PT2159565E - Microcuvete de utilização única para determinação do teor de hemoglobina em sangue puro - Google Patents

Description

DESCRIÇÃO "Microcuvete de utilização única para determinação do teor de hemoglobina em sangue puro" 0 invento refere-se a uma microcuvete de utilização única para determinação do teor de hemoglobina em sangue puro sem transformação química da hemoglobina, com uma cavidade em forma de fenda, que é formada para aspiração do sangue puro para a cavidade da cuvete por meio de uma força capilar, e estando pelo menos numa zona parcial limitada por duas paredes de cuvete essencialmente paralelas, que na sua superfície orientada para a cavidade, estão revestidas pelo menos parcialmente com um meio de hemólise seco, em que o meio de hemólise é solúvel através do sangue puro e é adequado para hemólise de células sanguíneas, e em que as paredes de cuvete, pelo menos em zonas parciais, são atravessáveis por radiação para fins de medição.

Uma microcuvete de utilização única para determinação de hemoglobina é conhecida, por exemplo, através da US 5 674 457. A microcuvete é produzida preferencialmente como peça única moldada por injecção a partir de um plástico adequado transparente que nas zonas parciais atravessáveis por radiação das paredes da cuvete está opticamente polida, para poder executar uma medição isenta de anomalias de uma reacção de cor. As paredes interiores da cavidade são revestidas com um reagente seco que é formado a partir de desoxicolato de sódio, azida de sódio e nitrito de sódio. Para determinação de hemoglobina num teste de sangue puro é assim utilizado o método de azida de metemoglobina, no qual são aplicados três reagentes. Como agente de hemólise é utilizado por exemplo o desoxicolato de sódio que caustica ou desintegra as paredes de células dos glóbulos vermelhos do sangue. A hemoglobina antes incluída nos eritrócitos apresenta-se agora como solução livre.

Através de um outro reagente, nitrito de sódio (NaN02), o ferro bivalente da hoxihemoglobina e da deoxihemoglobina é oxidado para ferro trivalente na metemoglobina. Os iões de azida do terceiro reagente, azida de sódio (NaN3) formam com a metemoglobina um complexo colorido que apresenta absorção máxima a 540 e 575 nm e, assim, pode ser determinado por fotometria de quantidade. Adicionalmente, é efectuada uma medição de controlo com um comprimento de onda, na qual nenhuma das formas relevantes de hemoglobina apresenta uma absorção notável. A medição de controlo serve, por isso, para compensação de turbações da marcha óptica dos raios e é executada, por exemplo, com um comprimento de onda de 800 nm.

As microcuvetes de utilização única servem para uma determinação rápida e dos custos favoráveis do teor de hemoglobina, por exemplo, para um "screening" de dadores de sangue. Para se conseguir uma evolução efectiva é desejável um tempo de medição, se possível curto, do teor de hemoglobina.

Também é conhecida uma hemólise química ou mecânica (através de ultra-sons) do teste de sangue sem efectuar uma transformação química adjacente da hemoglobina, por exemplo, em azida de metemoglobina. É então medida a absorção com determinados comprimentos de onda e através de um cálculo de matriz é determinada a concentração global de hemoglobina e dos derivados de hemoglobina. Os aparelhos deste tipo são normais para a análise clínica, por exemplo, em estações intensivas. De igual modo, é publicada em W002/011195A1 apenas a hemólise por meio de um agente de hemólise, de preferência desoxicolato de sódio, desoxicolato de potássio ou uma mistura destes sem seguidamente executar uma reacção com um nitrito e/ou uma azida. Estes reagentes adicionais são vistos como higroscópicos e são tornados responsáveis por uma deficiente capacidade de armazenamento das microcuvetes. Devido à deficiente transformação química das formas de hemoglobina é executada uma medição de absorção a 490 até 520 nm. A medição de compensação para tomar em conta a turvação tem lugar na região normal entre 850 e 910 nm. Com este processo, devido às transformações químicas agora desnecessárias do sangue hemolisado é economizado um determinado tempo de reacção. A aspiração do sangue puro na cavidade da cuvete através de uma força capilar é, no entanto, problemática. Na utilização de desoxicolato como agente de hemolização tem lugar uma aspiração fortemente retardada da gota de sangue para dentro da cavidade da cuvete. Em muitos casos não se verifica a entrada ou a mesma é acompanhada com uma formação perturbadora de bolhas de ar. A desejada aceleração da operação de medição não é, por isso, conseguida na prática.

