PT2131829E - Agonistas ppar-gama para a indução da expressão de péptidos antimicrobianos catiónicos como estimulantes imunoprotetores - Google Patents

Description

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DESCRIÇÃO

"AGONISTAS PPAR-GAMA PARA A INDUÇÃO DA EXPRESSÃO DE PÉPTIDOS ANTIMICROBIANOS CATIÓNICOS COMO ESTIMULANTES IMUNOPROTETORES"

Campo da Invenção A presente invenção refere-se à indução das defensinas através de agonistas PPAR-gama. As defensinas fornecem imunoproteção aos epitélios da pele, orais, nasais, oculares e outras mucosas dos epitélios, incluindo as mucosas vaginais. Em particular, a invenção refere-se à estimulação da produção de defensinas por intermédio desses agonistas através da ativação dos recetores PPAR nos epitélios e/ou nas mucosas. Mais particularmente, a invenção refere-se à estimulação da produção de defensinas entéricas por intermédio desses agonistas através da ativação dos recetores PPAR do intestino.

Antecedentes da Invenção

As doenças inflamatórias do intestino (DII), incluindo a doença de Crohn (DC) e a colite ulcerosa (CU), são doenças crónicas recorrentes com remissões e exacerbações que aparecem principalmente em pacientes jovens. A inflamação pode afetar todas as regiões do intestino e todas as camadas da mucosa do intestino, incluindo o tecido adiposo mesentérico adjacente e as áreas perianais na DC. Estas doenças caracterizam-se clinicamente por períodos prolongados e variáveis, pela diversidade de manifestações intestinais e pela ocorrência de complicações locais e sistémicas graves. A etiologia da DC e CU permanece desconhecida, embora se suponha que a resposta inflamatória intestinal patológica é uma consequência de uma quebra da tolerância à flora bacteriana no trato gastrintestinal de indivíduos geneticamente predispostos1.

As DII são mais proeminentes nos países desenvolvidos 2 e particularmente na Europa ocidental, América do Norte e Austrália. 0 predomínio da DC e CU é de cerca de 1 a 2/1000 habitantes. Especialmente em 2005, foi estimado um total de 120.000 de DC e 80.000 de CU na França e cerca de 2,5 milhões de pacientes com DII nos Estados Unidos. Sem quaisquer moléculas terapêuticas curativas disponíveis, a gestão terapêutica associa terapêutica sintomática (analgésicos, antibióticos, nutrição), agentes anti-inflamatórios e imunossupressores (aminossalicilatos, esteroides, azatioprina, metotrexato, ciclosporina, anticorpos monoclonais anti-TNF, tal como infliximabe) e tratamento cirúrgico. Em geral, o desenvolvimento de novas moléculas terapêuticas é, por conseguinte, crítico para a gestão clínica. A mucosa digestiva desenvolveu várias estratégias imunitárias para tolerar o contacto íntimo com comensais e impedir que as bactérias patogénicas se espalhem nos tecidos do hospedeiro. O reconhecimento de micróbios nativos e patogénicos de origem alimentar é uma função de barreira essencial para a sobrevivência de insetos e mamíferos. Em particular, a resistência de mamíferos a agentes patogénicos é principalmente conferida por recetores do tipo Toll (TLRs) ligados à membrana1 e pela família de repetições ricas em leucina de domínio de oligomerização de ligação de nucleótidos citosólico que contém proteínas (NOD-LRRs)2. O NOD1 e o NOD2 possuem um domínio N-terminal de recrutamento de caspase (CARD), um domínio central de ligação de nucleótidos (NOD) e um domínio C-terminal de repetições ricas em leucina (LRR)2.

Foi concentrada uma atenção considerável na sinalização NOD2, uma vez que as mutações deste gene foram associadas à doença de Crohn (DC)3'4. O NOD2 funciona como uma molécula de reconhecimento de padrões citosólica (PRM) para peptidoglicano bacteriano5 através da deteção de um grande muropéptido libertado e reciclado durante o 3 crescimento bacteriano - o muramil dipéptido MurNAc-L-Ala-D-isoGln (MDP) 6~8. A seguir ao reconhecimento de MDP, o N0D2 provoca e regula a imunidade inata e adaptável através dos fatores de transcrição e da ativação da quinase2. Por isso, a ausência de sinalização N0D2 em ratinhos confere compreensivelmente suscetibilidade oral a Listeria monocitogenes através da regulação de determinados péptidos antimibrobianos catiónicos entéricos (CAMPs)8. 0 recente trabalho provou que o N0D1 confere recetividade a peptidoglicanos que contêm ácido meso-diaminopimélico (essencialmente encontrado em bactérias Gram-negativas)9'10. Similarmente ao papel fisiológico do N0D2, o N0D1 é necessário para a expressão de determinadas β-defensinas através de células epiteliais gástricas durante a infeção por Helicobacter pylori11. Péptidos antimicrobianos gastrointestinais (CAMPs: defensinas, catelicidinas): implicações para doença inflamatória

Os recentes relatórios esclareceram o papel efetor de CAMPs na monitorização da homeostasia do intestino e inclusão de micróbios invasores, uma vez que as células estaminais que voltam a encher o epitélio do intestino necessitam de proteção antimicrobiana continua. 0 nivel de expressão de CAMPs tem um paralelo com o desenvolvimento intestinal nos metazoários, desde a imaturidade dos mecanismos de defesa locais durante a gestação até à colonização bacteriana do intestino após o nascimento12. De particular interesse é a regulação independente e dependente de NF-κΒ de dois tipos de CAMP que são predominantes no intestino mamifero, nomeadamente as defensinas e as catelicidinas.

As a-defensinas e β-defensinas são pequenos polipéptidos com resíduos hidrofóbicos espacialmente separados e positivamente carregados. Seis cisteínas invariantes formam 3 ligações dissulfureto intramoleculares 4 específicas e, deste modo, estabilizam a proteína numa configuração folha-beta de cadeia tripla complexamente dobrada12,13. Ao passo que as α-def ensinas HD-1 a HD-4 (igualmente conhecidas como proteínas de neutrófilos humanos 1 a 4) são expressas através de neutrófilos, as HD-5 e HD-6 (igualmente conhecidas como criptidinas nos ratinhos) são produzidas por células epiteliais intestinais especializadas, denominadas células Paneth. As últimas encontram-se essencialmente na base das criptas de Lieberkuhn no intestino delgado e têm um papel fundamental na imunidade inata da mucosa ileal ao sintetizar e libertar grânulos proteicos no lúmen a seguir à exposição aos micróbios e/ou produtos microbianos. Estes grânulos secretores são ricos em péptidos anfipáticos que podem causar a morte microbiana mediante rutura da integridade da membrana12.

