PT1745041E - Inibidores de quinoxalina da via de sinalização de hedgehog - Google Patents

Inibidores de quinoxalina da via de sinalização de hedgehog Download PDF

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Richard Goldsmith
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Description

1
DESCRIÇÃO
"INIBIDORES DE QUINOXALINA DA VIA DE SINALIZAÇÃO DE HEDGEHOG"
DOMÍNIO DA INVENÇÃO A presente invenção refere-se a compostos orgânicos úteis para terapia e/ou profilaxia num mamífero, em particular a compostos quinoxalina que inibem a via de sinalização de hedgehog e são úteis no tratamento de doenças hiperproliferativas e doenças mediadas por angiogénese.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO A proteína Hedgehog (Hh) foi primeiramente identificada em Drosophila melanogaster como um gene de polaridade segmentar envolvido na formação de padrões no embrião (Nusslein-Volhard et al., Roux. Arch. Dev. Biol. 193: 267-282 (1984)). Foi posteriormente identificado que três ortólogos de hedgehog de Drosophila (Sonic, Desert e Indian) ocorrem em todos os vertebrados, incluindo peixes, pássaros e mamíferos. 0 Desert hedgehog (DHh) é expresso principalmente nos testículos, no desenvolvimento embrionário do ratinho e em roedores e humanos adultos; o Indian hedgehog (IHh) está envolvido no desenvolvimento ósseo durante a embriogénese e na formação óssea no adulto; e o Sonic hedgehog (SHh) é expresso em níveis elevados na notocorda e placa de solo de embriões de vertebrados em desenvolvimento. Ensaios de explantes in vitro bem como expressão ectópica de SHh em animais transgénicos mostraram que o SHh desempenha um papel chave na formação de padrões de tubos neuronais (Echelard et al., supra.; Ericson et 2 al., Cell 81: 747-56 (1995); Marti et al., Nature 375: 322-5 (1995); Krauss et al., Cell 75, 1432-44 (1993); Riddle et al., Cell 75: 1401-16 (1993); Roelink et al., Cell 81:445-55 (1995); Hynes et al., Neuron 19: 15-26 (1997)). O Hh também desempenha um papel no desenvolvimento de membros (Krauss et al., Cell 75: 1431-44 (1993); Laufer et al.,
Cell 79, 993-1003 (1994)), somitos (Fan e Tessier-Lavigne, Cell 79, 1175-86 (1994); Johnson et al., Cell 79: 1165-73 (1994) ), pulmões (Bellusci et al., Develop. 124: 53-63 (1997) e pele (Oro et al., Science 276: 817-21 (1997)). De igual modo, o IHh e DHh estão envolvidos no desenvolvimento de células ósseas, intestinais e germinativas (Apelqvist et al., Curr. Biol. 7: 801-4 (1997); Bellusci et al., Dev.
Suppl. 124: 53-63 (1997); Bitgood et al., Curr. Biol. 6: 298-304 (1996); Roberts et al., Development 121: 3163-74 (1995) ). O SHh humano é sintetizado na forma de uma proteína precursora de 45 kDa que, por clivagem autocatalitica, dá origem a um fragmento N-terminal de 20 kDa que é responsável pela atividade normal de sinalização de hedgehog; e um fragmento C-terminal de 25 kDa que é responsável pela atividade de autoprocessamento na qual o fragmento N-terminal é conjugado a uma fração de colesterol (Lee, J.J., et al. (1994) Science 266, 1528-1536; Bumcrot, D.A., et al. (1995), Mol. Cell Biol. 15, 2294-2303; Porter, J.A., et al. (1995) Nature 374, 363- 366). O fragmento N- terminal consiste nos resíduos de aminoácidos 24-197 da sequência precursora completa que permanece associada a membranas através do colesterol no seu terminal C (Porter, J.A., et al. (1996) Science 274, 255-258; Porter, J.A., et al. (1995) Cell 86, 21-34). A conjugação ao colesterol é responsável pela localização tecidual do sinal de hedgehog. 3
Na superfície celular, pensa-se que o sinal de Hh é transmitido pela proteína de 12 domínios transmembranares Patched (Ptc) (Hooper and Scott, Cell 59: 751-65 (1989); Nakano et al., Nature 341: 508-13 (1989)) e pelo recetor do tipo acoplado à proteína G Smoothened (Smo) (Alcedo et al., Cell 86: 221-232 (1996); van den Heuvel e Ingham, Nature 382: 547-551 (1996)). Evidências genéticas e bioquímicas suportam um modelo de recetores no qual Ptch e Smo fazem parte de um complexo de recetores de múltiplos componentes (Chen e Struhl, Cell 87: 553-63 (1996); Marigo et al., Nature 384: 176-9 (1996); Stone et al., Nature 384: 129-34 (1996)). Por ligação de Hh a Ptch, o efeito inibidor normal de Ptch em Smo é atenuado, permitindo que Smo efetue a transdução do sinal de Hh através da membrana plasmática. No entanto, o mecanismo exato pelo qual Ptch controla a atividade de Smo ainda não foi clarificado. A cascata de sinalização iniciada por Smo conduz à ativação de fatores de transcrição Gli que efetuam a translocação para o núcleo, onde controlam a transcrição de genes alvo. Foi mostrado que Gli influencia a transcrição de inibidores da via de Hh, como Ptc e Hipl, num mecanismo de realimentação negativa, indicando que o controlo estrito da atividade da via de Hh é necessário para diferenciação celular e formação de órgãos apropriadas. A ativação descontrolada da via de sinalização de Hh está associada a malignidades, em particular as do cérebro, pele e músculo, bem como angiogénese. Uma explicação para isto é o facto de ter sido mostrado que a via de Hh regula a proliferação celular em adultos por ativação de genes envolvidos na progressão do ciclo celular, como ciclina D que está envolvida na transição Gl-S. Além disso, o SHh bloqueia a 4 paragem do ciclo celular mediada por p21, um inibidor de quinases dependentes de ciclina. A sinalização do Hh está adicionalmente implicada em cancro por indução de componentes na via do EGFR (EGF, Her2) envolvidos na proliferação, bem como componentes nas vias do PDGF (PDGFa) e VEGF envolvidas em angiogénese. A perda de mutações funcionais no gene Ptch foi identificada em pacientes com a síndroma do nevo basocelular (BCNS), uma doença hereditária caracterizada por múltiplos carcinomas de células basais (BCCs). Mutações disfuncionais no gene Ptch também foram associadas a uma grande percentagem de tumores de carcinomas de células basais esporádicos (Chidambaram et al., Câncer Research 56: 4599-601 (1996); Gailani et al., Nature Genet. 14: 78-81 (1996); Hahn et al., Cell 85: 841-51 (1996); Johnson et al., Science 272: 1668-71 (1996); Unden et al., Câncer Res. 56: 4562-5; Wicking et al., Am. J. Hum. Genet. 60: 21-6 (1997)). Pensa-se que a perda da função de Ptch causa uma sinalização descontrolada de Smo em carcinoma de células basais. De modo semelhante, foram identificadas mutações de Smo ativadoras em tumores BCC esporádicos (Xie et al., Nature 391: 90-2 (1998)), enfatizando o papel de Smo como subunidade sinalizadora no complexo do recetor para SHh.
Foram investigados vários inibidores da sinalização de hedgehog, como Ciclopamina, um alcaloide natural que se mostrou travar o ciclo celular em G0-G1 e induzir apoptose em SCLC. Crê-se que a ciclopamina inibe Smo por ligação ao seu feixe hepta-helicoidal. Foi mostrado que a forscolina inibe a via de Hh a jusante de Smo por ativação da proteína quinase A (PKA), que mantém inativos fatores de transcrição de Gli. Apesar dos progressos obtidos com estes e outros 5 compostos, continuam a ser necessários inibidores potentes da via de sinalização de hedgehog.