Em DE 10 2006 025 477 Ai é descrita uma microcuvete de utilização única que serve para aspiração de uma gota de sangue através da aspiração da gota de sangue para dentro da cavidade da microcuvete. Através do reagente sobre as paredes da cuvete paralelas entre si, as quais limitam a cavidade (portanto nas paredes interiores), o sangue é hemolisado, portanto tem que ser solúvel através do sangue puro. Em consequência disso, o agente de hemólise, portanto o reagente aplicado nas paredes interiores da cuvete, tem que ser suficientemente hidrófilo para ser solúvel no conhecido sangue aquoso. O presente invento parte da colocação do problema de se obter uma aceleração do decorrer da aspiração da gota de sangue até se obter uma execução expressiva da medição.

Para obtenção deste objectivo está previsto de acordo com o invento numa microcuvete de utilização única do tipo referido anteriormente, que com o agente de hemolização, é depositado pelo menos um aditivo nas paredes e que pelo menos um aditivo apresenta a forma de um sal inerte ou uma mistura de sais inertes, com o que o sangue puro é melhor e mais rapidamente aspirável para dentro da cavidade.

Enquanto as preparações habituais para aceleração do processo de medição eram dirigidas para a transformação química do sangue com reagentes adequados, com o presente invento é conseguida uma aceleração do processo de medição através da aceleração de operações físicas. A adição de um sal inerte, ou seja não reactivo relativamente à hemoglobina, dá origem de forma surpreendente a que o sangue puro seja aspirado melhor e mais rapidamente para dentro da cavidade em forma de fenda da microcuvete de utilização única através de efeito capilar e, para além disso, que o agente de hemólise se decomponha mais rapidamente no sangue puro, de modo que o efeito hemolisante seja acelerado nas células sanguíneas. Tem significado especial, neste caso, o aperfeiçoamento do comportamento de aspiração para a gota de sangue na cavidade em forma de fenda da microcuvete, porque neste caso é conseguida uma aceleração pelo menos de factor 2. 0 efeito de acordo com o invento da aspiração acelerada da gota de sangue para a cavidade em forma de fenda será ainda mais aperfeiçoado, devido a que nas faces interiores das paredes da cuvete é depositado como aditivo suplementar um polímero não reactivo solúvel na água. Em combinação com o sal inerte é, através disto, conseguida uma outra aceleração do comportamento de aspiração.

Um efeito de aceleração semelhante é conseguido - também acumulativo - de modo que como aditivo suplementar seja depositado nas faces interiores das paredes da cuvete um anticoagulante. Uma vez que o anticoagulante dá origem a uma aceleração da gota de sangue para a cavidade em forma de fenda sob efeito capilar, parte-se do princípio que a anomalia na aspiração da gota de sangue nas microcuvetes usadas até agora também pode ser prejudicada por razões de aglutinação e formações de agregados no sangue.

Por fim está previsto de acordo com o invento que para o agente de hemólise e como aditivo suplementar seja depositado um corante nas paredes. Através disto é possível um controlo de qualidade para o revestimento aplicado nas paredes interiores, que é visível devido à adição do corante e, deste modo, pode efectuar-se um controlo de homogeneidade. A aplicação homogénea do revestimento - pelo menos na região de medição da cuvete, representa precisamente um critério essencial para a exactidão da medição e é de importância fundamental para obtenção de uma aspiração da gota de sangue livre de bolhas de ar.