As células Paneth desempenham um papel crucial na manutenção da tolerância para com os comensais e na expulsão de infeções patogénicas através da produção de péptidos antimicrobianos, tal como a defensina. A via de sinalização Wnt/Tcf/beta-catenina é essencial no controlo da diferenciação da homeostasia intestinal e das células Paneth.

Curiosamente, a expressão intestinal diminuída de alfa-defensinas entéricas (nomeadamente HD-5) foi anunciada na DC, o que pode contribuir para alterações na flora luminal e/ou gerar vulnerabilidade em toda a barreira epitelial à infeção com agentes enteropatogénicos4, tal como E. coli aderente e invasiva59 e M. paratuberculosis60 (Figura 2) . A influência de outros sensores microbianos e dos CAMPs no aparecimento da doença cólica necessita igualmente de ser clarificada, uma vez que a carga bacteriana fisiológica é mais elevada no cólon do que no intestino delgado. Finalmente, a utilização de ratinhos com CAMPs mutantes e de um modelo de ratinho recentemente 5 desenvolvido que transporta a maior mutação de N0D2 associada a DC61 pode ajudar a determinar se a função da defensina entérica diminuída e/ou as mutações de NODs naturais são suficientes para acionar o desenvolvimento de doenças inflamatórias intestinais. A função antimicrobiana in vivo das α-defensinas tem sido exemplificada experimentalmente através da observação de uma maior resistência à infeção por Salmonella typhimurium em ratinhos transgénicos HD-5, acompanhada por alterações acentuadas na composição da flora dominante no lúmen gastrintestinal14. Ao contrário das β-defensinas, as a-defensinas produzidas por células Paneth são reguladas sobretudo num nível pós-transcrição através de proteases extracelulares15, incluindo metaloproteinase-7 da matriz (MMP-7, matrilisina) e tripsina em ratinhos e seres humanos, respetivamente16'17. Por isso, os ratinhos MMP-7_/“ acumulam formas inativas de criptidinas e cedem mais rapidamente à infeção oral com S. typhimurium do que os animais selvagens17. Seis β-defensinas humanas (hBD-1 a hBD-6) são primeiramente sintetizadas pela maioria das células epiteliais. Os ratinhos que não têm o ortologo hBDl mostram uma maior suscetibilidade à infeção por Staphylococcus aureus18, suportando um papel para esta proteína na imunidade inata.

As catelicidinas são CAMPs distintos de forma estrutural e evolutiva das defensinas, mas que têm uma abundância e distribuição semelhantes no trato gastrintestinal12. São sintetizadas como péptidos precursores grandes que contêm um domínio N-terminal altamente conservado (catelina) , ligado a um péptido exterminai com atividade antimicrobiana. Tal como acontece com as defensinas, as catelicidinas são ativadas por proteólise extracelular e parcial19. Embora diversos membros da família tenham sido identificados noutra espécie mamífera, os seres humanos e os ratinhos possuem um único 6 gene de catelicidina (referido como LL37/FALL39/hCAP18 e péptido antimicrobiano relacionado com catelina (CRAMP), respetrvamente) . A prova experimental indicou que os ratinhos que não têm CRAMP são mais suscetíveis à infeção cutânea através dos estreptococos do grupo A e à infeção no trato urinário através de Escherichia coli invasiva21'22. Além disso, os macrófagos deficientes em CRAMP não conseguiram controlar a replicação de S. typhimurium23.

Os ratinhos que suportam mutações nas vias de sinalização NF-κΒ e MyD88 apresentam uma maior suscetibilidade a colite induzida por Helicobacter e colite acionada por comensal, respetivamente25, indicando um papel essencial para NF-κΒ na tolerância/resistência do intestino às bactérias e um possível envolvimento na regulação da produção de CAMPs. Nos seres humanos, a expressão de hBD-1 é constitutiva no intestino delgado e no cólon, ao passo que a síntese cólica de hBD-2 a -4 é fortemente dependente da ativação de NF-κΒ através de agentes infecciosos no trato digestivo (tal como H. pylori) e/ou citocinas pró-inflamatórias12. Além do impacto regulador da sinalização TLR26, foi demonstrado que as vias de sinalização NOD1 e NOD2 acionam a expressão de hBD-211'27. Além disso, as recentes descobertas mostraram que a ativação das vias da MAP quinase também é necessária para a expressão de hBD-2 e/ou -311'26.

Foi demonstrado que três mutações no gene NOD2 (nomeadamente R702W, G908R e 1007fs) conduzem a uma predisposição para CD3'4. As correlações genótipo-fenótipo estabeleceram que os mutantes NOD2 são predominantemente ligados a CD42 ileal. Tanto as mutações comuns como as raras foram associadas à ativação de NF-κΒ induzida por MDP diminuída5,7 e à produção de citocinas nos monócitos de sangue periférico7,43-45. Laia e os colaboradores anunciaram recentemente que NOD2 é altamente expressado nas células Paneth46, 47 , uma descoberta que pode explicar a associação 7 entre as mutações N0D2 e o desenvolvimento de lesões inflamatórias ileais . De acordo com um efeito protetor do N0D2 no íleo, os ratinhos knockout Nod2 apresentaram (i) uma maior suscetibilidade à infeção oral (mas não à infeção sistémica) com a bactéria L. monocitogenes intracelular facultativa Gram-positiva e (ii) uma expressão nitidamente menor de um subgrupo de genes de criptidina8.

De modo significativo, foi detetada uma menor produção de HD-5 e HD-6 em biopsias e espécimes de ressecção cirúrgica de pacientes com DC ileal14, 48, 49 ; supostamente, as mutações N0D2 associadas a DC contribuíram para esta diminuição. Por outro lado, os indivíduos com colite de Crohn apresentaram níveis de α-defensina normais, mas têm um número de cópias muito reduzido para o gene hBD-2 de β-defensina, o que resulta numa expressão diminuída no cólon50. Tal como acontece com as mutações N0D2, um polimorfismo intrónico complexo do gene N0D1 foi associado à patogénese de DII51. Além disso, os ratinhos deficientes em Nodos apresentam uma maior suscetibilidade à infeção por H. pylori52 e uma menor expressão de determinadas β-def ensinas11. A expressão reduzida de defensinas na DC ileal pode contribuir para alterações na flora luminal, gerando assim vulnerabilidade em toda a barreira epitelial à infeção com agentes patogénicos associados a DC, tais como E. coli aderente e invasiva59 e M. paratuberculosis60.