Brzozowsli Z descreve, em Acta Polaniae Pharmaceutical, volume 53, n° 4, 1996, páginas 269-276 "2-mercapto-N-(azolyl)benzenesulphonamides III. Synthesis of some new 2-mercapto-N-(5-amino-l,2,4-triazol-3-yl)benzenesulphonamide derivatives with potential anti-HIV or anticancer activity". WO 03/88970 descreve 2-fenil-indolos como moduladores da via de sinalização de hedgehog.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
Num aspeto da presente invenção são proporcionados novos inibidores de hedgehog possuindo um fórmula geral (I)
I em que A é um carbociclo de
X é NR4C(O) em que R4 é H ou alquilo; Y é N, CH ou CR3;
Ri é selecionado do grupo que consiste em alquilo, cicloalquilo, arilo ou um heterociclo, cada um dos quais está opcionalmente substituído por hidroxilo, halogéneo, amino, nitro, alquilo, acilo, alquilsulfonilo, haloalquilo ou alcoxi; e o referido 6 cicloalquilo, arilo e heterociclo também estão opcionalmente substituídos com - (CH2) s- (Q) u- (CH2) t-Z em que Q é C (0) , S(0), S02, C(0)0, 0C(0), NR4C (0) , NR4C(S), NR4S0, NR4S02, NR4C(0)NH, NR4C(S)NH, C(0)NR4, ou C(S)NR4; e Z é hidroxilo, amino, haloqéneo, alquilsulfonilo, alcoxi, alcoxicarbonilo, haloalquilo, um carbociclo, um heterociclo ou um carbociclo ou heterociclo substituído por hidroxilo, halogéneo, amino, nitro, alquilo, acilo, alquilsulfonilo, haloalquilo, hidroxialquilo, alcoxi ou alcoxialcoxi; e s e t são independentemente 0 até 5 e u é 0 ou 1; em que alquilo designa um grupo hidrocarboneto alifático ramificado ou não ramificado, saturado ou insaturado, possuindo até 12 átomos de carbono; cicloalquilo designa um anel alifático mono-, bi-, ou tricíclico possuindo 3 até 14 átomos de carbono; arilo designa um grupo aromático carbocíclico fundido ou não fundido possuindo o número de átomos de carbono até 14 átomos de carbono; heterociclo designa qualquer anel aromático (heteroarilo) ou não aromático mono-, bi-, ou tricíclico, saturado ou insaturado, possuindo o número desde 5 até 14 átomos de anel, em que os átomos de anel são carbono e pelo menos um heteroátomo (azoto, enxofre ou oxigénio), R2 é halogéneo, hidroxilo, alquilo, acilo ou alcoxi cada um opcionalmente substituído por hidroxilo, halogéneo, amino, nitro, alquilo, acilo, alquilsulfonilo ou alcoxi; R3 é halogéneo, hidroxilo, alquilo, acilo ou alcoxi cada um opcionalmente substituído por hidroxilo, halogéneo, amino, nitro, alquilo, acilo, alquilsulfonilo ou alcoxi; m é 0-3; e respetivos sais e solvatos. 7
Noutro aspeto da invenção, são proporcionadas composições compreendendo compostos de fórmula I e um transportador, diluente ou excipiente.
Noutro aspeto da invenção, é proporcionada um método de tratamento de cancro, que compreende administrar uma quantidade eficaz de um composto de fórmula I até um mamifero necessitado.
Noutro aspeto da invenção, é proporcionada um método de inibição de sinalização de hedgehog numa célula, que compreende contactar a referida célula com um composto de fórmula I.
Noutro aspeto da invenção, é proporcionado um método de tratamento de uma doença ou estado associado à sinalização de hedgehog num mamifero, que compreende administrar ao referido mamifero uma quantidade eficaz de um composto de fórmula I.
DESCRIÇÃO PORMENORIZADA DAS FORMAS DE REALIZAÇÃO PREFERIDAS
Definições: "Acilo" designa um carbonilo contendo um substituinte representado pela fórmula -C(0)-R em que R é alquilo, um carbociclo, um heterociclo, carbocicloalquilo ou heterocicloalquilo em que alquilo, carbociclo e heterociclo são como definidos aqui. Grupos acilo incluem alcanoilo (por exemplo, acetilo), aroilo (por exemplo, benzoilo), e heteroaroilo. 8 "Alquilo" designa um grupo hidrocarboneto alifático ramificado ou não ramificado, saturado ou insaturado (isto é, alcenilo, alcinilo), possuindo até 12 átomos de carbono a menos que especificado em contrário. Quando usado como parte de outro termo, por exemplo, "alquilamino", a porção alquilo pode ser uma cadeia hidrocarbonada saturada, no entanto também inclui cadeias carbonadas de hidrocarboneto insaturado, tais como "alcenilamino" e "alcinilamino". Exemplos de grupos alquilo incluem metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, tert-butilo, n-pentilo, 2-metilbutilo, 2,2-dimetilpropilo, n-hexilo, 2-metilpentilo, 2,2-dimetilbutilo, n-heptilo, 3-heptilo, 2-metil-hexilo, e afins. Os termos "alquilo de cadeia curta", "Ci-C4 alquilo", e "alquilo com 1 até 4 átomos de carbono" são sinónimos e são utilizados de modo intermutável para designar metilo, etilo, 1-propilo, isopropilo, ciclopropilo, 1-butilo, sec-butilo ou t-butilo. A menos que seja especificado, grupos alquilo substituídos podem conter um, dois, três ou quatro substituintes que podem ser iguais ou diferentes. Exemplos dos grupos alquilo substituídos acima incluem, mas não estão limitados aos seguintes: cianometilo, nitrometilo, hidroximetilo, tritiloximetilo, propioniloximetilo, aminometilo, carboximetilo, carboxietilo, carboxipropilo, alquiloxicarbonilmetilo, aliloxicarbonilaminometilo, carbamoíloximetilo, metoximetilo, etoximetilo, t-butoximetilo, acetoximetilo, clorometilo, bromometilo, iodometilo, trifluorometilo, 6-hidroxi-hexilo, 2,4-dicloro(n-butilo), 2-amino(iso-propilo), 2-carbamoíloxietilo e afins. 0 grupo alquilo também pode estar substituído por um grupo carbociclo. Exemplos incluem grupos ciclopropilmetilo ciclobutilmetilo 9 ciclopentilmetilo, e ciclo-hexilmetilo, bem como os correspondents grupos -etilo, -propilo, -butilo, -pentilo, -hexilo, etc. Alquilos substituídos incluem metilos substituídos, por exemplo, um grupo metilo substituído por os mesmos substituintes do grupo "Cn-Cm alquilo substituído". Exemplos do grupo metilo substituído incluem grupos tais como hidroximetilo, hidroximetilo protegido (por exemplo, tetra-hidropiraniloximetilo), acetoximetilo, carbamoíloximetilo, trifluorometilo, clorometilo, carboximetilo, bromometilo e iodometilo. "Amidina" designa o grupo -C (NH) -NHR em que R é H ou alquilo ou aralquilo. Uma amidina particular é o grupo -NH-C (NH) -NH2. "Amino" designa aminas primárias (isto é, -NH2) , secundárias (isto é, -NRH) e terciárias (isto é, -NRR). Aminas secundárias e terciárias incluem alquilamina, dialhilamina, arilamina, diarilamina, aralquilamina e diaralquilamina. Aminas secundárias e terciárias particulares são metilamina, etilamina, propilamina, isopropilamina, fenilamina, benzilamina dimetilamina, dietilamina, dipropilamina e diisopropilamina. "Grupo protetor de amino" como usado aqui, refere-se a um derivado dos grupos habitualmente empregues para bloquear ou proteger um grupo amino enquanto são conduzidas reações noutros grupos funcionais do composto. Exemplos desses grupos protetores incluem carbamatos, amidas, grupos alquilo e arilo, iminas, bem como muitos derivados N-heteroatómicos que podem ser removidos para regenerar o grupo amina desejado. Outros exemplos destes grupos encontram-se em T. W. Greene e P. G. M. Wuts, "Protective 10
Groups in Organic Synthesis", 2a edição, John Wiley & Sons, Inc., Nova Iorque, NY, 1991, capítulo 7; E. Haslam, "Protective Groups in Organic Chemistry", J. G. W. McOmie, Ed., Plenum Press, Nova Iorque, NY, 1973, Capítulo 5, e T.W. Greene, "Protective Groups in Organic Synthesis", John Wiley and Sons, Nova Iorque, NY, 1981. O termo "amino protegido" refere-se a um grupo amino substituído por um dos grupos protetores de amino acima. "Arilo", quando usado isoladamente ou como parte de outro termo, designa um grupo aromático carbocíclico fundido ou não fundido possuindo o número de átomos de carbono designado ou, se não for designado nenhum número, até 14 átomos de carbono. Grupos arilo incluem fenilo, naftilo, bifenilo, fenantrenilo, naftacenilo, e afins (ver, por exemplo, Lang's Handbook of Chemistry (Dean, J. A., editor) 13a edição Tabela 7-2 [1985]). Numa forma de realização particular, arilo pode ser fenilo. Fenilo substituído ou arilo substituído designa um grupo fenilo ou grupo arilo substituído por um, dois, três, quatro ou cinco, tal como 1-2, 1-3 ou 1-4 substituintes escolhidos, a menos que especificado em contrário, desde halogéneo (F, Cl, Br, I) , hidroxi, hidroxi protegido, ciano, nitro, alquilo (por exemplo, Ci-Cô alquilo), alcoxi (por exemplo, Ci-Cô alcoxi), benziloxi, carboxi, carboxi protegido, carboximetilo, carboximetilo protegido, hidroximetilo, hidroximetilo protegido, aminometilo, aminometilo protegido, trifluorometilo, alquilsulfonilamino, arilsulfonilamino, heterociclilsulfonilamino, heterociclilo, arilo, ou outros grupos especificados. Um ou mais grupos metino (CH) e/ou metileno (CH2) nestes substituintes podem, por sua vez, estar substituídos com um grupo semelhante aos designados acima. Exemplos do termo "fenilo substituído" incluem mas 11 não estão limitados a um grupo mono- ou di(halo)fenilo, tal como 2-clorofenilo, 2-bromofenilo, 4-clorofenilo, 2,6-diclorofenilo, 2,5-diclorofenilo, 3,4-diclorofenilo, 3-clorofenilo, 3-bromofenilo, 4-bromofenilo, 3,4-dibromofenilo, 3-cloro-4-fluorofenilo, 2-fluorofenilo e afins; um grupo mono- ou di(hidroxi)fenilo, tal como 4-hidroxifenilo, 3-hidroxifenilo, 2,4-di-hidroxifenilo, os seus derivados com hidroxi protegido e afins; um grupo nitrofenilo, tal como 3- ou 4-nitrofenilo; um grupo cianofenilo, por exemplo, 4-cianofenilo; um grupo mono- ou di(alquilo de cadeia curta)fenilo, tal como 4-metilfenilo, 2,4-dimetilfenilo, 2-metilfenilo, 4-(iso-propil)fenilo, 4-etilfenilo, 3-(n-propil)fenilo e afins; um grupo mono ou di (alcoxi)fenilo, por exemplo, 3,4-dimetoxifenilo, 3-metoxi-4-benziloxifenilo, 3-metoxi-4-(1-clorometil)benziloxi-fenilo, 3-etoxifenilo, 4-(isopropoxi)fenilo, 4-(t-butoxi)fenilo, 3-etoxi-4-metoxifenilo e afins; 3- ou 4-trifluorometilfenilo; um grupo mono- ou dicarboxifenilo ou (carboxi protegido)fenilo, como 4-carboxifenilo; um mono- ou di(hidroximetil)fenilo ou (hidroximetilo protegido)fenilo, tal como 3-(hidroximetilo protegido)fenilo ou 3,4-di(hidroximetil)fenilo; um mono- ou di(aminometil)fenilo ou (aminometilo protegido)fenilo, tal como 2-(aminometil)fenilo ou 2,4-( aminometilo protegido)fenilo; ou um mono- ou di(N-(metilsulfonilamino))fenilo, tal como 3- (N-metilsulfonilamino))fenilo. Além disso, o termo " fenilo substituído" representa grupos fenilo dissubstituídos em que os substituintes são diferentes, por exemplo, 3-metil-4-hidroxifenilo, 3-cloro-4-hidroxifenilo, 2-metoxi-4-bromofenilo, 4-etil-2-hidroxifenilo, 3-hidroxi- 4- nitrofenilo, 2-hidroxi-4-clorofenilo, e afins, bem como grupos fenilo trissubstituídos em que os substituintes são 12 diferentes, por exemplo, 3-metoxi-4-benziloxi-6-metilo sulfonilamino, 3-metoxi-4-benziloxi-6-fenilo sulfonilamino, e grupos fenilo tetrassubstituídos em que os substituintes são diferentes, tais como 3-metoxi-4-benziloxi-5-metil-6-fenilo sulfonilamino. Grupos fenilo substituídos incluem grupos 2-clorofenilo, 2-aminofenilo, 2-bromofenilo, 3-metoxifenilo, 3-etoxi-fenilo, 4-benziloxifenilo, 4-metoxifenilo, 3-etoxi-4-benziloxifenilo, 3,4-dietoxifenilo, 3-metoxi-4-benziloxifenilo, 3-metoxi-4-(1-clorometil)benziloxi-fenilo, 3-metoxi-4-(1-clorometil)benziloxi-6-metilo sulfonilo aminofenilo. Anéis arilo fundidos também podem estar substituídos com qualquer (por exemplo, 1, 2 ou 3) um dos substituintes especificados aqui do mesmo modo que grupos alquilo substituídos. "Carbociclilo", "carbociclico" e "carbociclo", isoladamente e quando usado como uma fração num grupo complexo, tal como um grupo carbocicloalquilo, refere-se a um anel alifático mono-, bi-, ou triciclico possuindo 3 até 14 átomos de carbono, por exemplo, 3 até 7 átomos de carbono, que pode ser saturado ou insaturado, aromático ou não aromático e pode ter configuração em ponte. Grupos carbociclicos saturados incluem grupos ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo e ciclo-hexilo. Numa forma de realização particular, grupos carbociclo são ciclopropilo e ciclo-hexilo. Noutra forma de realização particular, o grupo carbociclo é ciclo-hexilo. Carbociclos insaturados incluem aromáticos, por exemplo, grupos arilo como previamente definidos, por exemplo, fenilo. Os termos "carbociclilo substituído" e "carbociclo" designam estes grupos substituídos com os mesmos substituintes do grupo "alquilo substituído". 13 "Grupo protetor de carboxi", como usado aqui, refere-se a um dos derivados éster do grupo ácido carboxilico habitualmente empregues para bloquear ou proteger o grupo ácido carboxilico enquanto são conduzidas reações noutros grupos funcionais do composto. Exemplos desses grupos protetores de ácido carboxilico incluem 4-nitrobenzilo, 4-metoxibenzilo, 3,4-dimetoxibenzilo, 2,4-dimetoxibenzilo, 2,4,6-trimetoxibenzilo, 2,4,6-trimetilbenzilo, pentametilbenzilo, 3,4-metilenodioxibenzilo, benzidrilo, 4,4'-dimetoxibenzidrilo, 2,2',4,4'-tetrametoxibenzidrilo, alquilo, tal como t-butilo ou t-amilo, tritilo, 4-metoxitritilo, 4,4'-dimetoxitritilo, 4,4',4"-trimetoxitritilo, 2-fenilprop-2-ilo, trimetilsililo, t-butildimetilsililo, fenacilo, 2,2,2-tricloroetilo, beta-(trimetilsilil)etilo, beta-(di(n-butil)metilsilil)etilo, p-toluenossulfoniletilo, 4-nitrobenzilsulfoniletilo, alilo, cinamilo, 1-(trimetilsililmetil)prop-l-en-3-ilo, e frações afins. A espécie empregue de grupo protetor de carboxi não é critica desde que o ácido carboxilico derivatizado seja estável na condição de reação(ões) subsequente (s) noutras posições da molécula e possa ser removido na altura apropriada sem destruir o restante da molécula. Em particular, é importante não sujeitar uma molécula com carboxi protegido a bases nucleofílicas fortes bases ou condições redutoras empregando catalisadores metálicos altamente ativados, tais como Níquel Raney. (Essas condições de remoção severas devem até ser evitadas ao remover grupos protetores de amino e grupos protetores de hidroxi, discutido em baixo). Grupos protetores de ácido carboxilico incluem grupos alilo e p-nitrobenzilo. Grupos protetores de carboxi semelhantes utilizados nas áreas das cefalosporinas, penicilinas e péptidos também podem ser 14 utilizados para proteger substituintes de grupos carboxi. Outros exemplos destes grupos encontram-se em T. W. Greene e P. G. M. Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis", 2a edição, John Wiley & Sons, Inc., Nova Iorque, N.Y., 1991, capitulo 5; E. Haslam, "Protective Groups in Organic Chemistry", J. G. W. McOmie, Editor, Plenum Press, Nova Iorque, N.Y., 1973, Capitulo 5, e T.W. Greene, "Protective Groups in Orqanic Synthesis", John Wiley and Sons, Nova Iorque, NY, 1981, Capitulo 5. 0 termo "carboxi protegido" refere-se a um grupo carboxi substituído por um dos grupos protetores de carboxi acima. "Guanidina" designa o grupo -NH-C (NH) -NHR em que R é H ou alquilo ou aralquilo. Um grupo guanidina particular é -NH-C (NH) -NH2. pirrolidinilo, "Grupo heterocíclico", "heterociclico", "heterociclo", "heterociclilo", ou "heterociclo" isoladamente e quando utilizado como uma fração num grupo complexo, tal como um grupo heterocicloalquilo, são usados de modo intermutável e referem-se a qualquer anel aromático (heteroarilo) ou não aromático mono-, bi-, ou triciclico, saturado ou insaturado, possuindo o número de átomos designado, por exemplo, desde 5 até 14 átomos de anel, em que os átomos de anel são carbono e pelo menos um heteroátomo (azoto, enxofre ou oxigénio), por exemplo, 1 até 4 heteroátomos. Tipicamente, um anel de 5 membros tem 0 até 2 ligações duplas e um anel com 6 ou 7 membros tem 0 até 3 ligações duplas e os heteroátomos de azoto ou enxofre podem, opcionalmente, estar oxidados (por exemplo, SO, SO2) , e qualquer heteroátomo de azoto pode, opcionalmente, estar quaternizado. Heterociclos não aromáticos incluem morfolinilo (morfolino), pirrolidinilo, oxiranilo, 15 oxetanilo, tetra-hidrofuranilo, 2,3-di-hidrofuranilo, 2H-piranilo, tetra-hidropiranilo, tiranilo, tietanilo, tetra-hidrotietanilo, aziridinilo, azetidinilo, l-metil-2-pirrolilo, piperazinilo e piperidinilo. Um grupo "heterocicloalquilo" é um grupo heterocíclico como definido acima ligado de modo covalente a um grupo alquilo grupo como definido acima. Heterociclos com 5 membros contendo um átomo de enxofre ou oxigénio e um até três átomos de azoto incluem tiazolilo, por exemplo, tiazol-2-ilo e tiazol-2-ilo N-óxido, tiadiazolilo, por exemplo, 1,3,4-tiadiazol-5-ilo e 1.2.4- tiadiazol-5-ilo, oxazolilo, por exemplo, oxazol-2-ilo, e oxadiazolilo, tal como 1,3,4-oxadiazol-5-ilo, e 1.2.4- oxadiazol-5-ilo. Heterociclos com anéis de 5 membros contendo 2 até 4 átomos de azoto incluem imidazolilo, por exemplo, imidazol-2-ilo; triazolilo, por exemplo, 1,3,4-triazol-5-ilo; 1,2,3-triazol-5-ilo, 1,2,4-triazol-5-ilo, e tetrazolilo, por exemplo, lH-tetrazol-5-ilo. Heterociclos de 5 membros benzo-fundidos incluem benzoxazol-2-ilo, benztiazol-2-ilo e benzimidazol-2-ilo. Heterociclos de 6 membros contendo um até três átomos de azoto e, opcionalmente, um átomo de enxofre ou oxigénio incluem piridilo, tal como pirid-2-ilo, pirid-3-ilo, e pirid-4-ilo; pirimidilo, por exemplo, piramid-3-ilo e pirimid-4-ilo; triazinilo, por exemplo, 1,3,4-triazin-2-ilo e 1,3,5-triazin-4-ilo; piridazinilo, por exemplo, piridazin-3-ilo, e pirazinilo. Numa forma de realização particular, heterociclos de 6 membros incluem N-óxidos de piridina e N-óxidos de piridazina e os grupos piridilo, pirimid-2-ilo, pirimid-4-ilo, piridazinilo e 1,3,4-triazin-2-ilo. Substituintes para heterociclos opcionalmente substituídos, e outros exemplos dos sistemas em anel de 5 e 6 membros discutidos acima podem ser encontrados em W. Drucceimer et al., Patente U.S. N° 4,278,793. 