Através da utilização dos aditivos referidos consegue-se com isto produzir uma microcuvete para aspiração rápida e livre de anomalias (isenta de bolhas de ar) de uma gota de sangue que possibilita uma medição mais rápida que até agora. 0 corpo de cuvete da microcuvete é produzido, de preferência, como peça única num processo de moldagem por injecção. Neste caso, o revestimento na face interior da microcuvete é produzido de modo que o agente de hemólise e com ele pelo menos um aditivo seja cheio com solução na cavidade e o solvente possa seguidamente evaporar. De acordo com isto, o agente de hemólise tem que ser solúvel através de um solvente apropriado facilmente volátil, por exemplo em álcool. Agentes de hemólise adequados são conhecidos e enumerados por exemplo em WO02/01195A1. É preferida a utilização de desoxicolatos, como desoxicolato de sódio, de potássio, de cálcio, de morfolina e de amónio. De preferência, utiliza-se desoxicolato de sódio. A percentagem do agente de hemólise no revestimento constitui, de preferência, 70 até 99,9% em peso. Na utilização preferida de vários aditivos, a percentagem do agente de hemólise preferida é de 70 até 85% em peso. O sal inerte adicionado de acordo com o invento, que também pode ser formado através da mistura de vários sais, é por exemplo cloreto de sódio ou cloreto de potássio. A percentagem do sal inerte no revestimento constitui 0,1 até 20% em peso, de preferência 0,2 até 10% em peso, de maior preferência 0,5 até 2% em peso.

Exemplos para polímeros solúveis na água não reactivos previstos como aditivos de acordo com o invento são o polietilenoglicol, polipropilenoglicol, copolímeros em bloco de óxido de etileno e óxido de propileno, silicones funcionalizados, polivinilpirrolidona, álcoois de polivinilo, acetatos de polivinilo, éter de glicol polialquileno (nome comercial Brij), monolaurato de polietileno sorbitano, monoestearato de polietilenoglicol sorbitano, polietileno glicol oleato de sorbitano (nome comercial Tween), octil glicósideo, dietilenoglicol, etilenoglicol éter diglicidílico, glicerol. A percentagem dos polímeros não reactivos solúveis em água no revestimento constitui, de preferência, 0,5 até 25 % em peso, de preferência 12 até 24% em peso, ainda mais preferido 15 até 20% em peso.

Exemplos para anti-coagulantes adequados como aditivo suplementar são heparina e sais de heparina, como heparina sódica, heparina potássica, heparina de amónio e heparina de lítio, citrato, fluoreto de sódio, ACD (dextrose ácida de citrato), jodacetato, hirudina, oxalato, ácido acetilsalicílico, e seus sais, varfarina, cumarina, e seus derivados, 1,3 idandiona, Femprocumona, dicumarol, marcoumar, estreptoquinase, uroquinase, EDTA (=ácido etilenodiamino tetra-acético) ou etilenodiamino tetra-acético). A percentagem do anticoagulante como aditivo constitui, de preferência, 0,05 até 5% em peso, de preferência 1 até 3% em peso. O corante previsto como aditivo suplementar pode ser seleccionado aleatoriamente, desde que o mesmo não perturbe a reacção da hemólise. A percentagem do corante no revestimento constitui preferencialmente 0,2 até 0,5 % em peso. A cavidade utilizada na microcuvete tem preferencialmente na zona de medição uma distância entre as faces interiores das paredes da cuvete de 100 até 200 pm. Fora da zona de medição, principalmente na zona de uma fenda de aspiração para as gotas de sangue, a distância das paredes da cuvete comporta preferencialmente entre 200 e 400 pm. Devido a isto, é facilitada a aspiração da gota de sangue para dentro da cavidade em forma de fenda. Dentro da cavidade desenvolve-se então uma transição gradual na zona de medição que apresenta uma altura de cuvete mais reduzida, portanto uma distância menor entre as faces interiores das paredes da cuvete. A zona de medição caracteriza-se, normalmente, pelas faces exteriores polidas das paredes da cuvete que favorecem o atravessar por radiação sem perturbações das paredes da cuvete com o sangue para análise existente na cavidade.