Paralelamente, as vias de sinalização independentes de NF-κΒ podem controlar a produção de CAMPs através da regulação da renovação, da diferenciação e/ou do compromisso de linhagem das células do epitélio. Curiosamente, a sinalização Wingless (Wnt) diminuída é associada a uma completa falta de células proliferativas no epitélio do intestino delgado fetal , o que sugere que esta via tem um papel essencial na manutenção do estado proliferativo/não diferenciado das células epiteliais 8 intestinais. Foi observado que a ausência do gene ephrinB3 (que é diminuído através da via de sinalização Wnt) resulta num compromisso de linhagem das células Paneth anormais Além disso, a via de sinalização Wnt pode monitorizar a expressão de genes de defensina (através do fator de transcrição 4, Tcf4) nas células derivadas de células Paneth, uma vez que as criptidinas não foram detetadas no intestino delgado dos ratinhos Tcf4-/- embrionários ou dos adultos que não têm o recetor Wnt Frizzled-530 .

Reciprocamente, os genes de criptidina são sobre- expressados nos ratinhos que mostram a ativação mutagénica da via de sinalizaçao Wnt '

Uma análise mutagénica específica do local de promotores de α-defensina revelou um papel essencial e regulador para os locais de ligação de TCF30. Consideradas como um todo, estas descobertas indicam que a ativação da sinalização Wnt é necessária para a produção de CAMPs derivados de células Paneth. Por isso, os determinantes de células Paneth (tais como Mtgrl e Gfil) devem ser considerados como possíveis candidatos para suscetibilidade a distúrbios inflamatórios crónicos32'33.

Finalmente, e tendo em conta o papel crucial de determinados recetores nucleares na imunidade, a inflamação induzida por bactérias e a proliferação/maturação de células, foi sugerido que estes recetores possam ter um possível papel na imunidade inata gastrintestinal através da regulação da biogénese de CAMP. Curiosamente, foi demonstrado que um agonista do recetor de glicocorticoides (dexametasona) melhora a expressão de hBD-2, embora o mecanismo fique por determinar34. Mais recentemente, os genes de codificação de catelicidina e hBD2 foram identificados como alvos do recetor de vitamina D (VDR)35, um recetor nuclear necessário para a resistência à infeção por M. bovis36. O tratamento de monócitos com um ligando VDR sintético conduziu ao aumento dependente da dose da 9 transcrição do gene de catelicidina, o que exerce um efeito antimicrobiano direto na M. tuberculosis37. De acordo com estas descobertas, os indivíduos com menores níveis de ligando VDR endógeno apresentam uma maior suscetibilidade à infeção por M. tuberculosis37.

Para contornar a atividade microbicida de CAMPs, os micro-organismos (geralmente agentes patogénicos) desenvolveram uma variedade de estratégias que são retrospetivas dos envolvidos na resistência antibiótica39. Uma forma de alcançar a inativação é produzir proteases, o que degrada os CAMPs; contudo, no caso das defensinas, as pontes dissulfureto intramoleculares transmitem os péptidos relativamente resistentes à proteólise enzimática. Outro estratagema consiste em reduzir a carga catiónica liquida do envelope bacteriano, de modo a baixar a respetiva afinidade para os CAMPs; isto é alcançado através da incorporação de grupos positivamente carregados nos polímeros de ácido teicoico (D-alanina) e no lípido A (aminoarabinose) na parede celular bacteriana. Outras abordagens bacterianas à resistência ao CAMP incluem impedir que os efetores hospedeiros acedam ao respetivo alvo através de captura extracelular por intermédio das proteínas secretoras e bombeiem ativamente os péptidos através da membrana citoplasmatica . Contudo, apesar destas várias armas protetoras (que não são mutuamente exclusivas), os micro-organismos continuarão provavelmente a ser inibidos pelos CAMPs se o hospedeiro for capaz de libertar o último em grandes quantidades no lúmen intestinal, tal como no caso das defensinas. Nessa situação, a diminuição dos genes de codificação de CAMP no nível de transcrição através de componentes bacterianos (conforme anunciado nos pacientes com shigelose40 e nos ratinhos infetados oralmente com S. typhimurium41) pode ser um mecanismo contador muito sofisticado (Figura 2). A agressão e deteção microbianas diminuídas através 10 dos micróbios entéricos específicos podem afetar a função dos CAMPs no intestino e resultar no desenvolvimento de distúrbios inflamatórios crónicos, tal como a doença inflamatória do intestino (DII). Estas descobertas esclarecem a patogénese da DC, o que é classicamente visto como sendo resultado de uma ativação de células T anormais através de imunogénios microbianos.

Além da atividade antimicrobiana dos CAMPs, as funções pleiotrópicas foram atribuídas às defensinas e catelicidinas (Quadro l)53. Ambos os CAMPs têm a capacidade de atrair quimicamente os imunócitos envolvidos na imunidade inata (neutrófilos e monócitos/macrófagos) , na imunidade adaptável (células dendríticas e linfócitos T) e nas reações alérgicas/inflamatórias (mastócitos). Além disso, o hBD2 pode ativar a via de sinalização dependente de TLR4 nas células dendríticas .

Por outro lado, Hancock et al. anunciaram recentemente que LL-37 pode diminuir a ativação dependente de TLR nos monócitos humanos55 e pode provocar a maturação de células dendríticas, resultando na polarização Thl de células T56. Consideradas como um todo, estas descobertas indicam que as interações CAMP podem iniciar e controlar a resposta inflamatória ligando a imunidade inata e adquirida (Quadro 1). Finalmente, os CAMPs, tal como LL-37, têm a capacidade de provocar a angiogénese, conforme demonstrado pela menor vascularização durante a reparação da ferida na pele em ratinhos deficientes em CRAMP57. Uma vez que a biologia das células Paneth influencia a angiogénese intestinal através do reconhecimento de comensais58, estas descobertas fornecem uma ideia da patogénese da DII. Os CAMPs entéricos têm diversos papéis essenciais e emergentes na imunidade inata e adaptável do trato gastrintestinal através da modulação da resistência microbiana, angiogénese, quimiotaxia e da ativação/maturação da resposta humoral (Quadro 1). Em particular, crê-se que a libertação de CAMPs 11 no lúmen protege as células da cripta mitoticamente ativas (o que renova a monocamada de células epiteliais) a partir da colonização através de micróbios patogénicos. A utilização de animais transgénicos fornece uma melhor compreensão do papel fisiológico e da regulação destes efetores. 0 N0D1/2 mostrou exercer uma atividade bactericida através da modulação da produção epitelial de defensinas - sugerindo um possível mecanismo em que as Moléculas de Reconhecimento de Padrões (PRMs) podem proteger o hospedeiro contra o desenvolvimento da DC (Figura 2). Péptidos antimicrobianos epiteliais: implicações para a estimulação do sistema imunitário

Diversos estudos recentes têm péptidos antimicrobianos implicados, incluindo defensinas, em papéis protetores nos epitélios da pele, orais, nasais, oculares e outras mucosas do epitélio, incluindo mucosas vaginais. Todas as mucosas partilham uma origem embriogenética comum, uma vez que todas são originárias da mesma camada embrionária e podem apresentar respostas bioquímicas semelhantes, incluindo a expressão de defensinas protetoras.