16 "Heteroarilo", isoladamente e quando usado como uma fração num grupo complexo, tal como um grupo heteroaralquilo, refere-se a qualquer sistema em anel aromático mono-, bi-, ou triciclico possuindo o número de átomos designado, em que pelo menos um anel é um anel de 5, 6 ou 7 membros contendo desde um até quatro heteroátomos selecionados de azoto, oxigénio, e enxofre. Numa forma de realização particular, grupos heteroarilo contêm pelo menos um heteroátomo (Lang's Handbook of Chemistry, supra). Na definição estão incluídos grupos bicíclicos nos quais quaisquer dos anéis heteroarilo acima estão fundidos a um anel benzeno. Numa forma de realização particular, heteroarilos incorporam pelo menos um heteroátomo de azoto e/ou oxigénio. Os seguintes sistemas em anel são exemplos dos grupos heteroarilo (que pode estar substituído ou não sunstituído) designados pelo termo "heteroarilo": tienilo, furilo, imidazolilo, pirazolilo, tiazolilo, isotiazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, triazolilo, tiadiazolilo, oxadiazolilo, tetrazolilo, tiatriazolilo, oxatriazolilo, piridilo, pirimidilo, pirazinilo, piridazinilo, tiazinilo, oxazinilo, triazinilo, tiadiazinilo, oxadiazinilo, ditiazinilo, dioxazinilo, oxatiazinilo, tetrazinilo, tiatriazinilo, oxatriazinilo, ditiadiazinilo, imidazolinilo, di-hidropirimidilo, tetra-hidropirimidilo, tetrazolo[1,5-b]piridazinilo e purinilo, bem como derivados benzo-fundidos, por exemplo, benzoxazolilo, benzofurilo, benzotiazolilo, benzotiadiazolilo, benzotriazolilo, benzoimidazolilo e indolilo. Numa forma de realização particular, "heteroarilo" inclui 1,3-tiazol-2-ilo, 4-(carboximetil)-5-metil-l,3-tiazol-2-ilo, sal de sódio de 4-(carboximetil)-5-metil-l,3-tiazol-2-ilo, 1,2,4-tiadiazol-5-ilo, 3-metil-l,2,4-tiadiazol-5-ilo, 1,3,4-triazol-5-ilo, 2- 17 metil-1,3,4-triazol-5-ilo, 2-hidroxi-l,3,4-triazol-5-ilo, sal de sódio de 2-carboxi-4-metil-l,3,4-triazol-5-ilo, 2-carboxi-4-metil-l,3,4-triazol-5-ilo, 1,3-oxazol-2-ilo, 1,3,4-oxadiazol-5-ilo, 2-metil-l,3,4-oxadiazol-5-ilo, 2-(hidroximetil)-1,3,4-oxadiazol-5-ilo, 1,2,4-oxadiazol-5-ilo, 1,3,4-tiadiazol-5-ilo, 2-tiol-l,3,4-tiadiazol-5-ilo, 2-(metiltio)-1,3,4-tiadiazol-5-ilo, 2-amino-l,3,4-tiadiazol-5-ilo, lH-tetrazol-5-ilo, l-metil-lH-tetrazol-5-ilo, 1-(1-(dimetilamino)et-2-il)-lH-tetrazol-5-ilo, 1-(carboximetil)-lH-tetrazol-5-ilo, sal de sódio de 1-(carboximetil)-lH-tetrazol-5-ilo, 1-(ácido metilsulfónico)-lH-tetrazol-5-ilo, sal de sódio de 1-(ácido metilsulfónico)-lH-tetrazol-5-ilo, 2-metil-lH-tetrazol-5-ilo, 1,2,3-triazol-5-ilo, 1-metil-l,2,3-triazol-5-ilo, 2-metil-1,2,3-triazol-5-ilo, N-óxido de 4-metil-l,2,3-triazol-5-ilo, pirid-2-ilo, 6-metoxi-2-(N-óxido)-piridaz-3-ilo, 6-hidroxipiridaz-3-ilo, l-metilpirid-2-ilo, 1-metilpirid-4-ilo, 2-hidroxipirimid-4-ilo, 1,4,5, 6-tetra-hidro-5,6-dioxo-4-metil-as-triazin-3-ilo, 1,4,5,6-tetra-hidro-4-(formilmetil)-5,6-dioxo-as-triazin-3-ilo, 2,5-di-hidro-5-oxo-5-hidroxi-astriazin-3-ilo, sal de sódio de 2,5-di-hidro-5-oxo-6-hidroxi-as-triazin-3-ilo, sal de sódio de 2,5-di-hidro-5-oxo-6-hidroxi-2-metil-astriazin-3-ilo, 2,5-di-hidro-5-oxo-6-hidroxi-2-metil-as-triazin-3-ilo, 2,5-di-hidro-5-oxo-6-metoxi-2-metil-as-triazin-3-ilo, 2,5-di-hidro-5-oxo-as-triazin-3-ilo, 2,5-di-hidro-5-oxo-2-metil-as-triazin-3-ilo, 2,5-di-hidro-5-oxo-2,6-dimetil-as-triazin-3-ilo, tetrazolo[1,5-b]piridazin-6-ilo e 8-aminotetrazolo[l,5-b]-piridazin-6-ilo. Alternativamente, grupos "heteroarilo" incluem 4-(carboximetil)-5-metil-l, 3-tiazol-2-ilo, sal de sódio de 4-(carboximetil)-5-metil-l,3-tiazol-2-ilo, 1,3,4-triazol-5-ilo, 2-metil-l,3,4-triazol-5-ilo, lH-tetrazol-5-ilo, l-metil-lH-tetrazol-5-ilo, 1-(1- 18 (dimetilamino)et-2-il)-lH-tetrazol-5-ilo, 1-(carboximetil)-lH-tetrazol-5-ilo, sal de sódio de 1-(carboximetil)-1H-tetrazol-5-ilo, 1-(ácido metilsulfónico)-lH-tetrazol-5-ilo, sal de sódio de 1-(ácido metilsulfónico)-lH-tetrazol-5-ilo, l,2,3-triazol-5-ilo, 1,4,5,6-tetra-hidro-5,6-dioxo-4-metil-as-triazin-3-ilo, 1,4,5,6-tetra-hidro-4-(2-formilmetil)-5,6-dioxo-as-triazin-3-ilo, sal de sódio de 2,5-di-hidro-5-oxo-6-hidroxi-2-metil-as-triazin-3-ilo, 2,5-di-hidro-5-oxo-6-hidroxi-2-metil-as-triazin-3-ilo, tetrazolo[1,5-b]piridazin-6-ilo, e 8-aminotetrazolo[1,5-b]piridazin-6-ilo. "Grupo protetor de hidroxi" como usado aqui, refere-se a um derivado do grupo hidroxi habitualmente empregue para bloquear ou proteger o grupo hidroxi enquanto são conduzidas reações noutros grupos funcionais do composto. Exemplos desses grupos protetores incluem grupos tetra-hidropiraniloxi, acetoxi, carbamoiloxi, trifluoro, cloro, carboxi, bromo e iodo. Outros exemplos destes grupos encontram-se em T. W. Greene e P. G. M. Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis", 2a edição, John Wiley & Sons, Inc., Nova Iorque, NY, 1991, capítulos 2-3; E. Haslam, "Protective Groups in Organic Chemistry", J. G. W. McOmie, Ed., Plenum Press, Nova Iorque, NY, 1973, Capítulo 5, e T.W. Greene, "Protective Groups in Organic Synthesis", John Wiley and Sons, Nova Iorque, NY, 1981. 0 termo "hidroxi protegido" refere-se a um grupo hidroxi substituído por um grupo protetor de hidroxi tal como os descritos acima. "Sais farmaceuticamente aceitáveis" incluem sais de adição de ácidos e bases. "Sal de adição de ácido farmaceuticamente aceitável" refere-se àqueles sais que retêm a eficácia e propriedades biológicas das bases livres 19 e que não são indesejáveis do ponto de vista biológico ou outro, formados com ácidos inorgânicos, tais como ácido cloridrico, ácido bromidrico, ácido enxofreico, ácido nítrico, ácido carbónico, ácido fosfórico e afins, e ácidos orgânicos podem ser selecionados das classes alifática, cicloalifática, aromática, aralifática, heterocíclica, carboxílica, e sulfónica classes de ácidos orgânicos, tais como ácido fórmico, ácido acético, ácido propiónico, ácido glicólico, ácido glucónico, ácido láctico, ácido pirúvico, ácido oxálico, ácido málico, ácido maleico, ácido maloneico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido aspártico, ácido ascórbico, ácido glutâmico, ácido antranílico, ácido benzoico, ácido cinâmico, ácido mandélico, ácido embónico, ácido fenilacético, ácido metanossulfónico, ácido etanossulfónico, ácido p-toluenossulfónico, ácido salicíclico e afins. "Sais de adição de bases farmaceuticamente aceitáveis" incluem os derivados de bases inorgânicas, tais como sais de sódio, potássio, lítio, amónio, cálcio, magnésio, ferro, zinco, cobre, manganês, alumínio e afins. Sais particulares são sais de amónio, potássio, sódio, cálcio e magnésio. Sais derivados de bases orgânicas não tóxicas e farmaceuticamente aceitáveis incluem sais de aminas primárias, secundárias, e terciárias, aminas substituídas, incluindo aminas substituídas de ocorrência natural, aminas cíclicas e resinas básicas de permuta iónica, tais como resinas de isopropilamina, trimetilamina, dietilamina, trietilamina, tripropilamina, etanolamina, 2-dietilaminoetanol, trimetamina, diciclo-hexilamina, lisina, arginina, histidina, cafeína, procaína, hidrabamina, colina, betaína, etilenodiamina, glucosamina, 20 metilglucamina teobromina purinas, pipenzina piperidina, N-etilpiperidina, poliamina e afins. Numa forma de realização particular, bases orgânicas não tóxicas são isopropilamina, dietilamina, etanolamina, trimetamina, diciclo-hexilamina, colina, e cafeína. A frase "e respetivos sais e solvatos", como usada aqui, significa que compostos da invenção podem existir em uma ou mais formas de sal ou solvato. Por exemplo, um composto da invenção pode ser substancialmente puro numa forma particular de sal ou solvato ou então pode consistir em misturas de duas ou mais formas de sal ou solvato. A presente invenção proporciona novos compostos possuindo a fórmula geral I:
em que A, X, Y, Ri, R2, e R3 são como definidos aqui. A é um anel selecionado do grupo que consiste em A2:
Numa forma de realização particular, A é o anel A2a:
c. X é NR4C (O) em que R4 é H ou alquilo. Numa forma de 21 realização particular, X é NR4C(0) que forma uma ligação amida entre o anel A e Ri. Y é N, CH ou CR3. Numa forma de realização particular, Y é CH ou CR3. Noutra forma de realização, Y é CH. Noutra forma de realização, Y é N.