Como material para o corpo da cuvete é apropriado qualquer material plástico transparente. Na produção de um corpo de cuvete como peça única pelo processo de moldagem por injecção, o material plástico tem que ser apropriado para moldagem por injecção.

Também é possível produzir a microcuvete de acordo com o invento com pelo menos duas peças, cujas duas peças são fixas entre si de forma apropriada, por exemplo por colagem. Neste caso é facilitada a aplicação do revestimento, porque o revestimento na face interior de pelo menos uma parede da cuvete pode ser aplicado por qualquer processo aleatório. Neste caso também é possível prever o revestimento só numa parede interior. Preferido é sem dúvida o revestimento de ambas as paredes da microcuvete localizadas opostas, pelo menos na zona de medição da microcuvete. Na forma de realização da microcuvete de duas peças, esta pode ser realizada também em vidro ou noutros materiais transparentes.

Lisboa, 2015-05-13

Claims (9)

1. REIVINDICAÇÕES 1 - Microcuvete de utilização única para determinação do teor de hemoglobina em sangue puro sem transformação química da hemoglobina, com uma cavidade em forma de fenda que é formada para aspiração do sangue puro para a cavidade da cuvete por meio de uma força capilar, estando limitada em pelo menos uma zona parcial por duas paredes de cuvete essencialmente paralelas, que são revestidas pelo menos parcialmente com um agente de hemólise seco na sua superfície orientada para a cavidade, na qual o agente de hemólise é solúvel no sangue puro e é adequado para hemólise de células sanguíneas, e em que as paredes da cuvete são susceptíveis de ser atravessadas por radiação pelo menos nas zonas parciais para fins de medição, caracterizada por ser depositado pelo menos um aditivo nas paredes conjuntamente com o agente de hemólise para aceleração da aspiração da gota de sangue para dentro da cavidade em forma de fenda, e por pelo menos um aditivo apresentar a forma de um sal inerte ou de uma mistura de sais inertes.
2. 2 - Microcuvete de utilização única de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por o sal inerte ou a mistura de sais inertes constituir uma percentagem de 0,1 até 20% em peso do revestimento global, formado pelo agente de hemólise e por pelo menos um aditivo.
3. 3 - Microcuvete de utilização única de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada por ser depositado um polímero não reactivo solúvel em água como aditivo suplementar sobre as superfícies das paredes da cuvete.
4. 4 - Microcuvete de utilização única de acordo com a reivindicação 3, caracterizada por constituir uma percentagem de 0,5 até 25% em peso do revestimento.
5. 5 - Microcuvete de utilização única de acordo com a reivindicação 1 até 4, caracterizada por ser depositado um anticoagulante como aditivo suplementar sobre as superfícies das paredes da cuvete.
6. 6 - Microcuvete de utilização única de acordo com a reivindicação 5, caracterizada por o anticoagulante constituir uma percentagem de 0,05 até 5% em peso do revestimento.
7. 7 - Microcuvete de utilização única de acordo com uma das reivindicações 1 até 6, caracterizada por ser depositado um corante como aditivo suplementar sobre a superfície das paredes da cuvete.
8. 8 - Microcuvete de utilização única de acordo com a reivindicação 7, caracterizada por o corante constituir uma percentagem de 0,2 até 0,5% em peso do revestimento.
9. 9 - Microcuvete de utilização única de acordo com uma das reivindicações 1 até 8, caracterizada por o revestimento ser produzido através da introdução de uma solução na cavidade e pela secagem por evaporação do solvente. Lisboa, 2015-05-13