Em 2003, Dinulos et al. examinaram a atividade antimicrobiana da expressão de queratinócitos de β-defensina-2 nas defesas imunitárias cutâneas. Foi descoberto que a expressão de β-defensinas-2 era induzida por Staphylococcus aureus, Streptococcus epidermidis, Escherichia coli e Pseudomonas aeruginosa, ao passo que Streptococcus pyogenes mostrou ser um fraco indutor de β-defensinas-2. O estudo indicou que a capacidade para induzir a expressão de β-defensinas-2 em conjunto com os respetivos efeitos antimicrobianos pode contribuir para a raridade de infeções na pele com o organismo bacteriano Gram-negativo, ao passo que a falta de estimulação concedida por Streptococcus pyogenes pode apontar para a respetiva capacidade para evitar as defesas do sistema 12 imunitário e causar uma doença de pele67.

No ano passado, Huang et al. realizaram ensaios antimicrobianos para investigar a atividade antimicrobiana de vários péptidos antimicrobianos expressados na superfície ocular humana, incluindo β-defensinas 1 a 3, em comparação com micróbios, tais como Pseudomonas aerginosa (PA), Staphylococcus aureus (SA) e Staphylococcus epidermidis (SE), na presença de NaCl ou ruturas. A β-defensina-3 mostrou ter uma atividade forte em comparação com SA e SE, ao passo que a β-defensina-2 tinha atividade moderada e a β-defensina-1 mostrou não ter qualquer atividade em comparação com estas estirpes. A atividade foi atenuada por NaCl e as ruturas inibiram completamente a atividade das β-defensinas-1 e 2, mas não afetaram a atividade da β-defensina-3. 0 estudo valida o papel de algumas defensinas, tal como um antimicrobiano in vivo68.

Relativamente ao último 2007, Vanhinsbergh mostrou que os níveis reduzidos de uma determinada expressão de genes imunomoduladores, em particular recetores do tipo Toll (TRLs) e defensinas, estão associados ao desenvolvimento de alergias, por exemplo o desenvolvimento de rinite alérgica e não alérgica69.

Finalmente, Chung et al identificaram vias de sinalização específicas percorridas por agentes patogénicos e comensais na estimulação de péptidos antimicrobianos, tais como defensinas e catelicidinas nos epitélios da pele, orais, das mucosas e outros, e identificam estas vias com o desenvolvimento de novos agentes terapêuticos para doenças penodontais

Esse trabalho reforça o papel protetor das defensinas no sistema imunitário humano e realça a importância de aumentar a resposta imunitária aos agentes patogénicos, fornecendo vias para a estimulação da produção de defensinas no corpo.

Outros Antecedentes da Técnica 13 A Patente US n.° 6.326.364 descreve compostos de 5-aminossalicilato, tal como 5-ASA, como tendo efeitos antimicrobianos seletivos in vitro. Os exemplos mostram efeitos inibitórios em comparação com uma série de culturas bacterianas de Clostridium em placas de ágar em condições aeróbias e anaeróbias. Não foi observado nenhum efeito em comparação com as colónias de Lactobacillus Enterococcus ou Bacteroides.

As Publicações Internacionais n.°s W02007/010514 e W02007/010516 descrevem a utilização de vários análogos estruturais de 5-ASA que funcionam como agonistas PPAR e podem ser utilizados no tratamento de condições gastrintestinais inflamatórias e cancro.

Funções de PPAR-gama

Recentemente, o recetor nuclear gama ativado por proliferador de peroxissoma (PPAR-gama) foi identificado como um alvo de fármacos anti-inflamatórios utilizados no tratamento de DII, que indica um mecanismo através do qual o efeito anti-inflamatório no intestino2 é mediado in vivo. Contudo, presumivelmente devido à origem embriogenética das mucosas comum, a expressão de recetores PPAR foi demonstrada em várias zonas de mucosas, para além do intestino. Estudos recentes sugeriram que o PPAR-gama pode contribuir para a inflamação crónica da mucosa nasal na rinite alérgica perene70. 0 PPAR-gama é um recetor nuclear essencial que controla a homeostasia intestinal interagindo com o fator de transcrição de células T (Tcf-4) e beta-catenina. 0 Tcf-4 é um fator de transcrição essencial na determinação do destino das células intestinais e na regulação da expressão de antibióticos naturais através de células Paneth3. 0 5-aminossalicilato (5-ASA) é um fármaco anti-inflamatório (mesalazina) muito utilizado no tratamento de doenças inflamatórias do intestino, mas o mecanismo adjacente aos respetivos efeitos intestinais continua a ser 14 mal compreendido. Recentemente, o recetor nuclear gama ativado por proliferador de peroxissoma (PPAR-gama) foi identificado como um alvo de 5-ASA, que indica um mecanismo através do qual o 5-ASA media in vivo o respetivo efeito anti-inflamatório no intestino2. Por isso, tendo em conta as propriedades antimicrobianas de 5-ASA, esses compostos e respetivos derivados podem modular a expressão de genes antimicrobianos através da ativação de PPAR-Y. A rosiglitazona também efetua a ativação dos recetores ativados por proliferador de peroxissoma (PPARs), especificamente o PPAR-gama, que tem um afeito anti-inf lamatório .

Definições

Para facilitar a compreensão da invenção, são definidos abaixo vários termos.

Conforme aqui utilizado, o termo "péptidos antimicrobianos" refere-se a α-defensinas ou β-defensinas (por ex., HD-5 para defensina humana 5), ou a pequenos polipéptidos com resíduos hidrofóbicos espacialmente separados e positivamente carregados.

Conforme aqui utilizado, o termo "ativa defensinas", quando utilizado relativamente a qualquer molécula que ativa defensinas, refere-se a uma molécula (ou seja, um agonista PPAR-gama) que induz a expressão de genes de a-defensinas ou β-defensinas.