Ri é selecionado do grupo que consiste em alquilo, cicloalquilo, arilo ou um heterociclo cada um dos quais está opcionalmente substituído por hidroxilo, halogéneo, amino, nitro, alquilo, acilo, alquilsulfonilo, haloalquilo ou alcoxi; e o referido cicloalquilo, arilo e heterociclo também estão opcionalmente substituídos com -(CH2) s~ (Q)u-(CH2)t-Z em que Q é C (0) , S (0) , S02, C(0)0, 0C (0) , NR4C(0), NR4C(S), NR4S0, NR4S02, NR4C(0)NH, NR4C (S)NH, C(0)NR4 ou C(S)NR4; e Z é hidroxilo, amino, halogéneo, alquilsulfonli, alcoxi, alcoxicarbonilo, haloalquilo, um carbociclo, um heterociclo ou um carbociclo ou heterociclo substituído por hidroxilo, halogéneo, amino, nitro, alquilo, acilo, alquilsulfonilo, haloalquilo, hidroxialquilo, alcoxi ou alcoxialcoxi; e s e t são independentemente 0 até 5 e u é 0 ou 1. Alternativamente, Ri é selecionado do grupo que consiste em cicloalquilo, arilo ou um heterociclo cada um dos quais está opcionalmente substituído por hidroxilo, halogéneo, amino, nitro, alquilo, acilo, alquilsulfonilo ou alcoxi.
Numa forma de realização particular, R4 é um cicloalquilo, arilo ou heterociclo opcionalmente substituído por hidroxilo, halogéneo, amino, nitro, alquilo, acilo, alquilsulfonilo, haloalquilo ou alcoxi; e o referido cicloalquilo, arilo e heterociclo está adicionalmente substituído por - (CH2) s- (Q) u- (CH2) t_Z em que Q é C (0) , S (0) , 22 S02, C(0)0, 0C(0), NR4C(0), NR4C(S), nr4so, nr4so2, NR4C(0)NH, NR4C (S) NH, C(0)NR4, ou C(S)NR4; e Z é hidroxilo, amino, halogéneo, alquilsulfonli, alcoxi, alcoxicarbonilo, haloalquilo, um carbociclo, um heterociclo ou um carbociclo ou heterociclo substituído por hidroxilo, halogéneo, amino, nitro, alquilo, acilo, alquilsulfonilo, haloalquilo, hidroxialquilo, alcoxi ou alcoxialcoxi; e s e t são independentemente 0 até 5 e u é 0 ou 1.
Numa forma de realização particular, Q é C(0). Noutra forma de realização, Q é C(0)NH. Noutra forma de realização, Q é C(0) 0. Noutra forma de realização, Q é S02. Noutra forma de realização, Q é S02NH. Noutra forma de realização, Q é NH. Numa forma de realização, s é 0. Noutra forma de realização, s é 0 até 3. Numa forma de realização, t é 0. Noutra forma de realização, t é 0 até 3. Numa forma de realização, u é 0. Noutra forma de realização, u é 1.
Numa forma de realização particular, Z é um carbociclo ou heterociclo selecionado do grupo que consiste em piperidina, piperazina, pirrolidina, morfolino, pirazolo, triazolo, pirrolidona, imidazolo e tiomorfolina. Numa forma de realização particular, Z é um carbociclo ou heterociclo selecionado do grupo que consiste em piperidin-l-ilo, 4-hidroxi-piperidin-l-ilo, N-metil-piperidin-4-ilo, piperazin-l-ilo, N-metil-piperazin-l-ilo, N-etil-piperazin-1-ilo, N-acetil-piperazin-l-ilo, pirrolidin-l-ilo, 3,5-dimetil-piperazin-l-ilo, morfolin-l-ilo, tiomorfolin-l-ilo, 3,5-dimetil-morfolin-l-ilo, N-hidroxietil-piperazin-l-ilo, pirazol-l-ilo, 1,2,4-triazol-l-ilo, pirrolid-2-ona-l-ilo e imidazol-5-ilo. Noutra forma de realização particular, Z é hidroxi, dimetilamino, CF3, metoxicarbonilo ou metoxi. 23
Alternativamente, Ri é selecionado do grupo que consiste em cicloalquilo, arilo ou um heterociclo cada um dos quais está opcionalmente substituído por hidroxilo, halogéneo, amino, nitro, alquilo, acilo, alquilsulfonilo ou alcoxi. Numa forma de realização particular, Ri está opcionalmente substituído arilo ou heteroarilo. Numa forma de realização particular Ri é um grupo fenilo opcionalmente substituído. 23
(Rs)o (Re)o (Re)o
Noutra forma de realização particular, Ri é um grupo piridina opcionalmente substituído. Numa forma de realização particular, Ri tem a fórmula IIa, Ilb, IIc, Ild, lie, Hf, Hg, Ilh, Ili, IIj , IHk, III ou Ilm: ^.(R6)o O (Re)0 O / w Ha Hb Dc nj nk m 24
Π] Hk Π] Hm em que W é 0, S ou NR7, em que R7 é H ou alquilo; Rg é halogéneo, amino, nitro, alquilo, acilo, alilsulfonilo ou alcoxi; e o é 0-3. Numa forma de realização particular, W é S. Numa forma de realização particular, R7 é o grupo de fórmula lia. Nessa forma de realização, Rg pode ser alcoxi e o é 1, 2 ou 3. Grupos lia particulares são lia1 - lia28:
O Me
Da1 na2 na3 Ca4 na5
Cl
na13 Qa14 Da15
25
Noutra forma de realização particular, Ri é o grupo de fórmula Ilb. Nessa forma de realização, R6 pode ser alquilo ou haloalquilo (por exemplo, CF3). Grupos Ilb particulares são Ilb1 - Ilb3:
Ilb1 Ilb2 Ilb3
Numa forma de realização particular, Ri é o grupo de fórmula IIc. Nessa forma de realização, W pode ser S e o é 0. Noutra forma de realização particular, Ri é o grupo de fórmula Ild. Nessa forma de realização, o pode ser 0. Noutra forma de realização particular, Ri é o grupo de fórmula lie. Nessa forma de realização, o pode ser 0. Noutra forma de realização particular, Ri é o grupo de fórmula Ilf. Nessa forma de realização, o pode ser 0. R2 é halogéneo, hidroxilo, alquilo, acilo ou alcoxi, cada um opcionalmente substituído por hidroxilo, halogéneo, amino, nitro, alquilo, acilo, alquilsulfonilo ou alcoxi. n 26 é 1. Numa forma de realização particular, R2 é hidroxilo. Numa forma de realização particular, R2 é alquilo ou alquilo substituído por halogéneo, metilo ou trifluorometilo. Numa forma de realização particular, R2 é acilo, por exemplo, alcanoílo, por exemplo, acetilo. Numa forma de realização particular, R2 é halogéneo, por exemplo, Cl ou F. Noutra forma de realização particular, R2 é alcoxi, por exemplo, metoxi ou etoxi. R3 é halogéneo, hidroxilo, alquilo, haloalquilo, acilo ou alcoxi; e m é 0-3. Numa forma de realização particular, m é 0, isto é, R3 está ausente. Noutra forma de realização particular, m é 1-3 e R3 é halogéneo (por exemplo, F) ou alquilo (por exemplo, metilo).
