordinário na especialidade poderia determinar facilmente tais níveis relativos dos marcadores; a seguir é proporcionada uma guia adicional na descrição de cada marcador individual.

Em algumas formas de realização, o termo "diagnóstico" refere-se à identificação da presença ou natureza de uma afeção patológica. Os métodos de diagnóstico diferenciam-se em sua sensibilidade e especificidade. A "sensibilidade" de um ensaio de diagnóstico é a percentagem de indivíduos enfermos que dão positivo no ensaio (percentagem de "positivos reais"). Os indivíduos doentes não detetados pelo ensaio são "falsos negativos". Os indivíduos que não estão doentes e que deram negativo no ensaio denominam-se "negativos reais". A "especificidade" de um ensaio de diagnóstico é 1 menos a taxa de falsos positivos, na qual a taxa de "falso positivo" se define como a proporção dos que não têm a doença que deram positivo no ensaio. Embora um método de diagnóstico em particular, pode não proporcionar um diagnóstico definitivo de uma afeção, é suficiente se o método proporciona uma indicação positiva que ajuda no diagnóstico.

Em algumas formas de realização, o termo "qualitativo" quando faz referência a diferenças nos níveis de expressão de um polinucleótido ou polipéptido tal como é descrito no presente documento, refere-se à presença contra a ausência de expressão, ou em algumas formas de realização, a regulação temporal da expressão, ou em algumas formas de realização, o momento da expressão, ou em algumas formas de realização, qualquer modificação depois da tradução à molécula expressa, e outros, tais como observará um perito na especialidade. Em algumas formas de realização, o termo "quantitativo" quando faz referência a diferenças nos níveis de expressão de um polinucleótido ou polipéptido tal como é descrito no presente documento, refere-se a diferenças absolutas na quantidade de expressão, tal como se determina por meio de qualquer meio, conhecido na técnica, ou noutras formas de realização, diferenças relativas, que podem ser estatisticamente significativas, ou em algumas formas de realização, quando se visualiza como um todo ou durante um período de tempo prolongado, etc., indicam uma tendência em termos de diferenças na expressão.

Em algumas formas de realização, o termo "diagnóstico" refere-se à classificação de uma doença ou um sintoma, que determina uma gravidade da doença, controlo da evolução da doença, previsão de um resultado de uma doença e/ou perspetivas de recuperação. 0 termo "detetar" também pode incluir opcionalmente qualquer dos anteriores. 0 diagnóstico de uma doença de acordo com a presente invenção, em algumas formas de realização, pode ser afetado por meio da determinação de um nível de um polinucleótido ou um polipéptido da presente invenção numa amostra biológica obtida do indivíduo, no qual o nível determinado pode ser correlacionado com a predisposição a, ou a presença ou a ausência da doença. Deveria ser indicado que uma "amostra biológica obtida do indivíduo" também pode compreender opcionalmente uma amostra que não foi retirada fisicamente do indivíduo, tal como é descrito com mais detalhes a seguir.

Em algumas formas de realização, o termo "nível" refere-se a níveis de expressão de ARN e/ou proteína ou ao número de cópias de ADN de um marcador da presente invenção.

No geral, o nível do marcador numa amostra biológica obtida do indivíduo é diferente (isto é, aumenta ou diminui) do nível do mesmo marcador numa amostra similar obtida a partir de um indivíduo saudável (no presente documento são descritos exemplos de amostras biológicas).

Podem ser usados numerosos métodos para a colheita de tecido ou fluido bem conhecidos para colher a amostra biológica do indivíduo com a finalidade de determinar o nível de ADN, ARN e/ou polipéptido do marcador de interesse no indivíduo.

Os exemplos incluem, mas não se limitam a, biopsia com agulha fina, biopsia com agulha, biopsia com agulha núcleo e biopsia cirúrgica (por exemplo, biopsia cerebral), e lavagem. Independentemente do método usado, uma vez que é obtida uma biopsia/amostra, pode ser determinada o nível do marcador e portanto pode ser feito um diagnóstico. A determinação do nível do mesmo marcador em tecidos normais do mesmo origem é realizada preferentemente no mesmo momento para detetar um aumento da expressão e/ou amplificação e/ou uma diminuição da expressão, do marcador em oposição aos tecidos normais.

Em algumas formas de realização, a expressão "quantidade de ensaio" de um marcador refere-se a uma quantidade de um marcador numa amostra do indivíduo que é coerente com um diagnóstico de uma doença ou afeção em particular. Uma quantidade de ensaio pode ser apresentada numa quantidade absoluta (por exemplo, micrograma/ml) ou uma quantidade relativa (por exemplo, intensidade relativa de sinais).

Em algumas formas de realização, a expressão "quantidade de controlo" de um marcador pode ser qualquer quantidade ou um intervalo de quantidades a comparar contra uma quantidade de ensaio de um marcador. Por exemplo, uma quantidade de controlo de um marcador pode ser a quantidade de um marcador num paciente com uma doença ou afeção em particular, ou uma pessoa sem tal doença ou afeção. Uma quantidade de controlo pode ser apresentada numa quantidade absoluta (por exemplo, micrograma/ml) ou uma quantidade relativa (por exemplo, intensidade relativa de sinais).

Em algumas formas de realização, o termo "detetar" refere-se à identificação da presença, ausência ou quantidade do objeto a detetar.

Em algumas formas de realização, o termo "marcador" inclui qualquer resíduo ou item detetável por meios espetroscópicos, fotoquímicos, bioquímicos, imunoquímicos, ou químicos. Por exemplo, os marcadores úteis incluem 32P, 35S, corantes fluorescentes, reagentes com densidade eletrónica, enzimas (por exemplo, tal como se usa normalmente num ELISA), biotina-estreptavadina, dioxigenina, haptenos e proteínas para as quais estão disponíveis antissoros ou anticorpos monoclonais, ou moléculas de ácidos nucleicos com uma sequência complementar a um alvo. 0 marcador com frequência gera um sinal que pode ser medido, tal como um sinal radiativo, cromogénico, ou fluorescente, que pode ser usado para quantificar a quantidade de marcador ligado numa amostra. 0 marcador pode ser incorporado ou ligado a um iniciador ou sonda covalentemente, ou através de ligações iónicas, de van der Waals ou de hidrogénio, por exemplo, incorporação de nucleótidos radiativos, ou nucleótidos biotinilados que se reconhecem com estreptavadina. 0 marcador pode ser detetado direta ou indiretamente. A deteção indireta pode implicar a ligação de um segundo marcador ao primeiro marcador, direta ou indiretamente. Por exemplo, o marcador pode ser o ligando de um parceiro de ligação, tal como biotina, que é um parceiro de ligação para a estreptavadina, ou uma sequência de nucleótidos, que é o parceiro de ligação para uma sequência complementar, à que pode ser hibridada de forma especifica. 0 parceiro de ligação pode ser detetado diretamente em si mesmo, por exemplo, um anticorpo em si mesmo pode ser marcado com uma molécula fluorescente. 0 parceiro de ligação também pode ser detetado indiretamente, por exemplo, um ácido nucleico que tem uma sequência de nucleótidos complementar pode ser uma parte de uma molécula de ADN ramificado que por sua vez pode ser detetado através de hibridação com outras moléculas de ácidos nucleicos marcadas (veja-se, por exemplo, P. D. Fahrlander e A. Klausner, Bio/Technology 6: 1165 (1988)). A quantificação do sinal é conseguida, por exemplo, por meio de contagem de cintilação, densitometria, ou citometria de fluxo.

Os marcadores detetáveis por meio de exemplo, opcional e preferentemente para utilização com imunoensaios, incluem, mas não se limitam a, contas magnéticas, corantes fluorescentes, radiomarcadores, enzimas (por exemplo, peroxidase de rábano picante, fosfatase alcalina e outras usadas normalmente num ELISA), e marcadores calorimétricos tais como ouro coloidal ou vidro colorido ou contas de plástico. Como alternativa, o marcador na amostra pode ser detetado usando um ensaio indireto, no qual, por exemplo, um segundo anticorpo marcado usa-se para detetar anticorpo específico do marcador ligado, e/ou num ensaio de competição ou inibição no qual, por exemplo, um anticorpo monoclonal que se liga a um epítopo distinto do marcador é incubado simultaneamente com a mistura. 0 "imunoensaio" é um ensaio que usa um anticorpo que se liga especificamente a um antigénio. 0 imunoensaio carateriza-se pela utilização de propriedades de ligação específicas de um anticorpo em particular, para isolar, ter como alvo, e/ou quantificar o antigénio. A expressão " liga-se de forma específica (ou de forma seletiva)" a um anticorpo ou "especificamente (ou seletivamente) imunorreativo com" ou "interage ou liga-se de forma específica" quando faz referência a uma proteína ou péptido (houve outro epítopo), em algumas formas de realização refere-se a uma reação de ligação que é determinante da presença da proteína numa população heterogénea de proteínas e outros agentes biológicos. Portanto, nas condições de imunoensaio designadas, os anticorpos especificados ligam-se a uma proteína particular, pelo menos duas vezes mais que o fundo (sinal não específico) e não se ligam substancialmente numa quantidade significativa a outras proteínas presentes na amostra. A ligação específica a um anticorpo em tais condições pode necessitar um anticorpo que é selecionado por sua especificidade para uma proteína particular. Por exemplo, os anticorpos policlonais aumentados até a proteína básica seminal de espécies específicas tais como rato, ratinho, ou ser humano podem ser selecionados para obter somente os anticorpos policlonais que são especificamente imuorreagentes com a proteína básica seminal e não com outras proteínas, exceto para variantes polimórficas e alelos de proteína básica seminal. Esta seleção pode ser conseguida por meio da subtração de anticorpos que reagem de forma cruzada com moléculas de proteína básica seminal de outras espécies. Pode ser usada uma diversidade de formatos de imunoensaio para selecionar anticorpos especificamente imunorreagentes com uma proteína particular. Por exemplo, são usados de forma rotineira imunoensaios de ELISA em fase sólida para selecionar anticorpos especificamente imunorreagentes com uma proteína (veja-se, por exemplo, Harlow e Lane, Antibodies, A Laboratory Manual (1988), para uma descrição de formatos e condições de imunoensaio que podem ser usados para determinar imunorreatividade específica). Em geral, uma reação específica ou seletiva será pelo menos duas vezes a sinal de fundo ou ruído e mais geralmente mais de 10 a 100 vezes o fundo.

Noutra forma de realização, a presente invenção proporciona um método para detetar os polipéptidos da presente invenção numa amostra biológica, que compreende: colocar em contato uma amostra biológica com um anticorpo que reconhece de forma específica um polipéptido de acordo com a presente invenção e detetar a dita interação; no qual a presença de uma interação se correlaciona com a presença de um polipéptido na amostra biológica.

Em algumas formas de realização da presente invenção, os polipéptidos que são descritos no presente documento são exemplos não limitativos de marcadores para diagnóstico de uma doença e/ou uma afeção indicativa. Cada marcador da presente invenção pode ser usado em separado ou em combinação, para diversas utilizações, que incluem, mas não se limitam a, pronóstico, predição, identificação sistemática, diagnóstico precoce, determinação da evolução, seleção de terapêutica e controlo do tratamento de uma doença e/ou uma afeção indicativa.

Num objeto relacionado, as doenças detetadas incluirão cancros tais como tumores não sólidos e sólidos, sarcomas, neoplasias hematológicas que incluem, mas não se limitam a leucemia linfocítica aguda, leucemia linfocítica crónica, leucemia linfocítica crónica, leucemia mielógena crónica, mieloma múltipla, linfoma de Hodgkin, linfoma não Hodgkin, cancro de mama, próstata, pulmão, ovário, cólon, baço, rim, bexiga, cabeça e pescoço, útero, testículos, estômago, colo uterino, fígado, ossos, pele, pâncreas, cérebro e nas quais o cancro pode ser não metastático, invasivo ou metastático.

Noutro objeto relacionado, as doenças detetadas incluirão distúrbios autoimunes e neoplásicos selecionados a partir do grupo que consiste em esclerose múltipla; psoríase; artrite reumatoide; lúpus eritematoso sistémico; colite ulcerosa; doença de Crohn; distúrbios imunes associados com rejeição a transplante de enxerto, angeíte linfocítica benigna, lúpus eritematoso, tiroidite de Hashimoto, mixedema primário, doença de Graves, anemia perniciosa, gastrite atrófica autoimune, doença de Addison, diabetes mellitus dependente de insulina, síndrome de Goodpasture, miastenia gravis, pênfigo, oftalmia simpática, uveíte autoimune, anemia hemolítica autoimune, trombocitopenia idiopática, cirrose biliar primária, hepatite de ação crónica, colite ulcerosa, síndrome de Sjogren, doença reumática, polimiosite, esclerodermia, doença mista do tecido subjuntivo, reumatismo inflamatório, reumatismo degenerativo, reumatismo extra-articular, doenças do colagénio, poliartrite crónica, psoríase artropática, espondilite anquilosante, artrite reumatoide juvenil, periartrite escapulumeral, panarterite nodosa, esclerodermia sistémica progressiva, artrite urática, dermatomiosite, reumatismo muscular, miosite, miogelose e condrocalcinose.

Noutro objeto relacionado, as doenças detetadas incluirão rejeição de qualquer transplante de órgão e/ou doença de enxerto contra o hospedeiro.

Cada polipéptido/polinucleótido da presente invenção podem ser usados em separado ou em combinação, para diversas utilizações, que incluem, mas não se limitam a, pronóstico, predição, identificação sistemática, diagnóstico precoce, determinação da evolução, seleção de terapêutica e controlo do tratamento da doença e/ou uma afeção indicativa, tal como foi pormenorizado anteriormente.

Tal combinação pode compreender opcionalmente qualquer subcombinação de marcadores, e/ou uma combinação que carateriza pelo menos outro marcador, por exemplo um marcado conhecido. Além disso, tal combinação pode ser usado opcional e preferentemente tal como foi descrito anteriormente com relação à determinação de uma relação entre uma medida quantitativa ou semiquantitativa de qualquer outro marcador que se descreve no presente documento com relação a qualquer outro marcador descrito no presente documento, e/ou qualquer outro marcador conhecido, e/ou qualquer outro marcador.

De acordo com formas de realização adicionais da presente invenção, os marcadores da presente invenção poderiam ser usados opcionalmente em separado ou em combinação com marcadores conhecidos para cancro de pulmão, que incluem, mas não se limitam a CEA, CA15-3, Beta-2-microglobulina, CA19-9, TPA, e/ou em combinação com as proteínas conhecidas para o marcador variável tal como é descrito no presente documento.

De acordo com formas de realização adicionais da presente invenção, os marcadores da presente invenção poderiam ser usados opcionalmente em separado ou em combinação com marcadores conhecidos para cancro de ovário, que incluem, mas não se limitam a CEA, CA125 (Mucina 16), CA72-4TAG, CA-50, CA 54-61, CA-195 e CA 19-9 em combinação com CA-125, e/ou em combinação com as proteínas conhecidas para o marcador variável tal como é descrito no presente documento.

De acordo com formas de realização adicionais da presente invenção, os marcadores da presente invenção poderiam ser usados opcionalmente em separado ou em combinação com marcadores conhecidos para cancro de cólon, que incluem, mas não se limitam a CEA, CA19-9, CA50, e/ou em combinação com as proteínas conhecidas para o marcador variável tal como é descrito no presente documento.

Em algumas formas de realização da presente invenção, são proporcionados métodos, utilizações, dispositivos e ensaios para o diagnóstico de uma doença ou afeção. Opcionalmente, pode ser usada uma pluralidade de marcadores com a presente invenção. A pluralidade de marcadores pode incluir opcionalmente marcadores que são descritos no presente documento, e/ou um ou mais marcadores conhecidos. A pluralidade de marcadores correlaciona-se preferentemente a seguir com a doença ou afeção. Por exemplo, tal correlação pode compreender opcionalmente a determinação da concentração de cada uma da pluralidade de marcadores, e comparar individualmente cada concentração de marcador com um nível de limiar. Opcionalmente, se a concentração do marcador for superior ou inferior ao nível de limiar (dependendo do marcador e/ou do ensaio de diagnóstico que se está a realizar), a concentração do marcador correlaciona-se com a doença ou afeção. Opcional e preferentemente, uma pluralidade de concentrações de marcador correlaciona-se com a doença ou afeção.

Como alternativa, tal correlação pode compreender opcionalmente determinar a concentração de cada uma da pluralidade de marcadores, calcular um único valor de índice com base na concentração de cada uma da pluralidade de marcadores, e comparar o valor de índice com um nível de limiar.

Além disso, como alternativa, tal correlação pode compreender opcionalmente determinar uma alteração temporal em pelo menos um dos marcadores, e na qual a alteração temporal é usada na etapa de correlação.

Além disso, como alternativa, tal correlação pode compreender opcionalmente determinar se pelo menos um número "X" da pluralidade de marcadores tem uma concentração fora do intervalo predeterminado e/ou acima ou abaixo de um limiar (como foi descrito anteriormente). 0 valor de "X" pode ser opcionalmente um marcador, uma pluralidade de marcadores ou todos os marcadores; como alternativa ou adicionalmente, em lugar de incluir qualquer marcador na contagem de "X", pode ser necessário opcionalmente um ou mais marcadores específicos da pluralidade de marcadores para que se correlacione com a doença ou afeção (de acordo com um intervalo e/ou limiar).

Além disso, como alternativa, tal correlação pode compreender opcionalmente determinar se uma relação de concentrações de marcador para dois marcadores está fora de um intervalo e/ou acima ou abaixo de um limiar. Opcionalmente, se a relação estiver acima ou abaixo do nível de limiar e/ou fora do intervalo, a relação correlaciona-se com a doença ou afeção.

Opcionalmente, pode ser usada uma combinação de duas ou mais destas correlações com um painel individual e/ou para sua correlação entre uma pluralidade de painéis.

Opcionalmente, o método distingue uma doença ou afeção com uma sensibilidade de pelo menos 70 % a uma especificidade de pelo menos 85 % quando se compara com indivíduos normais. Tal como é usado no presente documento, sensibilidade refere-se ao número de amostras positivas (doentes) detetado com relação ao número total de amostras positivas presentes; especificidade refere-se ao número de amostras negativas reais (não doentes) detetado sobre o número total de amostras negativas presentes. Preferentemente, o método distingue uma doença ou afeção com uma sensibilidade de pelo menos 80 % a uma especificidade de pelo menos 90 % quando se compara com indivíduos normais. Mais preferentemente, o método distingue uma doença ou afeção com uma sensibilidade de pelo menos 90 % a uma especificidade de pelo menos 90 % quando se compara com indivíduos normais. Também, mais preferentemente, o método distingue uma doença ou afeção com uma sensibilidade de pelo menos 70 % a uma especificidade de pelo menos 85 % quando se compara com indivíduos que apresentam sintomas que imitam sintomas da doença ou afeção.

Um painel de marcador pode ser analisado num número de maneiras bem conhecidas pelos peritos na especialidade. Por exemplo, cada membro de um painel pode ser comparado com um valor "normal", ou um valor que indica um resultado particular. Um diagnóstico/pronóstico particular, pode depender da comparação de cada marcador com este valor; como alternativa, se somente um subconjunto de marcadores estiver fora de um intervalo normal, este subconjunto pode ser indicativo de um diagnóstico/pronóstico particular. O perito na especialidade também compreenderá que os marcadores de diagnóstico, marcadores de diagnóstico diferencial, marcadores de pronóstico, marcadores de momento do início, marcadores de diferenciação de doença ou afeção, etc., podem ser combinados num único ensaio ou dispositivo. Os marcadores também podem ser usados normalmente com múltiplas finalidades, por exemplo, por meio da aplicação de um limiar diferente ou um fator de peso diferente ao marcador para as diferentes finalidades.

Numa forma de realização, os painéis compreendem marcadores para as seguintes finalidades: diagnóstico de uma doença; diagnóstico de doença e indicação de se a doença está numa fase aguda e/ou se foi produzido um ataque agudo da doença; diagnóstico de doença e indicação de se a doença está numa fase não aguda e/ou se foi produzido um ataque não agudo da doença; indicação de se foi produzido uma combinação de fases ou ataques agudos e não agudos; diagnóstico de uma doença e pronóstico de um resultado adverso subsequente; diagnóstico de uma doença e pronóstico de uma fase ou ataque agudos ou não agudos subsequentes; evolução da doença (por exemplo para cancro, tal evolução pode incluir, por exemplo, aparecimento ou reaparição da metástase).

Os diagnósticos anteriores também podem incluir opcionalmente diagnóstico diferencial da doença para distingui-la de outras doenças, incluindo as doenças que podem apresentar um ou mais sintomas similares ou idênticos.

Em certas formas de realização, um ou mais indicadores de diagnóstico ou pronóstico correlacionam-se com uma afeção ou doença simplesmente pela presença ou ausência dos indicadores. Noutras formas de realização, podem ser estabelecidos os níveis de limiar de um indicador de diagnóstico ou pronóstico, e o nível dos indicadores numa amostra do paciente pode ser comparado simplesmente com os níveis de limiar. A sensibilidade e a especificidade de um ensaio de diagnóstico e/ou pronóstico dependem de mais que somente a "qualidade" analítica do ensaio, também dependem da definição do que constitui um resultado anormal. Na prática, as curvas de Caraterística Operativa do Recetor, ou curvas "ROC", em geral, calculam-se por meio de representação do valor de uma variável contra sua frequência relativa em populações "normais" e de "doença", e/ou por comparação de resultados a partir de um indivíduo, antes, durante e/ou depois do tratamento.

De acordo com formas de realização da presente invenção, a proteína C10RF32, polinucleótido ou um fragmento do mesmo, podem ser representados como um biomarcador para detetar a doença e/ou uma afeção indicativa, tal como foi pormenorizado anteriormente.

De acordo com ainda outras formas de realização, a presente invenção inclui opcional e preferentemente qualquer sequência de aminoácido ou fragmentos do mesmo codificados por uma sequência de ácidos nucleicos que corresponde a C10RF32, tal como é descrito no presente documento. Qualquer oligopéptido ou péptido que se relaciona com tal sequência de aminoácidos ou fragmento da mesma também pode ser usado opcionalmente (adicionalmente ou como alternativa) como um biomarcador.

Em ainda outras formas de realização, a presente invenção proporciona um método para detetar um polinucleótido da presente invenção numa amostra biológica, usando ensaios baseados em NAT, que compreendem: hibridar as moléculas de ácido nucleico isolado ou fragmentos de oligonucleótido de pelo menos aproximadamente um comprimento mínimo a um material de ácido nucleico de uma amostra biológica e detetar um complexo de hibridação; no qual a presença de um complexo de hibridação correlaciona-se com a presença do polinucleótido na amostra biológica. Os exemplos não limitativos de métodos ou ensaios são descritos a seguir. A presente invenção também se refere a kits com base em tais métodos ou ensaios de diagnóstico. ENSAIOS BASEADOS EM TECNOLOGIA DE ÁCIDOS NUCLEICOS (NAT): A deteção de um ácido nucleico de interesse numa amostra biológica também pode ser realizada opcionalmente por meio de ensaios baseados em NAT, que envolvem tecnologia de amplificação de ácidos nucleicos, tais como PCR por exemplo (ou variações da mesma tal como PCR em tempo real por exemplo) . Como é usado no presente documento, um "iniciador" define um oligonucleótido que é capaz de hibridar-se a (hibridar-se com) uma sequência alvo, criando deste modo uma região de cadeia dupla que pode servir como um ponto de início para a síntese de ADN em condições adequadas. A amplificação de uma sequência de ácidos nucleicos selecionada, ou alvo, pode ser realizada por meio de um número de métodos adequados conhecidos na técnica. Os exemplos não limitativos de técnicas de amplificação incluem reação em cadeia de polimerase (PCR), reação em cadeia de ligase (LCR) , amplificação com deslocamento de cadeia (SDA), amplificação baseada em transcrição, o sistema de replicase q3 e NASBA (Kwoh et al., 1989, Proc. Natl. Acad. Sei. USA 86, 1173-1177; Lizardi et al. , 1988, BioTechnology 6: 1197-1202; Malek et al. , 1994, Methods Mol. Biol., 28:253-260; e Sambrook et al., 1989, mencionado anteriormente) . Os exemplos não limitativos de ensaio baseado em Tecnologia de Ácidos Nucleicos são selecionados a partir do grupo que consiste numa PCR, PCR em Tempo Real, LCR, Reação de Síntese Autossustentada, Q-Beta Replicase, reação de sonda de ciclação, ADN ramificado, análise de RFLP, DGGE/TGGE, Polimorfismo de Conformação de Cadeia Simples, identificação genética com didesoxi, microarranjos, hibridação In Situ com Fluorescência e Hibridação Genómica Comparativa. No presente documento, a terminologia "par de amplificação" (ou "par iniciador") refere-se a um par de oligonucleótidos (oligos) da presente invenção, que são selecionados para que se usem em conjunto na amplificação de uma sequência de ácidos nucleicos selecionada por meio de um de um número de tipos de métodos de amplificação, preferentemente uma reação em cadeia de polimerase. Tal como se sabe normalmente na técnica, os oligos projetam-se para que se liguem a uma sequência complementar em condições selecionadas. Numa forma de realização particular, a amplificação de uma amostra de ácido nucleico de um paciente amplifica-se em condições que favorecem a amplificação do ácido nucleico que é expresso diferencialmente mais abundante. Numa forma de realização preferida, a RT-PCR é realizada numa amostra de ARNm de um paciente em condições que favorecem a amplificação do ARNm mais abundante. Noutra forma de realização anterior, a amplificação dos ácidos nucleicos expressos de forma diferencial é realizada simultaneamente. Um perito na especialidade observará que tais métodos poderiam ser adaptados para a deteção de proteínas expressas em forma diferencial em lugar de sequências de ácidos nucleicos que são expressos de forma diferencial. 0 ácido nucleico (isto é ADN ou ARN) para a prática da presente invenção pode ser obtido de acordo com métodos bem conhecidos.

Os iniciadores de oligonucleótidos da presente invenção podem ter qualquer comprimento adequado, dependendo do formato de ensaio particular, e das necessidades particulares, e dos genomas fixos como alvo usados. Opcionalmente, os iniciadores de oligonucleótido têm pelo menos 12 nucleótidos de comprimento, preferentemente entre 15 e 24 moléculas, e podem ser adaptados para que se ajustem especialmente a um sistema de amplificação de ácidos nucleicos escolhido. Tal como se sabe normalmente na técnica, os iniciadores de oligonucleótido podem ser projetados tendo em conta o ponto de fusão de hibridação do mesmo com sua sequência fixa como alvo (Sambrook et ai., 1989, Molecular Cloning - A Laboratory Manual, 2a Edição, CSH Laboratories; Ausubel et ai., 1989, em Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons Inc., N.E.).

IMUNOENSAIOS

Noutra forma de realização da presente invenção, urn imunoensaio pode ser usado para detetar e analisar qualitativa ou quantitativamente marcadores numa amostra. Este método compreende: proporcionar um anticorpo que se liga de forma especifica a um marcador; colocar em contato uma amostra com o anticorpo; e detetar a presença de um complexo do anticorpo unido ao marcador na amostra.

Para preparar um anticorpo que se liga de forma especifica a um marcador, podem ser usados marcadores de proteína purificada. Podem ser preparados anticorpos que se ligam de forma específica a um marcador de proteína usando qualquer método adequado conhecido na técnica.

Depois de proporcionar o anticorpo, um marcador pode ser detetado e/ou quantificado usando qualquer de um número de ensaios de ligação imunológica bem reconhecidos. Os ensaios úteis incluem, por exemplo, um ensaio imuno enzimático (EIA) tal como ensaio de imunoabsorção ligada a enzimas (ELISA), um ensaio radioimune (RIA), um ensaio de Western blot, ou um ensaio de slot blot. Vejam-se, por exemplo, os documentos de Patente dos Estados Unidos com números 4.366.241; 4.376.110; 4.517.288; e 4.837.168). Geralmente, uma amostra obtida de um indivíduo pode ser colocada em contato com o anticorpo que se liga de forma específica ao marcador.

Opcionalmente, o anticorpo pode ser fixo a um suporte sólido para facilitar a lavagem e posterior isolamento do complexo, antes de colocar em contato o anticorpo com uma amostra. Os exemplos de suportes sólidos incluem, mas não se limitam a, vidro ou plástico em forma de, por exemplo, uma placa de microtitulação, uma haste, uma conta, ou uma microconta. Os anticorpos também podem ser ligados a um suporte sólido.

Depois de incubar a amostra com anticorpos, a mistura é lavada e o complexo de anticorpo-marcador formado pode ser detetado. Isto pode ser realizado por meio da incubação da mistura lavada com um reagente de deteção. Como alternativa, o marcador na amostra pode ser detetado usando um ensaio indireto, no qual, por exemplo, um segundo anticorpo marcado é usado para detetar o anticorpo específico demarcador ligado, e/ou num ensaio de competição ou inibição no qual, por exemplo, um anticorpo monoclonal que se liga a um epítopo distinto do marcador é incubado simultaneamente com a mistura.

Durante todos os ensaios, podem ser necessárias etapas de incubação e/ou lavagem depois de cada combinação de reagentes. As etapas de incubação podem variar de aproximadamente 5 segundos a várias horas, preferentemente de aproximadamente 5 minutos a aproximadamente 24 horas. No entanto, o tempo de incubação dependerá o formato de ensaio, marcador, volume de solução, concentrações e similares. Normalmente, os ensaios serão realizados a temperatura ambiente, embora possam ser realizados num intervalo de temperaturas, tais como de 10 °C a 40 °C. O imunoensaio pode ser usado para determinar a quantidade de ensaio de um marcador numa amostra de um indivíduo. Em primeiro lugar, uma quantidade de ensaio de um marcador numa amostra pode ser detetada usando os métodos de imunoensaio que foram descritos anteriormente. Se um marcador estiver presente na amostra, este formará um complexo de anticorpo-marcador com um anticorpo que se liga de forma específica ao marcador nas condições de incubação adequadas descritas anteriormente. A quantidade de um complexo de anticorpo-marcador pode ser determinada opcionalmente por comparação com um padrão. Tal como foi indicado anteriormente, não é necessário medir a quantidade de ensaio de marcador em unidades absolutas, contanto que a unidade de medida possa ser comparada com uma quantidade e/ou sinal de controlo.

Radioimunoensaio (RIA): Numa versão, este método envolve a precipitação do substrato desejado e nos métodos que se detalham a seguir no presente documento, com um anticorpo específico e proteína de ligação a anticorpo radiomarcada (por exemplo, proteína A marcada com 1125) imobilizado num veículo precipitável tal como contas de agarose. O número de contagens no sedimento precipitado é proporcional à quantidade de substrato.

Numa versão alternativa do RIA, são usados um substrato marcado e uma proteína de ligação a anticorpo sem marcar. Uma amostra que contém uma quantidade desconhecida de substrato é adicionada em quantidades variáveis. A diminuição nas contagens precipitadas a partir do substrato marcado é proporcional à quantidade de substrato na amostra adicionada.

Ensaio de imunoabsorção ligada a enzimas (ELISA): Este método envolve a fixação de uma amostra (por exemplo, células fixas ou uma solução de proteínas) que contém um substrato de proteína a uma superfície tal como uma placa de microtitulação. Aplica-se um anticorpo especifico para substrato acoplado a uma enzima e permite-se que se ligue ao substrato. A seguir, deteta-se a presença do anticorpo e quantifica-se por meio de uma reação colorimétrica usando a enzima acoplada ao anticorpo. As enzimas usadas normalmente neste método incluem peroxidase de rábano picante e fosfatase alcalina. Se for bem calibrado e estiver dentro do intervalo de resposta, a quantidade de substrato presente na amostra é proporcional à quantidade de color produzido. Em geral, usa-se um padrão de substrato para melhorar a precisão quantitativa.

Western blot: Este método envolve a separação de um substrato de outra proteína por meio de um gel de acrilamida seguido de transferência do substrato a uma membrana (por exemplo, náilon ou PVDF). A presença do substrato deteta-se a seguir por meio de anticorpos específicos para o substrato, que por sua vez são detetados por meio de reagentes de ligação ao anticorpo. Os reagentes de ligação ao anticorpo podem ser, por exemplo, proteína A, ou outros anticorpos. Os reagentes de ligação ao anticorpo podem ser radiomarcados ou ligados com enzimas tal como foi descrito anteriormente no presente documento. A deteção pode ser por meio de autorradiografia, reação colorimétrica ou quimiluminescência. Este método permite tanto a quantificação de uma quantidade de substrato como a determinação de sua identidade por meio de uma posição relativa na membrana que é indicativa de uma distância de migração no gel de acrilamida durante a eletroforese.

Análise imunohistoquímica: Este método envolve a deteção de um substrato in situ em células fixas por meio de anticorpos específicos para o substrato. Os anticorpos específicos para o substrato podem ser ligados com enzimas ou podem ser ligados a fluoróforos. A deteção e a avaliação subjetiva realizam-se com microscópio. Se forem usados anticorpos ligados a enzimas, pode ser necessária uma reação colorimétrica.

Classificação celular ativada com fluorescência (FACS) : Este método envolve a deteção de um substrato in situ em células por meio de anticorpos específicos para o substrato. Os anticorpos específicos para o substrato se ligam a fluoróforos. A deteção é realizada por meio de uma máquina de classificação celular que lê o comprimento de onda da luz emitida desde cada célula a medida que passa através de um raio de luz. Este método pode usar dois ou mais anticorpos simultaneamente.

MÉTODOS DE RADIOFORMAÇÃO DE IMAGENS

Estes métodos incluem, mas não se limitam a, tomografia de emissão de positrões (PET) tomografia computadorizada de emissão monofotónica (SPECT). Estas duas técnicas não são invasivas, e podem ser usadas para detetar e/ou medir uma grande diversidade de eventos e/ou funções teciduais, tais como deteção de células cancerígenas por exemplo. Ao contrário de PET, SPECT podem ser usados opcionalmente com dois marcadores simultaneamente. SPECT tem algumas outras vantagens assim como, por exemplo com relação ao custo e os tipos de marcadores que podem ser usados. Por exemplo, o documento de Patente dos Estados Unidos N° 6.696.686 descreve a utilização de SPECT para deteção de cancro de mama, e é incorporado pela presente por referência tal como se expõe totalmente no presente documento. TERANÓSTICA: 0 termo teranóstica descreve a utilização de ensaio diagnóstico para diagnosticar a doença, escolha do regime de tratamento correto de acordo com os resultados do ensaio de diagnóstico e/ou controlo da resposta do paciente à terapêutica de acordo com os resultados do ensaio de diagnóstico. Os ensaios teranósticos podem ser usados para selecionar pacientes para tratamentos que é provável que sejam beneficiados em particular, e que de forma pouco provável produzam efeitos secundários. Também podem proporcionar uma indicação precoce e objetiva da eficácia do tratamento em pacientes individuais, de modo que (se for necessário) o tratamento pode ser alterado com um mínimo de atraso. Por exemplo: DAKO e Genentech em conjunto criaram HercepTest e Herceptin (trastuzumab) para o tratamento do cancro de mama, o primeiro ensaio teranóstico aprovado simultaneamente com um novo fármaco terapêutico. Além de HercepTest (que é um ensaio imunohistoquímico) , estão em desenvolvimento outros ensaios teranósticos que usam química clínica tradicional, imunoensaio, tecnologias baseadas em células e ensaios de ácidos nucleicos. 0 ensaio de TPMT (tiopurina S-metil-transferase) de PPGx lançado recentemente, que está a permitir que os doutores identifiquem pacientes com risco de reações secundárias potencialmente mortais à 6-mercaptopurina, um agente usado no tratamento da leucemia. Além disso, Nova Molecular foram os primeiros na forma de realização de genótipos de SNP do gene da apoliproteína E para prever respostas dos pacientes com doença de Alzheimer a terapêuticas colinomiméticas e na atualidade usa-se amplamente em ensaios clínicos de novos fármacos para esta indicação. Portanto, o campo da teranóstica representa a interseção da informação do ensaio de diagnóstico que prediz a resposta de um paciente a um tratamento com a seleção do tratamento apropriado para este paciente particular. MARCADORES SUSTITUTOS:

Um marcador substituto é um marcador, que pode ser detetado num laboratório e/ou de acordo com um sinal ou sintoma físico no paciente, e que se usa em ensaios terapêuticos como um substituto para um ponto final clinicamente significativo. 0 marcador substituto é uma medida direta de como se sente, funciona, ou sobrevive um paciente que se espera que prediga o efeito da terapêutica. A necessidade de marcadores substitutos aparece principalmente quando tais podem ser divididos de forma mais precoce, de forma mais conveniente, ou de forma mais frequente que os pontos finais de interesse em termos do efeito do tratamento num paciente, que se denominam pontos finais clínicos. De forma ideal, um marcador substituto deveria ser biologicamente plausível, preditivo da evolução da doença e deveria ser possível medir com ensaios padronizados (que incluem, mas não se limitam a, modalidades de química clínica tradicional, imunoensaio, tecnologias baseadas em células, ensaios de ácidos nucleicos e formação de imagens).

Os pontos finais substitutos usaram-se primeiro principalmente na área cardiovascular. Por exemplo, foram aprovados fármacos antihipertensivos com base em sua eficácia para reduzir a pressão sanguínea. De forma análoga, no passado, foram aprovados agentes que reduzem o colesterol com base em sua capacidade para diminuir o colesterol em soro, não há evidência direta de que diminuam a mortalidade por doença cardíaca aterosclerótica. Na atualidade, a medida dos níveis de colesterol é um marcador substituto aceite de aterosclerose. Além disso, os dois marcadores substitutos usados mais habitualmente na atualidade em estudos de VIH são contagens de linfócitos T de CD4+ e ARN de VIH em plasma quantitativo (carga virai). Em algumas formas de realização da presente invenção, o padrão de expressão de polipéptido/polinucleótido pode servir como um marcador substituto para uma doença em particular, tal como o observará um perito na especialidade.

UTILIZAÇÕES E MÉTODOS DA INVENÇÃO

Os fármacos de C10RF32 de acordo com a invenção, especialmente anticorpos, em particular, os anticorpos humanos, composições de anticorpos, e conjugados solúveis que contêm o ectodominio do antigénio C10RF32 ou um fragmento ou variante do mesmo, ou uma sequência de ácidos nucleicos correspondentes ou vetor ou célula que expressa os mesmos e métodos da presente invenção têm numerosas utilidades de diagnóstico e terapêuticas in vitro e in vivo que envolvem o diagnóstico e tratamento de distúrbios relacionados com o antigénio C10RF32 e/ou distúrbios nos quais a modulação da co-estimulação imune, por exemplo, que envolve a co-estimulação imune relacionada com B7 que envolve ao antigénio C10RF32. Tal como foi indicado, estas afeções incluem em particular, cancros que expressam de forma diferencial o antigénio C10RF32, tais como cancro de pulmão, cancro de ovário, cancro de cólon, incluindo formas invasivas e metastáticas dos mesmos, e/ou afeções autoimunes nas quais se deseja terapeuticamente a modulação da co-estimulação tal como a implicação de B7. Os anticorpos anti-C10RF32 objeto podem prevenir a estimulação negativa mediada por B7 da atividade dos linfócitos T contra células cancerígenas e/ou prevenir a estimulação positiva da atividade dos linfócitos T. Tais anticorpos podem ser usados no tratamento de afeções que incluem cancros tais como tumores não sólidos e sólidos, sarcomas, neoplasias hematológicas que incluem, mas não se limitam a leucemia linfocítica aguda, leucemia linfocítica crónica, leucemia linfocítica crónica, leucemia mielógena crónica, mieloma múltipla, linfoma de Hodgkin, linfoma não Hodgkin, cancro de mama, próstata, pulmão, ovário, cólon, baço, rim, bexiga, cabeça e pescoço, útero, testículos, estômago, colo uterino, fígado, ossos, pele, pâncreas, cérebro e nas quais o cancro pode ser não metastático, invasivo ou metastático assim como distúrbios não malignos tais como distúrbios imunes que incluem, mas não se limitam a rejeição a transplante e doença de enxerto contra o hospedeiro, e distúrbios autoimunes tais como os mencionados anteriormente.

Por exemplo, estas moléculas podem ser administradas a células em cultivo, in vitro ou ex vivo, ou a indivíduos humanos, por exemplo, in vivo, para tratar, prevenir e para diagnosticar uma diversidade de distúrbios. Os indivíduos preferidos incluem pacientes humanos que têm distúrbios mediados por células que expressam o antigénio C10RF32 e células que possuem atividade de C10RF32. Os métodos são particularmente adequados para o tratamento de pacientes humanos que têm um distúrbio associado com expressão anómala do antigénio C10RF32 usando anticorpos que se ligam de forma específica a H19011_1_P8 (SEQ ID N° : 48), Hl 9 011_1_P9 (SEQ ID N°: 50)

Os fármacos de C10RF32 de acordo com a invenção são administrados juntamente com outro agente, e os dois podem ser administrados em qualquer ordem ou de forma simultânea.

Dada a ligação específica dos anticorpos da invenção para C10RF32, os anticorpos da invenção podem ser usados para detetar de forma específica a expressão de C10RF32 na superfície das células e, além disso, podem ser usados para purificar o antigénio C10RF32 através de purificação por imunoafinidade.

Além disso, dada a expressão de C10RF32 em diversas células tumorais, os anticorpos humanos, composições de anticorpo e métodos da presente invenção podem ser usados para tratar um indivíduo com um distúrbio tumorigénico, por exemplo, um distúrbio caraterizado pela presença de células tumorais que expressam o antigénio C10RF32 tal como cancro de pulmão e cancro de ovário, tal como foi mencionado.

Numa forma de realização, os anticorpos (por exemplo, anticorpos monoclonais humanos, moléculas e composições multiespecíficas e biespecíficas) da invenção podem ser usados para detetar níveis de C10RF32 ou níveis de células que contêm C10RF32 em sua superfície da membrana, cujos níveis podem ser ligados a seguir a determinados sintomas de doença. Como alternativa, os anticorpos podem ser usados para inibir ou bloquear a função de C10RF32 que, por sua vez, podem ser ligados à prevenção ou melhora de determinados sintomas de doença, o que envolve deste modo C10RF32 como um mediador da doença. Isto pode ser conseguido colocando em contato uma amostra e uma amostra de controlo com o anticorpo anti-C10RF32 em condições que permitem a formação de um complexo entre o anticorpo correspondente e C10RF32. Qualquer complexo formado entre o anticorpo e C10RF32 deteta-se e compara-se na amostra e no controlo.

Noutra forma de realização, os anticorpos (por exemplo, anticorpos humanos, moléculas e composições multiespecíficas e biespecíficas) da invenção inicialmente podem ser submetidos a ensaio para atividade de ligação associada com utilização terapêutica ou de diagnóstico in vitro. Por exemplo, as composições da invenção podem ser submetidas ao ensaio usando ensaios de citometria de fluxo.

Os anticorpos (por exemplo, anticorpos humanos, moléculas multiespecíficas e biespecíficas, imunoconjugados e composições) da invenção têm utilidade tradicional em terapêutica e diagnóstico de doenças relacionadas com C10RF32. Por exemplo, os anticorpos monoclonais humanos, as moléculas multiespecíficas ou biespecíficas e os imunoconjugados podem ser usados para provocar uma ou mais das seguintes atividades biológicas in vivo ou in vitro: para inibir o crescimento de e/ou eliminar uma célula que expressa C10RF32; para mediar fagocitose ou ADCC de uma célula que expressa C10RF32 em presença de células efetoras humanas, ou para bloquear a ligação do ligando C10RF32 a C10RF32.

Numa forma de realização particular, os anticorpos (por exemplo, anticorpos humanos, moléculas e composições multiespecíficas e biespecíficas) são usados in vivo para tratar, prevenir ou diagnosticar uma diversidade de doenças relacionadas. Os exemplos de doenças relacionadas com C10RF32 incluem, entre outros, cancro, tal como cancro de pulmão, cancro de ovário, cancro de cólon, outros tumores não sólidos e sólidos, sarcomas, neoplasias hematológicas que incluem, mas não se limitam a leucemia linfocítica aguda, leucemia linfocítica crónica, leucemia linfocítica crónica, leucemia mielógena crónica, mieloma múltipla, linfoma de Hodgkin, linfoma não Hodgkin, cancro de mama, próstata, baço, rim, bexiga, cabeça e pescoço, útero, testículos, estômago, colo uterino, fígado, ossos, pele, pâncreas, cérebro e nas quais o cancro pode ser não metastático, invasivo ou metastático. Os exemplos adicionais de doenças relacionadas com C10RF32 incluem, entre outros, distúrbios não malignos tais como distúrbios imunes que incluem, mas não se limitam a doenças autoimunes, rejeição a transplante e doença de enxerto contra o hospedeiro. Tais distúrbios incluem, por meio de exemplo, doenças autoimunes selecionadas entre esclerose múltipla; psoríase; artrite reumatoide; lúpus eritematoso sistémico; colite ulcerosa; doença de Crohn, distúrbios imunes associados com rejeição a transplante de enxerto, angeíte linfocítica benigna, lúpus eritematoso, tiroidite de Hashimoto, mixedema primário, doença de Graves, anemia perniciosa, gastrite atrófica autoimune, doença de Addison, diabetes mellitus dependente de insulina, síndrome de Goodpasture, miastenia gravis, pênfigo, oftalmia simpática, uveíte autoimune, anemia hemolítica autoimune, trombocitopenia idiopática, cirrose biliar primária, hepatite de ação crónica, colite ulcerosa, síndrome de Sjogren, doença reumática, polimiosite, esclerodermia, doença mista do tecido subjuntivo, reumatismo inflamatório, reumatismo degenerativo, reumatismo extra-articular, doenças do colagénio, poliartrite crónica, psoríase artropática, espondilite anquilosante, artrite reumatoide juvenil, periartrite escapulumeral, panarterite nodosa, esclerodermia sistémica progressiva, artrite urática, dermatomiosite, reumatismo muscular, miosite, miogelose e condrocalcinose.

As vias adequadas para administrar as composições de anticorpo (por exemplo, anticorpos monoclonais humanos, moléculas multiespecificas e biespecificas e imunocon j ugados) da invenção in vivo e in vitro são bem conhecidas na técnica e os peritos ordinários na especialidade podem seleciona-las. Por exemplo, as composições de anticorpos podem ser administradas por meio de injeção (por exemplo, intravenosa ou subcutânea). As dosagens adequadas das moléculas usadas dependerão da idade e do peso do indivíduo e da concentração e/ou formulação da composição de anticorpo.

Como foi descrito anteriormente, os anticorpos anti-C10RF32 humanos da invenção podem ser coadministrados com um ou outros agentes terapêuticos mais, por exemplo, um agente citotóxico, um agente radiotóxico e um agente imunossupressor. 0 anticorpo pode ser unido ao agente (como um imunocomplexo) ou pode ser administrado de forma separada do agente. No último caso (administração separada), o anticorpo pode ser administrado antes, depois ou de forma simultânea com o agente ou pode ser coadministrado com outras terapêuticas conhecidas, por exemplo, uma terapêutica anticancro, por exemplo, radiação. Tais agentes terapêuticos incluem, entre outros, agentes antineoplásicos tais como doxorrubicina (adriamicina), sulfato de cisplatina e bleomicina, carmustina, clorambucilo, e ciclofosfamida hidroxiureia que, por si mesmos, somente são eficazes a níveis que são tóxicos ou subtóxicos para um paciente. A cisplatina é administrada por via intravenosa como uma dose de 100 mg uma vez a cada quatro semanas e a adriamicina é administrada por via intravenosa como uma dose de 60-75 mg/ml uma vez a cada 21 dias. A coadministração dos anticorpos anti-C10RF32 humanos, ou fragmentos de ligação ao antigénio dos mesmos, da presente invenção com agentes quimioterápicos proporciona dois agentes anticancro que funcionam através de diferentes mecanismos que proporcionam um efeito citotóxico às células tumorais humanas. Tal coadministração pode resolver problemas devido ao desenvolvimento de resistência a fármacos ou a uma alteração na antigenicidade das células tumorais que os converteria em não reagentes com o anticorpo.

As células efetoras especificas de alvo, por exemplo, células efetoras unidas a composições (por exemplo, anticorpos humanos, moléculas multiespecificas e biespecificas) da invenção também podem ser usadas como agentes terapêuticos. As células efetoras para ter como alvo podem ser leucócitos humanos tais como macrófagos, neutrófilos ou monócitos. Outras células incluem eosinófilos, linfócitos citoliticos naturais e outras células que portam recetores de IgG ou IgA. Se for desejado, as células efetoras podem ser obtidas do indivíduo a tratar. As células efetoras específicas de alvo podem ser administradas como uma suspensão de células numa solução fisiologicamente aceitável. O número de células administradas deve ser da ordem de 10~8 a 10~9, mas variará dependendo da finalidade farmacêutica. Em geral, a quantidade será suficiente para obter localização na célula alvo, por exemplo, uma célula tumoral que expressa C10RF32 e para realizar a morte celular, por exemplo, por meio de fagocitose. As vias de administração também podem variar. A terapêutica com células efetoras específicas de alvo pode ser realizada conjuntamente com outras técnicas para eliminar células fixas como alvo. Por exemplo, a terapêutica antitumoral usando as composições (por exemplo, anticorpos humanos, moléculas multiespecificas e biespecificas) da invenção e/ou células efetoras armadas com estas composições pode ser usada conjuntamente com quimioterapia. Além disso, a imunoterapia de combinação pode ser usada para dirigir duas populações efetoras citotóxicas distintas para a rejeição da célula tumoral. Por exemplo, os anticorpos anti-C10RF32 ligados a RI anti-Fc-gama ou anti-CD3 podem ser usados conjuntamente com agentes de ligação específicos de recetores de IgG ou IgA.

As moléculas biespecificas e multiespecificas da invenção também podem ser usadas para modular R de Fc gama ou os níveis de R de Fc gama em células efetoras, tais como por meio de proteção e eliminação de recetores na superfície celular. Também podem ser usadas misturas de recetores de anti-Fc para esta finalidade.

As composições (por exemplo, anticorpos humanos, moléculas multiespecificas e biespecificas e imunoconjugados) da invenção que têm locais de ligação ao complemento, tais como porções de IgGl -2 ou -3 ou IgM que se ligam a complemento, também podem ser usadas em presença de complementos. Numa forma de realização, o tratamento ex vivo de uma população de células que compreende células alvo com um agente de união da invenção e células efetoras apropriadas pode ser suplementado por meio da adição de complemento ou soro que contém complemento. A fagocitose de células alvo revestidas com um agente de união da invenção pode ser melhorada por meio da ligação de proteínas de complemento. Noutra forma de realização, as células alvo revestidas com as composições (por exemplo, anticorpos humanos, moléculas multiespecificas e biespecificas) da invenção também podem ser lisadas por meio de complemento. Noutra forma de realização adicional, as composições da invenção não ativam o complemento.

As composições (por exemplo, anticorpos humanos, moléculas multiespecificas e biespecificas e imunoconjugados) da invenção também podem ser administradas juntamente com complemento. Por conseguinte, dentro do alcance da invenção estão composições que compreendem anticorpos humanos, moléculas multiespecificas ou biespecificas e soro ou complemento. Estas composições são vantajosas porque o complemento se localiza em proximidade aos anticorpos humanos, moléculas multiespecificas ou biespecificas. Como alternativa, os anticorpos humanos, moléculas multiespecificas ou biespecificas da invenção e o complemento ou soro podem ser administrados em separado.

Também dentro do alcance da presente invenção estão kits que compreendem o antigénio C10RF32 ou conjugados de C10RF32 ou composições de anticorpo da invenção (por exemplo, anticorpos humanos, moléculas biespecificas ou multiespecificas, ou imunoconjugados) e instruções de utilização. 0 kit pode conter adicionalmente um ou mais reagentes adicionais, tais como um reagente imunossupressor, um agente citotóxico ou um agente radiotóxico, ou um ou mais anticorpos humanos adicionais da invenção (por exemplo, um anticorpo humano que tem atividade complementar que se liga a um epitopo no antigénio C10RF32 distinto do primeiro anticorpo humano).

Por conseguinte, pode ser administrado adicionalmente (antes de, simultaneamente com, ou depois da administração de um anticorpo humano da invenção) outro agente terapêutico aos pacientes tratados com composições de anticorpo da invenção, tal como um agente citotóxico ou radiotóxico, que potência ou aumenta o efeito terapêutico dos anticorpos humanos.

Noutras formas de realização, o indivíduo pode ser tratado adicionalmente com um agente que modula, por exemplo, aumenta ou inibe, a expressão ou atividade de recetores de Fcy ou Fcy, por exemplo, por tratamento do indivíduo com uma citocina. As citocinas preferidas para administração durante o tratamento com a molécula multiespecífica incluem fator de estimulação de colónias de granulócitos (G-CSF) , fator de estimulação de colónias de granulócitos e macrófagos (GM-CSF), interferão gama (IFN-gama), e fator de necrose tumoral (TNF).

As composições (por exemplo, anticorpos humanos, moléculas muitiespecíficas e biespecíficas) da invenção também podem ser usadas para ter como alvo células que expressam R de Fc gama ou C10RF32, por exemplo, para marcar tais células. Para tal utilização, o agente de ligação pode ser ligado a uma molécula que pode ser detetada. Portanto, a invenção proporciona métodos para localizar células ex vivo ou in vitro que expressam recetores de Fc, tais como R de Fc gama, ou antigénio C10RF32. 0 marcador detetável pode ser, por exemplo, um radioisótopo, um composto fluorescente, uma enzima, ou um cofator enzimático.

Numa forma de realização particular, a invenção proporciona métodos para detetar a presença de antigénio C10RF32 numa amostra, ou medir a quantidade de antigénio C10RF32, respetivamente, que compreende colocar em contato a amostra, e uma amostra de controlo, com um anticorpo monoclonal humano, ou uma porção de ligação a antigénio do mesmo, que se liga de forma específica para C10RF32 em condições que permitem a formação de um complexo entre o anticorpo ou porção do mesmo e C10RF32. A seguir, deteta-se a formação de um complexo, na qual uma diferença na formação do complexo entre a amostra em comparação com a amostra de controlo é indicativa da presença de antigénio C10RF32 na amostra. Tal como se indica, a invenção em particular, inclui ensaios para detetar o antigénio C10RF32 in vitro e in vivo tais como imunoensaios, radioimunoensaios, radioensaios, ensaios de radioformação de imagens, ELISA, Western blot, FACS, slot blot, ensaios imunohistoquímicos, e outros ensaios bem conhecidos pelos peritos na especialidade.

Noutras formas de realização, a invenção proporciona métodos para tratar um distúrbio mediado por C10RF32 num indivíduo, por exemplo, cancro, tais como tumores não sólidos e sólidos, sarcomas, neoplasias hematológicas que incluem, mas não se limitam a leucemia linfocítica aguda, leucemia linfocítica crónica, leucemia linfocítica crónica, leucemia mielógena crónica, mieloma múltipla, linfoma de Hodgkin, linfoma não Hodgkin, cancro de mama, próstata, pulmão, ovário, cólon, baço, rim, bexiga, cabeça e pescoço, útero, testículos, estômago, colo uterino, fígado, ossos, pele, pâncreas, cérebro e nos quais o cancro pode ser não metastático, invasivo ou metastático, assim como distúrbios não malignos tais como distúrbios imunes que incluem, mas não se limitam a rejeição a transplante e doença de enxerto contra o hospedeiro, ou uma doença autoimune selecionada a partir de as mencionadas anteriormente e métodos para tratar qualquer afeção na qual a modulação da co-estimulação imune que envolve a C10RF32 se deseja terapeuticamente usando anticorpos anti-C10RF32 ou conjugados solúveis de antigénio C10RF32 ou outros fármacos que têm como alvo e modulam (estimulam ou inibem) uma ou mais atividades biológicas de C10RF32.

Por meio da administração do anticorpo anti-C10RF2, conjugado de antigénio solúvel de C10RF32 outro fármaco que tem como alvo do antigénio C10RF32 ou uma porção do mesmo a um indivíduo, a capacidade do antigénio C10RF32 para induzir tais atividades é inibida ou estimulada e, deste modo, o distúrbio associado é tratado. 0 antigénio C10RF32 solúvel ou conjugado de antigénio ou anticorpo anti-C10RF32 ou fragmento que contém composição ou outro fármaco que tem como alvo e modula C10RF32 pode ser administrado em separado ou juntamente com outro agente terapêutico, tal como um agente citotóxico ou um agente radiotóxico que atua conjuntamente com ou de forma sinérgica com a composição de anticorpo para tratar ou prevenir a doença mediada pelo antigénio C10RF32.

Noutra forma de realização adicional, os imunoconjugados da invenção podem ser usados para ter compostos como alvo (por exemplo, agentes terapêuticos, marcadores, citotoxinas, imunossupressores de radiotoxinas, etc.) a células que têm recetores da superfície celular de C10RF32 por meio da ligação de tais compostos ao anticorpo. Portanto, a invenção também proporciona métodos para localizar células ex vivo ou in vivo que expressam C10RF32 (por exemplo, com um marcador detetável, tal como um radioisótopo, um composto fluorescente, uma enzima, ou cofator enzimático). Como alternativa, os imunoconjugados podem ser usados para eliminar células que têm recetores da superfície celular de C10RF32 tendo citotoxinas ou radiotoxinas como alvo para o antigénio C10RF32. A presente invenção ilustra-se adicionalmente por meio da seguinte caraterização de sequências de um transcrito de ADN que codifica o antigénio C10RF32, seus domínios e dados de expressão em tecidos normais e cancerígenos assim como exemplos vaticinadores que descrevem o fabrico de anticorpos totalmente humanos para os mesmos. Esta informação e os exemplos são ilustrativos e não deveriam ser interpretados como limitativos adicionalmente. Os conteúdos de todas as figuras e todas as referências, patentes e pedidos de patente publicados mencionados através de todo o presente pedido são incorporados expressamente no presente documento por referência. EXEMPLOS EXEMPLO 1:

MÉTODOS USADOS PARA ANALISAR A EXPRESSÃO DO ARN QUE CODIFICA AS PROTEÍNAS DA INVENÇÃO

As alvos da presente invenção foram submetidos a ensaio com relação a sua expressão em diversas amostras de tecido cancerígeno e não cancerígeno e/ou com relação a sua expressão num amplo painel de amostras humanas que contêm diversos tipos de células imunes, e amostras de neoplasias hematológicas e linhas celulares, assim como várias amostras de tecidos normais. A lista das amostras de ARN específico de sangue usadas para a análise de qRT-PCR é proporcionada no Quadro 1 que se segue. Uma descrição das amostras usadas no painel de tecido normal é proporcionada no Quadro 2. Uma descrição das amostras usadas no painel de ensaio de cancro de pulmão é proporcionada no Quadro 3 que se segue. Uma descrição das amostras usadas no painel de ensaio de cancro de ovário é proporcionada no Quadro 4 que se segue. Uma descrição das amostras usadas no painel de ensaio de cancro de cólon é proporcionada no Quadro 5 que se segue. As chaves para o Quadro 3, 4 e 5 são proporcionados nos Quadros 3_1, 4_1, e 5_1, respetivamente. A seguir foram realizados ensaios tal como foram descritos na seção "Materiais e Métodos Experimentais" que se segue.

Quadro 4_1

Chave Nome Completo A Adenocarcinoma APP Adenocarcinoma de peritoneo primário

BMC CISTOADENOMA MUCINOSO BENIGNO

BSC CISTOADENOMA SEROSO BENIGNO

BSCF CISTOADENOFIBROMA SEROSO BENIGNO C Carcinoma

Estágio C Estágio do cancro CAU Caucásico CCA Adenocarcinoma de células claras

CNOS Carcinoma NOS

EA ADENOCARCINOMA ENDOMETROIDE EA de BM Adenocarcinoma endometroide de neoplasia intermediária M Menopáusica

MA ADENOCARCINOMA MUCINOSO

MBT TUMOR INTERMEDIÁRIO MUCINOSO MC Cistoadenocarcinoma mucinoso MC MCistoadenocarcinoma mucinoso com malignidade

Baixa baixa

Idade Idade Menstrual

Mens.

Misto... Cistoadenocarcinoma epitelial misto com mucinoso, endometrioide, escamoso e seroso papilar MS e EA Adenocarcinoma seroso e endometrioide misto MS e EAM Adenocarcinoma seroso e endometrioide misto de Muller

NO-BM OVÁRIO-BM NORMAL

NO-PM OVÁRIO-PM NORMAL

Chave Nome Completo

NO-PS OVÁRIO-PS NORMAL oc Anticonceptivo oral OVC Cancro de Ovário OVC_B Benigno de Ovário OVC_BT Tumor Intermediário de Ovário OVC_N Normal de Ovário OVC_NBM Emparelhado normal-benigno de Ovário PA Adenocarcinoma papilar PC Cistoadenocarcinoma papilar PEA Adenocarcinoma endometrioide papilar PMC Cistoadenocarcinoma mucinoso papilar

Post-M Pós-menopáusica

Pre-M Pré-menopáusica PS e EC Cistoadenocarcinoma seroso e endometrioide papilar PSA Adenocarcinoma seroso papilar PSC Carcinoma seroso papilar

SA ADENOCARCINOMA SEROSO SPC Cistoadenocarcinoma seroso papilar W Branco

WCAU BRANCO/CAUCÁSICO

Materiais e Métodos Experimentais Usados para Obter Dados de Expressão Preparação de ARN - 0 ARN foi obtido em ABS (Wilmington, DE 19801, USA, http://www.absbioreagents.com), BioChain Inst. Inc. (Hayward, CA 94545 USA www.biochain.com), GOG para amostras de ovário- Pediatic Cooperative Human Tissue Network, Banco de Tecidos do Grupo de Oncologia Ginecológica, Children Hospital of Columbus (Columbus OH 43205 USA), Clontech (Franklin Lakes, NJ USA 07417, www.clontech.com), Ambion (Austin, TX 78744 USA, http://www.ambion.com), Asternad (Detroit, MI 48202-3420, USA, www.asterand.com), e em Genomics Collaborative Inc., uma Divisão de Seracare (Cambridge, MA 02139, USA, www.genomicsinc.com). Como alternativa, gerou-se ARN a partir de células de sangue, linhas celulares ou amostras de tecido usando o Reagente TRI (Molecular Research Center), de acordo com as instruções do Fabricante. As amostras de tecido e ARN foram obtidas de pacientes ou pós-morte. A maioria das amostras de ARN total foi tratada com ADNasel (Ambion). RT PCR - Misturou-se ARN purificado (2-10 yg) com 300-1500 ng de iniciadores de Hexâmeros Aleatórios (Invitrogen) e dNTP 500 yM num volume total de 31,2 a 156 yl. A mistura foi incubada durante 5 min a 65 °C e a seguir foi arrefecida rapidamente em gelo. A partir deste momento, adicionaram-se 10-50 yl de 5X de tampão de primeira cadeia de SuperscriptII (Invitrogen), de 4,8 a 24 yl de DTT 0,1 M e 80-400 unidades de RNasina (Promega), e a mistura foi incubada durante 10 min a 25 °C, seguido de incubação adicional a 42 °C durante 2 min. A seguir, adicionaram-se 2-10 yl (400-2000 unidades) de SuperscriptII (Invitrogen) e a reação (volume final de 50-250 yl) foi incubada durante 50 min a 42 °C e a seguir inativou-se a 70 °C durante 15 min. O ADNc resultante foi diluido a 1:20 em tampão TE (Tris 10 mM e pH = 8, 1 mM EDTA pH = 8). A análise de RT-PCR em Tempo Real foi realizada tal como é descrito a seguir - Foi usado ADNc (5 yl), preparado tal como foi descrito anteriormente, como um molde em reações de PCR em Tempo Real (volume final de 20 yl) usando o ensaio de SYBR Green I (PE Applied Biosystem) com iniciadores específicos e Enzima UNG (Eurogentech ou ABI ou Roche). A amplificação realizou-se tal como se segue: 50 °C durante 2 min, 95 °C durante 10 min, e a seguir 40 ciclos de 95 °C durante 15 seg, seguido de 60 °C durante 1 min, seguido por etapa de dissociação. A deteção realizou-se usando o SDS 7000 de PE Applied Biosystem. O ciclo no qual as reações conseguiram um nível limiar de fluorescência (Ct = Ciclo de Limiar, que se descreve com detalhes a seguir) foi registado e foi usado para calcular a quantidade relativa de transcrito nas reações de RT. A quantidade relativa foi calculada usando a equação Q = eficáciaA-Ct. A eficácia da reação de PCR foi calculada a partir de uma curva padrão, criada por meio da utilização de diferentes diluições de várias reações de transcrição inversa (RT) . Para minimizar as diferenças inerentes na reação de RT, as quantidades relativas resultantes foram normalizadas usando um fator de normalização calculado da seguinte maneira: A expressão de vários genes constitutivos (HSKP) foi comprovada em cada painel. A quantidade relativa (Q) de cada gene constitutivo em cada amostra, calculado tal como foi descrito anteriormente, foi dividida entre a quantidade média deste gene em todas as amostras de painel para obter a "Q rei relativa a MED". A seguir, para cada amostra, foi calculada a média da "Q rei relativa a MED" dos genes constitutivos selecionados e serviu como fator de normalização desta amostra para cálculos adicionais. 0 resumo esquemático da análise de PCR quantitativa em tempo real é apresentado na Figura 1. Tal como se mostra, o eixo x mostra o número de ciclos. 0 ponto de CT = Ciclo Limiar, que é o ciclo no qual a curva de amplificação cruza o limiar de fluorescência que foi estabelecido na experiência. Este ponto é um número de ciclos calculado no qual o sinal dos produtos de PCR está acima do nivel de fundo (corante ROX passivo) e ainda na fase Geométrica/Exponencial (tal como se mostra, uma vez que o nivel de presença cruza o limiar de medida, apresenta uma fase de aumento geométrico, durante a qual as medidas são as mais precisas, seguido de uma fase linear e uma fase de platô; para medidas quantitativas, as últimas duas fases não proporcionam medidas precisas). 0 eixo y mostra a fluorescência normalizada do indicador. Deveria ser indicado que este tipo de análise proporciona quantificação relativa.

Para cada amostra de RT, a expressão do amplicão especifico foi normalizada ao fator de normalização calculado a partir da expressão de diferentes genes constitutivos tal como foi descrito na seção anterior.

Estes genes constitutivos são diferentes para cada painel. Para painel de cólon - HPRTl (N° de Referência no GenBank. NM_000194 (SEQ ID N°: 118); amplicão - HPRTl- amplicão (SEQ ID N°: 181)), PBGD (N° de Referência no

GenBank. BC019323 (SEQ ID N° : 117); amplicão - PBGD- amplicão (SEQ ID N° : 178)), e G6PD (N° de Referência no GenBank. NM_000402 (SEQ ID N°: 119); amplicão G6PD (SEQ ID N°: 184)) . Para painel de pulmão - HPRTl (N° de Referência no GenBank. NM_000194 (SEQ ID N° : 118); amplicão - HPRTl-amplicão (SEQ ID N°: 181)), PBGD (N° de Referência no

GenBank. BC019323 (SEQ ID N° : 117); amplicão - PBGD- amplicão (SEQ ID N°: 178)), SDHA (N° de Referência no

GenBank. NM_004168 (SEQ ID N° : 116); amplicão - SDHA- amplicão (SEQ ID N° : 175)) e Ubiquitina (N° de Referência no GenBank. BC000449 (SEQ ID N° : 115); amplicão

Ubiquitina-amplicão (SEQ ID N°: 172)). Para painel de ovário - SDHA (N° de Referência no GenBank. NM_004168 (SEQ ID N° : 116); amplicão - SDHA-amplicão (SEQ ID N° : 175)),

HPRTl (N° de Referência no GenBank. NM_000194 (SEQ ID

N°: 118); amplicão - HPRTl-amplicão (SEQ ID N°: 181)) e G6PD (N° de Referência no GenBank. NM_000402 (SEQ ID N° : 119); G6PD amplicão (SEQ ID N°: 184)). Para painel normal - SDHA (N° de Referência no GenBank. NM_004168 (SEQ ID N° : 116); amplicão - SDHA-amplicão (SEQ ID N° : 175)),

Ubiquitina (N° de Referência no GenBank. BC000449 (SEQ ID N° : 115); amplicão - Ubiquitina-amplicão (SEQ ID N°: 172)), e caixa TATA (N° de Referência no GenBank. NM_003194 (SEQ ID N° : 114); amplicão TATA (SEQ ID N° : 169)). Para painel de sangue - HSBl 1_HUMANA (N° de Referência. Q9Y450) (SEQ ID N° : 109), DHSA_HUMANA (SEQ ID N°: 110) (N° de Referência P31040), SFRS4_HUMANA (SEQ ID N°: 111) (N° de Referência Q08170) e SLC25A3 (N° de Referência Q7Z7N7) (SEQ ID N°: 112) .

As sequências dos genes constitutivos medidas em todos os exemplos de painel de sangue foram como se segue: HSBlL_HUMANA (SEQ ID N°: 109) (N° de Acesso Q9Y450). T05337 seg30-34Fl-Iniciador direto (SEQ ID N° : 152): GCTCCAGGCCATAAGGACTTC. T05337_seg30-34R1 (SEQ ID N°: 153)-Iniciador indireto: CAGCTTCAAACTCTCCCCTGC.

Amplicão (SEQ ID N°: 154):

GCTCCAGGCCATAAGGACTTCATTCCAAATATGATTACAGGAGCAGCCCAG

GCGGATGTAGCTGTTTTAGTTGTAGATGCCAGCAGGGGAGAGTTTGAAGCT

G DHSA_HUMANA (SEQ ID N°: 110) (N° de Acesso P31040)

M78124_seg45-48Fl (SEQ ID N° : 155)-Iniciador direto: TTCCTTGCCAGGACCTAGAG

M78124-seg45-48Rl-Iniciador inverso (SEQ ID N°: 156): CATAAACCTTTCGCCTTGAC

Amplicão (SEQ ID N°: 157): TTCCTTGCCAGGACCTAGAGTTXGTTCAGTTCCACCCCACAGGCATATATGG TGCrGGTTGTCTCATTACGGAAGGATGTCGTGGAGAGGGAGGCATTCTCATT AAC AGTCAAGGCGAAAGGTTT ATG SFRS4_HUMANA (SEQ ID N°: 111) (N° de Acesso Q08170) HUMSRP75Aseg30-33Fl (SEQ ID N°: 158)- Iniciador

direto: AATTTGTCAAGTCGGTGCAGC HUMSRP75Aseg30-33Rl (SEQ ID N°: 159)- Iniciador indireto: TCACCCCTTCATTTTTGCGT Amplicão (SEQ ID N°: 160):

AATTTGTc A AGTC GGTGC AGCTGGC AAGACCTAAAGG ATT AT AT GCGTCAG

GCAGGAGAAGTGACTTATGCAGATGCTCACAAGGGACGCAAAAATGAAGG

GGTGA

SLC25A3 (N° de Acesso Q7Z7N7) (SEQ ID N°: 112) SSMPCPseg24-25-29F1- Iniciador direto (SEQ ID

N°: 161): CCCAAAATGTATAAGGAAGAAGGC

SSMPCPseg24-25-29R1- Iniciador inverso (SEQ ID N° : 162): TTCAAAGCAGGCGAACTTCA Amplicão (SEQ ID N°: 163) :

CAGCCAGGTTATGCCAACACTTTGAGGGATGCAGCTCCCAAAATGTATAAG

GAAGAAGGCCTAAAAGCATTCTACAAGGGGGTTGCTCCTCTCTGGATGAGA

CAGATACCATACACCATGATGAAGTTCGCCTGCnTGA

As sequências dos genes constitutivos medidas em todos os exemplos em painel de amostras de tecido normal foram como se segue:

Caixa TATA (N° de Acesso do GenBank NM 003194 (SEQ ID N°: 114)) .

Iniciador direto de caixa TATA (SEQ ID N°: 167):

CGGTTTGCTGCGGTAATCAT

Iniciador inverso de caixa TATA (SEQ ID N°: 168) :

TTTCTTGCTGCCAGTCTGGAC

Caixa TATA -amplicão (SEQ ID N°: 169): CGGTTTGCTGCGGTAATCATGAGGATAAGAGAGCCACGAACCACGGCACT GATTTTCAGTTCTGGGAAAATGGTGTGCACAGGAGCCAAGAGTGAAGAAC AGTCCAGACTGGCAGCAAGAAA

Ubiquitina (N° de Acesso do GenBank BC000449 (SEQ ID N° : 115))

Iniciador direto de Ubiquitina (SEQ ID N°: 170):

ATTTGGGTCGCGGTTCTTG

Iniciador inverso de Ubiquitina (SEQ ID N° : 171) :

TGCCTTGACATTCTCGATGGT

Ubiquitina-amplicão (SEQ ID N°: 172)

ATTTGGGTCGCGG'ITCTTGTTTGTGGATCGCrGTGATCGTCACTTG ACAATGCAGATCTTCGTGAAGACTCTGACTGGTAAGACCATCACCCTCGAG G TTGAGCCCAGTGACACCATCGAGAATGTCAAGGCA SDHA (N° de Acesso do GenBank NM_004168 (SEQ ID N°: 116))

Iniciador direto de SDHA (SEQ ID N°: 173):

TGGGAACAAGAGGGCATCTG

Iniciador inverso de SDHA (SEQ ID N°: 174):

CCACCACTGCATCAAATTCATG

SDHA-amplicão (SEQ ID N°: 175): TGGGAACAAGAGGGCATCTGCTAAAGTTTCAGATTCCATTTCTGCTCAGTAT CCAGTAGTGGATCATGAATTTGATGCAGTGGTGG

As sequências para iniciadores e amplicões dos genes constitutivos medidas em todos os exemplos de cancro são indicadas a seguir. Para painel de cólon - usaram-se HPRTl, PBGD e G6PD. Para painel de pulmão - usaram-se PBGD, HPRTl, Ubiquitina e SDHA. Para painel de ovário - usaram-se HPRTl, SDHA e G6PD.

SDHA (N° de Acesso do GenBank NM_004168 (SEQ ID N°: 116):

Iniciador direto de SDHA (SEQ ID N°: 173):

TGGGAACAAGAGGGCATCTG

Iniciador inverso de SDHA (SEQ ID N°: 174):

CCACCACTGCATCAAATTCATG

SDHA-amplicão (SEQ ID N°: 175): TGGGAACAAGAGGGCATCTGCTAAAGTTTCAGATTCCATTTCTGCTCAGTAT CCAGTAGTGGATCATGAATTTGATGCAGTGGTGG

PBGD (N° de Acesso do GenBank BC019323 (SEQ ID N° : 117)),

Iniciador direto de PBGD (SEQ ID N°: 176):

TGAGAGTGATTCGCGTGGG

Iniciador inverso de PBGD (SEQ ID N°: 177):

CCAGGGTACGAGGCTTTCAAT

PBGD-amplicão (SEQ ID N°: 178): TGAGAGTGATTCGCGTGGGTACCCGCAAGAGCCAGCTTGCTCGCATACAGA CGGACAGTGTGGTGGCAACATTGAAAGCCTCGTACCCTGG

HPRTl (N° de Acesso do GenBank NM_000194 (SEQ ID N°: 118)),

Iniciador direto de HPRTl (SEQ ID N°: 179):

TGACACTGGCAAAACAATGCA

Iniciador inverso de HPRTl (SEQ ID N°: 180):

GGTCCTTTTCACCAGCAAGCT HPRTl-amplicão (SEQ ID N°: 181):

TGACACTGGCAAAACAATGCAGACTTTGCTTrCCITGGTCAGGCAGTATAA

TCCAAAGATGGTCAAGGTCGCAAGCTTGCTGGTGAAAAGGACC G6PD (N° de Acesso do GenBank NM_000402 (SEQ ID N°: 119))

Iniciador direto de G6PD (SEQ ID N°: 182): gaggccgtcaccaagaacat

Iniciador inverso de G6PD (SEQ ID N° : 183): ggacagccggtcagagctc G6PD-amplicão (SEQ ID N°: 184): gaggccgtcaccaagaacattcacgagtcctgcatgagccagataggctggaaccgcatcatcgtggagaagcccttc gggagggacctgeagagctetgacicggctgtcc:

Ubiquitina (N° de Acesso do GenBank BC000449 (SEQ ID N° : 115))

Iniciador direto de Ubiquitina (SEQ ID N°: 170):

ATTTGGGTCGCGGTTCTTG

Iniciador inverso de Ubiquitina (SEQ ID N°: 171):

TGCCTTGACATTCTCGATGGT

Amplicão de Ubiquitina (SEQ ID N°: 172): ATTTGGGTCGCGGTTCTTGTTTGTGGATCGCTGTGATCGTCACTTGACAATGC AGATCTTCGTGAAGACTCTGACTGGTAAGACCATCACCCTCGAGG TTGAGCCCAGTGACACCATCGAGAATGTCAAGGCA

Outra metodologia usada para prever o padrão de expressão das proteínas da invenção foi a ferramenta de descoberta de MED: MED é uma plataforma para colheita de dados públicos de expressão genética, normalização, anotação e rendimento de diversas consultas. Os dados de expressão a partir dos microarranjos de Affymetrix mais amplamente usados são descarregados do Omnibus de Expressão Genética (GEO www.ncbi.nlm.nih.gov/GEO). Os dados são normalizados de forma multiplicativa ajustando o percentil 95 a um valor constante (expressão normalizada = 1200), e o ruído filtra-se ajustando 30 % inferior a 0. As experiências são anotadas, primeiro de forma automática, e logo manualmente, para identificar tecido e afeção, e os chips são agrupados de acordo com esta anotação, e é feita a verificação cruzada deste grupo comparando o padrão geral de expressão dos genes de cada chip para o padrão de expressão médio geral dos genes neste grupo. Atribui-se um valor de expressão a cada conjunto de sonda em cada grupo que é a mediana das expressões deste conjunto de sonda em todos os chips incluídos no grupo. 0 vetor de expressão de todos os conjuntos de sonda dentro de um certo grupo é o chip virtual deste grupo, e a coleção de todos estes chips virtuais é um painel virtual. 0 painel (ou subpainéis) pode ser consultado para identificar conjuntos de sondas com um comportamento requerido (por exemplo, a expressão específica num subconjunto de tecidos, ou expressão diferencial entre doença e tecidos saudáveis). Estes conjuntos de sonda estão unidos aos contigs de LEADS e a RefSeqs (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/RefSeq/) por meio de formação de mapas no nível da sonda, para sua análise adicional.

As plataformas Affymetrix que são descarregadas são HG-U95A e a família HG-U133 (A, B, A2,0 e PLUS 2.0). A seguir foram criados três painéis virtuais: U95 e U133 Plus 2.0, com base nas plataformas correspondentes, e U133 que usa o conjunto de conjuntos de sonda para HG-U133A, HG-U133 A2,0 e HG-U133 PLUS 2.0+.

Os resultados da ferramenta de descoberta MED são apresentados em representações de dispersão. A representação de dispersão é uma representação compacta de um dado painel (coleção de grupos). 0 eixo y é a expressão (normalizada) e o eixo x descreve os grupos no painel. Para cada grupo, a expressão média é representada com um marcador sólido, e os valores de expressão dos diferentes chips no grupo são representados com hífens pequenos ("-") . Os grupos são ordenados e marcados como se segue - "Outros" grupos (por exemplo, doenças não cancerígenas, benignas, etc.) com um triângulo, Células tratadas com um quadrado, Normais com um círculo, Emparelhados com uma cruz, e Cancro com um diamante. 0 número de chips em cada grupo também se escreve adjacente a seu nome. EXEMPLO 6 DESCRIÇÃO PARA O GRUPO H19011_1 A presente invenção refere-se a polipéptidos C10RF32, novas variantes splice e agentes de diagnóstico e terapêuticos baseados nos mesmos. 0 grupo H19011_1 (ID interna 76432827) representa 2 transcritos e 5 segmentos de interesse, cujos nomes são proporcionados nos Quadros 91 e 92, respetivamente. As variantes de proteínas selecionadas são proporcionadas no Quadro 93.

Quadro 91 - Transcritos de interesse Nome do Transcrito H19011_1_T8 (SEQ ID N°: 45)

Hl 9 011 1 T9 (SEQ ID N°: 46)

Quadro 92 - Segmentos de interesse Nome do Segmento

Hl 9 011 1 N13 (SEQ ID N°: 129) H19011 1 N8 (SEQ ID N°: 130)

Hl 9011 1 N10 (SEQ ID N°: 131) H19011 1 Nil (SEQ ID N°: 132)

Hl 9011 1 N12 (SEQ ID N°: 133)

Quadro 93 - Proteínas de interesse

Nome da Proteína Transcritos Correspondentes

Hl 9011 1 P8 (SEQ H19011 1 T8 (SEQ ID N°: 45) H19011 1 P9 (SEQ Hl9011 1 T9 (SEQ ID N°: 46)

Estas sequências são variantes da proteína hipotética conhecida da proteína LOC387597 (identificador de referência de RefSeq NP_955383 (SEQ ID N° : 47), sinónimos: C10RF32, NP_955383; tipo LISCH; RP4-782G3,2; dJ782G3,l), denominada no presente documento como a proteína conhecida anteriormente. C10RF32 é uma proteína hipotética que se encontrou por ordenador durante a anotação do cromossoma 1 (Gregory SG et al. 2006, Nature 441 (7091) 315-321). Seu homólogo anotado mais próximo pertence à família LISCH7, uma subfamília da superfamília de imunoglobulina. Um dos membros anotados desta família é o recetor de lipoproteína estimulada por lipólise que tem um papel provável na eliminação de lipoproteína rica em triglicéridos do sangue (anotação de referência de Swissprot Q86X29).

De acordo com a presente invenção, previu-se que C10RF32 era um novo membro de B7/CD28 com base na presença de um domínio de IgV, além de ser uma proteína de membrana de tipo I, ao igual que outros membros conhecidos de B7. Além disso, duas variantes submetidas a splicing alternativo (H19011_1_P8 (SEQ ID N° : 48) e H19011_1_P9 (SEQ ID N°: 50)), que partilham somente os primeiros 5 exões com o C10RF32 de tipo silvestre, são similares aos membros conhecidos da família B7 em seus tamanhos de exões e a posição de IgV e domínios transmembrana dentro destes exões. Além disso, na presente invenção mostrou-se que C10RF32 estava sobre-expresso em cancro de pequena célula de pulmão.