Conforme aqui utilizado, o termo "primer" refere-se a um oligonucleótido sintético, que é capaz de funcionar como um ponto de iniciação da síntese quando colocado em condições nas quais é induzida a síntese de um produto de extensão de primer complementar a uma cadeia de ácido nucleico.

Conforme aqui utilizado, o termo "reação em cadeia da polimerase" (a seguir "PCR") é um método para ampliar um segmento de uma sequência-alvo numa mistura de ADN genómico sem clonagem ou purificação. Os dois primers são 15 complementares às respetivas cadeias da sequência-alvo de cadeia-dupla.

Conforme aqui utilizado, o termo "análogos estruturais" refere-se a compostos cuja estrutura molecular funciona como imitações do 5-ASA relativamente à respetiva capacidade de ligação ao recetor PPAR-gama. Em particular, os compostos cujas estruturas permitem tipos análogos de ligação de hidrogénio e interações eletrostáticas no recetor PPAR-gama.

Conforme aqui utilizado, o termo "células Caco-2" refere-se a células de adenocarcinoma de cólon caucasiano humano.

Conforme aqui utilizado, o termo "rosiglitazona" refere-se a um agonista quimico altamente seletivo e forte para PPAR-gama. Conforme aqui utilizado, o termo "epitélios" refere-se a tecidos corporais compostos por camadas de células que cobrem as superfícies dos órgãos, tais como a superfície da pele e o revestimento interior do trato digestivo.

Conforme aqui utilizado, o termo "mucosas" refere-se às membranas mucosas que são revestimentos de origem principalmente endodérmica, cobertos no epitélio e envolvidos na absorção e secreção. As mucosas revestem várias cavidades corporais expostas ao ambiente externo e órgãos internos. Estas prolongam-se pela pele das narinas, dos lábios, das orelhas, da área genital e do ânus.

Objeto da Invenção 0 âmbito da invenção é definido pelas reivindicações. Igualmente divulgados são os agonistas PPAR-gama, que podem estimular os recetores PPAR-gama para induzir a expressão de defensinas entéricas no intestino.

Igualmente divulgados são os agonistas PPAR-gama, que compreendem uma série de compostos ativos no recetor PPAR, para serem utilizados como estimulantes para induzir a expressão de CAMPs entéricos no intestino, em particular a 16 expressão de defensinas.

Igualmente divulgados são os compostos capazes de destruir micróbios através da estimulação da expressão de CAMPs. Os CAMPs podem ser defensina e/ou catelicidina. Os micróbios são agentes capazes de destruir bactérias, vírus, fungos e outros agentes infecciosos.

Igualmente divulgados são os compostos que melhoram os mecanismos de defesa do corpo através da expressão de CAMPs. 0 CAMP pode ser defensina e/ou catelicidina. 0 objeto da presente invenção é fornecer compostos para serem utilizados na intervenção de diverticulite aguda da condição do trato gastrintestinal.

Um dos objetos preferidos da invenção é fornecer uma intervenção para a prevenção da diverticulite aguda em pacientes afetados por diverticulite cólica, colite indeterminada e colite infecciosa.

Outro objeto da invenção é fornecer compostos para serem utilizados na preparação de um medicamento para o tratamento e a prevenção dessas doenças.

Igualmente divulgados são os moduladores da expressão de CAMPs.

Sumário da invenção É divulgado um método que utiliza uma variedade de entidades químicas que funcionam no PPAR-gama para induzir a produção de CAMPs. Esses compostos podem ser utilizados na indução da expressão de CAMPs em tecidos com recetores PPAR-gama, tais como epitélios e/ou mucosas. Em particular, os compostos podem ser utilizados para induzir a expressão de CAMPs entéricos no intestino. As defensinas são exemplos de CAMPs.

Igualmente divulgados são os agonistas PPAR-gama, que compreendem uma série de compostos ativos no recetor PPAR-gama, para serem utilizados como estimulantes para induzir a expressão de CAMPs no tecido, em particular a expressão de defensinas. 17

Igualmente divulgados são os agonistas PPAR-gama, que compreendem uma série de compostos ativos no recetor PPAR-gama, para serem utilizados como estimulantes para induzir a expressão de CAMPs nos epitélios e/ou nas mucosas com recetores PPAR-gama, em particular a expressão de defensinas.

Igualmente divulgados são os agonistas PPAR-gama, que compreendem uma série de compostos ativos no recetor PPAR-gama, para serem utilizados como estimulantes para induzir a expressão de CAMPs entéricos no intestino, em particular a expressão de defensinas.

Os compostos da invenção podem ser selecionados a partir de ácido 2-metoxi-3-(4'-aminofenil) propiónico, 5-amino-N-hidroxi-2-metoxibenzamida, ácido 2-etoxi-3-(4'-aminofenil) propiónico ou ácido 2-etoxi-3-(3'aminofenil) propiónico para serem utilizados no tratamento e na prevenção de diverticulite aguda.

Os compostos podem ser utilizados na indução da expressão de CAMPs em tecidos com recetores PPAR-gama, tais como epitélios e/ou mucosas. Em particular, os compostos podem ser utilizados para induzir a expressão de CAMPs entéricos no intestino.

Os compostos da invenção podem ser selecionados a partir do grupo que compreende: ácido 3-(4'-aminofenil)2-metoxipropiónico "R34", ácido 3-(4'-aminofenil)2-etoxipropiónico, ácido 3-(3'-aminofenil)2-etoxipropiónico.

Os nomes dos compostos acima também podem ser escritos na nomenclatura química padrão conforme apresentado em seguida (nomenclatura essa que será utilizada em todo o texto): ácido (±)-2-metoxi-3-(4'-aminofenil) propiónico "R34" (forma racémica), ácido (±)-2-etoxi-3-(4'-aminofenil) propiónico, ácido (±)-2-etoxi-3-(3'-aminofenil) propiónico.

Em particular, os compostos para utilização nos métodos da presente invenção podem ser enantiómeros das seguintes misturas racémicas: ácido (R,S)-2-metoxi-3-(4- 18 aminofenil)propiónico (composto 34) "R34" (forma racémica)

Enantiómeros de R34: ácido (+) 2-S-metoxi-3'(4'-aminofenil)propiónico "34—El" ou "E-l", ácido (-) 2-R-metoxi-3-(4'-aminofenil)propiónico "34—E2" ou "E—2".