Compostos particulares da invenção incluem, mas não estão limitados aos seguintes:
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Os compostos da invenção podem conter um ou mais átomos de carbono assimétricos. Por conseguinte, os compostos podem existir como diastereómeros, enantiómeros ou suas misturas. As sínteses dos compostos podem empregar racematos, diastereómeros ou enantiómeros como materiais de partida ou como intermediários. Os compostos diastereoméricos podem ser separados por métodos cromatográficos ou de cristalização. Da mesma forma, as misturas enantioméricas podem ser separadas usando as mesmas técnicas ou outras conhecidas na arte. Cada um dos átomos de carbono assimétricos pode estar na configuração R ou S e ambas estas configurações estão abrangidas pelo âmbito da invenção. A invenção também engloba pró-fármacos dos compostos acima descritos. Os pró-fármacos adequados incluem grupos conhecidos de protetores de amino e protetores de carboxi que são libertados, por exemplo hidrolisados, para produzir o composto-mãe sob condições fisiológicas. Uma classe particular de pró-fármacos são compostos em que um átomo de azoto num grupo amino, amidino, aminoalquilenoamino, iminoalquilenoamino ou guanidino é substituído por um grupo hidroxi (OH), um grupo alquilcarbonilo (-CO-R), um alcoxicarbonilo (-CO-OR), um grupo aciloxialquilo- 43 alcoxicarbonilo-(-C00-R-0-C0-R), em que R é um grupo monovalente ou bivalente e tal como acima definido, ou um grupo possuindo a fórmula -C(0)-0-CPlP2-haloalquilo, em que PI e P2 são o mesmo ou diferentes e são H, alquilo inferior, alcoxi inferior, ciano, halo alquilo inferior ou arilo. Os compostos de pró-fármacos podem ser preparados por reação dos compostos da invenção descritos acima com um composto de acilo ativado para ligação de um átomo de azoto no composto da invenção ao carbonilo do composto acilo ativado. Compostos de carbonilo ativado adequados contêm um bom grupo de saida ligado ao carbono carbonilo e incluem halogenetos de acilo, aminas de acilo, sais de acilo piridinio, alcóxidos de acilo, em particular fenóxidos de acilo, tais como p-nitrofenoxi acilo, dinitrofenoxi acilo, fluorofenoxi acilo, e difluorofenoxi acilo. As reações são geralmente exotérmicas e são realizadas em solventes inertes a temperaturas reduzidas, tais como -78 a cerca de 50C. As reações são geralmente também realizadas na presença de uma base inorgânica tal como carbonato de potássio ou bicarbonato de sódio, ou uma base orgânica tal como uma amina, incluindo piridina, trietilamina, etc. Uma forma de preparação de pró-fármacos é descrita no documento USSN 08/843,369 depositado a 15 de abril de 1997 (correspondente à publicação de PCT W09846576)
SÍNTESE
Os compostos da invenção são preparados utilizando técnicas normalizadas orgânico-sintéticas a partir de materiais de partida e reagentes disponíveis no mercado. Será apreciado que os procedimentos sintéticos utilizados na preparação de compostos da invenção dependerão dos substituintes particulares presentes num composto e que vários procedimentos de proteção e de desproteção podem ser 44 necessários como é normalizado na sintese orgânica. Os compostos da invenção em que X é NR4C (0) , podem ser preparados de acordo com o esquema geral 1.
Esquema 1
0 material de amina de partida é acilado pelo cloreto de ácido apropriado Cl-C(0)-Ri e o composto resultante é, então, alfa-bromado com Br2 numa mistura de ácidos acético e bromidrico. 0 intermediário alfa-bromo-cetona é então convertido no produto final de quinoxalina ou 5-azaquinoxalina por reacção com a 1,2-fenilenodiamina ou 2,3-piridinadiamina apropriada na presença de uma base tal como acetato de sódio. 0 mesmo esquema pode ser utilizado para preparar compostos tioamida da invenção, isto é, X é NR4C(S), através do emprego de um cloreto de ácido tio apropriado Cl-C(S)-Ri na etapa de acilação. Os materiais de partida e reagentes neste esquema e em subsequentes esquemas de sintese ou estão disponíveis no mercado, ou podem ser preparados utilizando materiais de partida disponíveis no mercado utilizando uma técnica de química orgânica estabelecida. 45
Os compostos da invenção inibem a sinalização de hedgehog e são úteis para o tratamento de cancros associados com uma sinalização aberrante de hedgehog, por exemplo, quando o Patched falha na repressão, ou não reprime de forma adequada, o Smoothened (fenótipo de perda de função Ptc) e/ou quando o Smoothened está ativo independentemente da repressão de Patched (fenótipo de ganho de função Smo) . Exemplos de tipos de câncer incluem o carcinoma de células basais, tumores neuroectodérmicos como o meduloblastoma, meningioma, hemangioma, glioblastoma, adenocarcinoma no pâncreas, carcinoma epidermóide no pulmão, condrossarcoma, carcinoma da mama, rabdomiossarcoma, cancro no esófago, cancro no estômago, cancro no trato biliar, carcinoma renal, carcinoma da tiroide Os compostos da invenção podem ser administrados antes, concomitantemente com, ou após a administração de outros tratamentos anticancerigenos tais como a terapia de radiação ou quimioterapia. Compostos adequados de quimioterapia citostática incluem, mas não estão limitados a (i) antimetabolitos, tais como citarabina, fludarabina, 5-fluoro-2'-deoxiuiridina, gemcitabina, hidroxiureia ou metotrexato; (ii) agentes de fragmentação de ADN, tais como bleomicina; (iii) os agentes de reticulação de ADN, tais como clorambucil, cisplatina, ciclofosfamida, ou mostarda de azoto; (iv) os agentes intercalantes tais como adriamicina (doxorrubicina) ou mitoxantrona; (v) inibidores da sintese de proteínas, tais como L-asparaginase, ciclo-heximida, puromicina ou toxina difteria; (vi) venenos da topoisomerase I, tais como a camptotecina ou topotecano; (vii) venenos de topoisomerase II, tais como etoposido (VP-16) ou teniposido; (viii) os agentes microtúbulos-dirigidos, tais como colcemid, colchicina, paclitaxel, vinblastina, ou vincristina; (ix) inibidores da quinase, tais como Flavopiridol, 46 estaurosporina, STI571 (CPG 57148B) ou UCN-01 (7-hidroxistaurosporina); (x) Os agentes diversos investigacionais tais como tioplatin, PS-341, fenilbutirato, ET-I8-OCH3, ou inibidores da transferase de farnesil (L-739749, L-744832); polifenóis tais como quercetina, resveratrol, piceatannol, epigalocatecina gaiato, theaflavins, flavonóides, procianidinas, ácido betulinico e seus derivados; (xi) hormonas, tais como glucocorticóides ou fenretinida; (xii) antagonistas de hormonas, tais como os antagonistas de tamoxifeno, finasterida ou LHRH. Numa forma de realização particular, os compostos da presente invenção são co-administrado com um composto citostático selecionado de entre o grupo consistindo de cisplatina, doxorubicina, taxol, taxotere e mitomicina C.
Outra classe de compostos ativos que podem ser utilizados na presente invenção são aqueles que são capazes de sensibilizar ou induzir a apoptose por ligação a recetores de morte ("agonistas de recetores de morte"). Tais agonistas de recetores de morte incluem ligantes dos recetores de morte como o fator de necrose tumoral (TNF-α), fator β de necrose tumoral (TNF-β, linfotoxina- a), LT- β (linfotoxina-β), TRAIL (Apo2L, ligante DR4), ligante CD95 (Fas, APO-1), ligante TRAMP (DR3, Apo-3), ligante DR6, bem como fragmentos e derivados de qualquer um dos referidos ligantes. Numa forma de realização particular, o ligante do recetor de morte é o TNF-α. Numa outra forma de realização particular, o ligante do recetor de morte é Apo2L/TRAIL. Além disso, os agonistas de recetores de morte compreendem anticorpos de agonistas para recetores de morte, tais como o anticorpo anti-CD95, anticorpo anti-TRAIL-Rl (DR4), anticorpo anti-TRAIL-R2 (DR5), anticorpo anti-TRAIL-R3, 47 anticorpo anti-TRAIL-R4, anticorpo anti-DR6, anticorpo anti-TNF-Rl e anticorpo anti-TRAMP (DR3), bem como fragmentos e derivados de qualquer um dos referidos anticorpos.