Como foi indicado anteriormente, o grupo H19011 representa 2 transcritos, que foram indicados no Quadro 91 mencionado anteriormente. Estes transcritos codificam proteínas que são variantes de proteína hipotética da proteína LOC387597 (SEQ ID N°: 47). A seguir é proporcionada uma descrição de cada proteína variante.

Proteína variante H19011_1_P8 (SEQ ID N°: 48) tem uma sequência de aminoácidos tal como se codifica com o transcrito H19011_1_T8 (SEQ ID N° : 45) . Os alinhamentos a uma ou mais sequências de proteínas publicadas anteriormente são mostrados na Figura 38A. Uma breve descrição da relação da proteína variante para cada tal proteína alinhada é como se segue:

Informe de comparação entre H19011_1_P8 (SEQ ID N°: 48) e proteínas conhecidas Q71H61_HUMANA e NP_955383 (SEQ ID N°: 47) (Figura 38A): A. Um polipéptido quimérico isolado que codifica H19011_1_P8 (SEQ ID N° : 48), que compreende uma primeira sequência de aminoácidos que é homóloga em pelo menos 90 %

a MDRVLLRWISLFWLTAMVEGLQVTVPDKKKVAMLFQPTVLRCHFSTSSHQPAV VQWKFKSYCQDRMGESLGMSSTRAQSLSKRNLEWDPYLDCLDSRRTVRVVASK QGSTVTLGDFYRGREITIVHDADLQIGKLMWGDSGLYYCIITTPDDLEGKNE que corresponde aos aminoácidos 1 - 158 das proteínas conhecidas Q 71H 61 - HUMANA e NP_955383 (SEQ ID N° : 47), que também corresponde aos aminoácidos 1 - 158 de H19011_1_P8 (SEQ ID N° : 48), um aminoácido G de união por ponte que corresponde ao aminoácido 159 de H19011_1_P8 (SEQ ID N°: 48), uma segunda sequência de aminoácidos que é homóloga em pelo menos 90 % a S que corresponde aos aminoácidos 160 - 160 das proteínas conhecidas Q71H61_HUMANA e NP_955383 (SEQ ID N°: 47), que também corresponde aos aminoácidos 160 - 160 de Hl9011_l_P8 (SEQ ID N° : 48), aminoácidos de união por ponte LG que corresponde ao aminoácido 161 - 162 de H19011_1_P8 (SEQ ID N°: 48), uma terceira sequência de aminoácidos que é homóloga em pelo menos 90 % a LLVLGRTGLLADLLPSFAVEIMPEWVFVGLVLLGVFLFFVLVGICWCQCCPHSCC CYVRCPCCPDSC que corresponde aos aminoácidos 163 - 229 das proteínas conhecidas Q71H61_HUMANA e NP_955383 (SEQ ID N° : 47), que também corresponde aos aminoácidos 163 - 229 de H19011 1 P8 (SEQ ID N° : 48), um aminoácido W de união por ponte que corresponde ao aminoácido 230 de H19011_1_P8 (SEQ ID N°: 48), uma quarta sequência de aminoácidos que é homóloga em pelo menos 90 % a CPQA que corresponde aos aminoácidos 231 - 234 das proteínas conhecidas Q71H61_HUMANA e NP_955383 (SEQ ID N°: 47), que também corresponde aos aminoácidos 231 - 234 de H19011_1_P8 (SEQ ID N° : 48), e uma quinta sequência de aminoácidos que é homóloga em pelo menos 70 %, opcionalmente pelo menos 80 %, preferentemente pelo menos 85 %, mais preferentemente pelo menos 90 % e o mais preferentemente pelo menos 95, 96, 97, 98 ou 99 % a um polipéptido que tem a sequência CEYSDRWGDRAIERNVYLST (SEQ ID N° : 293) que corresponde aos aminoácidos 235 - 254 de H19011_1_P8 (SEQ ID N°: 48), no qual a dita primeira sequência de aminoácidos, aminoácido de união por ponte, segunda sequência de aminoácidos, aminoácido de união por ponte, terceira sequência de aminoácidos, aminoácido de união por ponte, quarta sequência de aminoácidos e quinta sequência de aminoácidos são contíguas e são apresentados numa ordem sequencial. B. Um polipéptido isolado que codifica uma porção da borda de H19011_1_P8 (SEQ ID N°: 48), que compreende uma sequência de aminoácidos que é homóloga em pelo menos 70 %, opcionalmente pelo menos aproximadamente 80 %, preferentemente pelo menos aproximadamente 85 %, mais preferentemente pelo menos aproximadamente 90 % e o mais preferentemente pelo menos aproximadamente 95, 96, 97, 98 ou 99 % à sequência CEYSDRWGDRAIERNVYLST (SEQ ID N° : 293) de Hl 9 011_1_P8 (SEQ ID N°: 48). A localização da proteína variante foi determinada de acordo com os resultados de um número de diferentes programas de software e análise, que inclui análise de SignalP e outros programas especializados. Acredita-se que a proteína variante esteja localizada como se segue com relação à membrana celular. A proteína variante H19011 1 P8 (SEQ ID N°: 48) também apresenta os seguintes SNP não silenciosos (Polimorfismos de Nucleótido Único) tal como se enumera no Quadro 94, (proporcionado de acordo com suas posições na sequência de aminoácidos, com os aminoácidos alternativos enumerados (SEQ ID N°: 48)). Um exemplo de tal sequência deduzida, com aminoácidos alternativos, que foi produzida (usando parte dos SNP que se seguem), é proporcionado com o nome H19011_1_P8_V1 (SEQ ID N°: 49).

Quadro 94 - Mutações de aminoácidos Posições de SNP na sequência Aminoácidos de aminoácidos alternativos

159 G -> D

161 L -> V

162 G -> E

202 V -> D

202 V -> G

230 W -> C A proteína variante tem os seguintes domínios, tal como se determina usando InterPro. Os domínios são descritos no Quadro 95:

Quadro 95 - Domínios de InterPro Descrição do Tipo de Posições na proteína domínio análise LISCH7 HMMPfam 186-234 IG SMART 27-166 A proteína variante H19Q11_1_P8 (SEQ ID N° : 48) é codificada com o transcrito Hl9011_l_T8 (SEQ ID N° : 45), para o qual a porção de codificação começa na posição 181 e termina na posição 942. O transcrito também tem os seguintes SNP tal como se enumera no Quadro 96 (proporcionado de acordo com sua posição na sequência de nucleótidos, com o aminoácido alternativo enumerado).

Quadro 96 - SNP do ácido nucleico Polimorfismo Posições de SNP na sequência de nucleótidos G->A 656 C->G 661 G->A 665 T -> A 785

Polimorfismo Posições de SNP na sequência de nucleótidos T -> G 785 G -> C 870 A estrutura genómica da proteína H19011_1_P8 (SEQ ID N°: 48) (número de exões relevantes para a região extracelular da proteína, o comprimento destes exões, a estrutura do codão no qual são inseridos os intrões e a localização das caraterísticas e domínios da proteína na estrutura genética) é caraterística para os ligandos da família de proteína B7 /co-estimuladora, tal como é proporcionado no Quadro 97.

Quadro 97 - estrutura genómica e caraterísticas da proteína Número do Comprimento do Caraterística da

Aminoácidos exão exão proteína no exão 1 46 1-15 Péptido de Sinal

2 333 16-126 Domínio de IgV 3 120 127-166 Domínio de IgC2 4 57 167-185

Região de 5 206 186-254 transmembrana A proteína variante H19011_1_P9 (SEQ ID N°: 50) tem uma sequência de aminoácidos tal como é codificada com o transcrito H19011_1_T9 (SEQ ID N°: 46) . Os alinhamentos para uma ou mais sequências de proteínas publicadas anteriormente são mostrados na Figura 38B. Uma breve descrição da relação da proteína variante de acordo com a presente invenção para cada uma de tais proteínas alinhadas é como se segue:

Informe de comparação entre H19011_1_P9 (SEQ ID N° : 50) e proteínas conhecidas Q71H61_HUMANA e NP_955383 (SEQ ID N°: 47) (Figura 38B): A. Um polipéptido quimérico isolado que codifica H19011_1_P9 (SEQ ID N° : 50), que compreende uma primeira sequência de aminoácidos que é homóloga em pelo menos 90 %

a MDRVLLRWISLFWLTAMVEGLQVTVPDKKKVAMLFQPTVLRCHFSTSSHQPAV VQWKFKSYCQDRMGESLGMSSTRAQSLSKRNLEWDPYLDCLDSRRTVRVVASK QGSTVTLGDFYRGREITIVHDADLQIGKLMWGDSGLYYCIITTPDDLEGKNE que corresponde aos aminoácidos 1 - 158 das proteínas conhecidas Q71H61_HUMANA e NP_955383 (SEQ ID N°: 47), que também corresponde aos aminoácidos 1 - 158 de H19011_1_P9 (SEQ ID N° : 50), um aminoácido G de união por ponte que corresponde ao aminoácido 159 de H19011_1_P9 (SEQ ID N°: 50), uma segunda sequência de aminoácidos que é homóloga em pelo menos 90 % a S que corresponde aos aminoácidos 160 - 160 das proteínas conhecidas Q71H61_HUMANA e NP_955383 (SEQ ID N°: 47), que também corresponde aos aminoácidos 160 - 160 de Hl9011_l_P9 (SEQ ID N° : 50), aminoácidos de união por ponte LG que corresponde ao aminoácido 161 - 162 de H19011_1_P9 (SEQ ID N°: 50), uma terceira sequência de aminoácidos que é homóloga em pelo menos 90 % a LLVL que corresponde aos aminoácidos 163 - 166 das proteínas conhecidas Q71H61_HUMANA e NP_955383 (SEQ ID N°: 47), que também corresponde aos aminoácidos 163 - 166 de H19011_1_P9 (SEQ ID N°: 50), uma quarta sequência de aminoácidos que é homóloga em pelo menos 90 % a EWVFVGLVLLGVFLFFVLVGICWCQCCPHSCCCYVRCPCCPDSC que corresponde aos aminoácidos 186 - 229 das proteínas conhecidas Q71H61 HUMANA e NP_955383 (SEQ ID N° : 47), que também corresponde aos aminoácidos 167 - 210 de H19011_1_P9 (SEQ ID N°: 50), um aminoácido W de união por ponte que corresponde ao aminoácido 211 de H19011_1_P9 (SEQ ID N°: 50), uma quinta sequência de aminoácidos que é homóloga em pelo menos 90 % a CPQA que corresponde aos aminoácidos 231 - 234 das proteínas conhecidas Q71H61_HUMANA e NP_955383 (SEQ ID N°: 47), que também corresponde aos aminoácidos 212 - 215 de H19011 1 P9 (SEQ ID N°: 50), e uma sexta sequência de aminoácidos que é homóloga em pelo menos 70 %, opcionalmente pelo menos 80 %, preferentemente pelo menos 85 %, mais preferentemente pelo menos 90 % e o mais preferentemente pelo menos 95, 96, 97, 98 ou 99 % a um polipéptido que tem a sequência CEYSDRWGDRAIERNVYLST (SEQ ID N° : 293) que corresponde aos aminoácidos 216 - 235 de H19011_1_P9 (SEQ ID N°: 50), no qual a dita primeira sequência de aminoácidos, aminoácido de união por ponte, segunda sequência de aminoácidos, aminoácido de união por ponte, terceira sequência de aminoácidos, quarta sequência de aminoácidos, aminoácido de união por ponte, quinta sequência de aminoácidos e sexta sequência de aminoácidos são contíguas e são apresentados numa ordem sequencial. B. Um polipéptido quimérico isolado que codifica uma porção de borda de Hl9011_l_P9 (SEQ ID N°: 50), que compreende um polipéptido que tem um comprimento "n", no qual n tem um comprimento de pelo menos aproximadamente 10 aminoácidos, opcionalmente um comprimento de pelo menos aproximadamente 20 aminoácidos, preferentemente um comprimento de pelo menos aproximadamente 30 aminoácidos, mais preferentemente um comprimento de pelo menos aproximadamente 40 aminoácidos e o mais preferentemente um comprimento de pelo menos aproximadamente 50 aminoácidos, no qual pelo menos dois aminoácidos compreendem LE, que tem uma estrutura tal como se segue: uma sequência que começa a partir de qualquer dos aminoácidos com números 166-x a 166; e que termina em qualquer dos aminoácidos com números 167 + ((n-2) - x), na qual x varia de 0 a n-2. C. Um polipéptido isolado que codifica uma porção de borda de H19011_1_P9 (SEQ ID N° : 50), que compreende uma sequência de aminoácidos que é homóloga em pelo menos 70 %, opcionalmente pelo menos aproximadamente 80 %, preferentemente pelo menos aproximadamente 85 %, mais preferentemente pelo menos aproximadamente 90 % e o mais preferentemente pelo menos aproximadamente 95, 96, 97, 98 ou 99 % à sequência CEYSDRWGDRAIERNVYLST (SEQ ID N° : 293) de Hl 9 011_1_P9 (SEQ ID N°: 50). A localização da proteína variante foi determinada de acordo com os resultados de um número de diferentes programas de software e análise, que incluem análise de SignalP e outros programas especializados. Acredita-se que a proteína variante se localiza como se segue com relação à membrana celular. A proteína variante H19011_1_P9 (SEQ ID N°: 50) também apresenta os seguintes SNP não silenciosos (Polimorfismos de Nucleótido Único) tal como se enumera no Quadro 98, (proporcionado de acordo com suas posições na sequência de aminoácidos, com os aminoácidos alternativos enumerados (SEQ ID N°: 50)).

Quadro 98 - Mutações de aminoácidos Posições de SNP na sequência de Aminoácidos aminoácidos alternativos

159 G -> D

161 L -> V

162 G -> E

183 V -> D

183 V -> G

211 W -> C A proteína variante H19011_1_P9 (SEQ ID N°: 50) é codificada com o transcrito Hl9011_l_T9 (SEQ ID N° : 46), para o qual a porção de codificação começa na posição 181 e termina na posição 885. O transcrito também apresenta os seguintes SNP tal como se enumera no Quadro 99 (proporcionada de acordo com sua posição na sequência de nucleótidos, com o aminoácido alternativo enumerado).

Quadro 99 - SNP de ácido nucleico Polimorfismo Posições de SNP em sequência de nucleótidos G->A 656 C->G 661 G->A 665 T -> A 728 T -> G 728 G -> C 813

Como foi indicado anteriormente, o grupo H19011 apresenta 5 segmentos, que se enumeraram no Quadro 92 mencionado anteriormente. Estes segmentos são porções de sequências de ácidos nucleicos que são descritas no presente documento em separado porque têm um interesse particular. A seguir é proporcionada uma descrição de cada segmento. 0 grupo do segmento H19011_1_N13 (SEQ ID N°: 129) está apoiado por 3 bibliotecas. 0 número de bibliotecas foi determinado tal como foi descrito anteriormente. Este segmento pode ser encontrado nos seguintes transcritos: Hl 9 011_1_T8 (SEQ ID N°: 45) e H19011_1_T9 (SEQ ID N° : 46). 0 Quadro 100 que se segue descreve a posição de inicio e fim deste segmento em cada transcrito.

Quadro 100 - Localização do segmento nos transcritos

Nome do Posição de inicio Posição de fim do transcrito do segmento segmento

Hl 9011 1 T8 (SEQ -- 884 1407 ID N°: 45)

Hl 9011 1 T9 (SEQ -- 827 1350 ID N° : 46)

Também são proporcionados segmentos curtos relacionados com o grupo mencionado anteriormente. Estes segmentos têm um comprimento de até aproximadamente 120 pb, e assim são incluídos numa descrição separada. O grupo do segmento H19011_1_N8 (SEQ ID N° : 130) está apoiado por 4 bibliotecas. O número de bibliotecas foi determinado tal como foi descrito anteriormente. Este segmento pode ser encontrado nos seguintes transcritos: H19011_1_T8 (SEQ ID N° : 45) . O Quadro 101 que se segue descreve a posição de início e fim deste segmento em cada transcrito.

Quadro 101 - Localização do segmento nos transcritos Nome do Posição de inicio Posição de fim do transcrito do segmento segmento

Hl 9011 1 T8 (SEQ -- 680 736 ID N°: 45) O grupo do segmento H19011 1 N10 (SEQ ID N°: 131) está apoiado por 5 bibliotecas. O número de bibliotecas foi determinado tal como foi descrito anteriormente. Este segmento pode ser encontrado nos seguintes transcritos:

Hl 9 011_1_T8 (SEQ ID N°: 45) e H19011_1_T9 (SEQ ID N°: 46). O Quadro 102 que se segue descreve a posição de início e fim deste segmento em cada transcrito.

Quadro 102 - Localização do segmento nos transcritos

Nome do Posição de inicio Posição de fim do transcrito do segmento segmento

Hl 9011 1 T8 (SEQ -- 737 797 ID N°: 45)

H19011 1 T9 (SEQ -- 680 740 ID N° : 46) O grupo do segmento H19011_1_N11 (SEQ ID N°: 132) está apoiado por 3 bibliotecas. O número de bibliotecas foi determinado tal como foi descrito anteriormente. Este segmento pode ser encontrado nos seguintes transcritos: Hl 9 011_1_T8 (SEQ ID N°: 45) e H19011_1_T9 (SEQ ID N°: 46). O Quadro 103 que se segue descreve a posição de inicio e fim deste segmento em cada transcrito.

Quadro 103 - Localização do segmento nos transcritos

Nome do Posição de inicio Posição de fim do transcrito do segmento segmento

Hl 9011 1 T8 (SEQ -- 798 863 ID N°: 45)

Hl 9011 1 T9 (SEQ -- 741 806 ID N° : 46) O grupo do segmento H19011_1_N12 (SEQ ID N°: 133) está apoiado por 5 bibliotecas. O número de bibliotecas foi determinado tal como foi descrito anteriormente. Este segmento pode ser encontrado nos seguintes transcritos: Hl 9 011_1_T8 (SEQ ID N°: 45) e H19011_1_T9 (SEQ ID N° : 46). O Quadro 104 que se segue descreve a posição de inicio e fim deste segmento em cada transcrito.

Quadro 104 - Localização do segmento nos transcritos

Nome do Posição de inicio Posição de fim do transcrito do segmento segmento

Hl 9011 1 T8 (SEQ -- 864 883 ID N°: 45)

Hl 9011 1 T9 (SEQ -- 807 826 ID N° : 46) A expressão de C10RF32, grelha de leitura aberta 32 do cromossoma 1, transcritos de H19011 que podem ser detetados com amplicão tal como é representada com a sequência de nome Hl9011_segl3F2R2 (SEQ ID N°: 235) em tecidos de Cólon normais e cancerígenos, em tecidos de Pulmão normais e cancerígenos e em diferentes tecidos normais. A expressão de C10RF32, grelha de leitura aberta 32 do cromossoma 1, transcritos que podem ser detetados com ou de acordo com o amplicão segl3 - Hl9011_segl3F2R2 (SEQ ID N°: 235) e os iniciadores H19011 segl3F2 (SEQ ID N°: 233) e Hl9011_segl3R2 (SEQ ID N°: 234) foi medida com PCR em tempo real em painel de cólon, painel de pulmão e painel normal. As amostras usadas são pormenorizadas no Quadro 5, Quadro 3 e Quadro 2 mencionados anteriormente, respetivamente. Para cada amostra de RT, a expressão do amplicão mencionado anteriormente foi normalizada com o fator de normalização calculado a partir da expressão de vários genes constitutivos tal como é descrito no Exemplo 1.

Painel de cólon - A quantidade normalizada de cada amostra de RT foi dividida a seguir entre a média das quantidades das amostras normais (números de amostra 42-70, Quadro 5 mencionada anteriormente). A seguir, foi calculada o reciproco para esta relação, para obter um valor do número de vezes de regulação negativa para cada amostra com relação à média das amostras normais. A Figura 39 é um histograma que mostra a regulação negativa dos transcritos de C10RF32 indicados anteriormente em amostras cancerígenas de Cólon com relação às amostras normais.

Tal como é evidente a partir da Figura 39, a expressão de transcritos de C10RF32 que podem ser detetados com o amplicão anterior em amostras de cancro era significativamente menor que nas amostras não cancerígenas (números de amostra 42-70, Quadro 5 mencionado anteriormente). De forma notável, encontrou-se uma regulação negativa de pelo menos 6 vezes em 17 de cada 55 amostras de adenocarcinoma.

Aplicou-se análise estatística para verificar a significância destes resultados, como é descrito a seguir. O valor de P para a diferença nos níveis de expressão de transcritos de C10RF32 que podem ser detetados com o amplicão anteriormente em amostras de cancro de Cólon contra as amostras de tecido normal foi determinado com o ensaio de T como 9,36e-004.

Encontrou-se um limiar de regulação negativa de 6 vezes para diferenciar entre amostras de cancro e normais com um valor de P de 2,67e-004 tal como se comprova com o ensaio de Fisher exato.

Os valores mencionados anteriormente demonstram a significância estadística dos resultados.

Painel de pulmão - A quantidade normalizada de cada amostra de RT foi dividida a seguir entre a média das quantidades das amostras normais (números de amostra 51-64 e 69-70, Quadro 3 mencionado anteriormente), para obter um valor do número de vezes de regulação positiva para cada amostra com relação à média das amostras normais. A Figura 40 é um histograma que mostra a sobre-expressão dos transcritos de C10RF32 que foram indicados anteriormente em amostras de Pulmão cancerígenas com relação às amostras normais.

Tal como é evidente a partir da Figura 40, a expressão dos transcritos de C10RF32 que podem ser detetados com o amplicão mencionado anteriormente em amostras de carcinoma de pequena célula era significativamente mais elevada que nas amostras não cancerígenas (números de amostra 51-64 e 69-70, Quadro 3 mencionado anteriormente). De forma notável, encontrou-se uma sobre-expressão de pelo menos 6 vezes em 9 de cada 9 amostras de carcinoma de pequena célula.

Aplicou-se análise estatística para verificar a significância destes resultados, como é descrito a seguir. O valor de P para a diferença nos níveis de expressão dos transcritos de C10RF32 que podem ser detetados com o amplicão mencionado anteriormente em amostras de carcinoma de pequena célula de Pulmão contra as amostras de tecido normal foi determinado com o ensaio de T como 3,43e-003.

Encontrou-se um limiar de sobre-expressão de 6 vezes para diferenciar entre amostras de carcinoma de pequena célula e normais com um valor de P de 4,89e-007 tal como se comprova com o ensaio de Fisher exato.

Os valores mencionados anteriormente demonstram a significância estadística dos resultados.

Painel normal -A quantidade normalizada de cada amostra de RT foi dividida a seguir entre a média das quantidades das amostras de cólon (números de amostra 3, 4 e 5, Quadro 2 mencionado anteriormente) , para obter um valor da expressão relativa de cada amostra com relação à média das amostras de cólon, tal como se mostra na Figura 41A. A quantidade normalizada de cada amostra de RT foi dividida a seguir entre a média das quantidades das amostras de pulmão (números de amostra 26, 28, 29 e 30,

Quadro 2 mencionado anteriormente) , para obter um valor da expressão relativa de cada amostra com relação à média das amostras de pulmão, tal como se mostra na figura 41B.

Para a experiência anterior, foi usado o seguinte par de iniciadores como um exemplo ilustrativo não limitativo somente de um par de iniciadores adequado: iniciador direto de Hl9011_segl3F2 (SEQ ID N°: 233); e iniciador inverso de Hl9011_segl3R2 (SEQ ID N°: 234).

Para a experiência anterior, foi obtido o seguinte amplicão como um exemplo ilustrativo não limitativo somente de um amplicão adequado: Hl9011_segl3F2R2 (SEQ ID N°: 235).

Iniciador Direto >Hl9011_segl3F2 (SEQ ID N° : 233): GTGAGTACAGTGACCGCTGGG

Iniciador inverso >Hl9011_segl3R2 (SEQ ID N° : 234): GGAGAAGAGTCTGGAATGACCAA

Amplicão >Hl9011_segl3F2R2 (SEQ ID N°: 235) GTGAGTACAGTGACCGCTGGGGAGACAGAGCGATCGAGAGAAAT GTCTACCTCTCTACCTGACAGCTGTGTGCGCTGGGTrCCTCCTCCACCTCCTG TCCTGCCACCCCCAAGATTGGTCATTCCAGACTCTTCTCC A expressão de C10RF32, grelha de leitura aberta 32 do cromossoma 1, transcritos de H19011 que podem ser detetados com amplicão tal como é representado no nome da sequência H19011 seg8-13FlRl (SEQ ID N° : 238) em tecidos de Pulmão normais e cancerígenos. A expressão de C10RF32, grelha de leitura aberta 32 do cromossoma 1, transcritos detetáveis com ou de acordo com o amplicão seg8-13FlRl - Hl9011_seg8-13FlRl (SEQ ID N° : 238) e os iniciadores Hl9011_seg8-13F1 (SEQ ID N°: 236) e Hl9011_seg8-13Rl (SEQ ID N° : 237) foi medida com PCR em tempo real em painel de pulmão. As amostras usadas são pormenorizadas no Quadro 3 mencionado anteriormente. Às amostras que não apresentaram deteção do amplicão (amostras n° 1, 2, 4-10, 12-27, 29-35, 37-41, 51-64 e 69-70, Quadro 3) foi assignado um valor de Ct de 41 e calculado consequentemente. Estas amostras apresentavam um produto de iniciador-dímero com uma curva de dissociação caraterística e um TM significativamente menor (este produto falso em sentido de artefacto foi identificado por seu aspeto no controlo negativo sem amostra de RT). Para cada amostra de RT, a expressão do amplicão mencionado anteriormente foi normalizada com o fator de normalização calculado a partir da expressão de vários genes constitutivos tal como é descrito no Exemplo 1. A quantidade normalizada de cada amostra de RT foi dividida a seguir entre a média das quantidades das amostras normais (números de amostra 51-64 e 69-70, Quadro 3 mencionado anteriormente), para obter um valor do número de vezes de regulação positiva para cada amostra com relação à média das amostras normais. A Figura 42 é um histograma que mostra a sobre-expressão dos transcritos de C10RF32 que foram indicados anteriormente em amostras de Pulmão cancerígenas com relação às amostras normais.

Tal como é evidente a partir da Figura 42, a expressão dos transcritos de C10RF32 que podem ser detetados com o amplicão mencionado anteriormente em amostras de carcinoma de pequena célula era significativamente mais elevada que nas amostras não cancerígenas (números de amostra 51-64 e 69-70, Quadro 3 mencionado anteriormente). De forma notável, encontrou-se uma sobre-expressão de pelo menos 500 vezes em 9 de cada 9 amostras de carcinoma de pequena célula.

Aplicou-se análise estatística para verificar a significância destes resultados, como é descrito a seguir. O valor de P para a diferença nos níveis de expressão dos transcritos de C10RF32 que podem ser detetados com o amplicão mencionado anteriormente em amostras de carcinoma de pequena célula de Pulmão contra as amostras de tecido normal foi determinado com o ensaio de T como 6,70e-003.

Encontrou-se um limiar de sobre-expressão de 500 vezes para diferenciar entre amostras de carcinoma de pequena célula e normais com um valor de P de 4,89e-007 tal como se comprova com o ensaio de Fisher exato.

Os valores mencionados anteriormente demonstram a significância estadística dos resultados.

Para a experiência anterior, foi usado o seguinte par de iniciadores como um exemplo ilustrativo não limitativo somente de um par de iniciadores adequado: iniciador direto de Hl9011_seg8-13Fl (SEQ ID N°: 236); e iniciador inverso de Hl9011_seg8-13R1 (SEQ ID N°: 237).

Para a experiência anterior, foi obtido o seguinte amplicão como um exemplo ilustrativo não limitativo somente de um amplicão adequado: Hl9011_seg8-13FlRl (SEQ ID N° : 238) .

Iniciador Direto >Hl9011_seg8-13Fl (SEQ ID N°: 236): GCCCAGTTTTGCTGTGGAGA

Iniciador inverso >Hl9011_seg8-13Rl (SEQ ID N°: 237): GGTAGACATTTCTCTCGATCGCTC

Amplicão >Hl9011_seg8-13FlRl (SEQ ID N°: 238)

GCCCAGTnTGCTGTGGAGATTATGCCAGAGTGGGTGTTTGlTGGC

CTGGTGCTCCTGGGCGTCTTCCTCTTCTTCGTCCTGGTGGGGATCTGCTGGTG

CCAGTGCTGCCCTCACAGCTGCTGCTGCTATGTCCGCTGCCCATGCTGCCCA

GATTCCTGCTGGTGCCCTCAAGCCTGTGAGTACAGTGACCGCTGGGGAGAC

AGAGCGATCGAGAGAAATGTCTACC A expressão de C10RF32, grelha de leitura aberta 32 do cromossoma 1, transcritos de H19011 que podem ser detetados com amplicão tal como é representado no nome da sequência Hl9011-junc8-10segl3 (SEQ ID N°: 241) em tecidos de pulmão normais e cancerígenos, em tecidos de cólon normais e cancerígenos, em diferentes tecidos normais e no painel específico para sangue. A expressão dos transcritos de C10RF32 que podem ser detetados com ou de acordo com o amplicão junc8-10segl3 -Hl9011_junc8-10segl3 (SEQ ID N°: 241) e os iniciadores Hl9011_junc8-10segl3Fl (SEQ ID N°: 239) e Hl9011_junc8-10segl3Rl (SEQ ID N°: 240) foi medida com PCR em tempo real para painel de pulmão, painel de cólon, painel normal painel de sangue. As amostras usadas são pormenorizadas no Quadro 3, Quadro 5, Quadro 2 e Quadro 1 mencionados anteriormente, respetivamente. Para cada amostra de RT, a expressão do amplicão mencionado anteriormente foi normalizada com o fator de normalização calculado a partir da expressão de vários genes constitutivos tal como é descrito no Exemplo 1.

Para painel de pulmão - À amostra não detetada de (amostra n° 69, Quadro 3) foi assignado um valor de Ct de 41 e calculou-se consequentemente. A quantidade normalizada de cada amostra de RT foi dividida a seguir entre a média das quantidades das amostras normais (números de amostra 51, 53, 54, 56, 57, 59, 61, 62, 64 e 70, Quadro 3 mencionado anteriormente), para obter um valor do número de vezes de regulação positiva para cada amostra com relação à média das amostras normais. A Figura 43 é um histograma que mostra a sobre-expressão dos transcritos de C10RF3 mencionados anteriormente em amostras de Pulmão cancerígenas com relação às amostras normais.

Tal como é evidente a partir da Figura 43, a expressão dos transcritos de C10RF32 que podem ser detetados com o amplicão mencionado anteriormente em amostras de carcinoma de pequena célula era significativamente mais elevada que nas amostras não cancerígenas (números de amostra 51, 53, 54, 56, 57, 59, 61, 62, 64 e 70, Quadro 3 mencionado anteriormente) . De forma notável, encontrou-se uma sobre-expressão de pelo menos 7 vezes em 9 de cada 9 amostras de carcinoma de pequena célula.

Aplicou-se análise estatística para verificar a significância destes resultados, como é descrito a seguir. O valor de P para a diferença nos níveis de expressão dos transcritos de C10RF32 que podem ser detetados com o amplicão mencionado anteriormente em amostras de carcinoma de pequena célula de Pulmão contra as amostras de tecido normal foi determinado com o ensaio de T como 2,34e-003.

Encontrou-se um limiar de sobre-expressão de 7 vezes para diferenciar entre amostras de carcinoma de pequena célula e normais com um valor de P de l,08e-005 tal como se comprova com o ensaio de Fisher exato.

Os valores mencionados anteriormente demonstram a significância estadística dos resultados.

Para painel de cólon - À amostra não detetada de (amostra n° 79, Quadro 5) foi assignado um valor de Ct de 41 e calculou-se consequentemente. A quantidade normalizada de cada amostra de RT foi dividida a seguir entre a média das quantidades das amostras normais (números de amostra 42-62 e 65-70, Quadro 5 mencionado anteriormente). A seguir, foi calculada o recíproco para esta relação, para obter um valor do número de vezes de regulação negativa para cada amostra com relação à média das amostras normais. A Figura 44 é um histograma que mostra a regulação negativa dos transcritos de C10RF32 indicados anteriormente em amostras de cólon cancerígenas com relação às amostras normais.

Tal como é evidente a partir da Figura 44, a expressão de transcritos de C10RF32 que podem ser detetados com o amplicão anterior em amostras de cancro era significativamente menor que nas amostras não cancerígenas (números de amostra 42-62 e 65-70, Quadro 5 mencionado anteriormente). De forma notável, encontrou-se uma regulação negativa de pelo menos 5 vezes em 15 de cada 36 amostras de adenocarcinoma.

Aplicou-se análise estatística para verificar a significância destes resultados, como é descrito a seguir. Encontrou-se um limiar de regulação negativa de 5 vezes para diferenciar entre amostras de cancro e normais com um valor de P de 4,29e-004 tal como se comprova com o ensaio de Fisher exato.

Os valores mencionados anteriormente demonstram a significância estadística dos resultados.

Para painel normal - Às amostras não detetadas (amostras n° 42 e 49, Quadro 2) foi assignado um valor de Ct de 41 e calculou-se consequentemente. A quantidade normalizada de cada amostra de RT foi dividida a seguir entre a média das quantidades das amostras de cólon (números de amostra 4 e 5, Quadro 2 mencionado anteriormente), para obter um valor da expressão relativa de cada amostra com relação à média das amostras de cólon, tal como se mostra na Figura 45A. A quantidade normalizada de cada amostra de RT foi dividida a seguir entre a média das quantidades das amostras de pulmão (números de amostra 26, 29 e 30, Quadro 2 mencionado anteriormente), para obter um valor da expressão relativa de cada amostra com relação à média das amostras de pulmão, tal como se mostra na Figura 45B.

Para painel de sangue - A quantidade normalizada de cada amostra de RT foi dividida a seguir entre a média das quantidades de amostras normais de rim (números de amostra 65-67, Quadro 1 mencionado anteriormente) , para obter um valor da expressão relativa de cada amostra com relação à média das amostras normais de rim.

Os resultados desta análise são representados no histograma da Figura 46. A expressão do transcrito de C10RF32 indicado anteriormente é elevada numa amostra de linfoma (amostra n° 33, Quadro 1), mas também em amostra de cérebro normal.

Para a experiência anterior, foi usado o seguinte par de iniciadores como um exemplo ilustrativo não limitativo somente de um par de iniciadores adequado: iniciador direto de Hl9011_junc8-10segl3Fl (SEQ ID N°: 239); e iniciador inverso de Hl9011_junc8-10segl3Rl (SEQ ID N°: 240).

Para a experiência anterior, foi obtido o seguinte amplicão como um exemplo ilustrativo não limitativo somente de um amplicão adequado: Hl9011_junc8-10segl3FlRl (SEQ ID N° : 241) .

Iniciador Direto >Hl9011_junc8-10segl3Fl (SEQ ID N° : 239)

TGTGGAGATTATGCCAGAGTGG

Iniciador inverso >Hl9011_junc8-10segl3Rl (SEQ ID N°: 240)

GACATTTCTCTCGATCGCTCTGT

Amplicão >Hl9011_junc8-10segl3FlRl (SEQ ID N°: 241) TGTGGAGATTATGCCAGAGTGGGTGTTTGTTGGCCTGGTGCTCCTG GGCGTCTTCCTCTTGTTCGTCCTGGTGGGGATCTGCTGGTGCCAGTGCTGCCC TCACAGCTGCTGCTGCTATGTCCGCTGCCCATGCTGCCCAGATTCCTGCTGG TGCCCTCAAGCCTGTGAGTACAGTGACCGCTGGGGAGACAGAGCGATCGA GAGAAATGTC A expressão de C10RF32, grelha de leitura aberta 32 do cromossoma 1, transcritos de H19011 que podem ser detetados com amplicão tal como é representado no nome da sequência

Hl9011_junc6-10 (SEQ ID N°: 244) em tecidos de pulmão normais e cancerígenos e em tecidos de Cólon normais e cancerígenos . A expressão dos transcritos de C10RF32 que podem ser detetados com ou de acordo com o amplicão junc6-10 Hl9011_junc6-10FlRl (SEQ ID N°: 244) e os iniciadores Hl 9 01l_j unc6-1OFl (SEQ ID N°: 242) e Hl 901l_junc6-1ORl (SEQ ID N° : 243) foi medida com PCR em tempo real em painel de pulmão e em painel de cólon. As amostras usadas são pormenorizadas no Quadro 3 e no Quadro 5 mencionados anteriormente, respetivamente. Para cada amostra de RT, a expressão do amplicão anterior foi normalizada com o fator de normalização calculado a partir da expressão de vários genes constitutivos tal como é descrito no Exemplo 1.

Painel de pulmão - A quantidade normalizada de cada amostra de RT foi dividida a seguir entre a média das quantidades das amostras normais (números de amostra 51-64, 69 e 70, Quadro 3 mencionado anteriormente). A seguir, foi calculada o recíproco para esta relação, para obter um valor do número de vezes de regulação negativa para cada amostra com relação à média das amostras normais. A Figura 47 é um histograma que mostra a regulação negativa dos transcritos de C10RF32 indicados anteriormente em amostras de Pulmão cancerígenas com relação às amostras normais.

Tal como é evidente a partir da Figura 47, a expressão dos transcritos de C10RF32 que podem ser detetados com o amplicão mencionado anteriormente em amostras de carcinoma de não pequena célula, adenocarcinoma e carcinoma de células escamosas era significativamente menor que nas amostras não cancerígenas (números de amostra 51-64, 69 e 70, Quadro 3 mencionado anteriormente). De forma notável, encontrou-se uma regulação negativa de pelo menos 5 vezes em 23 de cada 39 amostras de carcinoma de não pequena célula especialmente em 8 de cada 17 amostras de adenocarcinoma e em 12 de cada 16 amostras de carcinoma de células escamosas.

Aplicou-se análise estatística para verificar a significância destes resultados, como é descrito a seguir. 0 valor de P para a diferença nos níveis de expressão dos transcritos de C10RF32 que podem ser detetados com o amplicão mencionado anteriormente em amostras de carcinoma de não pequena célula de pulmão, adenocarcinoma de pulmão e carcinoma de células escamosas de pulmão, contra as amostras de tecido normal foi determinado com o ensaio de T como l,18e-003, 2,87e-002 e 3,55e-004, respetivamente.

Encontrou-se um limiar de regulação negativa de 5 vezes para diferenciar entre amostras de carcinoma de não pequena célula de pulmão, adenocarcinoma de pulmão e carcinoma de células escamosas de pulmão e amostras normais com valor de P de l,59e-003, 3,54e-002 e 4,78e-004, respetivamente, tal como se comprova com o ensaio de Fisher exato.

Os valores mencionados anteriormente demonstram a significância estadística dos resultados.

Painel de cólon - A quantidade normalizada de cada amostra de RT foi dividida a seguir entre a média das quantidades das amostras normais (números de amostra 42-70, Quadro 5 mencionado anteriormente). A seguir, foi calculada o recíproco para esta relação, para obter um valor do número de vezes de regulação negativa para cada amostra com relação à média das amostras normais. A Figura 48 é um histograma que mostra a regulação negativa dos transcritos de C10RF32 indicados anteriormente em amostras cancerígenas de Cólon com relação às amostras normais.

Tal como é evidente a partir da Figura 48, a expressão dos transcritos de C10RF32 que podem ser detetados com o amplicão mencionado anteriormente em amostras de cancro era significativamente menor que nas amostras não cancerígenas (números de amostra 42-70, Quadro 5 mencionado anteriormente). De forma notável, encontrou-se uma regulação negativa de pelo menos 9 vezes em 23 de cada 55 amostras de adenocarcinoma.

Aplicou-se análise estatística para verificar a significância destes resultados, como é descrito a seguir.

Encontrou-se um limiar de regulação negativa de 9 vezes para diferenciar entre amostras de cancro e normais com um valor de P de 7,39e-006 tal como se comprova com o ensaio de Fisher exato.

Os valores mencionados anteriormente demonstram a significância estadistica dos resultados.

Para a experiência anterior, foi usado o seguinte par de iniciadores como um exemplo ilustrativo não limitativo somente de um par de iniciadores adequado: iniciador direto de Hl9011_junc6-10Fl (SEQ ID N°: 242); e iniciador inverso de Hl9011_junc6-10R1 (SEQ ID N°: 243).

Para a experiência anterior, foi obtido o seguinte amplicão como um exemplo ilustrativo não limitativo somente de um amplicão adequado: Hl9011_junc6-10FlRl (SEQ ID N° : 244) .

Iniciador Direto >Hl9011_junc6-10Fl (SEQ ID N°: 242).

ACTCTATTACTGTATTATCACCACCCCAG

Iniciador inverso >Hl9011_junc6-10Rl (SEQ ID N°: 243)

CCCAACAAACACCCACTCCAAC

Amplicão >Hl901l_junc6-1OFlRl (SEQ ID N°: 244)

ACTCTATTACTGTATTATCACCACCCCAGATGACCTGGAGGGGAA

AAATGAGGGCTCACTGGGACTGCTGGTGTTGGAGTGGGTGnTGTTGG EXEMPLO 8

CLONAGEM DE TRANSCRITOS DE COMPRIMENTO COMPLETO QUE CODIFICAM VSIG1, ILDRl, LOC253012, AI216611, C10RF32, FXYD3 FUSIONADOS COM EGFP A clonagem de transcritos de Comprimento Completo que codificam VSIG1, ILDRl, LOC253012, AI216611, C10RF32, FXYD3 fusionados com EGFP realizou-se como é descrito a seguir.

Em primeiro lugar, construiu-se o vetor de expressão de EGFP e a seguir as grelhas de leitura aberta de VSIG1, ILDRl, LOC253012, AI216611, C10RF32 ou FXYD3 (ORF) foram clonadas. EGFP foi subclonado em pIRESpuro3 (número de catálogo de Clontech: 631619) como se segue: o vetor EGFP-Nl (número de catálogo de Clontech: 6085-1) foi digerido com Nhel e Notl para extinguir o gene de EGFP. O inserto de EGFP ligou-se a seguir em pIRESpuro3 (número de catálogo de Clontech: 631619), que previamente tinha sido digerido com as mesmas enzimas, com a finalidade de obter o vetor EGFP-pIRESpuro3. A clonagem das grelhas de leitura aberta de VSIG1, ILDRl, LOC253012, AI216611, C10RF32, FXYD3 (ORF) realizou-se usando as seguintes etapas: 1. Realizou-se uma reação de transcrição inversa como se segue: foram misturados 10 yg de ARN purificado com 150 ng de iniciadores de Hexâmero Aleatório (Invitrogen, Carlsbad. CA. EUA, número de catálogo: 48190-011) e dNTP 500 μΜ num volume total de 156 μΐ. A mistura foi incubada durante 5 min a 65 °C e a seguir foi arrefecida rapidamente em gelo. A partir deste momento, adicionaram-se 50 Dl de tampão de primeira cadeia de SuperscriptII 5X (Invitrogen, número de catálogo: 18064-014, número de peça: Y00146), 24 μΐ de 0,1 M DTT e 400 unidades de RNasina (Promega, Milwaukee. WS. EUA, número de catálogo: N2511), e a mistura foi incubada durante 10 min a 25 °C, seguido de incubação adicional a 42 °C durante 2 min. A seguir, adicionaram-se 10 μΐ (2000 unidades) de SuperscriptII (Invitrogen, número de catálogo: 18064-014) e a reação (volume final de 250 μΐ) foi incubada durante 50 min a 42 °C a seguir inativou-se a 70 yC durante 15 min. O ADNc resultante foi diluído a 1:20 em tampão de TE (Tris 10 mM, EDTA 1 mM, pH 8). 2. Realizou-se PCR usando Platinum PFX™ (Invitrogen., Carlsbad. CA. EUA, número de catálogo: 1178-021) nas seguintes condições: 5 yl de tampão Platinum PFX lOx; 5 yl - ADNc a partir do anterior; 2 μΐ - dNTP 10 mM (2,5 mM de cada nucleótido); 0,5 μΐ - enzima de Platinum PFX; 37 μΐ -H2O; e 1,5 μΐ - de cada iniciador (15 μΜ) num volume total de reação de 50 μΐ; com um programa de reação de 5 minutos em 95 °C; 35 ciclos de: 30 segundos a 94 °C, 30 segundos a 55 °C, 50 segundos a 68 °C; a seguir 10 minutos a 68 °C. Os iniciadores que foram usados incluem sequências especificas do gene que se correspondem às coordenadas desejadas da proteína e locais enzimáticos de restrição e sequência de Kozak, tal como se enumera no Quadro 136, a seguir. As letras em negrito no Quadro 136 representam a sequência genética específica enquanto que as extensões do local de restrição usadas com finalidades de clonagem são apresentadas em itálico e as sequências de Kozak estão sublinhadas. O Quadro 136 demonstra as etapas de clonagem de alvos de ORF. Por exemplo, clonaram-se FXYD3_T25_P14 e VSIG1_T6_P5 por meio de amplificação com PCR dos dois fragmentos de sobreposição do comprimento completo na etapa 1, seguido de PCR adicional na etapa 2 usando ambos fragmentos de PCR da etapa 1 como um molde para gerar o comprimento completo. VSIG1_T5_P4 foi clonado usando ambos fragmentos de PCR gerados na etapa 1 para digestão e ligação direta, AI216611_T1_P1 foi clonado realizando PCR aninhada no produto de PCR gerado a partir da etapa 1. Carregaram-se 5 μΐ dos produtos com números 1, 4, 5, 8, 9, 10, 11, 12, 15, 16 e 17 (Quadro 136), num gel de agarose a 1 % corado com brometo de etídio, submetido a eletroforese em solução de lxTBE a 100 V, e visualizou-se com luz UV. Depois da verificação da banda do tamanho esperado, o produto restante de PCR foi processado para purificação de ADN usando o kit de purificação de PCR de Qiaquick (Qiagen™, Valencia. CA. EUA, número de catálogo 28106). Os produtos de PCR extraídos foram digeridos com as enzimas de restrição apropriadas (New England Biolabs, Beverly. MA. EUA), tal como se enumera no Quadro 136. Depois da digestão, os ADN carregaram-se num gel de agarose a 1 % tal como foi descrito anteriormente. 0 tamanho de banda esperado foi excisado e extraído a partir do gel usando o kit de Extração de Gel de QiaQuick™ (Qiagen, número de catálogo: 28707).

Os ADN das ORF dos alvos digeridos ligaram-se ao vetor EGFP_pIRESpuro3 usando o Sistema de Ligamento Rápido de ADN LigaFastTM (Promega, número de catálogo: M8221.). Os ADN resultantes foram transformados em DH5a de bactérias E. coli competentes (RBC Bioscience, Taipei, Taiwan, número de catálogo: RH816) de acordo com as instruções do fabricante, a seguir cultivaram-se em placas de agar com LB-ampicilina para seleção de plasmídeos recombinantes, e incubou-se durante a noite a 37 °C.

Ao dia seguinte, tomou-se uma série de colónias de cada transformação que cresceu nas placas seletivas para análise adicional por meio de formação de placas cultivadas em estrias noutra placa seletiva e por meio de PCR usando GoTaq ReadyMix (Promega, número de catálogo: M7122.). A identificação sistemática dos clones positivos realizou-se por meio de PCR usando iniciador específico do vetor pIRESpuro3 e iniciador específico de gene (não são mostrados os dados). Depois da finalização de todos os ciclos de PCR, a metade da reação foi analisada usando gel de agarose a 1 % tal como foi descrito anteriormente. Depois da verificação do tamanho de banda esperado, foram cultivados 2 colónias positivas para cada reação de ligamento em 5 ml de Caldo de cultivo Terrific complementado com 100 yg/ml de ampicilina, com agitação durante a noite a 37 °C. O ADN plasmídeo foi isolado de cultivos bacterianos usando o Kit de Miniprep em Centrífuga de Qiaprep™ (Qiagen, número de catálogo: 27106). A clonagem precisa foi verificada por meio de sequenciação dos insertos (Weizmann Institute, Rehovot, Israel). Depois da verificação de uma colónia livre de erro (isto é, sem mutações dentro do ORF), os plasmideos recombinantes foram processados para análise adicionais.

As sequências de ADN dos VSIG1, ILDRl, LOC253012, AI216611, C10RF32 ou FXYD3 de comprimento completo fusionados com EGFP resultantes são mostrados nas Figuras 56A-J. Nas Figuras 56A-J, a sequência especifica do gene que corresponde à sequência de comprimento completo do alvo é marcado com letras em negrito, a sequência de EGFP é apresentada em letra itálico sem negrito e as mutações conhecidas de SNP/silenciosa são apresentados sublinhadas. A Figura 56A apresenta a sequência de ADN de FXYD3_T0_P0_EGFP (996 pb) (SEQ ID N° : 77); a Figura 56B apresenta a sequência de ADN de FXYD3_T25_P14_EGFP (1083 pb) (SEQ ID N°: 78); a Figura 56C apresenta a sequência de ADN de AI216611_T0_P0_EGFP (1371 pb) (SEQ ID N°: 79); a Figura 56D apresenta a sequência de ADN de AI216611_T1_P1_EGFP (1332 pb) (SEQ ID N°: 80); a Figura 56E apresenta a sequência de ADN de C10RF32_T8_P8_EGFP (1533 pb) (SEQ ID N°: 81); a Figura 56F apresenta a sequência de ADN de LOC253012_T4_P5_EGFP (2085 pb) (SEQ ID N° : 82); a Figura 56G apresenta a sequência de ADN de ILDRl_T0_P3_EGFP (2373 pb) (SEQ ID N° : 83); a Figura 56H apresenta a sequência de ADN de ILDR1_T2_P5_EGFP (2241 pb) (SEQ ID N°: 84); a Figura 561 apresenta a sequência de ADN de VSIG1_T6_P5_EGFP (2082 pb) (SEQ ID N°: 85); a Figura 56J apresenta a sequência de ADN de VSIG1_T5_P4_EGFP (2004 pb) (SEQ ID N° : 86) .

As sequências de aminoácidos dos VSIG1, ILDRl, LOC253012, AI216611, C10RF32 ou FXYD3 de comprimento completo fusionadas com EGFP resultantes são mostrados na Figura 57A-J; a sequência especifica do gene que corresponde à sequência de comprimento completo da proteína é marcada em letras em negrito, a sequência de EGFP é apresentada em letra itálico sem negrito e os aminoácidos modificados devido aos SNP conhecidos são apresentados sublinhados. A Figura 57A apresenta a sequência de aminoácidos da proteína FXYD3_P0_EGFP (331 aa) (SEQ ID N° : 87); a Figura 57B apresenta a sequência de aminoácidos da proteína FXYD3_P14_EGFP (360 aa) (SEQ ID N° : 88); a Figura 57C apresenta a sequência de aminoácidos da proteína AI216 611_P0_EGFP (456 aa) (SEQ ID N° : 89); a Figura 57D apresenta a sequência de aminoácidos da proteína AI216611_P1_EGFP (443 aa) (SEQ ID N°: 90); a Figura 57E apresenta a sequência de aminoácidos da proteína C10RF32_P8_EGFP (510 aa) (SEQ ID N°: 91); a Figura 57F apresenta a sequência de aminoácidos da proteína LOC253012_P5_EGFP (694 aa) (SEQ ID N° : 92); a Figura 57G apresenta a sequência de aminoácidos da proteína

ILDR1_P3_EGFP (790 aa) (SEQ ID N°: 93); a Figura 57H apresenta a sequência de aminoácidos da proteína ILDRl_P5_EGFP (746 aa) (SEQ ID N°: 94); a Figura 571 apresenta a sequência de aminoácidos da proteína

VSIG1_P5_EGFP (693 aa) (SEQ ID N°: 95); a Figura 57J apresenta a sequência de aminoácidos da proteína VSIG1_P4_EGFP (667 aa) (SEQ ID N°: 96).

EXEMPLO 9 DETERMINAÇÃO DA LOCALIZAÇÃO CELULAR DE VSIG1, ILDRl, LOC253012, AI216611, C10RF32 E FXYD3

Com a finalidade de determinar a localização celular dos alvos de proteína, estes clonaram-se como proteínas de fusão de EGFP (Proteína Fluorescente Verde Potenciada). A localização das proteínas foi observada depois de transfeção transitória (Chen et al. , Molecular vision 2002; 8; 372-388) usando o microscópio confocal. As células foram observadas para a presença de produtos fluorescentes 48 horas depois da transfeção. A determinação da localização celular de VSIG1, ILDRl, LOC253012, AI216611, C10RF32 e FXYD3 realizou-se por meio de transfeção transitória das construções recombinantes de ORF-EGFP que foram descritas anteriormente.

As construções de VSIC1, ILDRl, LOC253012, AI216611, C10RF32 e FXYD3-EGFP pIRESpuro3 transfetam-se de forma transitória posteriormente em linfócitos T de células HEK-293 como se segue:

As células HEK-293T (ATCC, CRL-11268) cultivaram-se em lamelas cobre-objetos de vidro estéreis, 13 mm de diâmetro (Marienfeld, número de catálogo: 01 115 30), que foram colocadas numa placa de 6 poços, usando 2 ml de DMEM aquecido previamente [Meios de Eagle modificados com Dulbecco, Biological Industries (Beit Ha'Emek, Israel), número de catálogo: 01-055-lA] + FBS a 10 % (Soro Bovino

Fetal) + 4 mM de L-Glutamina. 500.000 células por poço foram transfetadas com 2 yg da construção de ADN usando 6 yl de reagente FuGENE 6 (Roche, número de catálogo: 11-814-443-001) diluído em 94 ul de DMEM. A mistura foi incubada a temperatura ambiente durante 15 minutos. A mistura de complexo adicionou-se gota a gota às células e foi submetida a agitação vorticial. As células foram colocadas numa incubadora mantida a 37 °C com conteúdo de CO2 a 5 %. 48 horas depois da transfeção transitória, as células foram processadas adicionalmente para análise em microscópio confocal. As lamelas cobre-objetos foram lavadas 3 vezes em solução salina tamponada com fosfato (PBS) e foram fixos durante 15 minutos com paraformaldeido a 3,7 % ou a 1 % (PFA) (Sigma, número de catálogo: P-6148). Depois de 2 lavagens em PBS, as lamelas cobre-objetos fixos foram colados a uma lâmina porta-objetos usando solução de montagem (Sigma, número de catálogo: G0918) e as células foram observadas para a presença de produto fluorescente usando microscópio confocal. Os resultados são apresentados na Figura 58A-F. A Figura 58A demonstra que as proteínas fusionadas com AI216611_P0_EGFP (SEQ ID N°: 89) e Al216611_Pl_EGFP (SEQ ID N°: 90) estão localizadas na membrana celular depois da expressão em linfócitos T de células HEK 293. A imagem foi obtida usando a objetiva de 40x do microscópio confocal. A Figura 58B demonstra que as proteínas fusionadas com FXYD3_P0_EGFP (SEQ ID N° : 87) e FXYD3_Pl4_EGFP (SEQ ID N°: 88) estão localizadas na membrana celular depois da expressão em linfócitos T de células HEK 293. A imagem foi obtida usando a objetiva de 40x do microscópio confocal. A Figura 58C demonstra que a proteína fusionada com C10RF32_P8_EGFP (SEQ ID N° : 91) está localizada na membrana celular; a membrana do retículo endoplasmático (ER) e nas ligações celulares depois da expressão em linfócitos T de células HEK 293. A imagem foi obtida usando a objetiva de 40x do microscópio confocal. A Figura 58D demonstra que a proteína fusionada com LOC253012_P5_EGFP (SEQ ID N°: 92) está localizada na membrana celular e a membrana do retículo endoplasmático (ER) depois da expressão em linfócitos T de células HEK 293. A imagem foi obtida usando a objetiva de 40x do microscópio confocal. A Figura 58E demonstra que as proteínas fusionadas com VSIG1 _P5_EGFP (SEQ ID N° : 95) e VSIG1- _P4 _EGFP (SEQ ID N°: 96) estão localizadas na membrana celular e na membrana do retículo endoplasmático depois da expressão em linfócitos T de células HEK 293. A imagem foi obtida usando a objetiva de 40x do microscópio confocal. A Figura 58F demonstra que as proteínas fusionadas com ILDRl _P3_EGFP (SEQ ID N° : 93) e ILDRl_P5_EGFP (SEQ ID N°: 94) estão localizadas na membrana celular e na membrana do retículo endoplasmático depois da expressão em linfócitos T de células HEK 293. A imagem foi obtida usando a objetiva de 40x do microscópio confocal. EXEMPLO 10 CLONAGEM E EXPRESSÃO DE DOMÍNIO EXTRACELULAR (ECD) DE VSIG1, ILDRl, LOC253012, AI216611, C10RF32 E FXYD3

FUSIONADOS COM FC DE RATINHO A finalidade desta análise era clonar os ECD de VSIG1, ILDRl, LOC253012, AI216611, C10RF32 e FXYD3 fusionados através de sua extremidade C correspondente a Fc de ratinho (mFc), e expressar os ECD fusionados em linfócitos T de células HEK 293 (ATCC- CRL-11268), com a finalidade de que fossem usados adicionalmente para produção de anticorpos assim como para avaliação funcional dos ECD de VSIG1, ILDRl, LOC253012, AI216611, C10RF32 e FXYD3.

As coordenadas do ECD clonado são descritas no Quadro 137 :

A clonagem das proteínas de fusão (ECD_mFc) realizou-se em duas etapas: 1. Clonagem de ECD a pIRESpuro3. 2. Subclonagem da IgG2a de Fc de ratinho em estrutura com a extremidade C do ECD clonado previamente em pIRESpuro3, a partir da etapa 1. A clonagem de ECD a pIRESpuro3 realizou-se como se segue : A clonagem do ECD para cada um dos VSIG1, ILDRl, LOC253 012, AI216611, C10RF32 e FXYD3 realizou-se delimitando por PCR a sequência parcial de aminoácidos de sua ECD tal como se descreve no Quadro 137, usando sua

No Quadro 138, mencionado anteriormente, as letras em negrito representam a sequência especifica do gene enquanto que as extensões do local de restrição usadas com finalidades de clonagem são apresentadas em letra itálico e a sequência de Kozak está sublinhada.

Os produtos de PCR foram purificados e foram digeridos com as enzimas de restrição apropriadas tal como é descrito no Quadro 138. Os produtos de PCR para FXYD3, AI216611, C10RF32 e LOC253012 ligaram-se em pIRESpuro3, enquanto que os produtos de PCR VSIG1 e ILDRl ligaram-se em IL6sp_pIRESpuro3 com a finalidade de aumentar sua secreção. A mistura de ligamento foi transformada em células competentes para DH5a. Os transformantes positivos foram identificados sistematicamente e foram verificados por meio de sequenciação de ADN.

Clonagem de ECD-mFc pIRESpuro3

Otimizou-se o codão da sequência de proteínas de Fc de ratinho (IgG2a) (Referência - CAA49868 aa 237-469) seguido de sequência do local de clivagem de TEV otimizado para estimular a expressão de proteínas em sistema de mamífero. A sequência otimizada foi sintetizada por meio de GeneArt (Alemania) com local de restrição de BamHI de flanqueamento na extremidade N e local de restrição de Notl na extremidade C. 0 fragmento de ADN foi digerido com BamHl/Notl e ligou-se em estrutura em construções de ECD_pIRESpuro3 digeridos previamente com as mesmas enzimas para dar ECD_mFc_pIRESpuro3. A mistura de ligamento foi transformada em células competentes para DH5a. Os transformantes positivos foram identificados sistematicamente e foram verificados por meio de sequenciação de ADN.

As sequências de nucleótidos das ORF de ECD_mFc são mostradas na Figura 59A-F: a sequência específica do gene que corresponde à sequência de ECD está marcada com letra em negrito, a sequência do local de clivagem de TEV está sublinhada, a sequência de mFc está em letra itálico sem negrito e a sequência de IL6sp está em letra itálico em negrito. A Figura 59A mostra a sequência de ADN de FXYD3_T25_Pl4_ECD-_mFc (924 pb) (SEQ ID N° : 97); a Figura 59B mostra a sequência de ADN de Al216611_T0_P0_ECD_mFc (1170 pb) (SEQ ID N°: 98), a Figura 59C mostra a sequência de ADN de C10RF32_T8_P8_ECD_mFc (1287 pb) (SEQ ID N°: 99); a Figura 59D mostra a sequência de ADN de LOC253012_T4_P5_ECD_mFc (1740 pb) (SEQ ID N° : 100), a Figura 59E mostra a sequência de ADN de ILDRl_T0_P3_ECD_mFc (1167 pb) (SEQ ID N°: 101), e a Figura 59F mostra a sequência de ADN de VSIGl_T6_P5_ECD_mFc (1641 pb) (SEQ ID N°: 102) . A sequência das proteínas de fusão de ECD_mFc resultantes é mostrada na Figura 60A - 60F; a sequência específica do gene que corresponde à sequência de ECD está marcada com letra em negrito, a sequência de local de clivagem TEV está sublinhada, a sequência de mFc está em letra itálico sem negrito e a sequência de IL6sp está em letra itálico em negrito. A Figura 60A mostra a sequência de aminoácidos de FXYD3_T25_Pl4_ECD_mFc (307 aa) (SEQ ID N°: 103); a Figura 60B mostra a sequência de aminoácidos de Al216611_T0_P0_ECD_mFc (389 aa) (SEQ ID N° : 104), a Figura 60C mostra a sequência de aminoácidos de C10RF32_T8_P8_ECD_mFc (428 aa) (SEQ ID N° : 105); a Figura 60D mostra a sequência de aminoácidos de LOC253012_T4_P5_ECD_mFc (579 aa) (SEQ ID N°: 106), a Figura 60E mostra a sequência de aminoácidos de ILDRl_T0_P3_ECD_mFc (388 aa) (SEQ ID N° : 107), e a Figurai 60F mostra a sequência de aminoácidos de VSIGl_T6_P5_ECD_mFc (546 aa) (SEQ ID N°: 108).

Para gerar células que expressam ECD-mFc, transfetaram-se linfócitos T de células HEK-293 com as construções que foram descritas anteriormente que se correspondem ao domínio extracelular de VSIG1, ILDRl, LOC253012, AI216611, C10RF32 e FXYD3 fusionado com Fc de ratinho. Geraram-se grupos estáveis como se segue seguido de 48 horas de pós-transfeção, as células foram tripsinadas e foram transferidas a um balão T75 que contém meio de seleção (DMEM FCS a 10 % e 5 yg/ml de puromicina) para obter grupos estáveis. Os meios foram alterados a cada 3 a 4 dias até a formação de colónias.

Para verificar a identidade das células, realizou-se PCR genómica, que indica as sequências corretas integradas no genoma celular (não são mostrados os dados).

Colheu-se meio privado de células e purificou-se por meio de contas de Proteína A-Sepharose (Amersham número de catálogo 17-5280-04) como se segue: 1 ml de meio privado de células foi incubado com 50 μΐ de contas de Proteína A Sepharose durante 45 minutos a temperatura ambiente. Ao final do período de incubação, as proteínas foram eluídas dos péletes de contas com 50 μΐ de tampão de amostra que contém Citrato Fosfato 100 mM pH 3,5 e DTT 10 mM. As amostras foram fervidas durante 3 minutos e carregaram-se 25 μΐ em gel de NuPAGE Bis Tris a 12 % (Invitrogen, número de catálogo NP0342). As proteínas foram transferidas a uma membrana de nitrocelulose e foram bloqueadas com leite magro a 10 % em PBST (PBS complementado com tween-20 a 0,05 %). A seguir, a membrana foi transferida durante 1 hora com fragmento de HRP de Fc de IgG anti-ratinho de Cabra (Jackson, número de catálogo 115-035-206.) (1:40.000 em solução de bloqueio) a temperatura ambiente. Depois da incubação com solução de ECL (Amersham Biosciences, N° de Catálogo RPN2209), a membrana foi exposta ao filme. A Figura 61 mostra os resultados de uma Western blot em FXYD3_ECD_mFc expresso (SEQ ID N° : 103), AI216611 ECD_mFc (SEQ ID N°: 104), C10RF32_ECD_mFc (SEQ ID N°: 105), LOC253012_ECD_mFc (SEQ ID N°: 106), ILDRl_ECD_mFc (SEQ ID N° : 107), VSIGl_ECD_mFc (SEQ ID N°: 108).

As pistas são como se segue: pista 1 Marcadores de peso molecular (Amersham, arco-íris de intervalo completo, número de catálogo RPN800); pista 2- LOC253012_ECD_mFc (SEQ ID N° : 106); pista 3 - FXYD3_ECD_mFc (SEQ ID N° : 103); pista 4 - AI216611 ECD_mFc (SEQ ID N° : 104); pista 5 -C10RF32_ECD_mFc (SEQ ID N° : 105); pista 6 - ILDRl_ECD_mFc (SEQ ID N°: 107); pista 7 - VSIGl_ECD_mFc (SEQ ID N°: 108). EXEMPLO 11

PRODUÇÃO DE PROTEÍNA DO DOMÍNIO EXTRACELULAR (ECD) DE VSIG1, ILDRl, LOC253012, AI216611, C10RF32 E FXYD3 FUSIONADO COM FC DE RATINHO

Para produzir VSIG1, ILDRl, LOC253012, AI216611, C10RF32 e FXYD3 ECD fusionados com Fc de ratinho, usaram-se grupos de linfócitos T de células HEK 293 transfetados de forma estável com as construções correspondentes que foram descritas anteriormente no presente documento. As células transfetadas, mantidas normalmente em meio complementado com soro a 10 %, foram transferidas em meio livre de soro (EX-CELL293, SAFC) complementado com glutamina 4 mM e antibióticos de seleção (5 ug/ml de puromicina), e foram cultivadas em suspensão em balões de agitação a 37 °C, com agitação. O volume do cultivo elevou-se por meio de diluições sequenciais até uma fase de produção de 3-4 dias realizada em balões de agitação de 2 1. O meio dos agitadores foi colhido, eliminado das células por centrifugação, filtrado através de um filtro de 0,22 ym e foi mantido a -20 °C.

Os ECD de VSIG1, ILDRl, LOC253012, AI216611, C10RF32 e FXYD3 fusionados com Fc de ratinho foram purificados usando cromatografia por afinidade de nProteína A como é descrito a seguir.

As colheitas foram concentradas aproximadamente 10 vezes usando sistema de ultrafiltração PALL em duas cassetes de 10 kDa. O concentrado foi ajustado a seguir a pH 7,5, por meio da adição de NaOH 5 M e foi filtrado através de um filtro Stericup de 0,2 ym. O método de purificação realizou-se usando AKTA Explorer (GE Healthcare). Foram lavados 2 ml de nProteina A Sepharose TM, resina de Fluxo Rápido (N° de cat 17-5280-02) numa coluna de cromatografia Poli-prep a vácuo com 10 volumes de coluna (CV) de etanol a 70 %, 10 CV de WFI (Água Estéril para Irrigação (TEVA)) seguido de 10 CV de tampão A. Foram transferidos 2 ml de resina em dois tubos de 500 ml (1 ml cada um) e adicionou-se a colheita concentrada. O tubo foi incubado durante a noite a 4 °C num cilindro para permitir a ligação da proteína. A resina única foi transferida a seguir e foi empacotada sob fluxo constante numa coluna XK16 (GE Healthcare, N° de cat 18-8773-01) . A coluna foi lavada com 20 CV de tampão A (Tris 100 Mm a pH 7,4) e realizou-se redução numa etapa usando o tampão B a 100 % (Citrato/Fosfato a pH 3,0) . As frações foram avaliadas com tampão C a 12,5 % (v/v) (Tris 2 M a pH 8,5) para ajustar o pH a ~7,5 e foram combinadas. O tampão final foi permutado por DPBS (solução salina tamponada com Fosfato modificada com Dulbecco a pH 7,4, /ou Ca, c/ou Mg) pH 7,4 c/ou Ca, c/ou Mg usando uma coluna de dessalinização HiPrep TM (GE Healthcare, N° de cat 17-5087-01) de 53 ml. A proteína foi filtrada através de um filtro de 0,22 ym, foram tomadas alíquotas em condições estéreis, e armazenadas a -800 °C. A concentração final da proteína foi determinada por meio de ensaio de proteína total de BCA e a proteína foi analisada por meio de SDS/PAGE de redução corada com Coomassie (não são mostrados os dados). O nível de endotoxina foi determinado por meio de ensaio de LAL colorimétrico (Lisado de Amebócitos de Limulus, QCL-1000, Cambrex). As identidades das proteínas específicas foram verificadas por meio de MS (no Smoler Proteomics Center, Technion, Haifa, não são mostrados os dados) .

As análises da proteína resultantes foram sumarizadas no Quadro 139.

EXEMPLO 12

LIGAÇÃO DAS PROTEÍNAS FUSIONADAS COM Fc DOS ECD A LINFÓCITOS T ATIVADOS

Com a finalidade de examinar a capacidade dos ECD de VSIGl, ILDRl, LOC253012, AI216611, C10RF32 e FXYD3 fusionados com Fc que foram descritos anteriormente para ligar-se a um suposto contrarrecetor em linfócitos T, estes ECD fusionados com Fc foram submetidos a ensaio em linfócitos T em repouso ou ativados. Os linfócitos T purificados foram ativados com ConA (Sigma Aldrich, N° de Cat C5275) , seguido de incubação com os ECD de VSIGl, ILDRl, LOC253012, AI216611, C10RF32 ou FXYD3 fusionados com Fc e foram analisados por meio de citometria de fluxo.

Os linfócitos T foram purificados a partir de sangue completo por meio de seleção negativa usando Coquetel de Enriquecimento de Linfócitos T Humanos RosetteSep™ (StemCell Technologies, N° de CAT 15061) . Isto deu como resultado uma população de linfócitos T (CD3+) com uma pureza de um ~90 %. Os linfócitos T purificados (IX 105) foram cultivados durante 48 horas em 100 ui de meio RPMI 1640 completo que continha FBS a 10 %, sem nenhuma ativação ou ativado com ConA (Concovalina A, 10 ug/ml, Sigma Aldrich, N° de Cat C5275). Os cultivos foram colhidos e corados com as proteínas fusionadas com Fc dos ECD durante 1 hora a 4 °C (ECD de VSIG1, ILDRl, LOC253012, AI216611, FXYD3 ou C10RF32 fusionados com Fc de IgG2 de ratinho). As proteínas unidas foram detetadas com Fc anti-ratinho de cabra de F(ab)2 conjugado com FITC durante meia hora a 4 °C (Jackson ImmunoResearch Laboratories. N° de CAT 115-096-071). As amostras foram analisadas usando um FACSCalibur (BD Immunocytometry Systems) e software CellQuest.

As Figuras 62A-D apresentam a união das proteínas fusionadas com Fc dos ECD (VSIG1 (SEQ ID N°: 108), LOC253012 (SEQ ID N° : 106), AI216611 (SEQ ID N° : 104) ou C10RF32 (SEQ ID N° : 105)) para linfócitos T em repouso ou linfócitos T ativados com Con A para diferentes períodos de tempo. Os linfócitos T humanos primários de três dadores diferentes foram cultivados durante um período total de 48 horas na ausência de estímulo (0 horas) ou em presença de Con A, que foram adicionou a uma concentração final de 10 yg/ml para as últimas 6, 18, 24 ou 48 horas de cultivo (linfócitos T do dador 5 foram cultivados com Con A durante 0, 6, 18 e 24 horas enquanto que os dadores 6 e 7 foram cultivados durante 0, 6, 24 e 48 horas) . A seguir, as células foram colhidas e foram incubadas com 10 yg/ml das proteínas fusionadas com Fc dos ECD indicados. A Figura 62A mostra os resultados de união para o ECD de VSIG1 fusionado com Fc; a Figura 62B mostra os resultados de união para o ECD de LOC253012 fusionado com Fc; a Figura 62C mostra os resultados de união para o ECD de C10RF32 fusionado com Fc; a Figura 62D mostra os resultados de ligação para o ECD de AI216611 fusionado com Fc e a Figura 62E mostram os resultados de ligação para o ECD de FXYD3 fusionado com Fc. A percentagem de células positivas foi determinada como a diferença entre as células positivas com a proteína indicada e as células positivas obtidas com Fc de anti-ratinho de cabra de F(ab)2 conjugado com FITC. A Figura 63 apresenta a resposta à dose da união de proteínas similares a B7 para linfócitos T ativados. Os linfócitos T purificados foram cultivados durante 48 horas. Adicionou-se Con A para as últimas 24 horas. A seguir, as células foram colhidas e coradas com concentrações crescentes (3, 6. 12, 25 e 50 yg/ml) dos ECD de VSIG1, LOC253012, C10RF32, AI216611 ou ILDRl fusionados com Fc. Como controlo negativo, foi usada IgG2a de ratinho às mesmas concentrações.

Os resultados apresentados nas Figuras 62A-D e 63 demonstram a união de todas as proteínas fusionadas com Fc dos ECD submetidas a ensaio (ECD de VSIG1, ILDRl, LOC253012, AI216611 ou C10RF32 fusionados com Fc de IgG2 de ratinho, SEQ ID N° : 108, 107, 106, 104, ou 105, respetivamente), a níveis de ligação acima daqueles dos controlos negativos: IgG2a de ratinho (R&D Systems, N° de CAT MAB003) como controlo de isotipo. Detetou-se uma ligação básica para o ECD de VSIG1 fusionado com Fc e para ECD-Fc de LOC253012 para linfócitos T estimulados com ConA. Os ECD fusionados com Fc de C10RF32 e AI216611 apresentavam uma ligação mais débil para estas células, tal como pode ser observado a partir das Figuras 62A-D e 63. Encontrou-se que cada proteína ligava-se a uma certa percentagem de linfócitos T ativados. A classificação dos níveis de ligação foi como se segue VSIG1 > LOC253012 > ILDRl = AI216611 > C10RF32. Nenhuma das proteínas se ligava a linfócitos T em repouso (isto é, 0 hora de ConA nas Figuras 62A-D).

Efeito das proteínas fusionadas com Fc dos ECD da invenção na ativação de linfócitos T.

Com a finalidade de submeter a ensaio a atividade potencial co-estimuladora ou/e co-inibidora das proteínas solúveis, os ECD de VSIG1, ILDRl, LOC253012, AI216611, FXYD3 ou C10RF32 fusionados com Fc de IgG2 de ratinho, SEQ ID N°: 108, 107, 106, 104, ou 105, respetivamente, na proliferação de linfócitos T e secreção de IL-2, foram cultivados linfócitos T humanos em presença de anti-CD3 ((clone OKT3, eBioscience, N° de CAT 16-0037-85) e as proteínas de tipo B7 da invenção, que foram descritos anteriormente. A proteína B7-1 humana recombinante (R&D Systems, N° de CAT 140-Bl) foi usado como um controlo positivo para a atividade co-estimuladora. A proteína B7-H4 de ratinho recombinante (R&D Systems, N° de CAT 4206-B7) foi usado como controlo positivo para a atividade co-inibidora .

Em primeiro lugar, revestiram-se placas de 96 poços de fundo plano a 4 °C durante a noite com 3 yg/ml de mAb anti-CD3 (clone OKT3) e posteriormente revestiram-se com as concentrações indicadas de B7-1 humano (R&D, 3 pg/ml), B7- H4 de ratinho (R&D, 10 yg/ml) ou as proteínas fusionadas com Fc dos ECD de VSIG1, ILDRl, LOC253012, AI216611, FXYD3 ou C10RF32 fusionados com Fc de IgG2 de ratinho, durante 4 h a 37 °C. Os linfócitos T humanos foram purificados a partir de sangue completo como foi descrito anteriormente, e foram cultivados nas placas de 96 poços revestidas previamente (1 x 105 células/poço) em 250 μΐ de meio RPMI 1640 completo que continha FBS a 10 % durante 48 h. As placas revestidas foram lavadas com PBS três vezes antes de cultivar as células. A proliferação dos linfócitos T foi determinada por meio da incorporação de BrdU por meio de ELISA de proliferação celular, BrdU (colorimétrico) (Roche). As células foram marcadas com reagente de marcação de BrdU a uma concentração final de 100 μΜ durante as últimas 18 horas. A seguir as placas foram centrifugadas (a 300 g, durante 10 min,), e os sobrenadantes foram aspirados e foram armazenados a -20 °C para a determinação posterior de IL-2 usando um ELISA de IL-2 Humano (Diaclone, N° de CAT 850.010 096) . A incorporação de BrdU foi medida de acordo com as instruções do fabricante do ELISA de proliferação celular, BrdU (colorimétrico) (Roche, N° de CAT 11-647-229) .

As Figuras 64A-B apresentam o efeito das proteínas fusionadas com Fc dos ECD na proliferação de linfócitos T ou a secreção de IL-2, depois da ativação com Ab anti-CD3. A Figura 64A mostra os níveis de incorporação de BrdU. A Figura 64B mostra os níveis de secreção de IL-2.

Os resultados, apresentados na Figura 64A-B, indicam que nenhuma das proteínas fusionadas com ECD-Fc dos ECD de VSIG1, ILDRl, LOC253012, AI216611, FXYD3 ou C10RF32 fusionados com Fc de IgG2 de ratinho, apresentava atividade co-estimuladora. O controlo positivo, B7-1, apresentava uma forte atividade co-estimuladora, tal como se esperava. Parecia que o ECD de ILDRl fusionado com Fc e o ECD de AI216611 fusionado com Fc tinham atividade co-inibidora, dado que inibiam a proliferação celular do mesmo modo que B7-H4, em comparação com a obtida em presença do controlo negativo: IgG2a de ratinho (Figura 64A) . No entanto, não foi observado nenhum efeito significativo na secreção de IL-2 de qualquer das proteínas fusionadas com ECD-Fc, dos ECD de VSIG1, ILDRl, LOC253012, AI216611, FXYD3 ou C10RF32 fusionados com Fc (Figura 64B). EXEMPLO 13 LIGAÇÃO DAS PROTEÍNAS FUSIONADAS COM FC DOS ECD A LINFÓCITOS E A CÉLULAS POSITIVAS PARA CD4

Com a finalidade de examinar adicionalmente a capacidade dos ECD de VSIG1, ILDRl, LOC253012, AI216611, FXYD3 e C10RF32 fusionados com Fc para ligar-se a um suposto contrarrecetor em linfócitos T, estes ECD fusionados com Fc foram submetidos a ensaio primeiro em linfócitos. Prepararam-se PBMC a partir de sangue periférica humana, em tampão FACS a 1 x 10e7/ml. Adicionou-se bloqueador de Fc (hlgG (16D10), N° de lote 080706, 1,3 mg/ml) a 30 ug/ml e as células foram incubadas com o bloqueador em gelo durante 30 min. Adicionaram-se proteínas de fusão a 1 ug/10e6 por coloração em gelo durante 30 min. 0 2o Ab adicionou-se a 1 ug/100 ul/coloração durante 25-30 min (G0mIgG-Fc-FITC: Jackson Immunol Lab, 1 mg/ml, N° de código 115-096-071, N° de lote 71453, 1,0 mg/ml, usado a 1 ug/coloração). As células foram lavadas com o tampão em cada etapa que foi resumida anteriormente. A ligação foi analisada por citometria de fluxo. A Figura 65 ilustra a união dos ECD fusionados com Fc dos VSIG1, ILDRl, LOC253012, AI216611, FXYD3 ou C10RF32 a linfócitos. Tal como pode ser observado a partir da Figura 65, C10RF32, AI216611 e ILDRl ligam-se a um homólogo expresso em linfócitos. A seguir, realizou-se a ligação dos ECD fusionados com Fc de VSIG1, ILDRl, LOC253012, AI216611, FXYD3 e C10RF32 a células CD4+. Adicionou-se bloqueador de Fc (hlgG (16D10), N° de lote 080706, 1,3 mg/ml) a 30 ug/ml e as células foram incubadas com o bloqueador em gelo durante 30 min. Adicionaram-se proteínas de fusão a 1 ug/10e6 por coloração em I. durante 30 min. Adicionar 2o Ab a 1 ug/100 ul/coloração durante 25-30 min (G@mIgG-Fc-FITC: Jackson Immunol Lab, 1 mg/ml, N° de código 115-096-071, N° de lote 71453, 1,0 mg/ml, usado a 1 ug/coloração). 0CD4 (m0hCD4-APC: BD, N° de cat 3555349, N° de lote 44331). Adicionaram-se 20 ui de cada um por coloração, em gelo durante 30 min.

As células foram lavadas com o tampão em cada etapa que foi resumida anteriormente. A ligação foi analisada por citometria de fluxo. A Figura 66 ilustra a ligação dos ECD fusionados com Fc de ILDRl, C10RF32 e AI216611 a células CD4+. EXEMPLO 14 EFEITO DAS PROTEÍNAS FUSIONADAS COM FC DOS ECD NA ATIVAÇÃO DE LINFÓCITOS T.

Com a finalidade de submeter a ensaio a atividade co-estimuladora ou/e co-inibidora das proteínas de tipo B7, foi submetida a ensaio o efeito dos ECD de VSIG1, ILDRl, LOC253012, AI216611 ou C10RF32 fusionados com Fc de IgG2 de ratinho em proliferação de linfócitos T. Os linfócitos T foram purificados a partir de sangue completo por meio de seleção positiva usando microcontas de CD3 (microcontas conjugadas com anticorpos monoclonais CD3 anti-humanos (isotipo: IgG2a de ratinho) (Microcontas de CD3 de Sangue completo de MACS N° 130-090-874). As Dinacontas são revestidas com CD3 +/- B7 com Dinacontas de Epoxi M-450 (Invitrogen N° de cat 140,11) . Para a ativação dos linfócitos T de CD3, os linfócitos T de CD3 purificados são estimulados com as contas revestidas com CD3 + CD28 a uma relação de 1:1 ou 1:05 para diversos pontos temporais se for necessário. As células cultivaram-se a 2 x 10e5 por poço em presença ou ausência de contas revestidas com CD3 + CD28 (2 ug/ml cada uma) e a proliferação celular foi medido depois de 72 horas por meio de incorporação de trítio-timidina. Os resultados são mostrados na Figura 67. "CD3" na Figura 67 refere-se a CD3 somente sem a presença de uma molécula co-estimuladora ou co-inibidora; "CD3 + B7,2" refere-se a CD3 + um controlo de estimulador de B7 conhecido, B7,2; "CD3 + B7H4" refere-se a CD3 e B7H4 um controlo inibidor de B7 conhecido; "CD3 + B7H3" refere-se a CD3 e B7H3 uma proteína simuladora de B7 conhecida; "CD3 + 702" refere-se a CD3 + LOC253012-ECD-fusionado com Fc (SEQ ID N° : 106); "CD3 + 721" refere-se a CD3 + AI216611- ECD-fusionado com Fc (SEQ ID N°: 104); "CD3 + 754" refere-se a CD3 + C10RF32-ECD-fusionado com Fc (SEQ ID N°: 105); "CD3 + 768" refere-se a CD3 + VSIGl-ECD-fusionado com Fc (SEQ ID N°: 108) "CD3 + 770" refere-se a CD3 + ILDRl-ECD-fusionado com Fc (SEQ ID N° : 107); "CD3 + 789" refere-se a CD3 + FXYD3-ECD-fusionado com Fc (SEQ ID N°: 103). EXEMPLO 15

INTERAÇÃO DAS PROTEÍNAS FUSIONADAS COM ECD-FC COM LINHAS

CELULARES DE LINFOMA DERIVADAS DE LINFÓCITOS B EM REPOUSO, LINFÓCITOS B ATIVADOS, E LINFÓCITOS B

Depois da demostração da ligação das proteínas a linfócitos (Exemplo 12 e 13, no presente documento), examinou-se a capacidade das proteínas solúveis para ligar-se a linfócitos B.