As misturas racémicas dos compostos também podem ser utilizadas nos métodos aqui descritos. Os exemplos de misturas racémicas incluem: ácido (±)-2-metoxi-3-(4 aminofenil)propiónico "R34" (forma racémica).

As composições que contêm um excesso de um enantiómero em relação a outro, para qualquer um dos compostos estereoisoméricos aqui descritos, também podem ser utilizadas nos métodos aqui descritos.

De acordo com outra forma de realização ainda, os compostos que podem ser utilizados incluem o composto da fórmula (I):

De acordo com a invenção, um enantiómero de ácido (R,S)-2-metoxi-3-(4'-aminofenil)propiónico com a fórmula (I), nomeadamente ácido (-) 2-R-metoxi-3-(4'-aminofenil)propiónico "34-E2" ou "E-2", mostrou ser particularmente eficaz na indução da expressão de defensinas no intestino (Figuras 8 e 9) . De acordo com a presente invenção, alguns enantiómeros podem fornecer uma expressão de CAMPs superior em relação aos respetivos 19 estereoisómeros. Noutras formas de realização, algumas misturas racémicas podem fornecer uma expressão de CAMPs superior em relação aos respetivos estereoisómeros individuais.

De acordo com outra forma de realização ainda, os compostos que podem ser utilizados incluem o composto da fórmula (II):

De acordo com outra forma de realização ainda, os compostos que podem ser utilizados incluem o composto da fórmula (III) :

Preferencialmente, os compostos que podem ser utilizados nos métodos da invenção podem ser selecionados a partir do grupo que compreende: ácido (±)-2-metoxi-3-(4 aminofenil) propiónico "R34", ácido (+) 2-S-metoxi-3-(3-aminofenil)propiónico "34-El" ou 20 "E—1", ácido (-) 2-R-metoxi-3-(3-aminofenil)propiónico "34-E2" ou "E-2", ácido (±)-2-etoxi-3-(4'-aminofenil) propiónico, ácido (±)-2-etoxi-3-(3'-aminofenil) propiónico, cujas fórmulas foram ilustradas anteriormente.

Em particular, o composto 5-amino-N-hidroxi-2-metoxibenzamida também pode ser utilizado nos métodos da invenção.

Um exemplo compreende a utilização do seguinte composto:

í A presente invenção refere-se igualmente a compostos para serem utilizados nos métodos de tratamento de seres humanos e/ou mamíferos (incluindo roedores, animais de criação, animais domésticos, ratinhos, ratos, hamsters, coelhos, cães, gatos, porcos, ovelhas, vacas, cavalos) .

De acordo com a presente invenção, são fornecidos compostos para serem utilizados na intervenção da diverticulite aguda da condição do trato gastrintestinal.

Num aspeto da invenção, são fornecidos compostos para serem utilizados na prevenção de diverticulite aguda em pacientes afetados por diverticulose cólica, colite indeterminada e colite infecciosa.

Os compostos de acordo com a presente invenção podem ser utilizados de forma vantajosa no campo médico para estimular o PPAR-gama para produzir CAMPs. Os CAMPs incluem defensina e/ou catelicidina. Por conseguinte, outro aspeto da presente invenção refere-se a uma composição 21 farmacêutica que compreende um ou mais compostos, conforme definido acima, como princípios ativos em conjunto com um ou mais adjuvantes ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis.

Noutro aspeto, a invenção fornece compostos para serem utilizados na preparação de um medicamento para o tratamento e a prevenção da diverticulite aguda e a prevenção da diverticulite aguda em pacientes afetados por diverticulose cólica, colite indeterminada e colite infecciosa. A presente invenção refere-se igualmente a compostos para serem utilizados nos métodos de tratamento de seres humanos e/ou mamíferos (incluindo roedores, animais de criação, animais domésticos, ratinhos, ratos, hamsters, coelhos, cães, gatos, porcos, ovelhas, vacas, cavalos). Breve Descrição das Figuras

Figura 1: a rosiglitazona (composto de referência) ativa HD-5 nas células Caco-2, conforme determinado pela análise de PCR quantitativa.

Figura 2: o 5-amino-N-hidroxi-2-metoxibenzamida ativa HD-5 nas células Caco-2, conforme determinado pela análise de PCR quantitativa.

Figura 3: o ácido 2-etoxi-3-(3'aminofenil) propiónico ativa HD-5 nas células Caco-2, conforme determinado pela análise de PCR quantitativa.

Figura 4: o ácido 2-etoxi-3-(4'aminofenil) propiónico ativa HD-5 nas células Caco-2, conforme determinado pela análise de PCR quantitativa.

Figura 5: a mesalazina (composto de referência) ativa HD-5 nas células Caco-2, conforme determinado pela análise de PCR quantitativa.

Figura 6: estrutura de defensinas humanas e catelicidina A. Sequências humanas da α-defensina HD-5 entérica, da β-defensina HBD-2 e da catelicidina hCAP-18. As setas 22 cinzentas representam o local de divisão para HD-5 e catelicidina. Os padrões das três ligações dissulfureto intramoleculares (S-S) da α-defensina e β-defensina foram notificados em ambas as estruturas esquemática e tridimensional (paus azuis). B. É apresentada uma solução tridimensional (h-BD2 e catelicidina) ou estrutura cristalina (HD-5) de defensinas e catelicidina. Os números de acesso do Banco de Dados de Proteínas utilizados para a ilustração são os seguintes: 1ZMP para HD-5, 1E4Q para h-BD2 e 2FCG para LL-37 (fragmento C-terminal de hCAP-18). As voltas beta são representadas a cor de laranja e as alfa-hélices a vermelho. É apresentada a hidrofobicidade das moléculas.

Figura 7: um modelo patofisiológico para inflamação intestinal crónica. Assim que os micróbios e/ou respetivos produtos são detetados por TLRs e/ou NODs (lado esquerdo da figura), os CAMPs são sintetizados através da ação de NF-kB e/ou outros fatores de transcrição (consulte o texto principal). A seguir à respetiva secreção e processamento extracelular, os CAMPs (i) provocam tolerância e recrutamento de células inflamatórias, (i i) impedem a invasão de agentes patogénicos microbianos e (iii) protegem contra o desenvolvimento de inflamação intestinal crónica. A síntese e/ou função de péptidos antimicrobianos anormais podem conduzir à ativação aberrante do sistema imunitário adaptável e à inflamação intestinal (lado direito da figura) através de ameaças microbianas e/ou imunidade inata diminuída (ou seja, mutações N0D2).

Figura 8: o 5-ASA 1 (composto de referência), a rosiglitazona 2 (composto de referência), o R34 racémico e o enantiómero 34-E2 induzem a expressão de hBDl (defensinas-1 humanas) nas células Caco-2.