Para efeitos de sensibilização de células para a apoptose, os compostos da presente invenção podem ser também usados em combinação com terapia de radiação. A frase "terapia de radiação" refere-se ao uso de radiação eletromagnética ou em partículas no tratamento de neoplasia. A terapia de radiação é baseada no principio de que a radiação de dosagem alta administrada a uma área alvo vai resultar na morte de células em reprodução em tecidos tanto tumorais como normais. 0 regime de dosagem de radiação é geralmente definido em termos de dose de absorção de radiação (rad), tempo e fracionamento, e deve ser cuidadosamente definida pelo oncologista. A quantidade de radiação que um paciente recebe dependerá de considerações diversas, incluindo a localização do tumor em relação a outros órgãos do corpo, e a medida em que o tumor se encontre espalhado. Exemplos de agentes radioterapêuticos são fornecidos em, mas não se limitam a, terapia de radiação e é conhecida na arte (Hellman, Principies of Radiation Therapy, Câncer, em Principies I and Practice of Oncology, 24875 (Devita et al., 4a ed., Vol 1, 1993) . Recentes avanços em terapia de radiação incluem a radiação de feixes externos adaptados tridimensionais, terapia de radiação de intensidade modulada (IMRT), radiocirurgia estereoestática e braquiterapia (terapia de radiação intersticial), esta última colocando a fonte de radiação diretamente no tumor como "sementes" implantadas. Estas modalidades de tratamento mais recentes administram doses maiores de radiação no tumor, o que representa a sua eficácia 48 aumentada quando comparada com a terapia de radiação de feixe externo normalizada. A radiação ionizante com radionuclideos beta-emissores é considerada a mais útil para aplicações radioterapêuticas por causa da transferência de energia linear moderada (LET) da partícula ionizante (electrão) e da sua gama intermédia (tipicamente vários milímetros de tecido). Os raios gama administram uma dosagem em níveis mais baixos a distâncias muito maiores. As partículas alfa representam o outro extremo, administrando uma dosagem muito elevada de LET, mas tendo uma gama extremamente limitada e, portanto, têm de estar em contacto íntimo com as células do tecido a ser tratado. Além disso, os emissores alfa são geralmente metais pesados, o que limita a química possível e apresenta riscos indevidos desde o vazamento do radionuclídeo a partir da área a ser tratada. Dependendo do tumor a ser tratado, todos os tipos de emissores são concebíveis no âmbito da presente invenção. Além disso, a presente invenção abrange os tipos de radiação não ionizante, como por exemplo radiação ultravioleta (UV), luz de alta energia visível, radiação de micro-ondas (terapia de hipertermia), radiação de infravermelhos (IR) e laser. Numa forma de realização particular presente invenção, é aplicada a radiação UV.
Os compostos da invenção inibem a angiogénese e são portanto úteis no tratamento de doenças ou condições mediadas por angiogénese, tais como tumores, em particular tumores sólidos, tais como do cólon, pulmão, pâncreas, ovário, mama, e glioma. Além disso, os compostos da invenção são úteis para o tratamento de degeneração macular por exemplo a degeneração macular húmida relacionada com a 49 idade. Os compostos da invenção também são úteis para o tratamento de doenças inflamatórias/imunológicas, tais como a doença de Crohn, doença inflamatória do intestino, sindroma de Sjogren, asma, rejeição de transplantes de órgãos, eritmatoses de lúpus sistémico, artrite reumatóide, artrite psoriática, psoriase e esclerose múltipla. Os compostos da invenção também são úteis como agente depilatório. A invenção também inclui composições farmacêuticas ou medicamentos que contêm os compostos da invenção e um veiculo terapeuticamente inerte, diluente ou excipiente, bem como métodos de utilização dos compostos da invenção para preparar tais composições e medicamentos. Tipicamente, os compostos da invenção utilizados nos métodos da invenção são formulados por mistura à temperatura ambiente ao pH apropriado, e no grau de pureza desejado, com veiculos fisiologicamente aceitáveis, isto é, veiculos que são não-tóxicos para os recipientes nas dosagens e concentrações empregues numa forma de administração galénica. 0 pH da formulação depende principalmente do uso particular e da concentração do composto, mas pode variar desde cerca de 3 a cerca de 8. Uma formulação particular é um tampão de acetato a um pH 5. 0 composto inibidor para utilização aqui pode estar numa formulação estéril. 0 composto pode ser armazenado como uma composição sólida, embora as formulações liofilizadas ou soluções aquosas sejam aceitáveis. A composição da invenção será formulada, doseada e administrada de uma maneira consistente com a boa prática médica. Os fatores para consideração neste contexto incluem o distúrbio particular a ser tratada, o mamifero particular 50 a ser tratado, a condição clínica do paciente individual, a causa do distúrbio, o local de administração do agente, o método de administração, o agendamento da administração e outros fatores conhecidos dos médicos. O termo "quantidade eficaz" do composto a ser administrado será gerido por tais considerações, e será a quantidade mínima necessária para diminuir a via de sinalização de hedgehog, ou então é a quantidade mínima necessária para provocar a redução do tamanho, volume ou a massa de um tumor que seja sensível à sinalização de hedgehog, ou uma redução no aumento do tamanho, volume ou a massa de tal tumor. Alternativamente "quantidade eficaz" do composto significa a quantidade necessária para reduzir o número de células malignas, ou a taxa de aumento do número de células malignas. Alternativamente, "quantidade eficaz" é a quantidade do composto da invenção necessária para aumentar a sobrevivência de pacientes afligidos com um tumor sensível à via anti-hedgehog. Tal quantidade pode ser inferior à quantidade que é tóxica à células normais, ou aos mamíferos como um todo. Com respeito às indicações não-malignas, "quantidade eficaz" significa a quantidade de composto da presente invenção necessária para diminuir a gravidade da indicação particular ou sintomas dos mesmos.
De um modo geral, a quantidade farmaceuticamente eficaz inicial do composto da invenção, administrada parentericamente por dose, estará na gama de cerca de 0,01 a cerca de 100 mg/kg, por exemplo, cerca de 0,1 a cerca de 20 mg/kg de peso corporal do paciente por dia, por exemplo, cerca de 0,3 a cerca de 15 mg/kg/dia. As formas unitárias de dosagem oral, tais como comprimidos e cápsulas, podem conter desde cerca de 25 a cerca de 1000 mg do composto da invenção. 51 0 composto da invenção pode ser administrado por quaisquer meios adequados, incluindo oral, tópico, transdérmico, parentérico, subcutâneo, intraperitoneal, intrapulmonar e intranasal, e, se desejado para o tratamento local, a administração intralesional. Infusões parentéricas incluem a administração intramuscular, intravenosa, intra-arterial, intraperitoneal, ou subcutânea. Um exemplo de uma forma de dosaqem oral adequada é um comprimido contendo cerca de 25 mg, 50 mg, 100 mg, 250 mg, ou 500 mg do composto da invenção, composto com cerca de 90-30 mg de lactose anidra, cerca de 5-40 mg de croscarmelose de sódio, cerca de 5 -30mg de polivinilpirrolidona (PVP) K30, e cerca de 1-10 mg de estearato de magnésio. Os ingredientes em pó são primeiramente misturados em conjunto e, em seguida, misturados com uma solução de PVP. A composição resultante pode ser seca, granulada, misturada com o estearato de magnésio e comprimida para formar comprimidos utilizando equipamento convencional. Uma formulação de aerossol pode ser preparada por dissolução do composto, por exemplo 5-400 mg, da invenção numa solução tampão adequada, por exemplo um tampão de fosfato, a adição de um tonificante, por exemplo um sal como cloreto de sódio, se desejado. A solução é filtrada tipicamente, por exemplo usando um filtro de 0,2 micrómetros, para remover as impurezas e contaminantes. As formulações tópicas incluem pomadas, cremes, loções, pós, soluções, pessários, pulverizações, aerossóis e cápsulas. Os unguentos e cremes podem ser formulados com uma base aquosa ou oleosa com a adição de agentes espessantes adequados e/ou agentes de gelificação e/ou solventes. Tais bases podem incluir água e/ou um óleo tal como parafina liquida ou um óleo vegetal tal como óleo de amendoim ou óleo de ricino ou um solvente tal como um 52 polietileno glicol. Os agentes espessantes que podem ser utilizados incluem a vaselina, estearato de alumínio, álcool cetoestearílico, polietilenoglicóis, cera microcristalina e cera de abelha. As loções podem ser formuladas com uma base aquosa ou oleosa e podem conter um ou mais agentes emulsionantes, agentes estabilizantes, agentes dispersantes, agentes de suspensão ou agentes espessantes. Os pós para a aplicação externa podem ser formados com o auxílio de qualquer base de pó adequada, por exemplo, talco, lactose ou amido. As gotas podem ser formuladas com uma base aquosa ou não aquosa compreendendo também um ou mais agentes dispersantes, agentes solubilizantes ou agentes de suspensão.