Prepararam-se PBMC a partir de sangue periférica humana, em tampão FACS a 1 x 10e7/ ml. Adicionou-se bloqueador de Fc (hlgG (16D10), N° de lote 080706, 1,3 mg/ml) a 30 yg/ml e as células foram incubadas com o bloqueador em gelo durante 30 min. Adicionaram-se proteínas de fusão ILDRl-ECD-Fc (SEQ ID N°: 107), C10RF32-ECD-Fc (SEQ ID N°: 105), AI216611-ECD-Fc (SEQ ID N°: 104), LOC253012-ECD-Fc (SEQ ID N° : 106), FXYD3-ECD-Fc (SEQ ID N°: 103), e VSIGl-ECD-Fc (SEQ ID N°: 108) a 1 yg/10e6 por coloração em gelo durante 30 minutos. O 2o Ab adicionou-se a 1 yg/100 μΐ/coloração durante 25-30 min (G@mIgG-Fc-FITC: Jackson

Immunol Lab, 1 mg/ml, N° de código 115-096-071, N° de lote 71453, 1,0 mg/ml, usado a 1 ug/coloração). As células foram lavadas com o tampão em cada etapa como foi resumido anteriormente. A ligação foi analisada por citometria de fluxo. Depois disto as células foram coradas com IgM-PE ©humano de ratinho (BD Bioscience. CA. EUA, N° de cat 555783) que é específico para linfócitos B. As células coradas foram analisadas por meio de citometria de fluxo. As células positivas para IgM ©humana foram selecionadas para analisar a união das proteínas de fusão da invenção aos linfócitos B.

Tal como se mostra na Figura 68A, ILDRl-ECD-Fc e C10RF32-ECD-Fc ligam-se a linfócitos B dos 3 dadores submetidos a ensaio. Al216611-ECD-Fc apresentava ligação a linfócitos B somente em 1 dador.

Com a finalidade de determinar a existência do homólogo em linfócitos B ativados, os PBMC foram ativados com LPS durante 72 horas com LPS. A partir deste momento, a união com as proteínas fusionadas com Fc dos ECD ILDRl-ECD-Fc (SEQ ID N°: 107), C10RF32-ECD-Fc (SEQ ID N°: 105), AI216611-ECD-FC (SEQ ID N° : 104), LOC253012-ECD-Fc (SEQ ID N°: 106), FXYD3-ECD-Fc (SEQ ID N°: 103), e VSIGl-ECD-Fc (SEQ ID N° : 108) realizou-se tal como foi descrito anteriormente, e as células foram coradas com anticorpos CD86-Cy5PE @humano de ratinho (BD Bioscience. CA. EUA, S, N° de cat 555659) e Θ CD19-PE humano de ratinho (BD Bioscience. CA. EUA). Os linfócitos B ativados foram definidos como população de células de CD19+/CD86+ dupla positiva.

Tal como se demonstra na Figura 68B, ILDRl-ECD-Fc (SEQ ID N° : 107), C10RF32-ECD-Fc (SEQ ID N° : 105) e AI216611-ECD-Fc (SEQ ID N° : 104) apresentavam união linfócitos B a ativados.

Com a finalidade de determinar a existência do homólogo em neoplasias de linfócitos B, a união das proteínas fusionadas com Fc dos ECD ILDRl-ECD-Fc (SEQ ID N° : 107), C10RF32-ECD-Fc (SEQ ID N° : 105), AI216611-ECD-Fc (SEQ ID N° : 104), LOC253012-ECD-Fc (SEQ ID N°: 106), FXYD3-ECD-Fc (SEQ ID N° : 103), e VSIGl-ECD-Fc (SEQ ID N° : 108) foi analisada em linhas celulares de linfoma de linfócitos B. Adquiriram-se células Raj i (N° da ATCC CCL-86) e Daudi (N° da ATCC CCL-213) na ATCC e mantiveram-se em RPMI + FBS a 10 %. As células foram coradas com proteína B7s ou controlos a 10 yg/ml e a partir deste momento com Fc de IgG anti-ratinho de cabra conjugado com FITC (Jackson Immunol Lab. NJ. EUA, N° de cat 115-096-071, N° de lote 71453) . A Figura 68C ilustra a ligação dos ECD fusionados com Fc das proteínas de tipo B7 (ILDRl-ECD-Fc (SEQ ID N°: 107), C10RF32-ECD-Fc (SEQ ID N° : 105), AI216611-ECD-Fc (SEQ ID N° : 104), LOC253012-ECD-FC (SEQ ID N° : 106), FXYD3-ECD-Fc (SEQ ID N° : 103), e VSIGl-ECD-Fc (SEQ ID N° : 108)) às linhas celulares de linfoma de linfócitos B. ILDRl-ECD-Fc (SEQ ID N°: 107) apresentava uma ligação clara a ambas linhas celulares de linfoma de linfócitos B. EXEMPLO 17

DESENVOLVIMENTO DE ANTICORPOS ANTI-VSIG1, ΑΝΤΙ-ILDRl, ANTI-LOC253 012, ANTI-AI216 611, ANTI-C10RF32 E ΑΝΤΙ-FXYD3 MONOCLONAIS DE RATINHO

Com a finalidade de submeter a ensaio a expressão de proteínas de tipo B7 em diferentes tecidos cancerígenos por meio de imunohistoquímica, foram desenvolvidos anticorpos monoclonais de ratinho específicos para os ECD fusionados com Fc das proteínas.

Desenvolvimento de anticorpos monoclonais de ratinho:

Imunizaram-se quatro grupos dos ratinhos Balb/c (3 ratinhos por grupo) com 4 proteínas dos ECD fusionados com Fc: VSIG1 (SEQ ID N° : 108), LOC253012 (SEQ ID N° : 106), C10RF32 (SEQ ID N° : 105) e FXYD3 (SEQ ID N° : 103). As imunizações foram realizadas 8 vezes a intervalos de uma semana em múltiplos locais, subcutâneos e intraperitoneais. Extraiu-se sangue aos ratinhos dez dias depois da 4a e a 8a imunizações. O soro foi identificado sistematicamente para título de anticorpos usando um protocolo de ELISA Direto que se descreve a seguir.

As placas para ELISA revestiram-se com 50 μΐ/poço de 2,5 yg/ml de proteínas fusionadas com Fc (ECD de VSIG1, LOC253012, C10RF32, FXYD3 fusionados com Fc de IgG2 de ratinho, SEQ ID N° : 108, 106, 105, 103, respetivamente) diluídos em DPBS durante 1 hora a temperatura ambiente (TA). A IgG humana fusionada com a região Fc de ratinho foi usada como um controlo negativo. Depois disto, as placas foram bloqueadas com 300 μΐ/poço de BSA/DPBS a 1 % durante 15 min a TA. Depois da etapa de bloqueio, os soros diluídos em série de ratinhos imunizados e a IgG de ratinho irrelevante foram transferidos às placas para ELISA bloqueadas e foram incubados durante 1 hora a TA. A seguir, as placas foram lavadas 3 vezes com 300 μΐ/poço de tampão de lavagem (DPBS com Tween 20 a 0,05 %, pH 7,2 - 7,4) . Para a deteção, as placas foram incubadas durante 1 hora a TA com 50 yl/poço de Anticorpo de Cadeia Leve Capa anti-Ratinho de Cabra com diluição a 1:1000 seguido de um lavagem extenso (6 vezes com 300 yl/poço de tampão de lavagem) e incubação com o substrato. O substrato, ácido 2,2'-azino-bis- (3-etilbenzotiazolina-6-sulfónico (ABTS), a 100 yl/poço foi adicionado e incubado durante aproximadamente 5 min a TA antes da leitura das placas a 414 nm usando um leitor de placas SPECTRAmax 340 PC de Molecular Devices e o software SOFTmax PRO. O título de anticorpo em soro foi definido como a diluição do soro que produz um sinal que era duas vezes a do fundo.

Os resultados do ensaio de ELISA dos soros imunizados depois de 4 imunizações são sumarizados no Quadro 140. Os dados mostram que depois de 4 imunizações, 2 grupos de ratinhos (imunizados com ECD de proteínas fusionadas com Fc de LOC253012 e VSIG1) desenvolveram títulos de anticorpos suficientes para produção de hibridoma.

Os ratinhos, que apresentavam os títulos de soro de anticorpo mais elevados, foram selecionados para produção de hibridoma. Os esplenócitos foram fusionados com a linha celular Ag8,653 de mieloma de ratinho. O sobrenadante dos clones de hibridoma foi submetido a ensaio por meio de ELISA direto (como foi descrito anteriormente) usando placas revestidas com revestimentos relevantes e irrelevantes. Os resultados são sumarizados no Quadro 141A e Quadro 141B.

Os resultados demonstram que a produção de linhas celulares de linhas celulares de hibridoma teve como resultado 14 clones que reconhecem especificamente LOC253012 (Quadro 141A, em negrito) e 14 clones que reconhecem especificamente VSIG1 (Quadro 141B, em negrito).

Para o resíduo das proteínas, foram realizadas quatro imunizações adicionais com a finalidade de facilitar o desenvolvimento dos títulos de anticorpo em soro para o resíduo das proteínas. Os títulos em soros depois da 8a imunização foram submetidos a ensaio por meio de ELISA direto. Os resultados são sumarizados no Quadro 142. Os resultados demonstram que depois das 8 imunizações, os ratinhos imunizados com ECD de FXYD fusionado com Fc (SEQ ID N° : 103) e ECD de C10RF32 fusionado com Fc (SEQ ID N° : 103) desenvolveram suficientes títulos de anticorpos para produção de hibridoma. Na seguinte etapa, os melhores respondedores serão selecionados para produção de hibridoma e fabrico de anticorpo monoclonal.

Os Anticorpos Monoclonais para cada um dos antigénios (VSIG1, LOC253012, C10RF32, FXYD3, AI216611 e ILDRl, SEQ ID N° : 108, 106, 105, 103, 104 e 107, respetivamente) são usados para análise de Imunohistoquímica para verificar o perfil de expressão destas proteínas putativas em cancro tecidos saudáveis.

Análise imunohistoquímica A imunohistoquímica permite a visualização (usando microscópio de luz ou confocal) da distribuição do tecido de antigénios específicos (ou epítopos). 0 método localiza alvos de proteínas de interesse por meio da aplicação de anticorpos monoclonais ou policlonais específicos para superfícies de tecido num método denominado incubação de anticorpo.

Este método envolve a deteção de um substrato in situ em células fixas por meio de anticorpos específicos para o substrato. Os anticorpos específicos para o substrato podem ser unidos com enzimas ou podem ser unidos a fluoróforos. A deteção é realizada com microscópio e avaliação subjetiva. Se forem usados anticorpos ligados a enzimas, pode ser necessária uma reação colorimétrica. A análise imunohistoquímica realizada para os antigénios (VSIG1, LOC253012, C10RF32, FXYD3, AI216611 e ILDRl, SEQ ID N°: 108, 106, 105, 103, 104 e 107, respetivamente) consiste em duas fases:

Fase I: Calibração do anticorpo: É realizada uma série de diluições de cada um dos anticorpos desenvolvidos contra os antigénios específicos de proteína usando tecidos de controlo selecionados embebidos em parafina e fixos com formalina (FFPE) e linhas celulares. O melhor rendimento do anticorpo seleciona-se para a Fase II.

Fase II: Distribuição de proteína e análise de localização: Usando a concentração ótima de anticorpo selecionada na Fase I, a distribuição e a localização das proteínas VSIG1, LOC253012, C10RF32, FXYD3, AI216611 e ILDRl são analisadas em Arranjos de Tecido que consistem em tecidos de cancro e tecidos saudáveis, buscando a expressão diferencial em algumas das amostras de cancro, em comparação com as amostras saudáveis. EXEMPLO 17

DESENVOLVIMENTO DE ANTICORPOS ANTI-VSIG1, ΑΝΤΙ-ILDRl, ANTI-LOC253 012, ANTI-AI216 611, ANTI-C10RF32 E ΑΝΤΙ-FXYD3 TOTALMENTE HUMANOS

Geração de Anticorpos Monoclonais Humanos Contra Antigénio de VSIGl, ILDRl, LOC253012, AI216611, C10RF32 e FXYD3

As proteínas de fusão compostas pelo domínio extracelular dos VSIGl, ILDRl, LOC253012, AI216611, C10RF32 e FXYD3 unidos a um polipéptido de Fc de IgG2 de ratinho são geradas por meio de métodos recombinantes convencionais e são usadas como antigénios para imunização.

Ratinho HuMab Transgénico.

Os anticorpos monoclonais totalmente humanos para VSIGl, ILDRl, LOC253012, AI216611, C10RF32 e FXYD3 são preparados usando ratinhos a partir da estirpe HCo7 do Ratinho HuMab transgénico. RTM., que expressa genes de anticorpo humano. Nesta estirpe de ratinho, o gene endógeno da cadeia leve capa de ratinho foi alterado de forma homozigota tal como é descrito em Chen et al. (1993) EMBO J. 12: 811-820 e o gene endógeno da cadeia pesada de ratinho foi alterado de forma homozigota tal como é descrito no Exemplo 1 da Publicação PCT do documento de patente WO 01/09187. Além disso, esta estirpe de ratinho porta um transgene humano de cadeia leve capa, KCo5, tal como é descrito em Fishwild et al. (1996) Nature Biotechnology 14: 845-851, e um transgene humano de cadeia pesada, HCo7, tal como é descrito nos documentos de Patente dos Estados Unidos com números 5.545.806; 5.625.825; e 5.545.807.

Imunizações Humanas:

Para gerar anticorpos monoclonais totalmente humanos para VSIG1, ILDRl, LOC253012, AI216611, C10RF32 e FXYD3, tomam-se ratinhos do ratinho HuMab de HCo7. RTM. (a estirpe pode ser imunizada com proteína de fusão de VSIG1 recombinante purificada derivada de células de mamífero que são transfetadas com um vetor de expressão que contém o gene que codifica a proteína de fusão. Os esquemas gerais de imunização para o ratinho HuMab. RTM. são descritos em Lonberg, N. e col (1994) Nature 368 (6474): 856-859; Fishwild, D. et al. (1996) Nature Biotechnology 14: 845-851 e Publicação PCT do documento de patente WO 98/24884. Os ratinhos têm 6-16 semanas de idade depois da primeira infusão de antigénio. Usa-se uma preparação de antigénio VSIGl recombinante purificado (5-50 yg, purificado a partir de células de mamífero transfetadas que expressam proteína de fusão de VSIGl) para imunizar os ratinhos HuMab por via intraperitoneal.

Os ratinhos transgénicos imunizam-se duas vezes com antigénio em adjuvante completo de Freund ou adjuvante IP de Ribi, seguido de 3-21 dias de IP (até um total de 11 imunizações) com o antigénio em adjuvante incompleto de Freund ou Ribi. A resposta imune é controlada por meio de sangramentos retroorbitais. O plasma é identificado sistematicamente por ELISA (como é descrito a seguir), e os ratinhos com suficientes títulos de imunoglobulina humana anti- VSIGl são usados para fusões. Os ratinhos são estimulados por via intravenosa com antigénio 3 dias antes de sacrificá-los e extrair o baço.

Seleção de ratinhos HuMab.TM. que produzem anticorpos Anti-VSIG1, ILDRl, LOC253012, AI216611, C10RF32 e FXYD3:

Para selecionar ratinhos HuMab.TM. que produzem anticorpos que se ligam a VSIG1, ILDRl, LOC253012, AI216611, C10RF32 ou FXYD3, os soros de ratinhos imunizados são submetidos a ensaio por meio de um ELISA modificado tal como é descrito originalmente em Fishwild, D. et al. (1996). Em resumo, as placas de microtitulação são revestidas com proteína de fusão VSIG1 recombinante purificada a 1-2. yg/ml em PBS, 50 μΐ/poços incubados a 4 graus C. durante a noite e a seguir bloqueadas com 200 μΐ/poço de BSA a 5 % em PBS. As diluições de plasma de ratinhos imunizados com VSIG1, ILDRl, LOC253012, AI216611, C10RF32 ou FXYD3 adicionam-se a cada poço e incubam-se durante 1-2 horas a temperatura ambiente. As placas são lavadas com PBS/Tween e a seguir incubadas com um anticorpo policlonal de cadeia leve capa de cabra anti-humano conjugado com fosfatase alcalina durante 1 hora a temperatura ambiente. Depois da lavagem, as placas desenvolvem-se com substrato pNPP e analisam-se por meio de espetrofotómetro a DO 415-650. Os ratinhos que desenvolveram os títulos mais elevados de anticorpos anti-VSIG1, anti-ILDRl, antÍ-LOC253012, anti-Al216 611, antiC10RF32 ou anti-FXYD3 são usados para fusões. As fusões realizam-se como é descrito a seguir e os sobrenadantes de hibridoma são submetidos a ensaio para atividade de anti-VSIG1, anti-ILDRl, antÍ-LOC253012, anti-Al216611, anti-C10RF32 ou anti-FXYD3 por meio de ELISA.

Geração de Hibridomas que produzem anticorpos monoclonais humanos para VSIG1, ILDRl, LOC253012, AI216611, C10RF32 ou FXYD3

Os esplenócitos de ratinho, isolados dos ratinhos HuMab, são fusionados com PEG a uma linha celular de mieloma de ratinho com base em protocolos convencionais. A seguir, os hibridomas resultantes são identificados sistematicamente para a produção de anticorpos específicos de antigénio. As suspensões de células individuais de linfócitos esplénicos de ratinhos imunizados são fusionadas até um quarto do número de células de mieloma de ratinho de não secreção P3X63 Ag8.6.53 (ATCC CRL 1580) com PEG a 50 % (Sigma). As células são cultivadas aproximadamente 1 X 10-5 /poço e, placa de titulação de fundo plano, seguido de aproximadamente duas semanas de incubação em meio seletivo que contém soro bovino fetal a 10 %, complementado com origem (IGEN) em RPMI, L-glutamina, piruvato de sódio, HEPES, penicilina, estreptomicina, gentamicina, lx HAT, e beta-mercaptoetanol. Depois de 1-2 semanas, as células são cultivadas em meio no qual o HAT é substituído com HT. A seguir, os poços individuais são identificados sistematicamente por meio de ELISA (descrito anteriormente) para anticorpos IgG monoclonais anti-VSIGl, anti-ILDRl, anti-LOC253012, anti-Al216611, anti-C10RF32 ou anti-FXYD3 humanos. Uma vez que se produz o crescimento do hibridoma extensivo, o meio é controlado normalmente depois de 10-14 dias. Os hibridomas que segregam anticorpo são cultivados de novo, identificados sistematicamente de novo e, se ainda forem positivos para IgG humana, os anticorpos monoclonais anti- VSIG1, anti-ILDRl, antÍ-LOC253012, anti-Al216611, anti-C10RF32 ou anti-FXYD3 são subclonados pelo menos duas vezes por meio de diluição limitativa. Os subclones estáveis são cultivados a seguir in vitro para gerar pequenas quantidades de anticorpo em meio de cultivo de tecido para caraterização adicional. São selecionados clones de hibridoma para análise adicional.

Caraterização estrutural de anticorpos monoclonais humanos anti- VSIG1, anti-ILDRl, anti-LOC253012, anti-AI216611, anti-C10RF32 ou anti-FXYD3 desejados

As sequências de ADNc que codificam as regiões variáveis de cadeia pesada e leve dos anticorpos monoclonais anti- VSIG1, anti-ILDRl, anti-LOC253012, anti-AI216611, anti-C10RF32 ou anti-FXYD3 obtidos são obtidos a partir dos hibridomas resultantes, respetivamente, usando técnicas convencionais de PCR e são sequenciados usando técnicas convencionais de sequenciação de ADN. São identificadas as sequências de nucleótidos e de aminoácidos da região variável de cadeia pesada e da região variável de cadeia leve. Estas sequências podem ser comparadas com sequências conhecidas de cadeia leve e pesada de imunoglobulina de linha germinal humana e são identificadas as CDR de cada cadeia pesada e leve das sequências obtidas anti- VSIG1, anti-ILDRl, anti-LOC253012, anti-Al216611, anti-C10RF32 ou anti-FXYD3.

Caraterização de especificidade de ligação e cinética de ligação de anticorpos monoclonais humanos anti-VSIGl, anti-ILDRl, anti-LOC253012, anti-Al216611, anti-C10RF32 ou anti-FXYD3 A afinidade de ligação, cinética de ligação, especificidade de ligação, e competição cruzada de anticorpos anti- VSIG1, anti-ILDRl anti-LOC253012, anti-AI216611, antiC10RF32 ou anti-FXYD3 são examinadas por meio de análise de Biacore. Além disso, a especificidade de ligação se examina por meio de citometria de fluxo. Afinidade e cinética de ligação São caraterizados anticorpos anti-C10RF32 produzidos de acordo com a invenção para afinidades e cinéticas de ligação por meio de análise de Biacore (Biacore AB,

Uppsala, Suécia). A proteina de fusão C10RF32 humana recombinante purificada é covalentemente ligada a um chip de CM5 (chip revestido com carboxi metil dextrano) através de aminas primárias, usando química convencional de acoplamento de amina e kit proporcionado por Biacore. A ligação é medida por meio de fluxo dos anticorpos em tampão HBS EP (proporcionado por BIAcore AB) a uma concentração de 267 nM a uma taxa de fluxo de 50 μΐ/min. A cinética de associação de anticorpos de associação a antigénio é continuada durante 3 minutos e a cinética de dissociação é continuada durante 7 minutos. As curvas de associação e dissociação ajustam-se a um modelo de ligação de Langmuir a 1:1 usando software BlAevaluation (Biacore AB). Para minimizar os efeitos de avidez na estimulação das constantes de união, para o ajuste somente é usado o segmento inicial de dados que se correspondem às fases de associação e dissociação.

Formação de mapas de epítopos de anticorpos anti-C10RF32 obtidos

Usa-se Biacore para determinar o agrupamento de epitopos de HuMAb anti-C10RF32. Os anticorpos anti-C10RF32 obtidos são usados para formar mapas de seus epitopos nos anticorpos do antigénio C10RF32 e são revestidos em três superficies diferentes do mesmo chip a 8000 RUs cada um. São feitas diluições dos mAb, começando a 10 yg/ml e incubam-se com C10RF32 fusionado com Fc (50 nM) durante uma hora. O complexo incubado é injetado nas três superficies (e uma superfície de referência) ao mesmo tempo durante 1,5 minutos a uma taxa de fluxo de 20 μΐ/min. O sinal de cada superfície ao final dos 1,5 minutos, depois da subtração das referências apropriadas, foi representado contra a concentração de mAb no complexo. Depois da análise dos dados, os anticorpos anti-C10RF32 são classificados em diferentes grupos de epítopos dependendo dos resultados da formação de mapas de epítopos. Também se comparam as propriedades funcionais dos mesmos.

Desenvolvem-se linhas celulares de ovário de hámster chinês (CHO) que expressam proteína C10RF32 na superfície celular e usam-se para determinar a especificidade dos HuMAb de C10RF32 por meio de citometria de fluxo. Transfetam-se células CHO com plasmídeos de expressão que contêm ADNc de comprimento completo que codifica uma forma de transmembrana de antigénio C10RF32 ou uma variante do mesmo. As proteínas transfetadas que contêm um marcador de epítopo na extremidade N são usadas para deteção por meio de um anticorpo específico para o epítopo. A ligação de um MAb anti-C10RF32 é avaliada por incubação das células aceites com os Ab de C10RF32 a uma concentração de 10 yg/ml. As células são lavadas e deteta-se a união com um Ab de IgG anti-humano marcado com FITC. Um Ab murino de marcador anti-epítopo, seguido de IgG anti-murina marcada, são usados como o controlo positivo. Usam-se Ab não específicos humanos e murinos como controlos negativos. Os dados obtidos são usados para avaliar a especificidade dos HuMAb para o alvo do antigénio C10RF32.

Estes anticorpos e outros anticorpos específicos para C10RF32 podem ser usados nas terapêuticas relacionadas com anti-C10RF32 que foram descritas anteriormente tais como tratamento de cancros no qual o antigénio C10RF32 é expresso de forma diferencial tal como cancro de pulmão, cancro de cólon e cancro de ovários e/ou para modulação (potenciação e inibição) da co-estimulação imune de B7 que envolve ao antigénio C10RF32 tal como no tratamento de cancros e doenças autoimunes no qual tais anticorpos por exemplo, evitarão a estimulação negativa da atividade dos linfócitos T contra células cancerígenas alvo desejadas ou evitarão a estimulação positiva da atividade dos linfócitos T provocando deste modo um efeito anti-autoimune desejado. A invenção foi descrita e formas de realização proféticas são proporcionadas em relação ao fabrico e seleção de anticorpos anti- C10RF32 desejados para utilização como métodos terapêuticos e de diagnóstico nos quais a doença ou afeção está associada ao antigénio C10RF32. A invenção é descrita agora adicionalmente por meio das reivindicações que se seguem.

LISTA DE SEQUÊNCIAS <110> Compugen Ltd

<120> POLIPÉPTIDOS E POLINUCLEÓTIDOS, E UTILIZAÇÕES DOS MESMOS COMO UM ALVO DE FÁRMACOS PARA PRODUZIR FÁRMACOS E AGENTES BIOLÓGICOS <130> <160> 302

<210> 1 <211> 3137 <212> ADN <213> Homo sapiens <4 0 0> 1 gtactgaaaa aagtctatac gcaataagta agcccaaaga ggcatgtttg cttggcgatg 60 cecagcagat aagccaggca aacctcggtg tgatcgaaga agccaatttg agactcagcc 120 tagtccaggc aagctaetgg cacctgctgc tctcaactaa cctccacaca atggtgttcg 180 cattttggaa ggtctttctg atcctaagct gccttgcagg tcaggttagt gtggtgcaag 240 tgaccatccc agacggtttc gtgaacgtga ctgttggatc taatgtcact ctcatctgca 300 tctacaccac cactgtggcc tcccgagaac agctttccat ccagtggtct ttcttccata 360 agaaggagat ggagccaatt tctatttact tttetcaagg tggacaagct gtagccatcg 420 ggcaatttaa agatcgaatt acagggtcca acgatccagg taatgcatct atcactatct 480 cgcatatgca gccagcagac agtggaattt acatctgcga tgttaacaac cccccagact 540 ttctcggcca aaaccaaggc atcctcaacg tcagtgtgtt agtgaaacct tctaagcccc 600 tttgtagcgt tcaaggaaga ccagaaactg gccacactat ttccctttcc tgtctctctg 660 cgcttggaac accttcccct gtgtactact ggcataaact tgagggaaga gacatcgtgc 720 cagtgaaaga aaacttcaac ccaaccaccg ggattttggt cattggaaat ctgacaaatt 780 ttgaacaagg ttattaccag tgtactgcca tcaacagact tggcaatagt tcctgcgaaa 840 tcgatctcac ttcttcacat ccagaagttg gaatcattgt tggggccttg attggtagcc 900 tggtaggtgc cgccatcatc atctctgttg tgtgcttcgc aaggaataag gcaaaagcaa 960 aggcaaaaga aagaaattct aagaccatcg cggaacttga gccaatgaca aagataaacc 1020 caaggggaga aagcgaagca atgccaagag aagacgctac ccaactagaa gtaactctac 1080 catcttccat tcatgagact ggccctgata ccatccaaga accagactat gagccaaagc 1140 ctactcagga gcctgcccca gagcctgecc caggatcaga gcctatggca gtgcctgacc 1200 ttgacatcga gctggagctg gagccagaaa cgcagtcgga attggagcca gagccagagc 1260 cagagccaga gtcagagcct ggggttgtag ttgagccctt aagtgaagat gaaaagggag 1320 tggttaaggc ataggctggt ggcctaagta cagcattaat cattaaggaa cccattactg 1380 ccatttggaa ttcaaataac ctaaccaacc tccacctcct ccttccattt tgaccaacct 1440 tettetaaca aggtgctcat tcctactatg aatccagaat aaacacgcca agataacagc 1500 taaatcagca agggttcctg tattaccaat atagaatact aacaatttta ctaacacgta 15 SO agcataacaa atgacagggc aagtgatttc taacttagtt gagttttgca acagtacctg 1620 tgttgttatt tcagaaaata ttatttctct ctttttaact actctttttt tttattttgg 1680 acagagtctt gctccgtcgc gcaggctgtg atcgtagtgg tgcgatctcg gctcactgca 1740 gcctccgctc cctgggttca agcgattctc ctgcctgagc ctcctgagta gctgggactg 1800 caggcacgtg ccaccacgcc cggctaattt tttgtatttt tagtagagat ggggtttcac 1860 gttgttggcc aggatggtct ccatctcctg acctcatgat ccgcccacct tggcctccca 1920 aaatgctggg attacaggca tgagccactg cgcccggcct ctttttagct actcttatgt 1980 tccacatgoa catatgacaa ggtggcatta attagattca atattatttc taggaatagt 2040 tcetcattca tttttatatt gaccactaag aaaataatte atcageatta tcteatagat 2100 tggaaaattt tctccaaata caatagagga gaatatgtaa agggtataca ttaattggta 2160 cgtagcattt aaaatcaggt cttataatta atgcttcatt cctcatatta gatttcccaa 2220 gaaatcaccc tggtatccaa tatctgagca tggcaaattt aaaaaataac acaatttctt 2280 gcctgtaacc ctagcacttt gggaggccga ggcaggtgga tcacctgagg tcaggagttc 2340 gagaccagcc tggccggcat ggcgaaaccc cttctctgct gaaaatacag aaattagctg 2400 ggcgtggtgg tgcatgcctg tagtcccagc tacttgggag gctgaggcag gagaatcgct 2460 tgaacocagg aggtggaggt tgcagtgagc cgagattgtg ccactgcact ccaacctggg 2520 tgacagagtg agattccatc tgaaaaacaa aaacaaaaac agaaaacaaa caaacaaaaa 2580 acaaaaaatc cccacaactt tgtcaaataa tgtacaggca aacactttca aatataattt 2640 ccttcagtga atacaaaatg ttgatatcat aggtgatgta caatttagtt ttgaatgagt 2700 tattatgtta tcactgtgtc tgatgttatc tactttgaaa ggcagtccag aaaagtgttc 2760 taagtgaact cttaagatct attttagata atttcaacta attaaataac ctgttttact 2820 gcctgtacat tccacattaa taaagcgata ccaatcttat atgaatgcta atattactaa 2880 aatgcactga tatcacttct tcttcccctg ttgaaaagct ttctcatgat catatttcac 2940 ccacatctca ccttgaagaa acttacaggt agacttacct tttcacttgt ggaattaatc 3000 atatttaaat cttactttaa ggctcaataa ataatactca taatgtctca ttttagtgac 3060 tcctaaggct agtcctttta taaacaactt tttctgacat agcatttatg tataataaac 3120 cagacattta aagtgta 3137

<210> 2 <211> 3049 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 2 gtactgaaaa aagtctatac gcaataagta agcccaaaga ggcatgtttg cttggcgatg 60 cccagcagat aagccaggca aacctcggtg tgatcgaaga agccaatttg agactcagcc 120 tagtccaggc aagctactgg cacctgctgc tctcaactaa cctccacaca atggtgttcg 180 cattttggaa ggtctttctg atcctaagct gccttgcagg tcaggttagt gtggtgcaag 240 tgaccateec agacggtttc gtgaacgtga ctgttggatc taatgtcact ctcatctgca 300 tctacaccac cactgtggcc tcccgagaac agctttccat ccagtggtct ttcttccata 360 agaaggagat ggagccaatt tctatttact tttctcaagg tggacaagct gtagccatcg 420 ggcaatttaa agatcgaatt acagggtcca acgatccagg taatgcatct atcactatct 480 cgeatatgca gccagcagac agtggaattt acatctgcga tgttaacaac cccccagact 540 ttctcggcca aaaccaaggc atcctcaacg tcagtgtgtt agtgaaacct tctaagcccc 600 tttgtagcgt tcaaggaaga ccagaaactg gccacactat ttccctttcc tgtctctctg 660 cgcttggaac accttcccct gtgtactact ggcataaact tgagggaaga gacatcgtgc 720 cagtgaaaga aaacttcaac ccaaccaccg ggattttggt cattggaaat ctgacaaatt 780 ttgaacaagg ttattaccag tgtactgcca tcaacagact tggcaatagt tcctgcgaaa 840 tcgatctcac ttcttcacat ccagaagttg gaatcattgt tggggccttg attggtagcc 900 tggtaggtgc cgccatcatc atctctgttg tgtgcttcgc aaggaataag gcaaaagcaa 960 aggcaaaaga aagaaattct aagaccatcg cggaacttga gccaatgaca aagataaacc 1020 caaggggaga aagcgaagca atgccaagag aagacgctac ccaactagaa gtaactctac 1080 catcttccat tcatgagact ggccctgata ccatccaaga accagactat gagccaaagc 1140 ctactcagga gcctgcccca gagcctgccc caggatcaga gcctatggca gtgcctgacc 1200 ttgacatcga gctggagctg gagccagaaa cgcagtcgga attggagcca gagccagagc 1260 cagagccaga gtcagagcct ggggttgtag ttgagccctt aagtgaagat gaaaagggag 1320 tggttaaggc ataggctggt ggcctaagta cagcattaat cattaaggaa cccattactg 1380 ccatttggaa ttcaaataac ctaaccaacc tccacctcct ccttccattt tgaccaacct 1440 tcttctaaca aggtgctcat tcctactatg aatccagaat aaacacgcca agataacagc 1500 taaatcagca agggttcctg tattaccaat atagaatact aacaatttta ctaacacgta 1560 agcataacaa atgacagggc aagtgatttc taacttagtt gagttttgca acagtacctg 1620 tgttgttatt tcagaaaata ttatttctct ctttttaact actctttttt tttattttgg 1680 acagagtctt gctccgtcgc gcaggctgtg atcgtagtgg tgcgatctcg gctcactgca 1740 gcctccgctc cctgggttca agcgattctc ctgcctgagc ctcctgagta gctgggactg 1800 caggcacgtg ccaccacgcc cggctaattt tttgtatttt tagtagagat ggggtttcac 1860 gttgttggcc aggatggtct ccatctcctg acctcatgat ccgcccacct tggcctccca 1920 aaatgctggg attacaggca tgagccactg cgcccggcct ctttttagct actcttatgt 1980 tccacatgca catatgacaa ggtggcatta attagattca atattatttc taggaatagt 2040 tcctcattca tttttatatt gaccactaag aaaataattc atcagcatta tctcatagat 2100 tggaaaattt tctccaaata caatagagga gaatatgtaa agggtataca ttaattggta 2160 cgtagcattt aaaatcaggt cttataatta atgcttcatt cctcatatta gatttcccaa 2220 gaaatcaccc tggtatccaa tatctgagca tggcaaattt aaaaaataac acaatttctt 2280 gcctgtaacc ctageacttt gggaggccga ggcaggtgga tcacctgagg tcaggagttc 2340 gagaccagcc tggccggcat ggcgaaaccc cttctctgct gaaaatacag aaattagctg 2400 ggcgtggtgg tgcatgcctg tagtcccagc tacttgggag gctgaggcag gagaatcgct 2460 tgaacccagg aggtggaggt tgcagtgagc cgagattgtg ccactgcact ccaacctggg 2520 tgacagagtg agattccatc tgaaaaacaa aaacaaaaac agaaaacaaa caaacaaaaa 2580 acaaaaaatc cccacaactt tgtcaaataa tgtacaggca aacactttca aatataattt 2640 ccttcagtga atacaaaatg ttgatatcat aggtgatgta caatttagtt ttgaatgagt 2700 tattatgtta tcactgtgtc tgatgttatc tactttgaaa ggcagtccag aaaagtgttc 2760 taagtgaact cttaagatct attttagata atttcaacta attaaataac ctgttttact 2820 gcctgtacat tccacattaa taaagcgata ccaatcttat atgaatgcta atattactaa 2880 aatgcactga tatcacttct tcttcccctg ttgaaaagct ttctcatgat catatttcac 2940 ccacatctca ccttgaagaa acttacaggt agacttacct tttcacttgt ggaattaatc 3000 atatttaaat cttactttaa ggctcaataa ataatactca taatgtctc 3049

<210> 3 <211> 2448 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 3 tacaggcatg agccactgcg cccggcctct ttfctagctac tcttatgfctc cscatgeaca 2100 tatgacaagg tggcatta&t tagatteaafc atfcattteta ggaatagtte efccattcatt 2160 tttatattga ccactaagaa aataattcat cagcattatc ccatagattg gaaaattttc 2220 tccaaaiaca atagaggaga atatgtaaag ggtatacatt aattggtacg tagcatttaa 2200 aatcaggtct tataattaat gctteattee teatattags tttcccaaga aataacectg 2340 gtatccaata tctgagcatg gcaaatttaa aaaataacac aatttcttgc ctgtaaocct 2400 sgcaetttgg gaggeegagg caggtggatc aectgaggtc aggagttega gaccagcctg 2400 geeggeatgg cgaaacccct tctctgctga aaatacagaa attagctggg cgtggtggtg 2520 eatgcctgta gtcceagcta cttgggagge tgaggsagga gaatcgcttg aacceaggag 2580 gtggaggttg cagtgagccg agattgtgcc actgcactcc aacctgggtg acagagtgag 2640 attccatctg aaaaacaaaa acaaaaacag aaaacaaaca aacaaaaaac aaaaaatccc 2700 cacaactttg tcaaataatg tacaggcaaa cactttcaaa tataatttcc ttcsgtgaat 2760 acaaaatgtt gatatcatag gtgatgtaca atttagtttt gaatgagtta ttatgttatc 2820 actgtgtctg atgttatcta ctttgaaagg cagtccagaa aagtgttcta agtgaactct 2880 taagatctát tttagataat ttcaactaat taaataacct gttttactgc ctgtacattc 2940 cacattaata aagcgatacc aatettatat gaatgctaat attactaaaa tgcactgata 3000 tcacttcttc ttcccctgtt gaaaagcttt ctcatgatca tatttcaccc acatctcacc 3060 ttgaagaaac ttaeaggtag acttaccttt tcacttgtgg aattaatcat atttaaatct 3120 taetttaagg ctcaataaat aatactcata atgtctcatt ttagtgacto etaaggetag 3180 tccttttata aacaactttt tcfcgacatag catttatgta taataaacca gacatttaaa 3240 gtgta 3245 gtactgaaaa aagtctatac gcaataagta agcccaaaga ggcatgtttg cttggcgatg 60 cccagcagat aagccaggca aacctcggtg tgatcgaaga agccaatttg agactcagcc 120 tagtccaggc aagctactgg cacctgctgc tctcaactaa cctccacaca atggtgttcg 180 cattttggaa ggtctttctg atcctaagct gccttgcagg tcaggttagt gtggtgcaag 240 tgaccatccc agacggtttc gtgaacgtga ctgttggatc taatgtcact ctcatctgca 300 tctacaccac Gactgtggcc tcccgagaac agctttccat ccagtggtct ttcttccata 360 agaaggagat ggagccaatt tctatttact tttctcaagg tggacaagct gtagccatcg 420 ggcaatttaa agatcgaatt acagggtcca acgatccagg taatgcatct atcactatct 480 cgcatatgca gccagcagac agtggaattt acatctgcga tgttaacaac cccccagact 540 ttctcggcca aaaccaaggc atcctcaacg tcagtgtgtt agtgaaacct tctaagcccc 600 tttgtagcgt tcaaggaaga ccagaaactg gccacactat ttccctttcc tgtctctctg 660 cgcttggaac accttcccct gtgtactact ggcataaact tgagggaaga gacatcgtgc 720 cagtgaaaga aaacttcaac ccaaccaccg ggattttggt cattggaaat ctgacaaatt 780 ttgaacaagg ttattaccag tgtactgcca tcaacagact tggcaatagt tcctgcgaaa 840 tcgatctcac ttcttcacat ccagaagttg gaatcattgt tggggccttg attggtagcc 900 tggtaggtgc cgccatcatc atctctgttg tgtgcttcgc aaggaataag gcaaaagcaa 960 aggcaaaaga aagaaattct aagaccatcg cggaacttga gccaatgaca aagataaacc 1020 caaggggaga aagcgaagca atgccaagag aagacgctac ccaactagaa gtaactctac 1080 catcttccat tcatgagact ggccctgata ccatccaaga accagactat gagccaaagc 1140 ctactcagga gcctgcccca gagcctgccc caggatcaga gcctatggca gtgcctgacc 1200 ttgacatcga gctggagctg gagccagaaa cgcagtcgga attggagcca gagccagagc 1260 cagagccaga gtcagagcct ggggttgtag ttgagccctt aagtgaagat gaaaagggag 1320 tggttaaggc ataggctggt ggcctaagta cagcattaat cattaaggaa cccattactg 1380 ccatttggaa ttcaaataac ctaaccaacc tccacctcct ccttccattt tgaccaacct 1440 tcttctaaca aggtgctcat tcctactatg aatccagaat aaacacgeca agataacagc 1500 taaatcagca agggttcctg tattaccaat atagaatact aacaatttta ctaaoacgta 1560 agcataacaa atgacagggc aagtgatttc taacttagtt gagttttgca acagtacctg 1620 tgttgttatt tcagaaaata ttatttctct ctttttaact actctttttt tttattttgg 1680 acagagtctt gctccgtcgc gcaggctgtg atcgtagtgg tgcgatctcg gctcactgca 1740 gcctccgctc cctgggttca agagaatcgc ttgaacccag gaggtggagg ttgcagtgag 1800 ccgagattgt gccactgcac tccaacctgg gtgacagagt gagattccat ctgaaaaaca 1860 aaaacaaaaa cagaaaacaa acaaacaaaa aacaaaaaat ccccacaact ttgtcaaata 1920 atgtacaggc aaacactttc aaatataatt tccttcagtg aatacaaaat gttgatatca 1980 taggtgatgt acaatttagt tttgaatgag ttattatgtt atcactgtgt ctgatgttat 2040 ctactttgaa aggcagtcca gaaaagtgtt ctaagtgaac tcttaagatc tattttagat 2100 aatttcaact aattaaataa cctgttttac tgcctgtaca ttccacatta ataaagcgat 2160 accaatctta tatgaatgct aatattacta aaatgcactg atatcacttc ttcttcccct 2220 gttgaaaagc tttctcatga tcatatttca cccacatctc accttgaaga aaottacagg 2280 tagacttacc ttttcacttg tggaattaat catatttaaa tcttacttta aggctcaata 2340 aataatactc ataatgtctc attttagtga ctcctaaggc tagtcctttt ataaacaact 2400 ttttctgaca tagcatttat gtataataaa ccagacattt aaagtgta 2448

<210> 4 <211> 2368 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 4 gtactgaaaa aagtctatac gcaataagta agcccaaaga ggcatgtttg cttggcgatg 60 cccagcagat aagccaggca aacctcggtg tgatcgaaga agccaatttg agactcagcc 120 tagtccaggc aagctactgg cacctgctgc tctcaactaa cctccacaca atggtgttcg 180 cattttggaa ggtctttctg atcctaagct gccttgcagg tcaggttagt gtggtgcaag 240 tgaccatccc agacggtttc gtgaacgtga ctgttggatc taatgtcact ctcatctgca 300 tctacaccac cactgtggcc tcccgagaac agctttocat ccagtggtct ttcttccata 360 agaaggagat ggagccaatt tctatttact tttctcaagg tggacaagct gtagccatcg 420 ggcaatttaa agatcgaatt acagggtcca acgatccagg taatgcatct atcactatct 480 cgcatatgca gccagcagac agtggaattt acatctgcga tgttaacaac cccccagact 540 ttctcggcca aaaccaaggc atcctcaacg tcagtgtgtt agtgaaacct tctaagcccc 600 tttgtagcgt tcaaggaaga ccagaaactg gccacactat ttccctttcc tgtctctctg 660 cgcttggaac accttcccct gtgtactact ggcataaact tgagggaaga gacatcgtgc 720 cagtgaaaga aaacttcaac ccaaccaccg ggattttggt cattggaaat ctgacaaatt 780 ttgaacaagg ttattaccag tgtactgcca tcaacagact tggcaatagt tcctgcgaaa 840 tcgatctcac ttcttcacat ccagaagttg gaatcattgt tggggccttg attggtagcc 900 tggtaggtgc cgccatcatc atctctgttg tgtgcttcgc aaggaataag gcaaaagcaa 960 aggcaaaaga aagaaattct aagaccatcg cggaacttga gccaatgaca aagataaacc 1020 caaggggaga aagcgaagca atgccaagag aagacgctac ccaactagaa gtaactctac 1080 catcttccat tcatgagact ggccctgata ccatccaaga accagactat gagccaaagc 1140 ctactcagga gcctgcccca gagcctgccc caggatcaga gcctatggca gtgcctgacc 1200 ttgacatcga gctggagctg gagccagaaa cgcagtcgga attggagcca gagccagagc 1260 cagagccaga gtcagagcct ggggttgtag ttgagccctt aagtgaagat gaaaagggag 1320 tggttaaggc ataggctggt ggcctaagta cagcattaat cattaaggaa cccattactg 1380 ccatttggaa ttcaaataac ctaaccaacc tccacctcct ccttccattt tgaccaacct 1440 tettctaaca aggtgctcat tcctactatg aatccagaat aaacacgcca agataacagc 1500 taaatcagca agggttcctg tattaccaat atagaatact aacaatttta ctaacacgta 1560 agcataacaa atgacagggc aagtgatttc taacttagtt gagttttgca acaçrtacctg 1620 tgttgttatt tcagaaaata ttatttctct ctttttaact actctttttt tttattttgg 1680 acagagtcgc ttgaacccag gaggtggagg ttgcagtgag ccgagattgt gccactgcac 1740 tccaacctgg gtgacagagt gagattccat ctgaaaaaca aaaacaaaaa cagaaaacaa 1800 acaaacaaaa aacaaaaaat ccccacaact ttgtcaaata atgtacaggc aaacactttc 1360 aaatataatt tccttcagtg aatacaaaat gttgatatca taggtgatgt acaatttagt 1920 tttgaatgag ttattatgtt atcactgtgt ctgatgttat ctactttgaa aggcagtcca 1980 gaaaagtgtt ctaagtgaac tcttaagatc tattttagat aatttcaact aattaaataa 2040 cctgttttac tgcctgtaca ttccacatta ataaagcgat accaatctta tatgaatgct 2100 aatattacta aaatgcactg atatcacttc ttcttcccct gttgaaaagc tttctcatga 2160 tcatatttca cccacatctc accttgaaga aacttacagg tagacttacc ttttcacttg 2220 tggaattaat catatttaaa tcttacttta aggctcaata aataatactc ataatgtctc 2280 attttagtga ctcctaaggc tagtcctttt ataaacaact ttttctgaca tagcatttat 2340 gtataataaa ccagacattt aaagtgta 2368

<210> 5 <211> 1501 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 5 gtactgaaaa aagtctatac gcaataagta agcccaaaga ggcatgtttg cttggcgatg 60 cccagcagat aagccaggca aacctcggtg tgatcgaaga agccaatttg agactcagcc 120 tagtccaggc aagctactgg cacctgctgc tctcaactaa cctccacaca atggtgttcg 180 cattttggaa ggtctttctg atcctaagct gccttgcagg tcaggttagt gtggtgcaag 240 tgaccatccc agacggtttc gtgaacgtga ctgttggatc taatgtcact ctcatctgca 300 tctacaccac cactgtggcc tcccgagaac agctttccat ccagtggtct ttcttccata 360 agaaggagat ggagccaatt tctatttact tttctcaagg tggacaagct gtagccatcg 420 ggcaatttaa agatcgaatt acagggtcca acgatccagg taatgeatct atcactatct 480 cgcatatgca gccagcagac agtggaattt acatctgcga tgttaacaac cccccagact 540 ttctcggcca aaaccaaggc atcctcaacg tcagtgtgtt agtgaaacct tctaagcccc 600 tttgtagcgt tcaaggaaga ccagaaactg gccacactat ttccctttcc tgtctctctg 660 cgcttggaac accttcccct gtgtactact ggcataaact tgagggaaga gacatcgtgc 720 cagtgaaaga aaacttcaac ccaaccaccg ggattttggt cattggaaat ctgacaaatt 780 ttgaacaagg ttattaccag tgtactgcca tcaacagact tggcaatagt tcctgcgaaa 840 tcgatctcac ttcttcacat ccagaagttg gaatcattgt tggggccttg attggtagcc 900 tggtaggtgc cgccatcatc atctctgttg tgtgcttcgc aaggaataag gcaaaagcaa 960 aggcaaaaga aagaaattct aagaccatcg cggaacttga gccaatgaca aagataaacc 1020 caaggggaga aagcgaagca atgccaagag aagacgctac ccaactagaa gtaactctac 1080 catcttccat tcatgagact ggccctgata ccatccaaga accagactat gagccaaagc 1140 ctactcagga gcctgcccca gagcctgccc caggatcaga gcctatggca gtgcctgacc 1200 ttgacatcga gctggagctg gagecagaaa cgoagtcgga attggagcca gagccagagc 1260 cagagccaga gtcagagcct ggggttgtag ttgagccctt aagtgaagat gaaaagggag 1320 tggttaaggc ataggctggt ggcctaagta cagcattaat cattaaggaa cccattactg 1380 ccatttggaa ttcaaataac ctaaccaacc tccacctcct ccttccattt tgaccaacct 1440 tcttctaaca aggtgctcat tcctactatg aatccagaat aaacacgcca agataacagc 1500 t 1501

<210> 6 <211> 3245 <212> ADN <213> Homo sapiens <4 Ο Ο> 6 gtactgaaaa aagtctatac gcaataagta agcccaaaga ggcatgtttg cttggcgatg 60 cccagcagat aagccaggca aacctcggtg tgatcgaaga agccaatttg agactcagcc 120 tagtccaggc aagctactgg cacctgctgc tctcaactaa cctccacaca atggtgttcg 180 cattttggaa ggtctttctg atcctaagct gccttgcagg tcaggttagt gtggtgcaag 240 tgaccatccc agacggtttc gtgaacgtga ctgttggatc taatgtcact ctcatctgca 300 tctacaccac cactgtggcc tcccgagaac agctttccat ccagtggtct ttcttccata 360 agaaggagat ggagccaatt tctcacagct cgtgcctcag tactgagggt atggaggaaa 420 aggcagtcgg tcagtgtcta aaaa'tgacgc acgtaagaga cgctcgggga agatgtagct 480 ggacctctga gatttacttt tctcaaggtg gacaagctgt agccatcggg caatttaaag 540 atcgaattac agggtccaac gatccaggta atgcatctat cactatctcg catatgcagc 600 cagcagacag tggaatttac atctgcgatg ttaacaaccc cccagacttt ctcggccaaa 660 accaaggcat cctcaacgtc agtgtgttag tgaaaccttc taagcccctt tgtagcgttc 720 aaggaagacc agaaactggc cacactattt ccctttcctg tctctctgcg cttggaacac 780 cttcccctgt gtaetaetgg cataaaettg agggaagaga catcgtgcca gtgaaagaaa 840 acttcaaccc aaccaccggg attttggtca ttggaaatct gacaaatttt gaacaaggtt 900 attaccagtg tactgccatc aacagacttg gcaatagttc ctgcgaaatc gatctcaett 960 cttcacatcc agaagttgga atcattgttg gggccttgat tggtagcctg gtaggtgccg 1020 ccatcatcat ctctgttgtg tgcttcgcaa ggaataaggc aaaagcaaag gcaaaagaaa 1080 gaaattctaa gaccatcgcg gaacttgagc caatgacaaa gataaaccca aggggagaaa 1140 gcgaagcaat gccaagagaa gacgctaccc aactagaagt aactctacca tcttccattc 1200 atgagactgg ccctgatacc atccaagaac cagactatga gccaaagcct actcaggagc 1260 ctgccccaga gcctgcccca ggatcagagc ctatggcagt gcctgacctt gacatcgagc 1320 tggagctgga gccagaaacg cagtcggaat tggagccaga gccagagcca gagccagagt 1380 cagagcctgg ggttgtagtt gagcccttaa gtgaagatga aaagggagtg gttaaggcat 1440 aggctggtgg cctaagtaca gcattaatca ttaaggaacc cattactgcc atttggaatt 1500 caaataacct aaccaacctc cacctcctcc ttccattttg accaaccttc ttctaacaag 1560 gtgctcattc ctactatgaa tccagaataa acacgccaag ataacagcta aatcagcaag 1620 ggttcctgta ttaccaatat agaatactaa caattttact aacacgtaag cataacaaat 1680 gacagggcaa gtgatttcta acttagttga gttttgeaac agtacctgtg ttgttatttc 1740 agaaaatatt atttctctct ttttaactac tctttttttt tattttggac agagtcttgc 1800 tccgtcgcgc aggctgtgat cgtagtggtg cgatctcggc tcactgcagc ctccgctccc 1860 tgggttcaag cgattctcct gcctgagcct cctgagtagc tgggactgca ggcacgtgcc 1920 accacgcccg gctaattttt tgtattttta gtagagatgg ggtttcacgt tgttggecag 1980 gatggtctcc atctcctgac ctcatgatcc gcccaccttg gcctcccaaa atgctgggat 2040 <210> 7

<211> 3323 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 7 gtactgaaaa aagtctatac gcaataagta agcccaaaga ggcatgtttg cttggcgatg 60 cccagcagat aagccaggca aacctcggtg tgatcgaaga agccaatttg agactcagcc 120 tagtccaggc aagctactgg cacctgctgc tctcaactaa cctccacaca atggtgttcg 180 cattttggaa ggtctttctg atcctaagct gccttgcagg tcaggttagt gtggtgcaag 240 tgaccatccc agacggtttc gtgaacgtga ctgttggatc taatgtcact ctcatctgca 300 tctacaccac cactgtggcc tcccgagaac agctttccat ccagtggtct ttcttccata 360 agaaggagat ggagccaatt tctcacagct cgtgcctcag tactgagggt atggaggaaa 420 aggcagtcgg tcagtgtcta aaaatgacgc acgtaagaga cgctcgggga agatgtagct 480 ggacctctga gtctccttgg gaggagggga agtggccaga tgttgaggct gtgaagggca 540 ctcttgatgg acagcaggct gaactccaga tttaetttte tcaaggtgga caagctgtag 600 ccatcgggca atttaaagat cgaattacag ggtccaacga tccaggtaat gcatctatca 660 ctatctcgca tatgcagcca gcagacagtg gaatttacat ctgcgatgtt aacaaccccc 720 cagactttct cggccaaaac caaggcatcc tcaacgtcag tgtgttagtg aaaccttcta 780 agcccctttg tagcgttcaa ggaagaccag aaactggcca cactatttcc ctttcctgtc 840 tctctgcgct tggaacacct tcccctgtgt actactggca taaacttgag ggaagagaca 900 tcgtgccagt gaaagaaaac ttcaacccaa ccaccgggat tttggtcatt ggaaatctga 960 caaattttga acaaggttat taccagtgta ctgccatcaa cagacttggc aatagttcct 1020 gcgaaatcga tctcacttct tcacatccag aagttggaat cattgttggg gccttgattg 1080 gtagcctggt aggtgccgcc atcatcatot ctgttgtgtg cttcgcaagg aataaggcaa 1140 aagcaaaggc aaaagaaaga aattctaaga ccatcgcgga acttgagcca atgacaaaga 1200 taaacccaag gggagaaagc gaagcaatgc caagagaaga cgctacccaa ctagaagtaa 1260 ctctaccatc ttccattcat gagactggcc ctgataccat ccaagaacca gactatgagc 1320 caaagcctac tcaggagcct gccccagagc ctgccccagg atcagagcct atggcagtgc 1380 ctgaccttga catcgagctg gagctggagc cagaaacgca gtcggaattg gagccagagc 1440 cagagccaga gccagagtca gagcctgggg ttgtagttga gcccttaagt gaagatgaaa 1500 agggagtggt taaggcatag gctggtggcc taagtacagc attaatcatt aaggaaccca 1560 ttactgccat ttggaattca aataacctaa ccaacctcca cctcctcctt ccattttgac 1620 caaccttctt ctaacaaggt gctcattcct actatgaatc cagaataaac acgccaagat 1680 aacagctaaa tcagcaaggg ttcctgtatt accaatatag aatactaaca attttactaa 1740 cacgtaagca taacaaatga cagggcaagt gatttctaac ttagttgagt tttgcaacag 1800 tacctgtgtt gttatttcag aaaatattat ttctctcttt ttaactactc ttttttttta 1860 ttttggacag agtcttgctc cgtcgcgcag getgtgateg tagtggtgcg atctcggctc 1920 actgcagcct ccgctccctg ggttcaagcg attctcctgc ctgagcctcc tgagtagctg 1980 ggactgcagg cacgtgccac cacgcccggc taattttttg tatttttagt agagatgggg 2040 tttcacgttg ttggccagga tggtctecat ctcctgacct catgatccgc ccaccttgge 2100 ctcccaaaat gctgggatta caggcatgag ccactgcgcc cggcctcttt ttagctactc 2160 ttatgttcca catgcacata tgacaaggtg gcattaatta gattcaatat tatttctagg 2220 aatagttcct cattcatttt tatattgacc actaagaaaa taattcatca gcattatctc 2280 atagattgga aaattttctc caaatacaat agaggagaat atgtaaaggg tatacattaa 2340 ttggtacgta gcatttaaaa tcaggtctta taattaatgc ttcattcctc atattagatt 2400 tcccaagaaa tcaccctggt atccaatatc tgagcatggc aaatttaaaa aataacacaa 2460 tttcttgcct gtaaccctag cactttggga ggccgaggca ggtggatcac ctgaggtcag 2520 gagttcgaga ccagcctggc cggcatggcg aaaccccttc tctgctgaaa atacagaaat 2580 tagctgggcg tggtggtgca tgcctgtagt cocagctact tgggaggctg aggcaggaga 2640 atcgcttgaa cccaggaggt ggaggttgca gtgagccgag attgtgccac tgcactocaa 2700 cctgggtgac agagtgagat tccatctgaa aaacaaaaac aaaaacagaa aacaaacaaa 2760 caaaaaacaa aaaatcccca caactttgtc aaataatgta caggcaaaca ctttcaaata 2820 taatttcctt cagtgaatac aaaatgttga tatcataggt gatgtacaat ttagttttga 2880 atgagttatt atgttatcac tgtgtctgat gttatctact ttgaaaggca gtccagaaaa 2940 gtgttctaag tgaactctta agatctattt tagataattt caactaatta aataacctgt 3000 tttactgcct gtacattcca cattaataaa gcgataccaa tcttatatga atgctaatat 3060 tactaaaatg cactgatatc acttcttctt cccctgttga aaagctttct catgatcata 3120 tttcacccac atctcacctt gaagaaactt acaggtagac ttaccttttc acttgtggaa 3180 ttaatcatat ttaaatctta ctttaaggct caataaataa tactcataat gtctcatttt 3240 agtgactcct aaggctagtc cttttataaa caactttttc tgacatagca tttatgtata 3300 ataaaccaga catttaaagt gta 3323

<210> 8 <211> 3014 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 8 gtactgaaaa aagtctatac gcaataagta agcccaaaga ggcatgtttg cttggcgatg 60 cccagcagat aagccaggca aacctcggtg tgatcgaaga agccaatttg agactcagcc 120 tagtccaggc aagctactgg cacctgctgc tctcaactaa cctccacaca atggtgttcg 180 cattttggaa ggtctttctg atcctaagct gccttgcagg tcaggttagt gtggtgcaag 240 tgaccatccc agacggtttc gtgaacgtga ctgttggatc taatgtcact ctcatctgca 300 tctacaccac cactgtggcc tcccgagaac agctttccat ccagtggtct ttcttccata 360 agaaggagat ggagccaatt tctatttact tttctcaagg tggacaagct gtagccatcg 420 ggcaatttaa agatcgaatt acagggtcca acgatccagt gaaaccttct aagccccttt 480 gtagcgttca aggaagacca gaaactggcc acactatttc cctttcctgt ctctctgcgc 540 ttggaacacc ttcccctgtg tactactggc ataaacttga gggaagagac atcgtgccag 600 tgaaagaaaa cttcaaccca accaccggga ttttggtcat tggaaatctg acaaattttg 660 aacaaggtta ttaccagtgt actgccatca acagacttgg caatagttcc tgcgaaatcg 720 atctcacttc ttcacatcca gaagttggaa tcattgttgg ggccttgatt ggtagcctgg 780 taggtgccgc catcatcatc tctgttgtgt gcttcgcaag gaataaggca aaagcaaagg 840 caaaagaaag aaattctaag accatcgcgg aacttgagcc aatgacaaag ataaacccaa 900 ggggagaaag cgaagcaatg ccaagagaag acgctaccca actagaagta actctaccat 960 cttccattca tgagactggc cctgatacca tccaagaacc agactatgag ccaaagccta 1020 ctoaggagcc tgccecagag cctgccccag gatcagagcc tatggcagtg cctgaccttg 1080 aeatcgagct ggagctggag ccagaaacgc agtcggaatt ggagccagag ccagagccag 1140 agccagagtc agagcctggg gttgtagttg agcccttaag tgaagatgaa aagggagtgg 1200 ttaaggcata ggctggtggc ctaagtacag cattaatcat taaggaaccc attactgcca 1260 tttggaattc aaataaccta accaacctcc acctcctcct tccattttga ccaaccttct 1320 tctaacaagg tgctcattcc tactatgaat ccagaataaa cacgccaaga taacagctaa 1380 atcagcaagg gttcctgtat taccaatata gaatactaac aattttacta acacgtaagc 1440 ataacaaatg acagggcaag tgatttctaa cttagttgag ttttgcaaca gtacctgtgt 1500 tgttatttca gaaaatatta tttctctctt tttaactact cttttttttt attttggaca 1560 gagtcttgct ccgtcgcgca ggctgtgatc gtagtggtgc gatctcggct cactgcagcc 1620 tccgctccct gggttcaagc gattctcctg cctgagcctc ctgagtagct gggactgcag 1680 gcacgtgcca ccacgcccgg ctaatttttt gtatttttag tagagatggg gtttcacgtt 1740 gttggccagg atggtctcca tctcctgacc tcatgatccg cccaccttgg cctcccaaaa 1800 tgctgggatt acaggcatga gccactgcgc ccggcctctt tttagctact cttatgttcc 1860 acatgcacat atgacaaggt ggoattaatt agattcaata ttatttctag gaatagttcc 1920 tcatteattt ttatattgac cactaagaaa ataattcatc agcattatct catagattgg 1980 aaaattttct ccaaatacaa tagaggagaa tatgtaaagg gtatacatta attggtacgt 2040 agcatttaaa atcaggtctt ataattaatg cttcattcct catattagat ttcccaagaa 2100 atcaccctgg tatccaatat ctgagcatgg caaatttaaa aaataacaca atttcttgcc 2160 tgtaacccta gcactttggg aggccgaggc aggtggatca cctgaggtca ggagttcgag 2220 accagcctgg ccggcatggc gaaacccctt ctctgctgaa aatacagaaa ttagctgggc 2280 gtggtggtgc atgcctgtag tcccagctac ttgggaggct gaggcaggag aatcgcttga 2340 acccaggagg tggaggttgc agtgagccga gattgtgcca ctgcactcca acctgggtga 2400 cagagtgaga ttccatctga aaaacaaaaa caaaaacaga aaacaaacaa acaaaaaaca 2460 aaaaatcccc acaactttgt caaataatgt acaggcaaac actttcaaat ataatttcct 2520 tcagtgaata caaaatgttg atatcatagg tgatgtacaa tttagttttg aatgagttat 2580 tatgttatca ctgtgtctga tgttatctac tttgaaaggc agtccagaaa agtgttctaa 2640 gtgaactctt aagatctatt ttagataatt tcaactaatt aaataacctg ttttactgcc 2700 tgtacattcc acattaataa agcgatacca atcttatatg aatgctaata ttactaaaat 2760 gcactgatat cacttcttct tcccctgttg aaaagctttc tcatgatcat atttcaccca 2820 catctcacct tgaagaaact tacaggtaga cttacctttt cacttgtgga attaatcata 2880 tttaaatctt actttaaggc tcaataaata atactcataa tgtctcattt tagtgactcc 2940 taaggctagt ccttttataa acaacttttt ctgacatagc atttatgtat aataaaccag 3000 acatttaaag tgta 3014

<210> 9 <211> 3135 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 9 gtactgaaaa aagtctatac gcaataagta agcccaaaga ggcatgtttg cttggcgatg 60 cceagcagat aagccaggca aaectcggtg tgatcgaaga agceaatttg agactcagcc 120 tagtccaggc aagctactgg cacctgctgc tctcaactaa cctccacaca atggtgttcg 180 cattttggaa ggtctttctg atcctaagct gccttgcagg tcaggttagt gtggtgcaag 240 tgaccatccc agacggtttc gtgaacgtga ctgttggatc taatgtcact ctcatctgca 300 tctacaccac cactgtggcc tcccgagaac agctttccat ccagtggtct ttcttccata 360 agaaggagat ggagccaatt tctatttact tttctcaagg tggacaagct gtagccatcg 420 ggcaatttaa agatcgaatt acagggtcca acgatccagg taatgcatct atcactatct 480 cgcatatgca gccagcagac agtggaattt acatctgcga tgttaacaac cccccagact 540 ttctcggcca aaaccaaggc atcctcaacg tcagtgtgtt agtgaaacct tctaagcccc 600 tttgtagcgt tcaaggaaga ccagaaactg gccacactat ttccctttcc tgtctctctg 660 cgcttggaac accttcccct gtgtactact ggcataaact tgagggaaga gacatcgtgc 720 cagtgaaaga aaacttcacc aaccaccggg attttggtca ttggaaatct gacaaatttt 780 gaacaaggtt attaccagtg tactgccatc aacagacttg gcaatagttc ctgcgaaatc 840 gatctcactt cttcacatcc agaagttgga atcattgttg gggccttgat tggtagcctg 900 gtaggtgccg ccatcatcat ctctgttgtg tgcttcgcaa ggaataaggc aaaagcaaag 960 gcaaaagaaa gaaattctaa gaccatcgcg gaacttgagc caatgacaaa gataaaccca 1020 sgÇÇfÇfagaaa gcgaagcaat gccaagagaa gacgctaccc aactagaagt aactctacca 1080 tcttccatto atgagactgg ccctgatacc atccaagaac cagactatga gccaaagcct 1140 actcaggagc ctgccccaga gcctgcccca ggatcagagc ctatggcagt gcctgacctt 1200 gacatcgagc tggagctgga gccagaaacg cagtcggaat tggagccaga gccagagcca 1260 gagccagagt cagagcctgg ggttgtagtt gagcccttaa gtgaagatga aaagggagrtg 1320 gttaaggcat aggctggtgg cctaagtaca gcattaatca ttaaggaacc cattactgcc 1380 atttggaatt caaataacct aaccaacetc cacctcctcc ttccattttg accaaccttc 1440 ttctaacaag gtgctcattc ctactatgaa tccagaataa acacgccaag ataacagcta 1500 aatcagcaag ggttcctgta ttaccaatat agaatactaa caattttact aacacgtaag 1560 cataacaaat gacagggcaa gtgatttcta acttagttga gttttgcaac agtacctgtg 1620 ttgttatttc agaaaatatt atttctctct ttttaactac tctttttttt tattttggac 1680 agagtcttgc tccgtcgcgc aggctgtgat cgtagtggtg cgatctcggc tcactgcagc 1740 ctccgctccc tgggttcaag cgattctcet gcctgagcct cctgagtagc tgggactgca 1800 ggcacgtgcc accacgcccg gctaattttt tgtattttta gtagagatgg ggtttcacgt 1860 tgttggccag gatggtctcc atctcctgac ctcatgatcc gcccaccttg gcctcccaaa 1920 atgctgggat tacaggcatg agccactgcg cccggcctct ttttagctac tcttatgttc 1980 cacatgcaca tatgacaagg tggcattaat tagattcaat attatttcta ggaatagttc 2040 ctcattcatt tttatattga ccactaagaa aataattcat cagcattatc tcatagattg 2100 gaaaattttc tccaaataca atagaggaga atatgtaaag ggtatacatt aattggtacg 2160 tagcatttaa aatcaggtct tataattaat gcttcattcc tcatattaga tttcccaaga 2220 aatcaccctg gtatccaata tctgagcatg gcaaatttaa aaaataacac aatttcttgc 2280 ctgtaaccct agcactttgg gaggccgagg caggtggatc acctgaggtc aggagttcga 2340 gaccagcctg gccggcatgg cgaaacccct tctctgctga aaatacagaa attagctggg 2400 cgtggtggtg catgcctgta gtcccagcta cttgggaggc tgaggcagga gaatcgcttg 2460 aacccaggag gtggaggttg cagtgagccg agattgtgcc actgcactcc aacctgggtg 2520 acagagtgag attccatctg aaaaacaaaa acaaaaacag aaaacaaaca aacaaaaaac 2580 aaaaaatccc cacaactttg tcaaataatg tacaggcaaa cactttcaaa tataatttcc 2640 ttcagtgaat acaaaatgtt gatatcatag gtgatgtaca atttagtttt gaatgagtta 2700 ttatgttatc actgtgtctg atgttatcta ctttgaaagg cagtccagaa aagtgttcta 2760 agtgaactct taagatctat tttagataat ttcaactaat taaataacct gttttactgc 2820 ctgtacattc cacattaata aagcgatacc aatcttatat gaatgctaat attactaaaa 2880 tgcactgata tcacttcttc ttcccctgtt gaaaagcttt ctcatgatca tatttcaccc 2940 acatctcacc ttgaagaaac ttacaggtag acttaccttt tcacttgtgg aattaatcat 3000 atttaaatct tactttaagg ctcaataaat aatactcata atgtctcatt ttagtgactc 3060 ctaaggctag tccttttata aacaactttt tctgacatag catttatgta taataaacca 3120 gacatttaaa gtgta 3135

<210> 10 <211> 2995 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 10 gtactgaaaa aagtctatac gcaataagta agcccaaaga ggcatgtttg cttggcgatg 60 cccagcagat aagccaggca aacctcggtg tgatcgaaga agccaatttg agactcagcc 120 tagtccaggc aagctactgg cacctgctgc tctcaactaa cctccacaca atggtgttcg 180 cattttggaa ggtctttctg atcctaagct gccttgcagg tcaggttagt gtggtgcaag 240 tgaccatccc agacggtttc gtgaacgtga ctgttggatc taatgtcact ctcatctgca 300 tctacaccac cactgtggcc tcccgagaac agctttccat ccagtggtct ttcttccata 360 agaaggagat ggagccaatt tctatttact tttctcaagg tggacaagct gtagccatcg 420 ggcaatttaa agatcgaatt acagggtcca acgatccagg taatgcatct atcactatct 480 cgcatatgca gccagcagac agtggaattt acatctgcga tgttaacaac cccccagact 540 ttctcggcca aaaccaaggc atcctcaacg tcagtgtgtt agtgaaacct tctaagcccc 600 tttgtagcgt tcaaggaaga ccagaaactg gccacactat ttccctttcc tgtctctctg 660 cgcttggaac accttcccct gtgtactact ggcataaact tgagggaaga gacatcgtgc 720 cagtgaaaga aaacttcaac ccaaccaccg ggattttggt cattggaaat ctgacaaatt 780 ttgaacaagg ttattaccag tgtactgcca tcaacagact tggcaatagt tcctgcgaaa 840 tcgatctcac ttcttcacgc caatgacaaa gataaaccca aggggagaaa gcgaagcaat 900 gccaagagaa gacgctaccc aactagaagt aactctacca tcttccattc atgagactgg 960 ccctgatacc atccaagaac cagactatga gecaaagcct actcaggagc ctgccccaga 1020 gcctgcccca ggatcagagc ctatggcagt gcctgacott gacatcgagc tggagctgga 1080 gccagaaacg cagtcggaat tggagccaga gccagagcca gagccagagt cagagcctgg 1140 ggttgtagtt gagcccttaa gtgaagatga aaagggagtg gttaaggcat aggctggtgg 1200 cctaagtaca gcattaatca ttaaggaacc cattactgcc atttggaatt caaataacct 1260 aaccaacctc cacctcctcc ttccattttg accaaccttc ttctaacaag gtgctcattc 1320 ctactatgaa tccagaataa acacgccaag ataacagcta aatcagcaag ggttcctgta 1380 ttaccaatat agaatactaa caattttact aacacgtaag cataacaaat gacagggcaa 1440 gtgatttcta acttagttga gttttgcaac agtacctgtg ttgttatttc agaaaatatt 1500 atttctctct ttttaactac tctttttttt tattttggac agagtcttgc tccgtcgcgc 1560 aggctgtgat cgtagtggtg cgatctcggc tcactgcagc ctccgctccc tgggttcaag 1620 cgattctcct gcctgagcct cctgagtagc tgggaetgca ggcacgtgcc accacgcecg 1680 gctaattttt tgtattttta gtagagatgg ggtttcacgt tgttggccag gatggtctcc 1740 atctcctgac ctcatgatcc gcccaccttg gcctcccaaa atgctgggat tacaggcatg 1800 agocactgcg cccggcctct ttttagctac tcttatgttc cacatgcaca tatgacaagg 1860 tggcattaat tagattcaat attatttcta ggaatagttc ctcattcatt tttatattga 1920 ccactaagaa aataattcat cagcattatc tcatagattg gaaaattttc tccaaataca 1980 atagaggaga atatgtaaag ggtatacatt aattggtacg tagcatttaa aatcaggtct 2040 tataattaat gcttcattcc tcatattaga tttcccaaga aatcaccctg gtatccaata 2100 tctgagcatg gcaaatttaa aaaataacac aatttcttgc ctgtaaccct agcactttgg 2160 gaggccgagg caggtggatc acctgaggtc aggagttcga gaccagcctg gccggcatgg 2220 cgaaacccct tctctgctga aaatacagaa attagctggg cgtggtggtg catgcctgta 2280 gtcccagcta cttgggaggc tgaggcagga gaatcgcttg aacccaggag gtggaggttg 2340 cagtgagccg agattgtgcc actgcactcc aacctgggtg acagagtgag attccatctg 2400 aaaaacaaaa acaaaaacag aaaacaaaca aacaaaaaac aaaaaatccc cacaactttg 2460 tcaaataatg tacaggcaaa cactttcaaa tataatttcc ttcagtgaat acaaaatgtt 2520 gatatcatag gtgatgtaca atttagtttt gaatgagtta ttatgttatc actgtgtctg 2580 atgttatcta ctttgaaagg cagtccagaa aagtgttcta agtgaactct taagatctat 2640 tttagataat ttcaactaat taaataacct gttttactgc ctgtacattc cacattaata 2700 aagcgatacc aatcttatat gaatgctaat attactaaaa tgcactgata tcacttcttc 2760 ttcccctgtt gaaaagcttt ctcatgatca tatttcaccc acatctcacc ttgaagaaac 2820 ttacaggtag acttaccttt tcacttgtgg aattaatcat atttaaatct tactttaagg 2880 ctcaataaat aatactcata atgtctcatt ttagtgactc ctaaggctag tccttttata 2940 aacaactttt tctgacatag catttatgta taataaacca gacatttaaa gtgta 2995

<210> 11 <211> 387 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 11

Met Val Phe Ala Phe Trp Lys Val Phe Leu lie Leu Ser Cys Leu Ala 15 10 15

Gly Gin Val Ser Val Val Gin Val Thr He Pro Asp Gly Phe Val Asn 20 25 30

Val Thr Val Gly Ser Asn Val Thr Leu lie Cys lie Tyr Thr Thr Thr 35 40 45

Val Ala Ser Arg Glu Gin Leu Ser lie Gin Trp Ser Phe Phe His Lys 50 55 60

Lys Glu Met Glu Pro lie Ser lie Tyr Phe Ser Gin Gly Gly Gin Ala 65 70 75 80

Val Ala' lie Gly Gin Phe Lys Asp Arg He Thr Gly Ser Asn Asp Pro 85 90 95

Gly Asn Ala Ser He Thr lie Ser His Met Gin Pro Ala Asp Ser Gly 100 105 110

He Tyr He Cys Asp val Asn Asn Pro Pro Asp Phe Leu Gly Gin Asn 115 120 125

Gin Gly lie Leu Asn Val Ser Val Leu Val Lys Pro Ser Lys Pro Leu 130 135 140

Cys Ser Val Gin Gly Arg Pro Glu Thr Gly His Thr He Ser Leu Ser 145 150 155 160

Cys Leu Ser Ala Leu Gly Thr Pro Ser Pro Val Tyr Tyr Trp His Lys 165 170 175

Leu Glu Gly Arg Asp lie Val Pro Val Lys Glu Asn Phe Asn Pro Thr 180 185 190

Thr Gly lie Leu Val lie Gly Asn Leu Thr Asn Phe Glu Gin Gly Tyr 195 200 205

Tyr Gin Cys Thr Ala lie Asn Arg Leu Gly Asn Ser Ser Cys Glu lie 210 215 220

Asp Leu Thr Ser Ser His Pro Glu Val Gly lie lie Val Gly Ala Leu 225 230 235 240

He Gly Ser Leu Val Gly Ala Ala lie He He Ser Val Val Cys Phe 245 250 255

Ala Arg Asn Lys Ala Lys Ala Lys Ala Lys Glu Arg Asn Ser Lys Thr 260 265 270

He Ala Glu Leu Glu Pro Met Thr Lys He Asn Pro Arg Gly Glu Ser 275 280 285

Glu Ala Met Pro Arg Glu Asp Ala Thr Gin Leu Glu Val Thr Leu Pro 290 295 300

Ser Ser lie His Glu Thr Gly Pro Asp Thr He Gin Glu Pro Asp Tyr 305 310 315 320

Glu Pro Lys Pro Thr Gin Glu Pro Ala Pro Glu Pro Ala Pro Gly Ser 325 330 335

Glu Pro Met Ala Val Pro Asp Leu Asp lie Glu Leu Glu Leu Glu Pro 340 345 350

Glu Thr Gin Ser Glu Leu Glu Pro Glu Pro Glu Pro Glu Pro Glu Ser 355 360 365

Glu Pro Gly Val Val Val Glu Pro Leu Ser Glu Asp Glu Lys Gly Val 370 375 380

Val Lys Ala 385 <210> 12 <211> 423

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 12

Met Val Phe Ala Phe Trp Lys Val Phe Leu lie Leu Ser Cys Leu Ala 15 10 15

Gly Gin Val Ser Val Val Gin Val Thr He Pro A3p Gly Phe Val Asn 20 25 30

Val Thr Val Gly Ser Asn Val Thr Leu lie Cys lie Tyr Thr Thr Thr 35 40 45

Val Ala Ser Arg Glu Gin Leu Ser lie Gin Trp Ser Phe Phe His Lys 50 55 60

Lys Glu Met Glu Pro lie Ser Hia Ser Ser Cys Leu Ser Thr Glu Gly 65 70 75 80

Met Glu Glu Lys Ala Val Gly Gin Cys Leu Lys Met Thr His Val Arg 85 90 95

Asp Ala Arg Gly Arg Cys Ser Trp Thr Ser Glu lie Tyr Phe Ser Gin 100 105 110

Gly Gly Gin Ala val Ala lie Gly Gin Phe Lys Asp Arg lie Thr Gly 115 120 125

Ser Asn Asp Pro Gly Asn Ala Ser lie Thr He Ser His Met Gin Pro 130 135 140

Ala Asp Ser Gly lie Tyr He Cys Asp Val Asn Asn Pro Pro Asp Phe 145 150 155 160

Leu Gly Gin Asn Gin Gly Ile Leu Asn Val Ser Val Leu Val Lys Pro 165 170 175

Ser Lys Pro Leu Cys Ser val Gin Gly Arg Pro Glu Thr Gly His Thr 180 185 190 lie Ser Leu Ser Cys Leu Ser Ala Leu Gly Thr Pro Ser Pro val Tyr 195 200 205