Figura 9: efeito de R34 racémico e enantiómeros 34-E1 e 34-E2 no nível PPAR-gama e LL37 (defensina) no nível ARNm em ratinhos de boa saúde (n=5). A administração de S-ASA 23 (30mM) (composto de referência), R34 (lmM), EI e E2 (lmM) através de enema durante 10 dias em ratinhos de boas saúde induziu a expressão de defensinas e ARNm PPARy de cólon.

Quadro 1. Funções versáteis das defensinas e catelicidinas. As funções de α/β-defensinas e catelicidinas são listadas no Quadro e descritas no texto principal. Descrição Detalhada da Invenção

Tendo em conta o papel negativo direto do recetor nuclear gama ativado por proliferador de peroxissoma (PPAR-gama) na via de sinalização Wnt/Tcf/beta-catenina, a ativação de PPAR-gama foi examinada para investigar a biogénese das defensinas.

Dados Experimentais

Os agonistas PPAR-gama, a rosiglitazona (em 1 μΜ durante 1, 3 ou 6 horas) e outros testados ativam Hod-5 nas células Caco-2, conforme determinado pela análise de PCR quantitativa (Figuras 1 a 5). Métodos

As linhas celulares epiteliais intestinais de cultura, nomeadamente Cacao-2 (de origem humana) e ICcl2 (de origem de ratinhos), foram tratadas com o inibidor GSK-3 de LiCl (20 microM) ou o inibidor de fosfatase de caliculina (50 nM) seguido ou não por estimulação com o agonista PPAR-gama, tal como rosiglitazona (ImicroM) (composto de referência). A expressão de defensinas e genes-alvo conhecidos de ambas as vias de sinalização Wnt e PPAR-gama foram investigadas pela PCR quantitativa em tempo real. A ativação de GSK3, beta-catenina, NF-kappaB, ERKl/2, SAPK/JNK e p38 foi medida através de immunoblotting especifico.

Para investigar o papel antimicrobiano de PPAR-gama, a replicação intracelular da Escherichia coli (LF82) associada à doença de Crohn foi medida durante a estimulação ou não com rosiglitazona na linha celular de macrófagos RAW.

Resultados A incubação com rosiglitazona e outros ativadores PPAR-gama aumentou significativamente a expressão de ambas as alfa-defensinas (HD-5 e HD-6) e beta-defensinas (DefblO) através das células epiteliais intestinais. Essa expressão de genes antimicrobianos foi submetida a sinergia a seguir à co-estimulação através de caliculina que provoca a degradação de beta-catenina. Por conseguinte, foi observada uma replicação intracelular reduzida de LF82 através da ativação de PPAR-gama por intermédio de rosiglitazona.

Reciprocamente, a expressão de um gene-alvo

Wnt/Tcf/beta-catenina, a ciclina-Dl e a estabilidade da beta-catenina diminuíram nitidamente durante a estimulação através de caliculina e rosiglitazona.

Finalmente, LiCl, um ativador da via de sinalização dependente de Wnt/TCF/beta-catenina, bloqueou a expressão de genes de defensina induzida por rosiglitazona durante a co-estimulação. A incubação com substâncias de teste aumentou significativamente a expressão de ambas as alfa-defensinas (HD-5 e HD-6) e beta-defensinas (DefblO) através das células epiteliais intestinais. Por conseguinte, foi observada uma replicação intracelular reduzida de LF82 através da ativação de PPAR-gama por intermédio de rosiglitazona.

Conclusão

Considerados como um todo, os resultados indicam que a ativação de PPAR-gama provoca a indução de um programa de genes antimicrobianos regulando negativamente a formação do complexo Tcf/beta-catenina. Estas descobertas realçam o potencial terapêutico de PPAR-gama na complementação da deficiência de defensinas em muitos distúrbios gastrintestinais, tais como doença de Crohn, colite ulcerosa; síndrome do intestino, diverticulite aguda, e na 25 prevenção da condição, tal como a diverticulite aguda, em pacientes afetados por diverticulose cólica, colite indeterminada e colite infecciosa.

Além disso, estas descobertas realçam o potencial terapêutico de agonistas PPAR-gama na complementação da deficiência de defensinas noutros distúrbios das mucosas, incluindo, sem limitação, distúrbios, tais como infeções e inflamações oculares, doença periodontal, rinite alérgica e não alérgica, vaginose bacteriana, e infeções e condições inflamatórias da pele, tais como impetigo, erisipela, dermatite, foliculite, acne e vulgar.

Estudos in vitro com materiais de composto racémico 34 e enantiómeros 34-El e 34-E2

0 5-ASA 1 (composto de referência) foi adquirido em Sigma-Aldrich (St Quentin Fallavier, França). A rosiglitazona 2 (composto de referência) foi sintetizada no laboratório de acordo com os procedimentos padrão. 0 composto racémico 34 e os dois enantiómeros do composto, 34-El e 34-E2, foram fornecidos por Giuliani SpA (Milão, Itália). 0 composto foi novamente suspenso no meio DMEM (Gibco) e ajustado em pH=7 se necessário com 10N NaOH. Regulação da expressão da defensina hBDl nas linhas celulares epiteliais cólicas A linha celular do carcinoma do cólon Caco-2 (ATCC HTB-39) cresceu regularmente no DMEM complementado respetivamente como 10% ou 20% de FCS aquecido e antibióticos. As células cresceram em monocamadas incubadas a 37 °C em 5% de C02 e 95% de humidade relativa. A célula foi estimulada por 5-ASA, R34, 34-El e 34-E2 durante 24 h. O ARN total foi isolado das células utilizando o kit Rneasy (Macherey Nagel, Hoerdt, França) de acordo com as instruções do fabricante. A quantificação de ARN foi efetuada utilizando a espetrofotometria. Após o tratamento a 37 °C durante 30 min com 20 a 50 unidades de DNase I sem RNase (Roche Diagnostics Corporation,

I 26

Indianapolis, IN, EUA), os primers oligo-dT (Roche Diagnostics Corporation, Indianapolis, EUA) foram utilizados para sintetizar ADNc de cadeia única. Os mARNs foram quantificados utilizando SYBR Green Master Mix (Applera, Courtaboeuf, França) com oligonucleótidos específicos de seres humanos para hBDl(S:5'-ATACTTCAAAAGCAATTTTCCTTTAT-3'; AS:5'-TTgTCTGAGATGGCCTCAggTggTAAC-3') num GeneAmp Abiprism 7000 (Applera, Courtaboeuf, França). Em cada ensaio, foram incluídos controlos calibrados e sem modelo. Cada amostra foi efetuada em triplicado. A intensidade da coloração do SYBR Green foi analisada utilizando o software Abiprism 7000 SDS (Applera, Courtaboeuf, França). Todos os resultados foram normalizados para o gene regulador não afetado da β-actina humana (S:5'-TCACCCACACTgTgCCCATCTACg-3'; AS: 5'-CAgCggAACCgCTCATTgCCAATg-3').