Tyr Trp His Lys Leu Glu Gly Arg Asp Ile Val Pro Val Lys Glu Asn 210 215 220

Phe Asn Pro Thr Thr Gly Ile Leu Val lie Gly Asn Leu Thr Asn Phe 225 230 235 240

Glu Gin Gly Tyr Tyr Gin Cys Thr Ala Ile Asn Arg Leu Gly Asn Ser 245 250 255

Ser Cys Glu lie Asp Leu Thr Ser Ser His Pro Glu Val Gly lie lie 260 265 270

Val Gly Ala Leu He Gly Ser Leu Val Gly Ala Ala lie lie lie Ser 275 2S0 265

Val Val Cys Phe Ala Arg Asn Lys Ala Lys Ala Lys Ala Lys Glu Arg 290 295 300

Asn Ser Lys Thr lie Ala Glu Leu Glu Pro Met Thr Lys lie Asn Pro 305 310 315 320

Arg Gly Glu Ser Glu Ala Met Pro Arg Glu Asp Ala Thr Gin Leu Glu 325 330 335

Val Thr Leu Pro Ser Ser He His Glu Thr Gly Pro Asp Thr lie Gin 340 345 350

Glu Pro Asp Tyr Glu Pro Lys Pro Thr Gin Glu Pro Ala Pro Glu Pro 355 360 365

Ala Pro Gly Ser Glu Pro Met Ala Val Pro Asp Leu Asp lie Glu Leu 370 375 380

Glu Leu Glu Pro Glu Thr Gin Ser Glu Leu Glu Pro Glu Pro Glu Pro 385 390 395 400

Glu Pro Glu Ser Glu Pro Gly Val Val Val Glu Pro Leu Ser Glu Asp 405 410 415

Glu Lys Gly Val Val Lys Ala 420

<210> 13 <211> 449 <212> PRT <213> Homo sapiens <40 0> 13

Met Val Phe Ala Phe Trp Lys Val Phe Leu lie Leu Ser Cys Leu Ala 15 10 15

Gly Gin Val Ser Val Val Gin Val Thr He Pro Asp Gly Phe Val Asn 20 25 30

Vai Thr Val Gly Ser Asn Vai Thr Leu lie Cys Ile Tyr Thr Thr Thr 35 40 45

Val Ala Ser Arg Glu Gin Leu Ser lie Gin Trp Ser Phe Phe His Lys 50 55 60

Lys Glu Met Glu Pro lie Ser His Ser Ser Cys Leu Ser Thr Glu Gly 65 70 75 80

Met Glu Glu Lys Ala Val Gly Gin Cys Leu Lys Met Thr His Val Arg 85 90 95

Asp Ala Arg Gly Arg Cys Ser Trp Thr Ser Glu Ser Pro Trp Glu Glu 100 105 110

Gly Lys Trp Pro Asp Val Glu Ala Val Lys Gly Thr Leu Asp Gly Gin 115 120 125

Gin Ala Glu Leu Gin lie Tyr Phe Ser Gin Gly Gly Gin Ala Val Ala 130 135 140

Ile Gly Gin Phe Lys Asp Arg Ile Thr Gly Ser Asn Asp Pro Gly Asn 145 150 155 160

Ala Ser Ile Thr Ile Ser His Met Gin Pro Ala Asp Ser Gly Ile Tyr 165 170 175 lie Cys Asp Val Asn Asn Pro Pro Asp Phe Leu Gly Gin Asn Gin Gly 180 185 190

Ile Leu Asn Val Ser Val Leu Val Lys Pro Ser Lys Pro Leu Cys Ser 195 200 205

Val Gin Gly Arg Pro Glu Thr Gly His Thr Ile Ser Leu Ser Cys Leu 210 215 220

Ser Ala Leu Gly Thr Pro Ser Pro Val Tyr Tyr Trp His Lys Leu Glu 225 230 235 240

Gly Arg Asp lie Val Pro Val Lys Glu Asn Phe Asn Pro Thr Thr Gly 245 250 255

Ile Leu Val Ile Gly Asn Leu Thr Asn Phe Glu Gin Gly Tyr Tyr Gin 260 265 270

Cys Thr Ala lie Asn Arg Leu Gly Asn Ser Ser Cys Glu lie Asp Leu 275 280 285

Thr Ser Ser His Pro Glu Val Gly lie He Val Gly Ala Leu lie Gly 290 295 300

Ser Leu Val Gly Ala Ala He He Ile Ser Val Val Cys Phe Ala Arg 305 310 315 320

Asn Lys Ala Lys Ala Lys Ala Lys Glu Arg Asn Ser Lys Thr Ile Ala 325 330 335

Glu Leu Glu Pro Met Thr Lys He Asn Pro Arg Gly Glu Ser Glu Ala 340 345 350

Met Pro Arg Glu Asp Ala Thr Gin Leu Glu Val Thr Leu Pro Ser Ser 355 360 365

He His Glu Thr Gly Pro Asp Thr He Gin Glu Pro Asp Tyr Glu Pro 370 375 380

Lys Pro Thr Gin Glu Pro Ala Pro Glu Pro Ala Pro Gly Ser Glu Pro 385 390 395 400

Met Ala Val Pro Asp Leu Asp Ile Glu Leu Glu Leu Glu Pro Glu Thr 405 410 415

Gin Ser Glu Leu Glu Pro Glu Pro Glu Pro Glu Pro Glu Ser Glu Pro 420 425 430

Gly Val Val Val Glu Pro Leu Ser Glu Asp Glu Lys Gly Val Val Lys 435 440 445

Ala

<210> 14 <211> 346 <212> PRT <213> Homo sapiens

Gly Gin Val Ser Val Val Gin Val Thr lie Pro Asp Gly Phe Val Asn 20 25 30

Val Thr Val Gly Ser Asn Val Thr Leu lie Cys lie Tyr Thr Thr Thr 35 40 45

Val Ala Ser Arg Glu Gin Leu Ser lie Gin Trp Ser Phe Phe His Lys 50 55 60

Lys Glu Met Glu Pro lie Ser He Tyr Phe Ser Gin Gly Gly Gin Ala 65 70 75 80

Val Ala lie Gly Gin Phe Lys Asp Arg He Thr Gly Ser Asn Asp Pro 65 SO 95 val Lys Pro Ser Lys Pro Leu Cys Ser val Gin Gly Arg Pro Glu Thr 100 105 110

Gly His Thr lie Ser Leu Ser Cys Leu Ser Ala Leu Gly Thr Pro Ser 115 120 125

Pro Val Tyr Tyr Trp His Lys Leu Glu Gly Arg Asp lie Val Pro Val 130 135 140

Lys Glu Asn Phe Asn Pro Thr Thr Gly He Leu Val He Gly Asn Leu 145 150 155 160

Thr Asn Phe Glu Gin Gly Tyr Tyr Gin Cys Thr Ala lie Asn Arg Leu 165 170 175

Gly Asn Ser Ser Cys Glu He Asp Leu Thr ser Ser His Pro Glu val 180 185 190

Gly lie lie Val Gly Ala Leu lie Gly Ser Leu Val Gly Ala Ala lie 195 200 205

He He Ser Val Val Cys Phe Ala Arg Asn Lys Ala Lys Ala Lys Ala 210 215 220

Lys Glu Arg Asn Ser Lys Thr lie Ala Glu Leu Glu Pro Met Thr Lys 225 230 235 240

He Asn Pro Arg Gly Glu Ser Glu Ala Met Pro Arg Glu Asp Ala Thr 245 250 255

Gin Leu Glu Val Thr Leu Pro Ser Ser He His Glu Thr Gly Pro Asp 260 265 270

Thr lie Gin Glu Pro Asp Tyr Glu Pro Lys Pro Thr Gin Glu Pro Ala 275 280 285

Pro Glu Pro Ala Pro Gly Ser Glu Pro Met Ala Val Pro Asp Leu Asp 290 295 300 lie Glu Leu Glu Leu Glu Pro Glu Thr Gin Ser Glu Leu Glu Pro Glu 305 310 315 320

Pro Glu Pro Glu Pro Glu Ser Glu Pro Gly Val Val Val Glu Pro Leu 325 330 335

Ser Glu Asp Glu Lys Gly Val Val Lys Ala 340 345

<210> 15 <211> 203 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 15

Met Val Phe Ala Phe Trp Lys val Phe Leu lie Leu Ser Cys Leu Ala 15 10 15

Gly Gin Val Ser Val Val Gin Val Thr He Pro Asp Gly Phe Val Asn 20 25 30

Val Thr Val Gly Ser Asn Val Thr Léu lie Cys lie Tyr Thr Thr Thr 35 40 45

Val Ala Ser Arg Glu Gin Leu Ser lie Gin Trp Ser Phe Phe His Lys 50 55 60

Lys Glu Met Glu Pro He Ser lie Tyr Phe Ser Gin Gly Gly Gin Ala 65 70 75 80

Val Ala lie Gly Gin Phe Lys Asp Arg He Thr Gly Ser Asn Asp Pro 85 90 95

Gly Asn Ala Ser lie Thr He Ser His Met Gin Pro Ala Asp Ser Gly 100 105 110

He Tyr lie Cys Asp Val Asn Asn Pro Pro Asp Phe Leu Gly Gin Asn 115 120 125

Gin Gly He Leu Asn val Ser val Leu Val Lys Pro Ser Lys Pro Leu 130 135 140

Cys Ser Val Gin Gly Arg Pro Glu Thr Gly His Thr lie Ser Leu Ser 145 150 155 160

Cys Leu Ser Ala Leu Gly Thr Pro Ser Pro Val Tyr Tyr Trp His Lys 165 170 175

Leu Glu Gly Arg Asp He Val Pro Val Lys Glu Asn Phe Thr Asn His 180 185 190

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<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 16

Met Val Phe Ala Phe Trp Lys Val Phe Leu He Leu Ser Cys Leu Ala 15 10 15

Gly Gin Val Ser Val val Gin val Thr lie Pro Asp Gly Phe Val Asn 20 25 30

Val Thr Val Gly Ser Asn Val Thr Leu He Cys He Tyr Thr Thr Thr 35 40 45

Val Ala Ser Arg Glu Gin Leu Ser lie Gin Trp Ser Phe Phe His Lys 50 55 60

Lys Glu Met Glu Pro lie Ser lie Tyr Phe Ser Gin Gly Gly Gin Ala 65 70 75 80

Val Ala He Gly Gin Phe Lys Asp Arg lie Thr Gly Ser Asn Asp Pro 85 90 95

Gly Asn Ala Ser lie Thr lie Ser His Met Gin Pro Ala Asp Ser Gly 100 105 110 lie Tyr lie Cys Asp Val Asn Asn Pro Pro Asp Phe Leu Gly Gin Asn 115 120 125

Gin Gly lie Leu Asn Val Ser Val Leu Val Lys Pro Ser Lys Pro Leu 130 135 140

Cys Ser Val Gin Gly Arg Pro Glu Thr Gly His Thr lie Ser Leu Ser 145 150 155 160

Cys Leu Ser Ala Leu Gly Thr Pro Ser Pro Val Tyr Tyr Trp His Lys 165 170 175

Leu Glu Gly Arg Asp lie Val Pro Val Lys Glu Asn Phe Asn Pro Thr 180 185 190

Thr Gly lie Leu Val He Gly Asn Leu Thr Asn Phe Glu Gin Gly Tyr 195 200 205

Tyr Gin Cys Thr Ala lie Asn Arg Leu Gly Asn Ser Ser Cys Glu He 210 215 220

Asp Leu Thr Ser Ser Arg Gin 225 230

<210> 17 <211> 2888 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 17 agccgtgggg agcgccgcag gtggggacga gccgggcggc acctgccccg ggaccagagc 60 ggacgctccc tccccgctgc gccgagggag gggaaacccg aggggttcct tggagaaggt 120 ggtgcgtcct ggggcggcag ctgaggaaga aagacgcagt gccccgaagc ccctgagctg 180 aaaagggcca gaaagggggc ggcatggcat ggcccaaact gcccgcacct tggctgctgc 240 tctgcacctg gctcccagca gggtgcctgt ccttgcttgt gacggtccag cacacagaac 300 gctatgtcac cctgtttgcc tctatcatcc tcaaatgtga ctacaccacc tctgcccagc 360 tccaggacgt ggtggtgaca tggcgcttca agtccttctg caaggaccct atctttgact 420 actactcagc gtcataccag gcagctttat ccctgggcca ggacccatcc aatgactgca 480 acgacaacca gcgggaagtt cgcatagtgg cccagcggcg ggggcagaat gagcccgtgc 540 tgggggtaga ttaccggcag cgcaagatca ccatccagaa ccgagcagat ctcgtgataa 600 atgaagtgat gtggtgggaç catggagtgt attactgcac cattgaggct ccaggggaca 660 catcaggaga ccccgataag gaagtaaagc tcatcgtcct acactggctg acagtgatct 720 tcatcatcct gggagccctc ctcctcctgc tgetgattgg agtgtgctgg tgccagtgct 780 gtcctcagrta ttgctgctgc tatatccgct gtccctgctg tcctgeccac tgctgctgtc 840 ctgaggaagc cctggcccgc caccgctaca tgaagcaggc ccaggccota ggtcctcaga 900 tgatgggaaa acccctgtac tggggggogg acaggagcto ccaggtttca tcttatccaa 960 tgcacccgct gctgcagcga gatttgtccc tgccgtccag cctcccgcag atgccaatga 1020 cccagaccac caatcagcct cccatcgcca atggtgtcct ggagtatttg gagaaagaac 1080 tgcggaacct caacctggcc cagcctctgc cccctgacct caaaggcaga tttggccatc 1140 cctgcagcat gctgtcctcc etgggctctg aggtcgtgga acgcagaatc atccacctgc 1200 ccccactgat cagagacctg tcatcctcaa ggaggaccag tgactccctg caccagcagt 1260 ggctcacccc aattccctcc aggccctggg atctgaggga ggggagaagc caccaccatt 1320 accctgattt ccacnaggag ctccaggacc gggggccaaa gtcttgggca ttggaaagaa 1380 gggagttgga cccatcgtgg agtggaaggc accgtagctc taggctgaat gggtcaccca 1440 tacactggtc agacagggac agcctaagcg atgtcccctc atccagtgag gcacgctggc 1500 ggccgagcca ccctcctttc aggagccgct gtcaggagag gccccgcagg cccagccecc 1560 gggagagcac tcagaggcac gggagacgac gcaggcaccg cagctactct cctcccttgc 1620 ectccggcct cagttcctgg agctctgaag aggacaagga gaggcagccc cagagctggc 1680 gggcccaccg ccgcggctcg oaotccccao actggocoga ggagaagccg cctagctacc 1740 gctcactgga tatcactoca ggcaagaata goaggaaaaa agggagtgtg gagaggcgct 1800 cggagaaaga cagctctcat agtggaagga gtgtggtcat ttagtcaeca agcacagcac 1860 aacttctgtg gctacttctc ggctcctgtg tgtcatcagc atcacctagg tttccagctg 1920 acttgggaac tgcaagtctg agtctaacag tttttggctt agattetgag aatcaaatag 1980 aagaatttta aatacaagag tttgagattg ggtatagtgg ctcacacctg taatcacagc 2040 actttgggag getaagaate acttgagact aggagttcaa gatcagcctg ggaaacatag 2100 tgagaccecg tctctacaaa aaatataaaa attagttagg tgtggtggca tgcacttgta 2160 gtcccagcta ctcaagaggc tgaggcagaa ggatcccttg agcccaggag tgcaaggctg 2220 caatgagcca ggatcccatg atcacacatc tgtattccag cctgggcaat agagcaagtc 2280 cccattacta aaaaacccaa aaggccaaaa aacaaaaaag ttagagttcg aggaattacc 2340 aactgtagtt ttagccttgg ttcatgctct ettgeatatt tatataatet ctgacttgta 2400 atggaccctg actggaatgt gatccctcag gaacttagta gcctgagtct ttcagtagac 2460 tacactgccc agaaccctgg ccattctcaa aatgagaact tgggaatgtt taagaagaaa 2520 tcaaacatgt ttcaggaaaa ggaaatctat ggagtattat agggacattc ccatgggaat 2580 gtatcttcct ccatggcatg tcttgagggt cctttcttgt taggagttta tcctgccagc 2640 ccataaatgg actatttatt gtaagtgtag aaaatcacag agaagcagtt ttgcaccagc 2700 cttattcctg tgccttgttt tcctcttgct ctttttttac ctgtatatct aatttatatt 2760 ttcatatata ttgtgtattg attgaagtca ctttaaatcc ttcttgggaa tgacacagta 2820 tataaataag gaagaaagaa aacatgccaa gctgagcatg ctgctccaaa taaatatctg 2880 ctttccta 2888

<210> 18 <211> 2756 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 18 agccgtgggg agcgccgcag gtggggacga gccgggcggc acctgccccg ggaccagagc 60 ggacgctccc tccccgctgc gccgagggag gggaaacccg aggggttcct tggagaaggt 120 ggtgcgtcct ggggcggcag ctgaggaaga aagacgcagt gccccgaagc ccctgagctg 180 aaaagggcca gaaagggggc ggcatggcat ggcccaaact gcccgcacct tggctgctgc 240 tctgcacctg gctcccagca gggtgcctgt ccttgcttgt gacggtccag cacacagaac 300 gctatgtcac cctgtttgcc tctatcatcc tcaaatgtga ctacaccacc tctgcccagc 360 tccaggacgt ggtggtgaca tggcgcttca agtccttctg caaggaccct atctttgact 420 actactcagc gtcataccag gcagctttat ccctgggcca ggacccatcc aatgactgca 480 acgacaacca gcgggaagtt cgcatagtgg cccagcggcg ggggcagaat gagcccgtgc 540 tgggggtaga ttaccggcag cgcaagatca ccatccagaa ccgagcagat ctcgtgataa 600 atgaagtgat gtggtgggac catggagtgt attactgcac cattgaggct ccaggggaca 660 catcaggaga ccccgataag gaagtaaagc tcatcgtcct acactggctg acagtgatct 720 tcatcatcct gggagccctc ctcctcctgc tgctgattgg agtgtgctgg tgccagtgct 780 gtcctcagta ttgctgctgc tatatccgct gtccctgctg tcctgcccac tgctgctgtc 840 ctgaggaaga tttgtccctg ccgtccagcc tcccgcagat gccaatgacc cagaccacca 900 atcagcctcc catcgccaat ggtgtcctgg agtatttgga gaaagaactg cggaacctca 960 acctggccca gcctctgccc cctgacctca aaggcagatt tggccatccc tgcagcatgc 1020 tgtcctccct gggctctgag gtcgtggaac gcagaatcat ccacctgccc ccactgatca 1080 gagacctgtc atcctcaagg aggaccagtg actccctgca ccagcagtgg ctcaccccaa 1140 ttccctccag gccctgggat ctgagggagg ggagaagcca ccaccattac cctgatttcc 1200 accaggagct ccaggaccgg gggccaaagt cttgggcatt ggaaagaagg gagttggacc 1260 catcgtggag tggaaggcac cgtagctcta ggctgaatgg gtcacccata cactggtcag 1320 acagggacag cctaagcgat gtcccctcat ccagtgaggc acgctggcgg ccgagccacc 1380 ctcctttcag gagccgctgt caggagaggc cccgcaggcc cagcccccgg gagagcactc 1440 agaggcacgg gagacgaçgc aggcaccgca gctactctcc tcccttgccc tccggcctca 1500 gttcctggag ctctgaagag gacaaggaga ggcagcccca gagctggcgg gcccaccgcc 1560 gcggctcgca ctccccacac tggcccgagg agaagccgco tagctaccgo tcactggata 1620 tcactccagg caagaatagc aggaaaaaag ggagtgtgga gaggcgctcg gagaaagaca 1680 gctctcatag tggaaggagt gtggtcattt agtcaccaag cacagcacaa cttctgtggc 1740 tacttctcgg ctcctgtgtg tcatcagcat cacctaggtt tccagctgac ttgggaactg 1800 caagtctgag tctaacagtt tttggcttag attctgagaa tcaaatagaa gaattttaaa 1860 tacaagagtt tgagattggg tatagtggct cacacctgta atcacagcac tttgggaggc 1920 taagaatcac ttgagactag gagttcaaga tcagcctggg aaacatagtg agaccccgtc 1980 tctacaaaaa atataaaaat tagttaggtg tggtggcatg cacttgtagt cccagctact 2040 caagaggctg aggcagaagg atcccttgag cccaggagtg caaggctgca atgagccagg 2100 atcccatgat cacacatctg tattccagcc tgggcaatag agcaagtccc cattactaaa 2160 aaacccaaaa ggccaaaaaa caaaaaagtt agagttcgag gaattaccaa ctgtagtttt 2220 agccttggtt catgctctct tgcatattta tataatctct gacttgtaat ggaccctgac 2280 tggaatgtga tccctcagga acttagtagc ctgagtcttt cagtagacta cactgcccag 2340 aaccetggcc attctcaaaa tgagaacttg ggaatgttta agaagaaatc aaacatgttt 2400 caggaaaagg aaatctatgg agtattatag ggacattccc atgggaatgt atcttcctcc 2450 atggcatgtc ttgagggtcc tttcttgtta ggagtttatc ctgccagccc ataaatggac 2520 tatttattgt aagtgtagaa aatcacagag aagcagtttt gcaccagcct tattcctgtg 2580 ccttgttttc ctcttgctct ttttttacct gtatatctaa tttatatttt catatatatt 2640 gtgtattgat tgaagtcact ttaaatcctt cttgggaatg acacagtata taaataagga 2700 agaaagaaaa catgccaagc tgagcatgct gctccaaata aatatctgct ttccta 2756 <210> 19 <211> 2621

<212> ADN <213> Homo sapiens <40 0> 19 agccgtgggg agcgccgcag gtggggacga gccgggcggc acctgccccg ggaccagagc 60 ggacgctccc tccccgctgc gccgagggag gggaaacccg aggggttcct tggagaaggt 120 ggtgcgtcct ggggcggcag ctgaggaaga aagacgcagt gccccgaagc ccctgagctg 180 aaaagggcca gaaagggggc ggcatggcat ggcccaaact gcccgcacct tggctgctgc 240 tctgcacctg gctcccagca gggtgcctgt ccttgcttgt gacggtccag cacacagaac 300 gctatgtcac cctgtttgcc tctatcatcc tcaaatgtga ctacaccacc tctgcccagc 360 tccaggacgt ggtggtgaca tggcgcttca agtccttctg caaggaccct atctttgact 420 actactcagc gtcataccag gcagctttat ccctgggcca ggacccatcc aatgactgca 480 acgacaacca gcgggaagtt cgcatagtgg cccagcggcg ggggcagaat gagcccgtgc 540 tgggggtaga ttaccggcag cgcaagatca ccatccagaa ccccctggcc cgccaccgct 600 aeatgaagca ggcccaggcc ctaggtcctc agatgatggg aaaacccctg tactgggggg 660 cggacaggag ctcccaggtt tcatcttatc caatgcaccc gctgctgcag cgagatttgt 720 ccctgccgtc cagcctcccg cagatgccaa tgacccagac caccaatcag cctcccatcg 780 ccaatggtgt cctggagtat ttggagaaag aactgcggaa cctcaacctg gcccagcctc 840 tgccccctga cctcaaaggc agatttggcc atccctgcag catgctgtcc tccctgggct 900 ctgaggtcgt ggaacgcaga atcatccacc tgcccccact gatcagagac ctgtcatcct 960 caaggaggac cagtgactcc ctgcaccagc agtggctcac cccaattccc tccaggccct 1020 gggatctgag ggaggggaga agccaccacc attaccctga tttccaccag gagctccagg 1080 accgggggcc aaagtcttgg gcattggaaa gaagggagtt ggacccatcg tggagtggaa 1140 ggcaccgtag ctctaggctg aatgggtcac ccatacactg gtcagacagg gacagcctaa 1200 gcgatgtccc ctcatccagt gaggcacgct ggcggccgag ccaccctcct ttcaggagcc 1260 gctgtcagga gaggccccgc aggcccagcc cccgggagag cactcagagg cacgggagac 1320 gacgcaggca ccgcagctac tctcctccct tgccctccgg cctcagttcc tggagctctg 1380 aagaggacaa ggagaggcag ccccagagct ggcgggccca ccgccgcggc tcgcactccc 1440 cacactggcc cgaggagaag ccgcctagct accgctcact ggatatcact ccaggcaaga 1500 atagcaggaa aaaagggagt gtggagaggc gctcggagaa agacagctct catagtggaa 1560 ggagtgtggt catttagtca ccaagcacag cacaacttct gtggctactt ctcggctcct 1620 gtgtgtcatc agcatcacct aggtttccag ctgacttggg aactgcaagt ctgagtctaa 1680 cagtttttgg cttagattct gagaatcaaa tagaagaatt ttaaatacaa gagtttgaga 1740 ttgggtatag tggctcacac ctgtaatcac agcactttgg gaggctaaga atcacttgag 1800 actaggagtt caagatcagc ctgggaaaca tagtgagacc ccgtctctac aaaaaatata 1860 aaaattagtt aggtgtggtg gcatgcactt gtagtcccag ctactcaaga ggctgaggca 1920 gaaggatccc ttgagcccag gagtgcaagg ctgcaatgag ccaggatccc atgatcacac 1980 atctgtattc cagcctgggc aatagagcaa gtccccatta ctaaaaaacc caaaaggcca 2040 aaaaacaaaa aagttagagt tcgaggaatt accaactgta gttttagcct tggttcatgc 2100 tctcttgcat atttatataa tctctgactt gtaatggacc ctgactggaa tgtgatccct 2160 caggaactta gtagcctgag tctttcagta gactacactg cccagaaccc tggccattct 2220 caaaatgaga acttgggaat gtttaagaag aaatcaaaca tgtttcagga aaaggaaatc 2280 tatggagtat tatagggaca ttcccatggg aatgtatctt cctccatggc atgtcttgag 2340 ggtcctttct tgttaggagt ttatcctgcc agcccataaa tggactattt attgtaagtg 2400 tagaaaatca cagagaagca gttttgcacc agccttattc ctgtgccttg ttttcctctt 2460 gctctttttt tacctgtata tctaatttat attttcatat atattgtgta ttgattgaag 2520 tcactttaaa tccttcttgg gaatgacaca gtatataaat aaggaagaaa gaaaacatgc 2580 caagctgagc atgctgctcc aaataaatat ctgctttcct a 2621

<210> 20 <211> 2717 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 20 agccçtgggg agcgccgcag gtggggacga gccgggcggc acctgccccg ggaccagagc 60 ggacgctccc tccccgctgc gccgagggag gggaaacccg aggggttcct tggagaaggt 120 ggtgcgtcct ggggcggcag ctgaggaaga aagacgcagt gccccgaagc ccctgagctg 180 aaaagggcca gaaagggggc ggcatggcat ggcccaaact gcccgcacct tggctgctgc 240 tctgcacctg gctcçcagca gcataccagg cagctttatc cctgggccag gacccatcca 300 atgactgcaa cgacaaccag cgggaagttc gcatagtggc ccagcggcgg gggcagaatg 360 agcccgtgct gggggtagat taccggcagc gcaagatcac catccagaac cgagcagatc 420 tcgtgataaa tgaagtgatg tggtgggacc atggagtgta ttactgcacc attgaggctc 480 caggggacac atcaggagac cccgataagg aagtaaagct catcgtccta cactggctga 540 cagtgatctt catcatcctg ggagccctcc tcctcctgct gctgattgga gtgtgctggt 600 gccagtgctg tcctcagtat tgctgctgct atatccgctg tccctgctgt cctgcccact 660 gctgctgtcc tgaggaagcc ctggcccgcc accgctacat gaagcaggcc caggccctag 720 gtcctcagat gatgggaaaa cccctgtact ggggggcgga caggagctcc caggtttcat 780 cttatccaat gcacccgctg ctgcagcgag atttgtccct gccgtccagc ctcccgcaga 840 tgccaatgac ccagaccacc aatcagcctc ccatcgccaa tggtgtcctg gagtatttgg 900 agaaagaact gcggaacctc aacctggccc agcctctgco ccctgacctc aaaggcagat 960 ttggccatcc ctgcagcatg ctgtcctccc tgggctctga ggtcgtggaa cgcagaatca 1020 tccacctgcc cccactgatc agagacctgt catcctcaag gaggaccagt gactccctgc 1080 accagcagtg gctcacccca attccctcca ggccctggga tctgagggag gggagaagcc 1140 accaccatta ccctgatttc caccaggagc tccaggaccg ggggccaaag tcttgggcat 1200 tggaaagaag ggagttggac ccatcgtgga gtggaaggca ccgtagctct aggctgaatg 1260 ggtcacccat acactggtca gacagggaca gcctaagcga tgtcccctca tccagtgagg 1320 cacgctggcg gccgagccac cctcctttca ggagccgctg tcaggagagg ccccgcaggc 1380 ccagcccccg ggagagcact cagaggcacg ggagacgacg caggcaccgc agctactctc 1440 ctcccttgcc ctccggcctc agttcctgga gctctgaaga ggacaaggag aggcagcccc 1500 agagctggcg ggcccaccgc cgcggctcgc actccccaca ctggcccgag gagaagccgc 1560 ctagctaccg ctcactggat atcactccag gcaagaatag caggaaaaaa gggagtgtgg 1620 agaggcgctc ggagaaagac agctctcata gtggaaggag tgtggtcatt tagtcaccaa 1680 gcacagcaca acttctgtgg ctacttctcg gctcctgtgt gtcatcagca tcacctaggt 1740 ttccagctga cttgggaact gcaagtctga gtctaacagt ttttggctta gattctgaga 1800 atcaaataga agaattttaa atacaagagt ttgagattgg gtatagtggc tcacacctgt 1860 aatcacagca ctttgggagg ctaagaatca cttgagacta ggagttcaag atcagcctgg 1920 gaaacatagt gagaccccgt ctctacaaaa aatataaaaa ttagttaggt gtggtggcat 1980 gcacttgtag tcccagctac tcaagaggct gaggcagaag gatcccttga gcccaggagt 2040 gcaaggctgc aatgagccag gatcccatga tcacacatct gtattccagc ctgggcaata 2100 gagcaagtcc ccattactaa aaaacccaaa aggccaaaaa acaaaaaagt tagagttcga 2160 ggaattacca actgtagttt tagccttggt tcatgctctc ttgcatattt atataatctc 2220 tgacttgtaa tggaccctga ctggaatgtg atccctcagg aacttagtag cctgagtctt 2280 tcagtagact acactgccca gaaccctggc cattctcaaa atgagaactt gggaatgttt 2340 aagaagaaat caaacatgtt tcaggaaaag gaaatctatg gagtattata gggacattcc 2400 catgggaatg tatcttcctc catggcatgt cttgagggtc ctttcttgtt aggagtttat 2460 cctgccagcc cataaatgga ctatttattg taagtgtaga aaatcacaga gaagcagttt 2520 tgcaccagcc ttattcctgt gccttgtttt cctcttgctc tttttttacc tgtatatcta 2580 atttatattt tcatatatat tgtgtattga ttgaagtcac tttaaatcct tcttgggaat 2640 gacacagtat ataaataagg aagaaagaaa acatgccaag ctgagcatgc tgctccaaat 2700 aaatatotgc tttccta 2717

<210> 21 <211> 502 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 21

Met Ala Trp Pro Lys Leu Pro Ala Pro Trp Leu Leu Leu Cys Thr Trp 15 10 15

Leu Pro Ala Gly Cys Leu Ser Leu Leu Val Thr Val Gin His Thr Glu 20 25 30

Arg Tyr Val Thr Leu Phe Ala Ser lie lie Leu Lys Cys Asp Tyr Thr 35 40 45

Thr Ser Ala Gin Leu Gin Asp Val Val Val Thr Trp Arg Phe Lys Ser 50 55 60

Phe Cys Lys Asp Pro lie Phe Asp Tyr Tyr Ser Ala Ser Tyr Gin Ala 65 10 75 80

Ala Leu Ser Leu Gly Gin Asp Pro Ser Asn Asp Cys Asn Asp Asn Gin 85 90 95

Arg Glu Val Arg lie Val Ala Gin Arg Arg Gly Gin Asn Glu Pro Val 100 105 110

Leu Gly Val Asp Tyr Arg Gin Arg Lys lie Thr lie Gin Asn Arg Ala 115 120 125

Asp Leu Val lie Asn Glu Val Met Trp Trp Asp His Gly Val Tyr Tyr 130 135 140

Cys Thr lie Glu Ala Pro Gly Asp Thr Ser Gly Asp Pro Asp Lys Glu 145 150 155 160

Val Lys Leu lie val Leu His Trp Leu Thr Val lie Phe lie lie Leu 165 170 175

Gly Ala Leu Leu Leu Leu Leu Leu lie Gly Val Cys Trp Cys Gin Cys 180 185 190

Cys Pro Gin Tyr Cys Cys Cys Tyr lie Arg Cys Pro Cys Cys Pro Ala 195 200 205

His Cys Cys Cys Pro Glu Glu Asp Leu Ser Leu Pro Ser ser Leu Pro 210 215 220

Gin Met Pro Met Thr Gin Thr Thr Asn Gin Pro Pro He Ala Asn Gly 225 230 235 240

Val Leu Glu Tyr Leu Glu Lys Glu Leu Arg Asn Leu Asn Leu Ala Gin 245 250 255

Pro Leu Pro Pro Asp Leu Lys Gly Arg Phe Gly His Pro Cys Ser Met 260 265 270

Leu Ser Ser Leu Gly Ser Glu Val Val Glu Arg Arg lie lie His Leu 275 280 285

Pro Pro Leu lie Arg Asp Leu Ser Ser Ser Arg Arg Thr Ser Asp Ser 290 295 300

Leu His Gin Gin Trp Leu Thr Pro lie Pro Ser Arg Pro Trp Asp Leu 305 310 315 320

Arg Glu Gly Arg Ser His His His Tyr Pro Asp Phe His Gin Glu Leu 325 330 335

Gin Asp Arg Gly Pro Lys Ser Trp Ala Leu Glu Arg Arg Glu Leu Asp 340 345 350

Pro Ser Trp Ser Gly Arg His Arg Ser Ser Arg Leu Asn Gly Ser Pro 355 360 365 lie His Trp Ser Asp Arg Asp Ser Leu Ser Asp Val Pro Ser Ser Ser 370 375 380

Glu Ala Arg Trp Arg Pro Ser His Pro Pro Phe Arg Ser Arg Cys Gin 385 390 395 400

Glu Arg Pro Arg Arg Pro Ser Pro Arg Glu Ser Thr Gin Arg His Gly 405 410 415

Arg Arg Arg Arg His Arg Ser Tyr Ser Pro Pro Leu Pro Ser Gly Leu 420 425 430

Ser Ser Trp Ser Ser Glu Glu Asp Lys Glu Arg Gin Pro Gin Ser Trp 435 440 445

Arg Ala His Arg Arg Gly Ser His Sèr Pro His Trp Pro Glu Glu Lys 450 455 460

Pro Pro Ser Tyr Arg Ser Leu Asp lie Thr Pro Gly Lys Asn Ser Arg 465 470 475 480

Lys Lys Gly Ser Val Glu Arg Arg Ser Glu Lys Asp Ser Ser His Ser 485 490 495

Gly Arg Ser Val Val lie 500

<210> 22 <211> 546 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 22

Met Ala Trp Pro Lys Leu Pro Ala Pro Trp Leu Leu Leu Cys Thr Trp 15 10 15

Leu Pro Ala Gly Cys Leu Ser Leu Leu val Thr val Gin His Thr Glu 20 25 30

Arg Tyr Val Thr Leu Phe Ala Ser He lie Leu Lys Cys Asp Tyr Thr 35 40 45

Thr Ser Ala Gin Leu Gin Asp Val Val Val Thr Trp Arg Phe Lys Ser 50 55 60

Phe Cys Lys Asp Pro lie Phe Asp Tyr Tyr Ser Ala Ser Tyr Gin Ala 65 70 75 80

Ala Leu Ser Leu Gly Gin Asp Pro Ser Asn Asp Cys Asn Asp Asn Gin 85 90 95

Arg Glu Val Arg lie Val Ala Gin Arg Arg Gly Gin Asn Glu Pro Val 100 105 110

Leu Gly Val Asp Tyr Arg Gin Arg Lys He Thr He Gin Asn Arg Ala 115 120 125

Asp Leu Val lie Asn Glu Val Met Trp Trp Asp His Gly Val Tyr Tyr 130 135 140

Cys Thr lie Glu Ala Pro Gly Asp Thr Ser Gly Asp Pro Asp Lys Glu 145 150 155 160

Val Lys Leu lie Val Leu His Trp Leu Thr Val lie Phe lie He Leu 165 170 175

Gly Ala Leu Leu Leu Leu Leu Leu lie Gly val Cys Trp Cys Gin Cys 180 185 190

Cys Pro Gin Tyr Cys Cys Cys Tyr lie Arg Cys Pro Cys Cys Pro Ala 195 200 205

His Cys Cys Cys Pro Glu Glu Ala Leu Ala Arg His Arg Tyr Met Lys 210 215 220

Gin Ala Gin Ala Leu Gly Pro Gin Met Met Gly Lys Pro Leu Tyr Trp 225 230 235 240

Gly Ala Asp Arg Ser Ser Gin Val Ser Ser Xyr Pro Met His Pro Leu 245 250 255

Leu Gin Arg Asp Leu Ser Leu Pro Ser Ser Leu Pro Gin Met Pro Met 260 265 270

Thr Gin Thr Thr Asn Gin Pro Pro He Ala Asn Gly Val Leu Glu Tyr 275 280 285

Leu Glu Lys Glu Leu Arg Asn Leu Asn Leu Ala Gin Pro Leu Pro Pro 290 295 300

Asp Leu Lys Gly Arg Phe Gly His Pro Cys Ser Met Leu Ser Ser Leu 305 310 315 320

Gly Ser Glu Val Val Glu Arg Arg He He His Leu Pro Pro Leu lie 325 330 335

Arg Asp Leu Ser Ser Ser Arg Arg Thr Ser Asp Ser Leu His Gin Gin 340 345 350

Trp Leu Thr Pro He Pro Ser Arg Pro Trp Asp Leu Arg Glu Gly Arg 355 360 365

Ser His His His Tyr Pro Asp Phe His Gin Glu Leu Gin Asp Arg Gly 370 375 380

Pro Lys Ser Trp Ala Leu Glu Arg Arg Glu Leu Asp Pro Ser Trp Ser 385 390 395 400

Gly Arg His Arg Ser Ser Arg Leu Asn Gly Ser Pro lie His Trp Ser 405 410 415

Asp Arg Asp Ser Leu Ser Asp Val Pro Ser Ser Ser Glu Ala Arg Trp 420 425 430

Arg Pro Ser His Pro Pro Phe Arg Ser Arg Cys Gin Glu Arg Pro Arg 435 440 445

Arg Pro Ser Pro Arg Glu Ser Thr Gin Arg His Gly Arg Arg Arg Árg 450 455 460

His Arg Ser Tyr Ser Pro Pro Leu Pro Ser Gly Leu Ser Ser Trp Ser 465 470 475 480 t

Ser Glu Glu Asp Lys Glu Arg Gin Pro Gin Ser Trp Arg Ala His Arg 485 490 495

Arg Gly Ser His Ser Pro His Trp Pro Glu Glu Lys Pro Pro Ser Tyr 500 505 510

Arg Ser Leu Asp lie Thr Pro Gly Lys Asn Ser Arg Lys Lys Gly Ser 515 520 525

Val Glu Arg Arg Ser Glu Lys Asp Ser Ser His Ser Gly Arg Ser Val 530 535 540

Val He 545

<210> 23 <211> 457 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 23

Met Ala Trp Pro Lys Leu Pro Ala Pro Trp Leu Leu Leu Cys Thr Trp 15 10 15

Leu Pro Ala Gly Cys Leu Ser Leu Leu val Thr val Gin His Thr Glu 20 25 30

Arg Tyr Val Thr Leu Phe Ala Ser He lie Leu Lys Cys Asp Tyr Thr 35 40 45

Tin- Ser Ala Gin leu Gin Asp Val Val Val Thr Trp Arg Phe Lys Ser 50 55 60

Phe Cys Lys Asp Pro lie Phe Asp Tyr Tyr Ser Ala Ser Tyr Gin Ala 65 70 75 80

Ala Leu Ser Leu Gly Gin Asp Pro Ser Asn Asp Cys Asn Asp Asn Gin 85 90 95

Arg Glu val Arg He val Ala Gin Arg Arg Gly Gin Asn Glu Pro val 100 105 110

Leu Gly Val Asp Tyr Arg Gin Arg Lys lie Thr He Gin Asn Pro Leu 115 120 125

Ala Arg His Arg Tyr Met Lys Gin Ala Gin Ala Leu Gly Pro Gin Met 130 135 140

Met Gly Lys Pro Leu Tyr Trp Gly Ala Asp Arg Ser Ser Gin Val Ser 145 150 155 160

Ser Tyr Pro Met His Pro Leu Leu Gin Arg Asp Leu Ser Leu Pro Ser 165 170 175

Ser Leu Pro Gin Met Pro Met Thr Gin Thr Thr Asn Gin Pro Pro lie 180 185 190

Ala Asn Gly Val Leu Glu Tyr Leu Glu Lys Glu Leu Arg Asn Leu Asn 195 200 205

Leu Ala Gin Pro Leu Pro Pro Asp Leu Lys Gly Arg Phe Gly His Pro 210 215 220

Cys Ser Met Leu Ser Ser Leu Gly Ser Glu Val Val Glu Arg Arg lie 225 230 235 240 lie His Leu Pro Pro Leu lie Arg Asp Leu Ser Ser Ser Arg Arg Thr 245 250 255

Ser Asp Ser Leu His Gin. Gin Trp Leu Thr Pro lie Pro Ser Arg Pro 260 265 270

Trp Asp Leu Axg Glu Gly Arg Ser His His His Tyr Pro Asp Phe His 275 280 285

Gin Glu Leu Gin Asp Arg Gly Pro Lys Ser Trp Ala Leu Glu Arg Arg 290 295 300

Glu Leu Asp Pro Ser Trp Ser Gly Arg His Arg Ser Ser Arg Leu Asn 305 310 315 320

Gly Ser Pro lie His Trp Ser Asp Arg Asp Ser Leu Ser Asp val Pro 325 330 335

Ser Ser Ser Glu Ala Arg Trp Arg Pro Ser His Pro Pro Phe Arg Ser 340 345 350

Arg Cys Gin Glu Arg Pro Arg Arg Pro Ser Pro Arg Glu Ser Thr Gin 355 360 365

Arg His Gly Arg Arg Arg Arg His Arg Ser Tyr Ser Pro Pro Leu Pro 370 375 380

Ser Gly Leu Ser Ser Trp Ser Ser Glu Glu Asp Lys Glu Arg Gin Pro 385 390 395 400

Gin Ser Trp Arg Ala His Arg Arg Gly Ser His Ser Pro His Trp Pro 405 410 415

Glu Glu Lys Pro Pro Ser Tyr Arg Ser Leu Asp lie Thr Pro Gly Lys 420 425 430

Asn Ser Arg Lys Lys Gly Ser Val Glu Arg Arg Ser Glu Lys Asp Ser 435 440 445

Ser His Ser Gly Arg Ser Val Val lie 450 455

<210> 24 <211> 489 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 24

Met Ala Trp Pro Lyg Leu Pro Ala Pro Trp Leu Leu Leu Cys Thr Irp 1 5 10 15

Leu Pro Ala Ala Tyr Gin Ala Ala Leu Ser Leu Gly Gin Asp Pro Ser 20 25 30

Asn Asp Cys Asn Asp Asn Gin Arg Glu Val Arg lie Val Ala Gin Arg 35 40 45

Arg Gly Gin Asn Glu Pro Val Leu Gly Val Asp Tyr Arg Gin Arg Lys 50 55 60 lie Thr He Gin Asn Arg Ala Asp Leu Val lie Asn Glu Val Met Trp 65 70 75 80

Trp Asp His Gly Val Tyr Tyr Cys Thr lie Glu Ala Pro Gly Asp Thr 85 90 95

Ser Gly Asp Pro Asp Lys Glu Val Lys Leu lie Val Leu His Trp Leu 100 105 110

Thr Val lie Phe He lie Leu Gly Ala Leu Leu Leu Leu Leu Leu lie 115 120 125

Gly Val Cys Trp Cys Gin Cys Cys Pro Gin Tyr Cys Cys Cys Tyr lie 130 135 140

Arg Cys Pro Cys Cys Pro Ala His Cys Cys Cys Pro Glu Glu Ala Leu 145 150 155 160

Ala Arg His Arg Tyr Met Lys Gin Ala Gin Ala Leu Gly Pro Gin Met 165 170 175

Met Gly Lys Pro Leu Tyr Trp Gly Ala Asp Arg Ser Ser Gin Val Ser 180 185 190

Ser Tyr Pro Met His Pro Leu Leu Gin Arg Asp Leu Ser Leu Pro Ser 195 200 205

Ser Leu Pro Gin Met Pro Met Thr Gin Thr Thr Asn Gin Pro Pro lie 210 215 220

Ala Asn Gly Val Leu Glu Tyr Leu Glu Lys Glu Leu Arg Asn Leu Asn 225 230 235 240

Leu Ala Gin Pro Leu Pro Pro Asp Leu Lys Gly Arg Phe Gly His Pro 245 250 255

Cys Ser Met Leu Ser Ser Leu Gly Ser Glu Val Val Glu Arg Arg lie 260 265 270 lie His Leu Pro Pro Leu lie Arg Asp Leu Ser Ser Ser Arg Arg Thr 275 280 285

Ser Asp Ser Leu His Gin Gin Trp Leu Thr Pro lie Pro Ser Arg Pro 290 295 300

Trp Asp Leu Arg Glu Gly Arg Ser His His His Tyr Pro Asp Phe His 305 310 315 320

Gin Glu Leu Gin Asp Arg Gly Pro Lys Ser Trp Ala Leu Glu Arg Arg 325 330 335

Glu Leu Asp Pro Ser Trp Ser Gly Arg His Arg Ser Ser Arg Leu Asn 340 345 350

Gly Ser Pro lie His Trp Ser Asp Arg Asp Ser Leu Ser Asp Val Pro 355 360 365

Ser Ser Ser Glu Ala Arg Trp Arg Pro Ser His Pro Pro Phe Arg Ser 370 375 380

Arg Cys Gin Glu Arg Pro Arg Arg Pro Ser Pro Arg Glu Ser Thr Gin 385 390 395 400

Arg His Gly Arg Arg Arg Arg His Arg Ser Tyr Ser Pro Pro Leu Pro 405 410 415

Ser Gly Leu Ser Ser Trp Ser Ser Glu Glu Asp Lys Glu Arg Gin Pro 420 425 430

Gin Ser Trp Arg Ala His Arg Arg Gly Ser His Ser Pro His Trp Pro 435 440 445

Glu Glu Lys Pro Pro Ser Tyr Arg Ser Leu Asp lie Thr Pro Gly Lys 450 455 460

Asn Ser Arg Lys Lys Gly Ser Val Glu Arg Arg Ser Glu Lys Asp Ser 465 470 475 480

Ser His Ser Gly Arg Ser Val Val lie 485

<210> 25 <211> 2148 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 25 acctcactgc taatttccct agcaaataaa ccagcagctg ctggtccaag ttaccactga 60 gaacagggca ctgcatgcat gggacaggat gctttcatgg agcccttcgg tgacacactt 120 ggggtctttc agtgcaaaat atacctcctt ctcttcggtg cttgctcggg gctgaaggtg 180 acagtgccat cacacactgt ccatggcgtc agaggtcagg ccctctacct acccgtccac 240 tatggcttcc acactccagc atcagacatc cagatcatat ggctatttga gagaccccac 300 acaatgccca aatacttact gggctctgtg aataagtctg tggttcctga cttggaatac 360 caacacaagt tcaccatgat gccacccaat gcatctctgc ttatcaaccc actgcagttc 420 cctgatgaag gcaattacat cgtgaaggtc aacattcagg gaaatggaac tctatctgcc 480 agtcagaaga tacaagtcac ggttgatgat cctgtcacaa agccagtggt gcagattcat 540 cctccctctg gggctgtgga gtatgtgggg aacatgaccc tgacatgcca tgtggaaggg 600 ggcactcggc tagcttacca atggctaaaa aatgggagac ctgtccacac cagctccacc 660 tactcctttt ctccccaaaa caataccctt catattgctc cagtaaccaa ggaagacatt 720 gggaattaca gctgcctggt gaggaaccct gtcagtgaaa tggaaagtga tatcattatg 780 cccatcatat attatggacc ttatggactt caagtgaatt ctgataaagg gctaaaagta 840 ggggaagtgt ttactgttga ccttggagag gccatcctat ttgattgttc tgctgattct 900 catcccccca acacctactc ctggattagg aggactgaca atactacata tatcattaag 960 catgggcctc gcttagaagt tgcatctgag aaagtagccc agaagacaat ggactatgtg 1020 tgctgtgctt acaacaacat aaccggcagg caagatgaaa ctcatttcac agttatcatc 1080 acttccgtag gactggagaa gcttgcacag aaaggaaaat cattgtcacc tttagcaagt 1140 ataactggaa tatcactatt tttgattata tccatgtgtc ttctcttcct atggaaaaaa 1200 tatcaaccct acaaagttat aaaacagaaa ctagaaggca ggccagaaac agaatacagg 1260 aaagctcaaa cattttcagg ccatgaagat gctctggatg acttcggaat atatgaattt 1320 gttgcttttc cagatgtttc tggtgtttcc aggatcccaa gcaggtctgt tccagcctct 1380 gattgtgtat cggggcaaga tttgcacagt acagtgtatg aagttattca gcacatccct 1440 gcccagcagc aagaccatcc agagtgaact ttcatgggct aaacagtaca ttcgagtgaa 1500 attctgaaga aacattttaa ggaaaaacag tggaaaagta tattaatctg gaatcagtga 1560 agaaaccaag accaacacct cttactcatt attcctttac atgcagaata gaggcattta 1620 tgcaaattga actgcaggtt tttcagcata tacacaatgt cttgtgcaac agaaaaacat 1680 gttggggaaa tattcctcag tggagagtcg ttctcatgct gacggggaga acgaaagtga 1740 caggggtttc ctcgtaagtt ttgtatgaaa tatctctaca aacctcaatt agttctactc 1800 tacactttca ctatcatcaa cactgagact atcctgtctc acctacaaat gtggaaactt 1860 tacattgttc gatttttcag cagactttgt tttattaaat ttttattagt gttaagaatg 1920 ctaaatttat gtttcaattt tatttccaaa tttctatctt gttatttgta caacaaagta 1980 ataaggatgg ttgtcacaaa aacaaaacta tgccttctct tttttttcaa tcaccagtag 2040 tatttttgag aagacttgtg aacacttaag gaaatgacta ttaaagtctt atttttattt 2100 ttttcaagga aagatggatt caaataaatt attctgtttt tgctttta 2148

<210> 26 <211> 2135 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 26 gtaaccagta ctagaatagt cagtacctag aagccactct tctttgaaaa ggattatcac 60 ctgatcaggt tctctctgca tttgcccctt tagattgtga aatgtggctc aaggtcttca 120 caactttcct ttcctttgca acaggtgctt gctcggggct gaaggtgaca gtgccatcac 180 acactgtcca tggcgtcaga ggtcaggccc tctacctacc cgtccactat ggcttccaca 240 ctccagcatc agacatccag atcatatggc tatttgagag accccacaca atgcccaaat 300 acttactggg ctctgtgaat aagtctgtgg ttcctgactt ggaataccaa cacaagttca 360 ccatgatgcc acccaatgca tctctgctta tcaacccact gcagttccct gatgaaggca 420 attacatcgt gaaggtcaac attcagggaa atggaactot atctgccagt, cagaagatac 4 80 aagtcacggt tgatgatcct gtcacaaagc cagtggtgca gattcatcct ccctctgggg 540 ctgtggagta tgtggggaac atgaccctga catgccatgt ggaagggggc actcggctag 600 cttaccaatg gctaaaaaat gggagacctg tccacaccag ctccacctac tecttttctc 660 cccaaaacaa tacccttcat attgctccag taaccaagga agacattggg aattacagct 720 gcctggtgag gaaccctgtc agtgaaatgg aaagtgatat cattatgccc atcatatatt 780 atggacctta tggacttcaa gtgaattctg ataaagggct aaaagtaggg gaagtgttta 840 ctgttgacct tggagaggcc atcctatttg attgttctgc tgattctcat ccccccaaca 900 cctactcctg gattaggagg actgacaata ctacatatat cattaagcat gggcctcgct 960 tagaagttgc atctgagaaa gtagcccaga agacaatgga ctatgtgtgc tgtgcttaca 1020 acaacataac cggcaggcaa gatgaaactc atttcacagt tatcatcact tccgtaggac 1080 tggagaagct tgcacagaaa ggaaaatcat tgtcaccttt agcaagtata actggaatat 1140 cactattttt gattatatcc atgtgtcttc tcttcctatg gaaaaaatat caaccctaca 1200 aagttataaa acagaaacta gaaggcaggc cagaaacaga atacaggaaa gctcaaacat 1260 tttcaggcca tgaagatgct ctggatgact tcggaatata tgaatttgtt gcttttccag 1320 atgtttctgg tgtttccagg atcccaagca ggtctgttcc agcctctgat tgtgtatcgg 1380 ggcaagattt gcacagtaca gtgtatgaag ttattcagca catccctgcc cagcagcaag 1440 accatccaga gtgaactttc atgggctaaa cagtacattc gagtgaaatt ctgaagaaac 1500 attttaagga aaaacagtgg aaaagtatat taatctggaa tcagtgaaga aaccaagacc 1560 aacacctctt actcattatt cctttacatg cagaatagag gcatttatgc aaattgaact 1620 gcaggttttt cagcatatac acaatgtctt gtgcaacaga aaaacatgtt ggggaaatat 1680 tcctcagtgg agagtcgttc tcatgctgac ggggagaacg aaagtgacag gggtttcctc 1740 gtaagttttg tatgaaatat ctctacaaac ctcaattagt tctactctac actttcacta 1800 tcatcaacac tgagactatc ctgtctcacc tacaaatgtg gaaactttac attgttcgat 1860 ttttcagcag actttgtttt attaaatttt tattagtgtt aagaatgcta aatttatgtt 1920 tcaattttat ttccaaattt ctatcttgtt atttgtacaa caaagtaata aggatggttg 1980 tcacaaaaac aaaactatgc cttctctttt ttttcaatca ccagtagtat ttttgagaag 2040 acttgtgaac acttaaggaa atgactatta aagtcttatt tttatttttt tcaaggaaag 2100 atggattcaa ataaattatt ctgtttttgc tttta 2135

<210> 27 <211> 2109 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 27 acctcactgc taatttccct agcaaataaa ccagcagctg ctggtccaag ttaccactga 60 gaacagggca ctgcatgcat gggacaggat gctttcatgg agcccttcgg tgacacactt 120 ggggtctttc agtgcaaaat atacctcctt ctcttcggtg cttgctcggg gctgaaggtg 180 acagtgecat cacacactgt ccatggcgtc agaggtcagg ccctctacct acccgtccac 240 tatggcttcc acactccagc atcagacatt cagatcatat ggctatttga gagaccccac 300 acaatgccca aatacttact gggctctgtg aataagtctg tggttcctga cttggaatac 360 caacacaagt tcaccatgat gccacccaat gcatctctgc ttatcaaccc actgcagttc 420 cctgatgaag gcaattacat cgtgaaggtc aacattcagg gaaatggaac tctatctgcc 480 agtcagaaga tacaagtcac ggttgatgat cctgtcacaa agccagtggt gcagattcat 540 cctccctctg gggctgtgga gtatgtgggg aacatgaccc tgacatgcca tgtggaaggg 600 ggcactcggc tagcttacca atggctaaaa aatgggagac ctgtccacac cagctccacc 660 tactcctttt ctccccaaaa caataccctt catattgctc cagtaaccaa ggaagacatt 720 gggaattaca gctgcctggt gaggaaccct gtcagtgaaa tggaaagtga tatcattatg 780 cccatcatat attatggacc ttatggactt caagtgaatt ctgataaagg gctaaaagta 840 ggggaagtgt ttactgttga ccttggagag gccatcctat ttgattgttc tgctgattct 900 catcccccca acacctactc ctggattagg aggactgaca atactacata tatcattaag 960 catgggcctc gcttagaagt tgcatctgag aaagtagccc agaagacaat ggactatgtg 1020 tgctgtgctt acaacaacat aaccggcagg caagatgaaa ctcatttcac agttatcatc 1080 acttccgtag gactggagaa gcttgcacag aaaggaaaat cattgtcacc tttagcaagt 1140 ataactggaa tatcactatt tttgattata tecatgtgtc ttctcttcct atggaaaaaa 1200 tatcaaccct acaaagttat aaaacagaaa ctagaaggca ggccagaaac agaatacagg 1260 aaagctcaaa cattttcagg ccatgaagat gctctggatg acttcggaat atatgaattt 1320 gttgcttttc cagatgtttc tggtgtttcc aggatcccaa gcaggtctgt tccagcctct 1380 gattgtgtat cggggcaaga tttgcacagt acagtgtatg aagttattca gcacatccct 1440 gcccagcagc aagaccatcc agagtgaact ttcatgggct aaacagtaca ttcgagtgaa 1500 attctgaaga aacattttaa ggaaaaacag tggaaaagta tattaatctg gaatcagtga 1560 agaaaccaag accaacacct cttactcatt attcctttac atgcagaata gaggcattta 1620 tgcaaattga actgcaggtt tttcagcata tacacaatgt cttgtgcaac agaaaaacat 1680 gttggggaaa tattcctcag tggagagtcg ttctcatgct gacggggaga acgaaagtga 1740 caggggtttc ctcgtaagtt ttgtatgaaa tatctctaca aacctcaatt agttctactc 1800 tacactttca ctatcatcaa cactgagact atcctgtctc acctacaaat gtggaaactt 1860 tacattgttc gatttttcag cagactttgt tttattaaat ttttattagt gttaagaatg 1920 ctaaatttat gtttcaattt tatttccaaa tttctatctt gttatttgta caacaaagta 1980 ataaggatgg ttgtcacaaa aacaaaacta tgccttctct tttttttcaa tcaccagtag 2040 tatttttgag aagacttgtg aacacttaag gaaatgacta ttaaagtctt atttttattt 2100 ttttcaagg 2109

<210> 28 <211> 2110 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 28 gtaaccagta ctagaatagt cagtacctag aagccactct tctttgaaaa ggattatcac 60 ctgatcaggt tctctctgca tttgcccctt tagattgtga aatgtggctc aaggtcttca 120 caactttcct ttcctttgca acaggtgctt gctcggggct gaaggtgaca gtgccatcac 180 acactgtcca tggcgtcaga ggtcaggccc tctacctacc cgtccactat ggcttccaca 240 ctccagcatc agacatccag atcatatggc tatttgagag accccacaca atgcccaaat 300 acttactggg ctctgtgaat aagtctgtgg ttcctgactt ggaataccaa cacaagttca 360 ccatgatgcc acccaatgca tctctgctta tcaacccact gcagttccct gatgaaggca 420 attacatcgt gaaggtcaac attcagggaa atggaactct atctgccagt cagaagatac 480 aagtcacggt tgatgatcct gtcacaaagc cagtggtgca gattcatcct ccctctgggg 540 ctgtggagta tgtggggaac atgaccctga catgccatgt ggaagggggc actcggctag 600 cttaccaatg gctaaaaaat gggagacctg tccacaccag ctccacctac tccttttetc 660 cccaaaacaa tacccttcat attgctccag taaccaagga agacattggg aattacagct 720 gcctggtgag gaaccctgtc agtgaaatgg aaagtgatat cattatgccc atcatatatt 780 atggacctta tggacttcaa gtgaattctg ataaagggct aaaagtaggg gaagtgttta 840 ctgttgacct tggagaggcc atcctatttg attgttctgc tgattctcat ccccccaaca 900 cctactcctg gattaggagg actgacaata ctacatatat cattaagcat gggcctcgct 960 tagaagttgc atctgagaaa gtagcccaga agacaatgga ctatgtgtgc tgtgcttaca 1020 acaacataac cggcaggcaa gatgaaactc atttcacagt tatcatcact tccgtaggac 1080 tggagaagct tgcacagaaa ggaaaatcat tgtcaccttt agcaagtata actggaatat 1140 cactattttt gattatatcc atgtgtcttc tcttcctatg gaaaaaatat caaccctaca 1200 aaggceagaa acagaataca ggaaagctca aacattttca ggccatgaag atgctctgga 1260 tgacttcgga atatatgaat ttgttgcttt tccagatgtt tctggtgttt ccaggatccc 1320 aagcaggtct gttceageet ctgattgtgt atcggggeaa gatttgcaca gtacagtgta 1380 tgaagttatt cagcacatcc ctgcccagca gcaagaccat ccagagtgaa ctttcatggg 1440 ctaaacagta cattcgagtg aaattctgaa gaaacatttt aaggaaaaac agtggaaaag 1500 tatattaatc tggaatcagt gaagaaacca agaccaacac ctcttactca ttattccttt 1560 acatgcagaa tagaggcatt tatgcaaatt gaactgcagg tttttcagca tatacacaat 1620 gtcttgtgca acagaaaaac atgttgggga aatattcctc agtggagagt cgttctcatg 1680 etgacgggga gaacgaaagt gacaggggtt tcctcgtaag ttttgtatga aatatctcta 1740 caaacctcaa ttagttctac tctacacttt cactatcatc aacactgaga ctatcctgtc 1800 tcacctacaa atgtggaaac tttacattgt tcgatttttc agcagacttt gttttattaa 1860 atttttatta gtgttaagaa tgctaaattt atgtttcaat tttatttcea aatttctatc 1920 ttgttatttg tacaacaaag taataaggat ggttgtcaca aaaacaaaac tatgccttct 1980 cttttttttc aatcaccagt agtatttttg agaagacttg tgaacactta aggaaatgac 2040 tattaaagtc ttatttttat ttttttcaag gaaagatgga ttcaaataaa ttattctgtt 2100 tttgctttta 2110

<210> 29 <211> 2189 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 29 gtaaccagta ctagaatagt cagtacctag aagccactct tctttgaaaa ggattatcac 60 ctgatcaggt tctctctgca tttgcccctt tagattgtga aatgtggctc aaggtcttca 120 caactttcct ttcctttgca acaggtgctt gctcggggct gaaggtgaca gtgccatcac 180 acactgtcca tggcgtcaga ggtcaggccc tctacctacc cgtccactat ggcttccaca 240 ctccagcatc agacatccag atcatatggc tatttgagag accccacaca atgcccaaat 300 acttactggg ctctgtgaat aagtctgtgg ttcctgactt ggaataccaa cacaagttca 360 ccatgatgcc acccaatgca tctctgctta tcaacccact gcagttccct gatgaaggca 420 attacatcgt gaaggtcaac attcagggaa atggaactct atctgccagt cagaagatac 480 aagtcacggt tgatgatcct gtcacaaagc cagtggtgca gattcatcct ccctctgggg 540 ctgtggagta tgtggggaac atgaccctga catgccatgt ggaagggggc actcggctag 600 cttaccaatg gctaaaaaat gggagacctg tccacaccag ctccacctae tccttttctc 660 cccaaaacaa tacccttcat attgctccag taaccaagga agacattggg aattacagct 720 gcctggtgag gaaccctgtc agtgaaatgg aaagtgatat cattatgccc atcatatatt 780 atggacctta tggacttcaa gtgaattctg ataaagggct aaaagtaggg gaagtgttta 840 ctgttgacct tggagaggcc atcctatttg attgttctge tgattctcat ccccccaaca 900 cctactcctg gattaggagg actgacaata ctacatatat cattaagcat gggcctcgct 960 tagaagttgc atctgagaaa gtagcccaga agacaatgga ctatgtgtgc tgtgcttaca 1020 acaacataac cggcaggcaa gatgaaactc atttcacagt tatcatcact tccgtaggac 1080 tggagaagct tgeacagaaa ggaaaatcat tgtcaccttt agcaagtata actggaatat 1140 cactattttt gattatatcc atgtgtcttc tcttcctatg gaaaaaatat caaccctaca 1200 aagttataaa acagaaacta gaaggcaggc cagaaacaga atacaggaaa gctcaaacat 1260 tttcaggcca tgaagatgct ctggatgact tcggaatata tgaatttgtt gcttttccag 1320 atgtttctgg tgtttccagg gttggttttc ctagtggctg attaaccgag aagtagaatt 1380 ctgcttcacc agagatccca agcaggtctg ttccagcctc tgattgtgta tcggggcaag 1440 atttgcacag tacagtgtat gaagttattc agcacatccc tgcccagcag caagaccatc 1500 cagagtgaac tttcatgggc taaacagtac attcgagtga aattctgaag aaacatttta 1560 aggaaaaaca gtggaaaagt atattaatct ggaatcagtg aagaaaccaa gaccaacacc 1620 tcttactcat tattccttta catgcagaat agaggcattt atgcaaattg aactgcaggt 1680 ttttcagcat atacacaatg tcttgtgcaa cagaaaaaca tgttggggaa atattcctca 1740 gtggagagtc gttctcatgc tgacggggag aacgaaagtg acaggggttt cctcgtaagt 1800 tttgtatgaa atatctctac aaacctcaat tagttctact ctacactttc actatcatca 1860 acactgagac tatcctgtct cacctacaaa tgtggaaact ttacattgtt cgatttttca 1920 gcagactttg ttttattaaa tttttattag tgttaagaat gctaaattta tgtttcaatt 1980 ttatttccaa atttctatct tgttatttgt acaacaaagt aataaggatg gttgtcacaa 2040 aaacaaaact atgccttctc ttttttttca atcaccagta gtatttttga gaagacttgt 2100 gaacacttaa ggaaatgact attaaagtct tatttttatt tttttcaagg aaagatggat 2160 tcaaataaat tattctgttt ttgctttta 2189

<210> 30 <211> 2191 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 30 gtaaccagta ctagaatagt cagtacctag aagccactct tctttgaaaa ggattatcac 60 ctgatcaggt tctctctgca tttgcccctt tagattgtga aatgtggctc aaggtcttca 12Ò caactttcct ttcctttgca acaggtgctt gctcggggct gaaggtgaca gtgccatcac 180 acactgtcca tggcgtcaga ggtcaggccc tctacctacc cgtccactat ggcttccaca 240 ctccagcatc agacatccag atcatatggc tatttgagag accccacaca atgcccaaat 300 acttactggg ctctgtgaat aagtctgtgg ttcctgactt ggaataccaa cacaagttca 360 ccatgatgcc acccaatgca tctctgctta tcaacccact gcagttccct gatgaaggca 420 attacatcgt gaaggtcaac attcagggaa atggaactct atctgccagt cagaagatac 480 aagtcacggt tgatgatcct gtcacaaagc cagtggtgca gattcatcct ccctctgggg 540 ctgtggagta tgtggggaac atgaccctga catgccatgt ggaagggggc actcggctag 600 cttaccaatg gctaaaaaat gggagacctg tccacaccag ctccacctac tccttttctc 660 cccaaaacaa tacccttcat attgctccag taaccaagga agacattggg aattacagct 720 gcctggtgag gaaccctgtc agtgaaatgg aaagtgatat cattatgccc atcatatatt 780 atggacctta tggacttcaa gtgaattctg ataaagggct aaaagtaggg gaagtgttta 840 ctgttgacct tggagaggcc atcctatttg attgttctgc tgattctcat ccccccaaca 900 cctactcctg gattaggagg actgacaata ctacatatat cattaagcat gggcctcgct 960 tagaagttgc atctgagaaa gtagcccaga agacaatgga ctatgtgtgc tgtgcttaca 1020 acaacataac cggcaggcaa gatgaaactc atttcacagt tatcatcact tccgtaggac 1080 tggagaagct tgcacagaaa ggaaaatcat tgtcaccttt agcaagtata actggaatat 1140 cactattttt gattatatcc atgtgtcttc tcttcctatg gaaaaaatat caaccctaca 1200 aagttataaa acagaaacta gaaggcaggc cagaaacaga atacaggaaa gctcaaacat 1260 tttcaggcca tgaagatgct ctggatgact tcggaatata tgaatttgtt gcttttccag 1320 atgtttctgg tgtttccagg gttggttttc ctagtggctg attaaccgag aagtagaatt 1380 ctgcttcacc agaggtatcc caagcaggtc tgttccagcc tctgattgtg tatcggggca 1440 agatttgcac agtacagtgt atgaagttat tcagcacatc cctgcccagc agcaagacca 1500 tccagagtga actttcatgg gctaaacagt acattcgagt gaaattctga agaaacattt 1560 taaggaaaaa cagtggaaaa gtatattaat ctggaatcag tgaagaaacc aagaccaaca 1620 cctcttactc attattcctt tacatgcaga atagaggcat ttatgcaaat tgaactgcag 1680 gtttttcagc atatacacaa tgtcttgtgc aacagaaaaa catgttgggg aaatattcct 1740 cagtggagag tcgttctcat gctgacgggg agaacgaaag tgacaggggt ttcctcgtaa 1800 gttttgtatg aaatatctct acaaacctca attagttcta ctctacactt tcactatcat 1860 caacactgag actatcctgt ctcacctaca aatgtggaaa ctttacattg ttcgattttt 1920 cagcagactt tgttttatta aatttttatt agtgttaaga atgctaaatt tatgtttcaa 1980 ttttatttcc aaatttctat cttgttattt gtacaacaaa gtaataagga tggttgtcac 2040 aaââacaaaa ctatgccttc tctttttttt caatcaccag tagtattttt gagaagaett 2100 gtgaacactt aaggaaatga ctattaaagt cttattttta tttttttcaa ggaaagatgg 2160 attcaaataa attattctgt ttttgctttt a 2191

<210> 31 <211> 2229 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 31 gtaaccagta ctagaatagt cagtacctag aagccactct tctttgaaaa ggattatcac 60 ctgatcaggt tctctctgca tttgcccctt tagattgtga aatgtggctc aaggtcttca 120 caactttcct ttcctttgca acaggtgctt gctcggggct gaaggtgaca gtgccatcac 180 acactgtcca tggcgtcaga ggtcaggccc tctacctacc cgtccactat ggcttccaca 240 ctccagcatc agacatccag atcatatggc tatttgagag accccacaca atgcccaaat 300 acttactggg ctctgtgaat aagtctgtgg ttcctgactt ggaataccaa cacaagttca 360 ccatgatgcc acccaatgca tctctgctta tcaacccact gcagttccct gatgaaggca .420 attacatcgt gaaggtcaac attcagggaa atggaactct atctgccagt cagaagatac 480 aagtcacggt tgatgatcct gtcacaaagc cagtggtgca gattcatcct ccctctgggg 540 ctgtggagta tgtggggaac atgaccctga catgccatgt ggaagggggc actcggctag 600 cttaccaatg gctaaaaaat gggagacctg tccacaccag ctccacctac tccttttctc 660 cccaaaacaa tacccttcat attgctccag taaccaagga agacattggg aattacagct 720 gcctggtgag gaaccctgtc agtgaaatgg aaagtgatat cattatgccc atcatatatt 780 atggacctta tggacttcaa gtgaattctg ataaagggct aaaagtaggg gaagtgttta 840 ctgttgacct tggagaggcc atcctatttg attgttctgc tgattctcat ccccccaaca 900 cctactcctg gattaggagg actgacaata ctacatatat cattaagcat gggcctcgct 960 tagaagttgc atctgagaaa gtagcccaga agacaatgga ctatgtgtgc tgtgcttaca 1020 acaacataac cggcaggcaa gatgaaactc atttcacagt tatcatcact tccgtaggac 1080 tggagaagct tgcacagaaa ggaaaatcat tgtcaccttt agcaagtata actggaatat 1140 cactattttt gattatatcc atgtgtcttc tcttcctatg gaaaaaatat caaccctaca 1200 aagttataaa acagaaacta gaaggcaggt aatgcatctg tttctatgaa aatagttgtt 1260 ttccttagat gcttattcct caattattat ccctgacaaa aatacctatt ttgtcttttc 1320 aggccagaaa cagaatacag gaaagctcaa acattttcag gccatgaaga tgctctggat 1380 gacttcggaa tatatgaatt tgttgctttt ccagatgttt ctggtgtttc caggatccca 1440 agcaggtctg ttccagcctc tgattgtgta tcggggcaag atttgcacag tacagtgtat 1500 gaagttattc agcacatccc tgcccagcag caagaccatc cagagtgaac tttcatgggc 1560 taaacagtac attcgagtga aattctgaag aaacatttta aggaaaaaca gtggaaaagt 1620 atattaatct ggaatcagtg aagaaaccaa gaccaacacc tcttactcat tattccttta 1680 catgcagaat agaggcattt atgcaaattg aactgcaggt ttttcagcat atacacaatg 1740 tcttgtgcaa cagaaaaaca tgttggggaa atattcctca gtggagagtc gttctcatgc 1800 tgacggggag aacgaaagtg acaggggttt cctcgtaagt tttgtatgaa atatctctac i860 aaacctcaat tagttctact ctacactttc actatcatca acactgagac tatcctgtct 1920 cacctacaaa tgtggaaact ttacattgtt cgatttttca gcagactttg ttttattaaa 1980 tttttattag tgttaagaat gctaaattta tgtttcaatt ttatttccaa atttctatct 2040 tgttatttgt acaacaaagt aataaggatg gttgtcacaa aaacaaaact atgccttctc 2100 ttttttttca atcaccagta gtatttttga gaagacttgt gaacacttaa ggaaatgact 2160 attaaagtct tatttttatt tttttcaagg aaagatggat tcaaataaat tattctgttt 2220 ttgctttta 2229

<210> 32 <211> 2229 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 32 gtaaccagta ctagaatagt cagtacctag aagccactct tctttgaaaa ggattatcac 60 ctgatcaggt tctctctgca tttgcccctt tagattgtga aatgtggctc aaggtcttca 120 caactttcct ttcctttgca acaggtgctt gctcggggct gaaggtgaca gtgccatcac 180 acactgtcca tggcgtcaga ggtcaggccc tctacctacc cgtccactat ggcttccaca 240 ctccagcatc agacatccag atcatatggc tatttgagag accccacaca atgcccaaat 300 acttactggg ctctgtgaat aagtctgtgg ttcctgactt ggaataccaa cacaagttca 360 ccatgatgcc acccaatgca tctctgctta tcaacccact gcagttccct gatgaaggca 420 attacatcgt gaaggtcaac attcagggaa atggaactct atctgccagt cagaagatac 480 aagtcacggt tgatgatcct gtcacaaagc cagtggtgca gattcatcct ccctctgggg 540 ctgtggagta tgtggggaac atgaccctga catgccatgt ggaagggggc actcggctag 600 cttaccaatg gctaaaaaat gggagacctg tccacaccag ctccacctac tccttttctc 660 cccaaaacaa tacccttcat attgctccag taaccaagga agacattggg aattacagct 720 gcctggtgag gaaccctgtc agtgaaatgg aaagtgatat cattatgccc atcatatatt 780 atggacctta tggacttcaa gtgaattctg ataaagggct aaaagtaggg gaagtgttta 840 ctgttgacct tggagaggcc atcctatttg attgttctgc tgattctcat ccccccaaca 900 cctactcctg gattaggagg actgacaata ctacatatat cattaagcat gggcctcgct 960 tagaagttgc atctgagaaa gtagcccaga agacaatgga ctatgtgtgc tgtgcttaca 1020 acaacataac cggcaggcaa gatgaaactc atttcacagt tatcatcact tccgtaggac 1080 tggagaagct tgcacagaaa ggaaaatcat tgtcaccttt agcaagtata actggaatat 1140 cactattttt gattatatcc atgtgtcttc tcttcctatg gaaaaaatat caaccctaca 1200 aagttataaa acagaaacta gaaggcaggc cagaaacaga atacaggaaa gctcaaacat 1260 tttcaggcca tgaagatgct ctggatgact tcggaatata tgaatttgtt gcttttccag 1320 atgtttctgg tgtttccagg gttggttttc ctagtggctg attaaccgag aagtagaatt 1380 ctgcttcacc agaggtgtaa aaagcatttg tttaagcact gggcagtgtg gtcaaatggc 1440 tgcattaccc attactgcat taagcagtgt tgacttactc cgtaatgaat ggcattgcca 1500 gatttgggaa gctaaagcat cttacttcgc ctttataagt aaagctaaca caaataagga 1560 agttatgcta attcataaat agtctttacc tggtaatctc agtgaagaga gaactaacta 1620 ggttgaaagt caagagaact gaataaacaa gctgggcgtg gtggctcaca tctgtattcc 1680 tagggctttg ggaggctgag atggaaagat cacttgagcc caggagtttg agatcagcct Π40 gggcaaagac cccatcccaa caaatattta aaaattagcc aagcatggtt atgcatgcct 1800 ctggtcccag cttcttggga gaccgaggca ggaggatcat tgagcccagg agttcaaggc 1860 tacagtgagc cgtgatcaca ctaccgcact ccagcctggg cagcagagta agaccctgtc 1920 tcaaataaat aaatactgaa taaacagcgg atcaggagac cctaatttaa gtcattctgc 1980 atcacttggg tgactgcaac ccatcacttt actaaactct ctctgttcct cagttttccc 2040 tttattgccc cctcatatct tttgacaaca ttgcaaagac aattgatcac acccttgaag 2100 atacctcatg cttcaggagg aagttaccat ataggcccaa agtatgcaag tatacatctt 2160 tattattgcc ctaaaggtgc atgagatggc aaaggagctt tcatatagtt gaagtcattt 2220 cagtccgga 2229

<210> 33 <211> 2323 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 33 gtaaccagta ctagaatagt cagtacctag aagccactct tctttgaaaa ggattatcac 60 ctgatcaggt tctctctgca tttgcccctt tagattgtga aatgtggctc aaggtcttca 120 caactttcct ttcctttgca acaggtgctt gctcggggct gaaggtgaca gtgccatcac 180 acactgtcca tggcgtcaga ggtcaggccc tctacctacc cgtccactat ggcttccaca 240 ctccagcatc agacatccag atcatatggc tatttgagag accccacaca atgcccaaat 300 acttactggg ctctgtgaat aagtctgtgg ttcctgactt ggaataccaa cacaagttca 360 ccatgatgcc acccaatgca tctctgctta tcaacccact gcagttccct gatgaaggca 420 attacatcgt gaaggtcaac attcagggaa atggaactct atctgccagt cagaagatac 480 aagtcacggt tgatgatcct gtcacaaagc cagtggtgca gattcatcct ccctctgggg 540 ctgtggagta tgtggggaac atgaccctga catgccatgt ggaagggggc actcggctag 600 cttaccaatg gctaaaaaat gggagacctg tccacaccag ctccacctac tccttttctc 660 cccaaaacaa tacccttcat attgctccag taaccaagga agacattggg aattaoaget 720 gcctggtgag gaaccctgtc agtgaaatgg aaagtgatat cattatgccc atcatatatt 780 atggacctta tggacttcaa gtgaattctg ataaagggct aaaagtaggg gaagtgttta 840 ctgttgacct tggagaggcc atcctatttg attgttctgc tgattctcat ccccccaaca 900 cctactcctg gattaggagg actgacaata ctacatatat cattaagcat gggcctcgct 960 tagaagttgc atctgagaaa gtagcccaga agacaatgga ctatgtgtgc tgtgcttaca 1020 acaacataac cggcaggcaa gatgaaactc atttcacagt tatcatcact tccgtaggac 1080 tggagaagct tgcacagaaa ggaaaatcat tgtcaccttt agcaagtata actggaatat 1140 cactattttt gattatatcc atgtgtcttc tcttcctatg gaaaaaatat caaccctaca 1200 aagttataaa acagaaacta gaaggcaggt aatgcatctg tttctatgaa aatagttgtt 1260 ttccttagat gcttattcct caattattat ccctgacaaa aatacctatt ttgtcttttc 1320 aggccagaaa cagaatacag gaaagctcaa acattttcag gccatgaaga tgctctggat 1380 gacttcggaa tatatgaatt tgttgctttt ccagatgttt ctggtgtttc cagggttggt 1440 tttcctagtg gctgattaac cgagaagtag aattctgctt caccagaggt gtaaaaagca 1500 tttgtttaag cactgggcag tgtggtcaaa tggctgcatt acccattact gcattaagca 1560 gtgttgactt actccgtaat gaatggcatt gccagatttg ggaagctaaa gcatcttact 1620 tcgcctttat aagtaaagct aacacaaata aggaagttat gctaattcat aaatagtctt 1680 tacctggtaa tctcagtgaa gagagaacta actaggttga aagtcaagag aactgaataa 1740 acaagctggg cgtggtggct cacatctgta ttcctagggc tttgggaggc tgagatggaa 1800 agatcacttg agcccaggag tttgagatca gcctgggcaa agaccccatc ccaacaaata 1860 tttaaaaatt agccaagcat ggttatgcat gcctctggtc ccagcttctt gggagaccga 1920 ggcaggagga tcattgagcc caggagttca aggctacagt gagccgtgat cacactaccg 1980 cactccagcc tgggcagcag agtaagaccc tgtctcaaat aaataaatac tgaataaaca 2040 gcggatcagg agaccctaat ttaagtcatt ctgcatcact tgggtgactg caacccatca 2100 ctttactaaa ctctctctgt tcctcagttt tccctttatt gccccctcat atcttttgac 2160 aacattgcaa agacaattga tcacaccctt gaagatacct catgcttcag gaggaagtta 2220 ccatataggc ccaaagtatg caagtataca tctttattat tgccctaaag gtgcatgaga 2280 tggcaaagga gctttcatat agttgaagtc atttcagtcc gga 2323

<210> 34 <211> 1578 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 34 gtaaccagfca ctagaatagt eagfcacetag aagccactct tctttgaaaa ggattatcac 60 ctgatcaggt tctctctgca tttgcccctt tagattgtga aatgtggctc aaggtcttca 120 caactttcot ttcctttgca acaggtgctt gctcggggct gaaggtgaca gfcgccatcac 180 acactgteca tggcgtcaga ggtcaggcec tctacctacc cgtccactat ggcttccaca 240 cfcccagcatc agacatccag atcatatggc tatttgagag accccacaca atgcccaaat 300 acttaetggg ctctgtgaat aagtctgtgg ttcetgactt ggaataccaa caoaagttca 360 ceatgatgcc acccaatgca tctctgctta tcaacccact gcagttccct gatgaaggca 420 attacafccgt gaaggtcaac attcagggaa atggaactct atctgccagt cagaagatac 480 aagtcacggt tgatgatcct gtcacaa&gc c&gtggtgca gattcatcct ccctctgggg 540 ctgtggagta tgtggggaac afcgaccctga catgccatgt ggaagggggc acfccggctag 600