Avaliação da expressão de β-defensinas em ratinhos de boa saúde 0 5-ASA (30mM), R34 racémico e 34-E1 e 34-E2 (lmM) foram administrados através de instilações intrarretais durante 8 dias. Post-mortem, o ARN total foi isolado de todos os tecidos eólicos dos ratinhos utilizando o kit Rneasy (Macherey Nagel, Hoerdt, França) de acordo com as instruções do fabricante. A quantificação de ARN foi efetuada utilizando a espetrofotometria. Após o tratamento a 37 °C durante 30 min com 20 a 50 unidades de DNase I sem RNase (Roche Diagnostics Corporation, Indianapolis, IN, EUA), os primers oligo-dT (Roche Diagnostics Corporation, Indianapolis, EUA) foram utilizados para sintetizar ADNc de cadeia única. Os mARNs foram quantificados utilizando SYBR Green Master Mix (Applera, Courtaboeuf, França) com oligonucleótidos específicos de ratinho para LL37(S:5'-gCTgATTCTTTTgACATCAgCTg-TAA-3' AS:5'-gCCAgCCgggAAATTTTCT-3') num GeneAmp Abiprism 7000 (Applera, Courtaboeuf, França). Em cada ensaio, foram incluídos controlos 27 calibrados e sem modelo. Cada amostra foi efetuada em triplicado. A intensidade da coloração do SYBR Green foi analisada utilizando o software Abiprism 7000 SDS (Applera, Courtaboeuf, França). Todos os resultados foram normalizados para o gene regulador não afetado β-actina (S:5'-gggTCAgAAggATTCCTATg-3'; A: 5' ggTCTCAAA-CATgATCTggg-3') .

Estudo in vivo

Regulação da dor visceral em ratos

Animais

Neste estudo foram utilizados ratos machos Sprague-Dawley (Charles River, 1'Arbresle, França) com um peso de 175 a 200 g. Os ratos foram mantidos em condições de laboratório durante 1 semana antes da experiência. Os animais foram alojados 5 por gaiola com alimentação e água disponíveis sem limitações. Todos os estudos foram efetuados de acordo com a proposta do Committee for Research and Ethical Issues of the International Association for the Study of Pain (Zimmermann M, Pain 1983; 16:109-110). Foi tomado muito cuidado, particularmente em relação às condições de alojamento, para evitar ou minimizar o desconforto dos animais.

Avaliação da sensibilidade cólica A nociceção nos animais foi estimada através da medição da pressão intracólica necessária para induzir uma resposta comportamental durante a distensão colorretal (CRD) devido ao enchimento de um balão introduzido no cólon. Esta resposta foi caracterizada por uma elevação da parte traseira do corpo do animal e contração abdominal muito visível correspondente às contrações graves (AI Chaer, gastro 2000; Tarrerias, pain 2002; Bourdu et al., 2005). Em resumo, os ratos foram anestesiados com anestesia volátil (2% de isoflurano), o balão (preparado conforme descrito anteriormente em Bourdu & al, 2005) foi inserido intrarretalmente de uma forma minimamente invasiva a 7 cm 28 do ânus, e o cateter foi preso à base da cauda. Após 5 minutos, os ratos foram colocados no meio de uma caixa Plexiglas 40x40 cm e o cateter foi ligado a um aparelho baróstato eletrónico (G&J Electronics Inc., Toronto, Canadá). Uma pressão cada vez maior foi aplicada continuamente até ser apresentado o comportamento da dor ou ser alcançada uma pressão de recorte de 80 mm Hg.

Tratamento dos animais

Os compostos foram administrados diariamente através de instilações intrarretais. Para cada enema, foi colocado um cateter (cateter Fogarty de 2 mm) no cólon a 7 cm do ânus, e os animais receberam 500μ1 de composto novamente suspenso numa ótima concentração no meio DMEM e ajustado em pH 7 através de 10N NaOH se necessário durante 21 dias. Os animais de controlo receberam apenas o meio. O efeito do composto na dor visceral foi avaliado após 2 e 3 semanas de tratamento.

Estatísticas

Todas as comparações foram analisadas utilizando o Teste de Permutação para duas amostras independentes. As estatísticas foram calculadas utilizando o software StatXact (Cytel Inc, Cambridge, MA, EUA). As diferenças foram consideradas estatisticamente significativas se o valor P <0,05.

Conclusões

Os resultados in vitro e in vivo obtidos mostraram claramente a indução da expressão de defensinas quando foram utilizados 5-ASA (composto de referência) e R34, EI e E2. Em particular e surpreendentemente, EI e E2 mostraram uma maior força em comparação com 5-ASA.

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DOCUMENTOS REFERIDOS NA DESCRIÇÃO

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Documentos de patente referidos na descrição • US 6326364 B [0028] • WO 2007010514 A [0029] • WO 2007010516 A [0029]

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Claims (5)

1 REIVINDICAÇÕES 1. Composto selecionado a partir de ácido 2-metoxi-3-(4' -aminofenil)propiónico, 5-amino-N-hidroxi-2-metoxibenzamida, ácido 2-etoxi-3-(4'-aminofenil) propiónico ou ácido 2-etoxi-3-(3'-aminofenil) propiónico, para ser utilizado no tratamento e/ou na prevenção de diverticulite aguda.

2. Um composto da reivindicação 1 para utilização de acordo com a reivindicação 1, em que o tratamento e/ou a prevenção da diverticulite aguda é em pacientes afetados por diverticulose cólica, colite indeterminada e colite infecciosa.

3. Um composto da reivindicação 1 para utilização de acordo com a reivindicação 1 ou reivindicação 2, em que o composto é ácido 2-metoxi-3-(4'-aminofenil)propiónico.

4. Um composto da reivindicação 3 para utilização de acordo com a reivindicação 3, em que o composto está presente numa mistura racémica ou está presente como o enantiómero S ou R.

5. Um composto da reivindicação 4 para utilização de acordo com a reivindicação 4, em que o composto está presente numa composição contendo um excesso de um enantiómero em relação a outro.