Cttaccaatg gctaaaaaet gggegacctg tccacaccag ctccacctac tccttttctc 660 cccaaaacaa tacccttcat attgctccag taaccaagga agacattggg aattacagct 720 gcctggtgag gaaocccgcc agtgaaatgg aaagtgatat cattatgccc atcatatatt 780 atggacctta tggacttcaa gtgaattctg ataaagggct aaaagtaggg gaagtgttta 840 cfcgttgacct tggagaggcc atcctatttg attgttctgo tgattctcat ccccccaasa $00 cctactcctg gattaggagg actgacaata ctacatatat cattaageat gggcctcgct §60 tagaagttgc atctgagaaa gtagcecaga agacaatgga ctatgtgtgc tgtgcttaca 1020 acaacataac cggcaggcaa gatgaaactc atttcacagt tatcatcact tccgtaggac 1080 tggagaagct tgcacagaaa ggaaaatcat tgtcaccttt agcaagtata accggaatat 1140 cactattttt gattatatcc atgtgtcttc tcttcctatg gaa&aaatat caaccctaca 1200 aagttataaa acagaaacta gaaggcaggc cagaaacaga atacaggaaa gctcaaaeat 1260 tttcaggttt catgctggca gotccatccc aaagagaaga ggaaaagaag atbtggcagg 1320 ggccaggatt gcttctttgt ccccactgta accctcatta tcatcaatat tgactgtact 1380 gacttattat aagttaacaa agttttggct caggccacaa aatcacaggg agccaagttt 1440 eagttttatt tcccctcatg tcaccttagg aaaattattt ttcttaaccg caacttcctc 1500 ttctatataa tagggataaa aacttccccc ttaaggttgc tatgagaatt aaataaaatg 1560 atataggtgg agtgcctg 1578 <210> 35 <211> 462

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 35

Met Gly Gin Asp Ala Phe Met Glu Pro Phe Gly Asp Thr Leu Gly Val 15 10 15

Phe Gin Cys Lys lie Tyr Leu Leu Leu Phe Gly Ala Cy3 Ser Gly Leu 20 25 30

Lys Val Thr Val Pro Ser His Thr Val His Gly Val Arg Gly Gin Ala 35 40 45

Leu Tyr Leu Pro Val His Tyr Gly Phe His Thr Pro Ala Ser Asp lie 50 55 60

Gin lie He Trp Leu Phe Glu Arg Pro His Thr Met Pro Lys Tyr Leu 65 70 75 80

Leu Gly Ser Val Asn Lys Ser Val Val Pro Asp Leu Glu Tyr Gin His 85 90 95

Lys Phe Thr Met Met Pro Pro Asn Ala Ser Leu Leu lie Asn Pro Leu 100 105 110

Gin Phe Pro Asp Glu Gly Asn Tyr lie Val Lys Val Asn lie Gin Gly 115 120 125

Asn Gly Thr Leu Ser Ala Ser Gin Lys lie Gin Val Thr Val Asp Asp 130 135 140

Pro Val Thr Lys Pro Val Val Gin He His Pro Pro Ser Gly Ala Val 145 150 155 160

Glu Tyr Val Gly Asn Met Thr Leu Thr Cys His val Glu Gly Gly Thr 165 170 175

Arg Leu Ala Tyr Gin Trp Leu Lys Asn Gly Arg Pro Val His Thr Ser 180 185 190

Ser Thr Tyr Ser Phe Ser Pro Gin Asn Asn Thr Leu His lie Ala Pro 195 200 205

Vai Thr Lys Glu Asp lie Gly Asn Tyr Ser Cys Leu Val Arg Asn Pro 210 215 220

Val Ser Glu Met Glu Ser Asp lie He Met Pro lie lie Tyr Tyr Gly 225 230 235 240

Pro Tyr Gly Leu Gin Val Asn Ser Asp Lys Gly Leu Lys Val Gly Glu 245 250 255

Val Phe Thr Val Asp Leu Gly Glu Ala He Leu Phe Asp Cys Ser Ala 260 265 270

Asp Ser His Pro Pro Asn Thr Tyr Ser Trp He Arg Arg Thr Asp Asn 275 280 285

Thr Thr Tyr He He Lys His Gly Fro Arg Leu Glu Val Ala Ser Glu 290 295 300

Lys Val Ala Gin Lys Thr Met Asp Tyr Val Cys Cys Ala Tyr Asn Asn 305 310 315 320 lie Thr Gly Arg Gin Asp Glu Thr His Phe Thr Val lie He Thr Ser 325 330 335

Val Gly Leu Glu Lys Leu Ala Gin Lys Gly Lys Ser Leu Ser Pro Leu 340 345 350

Ala Ser lie Thr Gly lie Ser Leu Phe Leu lie lie Ser Met Cys Leu 355 360 365

Leu Phe Leu Trp Lys Lys Tyr Gin Pro Tyr Lys Val lie Lys Gin Lys 370 375 380

Leu Glu Gly Arg Pro Glu Thr Glu Tyr Arg Lys Ala Gin Thr Phe Ser 385 390 395 400

Gly His Glu Asp Ala Leu Asp Asp Phe Gly He Tyr Glu Phe Val Ala 405 410 415

Phe Pro Asp Val Ser Gly Val Ser Arg lie Pro Ser Arg Ser Val Pro 420 425 430

Ala Ser Asp Cys val Ser Gly Gin Asp Leu His Ser Thr Val Tyr Glu 435 440 445 vai He Gin His lie Pro Ala Gin Gin Gin Asp His Pro Glu 450 455 460

<210> 36 <211> 450 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 36

Met Trp Leu Lys Val Phe Thr Thr Phe Leu Ser Phe Ala Thr Gly Ala 1 5 10 15'

Cys Ser Gly Leu Lys Val Thr Val Pro Ser His Thr Val His Gly Val 20 25 30

Arg Gly Gin Ala Leu Tyr Leu Pro Val His Tyr Gly Phe His Thr Pro 35 40 45

Ala Ser Asp lie Gin lie lie Trp Leu Phe Glu Arg Pro His Thr Met 50 55 60

Pro Lys Tyr Leu Leu Gly Ser Val Asn Lys Ser Val Val Pro Asp Leu 65 70 75 80

Glu Tyr Gin His Lys Phe Thr Met Met Pro Pro Asn Ala Ser Leu Leu 85 90 95 lie Asn Pro Leu Gin Phe Pro Asp Glu Gly Asn Tyr lie Val Lys Val 100 105 110

Asn lie Gin Gly Asn Gly Thr Leu Ser Ala Ser Gin Lys lie Gin Val 115 120 125

Thr Val Asp Asp Pro Val Thr Lys Pro Val Val Gin lie His Pro Pro 130 135 140

Ser Gly Ala Val Glu Tyr Val Gly Asn Met Thr Leu Thr Cys His Val 145 150 155 160

Glu Gly Gly Thr Arg Leu Ala Tyr Gin Trp Leu Lys Asn Gly Arg Pro 165 170 175

Val His Thr Ser Ser Thr Tyr Ser Phe Ser Pro Gin Asn Asn Thr Leu 180 185 190

His lie Ala Pro Val Thr Lys Glu Asp lie Gly Asn Tyr Ser Cys Leu 195 200 205

Vai Arg Asn Pro Vai Ser Glu Met Glu Ser Asp lie lie Met Pro He 210 215 220

He Tyr Tyr Gly Pro Tyr Gly Leu Gin Val Asn Ser Asp Lys Gly Leu 225 230 235 240

Lys Val Gly Glu Val Phe Thr Val Asp Leu Gly Glu Ala lie Leu Phe 245 250 255

Asp Cys Ser Ala Asp Ser His Pro Pro Asn Thr Tyr Ser Trp He Arg 260 265 270

Arg Thr Asp Asn Thr Thr Tyr He He Lys His Gly Pro Arg Leu Glu 275 280 285

Val Ala Ser Glu Lys val Ala Gin Lys Thr Met Asp Tyr Val Cys Cys 290 295 300

Ala Tyr Asn Asn He Thr Gly Arg Gin Asp Glu Thr His Phe Thr Val 305 310 315 320

He He Thr Ser Val Gly Leu Glu Lys Leu Ala Gin Lys Gly Lys Ser 325 330 335

Leu Ser Pro Leu Ala Ser lie Thr Gly lie Ser Leu Phe Leu He lie 340 345 350

Ser Met Cys Leu Leu Phe Leu Trp Lys Lys Tyr Gin Pro Tyr Lys Val 355 360 365 lie Lys Gin Lys Leu Glu Gly Arg Pro Glu Thr Glu Tyr Arg Lys Ala 370 375 380

Gin Thr Phe Ser Gly His Glu Asp Ala Leu Asp Asp Phe Gly He Tyr 385 390 395 400

Glu Phe Val Ala Phe Pro Asp Val Ser Gly Val Ser Arg lie Pro Ser 405 410 415

Arg Ser Val Pro Ala Ser Asp Cys Val Ser Gly Gin Asp Leu His Ser 420 425 430

Thr Val Tyr Glu Val lie Gin His lie Pro Ala Gin Gin Gin Asp His 435 440 445

Pro Glu 450

<210> 37 <211> 455 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 37

Met Trp Leu Lys Val Phe Thr Thr Phe Leu Ser Phe Ala Thr Gly Ala 15 10 15

Cys Ser Gly Leu Lys Val Thr Val Pro Ser His Thr Val His Gly Val 20 25 30

Arg Gly Gin Ala Leu Tyr Leu Pro Val His Tyr Gly Phe His Thr Pro 35 40 45

Ala Ser Asp lie Gin lie He Trp Leu Phe Glu Arg Pro His Thr Met 50 55 60

Pro Lys Tyr Leu Leu Gly Ser Val Asn Lys Ser Val Val Pro Asp Leu 65 70 75 80

Glu Tyr Gin His Lys Phe Thr Met Met Pro Pro Asn Ala Ser Leu Leu 85 90 95

lie Asn Pro Leu Gin Phe Pro Asp Glu Gly Asn Tyr lie Val Lys Val 100 105 HO

Asn lie Gin Gly Asn Gly Thr Leu Ser Ala Ser Gin Lys lie Gin Val 115 120 125

Thr Val Asp Asp Pro Val Thr Lys Pro Val Val Gin lie His Pro Pro 130 135 140

Ser Gly Ala Val Glu Tyr Val Gly Asn Met Thr Leu Thr Cys His Val 145 150 155 160

Glu Gly Gly Thr Arg Leu Ala Tyr Gin Trp Leu Lys Asn Gly Arg Pro 165 170 175

Val His Thr Ser Ser Thr Tyr Ser Phe Ser Pro Gin Asn Asn Thr Leu 180 185 190

His lie Ala Pro Val Thr Lys Glu Asp lie Gly Asn Tyr Ser Cys Leu 195 200 205

Val Arg Asn Pro Val Ser Glu Met Glu Ser Asp lie lie Met Pro lie 210 215 220 lie Tyr Tyr Gly Pro Tyr Gly Leu Gin Val Asn Ser Asp Lys Gly leu 225 230 235 240

Lys Val Gly Glu Val Phe Thr Val Asp Leu Gly Glu Ala lie Leu Phe 245 250 255

Asp Cys Ser Ala Asp Ser His Pro Pro Asn Thr Tyr Ser Trp lie Arg 260 265 270

Arg Thr Asp Asn Thr Thr Tyr lie lie Lys His Gly Pro Arg Leu Glu 275 280 285

Val Ala Ser Glu Lys Val Ala Gin Lys Thr Met Asp Tyr Val Cys Cys 290 295 300

Ala Tyr Asn Asn lie Thr Gly Arg Gin Asp Glu Thr His Phe Thr Val 305 310 315 320

He lie Thr Ser Val Gly Leu Glu Ly3 Leu Ala Gin Lys Gly Lys Ser 325 330 335

Leu Ser Pro Leu Ala Ser lie Thr Gly lie Ser Leu Phe Leu He lie 340 345 350

Ser Met Cys Leu Leu Phe Leu Trp Lys Lys Tyr Gin Pro Tyr Lys Gly 355 360 365

Gin Lys Gin Asn Thr Gly Lys Leu Lys His Phe Gin Ala Met Lys Met 370 375 380

Leu Trp Met Thr Ser Glu Tyr Met Asn Leu Leu Leu Phe Gin Met Phe 385 390 395 400

Leu Val Phe Pro Gly Ser Gin Ala Gly Leu Phe Gin Pro Leu He Val 405 410 415

Tyr Arg Gly Lys lie Cys Thr Val Gin Cys Met Lys Leu Phe Ser Thr 420 425 430

Ser Leu Pro Ser Ser Lys Thr Ile Gin Ser Glu Leu Ser Trp Ala Lys 435 440 445

Gin Tyr Ile Arçf Vai Lys Phe 450 455

<210> 38 <211> 419 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 38

Met Trp Leu Lys Val Phe Thr Thr Phe Leu Ser Phe Ala Thr Gly Ala 15 10 15

Cys Ser Gly Leu Lys Val Thr Val Pro Ser His Thr Vâl His Gly Val 20 25 30

Arg Gly Gin Ala Leu Tyr Leu Pro Val His Tyr Gly Phe His Thr Pro 35 40 45

Ala Ser Asp lie Gin lie lie Trp Leu Phe Glu Arg Pro His Thr Met 50 55 60

Pro Lys Tyr Leu Leu Gly Ser Val Asn Lys Ser Val Val Pro Asp Leu 65 70 75 80

Glu Tyr Gin His Lys Phe Thr Met Met Pro Pro Asn Ala Ser Leu Leu 85 90 95 lie Asn Pro Leu Gin Phe Pro Asp Glu Gly Asn Tyr lie Val Lys Val 100 105 110

Asn lie Gin Gly Asn Gly Thr Leu Ser Ala Ser Gin Lys lie Gin Val 115 120 125

Thr Val Asp Asp Pro Val Thr Lys Pro Val Val Gin' lie His Pro Pro 130 135 140

Ser Gly Ala Val Glu Tyr Val Gly Asn Met Thr Leu Thr Cys His Val 145 150 155 160

Glu Gly Gly Thr Arg Leu Ala Tyr Gin Trp Leu Lys Asn Gly Arg Pro 165 170 175

Val His Thr Ser Ser Thr Tyr Ser Phe Ser Pro Gin Asn Asn Thr Leu 180 185 190

His lie Ala Pro Val Thr Lys Glu Asp lie Gly Asn Tyr Ser Cys Leu 195 200 205

Val Arg Asn Pro Val Ser Glu Met Glu Ser Asp lie lie Met Pro lie 210 215 220 lie Tyr Tyr Gly Pro Tyr Gly Leu Gin Val Asn Ser Asp Lys Gly Leu 225 230 235 240

Lys. Val Gly Glu Val Phe Thr Val Asp Leu Gly Glu Ala He Leu Phe 245 250 , 255

Asp Cys Ser Ala Asp Ser His Pro Pro Asn Thr Tyr Ser Trp lie Arg 260 265 270

Arg Thr Asp Asn Thr Thr Tyr lie He Lys His Gly Pro Arg Leu Glu 275 280 285 val Ala ser Glu Lys val Ala Gin Lys Thr Met Asp Tyr val Cys Cys 290 295 300

Ala Tyr Asn Asn He Thr Gly Arg Gin Asp Glu Thr His Phe Thr Val 305 310 315 320 lie He Thr Ser Val Gly Leu Glu Lys Leu Ala Gin Lys Gly Lys Ser 325 330 335

Leu Ser Pro Leu Ala Ser He Thr Gly He Ser Leu Phe Leu lie lie 340 345 350

Ser Met Cys Leu Leu Phe Leu Trp Lys Lys Tyr Gin Pro Tyr Lys Val 355 360 365 lie Lys Gin Lys Leu Glu Gly Arg Pro Glu Thr Glu Tyr Arg Lys Ala 370 375 380

Gin Thr Phe Ser Gly His Glu Asp Ala Leu Asp Asp Phe Gly lie Tyr 385 390 395 400

Glu Phe Val Ala Phe Pro Asp Val Ser Gly Val Ser Arg Val Gly Phe 405 410 415

Pro Ser Gly

<210> 39 <211> 376 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 39

Met Trp Leu Lys Val Phe Thr Thr Phe Leu Ser Phe Ala Thr Gly Ala 15 10 15

Cys Ser Gly Leu Lys Val Thr Val Pro Ser His Thr Val His Gly Val 20 25 30

Arg Gly Gin Ala Leu Tyr Leu Pro Val His Tyr Gly Phe His Thr Pro 35 40 45

Ala Ser Asp lie Gin lie He Trp Leu Phe Glu Arg Pro His Thr Met 50 55 60

Pro Lys Tyr Leu Leu Gly Ser Val Asn Lys Ser Val Val Pro Asp Leu 65 70 75 80

Glu Tyr Gin His Lys Phe Thr Met Met Pro Pro Asn Ala Ser Leu Leu 85 90 95 lie Asn Pro Leu Gin Phe Pro Asp Glu Gly Asn Tyr lie Val Lys Val 100 105 110

Asn lie Gin Gly Asn Gly Thr Leu Ser Ala Ser Gin Lys lie Gin Val 115 120 125

Thr Val Asp Asp Pro Val Thr Lys Pro Val Val Gin He His Pro Pro 130 135 140

Ser Gly Ala Val Glu Tyr Val Gly Asn Met Thr Leu Thr Cys His Val 145 150 155 160

Glu Gly Gly Thr Arg Leu Ala Tyr Gin Trp Leu Lys Asn Gly Arg Pro 165 170 175

Val His Thr Ser Ser Thr Tyr Ser Phe Ser Pro Gin Asn Asn Thr Leu 180 185 190

His He Ala Pro Val Thr Lys Glu Asp He Gly Asn Tyr Ser Cys Leu 195 200 205

Vai Arg Asn Pro Vai Ser Glu Met Glu Ser Asp lie lie Met Pro lie 210 215 220 lie Tyr Tyr Gly Pro Tyr Gly Leu Gin Val Asn Ser Asp Lys Gly Leu 225 230 235 240

Lys Val Gly Glu Val Phe Thr Val Asp Leu Gly Glu Ala lie Leu Phe 245 250 255

Asp Cys Ser Ala Asp Ser His Pro Pro Asn Thr Tyr Ser Trp He Arg 260 265 · 2*70

Arg Thr Asp Asn Thr Thr Tyr lie lie Lys His Gly Pro Arg Leu Glu 275 280 285

Val Ala Ser Glu Lys Val Ala Gin Lys Thr Met Asp Tyr Val Cys Cys 290 295 300

Ala Tyr Asn Asn lie Thr Gly Arg Gin Asp Glu Thr His Phe Thr Val 305 310 315 320 lie He Thr Ser Val Gly Leu Glu Lys Leu Ala Gin Lys Gly Lys Ser 325 330 335

Leu Ser Pro Leu Ala Ser He Thr Gly lie Ser Leu Phe Leu lie lie 340 345 350

Ser Met Cys Leu Leu Phe Leu Trp Lys Lys Tyr Gin Pro Tyr Lys Val 355 360 365

Ile Lys Gin Lys Leu Glu Gly Arg 370 375

<210> 40 <211> 423 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 40

Met Trp Leu Lys Val Phe Thr Thr Phe Leu Ser Phe Ala Thr Gly Ala 15 10 15

Cys Ser Gly Leu Lys Val Thr Val Pro Ser His Thr Val His Gly Val 20 25 30

Arg Gly Gin Ala Leu Tyr Leu Pro Val His Tyr Gly Phe His Thr Pro 35 40 45

Ala Ser Asp lie Gin lie lie Trp Leu Phe Glu Arg Pro His Thr Met 50 55 60

Pro Lys Tyr Leu Leu Gly Ser Val Asn Lys Ser Val Val Pro Asp Leu 65 70 75 80

Glu Tyr Gin His Lys Phe Thr Met Met Fro Pro Asn Ala Ser Leu Leu 85 90 95 lie Asn Pro Leu Gin Phe Pro Asp Glu Gly Asn Tyr He Val Lys Val 100 - 105 110

Asn lie Gin Gly Asn' Gly Thr Leu Ser Ala Ser Gin Lys lie Gin Val 115 120 125

Thr Val Asp Asp pro val Thr Lys Pro Val Val Gin lie His Pro Pro 130 135 140

Ser Gly Ala Val Glu Tyr Val Gly Asn Met Thr Leu Thr Cys His Val 145 150 155 160

Glu Gly Gly Thr Arg Leu Ala Tyr Gin Trp Leu Lys Asn Gly Arg Pro 165 170 175

Val His Thr Ser Ser Thr Tyr Ser Phe Ser Pro Gin Asn Asn Thr Leu 180 185 190

His He Ala Pro Val Thr Lys Glu Asp He Gly Asn Tyr Ser Cys Leu 195 200 205 val Arg Asn Pro Val Ser Glu Met Glu Ser Asp lie He Met Pro lie 210 215 220 lie Tyr Tyr Gly Pro Tyr Gly Leu Gin Val Asn Ser Asp Lys Gly Leu 225 230 235 240

Lys Val Gly Glu Val Phe Thr Val Aep Leu Gly Glu Ala lie Leu Phe 245 250 255

Asp Cys Ser Ala Asp Ser His Pro Pro Asn Thr Tyr Ser Trp lie Arg 260 265 270

Arg Thr Asp Asn Thr Thr lyr He lie Lys His Gly Pro Arg Leu Glu 275 280 285

Vai Ala Ser Glu Lys Vai Ala Gin Lys Thr Met Asp Tyr Vai Cys Cys 290 295 300

Ala Tyr Asn Asn lie Thr Gly Arg Gin Asp Glu Thr His Phe Thr Val 305 310 315 320

He lie Thr Ser Val Gly Leu Glu Lys Leu Ala Gin Lys Gly Lys Ser 325 330 335

Leu Ser Pro Leu Ala Ser lie Thr Gly lie Ser Leu Phe Leu He Ile 340 345 350

Ser Met Cys Leu Leu Phe Leu Trp Lys Lys Tyr Gin Pro Tyr Lys Val 355 360 365

He Lys Gin Lys Leu Glu Gly Arg Pro Glu Thr Glu Tyr Arg Lys Ala 370 375 380

Gin Thr Phe Ser Gly Phe Met Leu Ala Ala Pro Ser Gin Arg Glu Glu 385 390 395 400

Glu Lys Lys lie Trp Gin Gly Pro Gly Leu Leu Leu Cys Pro His Cys 405 410 415

Asn Pro His Tyr His Gin Tyr 420

<210> 41 <211> 1520 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 41 atgaggcctc tgcccagcgg gaggaggaag acccgaggca tctccctagg actcttcgcc 60 ctctgcctgg ccgcagcccg ctgtctgcag agtcagggtg tgtccctata cattcctcag 120 gccaccatca atgccactgt caaagaagac atcctgctct cagttgagta ctcctgtcat 180 ggagtgccca ccatcgaatg gacatattca tccaattggg gaacgcagaa gatcgtggag 240 tggaaaccag ggactcaggc caacatctct caaagooaca aggacagagt ctgcaccttt 300 gacaacggct ccatccagct cttcagcgtg ggagtgaggg attccggcta ctatgtcatc 360 accgtgacgg agcgcctggg gagcagccag tttggcacca tcgtgctgca cgtctctgag 420 atcctctatg aagacctgca ctttgtcgct gtcatccttg cttttctcgc tgctgtggcc 480 gcagtattaa tcagcctcat gtgggtttgt aataagtgtg catataaatt tcagaggaag 540 agaagacaca aactcaaaga aagcacaact gaggagattg agctggaaga tgttgagtgt 600 tagccaaggc tgggcctgac tgcattccta cctcaagagg aaaccattct ccaacaaaaa 660 gagcaagcac agctattata cccattgtgt gtggtcctgt tgcagcccgc tcctaacagg 720 acagtgggag attaacaaca ttgactgcat ggagttgagg actgtggatg ggacaaagct 780 agtattagga ctcgcgctaa gttcaaggag aagagtgatt gaggctttga accaggagct 840 tcgcttggct gcagcatcag ggccgtgctg acacataacc aatggdagtc ggaggaacca 900 ggctctgggc caggacagtt tccagtgctg tgaagaaacg aggtgagcag tatccaaggg 960 gctcaaggat aatctgctga tttctttctc gtctttcaca cagagaggcc accagcagga 1020 aagcagtggg agttgggtag ctgctggggc cagcatgtcc tcttccacac tacctgcctt 1080 tcagaactct gctcttccgc ttgtcccgaa gtcagggctg gcaatcttca taatcaaagg 1140 ggagttggaa aagaacaccc actaagaggc ctccatggca gatgtcaatt aaattgcccc 1200 cccccccaaa tctcatgaca gtttattcac atcagtagtg tgggaagtta caatgttttt 1260 tttaaaaaaa gcttctttcc ttggctttcc atttctttga aaaaagggtt tcttttgaat 1320 ttttaaagct ctgccatact gaacattcct gtggaaaggt ttaaaatgca gagcctgagg 1380 tttttgcttt tcagaaaaat aaaaatcata gagattagct agtgtaaatg ttaagctata 1440 aattatgttt caaactgtga aaaaaaaaag ttttaaagaa tgaatgaaat aaaacctgaa 1500 aataaagccc tggtcctttg 1520

<210> 42 <211> 1650 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 42 atgaggcctc tgcccagcgg gaggaggaag acccgaggca tctccctagg actcttcgcc 60 ctctgcctgg ccgcagcccg ctgtctgcag agtcagggtg tgtccctata cattcotcag 120 gccaccatca atgccactgt caaagaagac atcctgctct cagttgagta ctcctgtcat 180 ggagtgccca ccatogaatg gacatattca tccaattggg gaacgcagaa gatcgtggag 240 tggaaaccag ggactcaggc caacatctct caaagccaca aggacagagt ctgcaccttt 300 gacaacggct ccatccagct cttçagcgtg ggagtgaggg attccggcta ctatgtcatc 360 acogtgacgg agcgcctggg gagcagccag tttggcacca tcgtgctgca cgtctctgag 420 atcctctatg aagacctgca ctttgtcgct gtcatccttg cttttctcgc tgctgtggcc 480 gcagtattaa tcagcctcat gtgggtttgt aataagtgtg catataaatt tcagaggaag 540 agaagacaca aactcaaagg taaccccctg ggccttgtga taatccatga gtggttttga 600 ggccagaggt ggcatgtgtt atcttgttct cacgaagaaa gcactatgtg gcttgatttc 660 caactcattg acttgtcttt gctttacaga aagcacaact gaggagattg agctggaaga 720 tgttgagtgt tagccaaggc tgggcctgac tgcattccta cctcaagagg aaaccattct 780 ccaacaaaaa gagcaagcac agctattata cccattgtgt gtggtcctgt tgcagcccgc 840 tcetaacagg acagtgggag attaacaaca ttgactgcat ggagttgagg actgtggatg 900 ggacaaagct agtattagga ctcgogctaa gttcaaggag aagagtgatt gaggctttga 960 accaggagct tcgcttggct gcagcatcag ggccgtgctg acacataacc aatggcagtc 1020 ggaggaacca ggctctgggc caggacagtt tccagtgctg tgaagaaacg aggtgagcag 1080 tatccaaggg gctcaaggat aatctgctga tttctttctc gtctttcaca cagagaggcc 1140 accagcagga aagcagtggg agttgggtag ctgctggggc cagcatgtcc tcttccacac 1200 tacctgcctt tcagaactct gctcttccgc ttgtcccgaa gtcagggctg gcaatcttca 1260 taatcaaagg ggagttggaa aagaacaccc actaagaggc ctccatggca gatgtcaatt 1320 aaattgcccc cccccccaaa tctcatgaca gtttattcac atcagtagtg tgggaagtta 1380 caatgttttt tttaaaaaaa gcttctttcc ttggctttcc atttctttga aaaaagggtt 1440 tcttttgaat ttttaaagct ctgccatact gaacattcct gtggaaaggt ttaaaatgca 1500 gagcctgagg tttttgcttt tcagaaaaat aaaaatcata gagattagct agtgtaaatg 1560 ttaagctata aattatgttt caaactgtga aaaaaaaaag ttttaaagaa tgaatgaaat 1620 aaaacctgaa aataaagccc tggtcctttg 1650 <210> 43

<211> 200 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 43

Met Arg Pro Leu Pro Ser Gly Arg Arg Lys Thr Arg Gly lie Ser Leu 15 10 15

Gly Leu Phe Ala Leu Cys Leu Ala Ala Ala Arg Cys Leu Gin Ser Gin 20 25 30

Gly Val Ser Leu Tyr lie Pro Gin Ala Thr lie Asn Ala Thr Val Lys 35 40 45

Glu Asp lie Leu Leu Ser val Glu Tyr Ser Cys His Gly val Pro Thr 50 55 60 lie Glu Trp Thr Tyr Ser Ser Asn Trp Gly Thr Gin Lys He Val Glu 65 70 75 80

Trp Lys Pro Gly Thr Gin Ala Asn lie Ser Gin Ser His Lys Asp Arg 85 90 95

Val Cys Thr Phe Asp Asn Gly Ser lie Gin Leu Phe Ser Val Gly Val 100 105 110

Arg Asp Ser Gly Tyr Tyr Val lie Thr Val Thr Glu Arg Leu Gly Ser 115 120 125

Ser Gin Phe Gly Thr He val Leu His Val Ser Glu lie Leu Tyr Glu 130 135 140

Asp Leu His Phe Val Ala Val lie Leu Ala Phe Leu Ala Ala Val Ala 145 150 155 160

Ala Val Leu lie Ser Leu Met Trp val Cys Asn Lys Cys Ala Tyr Lys 165 170 175

Phe Gin Arg Lys Arg Arg His Lys Leu Lys Glu Ser Thr Thr Glu Glu 180 185 190

He Glu Leu Glu Asp val Glu Cys 195 200 <210> 44 <211> 199

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 44

Met Arg Pro Leu Pro Ser Gly Arg Arg Lys Thr Arg Gly lie Ser Leu 15 10 15

Gly Leu Phe Ala Leu Cys Leu Ala Ala Ala Arg Cys Leu Gin Ser Gin 20 25 30

Gly Val Ser Leu Tyr He Pro Gin Ala Thr lie Asn Ala Thr Val Lys 35 40 45

Glu Asp lie Leu Leu Ser val Glu Tyr Ser Cys His Gly val Pro Thr 50 55 60 lie Glu Trp Thr Tyr Ser Ser Asn Trp Gly Thr Gin Lys He Val Glu 65 70 75 80

Trp Lys Pro Gly Thr Gin Ala Asn He Ser Gin Ser His Lys Asp Arg 85 90 95

Val Cys Thr Phe Asp Asn Gly Ser lie Gin Leu Phe Ser Val Gly Val 100 105 110

Arg Asp Ser Gly Tyr Tyr Val He Thr Val Thr Glu Arg Leu Gly Ser 115 120 125

Ser Gin Phe Gly Thr He Val Leu His Val Ser Glu He Leu Tyr Glu 130 135 140

Asp Leu His Phe Val Ala Val He Leu Ala Phe Leu Ala Ala val Ala 145 150 155 160

Ala Val Leu He Ser Leu Met Trp Val Cys Asn Lys Cys Ala Tyr Lys 165 170 175

Phe Gin Arg Lys Arg Arg His Lys Leu Lys Gly Asn Pro Leu Gly Leu 180 185 190 val lie He His Glu Trp Phe 195 <210> 45

<211> 1407 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 45 ccggcggcgc gatccagccc ccggccccgc ctgcgcggcc ggcccggcgg gcgctgcgcc 60 cagggacgcc cggtgcccgc cgctccgccg cegcccgctg ccgcggggtg acagcgatcc 120 ttctgttcca gccatttccc actttcctca ctccgtaatt cggctgggaa gttggggaag 180 atggataggg tcttgctgag gtggatttct ctcttctggc taacagccat ggtcgaaggc 240 cttcaggtca cagtgcccga caagaagaag gtggccatgc tcttccagcc cactgtgctt 300 cgctgccact tctcaacatc ctcccatcag cctgcagttg tgcagtggaa gttcaagtcc 360 tactgccagg atcgcatggg agaatccttg ggcatgtcct ctacccgggc ccaatctctc 420 agcaagagaa acctggaatg ggacccctac ttggattgtt tggacagcag gaggactgtt 480 cgagtagtag cttcaaaaca gggctcgact gtcaccctgg gagatttcta caggggcaga 540 gagatcacga ttgttcatga tgcagatctt caaattggaa agcttatgtg gggagacagc 600 ggactctatt actgtattat caccacccca gatgacctgg aggggaaaaa tgagggctca 660 ctgggactgc tggtgttggg caggacaggg ctgcttgctg atctcttgcc cagttttgct 720 gtggagatta tgccagagtg ggtgtttgtt ggcctggtgc tcctgggcgt cttcctcttc 780 ttcgtcctgg tggggatctg ctggtgccag tgctgccctc acagctgctg ctgctatgtc 840 cgctgcccat gctgcccaga ttcctgctgg tgccctcaag cctgtgagta cagtgaccgc 900 tggggagaca gagcgatcga gagaaatgtc tacctctcta cctgacagct gtgtgcgctg 960 ggttcctcct ccacctcctg tcctgccacc cccaagattg gtcattccag actcttctcc 1020 gctgggtgcc cctggcctca gggatgacca ttctcatttg ccttttcacc tacatacacc 1080 tctccacact tcttatccat atctatcact ccatgcattt ggaattctca tggacactat 1140 tgataaaatg gaagggcagg tttggcgtgg tgaggttgtg gtgtaagact gttccctctc 1200 cctggggcat tcaaactaga ggaaaccttc tctggtcgtt cccttcccat gcagagaagt 1260 tcctttttat atgagaagag tgtgcaaact gtggcctttg ggcacccacc cagccacaga 1320 tttgttttat ttactcccat gatgacatgg gccacaatag ggcctagttc ttatttgagg 1380 attcacaatt tttaccttac tggccaa 1407 <210> 46

<211> 1350 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 4 6 ccggcggcgc gatccagccc ccggccccgc ctgcgcggcc ggcccggcgg gcgctgcgcc 60 cagggacgcc cggtgcccgc cgctccgccg ccgcccgctg' ccgcggggtg acagcgatcc 120 ttctgttcca gccatttccc actttcctca ctccgtaatt cggctgggaa gttggggaag 180 atggataggg tcttgctgag gtggatttct ctcttctggc taacagccat ggtcgaaggc 240 cttcaggtca cagtgcccga caagaagaag gtggccatgc tcttccagcc cactgtgctt 300 cgctgccact tctcaacatc ctcccatcag cctgcagttg tgcagtggaa gttcaagtcc 360 tactgccagg atcgcatggg agaatccttg ggcatgtcct ctacccgggc ccaatctctc 420 agcaagagaa acctggaatg ggacccctac ttggattgtt tggacagcag gaggactgtt 480 cgagtagtag cttcaaaaca gggctcgact gtcaccctgg gagatttcta caggggcaga 540 gagatcacga ttgttcatga tgcagatctt caaattggaa agcttatgtg gggagacagc 600 ggactctatt actgtattat caccacccca gatgacctgg aggggaaaaa tgagggctca 660 ctgggactgc tggtgttgga gtgggtgttt gttggcctgg tgctcctggg cgtcttcctc 720 ttcttcgtcc tggtggggat ctgctggtgc cagtgctgcc ctcacagctg ctgctgctat 780 gtccgctgcc catgctgccc agattcctgc tggtgccctc aagcctgtga gtacagtgac 840 cgctggggag acagagcgat cgagagaaat gtctacctct ctacctgaca gctgtgtgcg 900 ctgggttcct cctccacctc ctgtcctgcc acccccaaga ttggtcattc cagactcttc 960 tccgctgggt gcccctggcc tcagggatga ccattctcat ttgccttttc acctacatac 1020 acctctccac acttcttatc catatctatc actccatgca tttggaattc tcatggacac 1080 tattgataaa atggaagggc aggtttggcg tggtgaggtt gtggtgtaag actgttccct 1140 ctccctgggg cattcaaact agaggaaacc ttctctggtc gttcccttcc catgcagaga 1200 agttcctttt tatatgagaa gagtgtgcaa actgtggcct ttgggcaccc acccagccac 1260 agatttgttt tatttactcc catgatgaca tgggccacaa tagggcctag ttcttatttg 1320 aggattcaca atttttacct tactggccaa 1350 <210> 47 <211> 639

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 47

Met Asp Arg Val Leu Leu Arg Trp lie Ser Leu Phe Trp Leu Thr Ala 15 10 15

Met Val Glu Gly Leu Gin Val Thr Val Pro Asp Lys Lys Lys Val Ala 20 25 30

Met Leu Phe Gin Pro Thr Val Leu Arg Cys His Phe Ser Thr Ser Ser 35 40 45

His Gin Pro Ala Val Val Gin Trp Lys Phe Lys Ser Tyr Cys Gin Asp 50 55 60

Arg Met Gly Glu Ser Leu Gly Met Ser Ser Thr Arg Ala Gin Ser Leu 65 70 75 80

Ser Lys Arg Asn Leu Glu Trp Asp Pro Tyr Leu Asp Cys Leu Asp Ser 85 90 95

Arg Arg Thr Val Arg Val Val Ala Ser Lys Gin Gly Ser Thr Val Thr 100 105 110

Leu Gly Asp Phe Tyr Arg Gly Arg Glu lie Thr lie Val His Asp Ala 115 120 125

Asp Leu Gin lie Gly Lys Leu Met Trp Gly Asp Ser Gly Leu Tyr Tyr 130 135 140

Cys He lie Thr Thr Pro Asp Asp Leu Glu Gly Lys Asn Glu Asp Ser 145 150 155 160

Val Glu Leu Leu Val Leu Gly Arg Thr Gly Leu Leu Ala Asp Leu Leu 155 170 175

Pro Ser Phe Ala Val Glu lie Met Pro Glu Trp Val Phe Val Gly Leu 180 185 190

Val Leu Leu Gly Val Phe Leu Phe Phe Val Leu Val Gly lie Cys Trp 195 200 205

Cys Gin Cys Cys Pro His Ser Cys Cys Cys Tyr Val Arg Cys Pro Cys 210 215 220

Cys Pro Asp Ser Cys Cys Cys Pro Gin Ala Leu Tyr Glu Ala Gly Lys 225 230 235 240

Ala Ala Lys Ala Gly Tyr Pro Pro Ser Val Ser Gly Val Pro Gly Pro 245 250 255

Tyr Ser lie Pro Ser Val Pro Leu Gly Gly Ala Pro Ser Ser Gly Met 260 265 270

Leu Met Asp Lys Pro His Pro Pro Pro Leu Ala Pro Ser Asp Ser Thr 275 280 285

Gly Gly Ser His Ser Val Arg Lys Gly Tyr Arg lie Gin Ala Asp Lys 290 295 300

Glu Arg Asp Ser Met Lys Val Leu Tyr Tyr Val Glu Lys Glu Leu Ala 305 310 315 320

Gin Phe Asp Pro Ala Arg Arg Met Arg Gly Arg Tyr Asn Asn Thr He 325 330 335

Ser Glu Leu Ser Ser Leu His Glu Glu Asp Ser Asn Phe Arg Gin Ser 340 345 350

Phe His Gin. Met Arg Ser ,Lys Gin Phe Pro val Ser Gly Asp Leu Glu 355 360 365

Ser Asn Pro Asp Tyr Trp Ser Gly Val Met Gly Gly Ser Ser Gly Ala 370 375 380

Ser Arg Gly Pro Ser Ala Met Glu Tyr Asn Lys Glu Asp Arg Glu Ser 395 390 395 400

Phe Arg His Ser Gin Pro Arg Ser Lys Ser Glu Met Leu Ser Arg Lys 405 410 415

Asn Phe Ala Thr Gly Val Pro Ala Val Ser Met Asp Glu Leu Ala Ala 420 425 430

Phe Ala Asp Ser Tyr Gly Gin Arg Pro Arg Arg Ala Asp Gly Asn Ser 435 440 445

His Glu Ala Arg Gly Gly Ser Arg Phe Glu Arg Ser Glu Ser Arg Ala 450 455 460

His Ser Gly Phe Tyr Gin Asp Asp Ser Leu Glu Glu Tyr Tyr Gly Gin 465 470 475 490

Arg Ser Arg Ser Arg Glu Pro Leu Thr Asp Ala Asp Arg Gly Trp Ala 485 490 495

Phe Ser Pro Ala Arg Arg Arg Pro Ala Glu Asp Ala His Leu Pro Arg 500 505 510

Leu Val Ser Arg Thr Pro Gly Thr Ala Pro Lys Tyr Asp His Ser Tyr 515 520 525

Leu Gly Ser Ala Arg Glu Arg Gin Ala Arg Pro Glu Gly Ala Ser Arg 530 535 540

Gly Gly Ser Leu Glu Thr Pro Ser Lys Arg Ser Ala Gin Leu Gly Pro 545 550 555 560

Arg Ser Ala Ser Tyr Tyr Ala Trp Ser Pro Pro Gly Thr Tyr Lys Ala 565 570 575

Gly Ser Ser Gin Asp Asp Gin Glu Asp Ala Ser Asp Asp Ala Leu Pro 580 585 590

Pro Tyr Ser Glu Leu Glu Leu Thr Arg Gly Pro Ser Tyr Arg Gly Arg 595 600 605

Asp Leu Pro Tyr His Ser Asn Ser Glu Lys Lys Arg Lys Lys Glu Pro 610 615 620

Ala Lys Lys Thr Asn Asp Phe Pro Thr Arg Met Ser Leu Val Val 625 630 635

<210> 48 <211> 254 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 48

Met Asp Arg Val Leu Leu Arg Trp lie Ser Leu Phe Trp Leu Thr Ala 15 10 15

Met Val Glu Gly Leu Gin Val Thr Val Pro Asp Lys Lys Lys Val Ala 20 25 30

Met Leu Phe Gin Pro Thr Val Leu Arg Cys His Phe Ser Thr Ser Ser 35 40 45

His Gin Pro Ala Val Val Gin Trp Lys Phe Lys Ser Tyr Cys Gin Asp 50 55 60

Arg Met Gly Glu Ser Leu Gly Met Ser Ser Thr Arg Ala Gin Ser Leu 65 70 75 80

Ser Lys Arg Asn Leu Glu Trp Asp Pro Tyr Leu Asp Cys Leu Asp Ser 85 90 95

Arg Arg Thr Val Arg Val Val Ala Ser Lys Gin Gly Ser Thr Val Thr 100 105 110

Leu Gly Asp Phe Tyr Arg Gly Arg Glu lie Thr lie Val His Asp Ala 115 120 125

Asp Leu Gin lie Gly Lys Leu Met Trp Gly Asp Ser Gly Leu Tyr Tyr 130 135 140

Cys lie lie Thr Thr Pro Asp Asp Leu Glu Gly Lys Asn Glu Gly Ser 145 150 155 160

Leu Gly Leu Leu Val Leu Gly Arg Thr Gly Leu Leu Ala Asp Leu Leu 165 170 175

Pro Ser Phe Ala val Glu He Met Pro Glu Trp Val Phe vai Gly Leu 180 185 190 val Leu Leu Gly val Phe Leu Phe Phe val Leu val Gly He Cys Trp 195 200 205

Cys Gin Cys Cys Pro His Ser Cys Cys Cys Tyr Val Arg Cys Pro Cys 210 215 220

Cys Pro Asp Ser Cys Trp Cys Pro Gin Ala Cys Glu Tyr Ser Asp Arg 225 230 235 240

Trp Gly Asp Arg Ala He Glu Arg Asn Val Tyr Leu Ser Thr 245 250

<210> 49 <211> 254 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 49

Met Asp Arg Val Leu Leu Arg Trp lie Ser Leu Phe Trp Leu Thr Ala 15 10 15

Met Val Glu Gly Leu Gin Val Thr Val Pro Asp Lys Lys Lys Val Ala 20 25 30

Met Leu Phe Gin Pro Thr Val Leu Arg Cys His Phe Ser Thr Ser Ser 35 40 45

His Gin Pro Ala Val Val Gin Trp Lys Phe Lys Ser Tyr Cys Gin Asp 50 55 60

Arg Met Gly Glu Ser Leu Gly Met Ser Ser Thr Arg Ala Gin Ser Leu 65 70 75 80

Ser Lys Arg Asn Leu Glu Trp Asp Pro Tyr Leu Asp Cys Leu Asp Ser 85 90 95

Arg Arg Thr Val Arg Val Val Ala Ser Lys Gin Gly Ser Thr Val Thr 100 105 110

Leu Gly Asp Phe Tyr Arg Gly Arg Glu lie Thr He Val His Asp Ala 115 120 125

Asp Leu Gin lie Gly Lys Leu Met Trp Gly Asp Ser Gly Leu Tyr Tyr 130 135 140

Cys lie lie Thr xhr Pro Asp Asp Leu Glu Gly Lys Asn Glu Asp Ser 145 150 155 160

Val Glu Leu Leu Val Leu Gly Arg Xhr Gly Leu Leu Ala Asp Leu Leu 165 170 175

Pro Ser Phe Ala Val Glu lie Met Pro Glu Trp Val Phe Val Gly Leu 180 185 190

Val Leu Leu Gly Val Phe Leu Phe Phe Val Leu Val Gly lie Cys Trp 195 200 205

Cys Gin Cys Cys Pro His Ser Cys Cys Cys Tyr Val Arg Cys Pro Cys 210 215 220

Cys Pro Asp Ser Cys Cys Cys Pro Gin Ala Cys Glu Tyr Ser Asp Arg 225 230 235 240

Trp Gly Asp Arg Ala lie Glu Arg Asn Val lyr Leu Ser Thr 245 250

<210> 50 <211> 235 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 50

Met Asp Arg Val Leu Leu Arg Trp lie Ser Leu Phe Trp Leu Thr Ala 15 10 15

Met val Glu Gly Leu Gin Val Thr Val Pro Asp Lys Lys Lys Val Ala 20 25 30

Met Leu Phe Gin Pro Thr Val Leu Arg Cys His Phe Ser Thr Ser Ser 35 40 45

His Gin Pro Ala Val Val Gin Trp Lys Phe Lys Ser Tyr Cys Gin Asp 50 55 60

Arg Met Gly Glu Ser Leu Gly Met Ser Ser Thr Arg Ala Gin Ser Leu 65 70 75 80

Ser Lys Arg Asn Leu Glu Trp Asp Pro Tyr Leu Asp Cys Leu Asp Ser 85 90 95

Arg Arg Thr Vai Arg Vai Vai Ala Ser Lys Gin Gly Ser Thr Vai Thr 100 105 110

Leu Gly Asp Phe Tyr Arg Gly Arg Glu lie Thr Ile Vai His Asp Ala 115 120 125

Asp Leu Gin lie Gly Lys Leu Met Trp Gly Asp Ser Gly Leu Tyr Tyr 130 135 140

Cys lie lie Thr Thr Pro Asp Asp Leu Glu Gly Lys Asn Glu Gly Ser 145 150 155 160

Leu Gly Leu Leu vai Leu Glu Trp Vai Phe Vai Gly Leu Vai Leu Leu 165 170 175

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Cys Pro His Ser Cys Cys Cys Tyr Vai Arg Cys Pro Cys Cys Pro Asp 195 200 205

Ser Cys Trp Cys Pro Gin Ala Cys Glu Tyr Ser Asp Arg Trp Gly Asp 210 215 220

Arg Ala Ile Glu Arg Asn Vai Tyr Leu Ser Thr 225 230 235

<210> 51 <211> 1621 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 51 gtggactagg aggcagccgc ccccaccagc acccactctg tagacccagg cgtctggctc 60 ccagcaccca cggaaagagc ctggctagga aactgcagcc tggtgcctgg cagacagttc 120 tcattctccc cagggcaggg agcaggttat gaccaggact aaggtcccag agtccccacc 180 ctgacccctc cctgctgttc cagccgctcc ctcatatcca cccctgcccc atctcctgac 240 tttggtcacg ctagcatctt ctgctgatcc tgaaattgta ccagcggcaa gatgtggcct 300 ggaaggggac tttaagttct ccacaactgc cagcaatcct tccaccaggc aaaacacatc 360 atctaaggaa aagaagtgag gtttgcttag ggcgtggcag cttcggataa acgcaggact 420 ccgcctggca gcccgatttc tcccggaacc tctgctcagc ctggtgaacc acacaggcca 480 gcgctctgac atgcagaagg tgaccctggg cctgcttgtg ttcctggcag gctttcctgt 540 cctggacgcc aatgacctag aagataaaaa oagtccttto tactatgact ggoacagcct 600 ccaggttggc gggctcatct gcgctggggt tctgtgcgcc atgggcatca tcatcgtcat 660 gagtgcaaaa tgcaaatgca agtttggcca gaagtccggt caccatccag gggagactcc 720 acctctcatc aocccaggct cagcccaaag ctgatgagga cagaccagct gaaattgggt 780 ggaggaccgt tctctgtccc caggtcctgt ctctgcacag aaacttgaac tccaggatgg 840 aattcttcct cctctgctgg gactcctttg catggcaggg cctcatctca cctctcgcaa 900 gagggtctct ttgttcaatt ttttttaatc taaaatgatt gtgcctctgc ccaagcagcc 960 tggagacttc ctatgtgtgc attggggtgg ggcttggggc accatgagaa ggttggcgtg 1020 ccctggaggc tgacacagag gctggcactg agcctgcttg ttgggaaaag cccacaggcc 1080 tgttcccttg tggcttggga catggcacag gcccgocctc tgcctcctca gccatgggaa 1140 cctcatatgc aatttgggat ttactagtag ccaaaaggaa tgaaagagag ctctaaccag 1200 atggaacact ggaacattcc agtggaccct ggaccattcc aggaaaactg ggacatagga 1260 tcgtcccgct atgatggaag tgttcagaca gtttataata gtaagcccct gtgaccctct 1320 cacttacccc gagacctcac tttattacaa gatctttcca aatacccaaa tgtccctgca 1380 agcccgttaa ataattccct atgctaccct taataacata caatgaccac atagtgtgag 1440 aacttccaac aagcctcaaa gtcccttgag actccccaat acctaataag gcatgcgaaa 1500 tgttctcatg aactacccca caacacgcct aaaactcaaa acacccaaaa atatctcctc 1560 caatgtcctg agacatgaac ccaaaaagag acccacaata aactcgtgac ttgtcccctc 1620 a 1621 <210> 52 <211> 1925

<212> ADN <213> Homo sapiens <400> 52 gtggactagg aggcagccgc ccccaccagc acccactctg tagacccagg cgtctggctc 60 ccagcaccca cggaaagagc ctggctagga aactgcagcc tggtgcctgg cagacagttc 120 toattctccc cagggcaggg agcaggttat gaccaggact aaggtcccag agtccccacc 180 ctgacccctc cctgctgttc cagccgctcc ctcatatcca cccctgcccc atctcctgac 240 tttggtcacg ctagcatctt ctgctgatcc tgaaattgta ccagcggcaa gatgtggcct 300 ggaaggggac tttaagttct ccacaactgc cagcaatcct tccaccaggc aaaacacatc 360 atctaaggaa aagaagtgag gtcggaacac caacgcatca tctcactgca tggccctgga 420 ggctctgccg tttaaagacc ccagaacctt ccccattcaa ggtcctctcc tgggcacagg 480 agattggaga aagctcctcc cttaattcca gggaccgagt tccagcccat ccaattctcc 540 gtotcacctg aggctgctgt ggtcctggtg accccaggga gcaacctgcc gcccatggct 600 ggggaggggg tgaagctgtc tctttaagag caggaatgga gcccctgggc ctcagggcat 660 ctgacttgtt ttctacctgc ccaggtttgc ttagggcgtg gcagcttcgg ataaacgcag 720 gactccgcct ggcagcccga tttctcccgg aacctctgct cagcctggtg aaccacacag 780 gccagcgctc tgacatgcag aaggtgaccc tgggcctgct tgtgttcctg gcaggctttc 840 ctgtcctgga cgccaatgao ctagaagata aaaacagtcc tttctactat gactggcaca 900 gcctccaggt tggcgggctc atctgcgctg gggttctgtg cgccatgggc atcatcatcg 960 tcatgagtgc aaaatgcaaa tgcaagtttg gccagaagtc cggtcaccat ccaggggaga 1020 ctccacctct catcacccca ggctcagccc aaagctgatg aggacagacc agctgaaatt 1080 gggtggagga ccgttctctg tccccaggtc ctgtctctgc acagaaactt gaactccagg 1140 atggaattct tcctcctctg ctgggactcc tttgcatggc agggcctcat ctcacctctc 1200 gcaagagggt ctctttgttc aatttttttt aatctaaaat gattgtgcct ctgcccaagc 1260 agcctggaga cttcctatgt gtgcattggg gtggggcttg gggcaccatg agaaggttgg 1320 cgtgccctgg aggctgacac agaggctggc actgagcctg cttgttggga aaagcccaca 1380 ggcctgttcc cttgtggctt gggacatggc acaggcccgc cctctgcctc ctcagccatg 1440 ggaacctcat atgcaatttg ggatttacta gtagccaaaa ggaatgaaag agagctctaa 1500 ccagatggaa cactggaaca ttccagtgga ccctggacca ttccaggaaa actgggacat 1560 aggatcgtcc cgctatgatg gaagtgttca gacagtttat aatagtaagc ccctgtgacc 1620 ctctcactta ccccgagacc tcactttatt acaagatctt tccaaatacc caaatgtccc 1680 tgcaagcccg ttaaataatt ccctatgcta cccttaataa catacaatga ccacatagtg 1740 tgagaacttc caacaagcct caaagtccct tgagactccc caatacctaa taaggcatgc 1800 gaaatgttct catgaactac cccacaacac gcotaaaact caaaacaccc aaaaatatct 1860' cctccaatgt cctgagacat gaacccaaaa agagacccac aataaaetcg tgacttgtcc 1920 cctca 1925 <210> 53

<211> 1808 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 53 gtggactagg aggcagccgc ccccaccagc acccactctg tagacccagg cgtctggctc 60 ccagcaccca cggaaagagc ctggctagga aactgcagcc tggtgcctgg cagacagttc 120

tcattctcec cagggcaggg agcaggttat gaccaggact aaggtcccag agtccccacc ISO ctgacccctc cctgctgttc cagccgctcc ctcatatcca cccctgcccc atctcctgac 240 tttggtcacg ctagcatctt ctgctgatcc tgaaattgta ccagcggcaa gatgtggcct 300 ggaaggggac tttaagttct ccacaactgc cagcaatcct tccaccaggc aaaacacatc 360 atctaaggaa aagaagtgag gtcggaacac caacgcatca tctcactgca tggccctgga 420 ggctctgccg tttaaagacc ccagaacctt ccccattcaa ggtcctctcc tgggcacagg 480 agattggaga aagctcctcc cttaattcca gggaccgagt tccagcccat ccaattctcc 540 * gtctcacctg aggctgctgt ggtcctggtt tgcttagggc gtggcagctt cggataaacg 600 caggactccg cctggcagcc cgatttctcc cggaacctct gctcagcctg gtgaaccaca 660 caggccagcg ctctgacatg cagaaggtga ccctgggcct gcttgtgttc ctggcaggct 720 ttcctgtcct ggacgccaat gacctagaag ataaaaacag tcctttctac tatgactggc 780 acagcctcca ggttggcggg ctcatctgcg ctggggttct gtgcgccatg ggcatcatca 840 tcgtcatgag tgcaaaatgc aaatgcaagt ttggccagaa gtccggtcac catccagggg 900 agactccacc tctcatcacc ccaggctcag cccaaagctg atgaggacag accagctgaa 960 attgggtgga ggaccgttct ctgtccccag gtcctgtctc tgcacagaaa cttgaactcc 1020 aggatggaat tcttcctcct ctgctgggac tcctttgcat ggcagggcct catctcacct 1080 ctcgcaagag ggtctctttg ttcaattttt tttaatctaa aatgattgtg cctctgccca 1140 agcagcctgg agacttccta tgtgtgcatt ggggtggggc ttggggcacc atgagaaggt 1200 tggcgtgccc tggaggctga cacagaggct ggcactgagc ctgcttgttg ggaaaagccc 1260 acaggcctgt tcccttgtgg cttgggacat ggcacaggcc cgccctctgc ctcctcagcc 1320 atgggaacct catatgcaat ttgggattta ctagtagcca aaaggaatga aagagagctc 1380 taaccagatg gaacactgga acattccagt ggaccctgga ccattccagg aaaactggga 1440 cataggatcg tcccgctatg atggaagtgt tcagacagtt tataatagta agcccctgtg 1500 accctctcac ttaccccgag acctcacttt attacaagat ctttccaaat acccaaatgt 1560 ccctgcaagc ccgttaaata attccctatg ctacccttaa taacatacaa tgaccacata 1620 gtgtgagaac ttccaacaag cctcaaagtc ccttgagact ccccaatacc taataaggca 1680 tgcgaaatgt tctcatgaac taccccacaa cacgcctaaa actcaaaaca cccaaaaata 1740 tctcctccaa tgtcctgaga catgaaccca aaaagagacc cacaataaac tcgtgacttg 1800 tcccctea 1608

<210> 54 <211> 1702 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 54 gtggactagg aggcagccgc ccccaccagc acccactctg tagacccagg cgtctggctc 60 ccagcaccca cggaaagagc ctggctagga aactgcagcc tggtgcctgg cagacagttc 120 tcattctccc cagggcaggg agcaggttat gaccaggact aaggtcccag agtccccacc 180 ctgacccctc cctgctgttc cagccgctcc ctcatatcca cccctgcccc atctcctgao 240 tttggtcacg ctagcatctt ctgctgatcc tgaaattgta ccagcggcaa gatgtggcct 300 ggaaggggac tttaagttct ccacaactgc cagcaatcct tccaccaggc aaaacacatc 360 atctaaggaa aagaagtgag gtcggaacac caacgcatca tctcactgca tggccctgga 420 ggctctgccg tttaaagacc ccagaacctt ccccattcaa ggtttgctta gggcgtggca 480 gcttcggata aacgcaggac tccgcctggc agcccgattt ctcccggaac ctctgctcag 540 cctggtgaac cacacaggcc agcgctctgá catgcagaag gtgaccctgg gcctgcttgt 600 gttcctggca ggctttcctg tcctggacgc caatgaccta gaagataaaa acagtccttt 660 ctactatgac tggcacagcc tccaggttgg cgggctcatc tgcgctgggg ttctgtgcgc 720 catgggcatc atcatcgtca tgagtgcaaa atgcaaatgc aagtttggcc agaagtccgg 780 tcaccatcca ggggagactc cacctctcat caccccaggc tcagcccaaa gctgatgagg 840 acagaccagc tgaaattggg tggaggaccg ttctctgtcc ccaggtcctg tctctgcaca 900 gaaacttgaa ctccaggatg gaattcttcc tcctctgctg ggactccttt gcatggcagg 960 gcctcatctc acctctcgca agagggtctc tttgttcaat tttttttaat ctaaaatgat 1020 tgtgcctctg cccaagcagc ctggagactt cctatgtgtg cattggggtg gggcttgggg 1080 caccatgaga aggttggcgt gccctggagg ctgacacaga ggctggcact gagcctgctt 1140 gttgggaaaa gcccacaggc ctgttccctt gtggcttggg acatggcaca ggcccgccct 1200

Ctgcctccto agccatggga acctcatatg caatttggga tttactagta gccaaaagga 1260 atgaaagaga gctctaacca gatggaacac tggaacattc cagtggaccc tggaccattc 1320 caggaaaact gggacatagg atcgtcccgc tatgatggaa gtgttcagac agtttataat 1380 agtaagcccc tgtgaccctc tcacttaccc cgagacctca ctttattaca agatctttcc 1440 aaatacccaa atgtccctgc aagcccgtta aataattccc tatgctaccc ttaataacat 1500 acaatgacca catagtgtga gaacttccaa caagcctcaa agtcccttga gactccccaa 1560 tacctaataa ggcatgcgaa atgttctcat gaactacccc acaacacgcc taaaactcaa 1620 aacacccaaa aatatctcct ccaatgtcct gagacatgaa cccaaaaaga gacccacaat 1680 aaactcgtga cttgtcccct ca 1702

<210> 55 <211> 1705 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 55 gtggactagg aggcagccgc ccccaccagc acccactctg tagacccagg cgtctggctc 60 ccagcaccca cggaaagagc ctggctagga aactgcagcc tggtgcctgg cagacagttc 120 tcattctccc cagggcaggg agcaggttat gaccaggact aaggtcccag agtccccacc 180 ctgacccctc cctgctgttc cagccgctcc ctcatatcca cccctgcccc atctcctgac 240 tttggtcacg ctagcatctt ctgctgatcc tgaaattgta ccageggcaa gatgtggcct 300 ggaaggggac tttaagttct ccacaactgc cagcaatcct tccaccaggc aaaacacatc 360 atctaaggaa aagaagtgag gtttgcttag ggcgtggcag cttcggataa acgcaggact 420 ccgcctggca gcccgatttc tcccggaacc tctgctcagc ctggtgaacc acacaggccc 480 gagtttcacc cagtccccac tccacggtgc agctgcggct tatctctcag cccagcgaga 540 tgccagcctt cctgtcccgg gccagcgctc tgacatgcag aaggtgaccc tgggcctgct 600 tgtgttcctg gcaggctttc ctçrtcctgga cgccaatgac ctagaagata aaaacagtcc 660 tttctactat gactggcaca gcctccaggt tggcgggctc atctgcgctg gggttctgtg 720 cgccatgggc atcatcatcg tcatgagtgc aaaatgcaaa tgcaagtttg gccagaagtc 780 cggtcaccat ccaggggaga ctccacctct catcacecca ggctcagccc aaagctgatg 840 aggacagacc agctgaaatt gggtggagga ccgttctctg tccccaggtc ctgtctctgc 900 acagaaactt gaactccagg atggaattct tcctcctctg ctgggactcc tttgcatggc 960 agggcctcat ctcacctctc gcaagagggt ctctttgttc aatttttttt aatctaaaat 1020 gattgtgcct ctgcccaagc agcctggaga cttcctatgt gtgcattggg gtggggcttg 1080 gggcaccatg agaaggttgg cgtgccctgg aggctgacac agaggctggc actgagcctg 1140 cttgttggga aaagcccaca ggcctgttcc cttgtggctt gggacatggc acaggcccgc 1200 cctctgcctc ctcagccatg ggaacctcat atgcaatttg ggatttacta gtagccaaaa 1260 ggaatgaaag agagctctaa ccagatggaa cactggaaca ttccagtgga ccctggacca 1320 ttccaggaaa actgggacat aggatcgtcc cgctatgatg gaagtgttca gacagtttat 1380 aatagtaagc ccctgtgacc ctctcactta ccccgagaec tcactttatt acaagatctt 1440 tccaaatacc caaatgtccc tgcaagcccg ttaaataatt ccctatgcta cccttaataa 1500 catacaatga ccacatagtg tgagaacttc caacaagcct caaagtccct tgagactcco 1560 caatacctaa taaggcatgc gaaatgttct catgaactac cccacaacac gcctaaaact 1620 caaaacaccc aaaaatatct cctccaatgt cctgagacat gaacccaaaa agagacccac 1680 aataaacteg tgacttgtcc cctca 1705 <210> 56 <211> 1786

<212> ADN <213> Homo sapiens <400> 56 gtggactagg aggcagccgc ccccaccagc acccactctg tagacccagg cgtctggctc 60 ccagcaccca cggaaagagc ctggctagga aactgoagcc tggtgcctgg cagacagttc 120 tcattctccc cagggcaggg agcaggttat gaccaggact aaggtcccag agtccccacc 180 ctgacccctc cctgctgttc cagccgctcc ctcatatcca cccctgcccc atctcctgac 240 tttggtcacg ctagcatctt ctgctgatcc tgaaattgta ccagcggcaa gatgtggcct 300 ggaaggggac tttaagttct ccacaactgc cagcaatcct tccaccaggc aaaacacatc 360 atctaaggaa aagaagtgag gtcggaacac caacgcatca tctcactgca tggccctgga 420 ggctctgccg tttaaagacc ccagaacctt ccccattcaa ggtttgctta gggcgtggca 480 gcttcggata aacgcaggac tccgcctggc agcccgattt ctcccggaac ctctgctcag 540 cctggtgaac cacacaggcc cgagtttcac ccagtcccca ctccacggtg cagctgcggc 600 ttatctctca gcccagcgag atgccagcct tcctgtcccg ggccagcgct ctgacatgca 660 gaaggtgacc ctgggcctgc ttgtgttcct ggcaggcttt cctgtcctgg acgccaatga 720 cctagaagat aaaaacagtc ctttctacta tgactggcac agcctccagg ttggcgggct 780 catctgcgct ggggttctgt gcgccatggg catcatcatc gtcatgagtg caaaatgcaa 840 atgcaagttt ggccagaagt ccggtcacca tccaggggag actccacctc tcatcacccc 900 aggctcagcc caaagctgat gaggacagac cagctgaaat tgggtggagg accgttctct 960 gtccccaggt cctgtctctg cacagaaact tgaactccag gatggaattc ttcctcctct 1020 gctgggactc ctttgcatgg cagggcctca tctcacctct cgcaagaggg tctctttgtt 1080 caattttttt taatctaaaa tgattgtgcc tctgcccaag cagcctggag acttcctatg 1140 tgtgcattgg ggtggggctt ggggcaccat gagaaggttg gcgtgccctg gaggctgaca 1200 cagaggctgg cactgagcct gcttgttggg aaaagcccac aggcctgttc ccttgtggct 1260 tgggacatgg cacaggcccg ccctctgcct cctcagccat gggaacctca tatgcaattt 1320 gggatttact agtagccaaa aggaatgaaa gagagctcta accagatgga acactggaac 1380 attccagtgg accctggacc attccaggaa aactgggaca taggatcgtc ccgctatgat 1440 ggaagtgttc agacagttta taatagtaag cccctgtgac cctctcactt accccgagac 1500 ctcactttat tacaagatct ttccaaatac ccaaatgtcc ctgcaagccc gttaaataat 1560 tccctatgct acccttaata acatacaatg accacatagt gtgagaactt ccaacaagcc 1620 tcaaagtccc ttgagactcc ccaataccta ataaggcatg cgaaatgttc tcatgaacta 1680 ccccacaaca cgcctaaaac tcaaaacacc caaaaatatc tcctccaatg tcctgagaca 1740 tgaacccaaa aagagaccca caataaactc gtgacttgtc ccctca 1786

<210> 57 <211> 1827 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 57 gtggactagg aggcagccgc ccccaccagc acccactctg tagacccagg cgtctggctc 60 ccagcaccca cggaaagagc ctggctagga aactgcagcc tggtgcctgg cagacagttc 120 tcattctccc cagggcaggg agcaggttat gaccaggact aaggtcccag agtccccacc 180 ctgacccctc cctgctgttc cagccgctcc ctcatatcca cccctgcccc atctcctgac 240 tttggtcacg ctagcatctt ctgctgatcc tgaaattgta ccagcggcaa gatgtggcct 300 ggaaggggac tttaagttct ccacaactgc cagcaatcct tccaccaggc aaaacacatc 360 atctaaggaa aagaagtgag gtttgcttag ggcgtggcag cttcggataa acgcaggact 420 ccgcctggca gcccgatttc tcccggaacc tctgctcagc ctggtgaacc acacagaggc 480 tg9?9c9agg aggataccat ctgtcagtct tggctggatg acatcatggg aagggggtat 540 agtggggcct tgcaggccag aggtggcttg gaggagcccc tggaaagagg cttaagaggc 600 ccgagtttca cccagtcccc actccacggt gcagctgcgg cttatctctc agcccagcga 660 gatgccagcc ttcctgtccc gggccagcgc tctgacatgc agaaggtgac cctgggcctg 720 cttgtgttcc tggcaggctt tcctgtcctg gacgccaatg acctagaaga taaaaacagt 780 cctttctact atgactggca cagcctccag gttggcgggc tcatctgcgc tggggttctg 840 tgcgccatgg gcatcatcat cgtcatgagt gcaaaatgca aatgcaagtt tggccagaag 900 tccggtcacc atccagggga gactccacct ctcatcaccc caggctcagc ccaaagctga 960 tgaggacaga ccagctgaaa ttgggtcgag gaccgttctc tgtccacagg tcctgtctct 1020 gcacagaaac ttgaactcca ggatggaatt cttcctcctc tgctgggsct cctttgcatg 1080 gcagggccto atctcacctc tcgcaagagg gtctctttgt tcaatttttt ttaatctaaa 1140 atgattgtgc ctctgcceaa gcagcctgga gacttcctat gtgtgcattg gggtggggct 1200 tggggcaeca tgagaaggtt ggcgtgccct ggaggctgac acagaggctg gcactgagcc 1260 tgcttgttgg gaaaagccca caggcctgtt cecttgtggc ttgggacatg gcacaggccc 1320 gccctctgcc tcctcagcca tgggaaccte atatgcaatt tgggatttac tagtagccaa 1380 aaggaatgaa agagagetct aaecagatgg aacactggaa cattccagtg gaccctggac 1440 cattccagga aaactgggac ataggatcgt cccgctatga tggaagtgtt cagacagttt 1500 ataatagtaa gcccctgtga ccctctcact taccccgaga cctcacttta ttacaagatc 1560 tttccaaata cccaaatgtc cctgcaagcc cgttaaataa ttccctatgc tacccttaat 1620 aacatacaat gaccacatag tgtgagaact tccaacaagc ctcaaagtoc cttgagactc 16B0 cccastacct aataaggcat gcgaaatgtt ctcatgaact accccacaac acgcctaaaa Π40 ctcaaaacac ccaaaaatat ctcctccaat gtcctgagac atgaacccaa aaagagaccc 1800 acaataaact cgtgacttgt ccccfcca 1827

<210> 58 <211> 3605 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 58 gtggactagg aggcagccgc ccccaccagc acccactctg tagacccagg cgtctggctc 60 ccagcaccca cggaaagagc ctggctagga aactgcagcc tggtgcctgg cagacagttc 120 tcattctccc cagggcaggg agcaggttat gaccaggact aaggtcccag agtccccacc 180 ctgacccctc cctgctgttc cagccgctcc ctcatatcca cccctgcccc atctcctgac 240 tttggtcacg ctagcatctt ctgctgatcc tgaaattgta ccagcggcaa gatgtggcct 300 ggaaggggac tttaagttct coacaactgc cagcaatcct tccaccaggc aaaacacatc 360 atctaaggaa aagaagtgag gtttgcttag ggcgtggcag cttcggataa acgcaggact 420 ccgcctggca gcccgatttc tcccggaacc tctgctcagc ctggtgaacc acacagaggc 480 tggggcgagg aggataccat ctgtcagtct tggctggatg acatcatggg aagggggtat 540 agtggggcct tgcaggccag aggtggcttg gaggagcccc tggaaagagg cttaagaggt 600 gagactcaac agccatggcg acagagcata gggctttaag atgaatttgc aggggttaca 660 ggattacaac tgcaatgtgg gctaataata gtgccccctg cattaagctg cagagattga 720 gcgagtaagt gggaagctga gaaaatgccc ccatggggta gacactcaat aagcatctgc 780 tgttattacc aggactcgta tggtcatggg tgacagcttc agaccacagg cagtccacct 840 acaacctgtg cccctatoca ccatgdcatc ctgcccaccc acccacgcca gctcccccaa 900 cceecaaeac ttttggggat cctaaacact tcctgggcct cagtaatgct ccccaaagcc 960 tcaggctttc ttcccgcaaa aaaaggaaaa gaaatggatg otccaactaa aattgtgagt 1020 tcagcatgtg gaattaactg ggaagctgag aggattccca ggcctggggt gcgcaggcag 1080 agggaggagt ctgtgccaac ctgcaaggac cacccgcacc gttggttgcg ggcaccaccc 1140 tctctcagca tttttgctgt tcgtgaaatg aggacatagt ggacgacgtc ggggattgct 1200 ggggggttaa gtgagtgaga acacggcaag gtcagtgtgc actccagggc aaggtggagg 1260 aagtgccagc tctcgctatc aaaattataa ctaggccagg cgtggtggct cacacctgta 1320 atcccagcac tgagggaggc cggggtgggt ggatcacctg aggtcaggag ttggagacca 1380 gcctggccaa cacagtgaaa ccctggctct accaaaaatg caaaaattag ccgagactgg 1440 tggcacacgc ctgtagtctc agctactcag gaggctgagg caggagaatc acttgaaccc 1500 aggaggcaga ggttgcagtg agctgagatt atgccattgc actccagcct gggtgacaga 1560 gtgaaactcc gcctcaaaaa aaaaaaacaa ttatgataac tatgcactca gcatttgggc 1620 agggacaggg cagggacagg gcaggggagg gcatgctcgg aggccagggc ttggtgcagc 1680 cttgcaggct ggtgagaggg caggactgat gccaggtcag gaaggagaga gaaacgagtt 1740 ccttatgctg agcaggtcta cotgggaaag agaaagtgtt tgctgtcacc aggaactctg 1800 ctgggcctag ggtagggtca ggggctgggc tggggacccc ggctaggcag agccagggct 1860 gggaccggga agggcatggg tgtgggatga ggggcaggag gttcggggga acagagatgg 1920 agctagggct gcagccagga ggtagagtcc ccctctaccc ccagtcccag cctcacgtca 1980 attcctccac acaccacccc acccccaagc agcttgaaga acctgctcag tcctcagcct 2040 gaagtctgca atgtcctggc agggccgggc aggctctgag cggtctaegg agaeacteet 2100 gggaagcggg cctcctgccg cctggcrtccc aatgccccgc ttccccaaac accccaaggc 2160 cctgacagtc cctagttagg agcagctgct ggggagccag gcctggctta aatcctactt 2220 cctggctaga gcacctagtt tcacctctca gagcctcagt ctccccatct gtccagtgag 2280 aacagtgggc agtggcgccc ttgtttggtt gcggggcgat tcccagaaag cctgaagtcc 2340 atgtccagtg agttattatg gctcctcccg cctcaggccc gagtttcacc cagtccccac 2400 tceacggtgc agctgcggct tatctctcag cccagcgaga tgcoagcott cctgtcccgg 2460 gccagcgctc tgacatgcag aaggtgaccc tgggcctgct tgtgttcctg gcaggctttc 2520 ctgtcctgga cgccaatgac ctagaagata aaaacagtcc tttctactat gactggcaca 2580 gcctccaggt tggcgggctc atctgcgctg gggttctgtg cgccatgggc atcatcatcg 2640 tcatgagtgc aaaatgcaaa tgcaagtttg gccagaagtc cggtcaccat ccaggggaga 2700 ctccacctct catcacccca ggctcagccc aaagctgatg aggacagacc agctgaaatt 2760 gggtggagga ccgttctctg tccccaggtc ctgtctctgc acagaaactt gaactccagg 2820 atggaattct tcctcctctg ctgggactcc tttgcatggc agggcctcat ctcacctctc 2880 gcaagagggt ctctttgttc aatttttttt aatctaaaat gattgtgcct ctgcccaagc 2940 agcctggaga cttcctatgt gtgcattggg gtggggcttg gggcaccatg agaaggttgg 3000 cgtgccctgg aggctgacac agaggctggc actgagcctg cttgttggga aaagcccaca 3060 ggcctgttcc cttgtggcft gggacatggc acaggcccgo cctctgcctc ctcagccatg 3120 ggaacctcat atgcaatttg ggatttacta gtagccaaaa ggaatgaaag agagctctaa 3180 ccagatggaa cactggaaca ttccagtgga ccctggacca ttccaggaaa actgggacat 3240 aggatcgtcc cgctatgatg gaagtgttca gacagtttat aatagtaagc ccctgtgacc 3300 ctctcactta ccccgagacc tcactttatt acaagatctt tccaaatacc caaatgtccc 3360 tgcaagcccg ttaaataatt ccctatgcta cccttaataa catacaatga ccacatagtg 3420 tgagaacttc caacaagcct caaagtccct tgagactccc caatacctaa taaggcatgc 3480 gaaatgttct catgaactac cccacaacac gcctaaaact caaaacaccc aaaaatatct 3540 cctccaatgt cctgagacat gaacccaaaa agagacccac aataaactcg tgacttgtcc 3600 cctca 3605

<210> 59 <211> 2459 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 59 gtggactagg aggcagccgc ccccaccagc acccactctg tagacccagg cgtctggctc 60 ccagcaccca cggaaagagc ctggctagga aactgcagcc tggtgcctgg cagacagttc 120 tcattctccc cagggcaggg agcaggttat gaccaggact aaggtcccag agtccccacc 180 ctgacccctc cctgctgttc cagccgctcc ctcatatcca cccctgcccc atctcctgac 240 tttggtcacg ctagcatctt ctgctgatcc tgaaattgta ccagcggcaa gatgtggcct 300 ggaaggggac tttaagttct ccacaactgc cagcaatcct tccaccaggc aaaacacatc 360 atctaaggaa aagaagtgag gtttgcttag ggcgtggcag cttcggataa acgcaggact 420 ccgcctggca gcccgatttc tcccggaacc tctgctcagc ctggtgaacc acacagaggc 480 tggggcgagg aggataccat ctgtcagtct tggctggatg acatcatggg aagggggtat 540 agtggggcct tgcaggccag aggtggcttg gaggagcccc tggaaagagg cttaagaggt 600 gagactcaac agccatggcg acagagcata gggctttaag atgaatttgc aggggttaca 660 ggattacaac tgcaatgtgg gctaataata gtgecccctg cattaagctg cagagattga 120 gcgagtaagt gggaagctga gaaaatgccc ccatggggta gacactcaat aagcatctgc "780 tgttattacc aggactcgta tggtcatggg tgacagcttc agaccacagg cagtccacct 840 acaacctgtg cccctatcca ccatgccatc ctgcccaccc acccacgcca gctcccccaa 900 cccccaacac ttttggggat cctaaacact tcctgggcct cagtaatgct ccccaaagcc 960 tcaggctttc ttcccgcaaa aaaaggaaaa gaaatggatg ctccaactaa aattgtgagt 1020 tcagcatgtg gaattaactg ggaagctgag aggattccca ggcctggggt gcgcaggcag 1080 agggaggagt ctgtgccaac ctgcaaggac cacccgcacc gttggttgcg ggcaccaccc 1140 tctctcagca tttttgctgt tcgtgaaatg aggacatagt ggacgacgtc ggggattgct 1200 ggggggttaa gtgagtgaga acacggcaag gcccgagttt cacccagtcc ccactccacg 1260 gtgcagctgc ggcttatctc tcagcccagc gagatgccag ccttcctgtc ccgggccagc 1320 gctctgacat gcagaaggtg accctgggcc tgcttgtgtt cctggcaggc tttcctgtce 1380 tggacgccaa tgacctagaa gataaaaaca gtcctttcta ctatgactgg cacagcctcc 1440 aggttggcgg gctcatctgc gctggggttc tgtgcgccat gggcatcatc atcgtcatga 1500 gtgcaaaatg caaatgcaag tttggccaga agtccggtca ccatccaggg gagactccac 1560 ctctcatcac cccaggctca gcccaaagct gatgaggaca gaccagctga aattgggtgg 1620 aggaccgttc tctgtcccca ggtcctgtct ctgcacagaa acttgaactc caggatggaa 1680 ttcttcctcc tctgctggga ctcctttgca tggcagggcc tcatctcacc tctcgcaaga 1740 gggtctcttt gttcaatttt ttttaatcta aaatgattgt gcctctgccc aagcagcctg 1800 gagacttcct atgtgtgcat tggggtgggg cttggggcac catgagaagg ttggcgtgcc i860 ctggaggctg acacagaggc tggcactgag cctgcttgtt gggaaaagcc cacaggcctg 1920 ttcccttgtg gcttgggaca tggcacaggc ccgccctctg cctcctcagc catgggaacc 1980 tcatatgcaa tttgggattt actagtagcc aaaaggaatg aaagagagct ctaaccagat 2040 ggaacactgg aacattccag tggaccctgg accattccag gaaaactggg acataggatc 2100 gtcccgctat gatggaagtg ttcagacagt ttataatagt aagcccctgt gaccctctca 2160 cttaccccga gacctcactt tattacaaga tctttccaaa tacccaaatg tccctgcaag 2220 eccgttaaat aatteeetat getaccctta ataacataca atgaccacat agtgtgagaa 2280 cttccaacaa gcctcaaagt cccttgagac tccccaatac ctaataaggc atgcgaaatg 2340 ttctcatgaa ctaccccaca acacgcctaa aactcaaaac acccaaaaat atctcctcca 2400 atgtcctgag acatgaaccc aaaaagagac ccacaataaa ctcgtgactt gtcccctca 2459

<210> 60 <211> 3716 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 60 gtggactagg aggcagccgc ccccaccagc acccactctg tagacccagg cgtctggctc 60 ccagcaccca cggaaagagc ctggctagga aactgcagcc tggtgcctgg cagacagttc 120 tcattctccc cagggcaggg agcaggttat gaccaggact aaggtcccag agtccccacc 180 ctgacccctc cctgctgttc cagccgctcc ctcatatcca cccctgcccc atctcctgac 240 tttggtcacg ctagcatctt ctgctgatcc tgaaattgta ccagcggcaa gatgtggcct 300 ggaaggggac tttaagttct ccacaactgc cagcaatcct tccaccaggc aaaacacatc 360 atctaaggaa aagaagtgag gtttgcttag ggcgtggcag cttcggataa acgcaggact 420 ccgcctggca gcccgatttc tcccggaacc tctgctcagc ctggtgaacc acacagaggc 480 tggggcgagg aggataccat ctgtcagtct tggctggatg acatcatggg aagggggtat 540 agtggggcct tgcaggccag aggtggcttg gaggagcccc tggaaagagg cttaagaggt 600 gagactcaac agccatggcg acagagcata gggctttaag atgaatttgc aggggttaca 660 ggattacaac tgcaatgtgg gctaataata gtgccccctg cattaagctg cagagattga 720 gcgagtaagt gggaagctga gaaaatgccc ccatggggta gacactcaat aagcatctgc 780 tgttattacc aggactcgta tggtcatggg tgacagcttc agaccacagg cagtccacct 840 acaacctgtg cccctatcca ccatgccatc ctgcccaccc acccacgcca gctcccccaa 900 eccccaacac ttttggggat cctaaacact tcctgggcct cagtaatgct ccccaaagcc 960 tcaggctttc ttcccgcaaa aaaaggaaaa gaaatggatg ctccaactaa aattgtgagt 1020 tcagcatgtg gaattaactg ggaagctgag aggattccca ggcctggggt gcgcaggcag 1080 agggaggagt ctgtgccaac ctgcaaggac cacccgcacc gttggttgcg ggcaccaccc 1140 tctctcagca tttttgctgt tcgtgaaatg aggacatagt ggacgacgtc ggggattgct 1200 ggggggttaa gtgagtgaga acacggcaag gtcagtgtgc actccagggc aaggtggagg 1260 aagtgccagc tctcgctatc aaaattataa ctaggccagg cgtggtggct cacacctgta 1320 atcccagcac tgagggaggc cggggtgggt ggatcacctg aggtcaggag ttggagacca 1380 gcctggccaa cacagtgaaa ccctggctct accaaaaatg caaaaattag ccgagaetgg 1440 tggcacacgc ctgtagtctc agctactcag gaggctgagg caggagaatc acttgaaccc 1500 aggaggcaga ggttgcagtg agctgagatt atgccattgc actccagcct gggtgacaga 1560 gtgaaactcc gcctcaaaaa aaaaaaacaa ttatgataac tatgcactca gcatttgggc 1620 agggacaggg cagggacagg gcaggggagg gcatgctcgg aggccagggc ttggtgcagc 1680 cttgcaggct ggtgagaggg caggactgat gccaggtcag gaaggagaga gaaacgagtt 1740 ccttatgctg agcaggtcta cctgggaaag agaaagtgtt tgctgtcacc aggaactctg 1800 ctgggcctag ggtagggtca ggggctgggc tggggacccc ggctaggcag agccagggct 1860 gggaccggga agggcatggg tgtgggatga ggggcaggag gttcggggga acagagatgg 1920 agctagggct gcagccagga ggtagagtcc ccctctaccc ccagtcccag cctcacgtca 1980 attcctccac acaccacccc acccccaagc agcttgaaga acctgctcag tcctcagcct 2040 gaagtctgca atgtcctggc agggccgggc aggctctgag cggtctacgg agacactcct 2100 gggaagcggg cctcctgccg cctggctccc aatgccccgc ttccccaaac accccaaggc 2160 cctgacagtc cctagttagg agcagctgct ggggagccag gcctggctta aatcctactt 2220 cctggctaga gcacctagtt tcacctctca gagcctcagt ctccccatct gtccagtgag 2280 aacagtgggc agtggcgccc ttgtttggtt gcggggcgat tcccagaaag cctgaagtcc 2340 atgtccagtg agttattatg gctcctcccg cctcaggccc gagtttcacc cagtccccac 2400 tccacggtgc agctgcggct tatctctcag cccagcgaga tgccagcctt cctgtcccgg 2460 gtgagctgcg caccctgcct ggggagcagg ggaggagggt tggggagcca caggcacagg 2520 gccagcctcc cggtggctct gctaaggccg gacctccegc cacccctcta ggccagcgct 2580 ctgacatgca gaaggtgacc ctgggectgc ttgtgttcct ggcaggcttt cctgtcctgg 2640 acgccaatga cctagaagat aaaaacagtc ctttctacta tgactggcac agcctccagg 2700 ttggcgggct catctgcgct ggggttctgt gcgccatggg catcatcatc gtcatgagtg 2760 caaaatgcaa atgcaagttt ggccagaagt ccggtcaeca tccaggggag actccacctc 2820 tcatcacccc aggctcagcc caaagctgat gaggacagac cagctgaaat tgggtggagg 2880 accgttctct gtccccaggt cctgtctctg cacagaaact tgaactccag gatggaattc 2940 ttcctcctct gctgggactc ctttgcatgg cagggcctca tctcacctct cgcaagaggg 3000 tctctttgtt caattttttt taatctaaaa tgattgtgcc tctgcccaag cagcctggag 3060 acttcctatg tgtgcattgg ggtggggctt ggggcaccat gagaaggfctg gcgtgccctg 3120 gaggctgaca cagaggctgg cactgagcct gcttgttggg aaaagcccac aggcctgttc 3180 ccttgtggct tgggacatgg cacaggcccg ccctctgcct cctcagccat gggaacctca 3240 tatgcaattt gggatttact agtagccaaa aggaatgaaa gagagetcta accagatgga 3300 acactggaac attccagtgg accctggacc attccaggaa aactgggaca taggatcgtc 3360 ccgctatgat ggaagtgttc agacagttta taatagtaag cccctgtgac cctctcactt 3420 accccgagac ctcactttat tacaagatct ttccaaatac ccaaatgtcc ctgcaagccc 3480 gttaaataat tccctatgct acccttaata acatacaatg accacatagt gtgagaactt 3540 ccaacaagcc tcaaagtccc ttgagactcc ccaataccta ataaggcatg cgaaatgttc 3600 tcatgaacta ccccacaaca cgcctaaaac tcaaaacacc caaaaatatc tcctccaatg 3660 tcctgagaca tgaacccaaa aagagaccca caataaactc gtgacttgtc ccctca 3716

<210> 61 <211> 2956 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 61 gtggactagg aggcagccgc ccccaccagc acccactctg tagacccagg cgtctggctc 60 ccagcaccca cggaaagagc ctggctagga aactgcagcc tggtgcctgg cagacagttc 120 tcattctccc cagggcaggg agcaggttat gaccaggact aaggtcccag agtccccacc 180 ctgacccctc cctgctgttc cagccgctcc ctcatatcca cccctgcccc atctcctgac 240 tttggtcacg ctagcatctt ctgctgatcc tgaaattgta ccagcggcaa gatgtggcct 300 ggaaggggac tttaagttct ccacaactgc cagcaatcct tccaccaggc aaaacacatc 360 atctaaggaa aagaagtgag gtttgcttag ggcgtggcag cttcggataa acgcaggact 420 ccgcctggca gcccgatttc tcccggaacc tctgctcagc ctggtgaacc acacagaggc 480 tggggcgagg aggataccat ctgtcagtct tggctggatg acatcatggg aagggggtat 540 agtggggcct tgcaggccag aggtggcttg gaggagcccc tggaaagagg cttaagaggt 600 gagactcaac agccatggcg acagagcata gggctttaag atgaatttgc aggggttaca 660 ggattacaac tgcaatgtgg gctaataata gtgccccctg cattaagctg cagagattga 720 gcgagtaagt gggaagctga gaaaatgccc ccatggggta gacactcaat aagcatctgc 780 tgttattacc aggactcgta tggtcatggg tgacagottc agaccacagg cagtccacct 840 acaacctgtg cccctatcca ccatgccatc ctgcccaccc acccacgcca gctcccccaa 900 cccccaacac ttttggggat cctaaacact tcctgggcct cagtaatgct ccccaaagcc 960 tcaggctttc ttcccgcaaa aaaaggaaaa gaaatggatg ctccaactaa aattgtgagt 1020 tcagcatgtg gaattaactg ggaagctgag aggattccca ggcctggggt gcgcaggcag 1080 agggaggagt ctgtgccaac ctgcaaggac caeccgcacc gttggttgcg ggcaccaccc 1140 tctctcagca tttttgctgt tegtgaaatg aggacatagt ggacgacgtc ggggattgct 1200 ggggggttaa gtgagtgaga acacggcaag gtcagtgtgc actccagggc aaggtggagg 1260 aagtgccagc tctcgctatc aaaattataa ctaggccagg cgtggtggct cacacctgta 1320 atcccagcac tgagggaggc cggggtgggt ggatcacctg aggtcaggag ttggagacca 1380 gcctggccaa cacagtgaaa ccctggctct accaaaaatg caaaaattag ccgagactgg 1440 tggcacacgc ctgtagtetc agctactcag gaggctgagg caggagaatc acttgaaccc 1500 aggaggcaga ggttgcagtg agctgagatt atgccattgc actccagcct gggtgacaga 1560 gtgaaactcc gcctcaaaaa aaaaaaacaa ttatgataac tatgcactca gcatttgggc 1620 agggacaggg cagggacagg gcraggggagg gcatgctcgg aggccagggc ttggtgcagc 1680 cttgcaggct ggtgagaggg caggactgat gccaggtcag gaaggagaga gaaacgagtt 1740 ccttatgctg agcaggtcta cctgggaaag agaaagtgtt tgctgtcaoc aggaactctg 1800 ctgggcctag ggccagcgct ctgacatgca gaaggtgacc ctgggcctgc ttgtgttcct 1860 ggcaggcttt cctgtcctgg acgccaatga cctagaagat aaaaacagtc ctttctacta 1920 tgactggcac agcctccagg ttggcgggct eatetgegct ggggttctgt gcgccatggg 1980 eatcatcatc gtcatgagtg caaaatgcaa atgcaagttt ggccagaagt ccggtcacca 2040 tccaggggag actccacctc tcatcacccc aggctcagcc caaagctgat gaggacagac 2100 cagctgaaat tgggtggagg accgttctct gtccccaggt cctgtctctg cacagaaact 2160 tgaactccag gatggaattc ttcctcctct gctgggactc ctttgcatgg cagggcctca 2220 tctcacctct cgcaagaggg tctctttgtt caattttttt taatctaaaa tgattgtgcc 2280 tçtgcccaag cagcctggag acttcctatg tgtgcattgg ggtggggctt ggggcaccat 2340 gagaaggttg gcgtgccctg gaggctgaca cagaggctgg cactgagcct gcttgttggg 2400 aaaagcccac aggcctgttc ccttgtggct tgggacatgg cacaggcccg ccctctgcct 2460 cctcagccat gggaacctca tatgcaattt gggatttact agtagccaaa aggaatgaaa 2520 gagagctcta accagatgga acactggaac attccagtgg accctggacc attccaggaa 2580 aactgggaca taggatcgtc ccgctatgat ggaagtgttc agacagttta taatagtaag 2640 cccctgtgac cctctcactt accccgagac ctcactttat tacaagatct ttccaaatac 2700 ccaaatgtcc ctgcaagccc gttaaataat tccctatgct acccttaata acatacaatg 2760 accacatagt gtgagaactt ccaacaagcc tcaaagtccc ttgagactcc ccaataccta 2820 ataaggcatg cgaaatgttc tcatgaacta ccccacaaca cgcctaaaac tcaaaacacc 2880 caaaaatatc tcctccaatg tcctgagaca tgaacccaaa aagagaccca caataaactc 2940 gtgacttgtc ccctca 2956

<210> 62 <211> 1743 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 62 gtggactagg aggcagccgc ccccaccagc acccactctg tagacccagg cgtctggctc 60 ccagcaccca cggaaagagc ctggctagga aactgcagcc tggtgcctgg cagacagttc 120 tcattctccc cagggcaggg agcaggttat gaccaggact aaggtcccag agtccccacc 180 ctgacccctc cctgctgttc cagccgctcc ctcatatcca cccctgcccc atctcctgac 240 tttggtcacg ctagcatctt ctgctgatcc tgaaattgta ccagcggcaa gatgtggcct 300 ggaaggggac tttaagttct ccacaactgc cagcaatcct tccaccaggc aaaacacatc 360 atctaaggaa aagaagtgag gtttgcttag ggcgtggcag cttcggataa acgcaggact 420 ccgcctggca gcccgatttc tcccggaacc tctgctcagc ctggtgaacc acacagaggc 480 tg999c?agg aggataccat ctgtcagtct tggctggatg acatcatggg aagggggtat 540 agtggggcct tgcaggccag aggtggcttg gaggagcccc tggaaagagg cttaagaggc 600 cagcgctctg acatgcagaa ggtgaccctg ggcctgcttg tgttcctggc aggctttcct 660 gtcctggacg ccaatgacct agaagataaa aacagtcctt tctactatga ctggcacagc 720 ctccaggttg gcgggctcat ctgcgctggg gttctgtgcg ccatgggcat catcatcgtc 780 atgagtgcaa aatgcaaatg caagtttggc cagaagtccg gtcaccatcc aggggagact 840 ccacctctca tcaccccagg ctcagcccaa agctgatgag gacagaccag ctgaaattgg 900 gtggaggacc gttctctgtc cccaggtcct gtctctgcac agaaacttga actccaggat 960 ggaattcttc ctcctctgct gggactcctt tgcatggcag ggcctcatct cacctctcgc 1020 aagagggtct ctttgttcaa ttttttttaa tctaaaatga ttgtgcctct gcccaagcag 1080 cctggagact tcctatgtgt gcattggggt ggggcttggg gcaccatgag aaggttggcg 1140 tgccctggag gctgacacag aggctggcac tgagcctgct tgttgggaaa agcccacagg 1200 cctgttccct tgtggcttgg gacatggcac aggcccgccc tctgcctcct cagccatggg 1260 aacctcatat gcaatttggg atttactagt agccaaaagg aatgaaagag agctctaacc 1320 agatggaaca ctggaacatt ccagtggacc ctggaccatt ccaggaaaac tgggacatag 1380 gatcgtcccg ctatgatgga agtgttcaga cagtttataa tagtaagccc ctgtgaccct 1440 ctcacttacc ccgagacctc actttattac aagatctttc caaataccca aatgtccctg 1500 caagoccgtt aaataattcc ctatgctacc cttaataaca tacaatgacc acatagtgtg 1560 agaaettcca aeaagcctca aagtcccttg agactcccea aggcatgcga 1620 aatgttctca tgaactaecc cacaacaogc otaaaactca aaacacccaa aaatatctcc 1680 tccaatgtcc tgagacatga acccaaaaag agacccacaa taaactcgtg acttgtcccc 1740 tea 1743

<210> 63 <211> 1841 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 63 gtggactagg aggcagccgc ccccaccagc acccactctg tagacccagg cgtctggctc 60 ccagcaccca cggaaagagc ctggctagga aactgcagcc tggtgcctgg cagacagttc 120 tcattctccc cagggcaggg agcaggttat gaccaggact aaggtcccag agtccccacc 180 ctgacccctc cctgctgttc cagccgctcc ctcatatcca cccctgcccc atctcctgac 240 tttggtcacg ctagcatctt ctgctgatcc tgaaattgta ccagcggcaa gatgtggcct 300 ggaaggggac tttaagttct ccacaactgc cagcaatcct tccaccaggc aaaacacatc 360 atctaaggaa aagaagtgag gtttgcttag ggcgtggcag cttcggataa acgcaggact 420 ccgcctggca gcccgatttc tcccggaacc tctgctcagc ctggtgaacc acacaggtga 480 gcagctgggg ccccttcctc caagccctcc ttgtctctgc ccctaaatta ggaagtatct 540 acctgccccc tgaccctgcc ccatagaagc ttttatgtta aagcgcctaa aatcttgtga 600 aatgcttttc tggagccagg agataaacgg aagtcccttc ccctaatgtc cctttcccca 660 ccattctcct ctcagggact tgttgaacca gctgaggcca gcgctctgac atgcagaagg 720 tgaccctggg cctgcttgtg ttcetggcag gctttcctgt cctggacgcc aatgacctag 780 aagataaaaa cagtcctttc tactatgact ggcacagcct ccaggttggc gggctcatct 840 gcgctggggt tctgtgcgcc atgggcatca tcatcgtcat gagtgcaaaa tgcaaatgca 900 agtttggcca gaagtccggt caccatccag gggagactcc acctctcatc accccaggct 960 cagcccaaag ctgatgagga cagaccagct gaaattgggt ggaggaccgt tctctgtccc 1020 caggtcctgt ctctgcacag aaacttgaac tccaggatgg aattcttcct cctctgctgg 1080 gactcctttg catggcaggg cctcatctca cctctcgcaa gagggtctct ttgttcaatt 1140 ttttttaatc taaaatgatt gtgcctctgc ccaagcagcc tggagacttc ctatgtgtgc 1200 attggggtgg ggcttggggc accatgagaa ggttggcgtg ccctggaggc tgacacagag 1260 gctggcactg agcctgcttg ttgggaaaag cecaeaggcc tgttcccttg tggcttggga 1320 catggcacag gcccgccctc tgcctcctca gccatgggaa cctcatatgc aatttgggat 1380 ttactagtag ccaaaaggaa tgaaagagag ctctaaccag atggaacact ggaacattcc 1440 agtggaccct ggaccattcc aggaaaactg ggacatagga tcgtcccgct atgatggaag 1500 tgttcagaca gtttataata gtaagcccct gtgaccctct cacttacccc gagacctcac 1560 tttattacaa gatctttcca aatacccaaa tgtccctgca agcccgttaa ataattccct 1620 atgctaccct taataacata caatgaccac atagtgtgag aacttccaac aagcctcaaa 1680 gtcccttgag actccccaat acctaataag gcatgcgaaa tgttctcatg aactacccca 1740 caacacgcct aaaactcaaa acacccaaaa atatctcctc caatgtcctg agacatgaac 1800 ccaaaaagag acccacaata aactcgtgac ttgtcccctc a 1841

<210> 64 <211> 2145 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 64 gtggactagg aggcagccgc ccccaccagc acccactctg tagacccagg cgtctggctc 60 ccagcaccca cggaaagagc ctggctagga aactgcagcc tggtgcctgg cagacagttc 120 tcattctccc cagggcaggg agcaggttat gaccaggact aaggtcccag agtccccacc 180 ctgacccctc cctgctgttc cagccgctcc ctcatatcca cccctgcccc atctcctgac 240 tttggtcacg ctagcatctt ctgctgatcc tgaaattgta ccagcggcaa gatgtggcct 300 ggaaggggac tttaagttct ccacaactgc cagcaatcct tccaccaggc aaaacacatc 360 atctaaggaa aagaagtgag gtcggaacac caacgcatca tctcactgca tggccctgga 420 ggctctgccg tttaaagaco ccagaacctt ccccattcaa ggtcctctcc tgggcacagg 480 âgattggaga aagctcctcc cttaattcca gggaccgagt tccagcccat ccaattctcc 540 gtctcacctg aggctgctgt ggtcctggtg accccaggga gcaacctgcc gcccatggct 600 ggggaggggg tgaagctgtc tctttaagag caggaatgga gcccctgggc ctcagggcat 660 ctgacttgtt ttctacctgc ccaggtttgc ttagggcgtg gcagcttcgg ataaacgcag 220 gactccgcct ggcagcccga tttctcccgg aacctctgct cagcctggtg aaccacacag 780 gtgagcagct ggggcccctt cctccaagcc ctccttgtct ctgcccctaa attaggaagt 840 atctacctgc cccctgaccc tgccccatag aagcttttat gttaaagcgc ctaaaatctt 900 gtgaaatgct tttctggagc caggagataa acggaagtcc cttcccctaa tgtccctttc 960 cccaccattc tcctctcagg gacttgttga accagctgag gccagcgctc tgacatgcag 1020 aaggtgaccc tgggcctgct tgtgttcctg gcaggctttc ctgtcctgga cgccaatgac 1080 ctagaagata aaaacagtcc tttctactat gactggcaca gcctccaggt tggcgggctc 1140 atctgcgctg gggttctgtg cgccatgggc atcatcatcg tcatgagtgc aaaatgcaaa 1200 tgcaagtttg gccagaagtc cggtcaccat ccaggggaga ctccacctct catcacccca 1260 ggctcagccc aaagctgatg aggacagacc agctgaaatt gggtggagga ccgttctctg 1320 tccccaggtc ctgtctctgc aoagaaactt gaactccagg atggaattct tcctcctctg 1380 ctgggactcc tttgcatggc agggcctcat ctcacctctc gcaagagggt ctctttgttc 1440 aatttttttt aatctaaaat gattgtgcct ctgcccaagc agcctggaga cttcctatgt 1500 gtgcattggg gtggggcttg gggcaccatg agaaggttgg cgtgccctgg aggctgacac 1560 agaggctggc actgagcctg cttgttggga aaagcccaca ggcctgttcc cttgtggctt 1620 gggacatggc acaggcccgc cctctgcctc ctcagccatg ggaacctcat atgcaatttg 1680 ggatttacta gtagccaaaa ggaatgaaag agagctctaa ccagatggaa cactggaaca 1740 ttccagtgga ccctggacca ttccaggaaa actgggacat aggatcgtcc cgctatgatg 1800 gaagtgttca gacagtttat aatagtaagc ccctgtgacc ctctcactta ccccgagacc 1860 tcactttatt acaagatctt tccaaatacc caaatgtccc tgcaagcccg ttaaataatt 1920 ccctatgcta cccttaataa catacaatga ccacatagtg tgagaacttc caacaagcct 1980 caaagtccct tgagactccc caatacctaa taaggcatgc gaaatgttct catgaactac 2040 cccacaacac gcctaaaact caaaacaccc aaaaatatct cctccaatgt cctgagacat 2100 gaacccaaaa agagacccac aataaactcg tgacttgtcc cctca 2145

<210> 65 <211> 1708 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 65 gtggactagg aggcagccgc ccccaccagc acccactctg tagacccagg cgtctggctc 60 ccagcaccca cggaaagagc ctggctagga aactgcagcc tggtgcctgg cagacagttc 120 tcattetccc cagggcaggg agcaggttat gaccaggact aaggtcccag agtccccacc 180 ctgacccctc cctgctgttc cagccgctcc ctcatatcca cccctgcccc atctcctgac 240 tttggtcacg ctagcatctt ctgctgatcc tgaaattgta ccagcggcaa gatgtggcct 300 ggaaggggac tttaagttct ccacaactgc cagcaatcct tccaccaggc aaaacacatc 360 atctaaggaa aagaagtgag gtttgcttag ggcgtggcag cttcggataa acgcaggaot 420 ccgcctggca gcccgatttc tcccggaacc tctgctcagc ctggtgaacc acacaggcea 480 gcgctctgac atgcagaagg tgaccctggg cctgcttgtg ttcctggcag gctttcctgt 540 cctggacgcc aátgacctag aagataaaaa cagtcctttc tactatggtg ctccatatat 600 atttgtcaag agaatggggg gacagatgaa gaggacacag gctggcactg aggtcccctc 660 cactttcctc ctagactggc acagcctcca ggttggcggg ctcatctgcg ctggggttct 720 gtgcgccatg ggcatcatca tcgtcatgag tgcaaaatgc aaatgcaagt ttggccagaa 780 gtccggtcac catccagggg agactccacc tctcatcacc ccaggctcag cccaaagctg 840 atgaggacag accagctgaa attgggtgga ggaccgttct ctgtccccag gtcctgtctc 900 tgcacagaaa cttgaactcc aggatggaat tcttcctcct ctgctgggac tcctttgcat 960 ggcagggcct catctcacct ctcgcaagag ggtctctttg ttcaattttt tttaatctaa 1020 aatgattgtg cctctgccca agcagcctgg agacttccta tgtgtgcatt ggggtggggc 1080 ttggggcacc atgagaaggt tggcgtgccc tggaggctga cacagaggct ggcactgagc 1140 ctgcttgttg ggaaaagccc acaggcctgt tcccttgtgg cttgggacat ggcacaggcc 1200 cgccctctgc ctcctcagcc atgggaacct catatgcaat ttgggattta ctagtagcca 1260 aaaggaatga aagagagctc taaccagatg gaacactgga acattccagt ggaccctgga 1320 ccattccagg aaaactggga cataggatcg tcccgctatg atggaagtgt tcagacagtt 1380 tataatagta agcccctgtg accctctcac ttaccccgag acctcacttt attacaagat 1440 ctttccaaat acccaaatgt ccctgcaagc ccgttaaata attccctatg ctacccttaa 1500 taacatacaa tgaccacata gtgtgagaac ttccaacaag cctcaaagtc ccttgagact 1560 ccocaatacc taataaggca tgcgaaatgt tctcatgaac taccccacaa cacgcctaaa 1620 actcaaaaca cccaaaaata tctcctccaa tgtcctgaga catgaaccca aaaagagacc 1680 cacaataaac tcgtgacttg tcccctca 1708 <210> 66

<211> 1792 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 6 6 gtggactagg aggcagccgc ccccaccagc acccactctg tagacccagg cgtctggctc 60 ccagcaccca cggaaagagc ctggctagga aactgcagcc tggtgcctgg cagacagttc 120 tcattctccc cagggcaggg agcaggttat gaccaggact aaggtcccag agtccccacc 180 ctgacccctc cctgctgttc cagccgctcc ctcatatcca cccctgcccc atctcctgac 240 tttggtcacg ctagcatctt ctgctgatcc tgaaattgta ccagcggcaa gatgtggcct 300 ggaaggggac tttaagttct ccacaactgc cagcaatcct tccaccaggc aaaacacatc 360 atctaaggaa aagaagtgag gtttgcttag ggcgtggcag cttcggataa acgcaggact 420 ccgcctggca gcccgatttc tcccggaacc tctgctcagc ctggtgaacc acacaggccc 480 gagtttcacc cagtccccac tccacggtgc agctgcggct tatctctcag cccagcgaga 540 tgccagcctt cctgtcccgg gccagcgctc tgacatgcag aaggtgaccc tgggcctgct 600 tgtgttcctg gcaggctttc ctgtcctgga cgccaatgac ctagaagata aaaacagtcc 660 tttctactat ggtgctccat atatatttgt caagagaatg gggggacaga tgaagaggac 720 acaggctggc actgaggtcc cctccacttt cctcctagac tggcacagce tccaggttgg 780 cgggctcatc tgcgctgggg ttctgtgcgc catgggcatc atcatcgtca tgagtgcaaa 840 atgcaaatgc aagtttggcc agaagtccgg tcaccatcca ggggagactc cacctctcat 900 caccccaggc tcagcccaaa gctgatgagg acagaccagc tgaaattggg tggaggaccg 960 ttctctgtcc ccaggtcctg tctctgcaca gaaacttgaa ctccaggatg gaattcttcc 1020 tcctctgctg ggactccttt gcatggcagg gcctcatctc acctctcgca agagggtctc 1080 tttgttcaat tttttttaat ctaaaatgat tgtgcctctg cccaagcagc ctggagactt 1140 cctatgtgtg cattggggtg gggcttgggg caccatgaga aggttggcgt gccctggagg 1200 ctgacacaga ggctggcact gagcctgctt gttgggaaaa gcccacaggc ctgttccctt 1260 gtggcttggg acatggcaca ggcccgccct ctgcctcctc agccatggga acctcatatg 1320 caatttggga tttactagta gccaaaagga atgaaagaga gctctaacca gatggaacac 1380 tggaacattc cagtggaccc tggaccattc caggaaaact gggacatagg atcgtcccgc 1440 tatgatggaa gtgttcagac agtttataat agtaagcccc tgtgaccctc tcacttaccc 1500 cgagacctca ctttattaca agatctttcc aaatacccaa atgtccctgc aagcccgtta 1560 aataattccc tatgctaccc ttaataacat acaatgacca catagtgtga gaacttccaa 1620 caagcctcaa agtcccttga gactccccaa tacctaataa ggcatgcgaa atgttctcat 1680 gaactacccc acaacacgcc taaaactcaa aacacccaaa aatatctcct ccaatgtcct 1740 gagacatgaa cccaaaaaga gacccacaat aaactcgtga cttgtcccct ca 1792 <210> 67 <211> 2660

<212> ADN <213> Homo sapiens gtggactagg aggcagccgc ccccaccagc acccactctg tagacccagg cgtctggctc 60 ccagcaccca cggaaagagc ctggctagga aactgcagcc tggtgcctgg cagacagttc 120 <400> 67 tcattctccc cagggcaggg agcaggttat gaccaggact aaggtcccag agtccccacc 180 ctgacccctc cctgctgttc cagccgctcc ctcatatcca cccctgcccc atctcctgac 240 tttggtcacg ctagcatctt ctgctgatcc tgaaattgta ccagcggcaa gatgtggcct 300 ggaaggggac tttaagttct ccacaactgc cagcaatcct tccaccaggc aaaacacatc 360 atctaaggaa aagaagtgag gtttgcttag ggcgtggcag cttcggataa acgcaggact 420 ccgcctggca gcccgatttc tcccggaacc tctgctcagc ctggtgaacc acacagaggc 480 tggggcgagg aggataccat ctgtcagtct tggctggatg acatcatggg aagggggtat 540 agtggggcct tgcaggccag aggtggcttg gaggagcccc tggaaagagg cttaagaggt 600 gagactcaac agccatggcg acagagcata gggctttaag atgaatttgc aggggttaca 660 ggattacaac tgcaatgtgg gctaataata gtgccccctg cattaagctg cagagattga 720 gcgagtaagt gggaagctga gaaaatgccc ccatggggta gacactcaat aagcatctgc 780 tgttattacc aggactcgta tggtcatggg tgacagcttc agaccacagg cagtccacct 840 acaacctgtg cccctatcca ccatgccatc ctgcccaccc acccacgcca gctcccccaa 900 cccccaacac ttttggggat cctaaacact tcctgggcct cagtaatgct ccccaaagcc 960 tcaggctttc ttcccgcaaa aaaaggaaaa gaaatggatg ctccaactaa aattgtgagt 1020 tcagcatgtg gaattaactg ggaagctgag aggattccca ggcctggggt gcgcaggcag 1080 agggaggagt ctgtgccaac ctgcaaggac cacccgcacc gttggttgcg ggcaccaccc 1140 tctctcagca tttttgctgt tcgtgaaatg aggacatagt ggacgacgtc ggggattgct 1200 ggggggttaa gtgagtgaga acacggcaag gtcagtgtgc actccagggc aaggtggagg 1260 aagtgccagc tctcgctatc aaaattataa ctaggccagg cgtggtggct cacacctgta 1320 atcccagcac tgagggaggc cggggcccga gtttcaccca gtccccactc cacggtgcag 1380 ctgcggctta tctctcagcc cagcgagatg ccagccttcc tgtcccgggc cagcgctctg 1440 acatgcagaa ggtgaccctg ggcctgcttg tgttcctggc aggctttcct gtcctggacg 1500 ccaatgacct agaagataaa aacagtcctt tctactatgg tgctccatat atatttgtca 1560 agagaatggg gggacagatg aagaggacac aggctggcac tgaggtcccc tccactttcc 1620 tcctagactg gcacagcctc caggttggcg ggctcatctg cgctggggtt ctgtgcgcca 1680 tgggcatcat catcgtcatg agtgcaaaat gcaaatgcaa gtttggccag aagtccggtc 1740 accatccagg ggagactcca cctctcatca ccccaggctc agcccaaagc tgatgaggac 1800 agaccagctg aaattgggtg gaggaccgtt ctctgtcccc aggtcctgtc tctgcacaga 1860 aacttgaact ccaggatgga attcttcctc ctctgctggg actcctttgc atggcagggc 1920 ctcatctcac ctctcgcaag agggtctctt tgttcaattt tttttaatct aaaatgattg 1980 tgcctctgcc caagcagcct ggagacttcc tatgtgtgca ttggggtggg gcttggggca 2040 ccatgagaag gttggcgtgc cctggaggct gacacagagg ctggcactga gcctgcttgt 2100 tgggaaaagc ccacaggcct gttcccttgt ggcttgggac atggoacagg cccgccctct 2160 gcctcctcag ccatgggaac ctcatatgca atttgggatt tactagtagc caaaaggaat 2220 gaaagagagc tctaaccaga tggaacactg gaacattcca gtggaccctg gaccattcca 2280 ggaaaactgg gacataggat cgtcccgcta tgatggaagt gttcagacag tttataatag 2340 taagcccctg tgaccctctc acttaccccg agacctcact ttattacaag atctttccaa 2400 atacccaaat gtccctgcaa gcccgttaaa taattcccta tgctaccctt aataacatac 2460 aatgaccaca tagtgtgaga acttccaaca agcctcaaag tcccttgaga ctccccaata 2520 cctaataagg catgcgaaat gttctcatga actaccccac aacacgccta aaactcaaaa 2580 cacccaaaaa tatctcctcc aatgtcctga gacatgaacc caaaaagaga cccacaataa 2640 actcgtgact tgtcccctca 2660

<210> 68 <211> 2015 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 68 gtggactagg aggcagccgc ccccaccagc acccactctg tagacccagg cgtctggctc 60 ccagcaccca cggaaagagc ctggctagga aactgcagcc tggtgcctgg cagacagttc 120 tcattctccc cagggcaggg agcaggttat gaccaggact aaggtcccag agtccccacc 180 ctgacccctc cctgctgttc cagccgctcc ctcatatcca cccctgcccc atctcctgac 240 tttggtcacg ctagcatctt ctgctgatcc tgaaattgta ccagcggcaa gatgtggcct 300 ggaaggggac tttaagttct ccacaactgc cagcaatcct tccaccaggc aaaacacatc 360 atctaaggaa aagaagtgag gtttgcttag ggcgtggcag cttcggataa acgcaggact 420 ccgcctggca gcccgatttc tcccggaacc tctgctcagc ctggtgaacc acacaggoca 480 gcgctctgac atgcagaagg tgaccctggg cctgcttgtg ttcctggcag gctttcctgt 540 cctggacgcc aatgacctag aagataaaaa cagtcctttc tactatgact ggcacagcct 600 ccaggttggc gggctcatct gcgctggggt tctgtgcgcc atgggcatca tcatcgtcat 660 gagtgagtgg aggagctcgg gggagcaggc gggccggggc tggggctccc ctcccctgac 720 cactcagctc tccccaacag gtgcaaaatg caaatgcaag tttggccaga agtccgggta 780 agatactgtt ccggcatgcc cgcctcaggc tgactggacg cttttcaggg tgaaagggct 840 aactctccca gcaggagagg cctcggggct ctgcccttta gagttcctgc cgctaagatt 900 tccaggttta ttgtttctag ctggtaatcc ccagggggcc ccaaatcctg aaatgctttg 960 gcccctggga ttgcacaacc ccccaaatgg aaaggcagcc aggaagacat gtctgggcag 1020 gctaagaacc ctctatccgg agggagaggg caaatggggg cggacaccaa tctcaccact 1080 tttgtctcct tagtcaccat ccaggggaga ctccacctct catcacccca ggctcagccc 1140 aaagctgatg aggacagacc agctgaaatt gggtggagga ccgttctctg tccccaggtc 1200 ctgtctctgc acagaaactt gaactccagg atggaattct tcctcctctg ctgggactcc 1260 tttgcatggc agggcctcat ctcacctctc gcaagagggt ctctttgttc aatttttttt 1320 aatctaaaat gattgtgcct ctgcccaagc agcctggaga cttcctatgt gtgcattggg 1380 gtggggcttg gggcaccatg agaaggttgg cgtgccctgg aggctgacac agaggctggc 1440 actgagcctg ottgttggga aaagcccaca ggcctgttcc cttgtggctt gggacatggc 1500 acaggcccgc cctctgcctc ctcagccatg ggaacctcat atgcaatttg ggatttacta 1560 gtagccaaaa ggaatgaaag agagctctaa ccagatggaa cactggaaca ttccagtgga 1620 ccctggacca ttccaggaaa actgggacat aggatcgtcc cgctatgatg gaagtgttca 1680 gacagtttat aatagtaagc ccctgtgacc ctctcactta ccccgagacc tcactttatt Π40 acaagatctt tccaaatace caaatgtccc tgcaagcccg ttaaataatt ccctatgcta 1800 cccttaataa catacaatga ccacatagtg tgagaacttc caacaagcct caaagtccct 1860 tgagactccc caatacctaa taaggcatgc gaaatgttct catgaactac cccacaacac 1920 gcctaaaact caaaacaccc aaaaatatct cctccaatgt cctgagacat gaacccaaâa 1980 agagacccac aataaactcg tgacttgtcc cctca 2015

<210> 69 <211> 1991 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 6 9 gtggactagg aggcagccgc ccccaccagc acccactctg tagacccagg cgtctggctc 60 ccagcaccca cggaaagagc ctggctagga aactgcagcc tggtgcctgg cagacagttc 120 tcattctccc cagggcaggg agcaggttat gaccaggact aaggtcccag agtccccacc 180 ctgacecctc cctgctgttc cagccgctcc ctcatatcca cccctgcccc atctcctgac 240 tttggtcacg ctagcatctt ctgctgatcc tgaaattgta ceagcggcaa gatgtggcct 300 ggaaggggac tttaagttct ccacaactgc cagcaatcct tccaccaggc aaaacacatc 360 atctaaggaa aagaagtgag gtttgcttag ggcgtggcag cttcggataa acgcaggact 420 ccgcctggca gcccgatttc tcccggaacc tctgctcagc ctggtgaacc acacaggcca 480 gcgctctgac atgcagaagg tgaccctggg cctgcttgtg ttcctggcag gctttcctgt 540 cctggacgcc aatgacctag aagactggca cagcctccag gttggcgggc tcatctgcgc 600 tggggttctg tgcgccatgg gcatcatcat cgtcatgagt gagtggagga gctcggggga 660 gcaggcgggc cggggctggg gctcccctcc cctgaccact cagctctccc caacaggtgc 720 aaaatgcaaa tgcaagtttg gccagaagtc cgggtaagat actgttccgg catgcccgcc 780 tcaggctgac tggacgcttt tcagggtgaa agggctaact ctcccagcag gagaggcctc 840 ggggctctgc cctttagagt tcctgccgct aagatttcca ggtttattgt ttctagctgg 900 taatccccag ggggccocaa atcctgaaat gctttggccc ctgggattgc acaacccccc 960 aaatggaaag gcagccagga agacatgtct gggcaggcta agaaccctct atccggaggg 1020 agagggcaaa tgggggcgga caccaatctc accacttttg tctccttagt caccatccag 1080 gggagactcc acctctcatc accccaggct cagcccaaag ctgatgagga cagaccagct 1140 gaaattgggt ggaggaccgt tctctgtccc caggtcctgt ctctgcacag aaacttgaac 1200 tccaggatgg aattcttcct cctctgctgg gactcctttg catggcaggg cctcatctca 1260 cctctcgcaa gagggtctct ttgttcaatt ttttttaatc taaaatgatt gtgcctctgc 1320 ccaagcagcc tggagacttc ctatgtgtgc attggggtgg ggctfcggggc accatgagaa 1380 ggttggcgtg ccctggaggc tgacacagag gctggcactg agcctgcttg ttgggaaaag 1440 cccacaggcc tgttcccttg tggcttggga catggcacag gcccgccctc tgcctcctca 1500 gccatgggaa cctcatatgc aatttgggat ttactagtag ccaaaaggaa tgaaagagag 1560 ctctaaccag atggaacact ggaacattcc agtggaccct ggaccattcc aggaaaactg 1620 ggacatagga tcgtcccgct atgatggaag tgttcagaca gtttataata gtaagcccct 1680 gtgaccctct cacttacccc gagacctcac tttattacaa gatctttcca aatacccaaa 1740 tgtccctgca agcccgttaa ataattccct atgctaccct taataacata caatgaccac 1800 atagtgtgag aacttccaac aagcctcaaa gtcccttgag actccccaat acctaataag 1860 gcatgcgaaa tgttctcatg aactacccca caacacgcct aaaactcaaa acacccaaaa 1920 atatctcctc caatgtcctg agacatgaac ccaaaaagag acccacaata aactcgtgac 1980 ttgtcccctc a 1991 <210> 70 <211> 87

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 70

Met Gin Lys Val Thr Leu Gly Leu Leu Val Phe Leu Ala Gly Phe Pro 15 10 15

Val Leu Asp Ala Asn Asp Leu Glu Asp Lys Asn Ser Pro Phe Tyr Tyr 20 25 30

Asp Trp His Ser Leu Gin Val Gly Gly Leu lie Cys Ala Gly val Leu 35 40 45

Cys Ala Met Gly lie lie lie Val Met Ser Ala Lys Cys Lys Cys Lys 50 55 60

Phe Gly Gin Lys Ser Gly His His Pro Gly Glu Thr Pro Pro Leu lie 65 70 75 80

Thr Pro Gly Ser Ala Gin Ser 85

<210> 71 <211> 113 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 71

Met Gin Lys Val Thr Leu Giy Leu Leu val Phe Leu Ala Gly Phe Pro 15 10 15

Val Leu Asp Ala Asn Asp Leu Glu Asp Lys Asn Ser Pro Phe Tyr Tyr 20 25 30

Asp Trp His Ser Leu Gin Val Gly Gly Leu lie Cys Ala Gly Val Leu 35 40 45

Cys Ala Met Gly lie lie lie val Met Ser Glu Trp Arg Ser Ser Gly 50 55 60

Glu Gin Ala Gly Arg Gly Trp Gly Ser Pro Pro Leu Thr Thr Gin Leu

65 70 75 SO

Ser Pro Thr Gly Ala Lys Cys Lys Cys Lys Phe Gly Gin Lys Ser Gly 85 90 95

His His Pro Gly Glu Thr Pro Pro Leu lie Thr Pro Gly Ser Ala Gin 100 105 110

Ser

<210> 72 <211> 116 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 72

Met Gin Lya Val Thr Leu Gly Leu Leu Val Phe Leu Ala Gly Phe Pro 15 10 15

Val Leu Asp Ala Asn Asp Leu Glu Asp Lys Asn Ser Pro Phe Tyr Tyr 20 25 30

Gly Ala Pro Tyr lie Phe Val Lys Arg Met Gly Gly Gin Met Lys Arg^ 35 40 45

Thr Gin Ala Gly Thr Glu Val Pro Ser Thr Phe Leu Leu Asp Trp His 50 55 60

Ser Leu Gin Val Gly Gly Leu lie Cys Ala Gly Val Leu Cys Ala Met 65 70 75 80

Gly He He lie val Met Ser Ala Lys Cys Lys Cys Lys Phe Gly Gin 85 90 95

Lys Ser Gly His His Pro Gly Glu Thr Pro Pro Leu He Thr Pro Gly 100 105 110

Ser Ala Gin Ser 115

<210> 73 <211> 96 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 73

Met Gin Lys Val Thr Leu Gly Leu Leu val Phe Leu Ala Gly Phe Pro 15 10 15

Val Leu Asp Ala Asn Asp Leu Glu Asp Lys Asn Ser Pro Phe Tyr Tyr 20 25 30

Asp Trp His Ser Leu Gin Val Gly Gly Leu lie Cys Ala Gly Val Leu 35 40 45

Cys Ala Met Gly lie He lie Val Met Ser Glu Trp Arg Ser Ser Gly 50 55 60

Glu Gin Ala Gly Arg Gly Trp Gly Ser Pro Pro Leu Thr Thr Gin Leu 65 70 75 80

Ser Pro Thr Gly Ala Lys Cys Lys Cys Lys Phe Gly Gin Lys Ser Gly 85 90 95

<210> 74 <211> 88 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 74

Met Gin Lys Val Thr Leu Gly Leu Leu Val Phe Leu Ala Gly Phe Pro 15 10 15

Val Leu Asp Ala Asn Asp Leu Glu Asp Trp His Ser Leu Gin val Gly 20 25 30

Gly Leu lie Cys Ala Gly Val Leu Cys Ala Met Gly lie lie lie val 35 40 45

Met Ser Glu Trp Arg Ser Ser Gly Glu Gin Ala Gly Arg Gly Trp Gly 50 55 60

Ser Pro Pro Leu Thr Thr Gin Leu Ser Pro Thr Gly Ala Lys Cys Lys 65 70 75 80

Cys Lys Phe Gly Gin Lys Ser Gly 85

<210> 75 <211> 139 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 75

Leu Leu Val Thr Val Gin His Thr Glu Arg Tyr Val Thr Leu Phe Ala 15 10 15

Ser lie lie Leu Lys Cys Asp Tyr Thr Thr Ser Ala Gin Leu Gin Asp 20 25 30

Val Val Val Thr Trp Arg Phe Lys Ser Phe Cys Lys Asp Pro lie Phe 35 40 45

Asp Tyr Tyr Ser Ala Ser Tyr Gin Ala Ala Leu Ser Leu Gly Gin Asp 50 55 60

Pro Ser Asn Asp Cys Asn Asp Asn Gin Arg Glu Val Arg lie Val Ala 65 70 75 80

Gin Arg Arg Gly Gin Asn Glu Pro Val Leu Gly Val Asp Tyr Arg Gin 85 90 95

Arg Lys lie Thr He Gin Asn Arg Ala Asp Leu Val lie Asn Glu Val 100 105 110

Met Trp Trp Asp His Gly Val Tyr Tyr Cys Thr lie Glu Ala Pro Gly 115 120 125

Asp Thr Ser Gly Asp Pro Asp Lys Glu Val Lys 130 135

<210> 76 <211> 434 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 76

Leu Leu Val Thr Val Gin His Thr Glu Arg Tyr Val Thr Leu Phe Ala 15 10 15

Ser lie lie Leu Lys Cys Asp Tyr Thr Thr Ser Ala Gin Leu Gin Asp 20 25 30

Val Val Val Thr Trp Arg Phe Lys Ser Phe Cys Lys Asp Pro lie Phe 35 40 45

Asp Tyr Tyr Ser Ala Ser Tyr Gin Ala Ala Leu Ser Leu Gly Gin Asp 50 55 60

Pro Ser Asn Asp Cys Asn Asp Asn Gin Arg Glu Val Arg He Val Ala 65 70 75 80

Gin Arg Arg Gly Gin Asn Glu Pro Val Leu Gly Val Asp Tyr Arg Gin 85 90 95

Arg Lys He Thr lie Gin Asn Pro Leu Ala Arg His Arg Tyr Met Lys 100 105 110

Gin Ala Gin Ala leu Gly Pro Gin Met Met Gly lys Pro Leu Tyr Trp 115 120 125

Gly Ala Asp Arg Ser Ser Gin Val Ser Ser Tyr Pro Met His Pro Leu 130 135 140

Leu Gin Arg Asp Leu Ser Leu Fro Ser Ser Leu Fro Gin Met Pro Met 145 150 155 160

Thr Gin Thr Thr Asn Gin Pro Pro lie Ala Asn Gly Val Leu Glu Tyr 165 170 175

Leu Glu Lys Glu Leu Arg Asn Leu Asn Leu Ala Gin Fro Leu Pro Pro 180 185 190

Asp Leu Lys Gly Arg Pile Gly His Pro Cya Ser Met Leu Ser Ser Leu 195 200 205

Gly Ser Glu val val Glu Arg Arg He lie His Leu Fro Pro Leu lie 210 215 220

Arg Asp Leu Ser Ser Ser Arg Arg Thr Ser Asp Ser Leu His Gin Gin 225 230 235 240

Trp Leu Thr Pro Tie Pro Ser Arg Pro Trp Asp Leu Arg Glu Gly Arg 245 250 255

Ser His His His Tyr Pro Asp Phe His Gin Glu Leu Gin Asp Arg Gly 260 265 270

Pro Lys Ser Trp Ala Leu Glu Arg Arg Glu Leu Asp Pro Ser Trp Ser 275 280 285

Gly Arg His Arg Ser Ser Arg Leu Asn Gly Ser Pro He His Trp Ser 290 295 300

Asp Arg Asp Ser Leu Ser Asp Val Pro Ser Ser Ser Glu Ala Arg Trp 305 310 315 320

Arg Pro Ser His Pro Pro Phe Arg Ser Arg Cys Gin Glu Arg Pro Arg 325 330 335

Arg Pro Ser Pro Arg Glu Ser Thr Gin Arg His Gly Arg Arg Arg Arg 340 345 350

His Arg Ser Tyr Ser Pro Pro Leu Pro Ser Gly Leu Ser Ser Trp Ser 355 360 365

Ser Glu Glu Asp Lys Glu Arg Gin Pro Gin Ser Trp Arg Ala His Arg 370 375 380

Arg Gly Ser His Ser Pro His Trp Pro Glu Glu Lys Pro Pro Ser Tyr 385 390 395 400

Arg Ser Leu Asp He Thr Pro Gly Lys Asn Ser Arg Lys Lys Gly Ser 405 410 415

Val Glu Arg Arg Ser Glu Lys Asp Ser Ser His Ser Gly Arg Ser Val 420 425 430

Val lie

<210> 77 <211> 996 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 77 atgcagaagg tgaccctggg cctgcttgtg ttcctggcag gctttcctgt cctggacgcc 60 aatgacctag aagataaaaa cagtcctttc tactatgact ggcacagcct ccaggttggc 120 gggctcatct gcgctggggt tctgtgcgcc atgggcatca tcatcgtcat gagtgcaaaa 180 tgcaaatgca agtttggcca gaagtccggt caccatccag gggagactcc acctctcatc 240 accccaggct cagcccaaag cggaccggtc gccaccatgg tgagcaaggg cgaggagctg 300 ttcaccgggg tggtgcccat cctggtcgag ctggacggcg acgtaaacgg ocacaagttc 360 agcgtgtccg gcgagggcga gggcgatgcc acctacggca agctgaccct gaagttcatc 420 tgcaccaccg gcaagctgcc cgtgccctgg cccaccctcg tgaccaccct gacctacggc 480 gtgcagtgct tcagccgcta ccccgaccac atgaagcagc acgacttctt caagtccgcc 540 atgcccgaag gctacgtcca ggagcgcacc atcttcttca aggacgacgg oaactacaag 600 acccgcgccg aggtgaagtt cgagggcgac accctggtga accgcatcga gctgaagggc 660 atcgacttca aggaggacgg caacatcctg gggcacaagc tggagtacaa ctacaacagc 720 cacaacgtct atatcatggc cgacaagcag aagaacggca tcaaggtgaa cttcaagatc 780 cgocacaaca tcgaggacgg cagcgtgcag ctcgccgacc actaccagca gaacaccccc 840 atcggcgacg gccccgtgct gctgcccgac aaccactacc tgagcaccca gtccgccctg 900 agcaaagacc ccaacgagaa gcgcgatcac atggtcctgc tggagttcgt gaccgccgcc 960 gggatcactc tcggcatgga cgagctgtac aagtaa 996

<210> 78 <211> 1083 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 78 atgcagaagg tgaccctggg cctgcttgtg ttcctggcag gctttcctgt cctggacgcc 60 aatgacctag aagataaaaa cagtcctttc tactatggtg ctccatatat atttgtcaag 120 agaatggggg gacagatgaa gaggacacag gctggcactg aggtcccctc cactttcctc 180 ctagactggc acagcctcca ggttggcggg ctcatctgcg ctggggttct gtgcgccatg 240 ggcatcatca tcgtcatgag tgcaaaatgc aaatgcaagt ttggccagaa gtccggtcac 300 catccagggg agactccacc tctcatcacc ccaggctcag cccaaagcgg accggtcgcc 360 accatggtga gcaagggcga ggagctgttc accggggtgg tgcccatcct ggtcgagctg 420 gacggcgacg taaacggcca caagttcagc gtgtccggcg agggcgaggg cgatgccacc 480 tacggcaagc tgaccctgaa gttcatctgc accaccggca agctgcccgt gccctggccc 540 accctcgtga ccaccctgac ctacggcgtg cagtgcttca gccgctaccc cgaccacatg 500 aagcagcacg acttcttcaa gtccgccatg cccgaaggct acgtccagga gcgcaccatc 660 ttcttcaagg acgacggcaa ctacaagacc cgcgccgagg tgaagttcga gggcgacacc 720 ctggtgaacc gcatcgagct gaagggcatc gacttcaagg aggacggcaa catcctgggg 780 cacaagctgg agtacaacta caacagecac aacgtctata tcatggccga caagcagaag 840 aacggcatca aggtgaactt caagatccgc cacaacatcg aggacggcag cgtgcagctc 900 gccgaccact accagcagaa cacccccatc ggcgacggcc ccgtgctgct gcccgacaac 960 cactacctga gcacccagtc cgccctgagc aaagacccca acgagaagcg cgatcacatg 1020 gtcctgctgg agttcgtgac cgccgccggg atcactctcg gcatggacga gctgtacaag 1080 taa 1083

<210> 79 <211> 1371 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 79 atgaggcctc tgcccagcgg gaggaggaag acccgaggca tctccctagg actcttcgcc 60 ctctgcctgg ccgcagcccg ctgtctgcag agtcagggtg tgtccctata cattcctcag 120 gccaccatca atgccactgt caaagaagac atcctgctct cagttgagta ctcctgtcat 180 ggagtgccca ccatcgaatg gacatattca tccaattggg gaacgcagaa gatcgtggag 240 tggaaaccag ggactcaggc caacatctct caaagccaca aggacagagt ctgcaccttt 300 gacaacggct ccatccagct cttcagcgtg ggagtgaggg attccggcta ctatgtcatc 360 accgtgacgg agcgcctggg gagcagccag tttggcacca tcgtgctgca cgtctctgag 420 atcctctatg aagacctgca ctttgtcgct gtcatccttg cttttctcgc tgctgtggcc 480 gcagtattaa tcagcctcat gtgggtttgt aataagtgtg catataaatt tcagaggaag 540 agaagacaca aactcaaaga aagcacaact gaggagattg agctggaaga tgttgagtgt 600 cgaattctgc agtcgacggt accgcgggcc cgggatccac cggtcgccac catggtgagc 660 aagggcgagg agctgttcac oggggtggtg cccatcctgg tcgagctgga cggcgacgta 720 aacggccaca agttcagcgt gtccggcgag ggcgagggcg atgccaccta cggcaagctg 780 accctgaagt tcatctgcac caccggcaag ctgcccgtgc cctggcccac cctcgtgacc 840 accctgacct acggcgtgca gtgcttcagc cgctaccccg accacatgaa gcagcacgac 900 ttcttcaagt ccgccatgcc cgaaggctac gtccaggagc gcaccatctt cttcaaggac 960 gacggcaact acaagacccg cgccgaggtg aagttcgagg gcgacaccct ggtgaaccgc 1020 atcgagctga agggcatcga cttcaaggag gacggcaaca tcctggggca caagctggag 1080 tacaactaca acagccacaa cgtctatatc atggccgaca agcagaagaa cggcatcaag 1140 gtgaacttca agatccgcca caacatcgag gacggcagcg tgcagctcgc cgaccactac 1200 cagcagaaca cccccatcgg cgacggcccc gtgctgctgc ccgacaacca ctaoctgagc 1260 acccagtccg ccctgagcaa agaccccaac gagaagcgcg atcacatggt cctgctggag 1320 ttcgtgaccg ccgccgggat cactctcggc atggacgagc tgtacaagta a 1371

<210> 80 <211> 1332 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 80 atgaggcctc tgcccagcgg gaggaggaag acccgaggca tctccctagg actcttcgcc 60 ctctgcctgg ccgcagcccg ctgtctacag agtcagggtg tgtccctata cattcctcag 120 gccaccatca atgccactgt caaagaagac atcctgctct cagttgagta ctcctgtcat 180 ggagtgccca ccatcgaatg gacatattca tccaattggg gaacgcagaa gatcgtggag 240 tggaaaccag ggactcaggc caacatctct caaagccaca aggacagagt ctgcaccttt 300 gacaacggct ccatccagct cttcagcgtg ggagtgaggg attccggcta ctatgtcatc 360 accgtgacgg agcgcctggg gagcagccag tttggcacca tcgtgctgca cgtctctgag 420 atcctctatg aagacctgca ctttgtcgct gtcatccttg cttttctcgc tgctgtggcc 480 gcagtattaa tcagcctcat gtgggtttgt aataagtgtg catataaatt tcagaggaag 540 agaagacaca aactcaaagg taaccccctg ggccttgtga taatccatga gtggtttgga 600 ccggtcgcca ccatggtgag caagggcgag gagctgttca ccggggtggt gcccatcctg 660 gtcgagctgg acggcgacgt aaacggccac aagttcagcg tgtccggcga gggcgagggc 720 gatgccacct acggcaagct gaccctgaag ttcatctgca ccaccggcaa gctgcccgtg 780 ccctggccca ccctcgtgac caccctgacc tacggcgtgc agtgcttcag ccgctacccc 840 gaccacatga agcagcacga cttcttcaag tccgccatgc ccgaaggcta cgtccaggag 900 cgcaccatct tcttcaagga cgacggcaac tacaagaccc gcgccgaggt gaagttcgag 960 ggcgacaccc tggtgaaccg catcgagctg aagggcatcg acttcaagga ggacggcaac 1020 atcctggggc acaagctgga gtacaactac aacagccaca acgtctatat catggccgac 1080 aagcagaaga acggcatcaa ggtgaacttc aagatccgcc acaacatcga ggacggcagc 1140 gtgcagctcg ccgaccacta ccagcagaac acccccatcg gcgacggccc cgtgctgctg 1200 cccgacaacc actacctgag cacccagtcc gccctgagca aagaccccaa cgagaagcgc 1260 gatcacatgg tcctgctgga gttcgtgacc gccgccggga tcactctcgg catggacgag 1320 ctgtacaagt aa 1332

<210> 81 <211> 1533 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 81 atggataggg tcttgctgag gtggatttct ctcttctggc taacagccat ggtcgaaggc 60 cttcaggtca cagtgcccga caagaagaag gtggccatgc tcttccagcc cactgtgctt 120 cgctgccact tctcaacatc ctcccatcag cctgcagttg tgcagtggaa gttcaagtcc 180 tactgccagg atcgcatggg agaatccttg ggcatgtcct ctacccgggc ccaatctctc 240 agcaagagaa acctggaatg ggacccctac ttggattgtt tggacagcag gaggactgtt 300 cgagtagtag cttcaaaaca gggctcgact gtcaccctgg gagatttcta caggggcaga 360 gagatcacga ttgttcatga tgcagatctt caaattggaa agcttatgtg gggagacagc 420 ggactctatt actgtattat caccacccca gatgacctgg aggggaaaaa tgaggactca 480 gtggaactgc tggtgttggg caggacaggg ctgcttgctg atctcttgcc cagttttgct 540 gtggagatta tgccagagtg ggtgtttgtt ggcctggtgc tcctgggcgt cttcctcttc 600 ttcgtcctgg tggggatctg ctggtgccag tgctgccctc acagctgctg ctgctatgtc 660 cgctgcccat gctgcccaga ttcctgctgc tgccctcaag cctgtgagta cagtgaccgc 120 tggggagaca gagcgatcga gagaaatgtc tacctctcta cccgaattct gcagtcgacg 780 gtaccgcggg cccgggatcc accggtcgcc accatggtga gcaagggcga ggagctgttc 840 accggggtgg tgcccatcct ggtcgagctg gacggcgacg taaacggcca caagttcagc 900 gtgtccggcg agggcgaggg ggatgccacc tacggcaagc tgaccctgaa gttcatctgc 960 accaccggca agctgcccgt gccctggccc accctcgtga ccaccctgac ctacggcgtg 1020 cagtgottca gccgctaccc cgaccacatg aagcagcacg acttcttcaa gtccgccatg 1080 ccegaaggct acgtccagga gcgcaccatc ttcttcaagg acgacggcaa ctacaagacc 1140 cgcgccgagg tgaagttcga gggcgacacc ctggtgaacc gcatcgagct gaagggcatc 1200 gacttcaagg aggacggcaa catcctgggg cacaagctgg agtacaacta caacagccac 1260 aacgtctata tcatggccga caagcagaag aacggcatca aggtgaactt caagatccgc 1320 cacaacatcg aggacggcag cgtgcagctc gccgaccact accagcagaa cacccccatc 1380 ggcgacggcc ccgtgctgct gcccgacaac cactacctga gcacccagtc cgccctgagc 1440 aaagacccca acgagaagcg cgatcacatg gtcctgctgg agttcgtgac cgccgccggg 1500 atcactctcg gcatggacga gctgtacaag taa 1533

<210> 82 <211> 2085 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 82 atgtggctca aggtcttcac aactttcctt tcctttgcaa caggtgcttg ctcggggctg 60 aaggtgacag tgccatcaca cactgtccat ggcgtcagag gtcaggccct ctacctaccc 120 gtccactatg gcttccacac tccagcatca gacatccaga tcatatggct atttgagaga 180 ccccacacaa tgcccaaata cttactgggc tctgtgaata agtctgtggt tcctgacttg 240 gaataccaac acaagttcac catgatgcca cccaatgcat ctctgcttat caacccactg 300 cagttccctg atgaaggcaa ttacatcgtg aaggtcaaca ttcagggaaa tggaactcta 360 tctgccagtc agaagataca agtcacggtt gatgatcctg tcacaaagcc agtggtgcag 420 attcatcctc cctctggggc tgtggagtat gtggggaaca tgaccctgac atgccatgtg 480 gaagggggca ctcggctagc ttaccaatgg ctaaaaaatg ggagacctgt ccacaccagc 540 tccacctact ccttttctcc ccaaaacaat acccttcata ttgctccagt aaccaaggaa 600 gacattggga attacagctg cctggtgagg aaccctgtca gtgaaatgga aagtgatatc 660 attatgccca tcatatatta tggaccttat ggacttcaag tgaattctga taaagggcta 720 aaagtagggg aagtgtttac tgttgacctt ggagaggcca tcctatttga ttgttctgct 780 gattctcatc cccccaacac ctactcctgg attaggagga ctgacaatac tacatatatc 840 attaagcatg ggcctcgctt agaagttgca tctgagaaag tagcccagaa gacaatggac 900 tatgtgtgct gtgcttacaa caacataacc ggcaggcaag atgaaactca tttcacagtt 960 atcatcactt ccgtaggact ggagaagctt gcacagaaag gaaaatcatt gtcaccttta 1020 gcaagtataa ctggaatatc actatttttg attatatcca tgtgtcttct cttcctatgg 1080 aaaaaatatc aaccctacaa agttataaaa cagaaactag aaggcaggcc agaaacagaa 1140 tacaggaaag ctcaaacatt ttcaggccat gaagatgctc tggatgactt cggaatatat 1200 gaatttgttg cttttccaga tgtttctggt gtttccagga tcccaagcag gtctgttcca 1260 gcctctgatt gtgtatcggg gcaagatttg cacagtacag tgtatgaagt tattcagcac 1320 atccctgccc agcagcaaga ccatccagag ggaccggtcg ccaccatggt gagcaagggc 1380 gaggagctgt tcaccggggt ggtgcccatc ctggtcgagc tggacggcga cgtaaacggc 1440 cacaagttca gcgtgtccgg cgagggcgag ggcgatgcca cctacggcaa gctgaccctg 1500 aagttcatct gcaccaccgg caagctgccc gtgccctggc ccaccctcgt gaccaccctg 1560 acctacggcg tgcagtgctt cagccgctac cccgaccaca tgaagcagca cgacttcttc 1620 aagtccgcca tgcccgaagg ctacgtccag gagcgcacca tcttcttcaa ggacgacggc 1680 aactacaaga cccgcgccga ggtgaagttc gagggcgaca ccctggtgaa ccgcatcgag Π40 ctgaagggca tcgacttcaa ggaggacggc aacatcctgg ggcacaagct ggagtacaac 1800 tacaacagcc acaacgtcta tatcatggcc gacaagcaga agaacggcat caaggtgaac 1860 ttcaagatcc gccacaacat cgaggacggc agcgtgcagc tcgccgacca ctaccagcag 1920 aacaccccca tcggcgacgg ccccgtgctg ctgcccgaca accactacct gagcacccag 1980 tccgccctga gcaaagaccc caacgagaag cgcgatcaca tggtcctgct ggagttcgtg 2040 accgccgccg ggatcactct cggcatggac gagctgtaca agtaa 2085

<210> 83 <211> 2373 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 83 atggcatggc ccaaactgcc cgcaccttgg ctgctgctct gcacctggct cccagcaggg 60 tgcctgtcct tgcttgtgac ggtccagcac acagaacgct atgtcaccct gtttgcctct 120 atcatcctca aatgtgacta caccacctct gcccagctcc aggacgtggt ggtgacatgg 180 cgcttcaagt ccttctgcaa ggaccctatc tttgactact actcagcgtc ataccaggca 240 gctttatccc tgggccagga cccatccaat gactgcaacg acaaccagcg ggaagttcgc 300 atagtggccc agcggcgggg gcagaatgag cccgtgctgg gggtagatta ccggcagcgc 360 aagatcacca tccagaaccg agcagatctc gtgataaatg aagtgatgtg gtgggaccat 420 ggagtgtatt actgcaccat tgaggctcca ggggacacat caggagaccc cgataaggaa 480 gtaaagctca tcgtcctaca ctggctgaca gtgatcttca tcatcctggg agccctcctc 540 ctcctgctgc tgattggagt gtgctggtgc cagtgctgtc ctcagtattg ctgctgctat 600 atccgctgtc cctgctgtcc tgcccactgc tgctgtcctg aggaagccct ggcccgccac 660 cgctacatga agcaggccca ggccctaggt cctcagatga tgggaaaacc cctgtactgg 720 ggggcggaoa ggagctccca ggtttcatct tatccaatgc acccgctgct gcagcgagat 780 ttgtccctgc ggtccagcct cccgcagatg ccaatgaccc agaccaccaa tcagcctccc 840 atcgccaatg gtgtcctgga gtatttggag aaagaactgc ggaacctcaa cctggcccag 900 cctctgcccc ctgacctcaa aggcagattt ggccatccct gcagcatgct gtcctccctg 960 ggctctgagg tcgtggaacg cagaatcatc cacctgcccc cactgatcag agacctgtca 1020 tcctcaagga ggaccagtga ctccctgcac cagcagtggc tcaccccaat tccctccagg 1080 ccctgggatc tgagggaggg gagaagccac caccattacc ctgatttcca ccaggagctc 1140 caggaccggg ggccaaagtc ttgggcattg gaaagaaggg agttggaccc atcgtggagt 1200 ggaaggcacc gtagctctag gctgaatggg tcacccatac actggtcaga cagggacagc 1260 ctaagcgatg tcccctcatc cagtgaggca cgctggcggc cgagccaccc tcctttcagg 1320 agccgctgtc aggagaggcc ccgcaggccc agcccccggg agagcactca gaggcacggg 1380 agacgacgca ggcaccgcag ctactctcct cccttgccct ccggcctcag ttcctggagc 1440 tctgaagagg acaaggagag gcagccccag agctggcggg cccaccgccg cggctcgcac 1500 tccccacact ggcccgagga gaagccgcct agctaccgct cactggatat cactccaggc 1560 aagaatagca ggaaaaaagg gagtgtggag aggcgctcgg agaaagacag ctctcatagt 1620 ggaaggagtg tggtoattgg accggtcgcc accatggtga gcaagggcga ggagctgttc 1680 accggggtgg tgcccatcct ggtcgagctg gacggcgacg taaacggcca caagttcagc 1740 gtgtccggcg agggcgaggg cgatgccacc tacggcaagc tgaccctgaa gttcatctgc 1800 accaccggca agctgcccgt gccctggccc accctcgtga ccaccctgac ctacggcgtg 1860 cagtgcttca gccgctaccc cgaccacatg aagcagcacg acttcttcaa gtccgccatg 1920 cccgaaggct acgtccagga gcgcaccatc ttcttcaagg acgacggcaa ctacaagacc 1980 cgcgccgagg tgaagttcga gggcgacacc ctggtgaacc gcatcgagct gaagggcatc 2040 gacttcaagg aggacggcaa catcctgggg cacaagctgg agtacaacta caacagccac 2100 aacgtctata tcatggccga caagcagaag aacggcatca aggtgaactt caagatccgc 2160 cacaacatcg aggacggcag cgtgcagctc gccgaccact accagcagaa cacccccatc 2220 ggcgacggcc ccgtgctgct gcccgacaac cactacctga gcacccagtc cgccctgagc 2280 aaagacccca acgagaagcg cgatcacatg gtcctgctgg agttcgtgac cgccgccggg 2340 atcactctcg gcatggacga gctgtacaag taa 2373

<210> 84 <211> 2241 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 84 atggcatggc ccaaactgcc cgcaccttgg ctgctgctct gcacctggct cccagcaggg 60 tgcctgtcct tgcttgtgac ggtccagcac acagaacgct atgtcaccct gtttgcctct 120 atcatcctca aatgtgacta oaccacctct gcccagctcc aggacgtggt ggtgacatgg 180 cgcttcaagt ccttctgcaa ggaccctatc tttgactact actcagcgtc ataccaggca 240 gctttatccc tgggccagga cccatccaat gactgcaacg acaaccagcg ggaagttcgc 300 atagtggccc agcggcgggg gcagaatgag cccgtgctgg gggtagatta ccggcagcgc 360 aagatcacca tccagaaccg agcagatctc gtgataaatg aagtgatgtg gtgggaccat 420 ggagtgtatt actgcaccat tgaggctcca ggggacacat caggagaccc cgataaggaa 480 gtaaagctca tcgtcctaca ctggctgaca gtgatcttca tcatcctggg agccctcctc 540 ctcctgctgc tgattggagt gtgctggtgc cagtgctgtc ctcagtattg ctgctgctat 600 atccgctgtc cctgctgtcc tgcccactgc tgctgtcctg aggaagattt gtccctgccg 660 tccagcctcc cgcagatgcc aatgacccag accaccaatc agcctcccat cgccaatggt 720 gtcctggagt atttggagaa agaactgcgg aacctcaacc tggcccagcc tctgccccct 780 gacctcaaag gcagatttgg ccatccotgc agcatgctgt cctccctggg ctctgaggtc 840 gtggaacgca gaatcatcca cctgccccca ctgatcagag acctgtcatc ctcaaggagg 900 accagtgact ccctgcacca gcagtggctc accccaattc cctccaggcc ctgggatctg 960 agggagggga gaagccacca ccattaccct gatttccacc aggagctcca ggaccggggg 1020 ccaaagtctt gggcattgga aagaagggag ttggacccat cgtggagtgg aaggcaccgt 1080 agctctaggc tgaatgggtc acccatacac tggtcagaca gggacagcct aagcgatgtc 1140 ccctcatcca gtgaggcacg ctggcggccg agccaccctc ctttcaggag ccgctgtcag 1200 gagaggcccc gcaggcccag cccccgggag agcactcaga ggcacgggag acgacgcagg 1260 caccgcagct actctcctcc cttgccctcc ggcctcagtt cctggagctc tgaagaggac 1320 aaggagaggc agccccagag ctggcgggcc caccgccgcg gctcgcactc cccacactgg 1380 cccgaggaga agccgcctag ctaccgctca ctggatatca ctccaggcaa gaatagcagg 1440 aaaaaaggga gtgtggagag gcgctcggag aaagacagct ctcatagtgg aaggagtgtg 1500 gtcattggac cggtcgccac catggtgagc aagggcgagg agctgttcac cggggtggtg 1560 cccatcctgg tcgagctgga cggcgacgta aacggccaca agttcagcgt gtccggcgag 1620 ggcgagggcg atgccaccta cggcaagctg accctgaagt tcatctgcac caccggcaag 1680 ctgcccgtgc cctggcccac cctcgtgacc accctgacct acggcgtgca gtgcttcagc 1740 cgctaccccg accacatgaa gcagcacgac ttcttcaagt ccgccatgcc cgaaggctac 1800 gtccaggagc gcaccatctt cttcaaggac gacggcaact acaagacccg cgccgaggtg 1860 aagttcgagg gcgacaccct ggtgaaccgc atcgagctga agggcatcga cttcaaggag 1920 gacggcaaca tcctggggca caagctggag tacaactaca acagccacaa cgtctatatc 1980 atggccgaca agcagaagaa cggcatcaag gtgaacttca agatccgcca caacatcgag 2040 gacggcagcg tgcagctcgc cgaccactac cagcagaaca cccccatcgg cgacggcccc 2100 gtgctgctgc ccgacaacca ctacctgagc acccagtccg ccctgagcaa agaccccaac 2160 gagaagcgcg atcacatggt cctgctggag ttcgtgaccg ccgccgggat cactctcggc 2220 atggacgagc tgtacaagta a 2241

<210> 85 <211> 2082 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 85 atggtgttcg cattttggaa ggtctttctg atcctaagct gccttgcagg tcaggttagt 60 gtggtgcaag tgaccatccc agacggtttc gtgaacgtga ctgttggatc taatgtcact 120 ctcatctgca tctacaccac cactgtggcc tcccgagaac agctttccat ccagtggtct 180 ttcttccata agaaggagat ggagccaatt tctcacagct cgtgcctcag tactgagggt 240 atggaggaaa aggcagtcag tcagtgtcta aaaatgacgc acgcaagaga cgctcgggga 300 agatgtagct ggacctctga gtctccttgg gaggagggga agtggccaga tgttgaggct 360 gtgaagggca ctcttgatgg acagcaggct gaactccaga tttacttttc tcaaggtgga 420 caagctgtag ccatcgggca atttaaagat cgaattacag ggtccaacga tccaggtaat 480 gcatctatca ctatctcgca tatgcagcca gcagacagtg gaatttacat ctgcgatgtt 540 aacaaccccc cagactttct cggccaaaac caaggcatcc tcaacgtcag tgtgttagtg 600 aaaccttcta agcccctttg tagcgttcaa ggaagaccag aaactggcca cactatttcc 660 ctttcctgtc tctctgcgct tggaacacct tcccctgtgt actactggca taaacttgag 720 ggaagagaca tcgtgccagt gaaagaaaac ttcaacccaa ccaccgggat tttggtcatt 780 ggaaatctga caaattttga acaaggttat taccagtgta ctgccatcaa cagacttggc 840 aatagttect gcgaaatcga tctcacttct tcacatccag aagttggaat cattgttggg 900 gccttgattg gtagcctggt aggtgccgcc atcatcatct ctgttgtgtg cttcgcaagg 960 aataaggcaa aagcaaaggc aaaagaaaga aattctaaga ccatcgcgga acttgagcca 1020 atgacaaaga taaacccaag gggagaaagc gaagcaatgc caagagaaga cgctacccaa 1080 ctagaagtaa ctctaccatc ttccattcat gagactggcc ctgataccat ccaagaacca 1140 gactatgagc caaagcctac tcaggagcct gccccagagc ctgccccagg atcagagcct 1200 atggcagtgc ctgaccttga catcgagctg gagctggagc cagaaacgca gtcggaattg 1260 gagccagágc cagagccaga gccagagtca gagcctgggg ttgtagttga gcccttaagt 1320 gaagatgaaa agggagtggt taaggcagga ccggtcgcca ccatggtgag caagggcgag 1380 gagctgttca ccggggtggt gcccatcctg gtcgagctgg acggcgacgt aaacggccac 1440 aagttcagcg tgtccggcga gggcgagggc gatgccacct acggcaagct gaccctgaag 1500 ttcatctgca ccaccggcaa gctgcccgtg ccctggccca ccctcgtgac caccctgacc 1560 tacggcgtgc agtgcttcag ccgctacccc gaccacatga agcagcacga cttcttcaag 1620 tccgccatgc ccgaaggcta cgtccaggag cgcaccatct tettcaagga cgaeggcaac 1680 tacaagaccc gcgccgaggt gaagttcgag ggcgacaccc tggtgaaccg catcgagctg 1740 aagggcatcg acttcaagga ggacggeaac atcctggggc acaagetgga gtacaactac 1800 aacagccaca acgtctatat catggccgac aagcagaaga acggcatcaa ggtgaacttc 1860 aagatccgcc acaacatcga ggacggcagc gtgcagctcg ccgaccacta ccagcagaac 1920 acccccatcg gcgacggccc cgtgctgctg cccgacaacc actacctgag cacccagtcc 1980 gccctgagca aagaccccaa cgagaagcgc gatcacatgg tcctgctgga gttcgtgacc 2040 gccgccggga tcactctcgg catggacgag ctgtacaagt aa 2082

<210> 86 <211> 2004 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 86 atggtgttcg cattttggaa ggtctttctg atcctaagct gccttgcagg tcaggttagt 60 gtggtgcaag tgaccatccc agacggtttc gtgaacgtga ctgttggatc taatgtcact 120 ctcatctgca tctacaccac cactgtggcc tcccgagaac agctttccat ccagtggtct 180 ttcttccata agaaggagat ggagccaatt tctcacagct cgtgcctcag tactgagggt 240 atggaggaaa aggcagtcag tcagtgtcta aaaatgacgc acgcaagaga cgctcgggga 300 agatgtagct ggacctctga gatttacttt tctcaaggtg gacaagctgt agccatcggg 360 caatttaaag atcgaattac agggtccaac gatccaggta atgcatctat cactatctcg 420 catatgcagc cagcagacag tggaatttac atctgcgatg ttaacaaccc cccagacttt 480 ctcggccaaa accaaggcat cctcaacgtc agtgtgttag tgaaaccttc taagcccctt 540 tgtagcgttc aaggaagacc agaaactggc cacactattt ccctttcctg tctctctgcg 600 cttggaacac cttcccctgt gtactactgg cataaacttg agggaagaga catcgtgcca 660 gtgaaagaaa acttcaaccc aaccaccggg attttggtca ttggaaatct gacaaatttt 720 gaacaaggtt attaccagtg tactgccatc aacagacttg gcaatagttc ctgcgaaatc 780 gatctcactt cttcacatcc agaagttgga atcattgttg gggccttgat tggtagcctg 840 gtaggtgcog ccatcatcat- ctctgttgtg tgcttcgcaa ggaataaggc aaaagcaaag 900 gcaaaagaaa gaaattctaa gaccatcgcg gaacttgagc caatgacaaa gataaacoca 960 aggggagaaa gcgaagcaat gccaagagaa gacgctaccc aactagaagt aactctacca 1020 tcttocattc atgagactgg ccctgatacc atccaagaac cagactatga gccaaagcct 1080 actcaggagc ctgccccaga gcctgcccca ggatcagagc ctatggcagt gcctgacctt 1140 gacatcgagc tggagctgga gccagaaacg cagtcggaat tggagccaga gccagagcca 1200 gagccagagt cagagcctgg ggttgtagtt gagcccttaa gtgaagatga aaagggagtg 1260 gttaaggcag gaccggtcgc caccatggtg agcaagggcg aggagctgtt caccggggtg 1320 gtgcccatcc tggtcgagct ggacggcgac gtaaacggcc acaagttcag cgtgtccggc 1380 gagggcgagg gcgatgccac ctacggcaag ctgaccctga agttcatctg caccaccggc 1440 aagctgcccg tgccctggcc caccctcgtg accaccctga cctacggcgt gcagtgcttc 1500 agccgctacc ccgaccacat gaagcagcac gacttcttca agtccgccat gcccgaaggc 1560 tacgtccagg agcgcaccat cttcttcaag gacgacggca actacaagac ccgcgccgag 1620 gtgaagttcg agggcgacac cctggtgaac cgcatcgagc tgaagggcat cgacttcaag 1680 gaggacggca acatcctggg gcacaagctg gagtacaact acaacagcca caacgtctat 1740 atcatggccg acaagcagaa gaacggcatc aaggtgaact tcaagatccg ccacaacatc 1800 gaggacggca gcgtgcagct cgccgaccac taccagcaga acacccccat cggcgacggc i860 cccgtgctgc tgcccgacaa ccactacctg agcacccagt ccgccctgag caaagacccc 1920 aacgagaagc gcgatcacat ggtcctgctg gagttcgtga ccgccgccgg gatcactctc 1980 ggcatggacg agctgtacaa gtaa 2004

<210> 87 <211> 331 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 87

Met Gin Lys Val Thr Leu Gly Leu Leu Val Phe Leu Ala Gly Phe Pro 15 10 15

Val Leu Asp Ala Asn Asp Leu Glu Asp Lys Asn Ser Pro Phe Tyr Tyr 20 25 30

Asp Trp His Ser Leu Gin Val Gly Gly Leu lie Cys Ala Gly Val Leu 35 40 45

Cys Ala Met Gly lie lie He Val Met Ser Ala Lys Cys Lys Cys Lys 50 55 60

Phe Gly Gin Lys Ser Gly His His Pro Gly Glu Thr Pro Pro Leu lie

65 70 75 SO

Thr Pro Gly Ser Ala Gin Ser Gly Pro Val Ala Thr Met Val Ser Lys 85 90 95

Gly Glu Glu Leu Phe Thr Gly Val val Pro He Leu val Glu Leu Asp 100 105 110

Gly Asp Val Asn Gly His Lys Phe Ser Val Ser Gly Glu Gly Glu Gly 115 120 125

Asp Ala Thr Tyr Gly Lys Leu Thr Leu Lys Phe He Cys Thr Thr Gly 130 135 140

Lys Leu Pro Val Pro Trp Pro Thr Leu Val Thr Thr Leu Thr Tyr Gly 145 150 155 160

Val Gin Cys Phe Ser Arg Tyr Pro Asp His Met Lys Gin His Asp Phe 165 170 175

Phe Lys Ser Ala Met Pro Glu Gly Tyr Val Gin Glu Arg Thr lie Phe 180 185 190

Phe Lys Asp Asp Gly Asn Tyr Lys Thr Arg Ala Glu Val Lys Phe Glu 195 200 205

Gly Asp Thr Leu val Asn Arg lie Glu Leu Lys Gly lie Asp Phe Lys 210 215 220

Glu Asp Gly Asn lie Leu Gly His Lys Leu Glu Tyr Asn Tyr Asn Ser 225 230 235 240

His Âsn Val Tyr lie Met Ala Asp Lys Gin Lys Asn Gly lie Lys Val 245 250 255

Asn Phe Lys lie Arg His Asn lie Glu Asp Gly Ser Val Gin Leu Ala 260 265 270

Asp His Tyr Gin Gin Asn Thr Pro lie Gly Asp Gly Pro val Leu Leu 275 280 285

Pro Asp Asn His Tyr Leu Ser Thr Gin Ser Ala Leu Ser Lys Asp Pro 290 - 295 300

Asn Glu Lys Arg Asp His Met Val Leu Leu Glu Phe Val Thr Ala Ala 305 310 315 320

Gly lie Thr Leu Gly Met Asp Glu Leu Tyr Lys 325 330

<210> 88 <211> 360 <212> PRT <213> Homo sapiens

Met Gin Lys Val Thr Leu Gly Leu Leu Val Phe Leu Ala Gly Phe Pro 15 10 15 <400> 88

Vai Leu Asp Ala Asn Asp Leu Glu Asp Lys Asn Ser Pro Phe Tyr Xyr 20 25 30

Gly Ala Pro Tyr lie Phe Vai Lys Arg Met Gly Gly Gin Met Lys Arg 35 40 45

Thr Gin Ala Gly Thr Glu Vai Pro Ser Thr Phe Leu Leu Asp Trp His 50 55 60

Ser Leu Gin Vai Gly Gly Leu lie Cys Ala Gly Vai Leu Cys Ala Met 65 70 75 80

Gly lie lie lie Vai Met Ser Ala Lys Cys Lys Cys Lys Phe Gly Gin 85 90 95

Lys Ser Gly His His Pro Gly Glu Thr Pro Pro Leu lie Thr Pro Gly 100 105 110

Ser Ala Gin Ser Gly Pro Vai Ala Thr Met Vai Ser Lys Gly Glu Glu 115 120 125

Leu Phe Thr Gly Vai Vai Pro lie Leu Vai Glu Leu Asp Gly Asp Vai 130 135 140

Asn Gly His Lys Phe Ser Vai Ser Gly Glu Gly Glu Gly Asp Ala Thr 145 150 155 160

Tyr Gly Lys Leu Thr Leu Lys Phe He Cys Thr Thr Gly Lys Leu Pro 165 170 175

Vai Pro Trp Pro Thr Leu Vai Thr Thr Leu Thr Tyr Gly Vai Gin Cys 180 . 185 190

Phe Ser Arg Tyr Pro Asp His Met Lys Gin His Asp Phe Phe Lys Ser 195 200 205

Ala Met Pro Glu Gly Tyr Vai Gin Glu Arg Thr lie Phe Phe Lys Asp 210 215 220

Asp Gly Asn Tyr Lys Thr Arg Ala Glu Vai Lys Phe Glu Gly Asp Thr 225 230 235 240

Leu Val Asn Arg lie Glu Leu Lys Gly lie Asp Phe Lys Glu Asp Gly 245 250 255

Asn lie Leu Gly His Lys Leu Glu Tyr Asn Tyr Asn Ser His Asn Vai 260 265 270

Tyr lie Met Ala Asp Lys Gin Lys Asn Gly Ile Lys Vai Asn Phe Lys 275 280 285 lie Arg His Asn lie Glu Asp Gly Ser Vai Gin Leu Ala Asp His Tyr 290 295 300

Gin Gin Asn Thr Pro He Gly Asp Gly Pro Vai Leu Leu Pro Asp Asn 305 310 315 320

His Tyr Leu Ser Thr Gin Ser Ala Leu Ser Lys Asp Pro Asn Glu Lys 325 330 335

Arg Asp His Met Vai Leu Leu Glu Phe Vai Thr Ala Ala Gly Ile Thr 340 345 350

Leu Gly Met Asp Glu Leu Tyr Lys 355 360

<210> 89 <211> 456 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 89

Met Arg Pro Leu Pro Ser Gly Arg Arg Lys Thr Arg Gly lie Ser Leu 15 10 15

Gly Leu Phe Ala Leu Cys Leu Ala Ala Ala Arg Cys Leu Gin Ser Gin 20 25 30

Gly Val Ser Leu Tyr lie Pro Gin Ala Thr lie Asn Ala Thr Val Lys 35 40 45

Glu Asp lie Leu Leu Ser Val Glu Tyr Ser Cys His Gly Val Pro Thr 50 55 60 lie Glu Trp Thr Tyr Ser Ser Asn Trp Gly Thr Gin Lys lie Val Glu 65 70 75 80

Trp Lys Pro Gly Thr Gin Ala Asn lie Ser Gin Ser His Lys Asp Arg 85 90 95

Val Cys Thr Phe Asp Asn Gly Ser lie Gin Leu Phe Ser Val Gly Val 100 105 110

Arg Asp Ser Gly Tyr Tyr Val lie Thr Val Thr Glu Arg Leu Gly Ser 115 120 125

Ser Gin Phe Gly Thr lie Val Leu His Val Ser Glu He Leu Tyr Glu 130 135 140

Asp Leu His Phe Val Ala Val lie Leu Ala Phe Leu Ala Ala Val Ala 145 150 155 160

Ala Val Leu He Ser Leu Met Trp Val Cys Asn Lys Cys Ala Tyr Lys 165 170 175

Phe Gin Arg Lys Arg Arg His Lys Leu Lys Glu Ser Thr Thr Glu Glu 180 185 190 lie Glu Leu Glu Asp val Glu Cys Arg lie Leu Gin Ser Thr Val Pro 195 200 205

Arg Ala Arg Asp Pro Pro Val Ala Thr Met Val Ser Lys Gly Glu Glu 210 215 220

Leu Phe Thr Gly Val Val Pro lie Leu Val Glu Leu Asp Gly Asp Val 225 230 235 240

Asn Gly His Lys Phe Ser Val Ser Gly Glu Gly Glu Gly Asp Ala Thr 245 250 255

Tyr Gly Lys Leu Thr Leu Lys Phe lie Cys Thr Thr Gly Lys Leu Pro 260 265 270

Val Pro Trp Pro Thr Leu Val Thr Thr Leu Thr Tyr Gly Val Gin Cys 275 280 285

Phe Ser Arg Tyr Pro Asp His Met Lys Gin His Asp Phe Phe Lys Ser 290 295 300

Ala Met Pro Glu Gly Tyr Val Gin Glu Arg Thr He Phe Phe Lys Asp 305 310 315 320

Asp Gly Asn Tyr Lys Thr Arg Ala Glu Val Lys Phe Glu Gly Asp Thr 325 330 335

Leu Val Asn Arg He Glu Leu Lys Gly lie Asp Phe Lys Glu Asp Gly 340 345 350

Asn He Leu Gly His Lys Leu Glu Tyr Asn Tyr Asn Ser His Asn Vai 355 360 365

Tyr He Met Ala Asp Lys Gin Lys Asn Gly lie Lys vai Asn Phe Lys 370 375 380

Ile Arg His Asn Ile Glu Asp Gly Ser Vai Gin Leu Ala Asp His Tyr 385 390 395 400

Gin Gin Asn Thr Pro lie Gly Asp Gly Pro Vai Leu Leu Pro Asp Asn 405 410 415

His Tyr Leu Ser Thr Gin Ser Ala Leu Ser Lys Asp Pro Asn Glu Lys 420 425 430

Arg Asp His Met Vai Leu Leu Glu Phe Vai Thr Ala Ala Gly Ile Thr 435 440 445

Leu Gly Met Asp Glu Leu Tyr Lys 450 455

<210> 90 <211> 443 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 90

Met Arg Pro Leu Pro Ser Gly Arg Arg Lys Thr Arg Gly He Ser Leu 15 10 15

Gly Leu Phe Ala Leu Cys Leu Ala Ala Ala Arg Cys Leu Gin Ser Gin 20 25 30

Gly Val Ser Leu Tyr lie Pro Gin Ala Thr lie Asn Ala Thr Val Lys 35 4 0 45

Glu Asp lie Leu Leu Ser Val Glu Tyr Ser Cys His Gly Val Pro Thr 50 55 60 lie Glu Trp Thr Tyr Ser Ser Asn Trp Gly Thr Gin Lys He Val Glu 65 70 75 80

Trp Lys Pro Gly Thr Gin Ala Asn lie Ser Gin Ser His Lys Asp Arg 85 90 95

Vai Cys Thr Phe Asp Asn Gly Ser lie Gin Leu Phe Ser Val Gly Val 100 105 110

Arg Asp Ser Gly Tyr Tyr Val lie Thr Val Thr Glu Arg Leu Gly Ser 115 120 125

Ser Gin Phe Gly Thr lie Val Leu His Val Ser Glu lie Leu Tyr Glu 130 135 140

Asp Leu His Phe Val Ala Val lie Leu Ala Phe Leu Ala Ala Val Ala 145 150 155 160

Ala val Leu He Ser Leu Met Trp Val Cys Asn Lys Cys Ala Tyr Lys 165 170 175

Phe Gin Arg Lys Arg Arg His Lys Leu Lys Gly Asn Pro Leu Gly Leu 180 185 190

Val He lie His Glu Trp Phe Gly Pro Val Ala Thr Met Val Ser Lys 195 200 205

Gly Glu Glu Leu Phe Thr Gly Val Val Pro lie Leu Val Glu Leu Asp 210 215 220

Gly Asp Val Asn Gly His Lys Phe Ser Val Ser Gly Glu Gly Glu Gly 225 230 235 240

Asp Ala Thr Tyr Gly Lys Leu Thr Leu Lys Phe He Cys Thr Thr Gly 245 250 255

Lys Leu Pro Val Pro Trp Pro Thr Leu Val Thr Thr Leu Thr Tyr Gly 260 265 270

Val Gin Cys Phe Ser Arg Tyr Pro Asp His Met Lys Gin His Asp Phe 275 280 285

Phe Lys Ser Ala Met Pro Glu Gly Tyr Val Gin Glu Arg Thr He Phe 290 295 300

Phe Lys Asp Asp Gly Asn Tyr Lys Thr Arg Ala Glu Val Lys Phe Glu 305 310 315 320

Gly Asp Thr Leu Val Asn Arg lie Glu Leu Lys Gly lie Asp Phe Lys 325 330 335

Glu Asp Gly Asn lie Leu Gly His Lys Leu Glu Tyr Asn Tyr Asn Ser 340 345 350

His Asn Vai Tyr He Met Ala Asp Lys Gin Lys Asn Gly lie Lys vai 355 360 365

Asn Phe Lys lie Arg His Asn lie Glu Asp Gly Ser Vai Gin Leu Ala 370 375 380

Asp His Tyr Gin Gin Asn Thr Pro lie Gly Asp Gly Pro Vai Leu Leu 385 390 395 400

Pro Asp Asn His Tyr Leu Ser Thr Gin Ser Ala Leu Ser Lys Asp Pro 405 410 415

Asn Glu Lys Arg Asp His Met Vai Leu Leu Glu Phe Vai Thr Ala Ala 420 425 430

Gly lie Thr Leu Gly Met Asp Glu Leu Tyr Lys 435 440

<210> 91 <211> 510 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 91

Met Asp Arg Val Leu Leu Arg Trp lie Ser Leu Phe Trp Leu Thr Ala 15 10 15

Met Val Glu Gly Leu Gin Val Thr Val Pro Asp Lys Lys Lys Val Ala 20 25 30

Met Leu Phe Gin Pro Thr Val Leu Arg Cys His Phe Ser Thr Ser Ser 35 40 45

His Gin Pro Ala Val Val Gin Trp Lys Phe Lys Ser Tyr Cys Gin Asp 50 55 60

Arg Met Gly Glu Ser Leu Gly Met Ser Ser Thr Arg Ala Gin Ser Leu 65 70 75 80

Ser Lys Arg Asn Leu Glu Trp Asp Pro Tyr Leu Asp Cys Leu Asp Ser 85 90 95

Arg Arg Thr Val Arg Val Val Ala Ser Lys Gin Gly Ser Thr Val Thr 100 105 110

Leu Gly Asp Phe Tyr Arg Gly Arg Glu lie Thr lie Val His Asp Ala 115 120 125

Asp Leu Gin lie Gly Lys Leu Met Trp Gly Asp Ser Gly Leu Tyr Tyr 130 135 140

Cys lie lie Thr Thr Pro Asp Asp Leu Glu Gly Lys Asn Glu Asp Ser 145 150 155 160

Val Glu Leu Leu Val Leu Gly Arg Thr Gly Leu Leu Ala Asp Leu Leu , 165 170 175

Pro Ser Phe Ala Val Glu lie Met Pro Glu Trp Val Phe Val Gly Leu 180 185 190

Val Leu Leu Gly Val Phe Leu Phe Phe Val Leu Val Gly He Cys Trp 195 200 205

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Val Ser Lys Gly Glu Glu Leu Phe Thr Gly Val Val Pro He Leu Val 275 280 285

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Tyr Asn Ser His Asn Val Tyr lie Met Ala Asp Lys Gin Lys Asn Gly 420 425 430 lie Lys Val Asn Phe Lys lie Arg His Asn lie Glu Asp Gly Ser Val 435 440 445

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Val Leu Leu Pro Asp Asn His Tyr Leu Ser Thr Gin Ser Ala Leu Ser 465 470 475 480

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<210> 92 <211> 694 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 92

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Arg Gly Gin Ala Leu Tyr Leu Pro Val His Tyr Gly Phe His Thr Pro 35 40 45

Ala Ser Asp lie Gin lie lie Trp Leu Phe Glu Arg Pro His Thr Met 50 55 60

Pro Lys Tyr Leu Leu Gly Ser Val Asn Lys Ser Val Val Pro Asp Leu 65 70 75 80

Glu Tyr Gin His Lys Phe Thr Met Met Pro Pro Asn Ala Ser Leu Leu 85 90 95

He Asn Pro Leu Gin Phe Pro Asp Glu Gly Asn Tyr He val Lys val 100 105 110

Asn lie Gin Gly Asn Gly Thr Leu Ser Ala Ser Gin Lys lie Gin Val 115 120 125

Thr Val Asp Asp Pro Val Thr Lys Pro Val Val Gin lie His Pro Pro 130 135 140

Ser Gly Ala Val Glu Tyr Val Gly Asn Met Thr Leu Thr Cys His Val 145 150 155 160

Glu Gly Gly Thr Arg Leu Ala Tyr Gin Trp Leu Lys Asn Gly Arg Pro 165 170 175

Val His Thr Ser Ser Thr Tyr Ser Phe Ser Pro Gin Asn Asn Thr Leu 180 185 190

His He Ala Pro Val Thr Lys Glu Asp lie Gly Asn Tyr Ser Cys Leu 195 200 205

Val Arg Asn Pro Val Ser Glu Met Glu Ser Asp lie lie Met Pro lie 210 215 220 lie Tyr Tyr Gly Pro Tyr Gly Leu Gin Val Asn Ser Asp Lys Gly Leu 225 230 235 240

Lys Val Gly Glu Val Phe Thr Val Asp Leu Gly Glu Ala lie Leu Phe 245 250 255

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Ala Tyr Asn Asn lie Thr Gly Arg Gin Asp Glu Thr H±s Phe Thr Vai 305 310 315 320 lie Ile Thr Ser Vai Gly Leu Glu Ly3 Leu Ala Gin Lys Gly Lys Ser 325 330 335

Leu Ser Pro Leu Ala Ser Ile Thr Gly Ile Ser Leu Phe Leu lie Ile 340 345 350

Ser Met Cys Leu Leu Phe Leu Trp Lys Lys Tyr Gin Pro Tyr Lys Vai 355 360 365 lie Lys Gin Lys Leu Glu Gly Arg Pro Glu Thr Glu Tyr Arg Lys Ala 370 375 380

Gin Thr Phe Ser Gly His Glu Asp Ala Leu Asp Asp Phe Gly Ile Tyr 385 390 395 400

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Asn Arg lie Glu Leu Lys Gly lie Asp Phe Lys Glu Asp Gly Asn lie 580 585 590

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Met Ala Asp Lys Gin Lys Asn Gly lie Lys Val Asn Phe Lys lie Arg 610 615 620

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<210> 93 <211> 790 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 93

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Leu Pro Ala Gly Cys Leu Ser Leu Leu Val Thr Val Gin His Thr Glu 20 25 30

Arg Tyr Val Thr Leu Phe Ala Ser He lie Leu Lys Cys Asp Tyr Thr 35 40 45

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Phe Cys Lys Asp Pro lie Phe Asp Tyr Tyr Ser Ala Ser Tyr Gin Ala 65 70 75 80

Ala Leu Ser Leu Gly Gin Asp Pro Ser Asn Asp Cys Asn Asp Asn Gin 85 90 95

Arg Glu Val Arg lie Val Ala Gin Arg Arg Gly Gin Asn Glu Pro Val 100 105 110

Leu Gly Val Asp Tyr Arg Gin Arg Lys lie Thr lie Gin Asn Arg Ala 115 120 125

Asp Leu Val lie Asn Glu Val Met Trp Trp Asp His Gly Val Tyr Tyr 130 135 140

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Val Lys Leu lie Val Leu His Trp Leu Thr Val lie Phe lie lie Leu 165 170 175

Gly Ala Leu Leu Leu Leu Leu Leu lie Gly Val Cys Trp Cys Gin Cys 180 185 190

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Leu Glu Lys Glu Leu Arg Asn Leu Asn Leu Ala Gin Pro Leu Pro Pro 290 295 300

Asp Leu Lys Gly Arg Phe Gly His Pro Cys Ser Met Leu Ser Ser Leu 305 310 315 320

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Arg Pro Ser Pro Arg Glu Ser Thr Gin Arg His Gly Arg Arg Arg Arg 450 455 460

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Vai lie Gly Pro Vai Ala Thr Met Vai Ser Lys Gly Glu Glu Leu Phe 545 550 555 560

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Asn Arg lie Glu Leu Lys Gly lie Asp Phe Lys Glu Asp Gly Asn Ile 675 680 685

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Met Ala Asp Lys Gin Lys Asn Gly Ile Lys Vai Asn Phe Lys Ile Arg 705 710 715 720

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His Met Vai Leu Leu Glu Phe Vai Thr Ala Ala Gly Ile Thr Leu Gly 770 775 780

Met Asp Glu Leu Tyr Lys 785 790

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Met Ala Trp Pro Lys Leu Pro Ala Pro Trp Leu Leu Leu Cys Thr Trp 15 10 15

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Arg Tyr Val Thr Leu Phe Ala Ser lie lie Leu Lys Cys Asp Tyr Thr 35 40 45

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Ala Leu Ser Leu Gly Gin Asp Pro Ser Asn Asp Cys Asn Asp Asn Gin 85 90 95

Arg Glu Val Arg lie Val Ala Gin Arg Arg Gly Gin Asn Glu Pro Val 100 105 110

Leu.Gly val asp Tyr Arg Gin Arg Lys lie Thr lie Gin Asn Arg Ala 115 120 125

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Val Lys Leu He Val Leu His Trp Leu Thr Val lie Phe lie lie Leu 165 170 175

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Leu Ser Ser Leu Gly Ser Glu Val Val Glu Arg Arg lie lie His Leu 275 2S0 285

Pro Pro Leu lie Arg Asp Leu Ser Ser Ser Arg Arg Thr Ser Asp Ser 290 295 300

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Arg Arg Arg Arg His Arg Ser Tyr Ser Pro Pro Leu Pro Ser Gly Leu 420 425 430 iSftr Ser Trp Ser Ser Giu Glu Asp Lys Glu Arg Sin Pro: Sin Ser Trp 435 440 445

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Lys Lys Sly Ser Val Glu Arg Arg Ser Glu Lys Asp Ser: Ser His Ser 4S5 490 495

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Met Glu Glu Lys Ala Val Ser Gin Cys Leu Lys Met Thr His Ala Arg 85 90 95

Asp Ala Arg Gly Arg Cys Ser Trp Thr Ser Glu Ser Pro Trp Glu Glu 100 - 105 110

Gly Lys Trp Pro Asp Val Glu Ala Val Lys Gly Thr Leu Asp Gly Gin 115 120 125

Gin Ala Glu Leu Gin He Tyr Phe Ser Gin Gly Gly Gin Ala Val Ala 130 135 140 lie Gly Gin Phe Lys Asp Arg He Thr Gly Ser Asn Asp Pro Gly Asn 145 150 155 160

Ala Ser lie Thr lie Ser His Met Gin Pro Ala Asp Ser Gly lie Tyr 165 170 175 lie Cys Asp Val Asn Asn Pro Pro Asp Phe Leu Gly Gin Asn Gin Gly 180 185 190 lie Leu Asn Val Ser Val Leu Val Lys Pro Ser Lys Pro Leu Cys Ser 195 200 205

Val Gin Gly Arg Pro Glu Thr Gly His Thr He Ser Leu Ser Cys Leu 210 215 220

Ser Ala Leu Gly Thr Pro Ser Pro Val Tyr Tyr Trp His Lys Leu Glu 225 230 235 240

Gly Arg Asp lie val Pro val Lys Glu Asn Phe Asn Pro Thr Thr Gly 245 250 255 lie Leu Val He Gly Asn Leu Thr Asn Phe Glu Gin Gly Tyr Tyr Gin 260 265 270

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Ser Leu Val Gly Ala Ala lie lie lie Ser Val Val Cys Phe Ala Arg 305 310 315 320

Asn Lys Ala Lys Ala Lys Ala Lys Glu Arg Asn Ser Lys Thr lie Ala 325 330 335

Glu Leu Glu Pro Met Thr Lys He Asn Pro Arg Gly Glu Ser Glu Ala 340 345 350

Met Pro Arg Glu Asp Ala Thr Gin Leu Glu Val Thr Leu Pro Ser Ser 355 360 365 lie His Glu Thr Gly Pro Asp Thr He Gin Glu Pro Asp Tyr Glu Pro 370 375 380

Lys Pro Thr Gin Glu Pro Ala Pro Glu Pro Ala Pro Gly Ser Glu Pro 385 390 395 400

Met Ala Val Pro Asp Leu Asp lie Glu Leu Glu Leu Glu Pro Glu Thr 405 410 415

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Leu Thr Leu Lys Phe lie Cys Thr Thr Gly Lys Leu Pro Val Pro Trp 500 505 510

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<210> 96 <211> 667 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 9 6

Met Val Phe Ala Phe Trp Lys Val Phe Leu lie Leu Ser Cys Leu Ala 1 5 10 15

Gly Gin Val Ser Val Val Gin Val Thr lie Pro Asp Gly Phe Val Asn 20 25 30

Val Thr Val Gly Ser Asn Val Thr Leu lie Cys lie Tyr Thr Thr Thr 35 40 45

Val Ala Ser Arg Glu Gin Leu Ser lie Gin Trp Ser Phe Phe His Lys 50 55 60

Lys Glu Met Glu Pro lie Ser His Ser Ser Cys Leu Ser Thr Glu Gly 65 70 75 80

Met Glu Glu Lys Ala Val Ser Gin Cys Leu Lys Met Thr His Ala Arg 85 90 95

Asp Ala Arg Gly Arg Cys Ser Trp Thr Ser Glu lie Tyr Phe Ser Gin 100 105 110

Gly Gly Gin Ala Val Ala He Gly Gin Phe Lys Asp Arg lie Thr Gly 115 120 125

Ser Asn Asp Pro Gly Asn Ala Ser lie Thr Ile Ser His Met Gin Pro 130 135 140

Ala Asp Ser Gly lie Tyr lie Cys Asp Vai Asn Asn Pro Pro Asp Phe 145 150 155 160

Leu Gly Gin Asn Gin Gly Ile Leu Asn Vai Ser Vai Leu Vai Lys Pro 165 Π0 175

Ser Lys Pro Leu Cys Ser Vai Gin Gly Arg Pro Glu Thr Gly Hls Thr 180 185 190

Ile Ser Leu Ser Cys Leu Ser Ala Leu Gly Thr Pro Ser Pro Vai Tyr 195 200 205

Tyr Trp His Lys Leu Glu Gly Arg Asp lie Vai Pro Vai Lys Glu Asn . 210 215 220

Phe Asn Pro Thr Thr Gly Tie Leu Vai Ile Gly Asn Leu Thr Asn Phe 225 230 235 240

Glu Gin Gly Tyr Tyr Gin Cys Thr Ala Ile Asn Arg Leu Gly Asn Ser 245 250 255

Ser Cys Glu Ile Asp Leu Thr Ser Ser His Pro Glu Vai Gly Ile Ile 260 265 270

Vai Gly Ala Leu Ile Gly Ser Leu Vai Gly Ala Ala Ile Ile Ile Ser 275 280 285

Vai Vai Cys Phe Ala Arg Asn Lys Ala Lys Ala Lys Ala Lys Glu Arg 290 295 300

Asn Ser Lys Thr lie Ala Glu Leu Glu Pro Met Thr Lys lie Asn Pro 305 310 315 320

Arg Gly Glu Ser Glu Ala Met Pro Arg Glu Asp Ala Thr Gin Leu Glu 325 330 335

Vai Thr Leu Pro Ser Ser lie His Glu Thr Gly Pro Asp Thr Ile Gin 340 345 350

Glu Pro Asp Tyr Glu Pro Lys Pro Thr Gin Glu Pro Ala Pro Glu Pro 355 360 365

Ala Pro Gly Ser Glu Pro Met Ala Vai Pro Asp Leu Asp lie Glu Leu 370 375 380

Glu leu Glu Pro Glu Thr Gin Ser Glu Leu Glu Pro Glu Pro Glu Pro 385 390 395 -300

Glu Pro Glu Ser Glu Pro Gly Vai Vai Vai Glu Pro Leu Ser Glu Asp 405 410 415

Glu Lys Gly Vai Vai Lys Ala Gly Pro Vai Ala Thr Met Vai Ser Lys 420 425 430

Gly Glu Glu Leu Phe Thr Gly Vai Vai Pro He Leu Vai Glu Leu Asp 435 440 445

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Asp Ala The Tyr Gly Lys Leu Thr Leu Lys Phe Ile Cys Thr Thr Gly 465 470 475 480

Lys Leu Pro Vai Pro Trp Pro Thr Leu vai Thr Thr Leu Thr Tyr Gly 485 490 495 val Gin Cys Phe Ser Arg Tyr Pro Asp His Met Lys Gin His Asp Phe 500 505 510

Phe Lys Ser Ala Met Pro Glu Gly Tyr val Gin Glu Arg Thr ile Phe 515 520 525

Phe Lys Asp Asp Gly Asn Tyr Lys Thr Arg Ala Glu Val Lys Phe Glu 530 535 540

Gly Asp Thr Leu Val Asn Arg lie Glu Leu Lys Gly Ile Asp Phe Lys 545 550 555 560

Glu Asp Gly Asn Ile Leu Gly His Lys Leu Glu Tyr Asn Tyr Asn Ser 565 570 575

His Asn Val Tyr lie Met Ala Asp Lys Gin Lys Asn Gly Ile Lys Val 580 585 590

Asn Phe Lys lie Arg His Asn lie Glu Asp Gly Ser Val Gin Leu Ala 595 600 605

Asp His Tyr Gin Gin Asn Thr Pro lie Gly Asp Gly Pro Val Leu Leu 610 615 620

Pro Asp Asn His Tyr Leu Ser Thr Gin Ser Ala Leu Ser Lys Asp Pro 625 630 635 640

Asn Glu Lys Arg Asp His Met Val Leu Leu Glu Phe Val Thr Ala Ala 645 650 655

Gly lie Thr Leu Gly Met Asp Glu Leu Tyr Lys 660 665

<210> 97 <211> 924 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 97 atgcagaagg tgaccctggg cctgcttgtg ttcctggcag gctttcctgt cctggacgcc 60

aatgacctag aagataaaaa cagtcctttc tactatggtg ctccatatat atttgtcaag 12Q agaatggggg gacagatgaa gaggacacag gctggcactg aggtcccctc cactttcctc 180 ctagactggg gatccgagaa cctgtacttt cagggcagcg gcgagcccag aggccccacc 240 atcaagccct gccccccctg caagtgccca gcccctaacc tgctgggcgg acccagcgtg 300 ttcatcttcc cccccaagat caaggacgtg ctgatgatca gcotgagccc catcgtgacc 360 tgcgtggtgg tggacgtgag cgaggacgac cccgacgtgc agatcagctg gttcgtgaac 420 aacgtggagg tgcacaccgc ccagacccag acccaccggg aggactacaa cagcaccctg 480 cgggtggtgt ccgccctgoc catccagcac caggactgga tgagcggcaa agaattcaag 540 tgcaaggtga acaacaagga cctgcctgcc cccatcgagc ggaccatcag caagcccaag 600 ggcagcgtga gagcccccca ggtgtacgtg ctgccccctc ccgaggaaga gatgaccaag 660 aaacaggtga ccctgacctg catggtgacc gacttcatgc ccgaggacat ctacgtggag 720 tggaccaaca acggcaagac cgagctgaac tacaagaaca ccgagcccgt gctggacagc 780 gacggcagct acttcatgta tagcaagctg agagtcgaga agaaaaactg ggtggagcgg 840 aacagctaca gctgcagcgt ggtgcacgag ggcctgcaca accaccacac caccaagagc 900 ttcagccgga cccccggcaa gtga 924 <210> 98

<211> 1170 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 98 atgaggcctc tgcccagcgg gaggaggaag acccgaggca tctccctagg actcttcgcc 60 ctctgcctgg ccgcagcccg ctgtctgcag agtcagggtg tgtccctata cattcctcag 120 gccaccatca atgccactgt caaagaagac atcctgctct cagttgagta ctcctgtcat 180 ggagtgccca ccatcgaatg gacatattca tccaattggg gaacgcagaa gatcgtggag 240 tggaaaccag ggactcaggc caacatctct caaagccaca aggacagagt ctgcaccttt 300 gacaacggct ccatccagct cttcagcgtg ggagtgaggg attccggcta ctatgtcatc 360 accgtgacgg agcgcctggg gagcagecag tttggcacca tcgtgctgca cgtctctgag 420 atcctctatg aagacggatc cgagaacctg tactttcagg gcagcggcga gcccagaggc 480 cccaccatca agccctgccc cccctgcaag tgcccagccc ctaacctgct gggcggaccc 540 agcgtgttca tcttcccccc caagatcaag gacgtgctga tgatcagcct gagccccatc .600 gtgacctgcg tggtggtgga cgtgagcgag gacgaccccg acgtgcagat cagctggttc 660 gtgaacaacg tggaggtgca caccgcccag acccagaccc accgggagga ctacaacagc 720 accctgcggg tggtgtccgc cctgcccatc cagcaccagg actggatgag cggcaaagaa 780 ttcaagtgca aggtgaacaa caaggacctg cctgccccca tcgagcggac catcagcaag 840 cccaagggca gcgtgagagc cccccaggtg tacgtgctgc cccctcccga ggaagagatg 900 accaagaaac aggtgaccct gacctgcatg gtgaccgact tcatgcccga ggacatctac 960 gtggagtgga ccaacaacgg caagaccgag ctgaactaca agaacaccga gcccgtgctg 1020 gacagcgacg gcagctactt catgtatagc aagctgagag tcgagaagaa aaactgggtg 1080 gagcggaaca gctacagctg cagcgtggtg cacgagggcc tgcacaacca ccacaccacc 1140 aagagcttca gccggacccc cggcaagtga 1170

<210> 99 <211> 1287 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 99 atggataggg tcttgctgag gtggatttct ctcttctggc taacagccat ggtcgaaggc 60 cttcaggtca cagtgcccga caagaagaag gtggccatgc tcttccagcc cactgtgctt 120 cgctgccact tctcaacatc ctcccatcag cctgcagttg tgcagtggaa gttcaagtcc 180 tactgccagg atcgcatggg agaatccttg ggcatgtcct ctacccgggc ccaatctctc 240 agcaagagaa acctggaatg ggacccctac ttggattgtt tggacagcag gaggactgtt 300 cgagtagtag cttcaaaaca gggctcgact gtcaccctgg gagatttcta caggggcaga 360 gagatcacga ttgttcatga tgcagatctt caaattggaa agcttatgtg gggagacagc 420 ggactctatt actgtattat caccacccca gatgacctgg aggggaaaaa tgaggactca 480 gtggaactgc tggtgttggg caggacaggg ctgcttgctg atctcttgcc cagttttgct 540 gtggagatta tgggatccga gaacctgtac tttcagggca gcggcgagcc cagaggcccc 600 accatcaagc cctgcccccc ctgcaagtgc ccagccccta acctgctggg cggacccagc 660 gtgttcatct teccccccaa gatcaaggac gtgctgatga tcagcctgag ccccatcgtg 720 acctgcgtgg tggtggacgt gagcgaggac gaccccgacg tgcagatcag ctggttcgtg 780 aacaacgtgg aggtgcacac cgcccagacc cagacccacc gggaggacta caacagcacc 840 ctgcgggtgg tgtccgccct gcccatccag caccaggact ggatgagcgg caaagaattc 900 aagtgcaagg tgaacaacaa ggacctgcct gcccccatcg agcggaccat cagcaagccc 960 aagggcagcg tgagagcccc ccaggtgtac gtgctgcccc ctcccgagga agagatgacc 1020 aagaaacagg tgaccctgac ctgcatggtg accgacttca tgcccgagga catctacgtg 1080 gagtggacca acaacggcaa gaccgagctg aactacaaga acaccgagcc cgtgctggac 1140 agcgacggca gctacttcat gtatagcaag ctgagagtcg agaagaaaaa ctgggtggag 1200 cggaacagct acagctgcag cgtggtgcac gagggcctgc acaaccacca caccaccaag 1260 agcttcagcc ggacccccgg caagtga 1287

<210> 100 <211> 1740 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 100 atgtggctca aggtcttcac aactttcctt tcctttgcaa caggtgcttg ctcggggctg 60 aaggtgacag tgccatcaca cactgtccat ggcgtcagag gtcaggccct ctacctaccc 120 gtccactatg gcttccacac tccagcatca gacatccaga tcatatggct atttgagaga 180 ccccacacaa tgcccaaata cttactgggc tctgtgaata agtctgtggt tcctgacttg 240 gaataccaac acaagttcac catgatgcca cccaatgcat ctctgcttat caacccactg 300 cagttccctg atgaaggcaa ttacatcgtg aaggtcaaca ttcagggaaa tggaactcta 360 tctgccagtc agaagataca agtcacggtt gatgatcctg tcacaaagcc agtggtgcag 420 attcatcctc cctctggggc tgtggagtat gtggggaaca tgaccctgac atgccatgtg 480 gaagggggca ctcggctagc ttaccaatgg ctaaaaaatg ggagacctgt ccacaccagc 540 tccacctact cottttctcc ccaaaacaat acccttcata ttgctccagt aaccaaggaa 600 gacattggga attacagctg cctggtgagg aaccctgtca gtgaaatgga aagtgatatc 660 attatgccca tcatatatta tggaccttat ggacttcaag tgaattctga taaagggcta 720 aaagtagggg aagtgtttac tgttgacctt ggagaggcca tcctatttga ttgttctgct 780 gattctcatc cccccaacac ctactcctgg attaggagga ctgacaatac tacatatatc 840 attaagcatg ggcctcgctt agaagttgca tctgagaaag tagcccagaa gacaatggac 900 tatgtgtgct gtgcttacaa caacataacc ggcaggcaag atgaaactca tttcacagtt 960 atcatcactt ccgtaggact ggagaagctt gcacagaaag gaaaaggatc cgagaacctg 1020 tactttcagg gcagcggcga gcccagaggc cccaccatca agccctgccc cccctgcaag 1080 tgcccagccc ctaacctgct gggcggaccc agcgtgttca tcttcccccc caagatcaag 1140 gacgtgctga tgatcagcct gagccccatc gtgacctgcg tggtggtgga cgtgagcgag 1200 gacgaccccg acgtgcagat cagctggttc gtgaacaacg tggaggtgca caccgcccag 1260 acccagaccc accgggagga ctacaacagc accctgcggg tggtgtccgc cctgcccatc 1320 cagcaccagg actggatgag cggcaaagaa ttcaagtgca aggtgaacaa caaggacctg 1380 cctgccccca tcgagcggac catcagcaag cccaagggca gcgtgagagc cccccaggtg 1440 tacgtgctgc cccctcccga ggaagagatg accaagaaac aggtgaccct gacctgcatg 1500 gtgaccgact tcatgcccga ggacatctac gtggagtgga ccaacaacgg caagaccgag 1560 ctgaactaca agaacaccga gcccgtgctg gacagcgacg gcagctactt catgtatagc 1620 aagctgagag tcgagaagaa aaactgggtg gagcggaaca gctacagctg cagcgtggtg 1680 cacgagggcc tgcacaacca ccacaccacc aagagcttca gccggacccc cggcaagtga 1740 <210> 101

<211> 1167 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 101 atgaacagct tcagcaccag cgccttcggc cccgtggcct tcagcctggg cctgctgctg 60 gtgctgcctg ccgccttccc tgcccccgtg ccccccttcg aagcccagct ccaggacgtg 120 gtggtgacat ggcgcttcaa gtccttctgc aaggacccta tctttgacta ctactcagcg 160 tcataccagg cagctttatc cctgggccag gacccatcca atgactgcaa cgacaaccag 240 cgggaagttc gcatagtggc ccagcggcgg gggcagaatg agcccgtgct gggggtagat 300 taccggcagc gcaagatcac catccagaac cgagcagatc tcgtgataaa tgaagtgatg 360 * tggtgggacc atggagtgta ttactgcacc attgaggctc caggggacac atcaggagac 420 cccgataagg aaggatccga gaacctgtac tttcagggca gcggcgagcc cagaggcccc 480 accatcaagc cctgcccccc ctgcaagtgc ccagccccta acctgctggg cggacccagc 540 gtgttcatct tcccccccaa gatcaaggac gtgctgatga tcagcctgag ccccatcgtg 600 acctgcgtgg tggtggacgt gagcgaggac gaccccgacg tgcagatcag ctggttcgtg 660 aacaacgtgg aggtgcacac cgcccagacc cagacccacc gggaggacta caacagcacc 720 ctgcgggtgg tgtccgccct gcccatccag caccaggact ggatgagcgg caaagaattc 780 aagtgcaagg tgaacaacaa ggacctgcct gcccccatcg agcggaccat cagcaagccc 840 aagggcagcg tgagagcccc ccaggtgtac gtgctgcccc ctcccgagga agagatgacc 900 aagaaacagg tgaccctgac ctgcatggtg accgacttca tgcccgagga catctacgtg 960 gagtggacca acaacggcaa gaccgagctg aactacaaga acaccgagcc cgtgctggac 1020 agcgacggca gctacttcat gtatagcaag ctgagagtcg agaagaaaaa ctgggtggag 1080 cggaacagct acagctgcag cgtggtgcac gagggcctgc acaaccacca caccaccaag 1140 agcttcagcc ggacccccgg caagtga 1167

<210> 102 <211> 1641 <212> ADN <213> Homo sapiens <40 0> 102 atgaacagct tcagcaccag cgccttcggc cccgtggcct tcagcctggg cctgctgctg 60 gtgctgcctg ccgccttccc tgcccccgtg ccccccttcg aaatcccaga cggtttcgtg 120 aacgtgactg ttggatctaa tgtcactctc atctgcatct acaccaccac tgtggcctcc 180 cgagaacagc tttccatcca gtggtctttc ttccataaga aggagatgga gccaatttct 240 cacagctcgt gcctcagtac tgagggtatg gaggaaaagg cagtcagtca gtgtctaaaa 300 atgacgcacg caagagacgc tcggggaaga tgtagctgga cctctgagtc tccttgggag 360 gaggggaagt ggccagatgt tgaggctgtg aagggcactc ttgatggaca gaaggctgaa 420 ctccagattt acttttctca aggtggacaa gctgtagcca tcgggcaatt taaagatcga 480 attacagggt ccaacgatcc aggtaatgca tctatcacta tctcgcatat gcagccagca 540 gacagtggaa tttacatctg cgatgttaac aaccccccag actttctcgg ccaaaaccaa 600 ggcatcctca acgtcagtgt gttagtgaaa ccttctaagc ccctttgtag cgttcaagga 660 agaccagaaa ctggccacac tatttccctt tcctgtctct ctgcgcttgg aacaccttcc 720 cctgtgtact actggcataa acttgaggga agagacatcg tgccagtgaa agaaaacttc 780 aacccaacca ccgggatttt ggtcattgga aatctgacaa attttgaaca aggttattac 840 cagtgtactg ccatcaacag acttggcaat agttcctgcg aaatcgatct cacttcttca 900 catccaggat ccgagaacct gtactttcag ggcagcggcg agcccagagg ccccaccatc 960 aagccctgcc ccccctgcaa gtgcccagcc cctaacctgc tgggcggacc cagcgtgttc 1020 atcttccccc ccaagatcaa ggacgtgctg atgatcagcc tgagccccat cgtgacctgc 1080 gtggtggtgg acgtgagcga ggacgacccc gacgtgcaga tcagctggtt cgtgaacaac 1140 gtggaggtgc acaccgccca gacccagacc caccgggagg actacaacag caccctgcgg 1200 gtggtgtccg ccctgcccat ccagcaccag gactggatga gcggcaaaga attcaagtgc 1260 aaggtgaaca acaaggacct gcctgccccc atcgagcgga ccatcagcaa gcccaagggc 1320 agcgtgagag ccccccaggt gtacgtgctg ccccctcccg aggaagagat gaccaagaaa 1380 caggtgaccc tgacctgcat ggtgaccgac ttcatgcccg aggacatcta cgtggagtgg 1440 accaacaacg gcaagaccga gctgaactac aagaacaccg agcccgtgct ggacagcgac 1500 ggcagctact tcatgtatag caagctgaga gtcgagaaga aaaactgggt ggagcggaac 1560 agctacagct gcagcgtggt gcacgagggc ctgcacaacc accacaccac caagagcttc 1620 agccggaccc ccggcaagtg a 1641 <210> 103

<211> 307 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 103

Met Gin Lys Val Thr Leu Gly Leu Leu Val Phe Leu Ala Gly Phe Pro 15 10 15

Val Leu Asp Ala Asn Asp Leu Glu Asp Lys Asn Ser Pro Phe Tyr Tyr 20 25 30

Gly Ala Pro Tyr lie Phe Val Lys Arg Met Gly Gly Gin Met Lys Arg 35 40 45

Thr Gin Ala Gly Thr Glu Val Pro Ser Thr Phe Leu Leu Asp Trp Gly 50 55 60

Ser Glu Asn Leu Tyr Phe Gin Gly Ser Gly Glu Pro Arg Gly Pro Thr 65 70 75 80

He Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly 85 90 95

Gly Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Lys lie Lys Asp Val Leu Met 100 105 110

He Ser Leu Ser Pro lie val Thr Cys val val val Asp val Ser Glu 115 120 125

Asp Asp Pro Asp Val Gin lie Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val 130 135 140

His Thr Ala Gin Thr Gin Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu 145 150 155 160

Arg Val Val Ser Ala Leu Pro He Gin His Gin Asp Trp Met Ser Gly 165 170 175

Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro He 180 185 190

Glu Arg Thr lie Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gin Val 195 200 205

Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gin Val Thr 210 215 220

Leu Thr Cys Met Val Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp He Tyr Val Glu 225 230 235 240

Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro 245 250 255

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val 260 265 270

Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val 275 280 285

His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr 290 295 300

Pro Gly Lys 305 <210> 104 <211> 389

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 104

Met Arg Pro Leu Pro Ser Gly Arg Arg Lys Thr Arg Gly lie Ser Leu 15 10 15

Gly Leu Phe Ala Leu Cys Leu Ala Ala Ala Arg Cys Leu Gin Ser Gin 20 25 30

Gly Val Ser Leu Tyr lie Pro Gin Ala Thr He Asn Ala Thr Val Lys 35 40 45

Glu Asp lie Leu Leu Ser Val Glu Tyr Ser Cys His Gly Val Pro Thr 50 55 60 lie Glu Trp Thr Tyr Ser Ser Asn Trp Gly Thr Gin Lys He Val Glu 65 70 75 80

Trp Lys Pro Gly Thr Gin Ala Asn He Ser Gin Ser His- Lys Asp Arg 85 90 95

Val Cys Thr Phe Asp Asn Gly Ser lie Gin Leu Phe Ser Val Gly Val 100 105 110

Arg Asp Ser Gly Tyr Tyr Val He Thr Val Thr Glu Arg Leu Gly Ser 115 120 125

Ser Gin Phe Gly Thr He Val Leu His Val Ser Glu lie Leu Tyr Glu 130 135 140

Asp Gly Ser Glu Asn Leu Tyr Phe Gin Gly Ser Gly Glu Pro Arg Gly 145 150 155 160

Pro Thr He Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lye Cys Pro Ala Pro Asn Leu 165 170 175

Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Lys lie Lys Asp Val 180 185 190

Leu Met He Ser Leu Ser Pro lie Val Thr Cys Val Val Val Asp Val ' 195 200 205

Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gin lie Ser Trp Phe val Asn Asn val 210 215 220

Glu Val His Thr Ala Gin Thr Gin Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser 225 230 235 240

Thr Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro lie Gin His Gin Asp Trp Met 245 250 255

Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lya Asp Leu Pro Ala 260 265 270

Pro lie Glu Arg Thr lie Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro 275 280 285

Gin Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gin 290 295 300

Val Thr Leu Thr Cys Met Val Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp lie Tyr 305 310 315 320

Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr 325 330 335

Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu 340 345 350

Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser 355 360 365

Val Val His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser 370 375 380

Arg Thr Pro Gly Lys 385

<210> 105 <211> 428 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 105

Met Asp Arg Val Leu Leu Arg Trp lie Ser Leu Phe Trp Leu Thr Ala 15 10 15

Met Val Glu Gly Leu Gin Val Thr Val Pro Asp Lys Lys Lys Val Ala 20 25 30

Met Leu Phe Gin Pro Thr Val Leu Arg Cys His Phe Ser Thr Ser Ser 35 40 45

His Gin Pro Ala Val Val Gin Trp Lys Phe Lys Ser Tyr Cys Gin Asp 50 55 60

Arg Met Gly Glu Ser Leu Gly Met Ser Ser Thr Arg Ala Gin Ser Leu 65 70 75 80

Ser Lyg Arg Asn Leu Glu Trp Asp Pro Tyr Leu Asp Cys Leu Asp Ser 85 90 95

Arg Arg Thr Val Arg Val Val Ala Ser Lys Gin Gly Ser Thr Val Thr 100 105 110

Leu Gly Asp Phe Tyr Arg Gly Arg Glu lie Thr lie Val His Asp Ala 115 120 125

Asp Leu Gin He Gly Lys Leu Met Trp Gly Asp Ser Gly Leu Tyr Tyr 130 135 140

Cys lie lie Thr Thr Pro Asp Asp Leu Glu Gly Lys Asn Glu Asp Ser 145 150 155 160

Val Glu Leu Leu Val Leu Gly Arg Thr Gly Leu Leu Ala Asp Leu Leu 165 170 175

Pro Ser Phe Ala val Glu lie Met Gly Ser Glu Asn Leu Tyr Phe Gin 180 185 190

Gly Ser Gly Glu Pro Arg Gly Pro Thr lie Lys Pro Cys Pro Pro Cys 195 200 205

Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe lie Phe 210 215 220

Pro Pro Lys He Lys Asp Val Leu Met lie Ser Leu Ser Pro lie Val

225 230 235 24C

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gin lie 245 250 255

Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gin Thr Gin Thr 260 265 270

His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro 275 280 285 lie Gin His Gin Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val 290 295 300

Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro lie Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro 305 310 315 320

Lys Gly Ser Vai Arg Ala Pro Gin Vai Tyr Vai Leu Pro Pro Pro Glu 325 330 335

Glu Glu Met Thr Lys Lys Gin Vai Thr Leu Thr Cys Met Vai Thr Asp 340 345 350

Phe Met Pro Glu Asp lie Tyr Vai Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr 355 360 365

Glu Leú Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Vai Leu Asp Ser Asp Gly Ser 370 375 380

Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg Vai Glu Lys Lys Asn Trp Vai Glu 385 390 395 400

Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Vai Vai His Glu Gly Leu His Asn His 405 410 415

His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys 420 425

<210> 106 <211> 579 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 106

Met Trp Leu Lys Val Phe Thr Thr Phe Leu Ser Phe Ala Thr Gly Ala 15 10 15

Cys Ser Gly Leu Lys Val Thr Val Pro Ser His Thr Val His Gly Val 20 25 30

Arg Gly Gin Ala Leu Tyr Leu Pro Val His Tyr Gly Phe His Thr Pro 35 40 45

Ala Ser Asp lie Gin lie lie Trp Leu Phe Glu Arg Pro His Thr Met 50 55 60

Pro Lys Tyr Leu Leu Gly Ser Val Asn Lys Ser Val Val Pro Asp Leu 65 70 75 80

Glu Tyr Gin His Lys Phe Thr Met Met Pro Pro Asn Ala Ser Leu Leu 85 90 95 lie Asn Pro Leu Gin Phe Pro Asp Glu Giy Asn Tyr He val Lys val 100 105 110

Asn He Gin Gly Asn Gly Thr Leu Ser Ala Ser Gin Lys lie Gin Val 115 120 125

Thr Val Asp Asp Pro Val Thr Lys Pro Val Val Gin lie His Pro Pro 130 135 140

Ser Gly Ala Val Glu Tyr Val Gly Asn Met Thr Leu Thr Cys His Val 145 150 155 160

Glu Gly Gly Thr Arg Leu Ala Tyr Gin Trp Leu Lys Asn Gly Arg Pro 165 170 175

Val His Thr Ser Ser Thr Tyr Ser Phe Ser Pro Gin Asn Asn Thr Leu 180 185 190

His lie Ala Pro Val Thr Lys Glu Asp lie Gly Asn Tyr Ser Cys Leu 195 200 205

Val Arg Asn Pro Val Ser Glu Met Glu Ser Asp lie lie Met Pro He 210 215 220 lie Tyr Tyr Gly Pro Tyr Gly Leu Gin Val Asn Ser Asp Lys Gly Leu 225 230 235 240

Lys val Gly Glu val Phe Thr val Asp Leu Gly Glu Ala He Leu Phe 245 250 255

Asp Cys Ser Ala Asp Ser His Pro Pro Asn Thr Tyr Ser Trp He Arg 260 265 270

Arg Thr Asp Asn Thr Thr Tyr He He Lys His Gly Pro Arg Leu Glu 275 280 285

Val Ala Ser Glu Lys Val Ala Gin Lys Thr Met Asp Tyr Val Cys Cys 290 295 300

Ala Tyr Asn Asn He Thr Gly Arg Gin Asp Glu Thr His Phe Thr Val 305 310 315 320

He lie Ihr Ser Val Gly Leu Glu Lys Leu Ala Gin Lys Gly Lys Gly 325 330 335

Ser Glu Asa Leu Tyr Phe Gin Gly Ser Gly Glu Pro Arg Gly Pro Thr 340 345 350 lie Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly 355 360 365

Gly Pro Ser Val Phe He Phe Pro Pro Lys He Lys Asp Val Leu Met 370 375 380 lie Ser Leu Ser Pro lie Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu 385 390 395 400

Asp Asp Pro Asp Val Gin He Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val 405 410 415

His Thr Ala Gin Thr Gin Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu 420 425 430

Arg Val Val Ser Ala Leu Pro He Gin His Gin Asp Trp Met Ser Gly 435 440 445

Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro lie 450 455 460

Glu Arg Thr He Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gin val 465 470 475 480

Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gin Val Thr 485 490 495

Leu Thr Cys Met Val Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp lie Tyr Val Glu 500 505 510

Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro 515 520 525

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg val 530 535 540

Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val 545 550 555 560

His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr 565 570 575

Pro Gly Lys

<210> 107 <211> 388 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 107

Met Asn Ser Phe Ser Thr Ser Ala Phe Gly Pro Val Ala Phe Ser Leu 15 10 15

Gly Leu Leu Leu Val Leu Pro Ala Ala Phe Pro Ala Pro Val Pro Pro 20 25 30

Phe Glu Ala Gin Leu Gin Asp Val Val Val Thr Trp Arg Phe Lys Ser 35 40 45

Phe Cys Lys Asp Pro lie Phe Asp Tyr Tyr Ser Ala Ser Tyr Gin Ala 50 55 60

Ala Leu Ser Leu Gly Gin Asp Pro Ser Asn Asp Cys Asn Asp Asn Gin 65 70 75 80

Arg Glu Val Arg lie Val Ala Gin Arg Arg Gly Gin Asn Glu Pro Val 85 90 95

Leu Gly Val Asp Tyr Arg Gin Arg Lys lie Thr I'le Gin Asn Arg Ala 100 105 110

Asp Leu Val He Asn Glu Val Met Trp Trp Asp His Gly Val Tyr Tyr 115 120 125

Cys Thr lie Glu Ala Pro Gly Asp Thr Ser Gly Asp Pro Asp Lys Glu 130 135 140

Gly Ser Glu Asn Leu Tyr Phe Gin Gly Ser Gly Glu Pro Arg Gly Pro 145 150 155 160

Thr He Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Leu 165 . 170 175

Gly Gly Pro Ser Val Phe He Phe Pro Pro Lys He Lys Asp Val Leu 180 185 190

Met lie Ser Leu Ser Pro lie Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 195 200 205

Glu Asp Asp Pro Asp Val Gin lie Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu 210 215 220

Val His Thr Ala Gin Thr Gin Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr 225 230 235 240

Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro lie Gin His Gin Asp Trp Met Ser 245 250 255

Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro 260 265 270 lie Glu Arg Thr lie Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gin 275 280 285

Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gin Val 290 295 300

Thr Leu Thr Cys Met val Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp lie Tyr val 305 310 315 320

Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu 325 330 335

Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg 340 345 350

Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val 355 360 365

Val His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg 370 375 380

Thr Pro Gly Lys 385 <210> 108 <211> 546

<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 108

Met Asn Ser Phe Ser Thr Ser Ala Phe Gly Pro Val Ala Phe Ser Leu 15 10 15

Gly Leu Leu Leu Val Leu Pro Ala Ala Phe Pro Ala Pro Val Pro Pro 20 25 30

Phe Glu He Pro Asp Gly Phe Val Asn Val Thr Val Gly Ser Asn Val 35 40 45

Thr Leu lie Cys lie Tyr Thr Thr Thr Val Ala Ser Arg Glu Gin Leu 50 55 60

Ser He Gin Trp Ser Phe Phe His Ly3 Lys Glu Met Glu Pro lie Ser 65 70 75 80

His Ser Ser Cys Leu Ser Thr Glu Gly Met Glu Glu Lys Ala Val Ser 85 90 95

Gin Cys Leu Lys Met Thr His Ala Arg Asp Ala Arg Gly Arg Cys Ser 100 105 110

Trp Thr Ser Glu Ser Pro Trp Glu Glu Gly Lys Trp Pro Asp Val Glu 115 120 125

Ala Val Lys Gly Thr Leu Asp Gly Gin Gin Ala Glu Leu Gin lie Tyr 130 135 140

Phe Ser Gin Gly Gly Gin Ala Val Ala lie Gly Gin Phe Lys Asp Arg 145 150 155 160 lie Thr Gly Ser Asn Asp Pro Gly Asn Ala Ser He Thr He Ser His 165 170 175

Met Gin Pro Ala Asp Ser Gly lie Tyr He Cys Asp Val Asn Asn Pro 180 185 190

Pro Asp Phe Leu Gly Gin Asn Gin Gly lie Leu Asn Val Ser Val Leu 195 200 205

Val Lys Pro Ser Lys Pro Leu Cys Ser Val Gin Gly Arg Pro Glu Thr 210 215 220

Gly His Thr He Ser Leu Ser Cys Leu Ser Ala Leu Gly Thr Pro Ser 225 230 235 240

Pro Val Tyr Tyr Trp His Lys Leu Glu Gly Arg Asp lie Val Pro Val 245 250 255

Lys Glu Asn Phe A3n Pro Ihr Thr Gly lie Leu Val lie Gly Asn Leu 260 265 270

Thr Asn Phe Glu Gin Gly Tyr Tyr Gin Cys Thr Ala lie Asn Arg Leu 275 280 285

Gly Asn Ser Ser Cys Glu He Asp Leu Thr Ser Ser His Pro Gly Ser 290 295 300

Glu Asn Leu Tyr Phe Gin Gly Ser Gly Glu Pro Arg Gly Pro Thr lie 305 310 315 320

Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly 325 330 335

Pro Ser val Phe He Phe Pro Pro Lys He Lys Asp val Leu Met He 340 345 350

Ser Leu Ser Pro lie Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Aap 355 360 365

Asp Pro Asp Val Gin He Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val Hi3 370 375 380

Thr Ala Gin Thr Gin Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg 385 390 395 400

Val Val Ser Ala Leu Pro lie Gin His Gin Asp Trp Met Ser Gly Lys 405 410 415

Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro lie Glu 420 425 430

Arg Thr He Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gin Val Tyr 435 440 445

Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gin Val Thr Leu 450 455 460

Thr Cys Met Val Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp He Tyr Val Glu Trp 465 470 475 480

Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val 485 490 495

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu 500 505 510

Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His 515 520 525

Glu Gly Leu His Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro 530 535 540

Gly Lys 545

<210> 109 <211> 684 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 109

Met Ala Arg His Arg Asn Val Arg Gly Tyr Asn Tyr Asp Glu Asp Phe 15 10 15

Glu Asp Asp Asp Leu Tyr Gly Gin Ser Val Glu Asp Asp Tyr Cys lie 20 25 30

Ser Pro Ser Thr Ala Ala Gin Phe lie Tyr Ser Arg Arg Asp Lys Pro 35 40 45

Ser Val Glu Pro Val Glu Glu Tyr Asp Tyr Glu Asp Leu Lys Glu Ser 50 55 60

Ser Asn Ser Val Ser Asn His Gin Leu Ser Gly Phe Asp Gin Ala Arg 65 70 75 80

Leu Tyr Ser Cys Leu Asp His Met Arg Glu Val Leu Gly Asp Ala Val 85 90 95

Pro Asp Glu lie Leu He Glu Ala Val Leu Lys Asn Lys Phe Asp Val 100 105 110

Gin Lys Ala Leu Ser Gly Val Leu Glu Gin Asp Arg Val Gin Ser Leu 115 120 125

Lys Asp Lys Asn Glu Ala Thr Val Ser Thr Gly Lys lie Ala Lys Gly 130 135 140

Lys Pro Val Asp Ser Gin Thr Ser Arg Ser Glu Ser Glu lie Val Pro 145 150 155 160

Lys Val Ala Lys Met Thr Val Ser Gly Lys Lys Gin Thr Met Gly Phe 165 170 175

Glu Val Pro Gly Val Ser Ser Glu Glu Asn Gly His Ser Phe His Thr 180 185 190

Pro Gin Lys Gly Pro Pro lie Glu Asp Ala lie Ala Ser Ser Asp Val 195 200 205

Leu Glu Thr Ala Ser Lys Ser Ala Asn Pro Pro His Thr lie Gin Ala 210 215 220

Ser Glu Glu Gin Ser Ser Thr Pro Ala Pro Val Lys Lys Ser Gly Lys 225 230 235 240

Leu Arg Gin Gin lie Asp Val. Lys Ala Glu Leu Glu Lys Arg Gin Gly 245 250 255

Gly Lys Gin Leu Leu Asn Leu Val Val lie Gly His Val Asp Ala Gly 260 , 265 270

Lys Ser Thr Leu Met Gly His Met Leu Tyr Leu Leu Gly Asn He Asn 275 280 285

Lys Arg Thr Met His Lys Tyr Glu Gin Glu Ser Lys Lys Ala Gly Lys 290 295 300

Ala Ser Phe Ala Tyr Ala Trp Val Leu Asp Glu Thr Gly Glu Glu Arg 305 310 315 320

Glu Arg Gly Val Thr Met Asp Val Gly Met Thr Lys Phe Glu Thr Thr 325 330 335

Thr Lys val lie Thr Leu Met Asp Ala Pro Gly His Lys Asp Phe He 340 345 350

Pro Asn Met He Thr Gly Ala Ala Gin Ala Asp Val Ala Val Leu Val 355 360 365

Val Asp Ala Ser Arg Gly Glu Phe Glu Ala Gly Phe Glu Thr Gly Gly 370 375 380

Gin Thr Arg Glu His Gly Leu Leu Val Arg Ser Leu Gly Val Thr Gin 385 390 395 400

Leu Ala Val Ala Val Asn Lys Met Asp Gin Val Asn Xrp Gin Gin Glu 405 410 415

Arg Phe Gin Glu He Thr Gly Lys Leu Gly His Phe Leu Lys Gin Ala 420 425 430

Gly Phe Lys Glu Ser Asp Val Gly Phe lie Pro Thr Ser Gly Leu Ser 435 440 445

Gly Glu Asn Leu He Thr Arg Ser Gin Ser Ser Glu Leu Thr Lys Trp 450 455 460

Tyr Lys Gly Leu Cys Leu Leu Glu Gin He Asp Ser Phe Lys Pro Pro 465 470 475 480

Gin Arg Ser lie Asp Lys Pro Phe Arg Leu Cys Val Ser Asp Val Phe 485 490 495

Lys Asp Gin Gly Ser Gly Phe Cys He Thr Gly Lys He Glu Ala Gly 500 505 510

Tyr lie Gin Thr Gly Asp Arg Leu Leu Ala Met Pro Pro Asn Glu Thr 515 520 525

Cys Thr Val Lys Gly lie Thr Leu His Asp Glu Pro val Asp Trp Ala 530 535 540

Ala Ala Gly Asp His Val Ser Leu Thr Leu Val Gly Met Asp He He 545 550 555 560

Lys He Asn Val Gly Cys lie Phe Cys Gly Pro Lys Val Pro He Lys 565 570 575

Ala Cys Thr Arg Phe Arg Ala Arg He Leu lie Phe Asn He Glu lie 580 585 590

Pro lie Thr Lys Gly Phe Pro Val Leu Leu His Tyr Gin Thr Val Ser 595 600 605

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Ala Leu Val Glu Leu Gin Thr Gin Arg Pro lie Ala Leu Glu Leu Tyr 645 650 655

Lys Asp Phe Lys Glu Leu Gly Arg Phe Met Leu Arg Tyr Gly Gly Ser 660 665 670

Thr He Ala Ala Gly Val Val Thr Glu lie Lys Glu 675 680

<210> 110 <211> 664 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 110

Met Ser Gly Val Arg Gly Leu Ser Arg Leu Leu Ser Ala Arg Arg Leu 15 10 15

Ala Leu Ala Lys Ala Trp Pro Thr,Val Leu Gin Thr Gly Thr Arg Gly 20 25 30

Phe His Phe Thr Val Asp Gly Asn Lys Arg Ala Ser Ala Lys Val Ser 35 40 45

Asp Ser lie Ser Ala Gin Tyr Pro Val Val Asp His Glu Phe Asp Ala 50 55 60

Val Val Val Gly Ala Gly Gly Ala Gly Leu Arg Ala Ala Phe Gly Leu 65 70 75 80

Ser Glu Ala Gly Phe Asn Thr Ala Cys Val Thr Lys Leu Phe Pro Thr- 85 90 95

Arg Ser His Thr Val Ala Ala Gin Gly Gly lie Asn Ala Ala Leu Gly 100 105 110

Asn Met Glu Glu Asp Asn Trp Arg Trp His Phe Tyr Asp Thr Val Lys 115 120 125

Gly Ser Asp Trp Leu Gly Asp Gin Asp Ala lie His Tyr Met Thr Glu 130 135 140

Gin Ala Pro Ala Ala Val Val Glu Leu Glu Asn Tyr Gly Met Pro Phe 145 150 155 160

Sex Arg Thr Glu Αβρ Gly lys lie Tyr Gin Arg Ala Phe Gly Gly Gin 165 170 175

Sex Leu Lys Phe Gly Lye Gly Gly Gin Ala His Arg Cys Cys Cys Val 180 185 190

Ala Asp Arg Thr Gly His Ser Leu Leu His Thr Leu Tyr Gly Arg Ser 195 200 205

Leu Arg Tyr Asp Thr Ser Tyr Phe Val Glu Tyr Phe Ala Leu Asp Leu 210 215 220

Leu Met Glu Asn Gly Glu Cys Arg Gly Val lie Ala Leu Cys lie Glu 225 230 235 240

Asp Gly Ser lie His Arg lie Arg Ala Lys Asn Thr Val Val Ala Thr 245 250 255

Gly Gly Tyr Gly Arg Thr Tyr Phe Ser Cys Thr Ser Ala His Thr Ser 260 265 270

Thr Gly Asp Gly Thr Ala Met lie Thr Arg Ala Gly Leu Pro Cys Gin 275 280 285

Asp Leu Glu Phe Val Gin Phe His Pro Thr Gly lie Tyr Gly Ala Gly 290 295 300

Cys Leu lie Thr Glu Gly Cys Arg Gly Glu Gly Gly lie Leu lie Asn 305 310 315 320

Ser Gin Gly Glu Arg Phe Met Glu Arg Tyr Ala Pro Val Ala Lys Asp 325 330 335

Leu Ala Ser Arg Asp Val Val Ser Arg Ser Met Thr Leu Glu lie Arg 340 345 350

Glu Gly Arg Gly Cys Gly Pro Glu Lys Asp His Val Tyr Leu Gin Leu 355 360 365

His His Leu Pro Pro Glu Gin Leu Ala Thr Arg Leu Pro Gly lie Ser 370 375 380

Glu Thr Ala Met lie Phe Ala Gly Val Asp Val Thr Lys Glu Pro lie 385 390 395 400

Pro Val Leu Pro Thr Val His Tyr Asn Met Gly Gly lie Pro Thr Asn 405 410 415

Tyr Lys Gly Gin Val Leu Arg His Val Asn Gly Gin Asp Gin lie Val 420 425 430

Pro Gly Leu Tyr Ala Cys Gly Glu Ala Ala Cys Ala Ser Val His Gly 435 440 445

Ala Asn Arg Leu Gly Ala Asn Ser Leu Leu Asp Leu Val Val Phe Gly 450 455 460

Arg Ala Cys Ala Leu Ser lie Glu Glu Ser Cys Arg Pro Gly Asp Lys 465 470 475 480

Val Pro Pro lie Lys Pro Asn Ala Gly Glu Glu Ser Val Met Asn Leu 485 490 495

Asp Lys Leu Arg Phe Ala Asp Gly Ser lie Arg Thr Ser Glu Leu Arg 500 505 510

Leu Ser Met Gin Lys Ser Met Gin Asn His Ala Ala Val Phe Arg Val 515 520 525

Gly Ser Val Leu Gin Glu Gly Cys Gly Lys lie Ser Lys Leu Tyr Gly 530 535 540

Asp Leu Lys His Leu Lys Thr Phe Asp Arg Gly Met Val Trp Asn Thr 545 550 555 560

Asp Leu Val Glu Thr Leu Glu Leu Gin Asn Leu Met Leu Cys Ala Leu 565 570 575

Gin Thr He Tyr Gly Ala Glu Ala Arg Lys Glu Ser Arg Gly Ala His 580 585 590

Ala Arg Glu Asp Tyr Lys Val Arg lie Asp Glu Tyr Asp Tyr Ser Lys 595 600 605

Pro lie Gin Gly Gin Gin Lys Lys Pro Phe Glu Glu His Trp Arg Lys 610 615 620

His Thr Leu Ser Tyr Val Asp Val Gly Thr Gly Lys Val Thr Leu Glu 625 630 635 640

Tyr Arg Pro Val lie Asp Lys Thr Leu-Asn Glu Ala Asp Cys Ala Thr 645 650 655

Val Pro Pro Ala lie Arg Ser Tyr 660

<210> 111 <211> 494 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 111

Met Pro Arg Val Tyr lie Gly Arg Leu Ser Tyr Gin Ala Arg Glu Arg 15 10 15

Asp Val Glu Arg Phe Phe Lys Gly Tyr Gly Lys lie Leu Glu Val Asp 20 25 30

Leu Lys Asn Gly Tyr Gly Phe Val Glu Phe Asp Asp Leu Arg Asp Ala 35 40 45

Asp Asp Ala Val Tyr Glu Leu Asn Gly Lys Asp Leu Cys Gly Glu Arg 50 55 60

Val lie Val. Glu His Ala Arg Gly Pro Arg Arg Asp Gly Ser Tyr Gly 65 "70 75 80

Ser Gly Arg Ser Gly Tyr Gly Tyr Arg Arg Ser Gly Arg Asp Lys Tyr 85 90 95

Gly Pro Pro Thr Arg Thr Glu Tyr Arg Leu lie Val Glu Asn Leu Ser 100 105 110

Ser Arg Cys Ser Trp Gin Asp Leu Lys Asp Tyr Met Arg Gin Ala Gly 115 120 125

Glu Val Thr Tyr Ala Asp Ala His Lys Gly Arg Lys Asn Glu Gly Val 130 135 140 lie Glu Phe Val Ser Tyr Ser Asp Met Lys Arg Ala Leu Glu Lys Leu 145 150 155 160

Asp Gly Thr Glu Val Asn Gly Arg Lys lie Arg Leu Val Glu Asp Lys 165 170 175

Pro Gly Ser Arg Arg Arg Arg Ser Tyr Ser Arg Ser Axg Ser His Ser 180 185 190

Arg Ser Arg Ser Arg Ser Arg His Ser Arg Lys Ser Arg Ser Arg Ser 195 200 205

Gly Ser Ser Lys Ser Ser His Ser Lys Ser Arg Ser Arg Ser Arg Ser 210 215 220

Gly Ser Axg Ser Arg Ser Lys Ser Arg Ser Arg Ser Gin Ser Arg Ser 225 230 235 240

Arg Ser Lys Lys Glu Lys Ser Arg Ser Pro Ser Lys Gin Lys Ser Arg 245 250 255

Ser Arg Ser His Ser Ala Gly Lys Ser Arg Ser Lys Ser Lys Asp Gin 260 265 270

Ala Glu Glu Lys lie Gin Asn Asn Asp Asn Val Gly Lys Pro Lys Ser 275 280 285

Arg Ser Pro Ser Arg His Lys Ser Lys Ser Lys Ser Arg Ser Arg Ser 290 295 300

Gin Glu Arg Arg Val Glu Glu Glu Lys Arg Gly Ser val Ser Arg Gly 305 310 315 320

Arg Ser Gin Glu Lys Ser Leu Arg Gin Ser Arg Ser Arg Ser Arg Ser 325 330 335 lys Gly Gly Ser Arg Ser Arg Ser Arg Ser Arg Ser Lys Ser Lys Asp 340 345 350

Lys Arg Lys Gly Arg Lys Arg Ser Arg Glu Glu Ser Arg Ser Arg Ser 355 360 365

Arg Ser Arg Ser Lye Ser Glu Arg Ser Arg Lys Arg Gly Ser Lys Arg 370 375 380 A3p Ser Lys Ala Gly Ser Ser Lys Lys Lys Lys Lys Glu Asp Thr Asp 385 390 395 400

Arg Ser Gin Ser Arg Ser Pro Ser Arg Ser Val Ser Lys Glu Arg Glu 405 410 415

His Ala Lys Ser Glu Ser Ser Gin Arg Glu Gly Arg Gly Glu Ser Glu 420 425 430

Asn Ala Gly Thr Asn Gin Glu Thr Arg Ser Arg Ser Arg Ser Asn Ser 435 440 445

Lys Ser Lys Pro Asn Leu Pro Ser Glu Ser Arg Ser Arg Ser Lys Ser 450 455 460

Ala Ser Lys Thr Arg Ser Arg Ser Lys Ser Arg Ser Arg Ser Ala Ser 465 470 475 480

Arg Ser Pro Ser Arg Ser Arg Ser Arg Ser His Ser Arg Ser 485 490

<210> 112 <211> 376 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 112

Thr Phe Pro Arg Glu Trp Leu Cys Asp Arg His Leu Arg Glu Lys Met 15 10 15

Phe Ser Ser Val Ala His Leu Ala Arg Ala Asn Pro Phe Asn Thr Pro 20 25 30

His Leu Gin Leu Val His Asp Gly Leu Gly Asp Leu Arg Ser Ser Ser 35 40 45

Pro Gly Pro Thr Gly Gin Pro Arg Arg Pro Arg Asn Leu Ala Ala Ala 50 55 60

Ala Val Glu Glu Tyr Ser Cys Glu Phe Gly Ser Ala Lys Tyr Tyr Ala 65 70 75 80

Leu Cys Gly Phe Gly Gly Val Leu Ser Cys Gly Leu Thr His Thr Ala 85 90 95

Val Val Pro Leu Asp Leu Val Lys Cys Arg Met Gin Val Asp Pro Gin 100 105 110

Lys Tyr Lys Gly lie Phe Asn Gly Phe Ser Val Thr Leu Lys Glu Asp 115 120 125

Gly Val Arg Gly Leu Ala Lys Gly Trp Ala Pro Thr Phe Leu Gly Tyr 130 135 140

Ser Met Gin Gly Leu Cys Lys Phe Gly Phe Tyr Glu Val Phe Lys Val 145 150 155 160

Leu Tyr Ser Asn Met Leu Gly Glu Glu Asn Thr Tyr Leu Trp Arg Thr 165 170 175

Ser Leu Tyr Leu Ala Ala Ser Ala Ser Ala Glu Phe Phe Ala Asp lie 180 185 190

Ala Leu Ala Pro Met Glu Ala Ala Lys val Arg He Gin Thr Gin Pro 195 200 205

Gly Tyr Ala Asn Thr Leu Arg Asp Ala Ala Pro Lys Met Tyr Lys Glu 210 215 220

Glu Gly Leu Lys Ala Phe Tyr Lys Gly Val Ala Pro Leu Trp Met Arg 225 230 235 240

Gin lie Pro Tyr Thr Met Met Lys Phe Ala Cys Phe Glu Arg Thr Val 245 250 255

Glu Ala Leu Tyr Lys Phe Val Val Pro Lys Pro Arg Ser Glu Cys Ser 260 265 270

Lys Pro Glu Gin Leu Val Val Thr Phe Val Ala Gly Tyr lie Ala Gly 275 280 285

Val Phe Cys Ala He Val Ser His Pro Ala Asp Ser Val Val Sér Val 290 295 300

Leu Asn Lys Glu Lys Gly Ser Ser Ala Ser Leu Val Leu Lys Arg Leu 305 310 315 320

Gly Phe Lys Gly Val Trp Lys Gly Leu Phe Ala Arg lie lie Met He 325 330 335

Gly Thr Leu Thr Ala Leu Gin Trp Phe He Tyr Asp Ser Val Lys Val 340 345 350

Tyr Phe Arg Leu Pro Arg Pro Pro Pro Pro Glu Met Pro Glu Ser Leu 355 360 365

Lys Lys Lys Leu Gly Leu Thr Gin 370 375

<210> 113 <211> 748 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 113 gcagataatg ggaggagccg ggcccgagcg agctctttcc tttcgctgct gcggccgcag 60 ccatgagtat gctcaggctt cagaagaggc tcgcctctag tgtcctccgc tgtggcaaga 120 agaaggtctg gttagacccc aatgagacca atgaaatcgc caatgcoaac tcccgtcagc 180 agatccggaa gctcatcaaa gatgggctga tcatccgcaa gcctgtgacg gtccattccc 240 gggctcgatg ccggaaaaac accttggccc gccggaaggg caggcacatg ggcataggta 300 agcggaaggg tacagccaat gcccgaatgc cagagaaggt cacatggatg aggagaatga 360 ggattttgcg ccggctgctc agaagatacc gtgaatctaa gaagatcgat cgccacatgt 420 atcacagcct gtacctgaag gtgaagggga atgtgttcaa aaacaagcgg attctcatgg 480 aacacataca caagctgaag gcagacaagg cccgcaagaa gctcctggct gaccaggctg 540 aggcccgcag gtctaagacc aaggaagcac gcaagcgccg tgaagagcgc ctccaggcca 600 agaaggagga gatcatcaag actttatcca aggaggaaga gaccaagaaa taaaacctcc 660 cactttgtct gtacatactg gcctctgtga ttacatagat cagccattaa aataaaacaa 720 gccttaatct gcaaaaaaaa aaaaaaaa 748

<210> 114 <211> 1867 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 114 ggttcgctgt ggcgggcgcc tgggccgccg gctgtttaac ttcgcttccg ctggcccata 60 gtgatctttg cagtgaccca gcagcatcac tgtttcttgg cgtgtgaaga taacccaagg 120 aattgaggaa gttgctgaga agagtgtgct ggagatgctc taggaaaaaa ttgaatagtg 180 agacgagttc cagcgcaagg gtttctggtt tgccaagaag aaagtgaaca tcatggatca 24 0 gaacaacagc ctgccacctt acgctcaggg cttggcctcc cctcagggtg ccatgactcc 300 cggaatccct atctttagtc caatgatgcc ttatggcact ggactgaccc oacagcctat 360 tcagaacacc aatagtctgt ctattttgga agagcaacaa aggcagcagc agcaacaaca 420 acagcagcag cagcagcagc agcagcaaca gcaacagcag cagcagcagc agcagcagca 480 gcagcagcag cagcagcagc agcagcagca gcaacaggca gtggcagctg cagccgttca 540 gcagtcaacg tcccagcagg caacacaggg aacctcaggc caggcaccac agctcttcca 600 ctcacagact ctcacaactg cacccttgcc gggcaccact ccactgtatc cctcccccat 660 gactcccatg acccccatca ctcctgccac gccagcttcg gagagttctg ggattgtacc 720 gcagctgcaa aatattgtat ccacagtgaa tcttggttgt aaacttgaco taaagaccat 780 tgcacttcgt gcccgaaacg ccgaatataa tcccaagcgg tttgctgcgg taatcatgag 840 gataagagag ccacgaacca cggcactgat tttcagttct gggaaaatgg tgtgcacagg 900 agccaagagt gaagaacagt ccagactggc agcaagaaaa tatgctagag ttgtacagaa 960 gttgggtttt ccagctaagt tcttggactt caagattcag aatatggtgg ggagctgtga 1020 tgtgaagttt cctataaggt tagaaggcct tgtgctcacc caccaacaat ttagtagtta 1080 tgagccagag ttatttcctg gtttaatcta cagaatgatc aaacccagaa ttgttctcct 1140 tatttttgtt tctggaaaag ttgtattaac aggtgctaaa gtcagagcag aaatttatga 1200 agcatttgaa aacatctacc ctattctaaa gggattcagg aagacgacgt aatggctctc 1260 atgtaccctt gcctccccca cccccttctt tttttttttt taaacaaatc agtttgtttt 1320 ggtaccttta aatggtggtg ttgtgagaag atggatgttg agttgcaggg tgtggcacca 1380 ggtgatgccc ttctgtaagt gcccaccgcg ggatgccggg aaggggcatt atttgtgcac 1440 tgagaacacc gcgcagcgtg actgtgagtt gctcataccg tgctgctatc tgggcagcgc 1500 tgcccattta tttatatgta gattttaaac actgctgttg acaagttggt ttgagggaga 1560 aaactttaag tgttaaagcc acctctataa ttgattggac tttttaattt taatgttttt 1620 ccccatgaac cacagttttt atatttctac cagaaaagta aaaatctttt ttaaaagtgt 1680 tgtttttcta atttataact cctaggggtt atttctgtgc cagacacatt ccacctctoc 1740 agtattgcag gacagaatat atgtgttaat gaaaatgaat ggctgtacat atttttttct 1800 ttcttcagag tactctgtac aataaatgca gtttataaaa gtgttaaaaa aaaaaaaaaa 1860 aaaaaaa 1867

<210> 115 <211> 2201 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 115 cgggatttgg gtcgcggttc ttgtttgtgg atcgctgtga tcgtcacttg acaatgcaga 60 tcttcgtgaa gactctgact ggtaagacca tcaccctcga ggttgagccc agtgacacca 120 tcgagaatgt caaggcaaag atccaagata aggaaggcat ccctcctgac cagcagaggc 180 tgatctttgc tggaaaacag ctggaagatg ggcgcaccct gtctgactac aacatccaga 240 aagagtccac cctgcacctg gtgctccgtc tcagaggtgg gatgcaaatc ttcgtgaaga 300 cactcactgg caagaccatc acccttgagg tggagcccag tgacaccatc gagaacgtca 360 aagcaaagat ccaggacaag gaaggcattc ctcctgacca gcagaggttg atctttgccg 420 gaaagcagct ggaagatggg cgcaccctgt ctgactacaa catccagaaa gagtctaccc 480 tgcacctggt gctccgtctc agaggtggga tgcagatctt cgtgaagacc ctgactggta 540 agaccatcac cctcgaggtg gagcccagtg acaccatcga gaatgtcaag gcaaagatcc 600 aagataagga aggcattcct cetgatcagc agaggttgat etttgcegga aaacagctgg 660 aagatggtcg taccctgtct gactacaaca tccagaaaga gtccaccttg cacctggtac 720 tccgtctcag aggtgggatg caaatcttcg tgaagacact cactggcaag accatcaccc 780 ttgaggtcga gcccagtgac actatcgaga acgtcaaagc aaagatccaa gacaaggaag 840 gcattcctcc tgaccagcag aggttgatct ttgccggaaa gcagctggaa gatgggcgca 900 ccctgtctga ctacaacatc cagaaagagt ctaccctgca cctggtgctc cgtctcagag 960 gtgggatgca gatcttcgtg aagaccctga ctggtaagac catcaccctc gaagtggagc 1020 cgagtgacac cattgagaat gtcaaggcaa agatccaaga caaggaaggc atccctcctg 1080 accagcagag gttgatcttt gccggaaaac agctggaaga tggtcgtacc ctgtctgact 1140 acaacatcca gaaagagtcc accttgcacc tggtgctccg tctcagaggt gggatgcaga 1200 tcttcgtgaa gaccctgact ggtaagacca toactctcga ggtggagccg agtgacacca 1260 ttgagaatgt caaggcaaag atccaagaca aggaaggcat ccctcctgat cagcagaggt 1320 tgatctttgc tgggaaacag ctggaagatg gacgcaccct gtctgactac aacatccaga 1380 aagagtccac cctgcacctg gtgctccgtc ttagaggtgg gatgcagatc ttcgtgaaga 1440 ccctgactgg taagaccatc actctcgaag tggagccgag tgaeaccatt gagaatgtca 1500 aggcaaagat ccaagacaag gaaggcatcc ctcctgacca gcagaggttg atctttgctg 1560 ggaaacagct ggaagatgga cgcaccctgt ctgactacaa catccagaaa gagtccaccc 1620 tgcacctggt gctccgtctt agaggtggga tgcagatctt cgtgaagacc ctgactggta 1680 agaccatcac tctcgaagtg gagccgagtg acaccattga gaatgtcaag gcaaagatcc 1740 aagacaagga aggcatccct cctgaccagc agaggttgat ctttgctggg aaacagctgg 1800 aagatggacg caccctgtct gactacaaca tccagaaaga gtccaccctg cacctggtgc 1860 tccgtctcag aggtgggatg cagatcttcg tgaagaccct gactggtaag accatcaccc 1920 tcgaggtgga gcccagtgac accatcgaga atgtcaaggc aaagatccaa gataaggaag 1980 gcatccctcc tgatcagcag aggttgatct ttgctgggaa acagctggaa gatggacgca 2040 ccctgtctga ctacaacatc cagaaagagt ccactctgca cttggtcctg cgcttgaggg 2100 ggggtgtcta agtttcccct tttaaggttt caacaaattt cattgcactt tcctttcaat 2160 aaagttgttg cattcccaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa a 2201

<210> 116 <211> 2405 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 116 tccggcgtgg tgcgcaggcg cggtatcccc cctcccccgc cagctcgaco ccggtgtggt 60 gcgcaggcgc agtctgcgca gggactggcg ggactgcgcg gcggcaacag cagacatgtc 120 gggggtccgg ggcctgtcgc ggctgctgag cgctcggcgc ctggcgctgg ccaaggcgtg 180 gccaacagtg ttgcaaacag gaacccgagg ttttcacttc actgttgatg ggaacaagag 240 ggcatctgct aaagtttcag attccatttc tgctcagtat ccagtagtgg atcatgaatt 300 tgatgcagtg gtggtaggcg ctggaggggc aggcttgcga gctgcatttg gcctttctga 360 ggcagggttt aatacagcat gtgttaccaa gctgtttcct accaggtcac acactgttgc 420 agcacaggga ggaatcaatg ctgctctggg gaacatggag gaggacaact ggaggtggca 480 tttctacgac accgtgaagg gctccgactg gctgggggac caggatgcca tccactacat 540 gacggagcag gcccccgccg ccgtggtcga gctagaaaat tatggcatgc cgtttagcag 600 aactgaagat gggaagattt atcagcgtgc atttggtgga cagagcctca agtttggaaa 660 gggcgggcag gcccatcggt gctgctgtgt ggctgatcgg actggccact cgctattgca 720 caccttatat ggaaggtctc tgcgatatga taccagctat tttgtggagt attttgcctt 780 ggatctcctg atggagaatg gggagtgccg tggtgtcatc gcactgtgca tagaggacgg 840 gtccatccat cgcataagag caaagaacac tgttgttgcc acaggaggct acgggcgcac 900 ctacttcagc tgcacgtctg cccacaccag cactggcgac ggcacggcca tgatcaccag 960 ggcaggcctt eettgccagg acctagagtt tgttcagttc caccetacag gcatatatgg 1020 tgctggttgt ctcattacgg aaggatgtcg tggagaggga ggcattctca ttaacagtca 1080 aggcgaaagg tttatggagc gatacgcccc tgtcgcgaag gacctggcgt ctagagatgt 1140 ggtgtctcgg tccatgactc tggagatccg agaaggaaga ggctgtggcc ctgagaaaga 1200 tcacgtctac ctgcagctgc accacctacc tccagagcag ctggccacgc gcctgcctgg 1260 catttcagag acagccatga tcttcgctgg cgtggacgtc acgaaggagc cgatccctgt 1320 cctccccacc gtgcattata acatgggcgg cattcccacc aactacaagg ggcaggtcct 1380 gaggcacgtg aatggccagg atcagattgt gcccggcctg tacgcctgtg gggaggccgc 1440 ctgtgcctcg gtacatggtg ccaaccgcct cggggcaaac tcgctcttgg acctggttgt 1500 ctttggtcgg gcatçrtgccc tgagcatcga agagtcatgc aggcctggag ataaagtccc 1560 tccaattaaa ccaaacgctg gggaagaatc tgtcatgaat cttgacaaat tgagatttgc 1620 tgatggaagc ataagaacat cggaactgcg actcagcatg cagaagtcaa tgcaaaatca 1680 tgctgccgtg ttccgtgtgg gaagcgtgtt gcaagaaggt tgtgggaaaa tcagcaagct 1740 ctatggagac ctaaagcacc tgaagacgtt cgaccgggga atggtctgga acacggacct 1800 ggtggagacc ctggagctgc agaacctgat gctgtgtgcg ctgcagacca tctacggagc 1860 agaggcacgg aaggagtcac ggggcgcgca tgccagggaa gactacaagg tgcggattga 1920 tgagtacgat tactccaagc ccatccaggg gcaacagaag aagccctttg aggagcactg 1980 gaggaagcac accctgtcct atgtggacgt tggcactggg aaggtcactc tggaatatag 2040 acccgtgatc gacaaaactt tgaacgaggc tgactgtgcc accgtcccgc cagccattcg 2100 ctcctactga tgagacaaga tgtggtgatg acagaatcag cttttgtaat tatgtataat 2160 agctcatgca tgtgtccatg tcataactgt cttcatacgc ttctgcactc tggggaagaa 2220 ggagtacatt gaagggagat tggcacctag tggctgggag cttgccagga acccagtggc 2280 cagggagcgt ggcacttacc tttgtccctt gcttcattct tgtgagatga taaaactggg 2340 cacagctctt aaataaaata taaatgaaca aactttcttt tatttccaaa aaaaaaaaaa 2400 aaaaa 2405

<210> 117 <211> 1536 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 117 gtgacgcgag gctctgcgga gaccaggagt cagactgtag gacgacctcg ggtcccacgt 60 gtccccggta ctcgccggcc ggagcccccg gcttcccggg gccgggggac cttagcggca 120 cccacacaca gcctactttc caagcggagc catgtctggt aacggcaatg cggctgcaac 180 ggcggaagaa aacagcccaa agatgagagt gattcgcgtg ggtacccgca agagccagct 240 tgctcgcata cagacggaca gtgtggtggc aacattgaaa gcctcgtacc ctggcctgca 300 gtttgaaatc attgctatgt ccaccacagg ggacaagatt cttgatactg cactctctaa 360 gattggagag aaaagcctgt ttaccaagga gcttgaacat gccctggaga agaatgaagt 420 ggacctggtt gttcactcct tgaaggacct gcccactgtg cttcctcctg gcttcaccat 480 cggagccatc tgcaagcggg aaaaccctca tgatgctgtt gtctttcacc caaaatttgt 540 tgggaagacc ctagaaaccc tgccagagaa gagtgtggtg ggaaccagct ccctgcgaag 600 agcagcccag ctgcagagaa agttcccgca tctggagttc aggagtattc ggggaaacct 660 caacacccgg cttcggaagc tggacgagca gcaggagttc agtgccatca tcctggcaac 720 agctggcctg cagcgcatgg gctggcacaa ccgggtgggg cagatcctgc accctgagga 780 atgcatgtat gctgtgggcc agggggcctt gggcgtggaa gtgcgagcca aggaccagga 840 catcttggat ctggtgggtg tgctgcacga tcccgagact ctgcttcgct gcatcgctga 900 aagggccttc ctgaggcacc tggaaggagg ctgcagtgtg ccagtagccg tgcatacagc 960 tatgaaggat gggcaactgt acctgactgg aggagtctgg agtctagacg gctcagatag 1020 catacaagag accatgcagg ctaooatcca tgtccctgcc cagcatgaag atggccctga 1080 ggatgaccca cagttggtag gcatcactgc tcgtaacatt ccacgagggc cccagttggc 1140 tgcccagaac ttgggcatca gcctggccaa cttgttgctg agcaaaggag ccaaaaacat 1200 cctggatgtt gcacggcagc ttaacgatgc ccattaactg gtttgtgggg cacagatgcc 1260 tgggttgctg ctgtccagtg cctacatccc gggcctcagt gccccattct cactgctatc 1320 tggggagtga ttaccccggg agactgaact gcagggttca agccttccag ggatttgcct 1380 caccttgggg octtgatgac tgccttgcct cctcagtatg tgggggcttc atctctttag 1440 agaagtccaa gcaacagcct ttgaatgtaa ccaatcctac taataaacca gttctgaagg 1500 taaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaa 1536

<210> 118 <211> 1435 <212> ADN <213> Homo sapiens <40 0> 118 ggcggggcct gcttctcctc agcttcaggc ggctgcgacg agccctcagg cgaacctctc 60 ggctttcccg cgcggcgccg cctcttgctg cgcctccgcc tcctcctctg ctccgccacc 120 ggcttcctcc tcctgagcag tcagcccgcg cgccggccgg ctccgttatg gcgacccgca 180 gccctggcgt cgtgattagt gatgatgaac caggttatga ccttgattta ttttgcatac 240 ctaatcatta tgctgaggat ttggaaaggg tgtttattcc tcatggacta attatggaca 300 ggactgaacg tcttgctcga gatgtgatga aggagatggg aggccatcac attgtagccc 360 tctgtgtgct caaggggggc tataaattct ttgctgacct gctggattac atcaaagcac 420 tgaatagaaa tagtgataga tccattccta tgactgtaga ttttatcaga ctgaagagct 480 attgtaatga coagtcaaca ggggacataa aagtaattgg tggagatgat ctctcaactt 540 taactggaaa gaatgtcttg attgtggaag atataattga cactggcaaa acaatgcaga 600 ctttgctttc cttggtcagg cagtataatc caaagatggt caaggtcgca agcttgctgg 660 tgaaaaggac cccacgaagt gttggatata agccagactt tgttggattt gaaattccag 120 acaagtttgt tgtaggatat gcccttgact ataatgaata cttcagggat ttgaatcatg 780 tttgtgtcat tagtgaaact ggaaaagcaa aatacaaagc ctaagatgag agttcaagtt 840 gagtttggaa acatctggag tcctattgac atcgccagta aaattatcaa tgttctagtt 900 ctgtggccat ctgcttagta gagctttttg catgtatctt ctaagaattt tatctgtttt 960 gtactttaga aatgtcagtt gctgcattcc taaactgttt atttgcacta tgagcctata 1020 gactatcagt tccctttggg cggattgttg tttaacttgt aaatgaaaaa attctcttaa 1080 accacagcac tattgagtga aacattgaac tcatatctgt aagaaataaa gagaagatat 1140 attagttttt taattggtat tttaattttt atatatgcag gaaagaatag aagtgattga 1200 atattgttaa ttataccacc gtgtgttaga aaagtaagaa gcagtcaatt ttcacatcaa 1260 agacagcatc taagaagttt tgttctgtcc tggaattatt ttagtagtgt ttcagtaatg 1320 ttgactgtat tttccaactt gttcaaatta ttaccagtga atctttgtca gcagttccct 1380 tttaaatgca aatcaataaa ttcccaaaaa tttaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaa 1435 <210> 119 <211> 2395

<212> ADN <213> Homo sapiens <400> 119 agaggcaggg gctggcctgg gatgcgcgcg cacctgccct cgccccgccc cgcccgcacg 60 aggggtggtg gccgaggccc cgccccgcac gcctcgcctg aggcgggtcc gctcagccca 120 ggcgcccgcc cccgcccccg ccgattaaat gggccggcgg ggctcagccc ccggaaacgg 180 tcgtacactt cggggctgcg agcgcggagg gcgacgacga cgaagogcag acagcgtcat 240 ggcagagcag gtggccctga gccggaccca ggtgtgcggg atcctgcggg aagagctttt 300 ccagggcgat gccttccatc agtcggatac acacatattc atcatcatgg gtgcatcggg 360 tgacctggcc aagaagaaga tctaccccac catctggtgg ctgttccggg atggccttct 420 gcccgaaaac accttcatcg tgggctatgc ccgttcccgc ctcacagtgg ctgacatccg 480 caaacagagt gagcccttct tcaaggccac cccagaggag aagctcaagc tggaggactt 540 ctttgcccgc aactcctatg tggctggcca gtacgatgat gcagcctcct accagcgcct 600 caacagccac atgaatgccc tccacctggg gtcacaggcc aaccgcctct tctacctggc 660 cttgcccccg accgtctacg aggccgtcac caagaacatt cacgagtcct gcatgagcca 720 gataggctgg aaccgcatca tcgtggagaa gcccttcggg agggacctgc agagctctga 780 ccggctgtcc aaccacatct cctccctgtt ccgtgaggac cagatctacc gcatcgacca 840 ctacctgggc aaggagatgg tgcagaacct catggtgctg agatttgcca acaggatctt 900 cggccccatc tggaaccggg acaacatcgc ctgcgttatc ctcaccttca aggagccctt 960 tggcactgag ggtcgcgggg gctatttcga tgaatttggg atcatccggg acgtgatgca 1020 gaaccaccta ctgcagatgc tgtgtctggt ggccatggag aagcccgcct ccaccaactc 1080 agatgacgtc cgtgatgaga aggtcaaggt gttgaaatgc atctcagagg tgcaggccaa 1140 caatgtggtc ctgggccagt acgtggggaa ccccgatgga gagggcgagg ccaccaaagg 1200 gtacctggac gaccccacgg tgccccgcgg gtccaccacc gccacttttg cagocgtcgt 1260 cctctatgtg gagaatgaga ggtgggatgg ggtgcccttc atcctgcgct gcggcaaggc 1320 cctgaacgag cgcaaggccg aggtgaggct gcagttccat gatgtggccg gcgacatctt 1380 ccaccagcag tgcaagcgca acgagctggt gatccgcgtg cagcccaacg aggccgtgta 1440 caccaagatg atgaccaaga agccgggcat gttcttcaac cccgaggagt cggagctgga 1500 cctgacctac ggcaacagat acaagaacgt gaagctccct gacgcctacg agcgcctcat 1560 cctggacgtc ttctgcggga gccagatgca cttcgtgcgc agcgacgagc tccgtgaggc 1620 ctggcgtatt ttcaccccac tgctgcacca gattgagctg gagaagccca agcccatccc 1680 ctatatttat ggcagccgag gccccacgga ggcagacgag ctgatgaaga gagtgggttt 1740 ccagtatgag ggcacctaca agtgggtgaa cccccacaag ctctgagccc tgggcaccca 1800 cctccacccc cgccacggcc accctccttc ccgccgcccg accccgagtc gggaggactc 1860 cgggaccatt gacctcagct gcacattcct ggccccgggc tctggccacc ctggcccgcc 1920 cctcgctgct gctactaccc gagcccagct acattcctca gctgccaagc actcgagacc 1980 atcetggccc ctccagaccc tgcctgagcc caggagctga gtcacctcct ccactcactc 2040 cagcccaaca gaaggaagga ggagggcgcc cattcgtctg tcccagagct tattggocac 2100 tgggtctcac tcctgagtgg ggccagggtg ggagggaggg acaaggggga ggaaaggggc 2160 gagcacccac gtgagagaat ctgcctgtgg ccttgcccgc cagcctcagt gccacttgac 2220 attccttgtc accagcaaca tctcgagccc cctggatgtc ccctgtccca ccaactctgc 2280 actccatggc caccccgtgc cacccgtagg cagcctctct gctataagaa aagcagacgc 2340 agcagctggg acccctccca acctcaatgc cctgccatta aatccgcaaa cagcc 2395 <210> 120 <211> 108

<212> ADN <213> Artificial <400> 120 cacagctcgt gcctcagtac tgagggtatg gaggaaaagg cagtcggtca gtgtctaaaa 60 atgacgcacg taagagacgc tcggggaaga tgtagctgga cctctgag 108 <210> 121 <211> 78 <212> ADN <213> Artificial <400> 121 tctccttggg aggaggggaa gtggccagat gttgaggctg tgaagggcac tcttgatgga 60 cagcaggctg aactccag 78 <210> 122 <211> 630 <212> ADN <213> Artificial <400> 122 gtcgtggaac gcagaatcat ccacctgccc ccactgatca gagacctgtc atcctcaagg 60 aggaccagtg actccctgca ccagcagtijg ctcaccccaa ttccctccag gccctgggat 120 ctgagggagg ggagaagcca ccaccattac cctgatttcc accaggagct ccaggaccgg 180 gggccaaagt cttgggcatt ggaaagaagg gagttggacc catcgtggag tggaaggcac 240 cgtagctcta ggctgaatgg gtcacccata cactggtcag acagggacag cctaagcgat 300 gtcccctcat ccagtgaggc acgctggcgg ccgagccacc ctcctttcag gagccgctgt 360 caggagaggc cccgcaggcc cagcccccgg gagagcactc agaggcacgg gagacgacgc 420 aggcaccgca gctactctcc tcccttgccc tccggcctca gttcctggag ctctgaagag 480 gacaaggaga ggcagcccca gagctggcgg gcccaccgcc gcggctcgca ctccccacac 540 tggcccgagg agaagccgcc tagctaccgc tcactggata tcactccagg caagaatagc 600 aggaaaaaag ggagtgtgga gaggcgctcg 630 <210> 123 <211> 351 <212> ADN <213> Artificial <400> 123 gtgcttgctc ggggctgaag gtgacagtgc catcacacac tgtccatggc gtcagaggtc 60 aggccctcta cctacccgtc cactatggct tccacactcc agcatcagac atccagatca 120 tatggctatt tgagagaccc cacacaatgc ccaaatactt actgggctct gtgaataagt 180 ctgtggttcc tgacttggaa taccaacaca agttcaccat gatgccaccc aatgcatctc 240 tgcttatcaa cccactgcag ttccctgatg aaggcaatta catcgtgaag gtcaacattc 300 agggaaatgg aactctatct gccagtcaga agatacaagt cacggttgat g 351 <210> 124 <211> 297 <212> ADN <213> Artificial <400> 124 atggacctta tggacttcaa gtgaattctg ataaagggct aaaagtaggg gaagtgttta 60 ctgttgacct tggagaggcc atcctatttg attgttctgc tgattctcat ccccccaaca 120 cctactcctg gattaggagg actgacaata ctacatatat cattaagcat gggcctcgct 180 tagaagttgc atctgagaaa gtagcccaga agacaatgga ctatgtgtgc tgtgcttaca 240 acaacataac cggcaggcaa gatgaaactc atttcacagt tatcatcact tccgtag 297 <210> 125 <211> 126 <212> ADN <213> Artificial <400> 125 gactggagaa gcttgcacag aaaggaaaat cattgtcacc tttagcaagt ataactggaa 60 tatcactatt tttgattata tccatgtgtc ttctcttcct atggaaaaaa tatcaaccct 120 acaaag 126 <210> 126 <211> 327 <212> ADN <213> Artificial <400> 126 gtcagggtgt gtccctatac attcctcagg ccaccatcaa tgccactgtc aaagaagaca 60 tcctgctctc agttgagtac tcctgtcatg gagtgcccac catcgaatgg acatattcat 120 ccaattgggg aacgcagaag atcgtggagt ggaaaccagg gactcaggcc aacatctctc 180 aaagccacaa ggacagagtc tgcacctttg acaacggctc catccagctc ttcagcgtgg 240 gagtgaggga ttccggctac tatgtcatca ccgtgaegga gcgcctgggg agcagccagt 300 ttggcaccat cgtgctgcac gtctctg 327 <210> 127 <211> 141

<212> ADN <213> Artificial <400> 127 agatcctcta tgaagacctg cactttgtcg ctgtcatcct tgcttttctc gctgctgtgg 60 ccgcagtatt aatcagcctc atgtgggttt gtaataagtg tgcatataaa tttcagagga 120 agagaagaca caaactcaaa g 141 <210> 128 <211> 326 <212> ADN <213> Artificial <400> 128 aaagcacaac tgaggagatt gagctggaag atgttgagtg ttagccaagg ctgggcctga 60 ctgcattcct acctcaagag gaaaccattc tccaacaaaa agagcaagca cagctattat 120 acccattgtg tgtggtcctg ttgcagcccg ctcctaacag gacagtggga gattaacaac 160 attgactgca tggagttgag gactgtggat gggacaaagc tagtattagg actcgcgcta 240 agttcaagga gaagagtgat tgaggctttg aaccaggagc ttcgcttggc tgcagcatca 300 gggccgtgct gacacataac caatgg 326 <210> 129 <211> 524 <212> ADN <213> Artificial <400> 129 gtgagtacag tgaccgctgg ggagacagag cgatcgagag aaatgtctac ctctctacct 60 gacagctgtg tgcgctgggt tcctcctcca cctcctgtcc tgccaccccc aagattggtc 120 attccagact cttctccgct gggtgcccct ggcctcaggg atgaccattc tcatttgcct 180 tttcacctac atacacctct ccacacttct tatccatatc tatcactcca tgcatttgga 240 attctcatgg acactattga taaaatggaa gggcaggttt ggcgtggtga ggttgtggtg 300 taagactgtt ccctctccct ggggcattca aactagagga aaccttctct ggtcgttccc 360 ttcccatgca gagaagttcc tttttatatg agaagagtgt gcaaactgtg gcctttgggc 420 acccacccag ccacagattt gttttattta ctcccatgat gacatgggcc acaatagggc 480 ctagttctta tttgaggatt cacaattttt accttactgg ccaa 524 <210> 130 <211> 57 <212> ADN <213> Artificial <400> 130 gcaggacagg gctgcttgct gatctcttgc ccagttttgc tgtggagatt atgccag 57 <210> 131 <211> 61 <212> ADN <213> Artificial <400> 131 agtgggtgtt tgttggcctg gtgctcctgg gcgtcttcct cttcttcgtc ctggtgggga 60 t 61 <210> 132 <211> 66 <212> ADN <213> Artificial <40 0> 132 ctgctggtgc cagtgctgcc ctcacagctg ctgctgctat gtccgctgcc catgctgccc 60 agattc 66 <210> 133 <211> 20 <212> ADN <213> Artificial <400> 133 ctgctggtgc cctcaagcct 20 <210> 134 <211> 87 <212> ADN <213> Artificial <400> 134 gtgctccata tatatttgtc aagagaatgg ggggacagat gaagaggaca caggctggca 60 ctgaggtccc ctccactttc ctcctag 87 <210> 135 <211> 44 <212> ADN <213> Artificial <400> 135 actggcacag cctccaggtt ggcgggctca tctgcgctgg ggtt 44 <210> 136 <211> 31

<212> ADN <213> Artificial <400> 136 ctgtgcgcca tgggcatcat catcgtcatg a 31 <210> 137 <211> 37 <212> ADN <213> Artificial <400> 137 gtgcaaaatg caaatgcaag tttggccaga agtccgg 37 <210> 138 <211> 212 <212> PRT <213> Artificial <400> 138

Gin Val Thr He Pro Asp Gly Phe val Asn val Thr Val Gly Ser Asn 15 10 15

Val Thr Leu He Cys lie Tyr Thr Thr Thr Val Ala Ser Arg Glu Gin 20 25 30

Leu Ser lie Gin Trp Ser Phe Phe His Lys Lys Glu Met Glu Pro lie 35 40 45

Ser He Tyr Phe Ser Gin Gly Gly Gin Ala Val Ala lie Gly Gin Phe 50 55 60

Lys Asp Arg lie Thr Gly Ser Asn Asp Pro Gly Asn Ala Ser lie Thr 65 70 75 80

He Ser His Met Gin Pro Ala Asp Ser Gly He Tyr He Cys Asp Val 85 90 95

Asn Asn Pro Pro Asp Phe Leu Gly Gin Asn Gin Gly He Leu Asn Val 100 105 110

Ser Val Leu Val Lys Pro Ser Lys Pro Leu Cys Ser Val Gin Gly Arg 115 120 125

Pro Glu Thr Gly His Thr He Ser Leu Ser Cys Leu Ser Ala Leu Gly 130 135 140

Thr Pro Ser Pro Val Tyr Tyr Trp His Lys Leu Glu Gly Arg Asp lie 145 150 155 160

Val Pro Val Lys Glu Asn Phe Asn Pro Thr Thr Gly lie Leu Val lie 165 170 175

Gly Asn Leu Thr Asn Phe Glu Gin Gly Tyr Tyr Gin Cys Thr Ala lie 180 185 190

Asn Arg Leu Gly Asn Ser Ser Cys Glu He Asp Leu Thr Ser Ser His 195 200 205

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Gin Val Thr lie Pro Asp Gly Phe val Asn Val Thr val Gly Ser Asn 15 10 15

Val Thr Leu lie Cys lie Tyr Thr Thr Thr Val Ala Ser Arg Glu Gin 20 25 30

Leu Ser lie Gin Trp Ser Phe Phe His Lys Lys Glu Met Glu Pro He 35 40 45

Ser His Ser Ser Cys Leu Ser Thr Glu Gly Met Glu Glu Lys Ala Val 50 55 60

Gly Gin Cys Leu Lys Met Thr His Val Arg Asp Ala Arg Gly Arg Cys 65 70 75 80

Ser Trp Thr Ser Glu lie Tyr Phe Ser Gin Gly Gly Gin Ala Val Ala 85 90 95 lie Gly Gin Phe Lys Asp Arg He Thr Gly Ser Asn Asp Pro Gly Asn 100 105 110

Ala Ser He Thr lie Ser His Met Gin Pro Ala Asp Ser Gly He Tyr 115 120 125

He Cys Asp Val Asn Asn Pro Pro Asp Phe Leu Gly Gin Asn Gin Gly 130 135 140

He Leu Asn Val Ser Val Leu Val Lys Pro Ser Lys Pro Leu Cys Ser 145 150 155 160

Val Gin Gly Arg Pro Glu Thr Gly His Thr He Ser Leu Ser Cys Leu 165 170 175

Ser Ala Leu Gly Thr Pro Ser Pro Val Tyr Tyr Trp His Lys Leu Glu 180 185 190

Gly Arg Asp He Val Pro Val Lys Glu Asn Phe Asn Pro Thr Thr Gly 195 200 205

He Leu Val lie Gly Asn Leu Thr Asn Phe Glu Gin Gly Tyr Tyr Gin 210 215 220

Cys Thr Ala lie Asn Arg Leu Gly Asn Ser Ser Cys Glu He Asp Leu 225 230 235 240

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Gin Val Thr He Pro Asp Gly Phe Val Asn Val Thr Val Gly Ser Asn 15 10 15

Val Thr Leu lie Cys He Tyr Thr Thr Thr Val Ala Ser Arg Glu Gin 20 25 30

Leu Ser lie Gin Trp Ser Phe Phe His Lys Lys Glu Met Glu Pro He 35 40 45

Ser His Ser Ser Cys Leu Ser Thr Glu Gly Met Glu Glu Lys Ala Val 50 55 60

Gly Gin Cys Leu Lys Met Thr His Val Arg Asp Ala Arg Gly Arg Cys 65 70 75 80

Ser Trp Thr Ser Glu Ser Pro Trp Glu Glu Gly Lys Trp Pro Asp Val 85 90 95

Glu Ala Val Lys Gly Thr Leu Asp Gly Gin Gin Ala Glu Leu Gin lie 100 105 110

Tyr Phe Ser Gin Gly Gly Gin Ala Val Ala lie Gly Gin Phe Lys Asp 115 120 125

Arg lie Thr Gly Ser Asn Asp Pro Gly Asn Ala Ser lie Thr lie Ser 130 135 140

His Met Gin Pro Ala Asp Ser Gly lie Tyr lie Cys Asp Val Asn Asn 145 150 155 160

Pro Pro Asp Phe Leu Gly Gin Asn Gin Gly lie Leu Asn val Ser val 165 170 175 '

Leu Val Lys Pro Ser Lys Pro Leu Cys Ser Val Gin Gly Arg Pro Glu 180 185 190

Thr Gly His Thr lie Ser Leu Ser Cys Leu Ser Ala Leu Gly Thr Pro 195 200 205

Ser Pro Val Tyr Tyr Trp His Lys Leu Glu Gly Arg Asp lie Val Pro 210 215 220

Val Lys Glu Asn Phe Asn Pro Thr Thr Gly lie Leu Val lie Gly Asn 225 230 235 240

Leu Thr Asn Phe Glu Gin Gly Tyr Tyr Gin Cys Thr Ala lie Asn Arg 245 250 255

Leu Gly Asn Ser Ser Cys Glu lie Asp Leu Thr Ser Ser His Pro Glu 260 265 270

Val Gly <210> 141 <211> 171 <212> PRT <213> Artificial <400> 141

Gin Val Thr lie Pro Asp Gly Phe Val Asn Val Thr Val Gly Ser Asn 15 10 15

Val Thr Leu lie Cys He Tyr Thr Thr Thr Val Ala Ser Arg Glu Gin 20 25 30

Leu Ser He Gin Trp Ser Phe Phe His Lys Lys Glu Met Glu Pro lie 35 40 45

Ser He Tyr Phe Ser Gin Gly Gly Gin Ala Val Ala He Gly Gin Phe 50 55 60

Lys Asp Arg He Thr Gly Ser Asn Asp Pro Val Lys Pro Ser Lys Pro 65 70 75 80

Leu Cys Ser Val Gin Gly Arg Pro Glu Thr Gly His Thr He Ser Leu 85 90 95

Ser Cys Leu Ser Ala Leu Gly Thr Pro Ser Pro Val Tyr Tyr Trp His 100 105 110

Lys Leu Glu Gly Arg Asp He Val Pro Val Lys Glu Asn Phe Asn Pro 115 120 125

Thr Thr Gly lie Leu Val He Gly Asn Leu Thr Asn Phe Glu Gin Gly 130 135 140

Tyr Tyr Gin Cys Thr Ala lie Asn Arg Leu Gly Asn Ser Ser Cys Glu 145 150 155 160 lie Asp Leu Thr Ser Ser His Pro Glu Val Gly 165 170 <210> 142 <211> 181 <212> PRT <213> Artificial <400> 142

Gin Val Thr lie Pro Asp Gly Phe Val Asn Val Thr Val Gly Ser Asn 15 10 15

Val Thr Leu He Cys lie Tyr Thr Thr Thr Val Ala Ser Arg Glu Gin 20 25 30

Leu Ser lie Gin Trp Ser Phe Phe His Lys Lys Glu Met Glu Pro lie 35 40 45

Ser He Tyr Phe Ser Gin Gly Gly Gin Ala Val Ala lie Gly Gin Phe 50 55 60

Lys Asp Arg lie Thr Gly Ser Asn Asp Pro Gly Asn Ala Ser lie Thr 65 70 75 80 lie Ser His Met Gin Pro Ala Asp Ser Gly lie Tyr lie Cys Asp Val 85 90 95

Asn Asn Pro Pro Asp Phe Leu Gly Gin Asn Gin Gly lie Leu Asn Val 100 105 110

Ser Val Leu Val Lys Pro Ser Lys Pro Leu Cys Ser Val Gin Gly Arg 115 120 125

Pro Glu Thr Gly His Thr He Ser Leu Ser Cys Leu Ser Ala Leu Gly 130 135 140

Thr Pro Ser Pro Val Tyr Tyr Trp His Lys Leu Glu Gly Arg Asp He 145 150 155 160

Val Pro Val Lys Glu Asn Phe Thr Asn His Arg Asp Phe Gly His Trp 165 170 175

Lys Ser Asp Lys Phe 180 <210> 143 <211> 209 <212> PRT <213> Artificial <400> 143

Gin Val Ihr He Pro Asp Gly Phe Val Asn Val Thr Val Gly Ser Asn 15 10 15

Val Thr Leu lie Cys He Tyr Thr Thr Thr Val Ala Ser Arg Glu Gin 20 25 30

Leu Ser He Gin Trp Ser Phe Phe His Lys Lys Glu Met Glu Pro lie 35 40 45

Ser He Tyr Phe Ser Gin Gly Gly Gin Ala Val Ala lie Gly Gin Phe 50 55 60

Lys Asp Arg He Thr Gly Ser Asn Asp Pro Gly Asn Ala Ser lie Thr 65 ' 70 75 80

He Ser His Met Gin Pro Ala Asp Ser Gly He Tyr He Cys Asp val 85 90 95

Asn Asn Pro Pro Asp Phe Leu Gly Gin Asn Gin Gly He Leu Asn Val 100 105 110

Ser Val Leu Val Lys Pro Ser Lys Pro Leu Cys Ser Val Gin Gly Arg 115 120 125

Pro Glu Thr Gly His Thr He Ser Leu Ser Cys Leu Ser Ala Leu Gly 130 135 140

Thr Pro Ser Pro Val Tyr Tyr Trp His Lys Leu Glu Gly Arg Asp He 145 150 155 160

Val Pro Val Lys Glu Asn Phe Asn Pro Thr Thr Gly He Leu Val He 165 170 175

Gly Asn Leu Thr Asn Phe Glu Gin Gly Tyr Tyr Gin Cys Thr Ala He 180 185 190

Asn Arg Leu Gly Asn Ser Ser Cye Glu lie Asp Leu Thr Ser Ser Arg 195 200 205

Gin <210> 144 <211> 312 <212> PRT <213> Artificial <400> 144

Ser His Thr Val His Gly Val Arg Gly Gin Ala Leu Tyr Leu Pro Val 1.5 10 15

His Tyr Gly Phe His Thr Pro Ala Ser Asp lie Gin He lie Trp Leu 20 25 30

Phe Glu Arg Pro His Thr Met Pro Lys Tyr Leu Leu Gly Ser Val Asn 35 40 45

Lys Ser Val Val Pro Asp Leu Glu Tyr Gin His Lys Phe Thr Met Met 50 55 60

Pro Pro Asn Ala Ser Leu Leu lie Asn Pro Leu Gin Phe Pro Asp Glu 65 70 75 00

Gly Asn Tyr lie Val Lys Val Asn lie Gin Gly Asn Gly Thr Leu Ser 85 90 95

Ala Ser Gin Lys lie Gin Val Thr Val Asp Asp Pro Val Thr Lys Pro 100 105 110 val val Gin lie His Pro Pro Ser Gly Ala val Glu Tyr val Gly Aen 115 120 125

Met Thr Leu Thr Cys His Val Glu Gly Gly Thr Arg Leu Ala Tyr Gin 130 135 140

Trp Leu Lys Asn Gly Arg Pro Val His Thr Ser Ser Thr Tyr Ser Phe 145 150 155 160

Ser Pro Gin Asn Asn. Thr Leu His lie Ala Pro Val Thr Lys Glu Asp 165 170 175 lie Gly Asn Tyr Ser Cys Leu Val Arg Asn Pro Val Ser Glu Met Glu 180 185 190

Ser Asp lie lie Met Pro lie lie Tyr Tyr Gly Pro Tyr Gly Leu Gin 195 200 205

Val Asn Ser Asp Lys Gly Leu Lys Val Gly Glu Val Phe Thr Val Asp 210 215 220

Leu Gly Glu Ala lie Leu Phe Asp Cys Ser Ala Asp Ser His Pro Pro 225 230 235 240

Asn Thr Tyr Ser Trp lie Arg Arg Thr A3p Asn Thr Thr Tyr lie lie 245 250 255

Lys His Gly Pro Arg Leu Glu Val Ala Ser Glu Lys Val Ala Gin Lys 260 265 270

Thr Met Asp - Tyr Val Cys Cys Ala Tyr Asn Asn He Thr Gly Arg Gin 275 280 285

Asp Glu Thr His Phe Thr Val lie He Thr Ser Val Gly Leu Glu Lys 290 295 300

Leu Ala Gin Lys Gly Lys Ser Leu 305 310 <210> 145 <211> 320 <212> PRT <213> Artificial <400> 145

Gly Leu Lys Val Thr Val Pro Ser His Thr Val His Gly Val Arg Gly 15 10 15

Gin Ala Leu Tyr Leu Pro Val His Tyr Gly Phe His Thr Pro Ala Ser 20 25 30

Asp lie Gin lie lie Trp Leu Phe Glu Arg Pro His Thr Met Pro Lys 35 40 45

Tyr Leu Leu Gly Ser Val Asn Lys Ser Val Val Pro Asp Leu Glu Tyr 50 55 60

Gin His Lys Phe Thr Met Met Pro Pro Asn Ala Ser Leu Leu lie Asn 65 70 75 80

Pro Leu Gin Phe Pro Asp Glu Gly Asn Tyr lie Val Lys Val Asn lie 85 90 95

Gin Gly Asn Gly Thr Leu Ser Ala Ser Gin Lys lie Gin Val Thr Val 100 105 110

Asp Asp Pro Val Thr Lys Pro Val Val Gin lie His Pro Pro Ser Gly 115 120 125

Ala Val Glu Tyr Val Gly Asn Met Thr Leu Thr Cys His Val Glu Gly 130 135 140

Gly Thr Arg Leu Ala Tyr Gin Trp Leu Lys Asn Gly Arg Pro Val His 145 150 155 160

Thr Ser Ser Thr Tyr Ser Phe Ser Pro Gin Asn Asn Thr Leu His lie 165 170 175

Ala Pro Val Thr Lys Glu Asp lie Gly Asn Tyr Ser Cys Leu Val Arg 180 185 190

Asn Pro Val Ser Glu Met Glu Ser Asp He lie Met Pro He He Tyr 195 200 205

Tyr Gly Pro Tyr Gly Leu Gin Val Asn Ser Asp Lys Gly Leu Lys Val 210 215 220

Gly Glu Val Phe Thr Val Asp Leu Gly Glu Ala lie Leu Phe Asp Cys 225 230 235 240

Ser Ala Asp Ser His Pro Pro Asn Thr Tyr Ser Trp He Arg Arg Thr 245 250 255

Asp Asn Thr Thr Tyr He He Lys His Gly Pro Arg Leu Glu Val Ala 260 265 270

Ser Glu Lys Val Ala Gin Lys Thr Met Asp Tyr Val Cys Cys Ala Tyr 275 280 285

Asn Asn lie Thr Gly Arg Gin Asp Glu Thr His Phe Thr Val lie He 290 295 300

Thr Ser Val Gly Leu Glu Lys Leu Ala Gin Lys Gly Lys Ser Leu 305 310 315 <210> 146 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial <400> 146

Leu Gin Ser Gin Gly Val Ser Leu Tyr lie Pro Gin Ala Thr lie Asn 15 10 15

Ala Thr Val Lys Glu Asp He Leu Leu Ser Val Glu Tyr Ser Cys His 20 25 30

Gly Val Pro Thr lie Glu Trp Thr Tyr Ser Ser Asn Trp Gly Thr Gin 35 40 45

Lys lie Val Glu Trp Lys Pro Gly Thr Gin Ala Asn lie Ser Gin Ser 50 55 60

His Lys Asp Arg Val Cys Thr Phe Asp Asn Gly Ser He Gin Leu Phe 65 70 75 80

Ser Val Gly Val Arg Asp Ser Gly Tyr Tyr Val lie Thr Val Thr Glu 85 90 95

Arg Leu Gly Ser Ser Gin Phe Gly Thr lie Val Leu His Val Ser Glu 100 105 110

He Leu Tyr Glu Asp Leu His 115 <210> 147 <211> 166 <212> PRT <213> Artificial <400> 147

Leu Gin Val Thr Val Pro Asp Lys Lys Lys Val Ala Met Leu Phe Gin 15 10 15

Pro Thr Val Leu Arg Cys His Phe Ser Thr Ser Ser His Gin Pro Ala 20 25 30

Val Val Gin Trp Lys Phe Lys Ser Tyr Cys Gin Asp Arg Met Gly Glu 35 40 45

Ser Leu Gly Met Ser Ser Thr Arg Ala Gin Ser Leu Ser Lys Arg Asn 50 55 60

Leu Glu Trp Asp Pro Tyr Leu Asp Cys Leu Asp Ser Arg Arg Thr Val 65 "70 75 80

Arg Val Val Ala Ser Lys Gin Gly Ser Thr Val Thr Leu Gly Asp Phe 85 90 95

Tyr Arg Gly Arg Glu He Thr lie Val His Asp Ala Asp Leu Gin lie 100 105 110

Gly Lys Leu Met Trp Gly Asp Ser Gly Leu Tyr Tyr Cys lie lie Thr 115 120 125

Thr Pro Asp Asp Leu Glu Gly Lys Asn Glu Gly Ser Leu Gly Leu Leu 130 135 140

Val Leu Gly Arg Thr Gly Leu Leu Ala Asp Leu Leu Pro Ser Phe Ala 145 150 155 160

Val Glu lie Met Pro Glu 165 <210> 148 <211> 149 <212> PRT <213> Artificial <400> 148

Leu Gin Val Thr Val Pro Asp Lys Lys Lys Val Ala Met Leu Phe Gin 15 10 15

Pro Thr Val Leu Arg Cys His Phe Ser Thr Ser Ser His Gin Pro Ala 20 25 30

Val Val Gin Trp Lys Phe Lys Ser Tyr Cys Gin Asp Arg Met Gly Glu 35 40 45

Ser Leu Gly Met Ser Ser Thr Arg Ala Gin Ser Leu Ser Lys Arg Asn 50 55 60

Leu Glu Trp Asp Pro Tyr Leu Asp Cys Leu Asp Ser Arg Arg Thr Val 65 70 75 80

Arg Val Val Ala Ser Lys Gin Gly Ser Thr Val Thr Leu Gly Asp Phe 85 90 95

Tyr Arg Gly Arg Glu He Thr He val His Asp Ala Asp Leu Gin lie 100 105 110 '

Gly Lys Leu Met Trp Gly Asp Ser Gly Leu Tyr Tyr Cys lie He Thr 115 120 125

Thr Pro Asp Asp Leu Glu Gly Lys Asn Glu Gly Ser Leu Gly Leu Leu 130 135 140

Val Leu Glu Trp Val 145 <210> 149 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial <400> 149

Asn Asp Leu Glu Asp Lys Asn Ser Pro Phe Tyr Tyr Asp Trp His Ser 15 10 15 <210> 150 <211> 45 <212> PRT <213> Artificial <400> 150

Asn Asp Leu Glu Asp Lys Asn Ser Pro Phe Tyr Tyr Gly Ala Pro Tyr 15 10 15 lie Phe Val Lys Arg Met Gly Gly Gin Met Lys Arg Thr Gin Ala Gly 20 25 30

Thr Glu Val Pro Ser Thr Phe Leu Leu Asp Trp His Ser 35 40 45 <210> 151 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <400> 151

Asn Asp Leu Glu Asp 1 5

<210> 152 <211> 21 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 152 gctccaggcc ataaggactt c 21

<210> 153 <211> 21 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 153 cagcttcaaa ctctcccctg c 21

<210> 154 <211> 103 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 154 gctccaggcc ataaggactt cattccaaat atgattacag gagcagccca ggcggatgta 60 gctgttttag ttgtagatgc cagcagggga gagtttgaag ctg 103

<210> 155 <211> 20 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 155 ttccttgcca ggacctagag 20

<210> 156 <211> 20 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 156 cataaacctt tcgccttgac 20

<210> 157 <211> 128 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 157 ttccttgcca ggacctagag tttgttcagt tccaccccac aggcatatat ggtgctggtt 60 gtctcattac ggaaggatgt cgtggagagg gaggcattct cattaacagt caaggcgaaa 120 ggtttatg 128

<210> 158 <211> 21 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <40 0> 158 aatttgtcaa gtcggtgcag c 21

<210> 159 <211> 20 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 159 tcaccccttc atttttgcgt 20

<210> 160 <211> 106 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 160 aatttgtcaa gtcggtgcag ctggcaagac ctaaaggatt atatgcgtca ggcaggagaa 60 gtgacttatg cagatgctca caagggacgc aaaaatgaag gggtga 106

<210> 161 <211> 24 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <40 0> 161 cccaaaatgt ataaggaaga aggc 24

<210> 162 <211> 20 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 162 ttcaaagcag gcgaacttca 20

<210> 163 <211> 140 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 163 cagccaggtt atgccaacac tttgagggat gcagctccca aaatgtataa ggaagaaggc 60 ctaaaagcat tctacaaggg ggttgctcct ctctggatga gacagatacc atacaccatg 120 atgaagttcg cctgctttga 140

<210> 164 <211> 23 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <40 0> 164 tggcaagaag aaggtctggt tag 23

<210> 165 <211> 22 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 165 tgatcagccc atctttgatg ag 22

<210> 166 <211> 101 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 166 tggcaagaag aaggtctggt tagaccccaa tgagaccaat gaaatcgcca atgccaactc 60 ccgtcagcag atccggaagc tcatcaaaga tgggctgatc a 101

<210> 167 <211> 20 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 167 cggtttgctg cggtaatcat 20

<210> 168 <211> 21 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 168 tttcttgctg ccagtctgga c 21

<210> 169 <211> 122 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 169 cggtttgctg cggtaatcat gaggataaga gagccacgaa ccacggcact gattttcagt 60 tctgggaaaa tggtgtgcac aggagccaag agtgaagaac agtccagact ggcagcaaga 120 aa 122

<210> 170 <211> 19 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 170 atttgggtcg cggttcttg 19

<210> 171 <211> 21 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 171 tgccttgaca ttctcgatgg t 21

<210> 172 <211> 133 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 172 atttgggtcg cggttcttgt ttgtggatcg ctgtgatcgt cacttgacaa tgcagatctt 60 cgtgaagact ctgactggta agaccatcac cctcgaggtt gagcccagtg acaccatcga 120 gaatgtcaag gca 133

<210> 173 <211> 20 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 173 tgggaacaag agggcatctg 20

<210> 174 <211> 22 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 174 ccaccactgc atcaaattca tg 22

<210> 175 <211> 86 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 175 tgggaacaag agggcatctg ctaaagtttc agattccatt tctgctcagt atccagtagt 60 ggatcatgaa tttgatgcag tggtgg 86

<210> 176 <211> 19 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 176 tgagagtgat tcgcgtggg 19

<210> 177 <211> 21 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 177 ccagggtacg aggctttcaa t 21

<210> 178 <211> 91 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 178 tgagagtgat tcgcgtgggt acccgcaaga gccagcttgc tcgcatacag acggacagtg 60 tggtggcaac attgaaagcc tcgtaccctg g 91

<210> 179 <211> 21 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 179 tgacactggc aaaacaatgc a 21

<210> 180 <211> 21 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 180 ggtccttttc accagcaagc t 21

<210> 181 <211> 94 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 181 tgacactggc aaaacaatgc agactttgct ttccttggtc aggcagtata atccaaagat 60 ggtcaaggtc gcaagcttgc tggtgaaaag gacc 94

<210> 182 <211> 20 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 182 gaggccgtca ccaagaacat 20

<210> 183 <211> 19 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 183 ggacagccgg tcagagctc 19

<210> 184 <211> 111 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 184 gaggccgtca ccaagaacat tcacgagtcc tgcatgagcc agataggctg gaaccgcatc 60 atcgtggaga agcccttcgg gagggacctg cagagctctg accggctgtc c 111 <210> 185 <211> 21

<212> ADN <213> Artificial <400> 185 aatgacgcac gtaagagacg c 21 <210> 186 <211> 20 <212> ADN <213> Artificial <400> 186 gagtgccctt cacagcctca 20 <210> 187 <211> 101 <212> ADN <213> Artificial <400> 187 aatgacgcac gtaagagacg ctcggggaag atgtagctgg acctctgagt ctccttggga 60 ggaggggaag tggccagatg ttgaggctgt gaagggcact c 101 <210> 188 <211> 22 <212> ADN <213> Artificial <400> 188 cacagctcgt gcctcagtac tg 22 <210> 189 <211> 20 <212> ADN <213> Artificial <40 0> 189 agctacatct tccccgagcg 20 <210> 190 <211> 97 <212> ADN <213> Artificial <400> 190 cacagctcgt gcctcagtac tgagggtatg gaggaaaagg cagtcggtca gtgtctaaaa 60 atgacgcacg taagagacgc tcggggaaga tgtagct 97 <210> 191 <211> 28 <212> ADN <213> Artificial <400> 191 gaagatgtag ctggacctct gagattta 28 <210> 192 <211> 24 <212> ADN <213> Artificial <400> 192 gttggaccct gtaattcgat cttt 24 <210> 193 <211> 92 <212> ADN <213> Artificial <40 0> 193 gaagatgtag ctggacctct gagatttact tttctcaagg tggacaagct gtagccatcg 60 ggcaatttaa agatcgaatt acagggtcca ac 92 <210> 194 <211> 23 <212> ADN <213> Artificial <400> 194 atgacgcacg taagagacgc teg 23 <210> 195 <211> 25 <212> ADN <213> Artificial <400> 195 ggagttcagc ctgctgtcca tcaag 25 <210> 196 <211> 124 <212> ADN <213> Artificial <400> 196 atgacgcacg taagagacgc tcggggaaga tgtagctgga cctctgagtc tccttgggag 60 gaggggaagt ggccagatgt tgaggctgtg aagggcactc ttgatggaca gcaggctgaa 120 ctcc 124 <210> 197 <211> 20

<212> ADN <213> Artificial <400> 197 agccaccacc attaccctga 20 <210> 198 <211> 19 <212> ADN <213> Artificial <400> 198 tgccttccac tccacgatg 19 <210> 199 <211> 104 <212> ADN <213> Artificial <400> 199 agccaccacc attaccctga tttccaccag gagctccagg accgggggcc aaagtcttgg 60 gcattggaaa gaagggagtt ggacccatcg tggagtggaa ggca 104 <210> 200 <211> 19 <212> ADN <213> Artificial <400> 200 gccaccgcta catgaagca 19 <210> 201 <211> 19

<212> ADN <213> Artificial <400> 201 ctggacggca gggacaaat 19 <210> 202 <211> 142 <212> ADN <213> Artificial <400> 202 gccaccgcta catgaagcag gcccaggccc taggtcctca gatgatggga aaacccctgt 60 actggggggc ggacaggagc tcccaggttt catcttatcc aatgcacccg ctgctgeagc 120 gagatttgtc cctgccgtcc ag 142 <210> 203 <211> 21 <212> ADN <213> Artificial <400> 203 tcctcctcct gctgctgatt g 21 <210> 204 <211> 20 <212> ADN <213> Artificial <400> 204 tgggcctgct tcatgtagcg 20 <210> 205 <211> 145

<212> ADN <213> Artificial <400> 205 tcctcctcct gctgctgatt ggagtgtgct ggtgccagtg ctgtcctcag tattgctgct 60 gctatatccg ctgtccctgc tgtcctgccc actgctgctg tcctgaggaa gccctggccc 120 gccaccgcta catgaagcag gccca 145

<210> 206 <211> 23 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 206 ccgcagtatt aatcagcctc atg 23

<210> 207 <211> 25 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 207 aatctcctca gttgtgcttt ctttg 25

<210> 208 <211> 101 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 208 ccgcagtatt aatcagcctc atgtgggttt gtaataagtg tgcatataaa tttcagagga 60 agagaagaca caaactcaaa gaaagcacaa ctgaggagat t 101

<210> 209 <211> 21 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 209 gaacgcagaa gatcgtggag t 21

<210> 210 <211> 20 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 210 ctgaagagct ggatggagcc 20

<210> 211 <211> 106 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 211 gaacgcagaa gatcgtggag tggaaaccag ggactcaggc caacatctct caaagccaca 60 aggacagagt ctgcaccttt gacaacggct ccatccagct cttcag 106

<210> 212 <211> 21 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 212 ctgcactttg tcgctgtcat c 21

<210> 213 <211> 26 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 213 caatctcctc agttgtgctt tctttg 26

<210> 214 <211> 145 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 214 ctgcactttg tcgctgtcat ccttgctttt ctcgctgctg tggccgcagt attaatcagc 60 ctcatgtggg tttgtaataa gtgtgcatat aaatttcaga ggaagagaag acacaaactc 120 aaagaaagca caactgagga gattg 145

<210> 215 <211> 21 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 215 tgctgcacgt ctctgagatc c 21

<210> 216 <211> 23 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 216 cacctctggc ctcaaaacca etc 23

<210> 217 <211> 208 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 217 tgctgcacgt ctctgagatc ctctatgaag acctgcactt tgtcgctgtc atccttgctt 60 ttctcgctgc tgtggccgca gtattaatca gcctcatgtg ggtttgtaat aagtgtgcat 120 ataaatttca gaggaagaga agacacaaac tcaaaggtaa ccccctgggc cttgtgataa 180 tccatgagtg gttttgaggc cagaggtg 208

<210> 218 <211> 21 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 218 gctgcacgtc tctgagatcc t 21

<210> 219 <211> 20 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 219 cacctctggc ctcaaaacca 20 <210> 220

<211> 207 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 220 gctgcacgtc tctgagatcc tctatgaaga cctgcacttt gtcgctgtca tccttgcttt 60 tctcgctgct gtggccgcag tattaatcag cctcatgtgg gtttgtaata agtgtgcata 120 taaatttcag aggaagagaa gacacaaact caaaggtaac cccctgggcc ttgtgataat 180 ccatgagtgg ttttgaggoc agaggtg 207

<210> 221 <211> 21 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 221 atgggcctcg cttagaagtt g 21

<210> 222 <211> 22 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 222 ttctgtgcaa gcttctccag tc 22

<210> 223 <211> 151 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 223 atgggcctcg cttagaagtt gcatctgaga aagtagccca gaagacaatg gactatgtgt 60 gctgtgctta caacaacata accggcaggc aagatgaaac tcatttcaca gttatcatca 120 cttccgtagg actggagaag ettgcacaga a 151

<210> 224 <211> 21 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 224 atcacacact gtccatggcg t 21

<210> 225 <211> 26 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 225 gtctctcaaa tagccatatg atctgg 26

<210> 226 <211> 107 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 226 atcacacact gtccatggcg tcagaggtca ggccctctac ctacccgtcc actatggctt 60 ccacactcca gcatcagaca tccagatcat atggctattt gagagac 107

<210> 227 <211> 19 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 227 gctttcatgg agcccttcg 19

<210> 228 <211> 18 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 228 gcctgacctc tgacgcca 18

<210> 229 <211> 131 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 229 gctttcatgg agcccttcgg tgacacactt ggggtctttc agtgcaaaat atacctcctt 60 ctcttcggtg cttgctcggg gctgaaggtg acagtgccat cacacactgt ccatggcgtc 120 agaggtcagg c 131

<210> 230 <211> 21 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 230 ctctgcattt gcccctttag a 21

<210> 231 <211> 21 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 231 gatggcactg tcaccttcag c 21

<210> 232 <211> 105 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 232 ctctgcattt gcccctttag attgtgaaat gtggctcaag gtcttcacaa ctttcctttc 60 ctttgcaaca ggtgcttgct cggggctgaa ggtgacagtg ccatc 105

<210> 233 <211> 21 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 233 gtgagtacag tgaccgctgg g 21

<210> 234 <211> 23 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 234 ggagaagagt ctggaatgac caa 23

<210> 235 <211> 137 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 235 gtgagtacag tgaccgctgg ggagacagag cgatcgagag aaatgtctac ctctctacct 60 gacagctgtg tgcgctgggt tcctcctcca cctcctgtcc tgccaccccc aagattggtc 120 attccagact cttctcc 137

<210> 236 <211> 20 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 236 gcccagtttt gctgtggaga 20 <210> 237 <211> 24

<212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 237 ggtagacatt tctctcgatc gctc 24

<210> 238 <211> 227 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 238 gcccagtttt gctgtggaga ttatgccaga gtgggtgttt gttggcctgg tgctcctggg 60 cgtcttcctc ttcttcgtcc tggtggggat ctgctggtgc cagtgctgcc ctcacagctg 120 otgctgctat gtccgctgcc catgctgccc agattcctgc tggtgccctc aagcctgtga 180 gtacagtgac cgctggggag acagagcgat cgagagaaat gtctacc 227

<210> 239 <211> 22 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 239 tgtggagatt atgccagagt gg 22

<210> 240 <211> 23 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 240 gacatttctc tcgatcgctc tgt 23

<210> 241 <211> 211 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 241 tgtggagatt atgccagagt gggtgtttgt tggcctggtg ctcctgggcg tcttcctctt 60 cttcgtcctg gtggggatct gctggtgcca gtgctgccct cacagctgct gctgctatgt 120 ccgctgccca tgctgcccag attcctgctg gtgccctcaa gcctgtgagt acagtgaccg 180 ctggggagac agagcgatcg agagaaatgt c 211

<210> 242 <211> 29 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 242 actctattac tgtattatca ccaccccag 29

<210> 243 <211> 21 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 243 ccaacaaaca cccactccaa c 21

<210> 244 <211> 93 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 244 actctattac tgtattatca ccaccccaga tgacctggag gggaaaaatg agggctcact 60 gggactgctg gtgttggagt gggtgtttgt tgg 93

<210> 245 <211> 29 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 245 gtgctccata tatatttgtc aagagaatg 29

<210> 246 <211> 20 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 246 ggaggctgtg ccagtctagg 20

<210> 247 <211> 102 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 247 gtgctccata tatatttgtc aagagaatgg ggggacagat gaagaggaca caggCtggca 60 ctgaggtccc ctccactttc ctcctagact ggcacagcct cc 102

<210> 248 <211> 18 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 248 actggcacag cctccagg 18

<210> 249 <211> 21 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 249 catttgcatt ttgcactcat g 21

<210> 250 <211> 91 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 250 actggcacag cctccaggtt ggcgggctca tctgcgctgg ggttctgtgc gccatgggca 60 tcatcatcgt catgagtgca aaatgcaaat g 91

<210> 251 <211> 20 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 251 ttgtgttcct ggcaggcttt 20

<210> 252 <211> 20 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 252 tcatctgtcc ccccattctc 20

<210> 253 <211> 114 <212> ADN <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Oligonucleótido sintético <400> 253 ttgtgttcct ggcaggcttt cctgtcctgg acgccaatga cctagaagat aaaaacagtc 60 ctttctacta tggtgctcca tatatatttg tcaagagaat ggggggacag atga 114 <210> 254 <211> 31 <212> ADN <213> Artificial <400> 254 ctagctagcc accatgcaga aggtgaccct g 31 <210> 255 <211> 30 <212> ADN <213> Artificial <400> 255 cgcgaccggt ccgctttggg ctgagcctgg 30 <210> 256 <211> 21 <212> ADN <213> Artificial <400> 256 cctgtgtcct cttcatctgt c 21 <210> 257 <211> 21 <212> ADN <213> Artificial <400> 257 gacagatgaa gaggacacag g 21 <210> 258 <211> 32 <212> ADN <213> Artificial <400> 258 ctagctagcc accatgaggc ctctgcccag eg 32 <210> 259 <211> 31

<212> ADN <213> Artificial <400> 259 cgcgaattcg acactcaaca tcttccagct c 31 <210> 260 <211> 18 <212> ADN <213> Artificial <400> 260 aaggctgcat aggagctg 18 <210> 261 <211> 23 <212> ADN <213> Artificial <400> 261 caatgagttg gaaatcaagc cac 23 <210> 262 <211> 70 <212> ADN <213> Artificial <400> 262 cgcgaccggt ccaaaccact catggattat cacaaggccc agggggttac ctttgagttt 60 gtgtcttctc 70 <210> 263 <211> 33

<212> ADN <213> Artificial <400> 263 ctagctagcc accatggata gggtcttgct gag 33 <210> 264 <211> 30 <212> ADN <213> Artificial <400> 264 cgcgaattcg ggtagagagg tagacatttc 30 <210> 265 <211> 36 <212> ADN <213> Artificial <400> 265 gcgcttcgaa gccaccatgt ggctcaaggt cttcac 36 <210> 266 <211> 33 <212> ADN <213> Artificial <400> 266 cgcgaccggt ccctctggat ggtcttgctg ctg 33 <210> 267 <211> 33 <212> ADN <213> Artificial <400> 267 ctagctagcc accatggcat ggcccaaact gcc 33 <210> 268 <211> 34 <212> ADN <213> Artificial <400> 268 cgcgaccggt ccaatgacca cactccttcc acta 34 <210> 269 <211> 34 <212> ADN <213> Artificial <400> 269 ctagctagcc accatggtgt tcgcattttg gaag 34 <210> 270 <211> 29 <212> ADN <213> Artificial <400> 270 ctggagttca gcctgctgtc catcaagag 29 <210> 271 <211> 29 <212> ADN <213> Artificial <400> 271 ctcttgatgg acagcaggct gaactccag 29 <210> 272 <211> 33

<212> ADN <213> Artificial <400> 272 cgcgaccggt cctgccttaa ccactccctt ttc 33 <210> 273 <211> 25 <212> ADN <213> Artificial <400> 273 cctcagtact gaggcacgag ctgtg 25 <210> 274 <211> 20 <212> ADN <213> Artificial <400> 274 cctcagtact gagggtatgg 20 <210> 275 <211> 29 <212> ADN <213> Artificial <400> 275 cgcggatccc cagtctagga ggaaagtgg 29 <210> 276 <211> 29 <212> ADN <213> Artificial <400> 276 cgcggatccg tcttcataga ggatctcag 29 <210> 277 <211> 29 <212> ADN <213> Artificial <400> 277 cgcggatccc ataatctcca cagcaaaac 29 <210> 278 <211> 33 <212> ADN <213> Artificial <400> 278 aaccggtgcc accatgtggc tcaaggtctt cac 33 <210> 279 <211> 29 <212> ADN <213> Artificial <400> 279 cgcggatcct tttcctttct gtgcaagct 29 <210> 280 <211> 30 <212> ADN <213> Artificial <400> 280 gcgttcgaag cccagctcca ggacgtggtg 30 <210> 281 <211> 29 <212> ADN <213> Artificial <400> 281 cgcggatcct tccttatcgg ggtctcctg 29 <210> 282 <211> 28 <212> ADN <213> Artificial <400> 282 gcgcttcgaa atcccagacg gtttcgtg 28 <210> 283 <211> 29 <212> ADN <213> Artificial <400> 283 cgcggatcct ggatgtgaag aagtgagat 29

<210> 284 <211> 36 <212> PRT <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Péptido sintético <400> 284

His Ser Ser Cys Leu Ser Thr Glu Gly Met Glu Glu Lys Ala Vai Gly 15 10 15

Gin Cys Leu Lys Met Thr His Vai Arg Asp Ala Arg Gly Arg Cys Ser 20 25 30

Trp Thr Ser Glu 35

<210> 285 <211> 62 <212> PRT <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Péptido sintético <400> 285

His Ser Ser Cys Leu Ser Thr Glu Gly Met Glu Glu Lys Ala Vai Gly 15 10 15

Gin Cys Leu Lys Met Thr His Vai Arg Asp Ala Arg Gly Arg Cys Ser 20 25 30

Trp Thr Ser Glu Ser Pro Trp Glu Glu Gly Lys Trp Pro Asp Vai Glu 35 40 45

Ala Vai Lys Gly Thr Leu Asp Gly Gin Gin Ala Glu Leu Gin 50 55 60

<210> 286 <211> 14 <212> PRT <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Péptido sintético <400> 286

Thr Asn His Arg Asp Phe Gly His Trp Lys Ser Asp Lys Phe 15 10

<210> 287 <211> 2 <212> PRT <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Péptido sintético <400> 287

Arg Gin 1

<210> 288 <211> 44 <212> PRT <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Péptido sintético <400> 288

Ala Leu Ala Arg His Arg Tyr Met Lys Gin Ala Gin Ala Leu Gly Pro 15 10 15

Gin Met Met Gly Lys Pro Leu Tyr Trp Gly Ala Asp Arg Ser Ser Gin 20 25 30

Val Ser Ser Tyr Pro Met His Pro Leu Leu Gin Arg 35 40

<210> 289 <211> 14 <212> PRT <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Péptido sintético <400> 289

Met Trp Leu Lys Val Phe Thr Thr Phe Leu Ser Phe Ala Thr 15 10

<210> 290 <211> 88 <212> PRT <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Péptido sintético <400> 290

Gly Gin Lys Gin Asn Thr Gly Lys Leu Lys His Phe Gin Ala Met Lys 15 10 15

Met Leu Trp Met Thr Ser Glu Tyr Met Asn Leu Leu Leu Phe Gin Met 20 25 30

Phe Leu Val Phe Pro Gly Ser Gin Ala Gly Leu Phe Gin Pro Leu He 35 40 45

Val Tyr Arg Gly Lys lie Cys Thr Val Gin Cys Met Lys Leu Phe Ser 50 55 60

Thr Ser Leu Pro Ser Ser Lys Thr He Gin Ser Glu Leu Ser Trp Ala 65 70 75 80

Lys Gin Tyr lie Arg Val Lys Phe 85

<210> 291 <211> 6 <212> PRT <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Péptido sintético <400> 291

Val Gly Phe Pro Ser Gly 1 5

<210> 292 <211> 34 <212> PRT <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Péptido sintético <400> 292

Phe Met Leu Ala Ala Pro Ser Gin Arg Glu Glu Glu Lys Lys Ile Trp 15 10 15

Gin Gly Pro Gly Leu Leu Leu Cys Pro His Cys Asn Pro His Tyr His 20 25 30

Gin Tyr

<210> 293 <211> 20 <212> PRT <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Péptido sintético <400> 293

Cys Glu Tyr Ser Asp Arg Trp Gly Asp Arg Ala Ile Glu Arg Asn Val 1 5 10 15

Tyr Leu Ser Thr 20

<210> 294 <211> 29 <212> PRT <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Péptido sintético <400> 294

Gly Ala Pro Tyr lie Phe Val Lys Arg Met Gly Gly Gin Met Lys Arg 15 10 15

Thr Gin Ala Gly Thr Glu Val Pro Ser Thr Phe Leu Leu 20 25

<210> 295 <211> 26 <212> PRT <213> Organismo Artificial <22 0> <223> Péptido sintético <400> 295

Glu Trp Arg Ser Ser Gly Glu Gin Ala Gly Arg Gly Trp Gly Ser Pro 15 10 15

Pro Leu Thr Thr Gin Leu Ser Pro Thr Gly 20 25

<210> 296 <211> 82 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 296

Ala Leu Ser Leu Gly Gin Asp Pro Ser Asn Asp Cys Asn Asp Asn Gin 15 10 15

Arg Glu Val Arg lie Val Ala Gin Arg Arg Gly Gin Asn Glu Pro Val 20 25 30

Leu Gly Val Asp Tyr Arg Gin Arg Lys lie Thr lie Gin Asn Arg Ala 35 40 45

Asp Leu Val lie Asn Glu Val Met Trp Trp Asp His Gly Val Tyr Tyr 50 55 60

Cys Thr lie Glu Ala Pro Gly Asp Thr Ser Gly Asp Pro Asp Lys Glu 65 70 75 80

Val Lys

<210> 297 <211> 63 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 297

Met Gin Lys Val Thr Leu Gly Leu Leu Val Phe Leu Ala Gly Phe Pro 15 10 15

Val Leu Asp Ala Asn Asp Leu Glu Asp Lys Asn Ser Pro Phe Tyr Tyr 20 25 30

Gly Ala Pro Tyr lie Phe Val Lys Arg Met Gly Gly Gin Met Lys Arg 35 40 45

Thr Gin Ala Gly Thr Glu Val Pro Ser Thr Phe Leu Leu Asp Trp 50 55 60

<210> 298 <211> 145 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 298

Met Arg Pro Leu Pro Ser Gly Arg Arg Lys Thr Arg Gly lie Ser Leu 15 10 15

Gly Leu Phe Ala Leu Cys Leu Ala Ala Ala Arg Cys Leu Gin Ser Gin 20 · 25 30

Gly Val Ser Leu Tyr lie Pro Gin Ala Thr lie Asn Ala Thr Val Lys 35 40 45

Glu Asp lie Leu Leu Ser Val Glu Tyr Ser Cys His Gly Val Pro Thr 50 55 60 lie Glu Trp Thr Tyr Ser Ser Asn Trp Gly Thr Gin Lys lie Val Glu 65 70 75 80

Trp Lys Pro Gly Thr Gin Ala Asn lie Ser Gin Ser His Lys Asp Arg 85 90 95

Val Cys Thr Phe Asp Asn Gly Ser lie Gin Leu Phe Ser Val Gly Val 100 105 110

Arg Asp Ser Gly Tyr Tyr Val lie Thr Val Thr Glu Arg Leu Gly Ser 115 120 125

Ser Gin Phe Gly Thr lie Val Leu His Val Ser Glu lie Leu Tyr Glu 130 135 140

Asp 145

<210> 299 <211> 184 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 299

Met Asp Arg Val Leu Leu Arg Trp lie Ser Leu Phe Trp Leu Thr Ala 15 10 15

Met Val Glu Gly Leu Gin Val Thr Val Pro Asp Lys Lys Lys Val Ala 20 25 30

Met Leu Phe Gin Pro Thr Val Leu Arg Cys His Phe Ser Thr Ser Ser 35 40 45

His Gin Pro Ala Val Val Gin Trp Lys Phe Lys Ser Tyr Cys Gin Asp 50 55 60

Arg Met Gly Glu Ser Leu Gly Met Ser Ser Thr Arg Ala Gin Ser Leu 65 70 75 80

Ser Lys Arg Asn Leu Glu Trp Asp Pro Tyr Leu Asp Cys Leu Asp Ser 85 90 95

Arg Arg Thr Val Arg Val Val Ala Ser Lys Gin Gly Ser Thr Val Thr 100 105 110

Leu Gly Asp Phe Tyr Arg Gly Arg Glu lie Thr lie Val His Asp Ala 115 120 125

Asp Leu Gin lie Gly Lys Leu Met Trp Gly Asp Ser Gly Leu Tyr Tyr 130 135 140

Cys lie lie Thr Thr Pro Asp Asp Leu Glu Gly Lys Asn Glu Asp Ser 145 150 155 160

Val Glu Leu Leu Val Leu Gly Arg Thr Gly Leu Leu Ala Asp Leu Leu 165 170 175

Pro Ser Phe Ala Val Glu lie Met 180

<210> 300 <211> 335 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 300

Met Trp Leu Lys Val Phe Thr Thr Phe Leu Ser Phe Ala Thr Gly Ala 15 10 15

Cys Ser Gly Leu Lys Val Thr Val Pro Ser His Thr Val His Gly Val 20 25 30

Arg Gly Gin Ala Leu Tyr Leu Pro Val His Tyr Gly Phe His Thr Pro 35 40 45

Ala Ser Asp lie Gin lie lie Trp Leu Phe Glu Arg Pro HÍ3 Thr Met 50 55 60

Pro Lys Tyr Leu Leu Gly Ser Val Asn Lys Ser Val Val Pro Asp Leu

65 70 75 SO

Glu Tyr Gin His Lys Phe Thr Met Met Pro Pro Asn Ala Ser Leu Leu 85 90 95 lie Asn Pro Leu Gin Phe Pro Asp Glu Gly Asn Tyr lie Val Lys Val 100 105 110

Asn lie Gin Gly Asn Gly Thr Leu Ser Ala Ser Gin Lys lie Gin Val 115 120 125

Thr Val Asp Asp Pro Val Thr Lys Pro Val Val Gin lie His Pro Pro 130 135 140

Ser Gly Ala Val Glu Tyr Val Gly Asn Met Thr Leu Thr Cys His Val 145 150 155 160

Glu Gly Gly Thr Arg Leu Ala Tyr Gin Trp Leu Lys Asn Gly Arg Pro 165 170 175

Val His Thr Ser Ser Thr Tyr Ser Phe Ser Pro Gin Asn Asn Thr Leu 180 185 190

His lie Ala Pro Val Thr Lys Glu Asp lie Gly Asn Tyr Ser Cys Leu 195 200 205

Val Arg Asn Pro Val .Ser Glu Met Glu Ser Asp He lie Met Pro lie 210 215 220

He Tyr Tyr Gly Pro Tyr Gly Leu Gin Val Asn Ser Asp Lys Gly Leu 225 230 235 240

Lys Val Gly Glu Val Phe Thr Val Asp Leu Gly Glu Ala He Leu Phe 245 250 255

Asp Cys Ser Ala Asp Ser His Pro Pro Asn Thr Tyr Ser Trp lie Arg 260 265 270

Arg Thr Asp Asn Thr Thr Tyr lie lie Lys His Gly Pro Arg Leu Glu 275 280 285

Vai Ala Ser Glu Lys Vai Ala Gin Lys Thr Met Asp Tyr Vai Cys Cys 290 295 300

Ala Tyr Asn Asn lie Thr Gly Arg Gin Asp Glu Thr His Phe Thr Val 305 310 315 320 lie He Thr Ser Val Gly Leu Glu Lys Leu Ala Gin Lys Gly Lys 325 330 335

<210> 301 <211> 110 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 301

Ala Gin Leu Gin Asp Val Val Val Thr Trp Arg Phe Lys Ser Phe Cys 15 10 15

Lys Asp Pro lie Phe Asp Tyr Tyr Ser Ala Ser Tyr Gin Ala Ala Leu 20 25 30

Ser Leu Gly Gin Asp Pro Ser Asn Asp Cys Asn Asp Asn Gin Arg Glu 35 40 45

Val Arg lie Val Ala Gin Arg Arg Gly Gin Asn Glu Pro Val Leu Gly 50 55 60

Val Asp Tyr Arg Gin Arg Lys He Thr lie Gin Asn Arg Ala Asp Leu 65 70 75 80

Val He Asn Glu Val Met Trp Trp Asp His Gly Val Tyr Tyr Cys Thr 85 90 95 lie Glu Ala Pro Gly Asp Thr Ser Gly Asp Pro Asp Lys Glu 100 105 110

<210> 302 <211> 268 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 302 lie Pro Asp Gly Phe Val Asn val Thr val Gly Ser Asn val Thr Leu 15 10 15 lie Cys lie Tyr Thr Thr Thr Val Ala Ser Arg Glu Gin Leu Ser lie 20 25 30

Gin Trp Ser Phe Phe His Lys Lys Glu Met Glu Pro lie Ser His Ser 35 40 45

Ser Cys Leu Ser Thr Glu Gly Met Glu Glu Lys Ala Val Ser Gin Cys 50 55 60

Leu Lys Met Thr His Ala Arg Asp Ala Arg Gly Arg Cys Ser Trp Thr 65 70 75 80

Ser Glu Ser Pro Trp Glu Glu Gly Lys Trp Pro Asp Val Glu Ala Val 85 90 95

Lys Gly Thr Leu Asp Gly Gin Gin Ala Glu Leu Gin He Tyr Phe Ser 100 105 110

Gin Gly Gly Gin Ala Val Ala lie Gly Gin Phe Lys Asp Arg lie Thr 115 120 125

Gly Ser Asn Asp Pro Gly Asn Ala Ser lie Thr He Ser His Met Gin 130 135 140

Pro Ala Asp Ser Gly He Tyr He Cys Asp Val Asn Asn Pro Pro Asp 145 150 155 160

Phe Leu Gly Gin Asn Gin Gly lie Leu Asn Val Ser Val Leu Val Lys 165 170 175

Pro Ser Lys Pro Leu Cys Ser Val Gin Gly Arg Pro Glu Thr Gly His 180 . 185 190

Thr lie Ser Leu Ser Cys Leu Ser Ala Leu Gly Thr Pro Ser Pro Val 195 200 205

Tyr Tyr Trp His Lys Leu Glu Gly Arg Asp He Val Pro Val Lys Glu 210 215 220

Asn Phe Asn Pro Thr Thr Gly lie Leu Val lie Gly Asn Leu Thr Asn 225 230 235 240

Phe Glu Gin Gly Tyr Tyr Gin Cys Thr Ala He Asn Arg Leu Gly Asn 245 250 255

Ser Ser Cys Glu lie Asp Leu Thr Ser Ser His Pro 260 265

DOCUMENTOS REFERIDOS NA DESCRIÇÃO

Esta lista de documentos referidos pelo autor do presente pedido de patente foi elaborada apenas para informação do leitor. Não é parte integrante do documento de patente europeia. Não obstante o cuidado na sua elaboração, o IEP não assume qualquer responsabilidade por eventuais erros ou omissões.

Documentos de patente referidos na descrição • US 969865 P [0001] • US 60969799 B [0001] • US 60969780 B [0001] • US 60969806 B [0001] • US 60969769 B [0001] • US 60969788 B [0001] • US 4469863 A [0237] • US 4476301 A [0237] • US 5023243 A [0237] • US 5177196 A [0237] • US 5188897 A [0237] • US 5264423 A [0237] • US 5276019 A [0237] • US 5278302 A [0237] • US 5286717 A [0237] • US 5321131 A [0237] • US 5399676 A [0237] • US 5405939 A [0237] • US 5453496 A [0237] • US 5455233 A [0237] • US 5466677 A [0237] [0239] • US 5476925 A [0237] • US 5519126 A [0237] • US 5536821 A [0237] • US 5541306 A [0237] • US 5550111 A [0237] • US 5563253 A [0237] • US 5571799 A [0237] • US 5587361 A [0237] • US 5625050 A [0237] • US 5034506 A [0239] • US 5166315 A [0239] • US 5185444 A [0239] • US 5214134 A [0239] • US 5216141 A [0239] • US 5235033 A [0239] • US 5264562 A [0239] • US 5264564 A [0239] • US 5405938 A [0239] • US 5434257 A [0239] • US 5470967 A [0239] • US 5489677 A [0239] • US 5541307 A [0239] • US 5561225 A [0239] • US 5596086 A [0239] • US 5602240 A [0239] • US 5610289 A [0239] • US 5608046 A [0239] • US 5618704 A [0239] • US 5623070 A [0239] • US 5663312 A [0239] • US 5633360 A [0239] • US 5677437 A [0239] • US 5677439 A [0239] • US 5539082 A [0240] • US 5714331 A [0240] • US 5719262 A [0240] • US 6303374 B [0240] [0242] • US 3687808 A [0241] • US 4873316 A [0263] [0277] • EP 264166 A [0263] [0277] • US 20060034852 A [0285] • WO 2006050262 A [0304] • WO 2006050247 A [0305] • WO 8705330 A [0309] • US 5225539 A, Winter [0340] [0371] • US 5530101 A [0340] [0371] • US 5585089 A [0340] [0371] • US 5693762 A [0340] [0371] • US 6180370 A, Queen [0340] [0371] • US 5677425 A, Bodmer [0345] • US 6165745 A, Ward [0346] • US 6277375 B, Ward [0347] • US 5869046 A [0347] • US 6121022 A, Presta [0347] • US 5624821 A [0348] • US 5648260 A, Winter [0348] • US 6194551 B, Idusogie [0349] • WO 9429351 A, Bodmer [0350] • WO 0042072 A, Presta [0351] • US 5714350 A [0352] • US 6350861 A, Co [0352] • US 20040110704 A, Yamane [0353] • EP 1176195 A, Hanai [0353] • WO 03035835 A, Presta [0353] • WO 9954342 A, Umana [0353] • EP 0154316 A, Nishimura [0354] • EP 0401384 A, Ishikawa [0354] • WO 02092780 A, Short [0360] • WO 03074679 A, Lazar [0360] • US 4816567 A, Cabilly [0371] • US 5545806 A [0372] [0786] • US 5569825 A [0372] • US 5625126 A [0372] • US 5633425 A [0372] • US 5789650 A [0372] • US 5877397 A [0372] • US 5661016 A [0372] • US 5814318 A [0372] • US 5874299 A [0372] • US 5770429 A, Lonberg and Kay [0372] • US 5545807 A, Surani [0372] [0786] • WO 9203918 A [0372] • WO 9312227 A [0372] • WO 9425585 A [0372] • WO 9713852 A [0372] • WO 9824884 A [0372] [0378] [0787] • WO 9945962 A, Lonberg and Kay [0372] • WO 0114424 A, Korman [0372] [0378] • WO 0243478 A, Ishida [0373] • US 5939598 A [0374] • US 6075181 A [0374] • US 6114598 A [0374] • US 6150584 A [0374] • US 6162963 A, Kucherlapati [0374] • US 5223409 A [0376] • US 5403484 A [0376] • US 5571698 A, Ladner [0376] • US 5427908 A [0376] • US 5580717 A, Dower [0376] • US 5969108 A [0376] • US 6172197 A, McCafferty [0376] • US 5885793 A [0376] • US 6521404 A [0376] • US 6544731 A [0376] • US 6555313 A [0376] • US 6582915 A [0376] • US 6593081 A, Griffiths [0376] • US 5476996 A [0377] • US 5698767 A, Wilson [0377] • US 4399216 A [0385] • US 4634665 A [0385] • US 5179017 A, Axel [0385] • WO 8704462 A [0387] • WO 8901036 A [0387] • EP 338841 A [0387] • US 4946778 A, Ladner [0406] • WO 8800052 A [0408] • US 4954617 A [0408] • WO 9410332 A [0408] • US 5260203 A [0415] • US 5455030 A [0415] • US 4881175 A [0415] • US 5132405 A [0415] • US 5091513 A [0415] • US 5476786 A [0415] • US 5013653 A [0415] • US 5258498 A [0415] • US 5482858 A [0415] • US 5399163 A [0445] • US 5383851 A [0445] • US 5312335 A [0445] • US 5064413 A [0445] • US 4941880 A [0445] • US 4790824 A [0445] • US 4596556 A [0445] • US 4487603 A [0445] • US 4486194 A [0445] • US 4447233 A [0445] • US 4447224 A [0445] • US 4439196 A [0445] • US 4475196 A [0445] • US 4522811 A [0446] • US 5374548 A [0446] • US 5399331 A [0446] • US 5416016 A, Low [0446] • US 4366241 A [0496] • US 4376110 A [0496] • US 4517288 A [0496] • US 4837168 A [0496] • US 6696686 B [0507] • WO 0109187 A [0786] • US 5625825 A [0786]

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Claims (15)

1. REIVINDICAÇÕES 1. Uma composição farmacêutica que compreende pelo menos um polipéptido do ectodominio de C10RF32 selecionado a partir do grupo que consiste em: i. um polipéptido do ectodominio de C10RF32 que consiste na sequência de aminoácidos na SEQ ID N°: 299; ii. um polipéptido do ectodominio de C10RF32 que consiste na sequência de aminoácidos na SEQ ID N°: 147; iii. um polipéptido do ectodominio de C10RF32 que consiste na sequência de aminoácidos na SEQ ID N°: 148; iv. um polipéptido variante do ectodominio de C10RF32 que possui uma identidade de sequência de pelo menos 95 % com as sequências de aminoácidos na SEQ ID N° : 299, SEQ ID N° : 147 ou SEQ ID N°: 148; e um diluente ou veiculo farmaceuticamente aceitável.
2. 2. A composição, de acordo com a reivindicação 1, na qual o dito polipéptido consiste na sequência de aminoácidos da SEQ ID N°: 147, SEQ ID N°: 148 ou SEQ ID N°: 299.
3. 3. Um polinucleótido isolado que codifica o polipéptido de acordo com as reivindicações 1 ou 2.
4. 4. Um vetor de expressão que contém pelo menos uma sequência de ácido nucleico de acordo com a reivindicação 3.
5. 5. Uma célula recombinante que compreende um vetor de expressão ou um virus que contém uma sequência de ácido nucleico de acordo com a reivindicação 3, no qual a célula expressa constitutiva ou induzivelmente o polipéptido codificado pelo segmento de ADN.
6. 6. Um método para produzir um polipéptido do ectodomínio de C10RF32, ou fragmento ou conjugado do mesmo, que compreende o cultivo da célula recombinante de acordo com a reivindicação 5, em condições por meio das quais a célula expressa o polipéptido codificado pelo segmento de ADN ou ácido nucleico e a recuperação do dito polipéptido.
7. 7. Um anticorpo ou fragmento de anticorpo que compreende um local de ligação a antigénio que se liga especificamente a um polipéptido selecionado a partir do grupo que consiste em: i) um polipéptido do ectodomínio de C10RF32 que consiste na sequência de aminoácidos na SEQ ID N° : 299; ii) um polipéptido do ectodomínio de C10RF32 que consiste na sequência de aminoácidos na SEQ ID N°: 147; iii) um polipéptido do ectodomínio de G10RF32 que consiste na sequência de aminoácidos na SEQ ID N°: 148.
8. 8. 0 anticorpo ou fragmento de acordo com a reivindicação 7, no qual o anticorpo é um anticorpo completamente humano, anticorpo quimérico, anticorpo humanizado ou primatizado; fragmento Fab, Fab', F(ab')2, F(ab'), F(ab), Fv ou scFv e unidade mínima de reconhecimento.
9. 9. 0 anticorpo ou fragmento de acordo com a reivindicação 7 ou 8, no qual o anticorpo se acopla a um resíduo selecionado a partir de: uma enzima, uma toxina, um agente terapêutico, um agente quimioterápico, ou um marcador detetável; e no qual o marcador detetável é um radioisótopo, um quelante de metal, uma enzima, um composto fluorescente, um composto bioluminescente ou um composto quimiluminescente.
10. 10. Uma composição farmacêutica que compreende o anticorpo de acordo com qualquer das reivindicações 7-9.
11. 11. Uma proteína de fusão que compreende o polipéptido do ectodomínio de C10RF32 isolado solúvel unido a uma sequência de proteína que não é C10RF32.
12. 12. Uma proteína de fusão de acordo com a reivindicação 11, na qual a sequência de proteína que não é C10RF32 é pelo menos uma parte de uma molécula de imunoglobulina.
13. 13. A proteína de fusão de acordo com a reivindicação 11 ou 12, na qual o polipéptido do ectodomínio de C10RF32 seleciona-se a partir de um polipéptido que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID N°: 147, SEQ ID N° : 148 ou SEQ ID N°: 299.
14. 14. A proteína de fusão de acordo com pelo menos uma das reivindicações 11 a 13, na qual a proteína de fusão compreende um fragmento de Fc.
15. 15. A proteína de fusão de acordo com pelo menos uma das reivindicações 11 a 14, que tem a sequência que foi apresentada na SEQ ID N°: 105.