EXEMPLOS A invenção será mais completamente entendida por referência aos exemplos que se seguem. Eles não devem, no entanto, ser considerados como limitativos do âmbito da invenção. As abreviaturas aqui utilizadas são as seguintes: DIPEA: diisopropiletilamina; DMAP: 4-dimetilaminopiridina; DME: 1,2-dimetoxietano; DMF: dimetilformamida; EDO: l-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida; HATU: hexafluorofosfato de 0-(7-Azobenzotriazol-l-il)- 1,1,3,3 tetrametilurónio; HOAc: ácido acético HOBt: hidroxibenzotriazol NBS: N-bromosucinamida; ROESY: Espectroscopia de efeito rotativo de Overhauser TASF: difluorotrimetilsilicato de tris(dimetilamino)sulfónio; 53 THF: tetrahidrofurano;
Todos os reagentes foram obtidos comercialmente, a menos que indicado em contrário. As reações foram realizadas utilizando material em vidro seco em estufa sob uma atmosfera de azoto. Liquidos e soluções sensíveis ao ar e à humidade foram transferidos através de uma seringa ou cânula de aço inoxidável. As soluções orgânicas foram concentradas sob pressão reduzida (ca. 15 mm Hg) por evaporação rotativa. Salvo indicação em contrário, todos os solventes utilizados foram obtidos comercialmente. A purificação cromatográfica dos produtos foi conseguida pelo uso de CombiFlash Companion and media da Isco. Os tempos de reação são dados apenas para ilustração. 0 decurso das reações foi seguido por cromatografia em camada fina (TLC) e cromatografia liquida acoplada a espetrometria de massa (LC-MS). A cromatografia em camada fina (TLC) foi realizada em placas de silica gel 60 F254 da EM Science (250 pm) . A visualização do cromatograma desenvolvido foi realizada por extinção de fluorescência. As LC-MS foram adquiridas com um aparelho Shimadzu 10AD LC numa coluna Phenomenex (50 x 4,6 mm, 5 pm) funcionando a 3 mL/min. Foi usada uma monitorização de detetores Shimadzu SPD-10A a 214 e 254 nm. Espetrometria de massa de quadripolo simples foi realizada num espetrómetro de massa da Applied Biosystems. Os espetros de ressonância magnética nuclear (RMN) foram adquiridos num espetrómetro da Varian Inova funcionando a 400 MHz para 1H e são referenciados internamente para o tetrametilsilano (TMS) em partes por milhão (ppm). Os dados para RMN são registados como se segue: alteração quimica (δ, ppm), multiplicidade (s, singleto; bs, singleto alargado; d, dupleto; t, tripleto; q, quarteto; quint, quinteto; sext, sexteto; hept, hepteto; m, multipleto; bm, 54 multipleto alargado), e integração. A estrutura e a pureza de todos os produtos finais foram avaliadas por pelo menos uma das seguintes técnicas: LC-MS, RMN, TLC.
Exemplo 1 Procedimento Geral
Os compostos dos exemplos 2-11 foram preparados de acordo com o seguinte procedimento geral.
A: procedimento de redução A uma solução agitada magneticamente do nitroaromático apropriado (1 eq) em 10 mL de HOAc foi adicionado pó de ferro de 325 malhas (10 eq) numa única porção. A suspensão resultante foi aquecida a 120 °C durante 30 minutos, depois vertida sobre gelo. A solução resultante foi extraida com EtOAc (3 x 20 mL) . Os orgânicos combinados foram lavados com NaHC03 saturado (3 x 10 mL) , secos com MgS04 anidro sólido, e em seguida, foram concentrados. O produto em bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash para se obter a anilina desejada. 55 B: procedimento de acilação A uma solução agitada magneticamente da anilina apropriada (1 eq) em 20 mL de diclorometano foi adicionada diisopropiletilamina (2,1 eq), seguida pelo cloreto de ácido apropriado (1,4 eq) numa única porção. A reação foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. A solução resultante foi agitada durante mais 3 h, e depois foi temperada pela adição de 30 mL de IN HC1. As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraida com EtOAc (3 x 30 mL) . Os orgânicos combinados foram lavados com NaHC03 saturado (1 x 20 mL) , secos com MgS04 anidro sólido, e em seguida, foram concentrados. O produto em bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash para se obter a amida desejada. C: procedimento de bromação A uma solução agitada magneticamente da acetofenona apropriada (1 eq) em 1 mL de benzeno a 0 °C foi adicionado lentamente 1 mL de HBr a 30% em HOAc, mantendo a temperatura. Br2 (1,1 eq) foi então adicionado gota a gota, e a solução resultante foi agitada a 0 °C durante 1 h. A reação foi vertida sobre gelo, e a solução foi neutralizada com NaHCCb sólido, sendo em seguida, extraida com EtOAc (3 x 10 mL) . Os orgânicos combinados foram secos com MgS04 anidro sólido, e em seguida, foram concentrados. A a-bromoacetofenona resultante foi transferida para a reação seguinte sem purificação. D: procedimento de formação de quinoxalina. A uma solução agitada magneticamente da α-bromoacetofenona apropriada (1 eq) em 5 mL de etanol adicionou-se a 1,2-fenilenodiamina apropriada (2,7 eq), seguida por DIPEA (3,4 56 eq). A solução resultante foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro com uma atmosfera de ar. A reação foi concentrada e, em seguida purificada por cromatografia de fase inversa numa coluna C-18 utilizando um gradiente de 0 a 90% de CH3CN em água, ambos contendo TFA a 0,05%. Os produtos contendo frações foram liofilizados para se obter um pó.
Exemplo 2 N-(4-cloro-3-(quinoxalin-3-il)fenil)-3,5- dimetoxibenzamida
0 procedimento A foi realizado com 2'-cloro-5'-nitro-acetofenona (0,22 g, 1,1 mmol) e pó de ferro (0,64 g, 11 mmol). O produto em bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash em silica gel eluindo com EtOAc:hexanos (0:1 a 1:0) para se obter a 2'-cloro-5'-amino-acetofenona desej ada. A uma solução agitada magneticamente de 2'-cloro-5'-amino-acetofenona (0,72 g, 4,2 mmol) em 20 mL de diclorometano foi adicionada diisopropiletilamina (2,2 mL, 12,6 mmol). Cloreto de 3,5-dimetoxibenzoilo (1,39 g, 6,9 mmol) numa única porção. A reação foi agitada durante 2 h à temperatura ambiente, e uma segunda porção de cloreto de 3,5-dimetoxibenzoilo (1,26 g, 6,3 mmol) foi adicionada, seguida de diisopropiletilamina (1,0 mL, 5,7 mmol). A solução resultante foi agitada durante mais 3 h, e depois foi temperada pela adição de 30 mL de IN HC1. As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com EtOAc (3 57 χ 30 mL) . Os orgânicos combinados foram lavados com NaHC03 saturado (1 x 20 mL) , secos com MSO4 anidro sólido, e em seguida, foram concentrados. 0 produto em bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash sobre silica gel eluindo com EtOAc: hexanos (0:1 a 2:5) para se obter a N- (3-acetil-4-clorofenil)-3,5-dimetoxibenzamida desej ada. O procedimento C foi realizado utilizando N-(3-acetil-4-clorofenil)-3,5-dimetoxibenzamida (0,1 g, 0,3 mmol) e Br2 (0,017 mL, 0,33 mmol) para se obter N- (3-(2-bromoacetil)-4-clorofenil)-3,5-dimetoxibenzamida. O procedimento D foi realizado utilizando N-(3-(2-bromoacetil)-4-clorofenil)-3,5-dimetoxibenzamida (0,029 g, 0,07 mmol), 1,2-fenilenodiamina (0,021 g, 0,19 mmol) e DIPEA (0,042 mL, 0,24 mmol) para se obter N-(4-cloro-3-(quinoxalin-3-il)fenil)-3,5-dimetoxibenzamida na forma de um pó castanho claro. 2h rmn (EDCI3, 400 MHz) δ 9,26 (s, 1H) , 8,15· OO í—1 OO 1 (m, CM 7,91-7, 92 (m, 2H) , 7,80-7,82 (m, 2H) , 7,54 (d, 1H) , 6, 96 (d, 2H) , 6,61 (t. 1H) , 3,83 (s, 6H) ppm) , MS (Ql) XXX (M)+.
Exemplo 3 N-(4-cloro-3-(6-metilquinoxalin-2-il)fenil)-3,5-dime toxibenz amida ΟΜβ
O procedimento D foi realizado utilizando 77-(3-(2-bromoacetil)-4-clorofenil)-3,5-dimetoxibenzamida (0,045 g, 0,11 mmol), 4-metil-l,2-fenilenodiamina (0,022 g, 0,18 mmol) e Dl ΡΕΑ (0,06 mL, 0,34 mmol) . A N- (4-cloro-3 - (6 -metilquinoxalin-2-il)fenil)-3,5-dimetoxibenzamida resultante foi um pó claro e consistia de uma mistura de produtos 6- e 7-metilados. RMN (CDC13, 400 MHz) δ 9,21 (s, 1H) , 8,08 (d, 1H) , 7,90- 7, 96 (m, 3H) , 7,68 (d, 1H), 7, 56 (d, 1H) , 6,98 (d, 2H) , 6, 64 (t, 1H) , 3,83 (s, 6H) ppm); MS (Ql) 434, .3 (M)+.
Exemplo 4 N- (4-cloro-3-(5,7-dimetilquinoxalin-3-il)fenil)-3,5-dimetoxibenzamida OMe
0 procedimento D foi realizado utilizando N-(3-(2-bromoacetil)-4-clorofenil)-3,5-dimetoxibenzamida (0,044 g, 0,11), 3,5-dimetil-l,2-fenilenodiamina (0,020 g, 0,18 mmol) e DIPEA (0,06 mL, 0,34 mmol). A N- (4-cloro-3- (5,7-dimetilquinoxalin-3-il)fenil)-3,5-dimetoxibenzamida resultante foi um pó claro cuja regioguimica foi determinada por analogia ao exemplo 10. 1H RMN (CDCI3, 400 MHz) δ 9 , 22 (s, 1H) , 7, 95 (d, 1H), 7,86 7, 90 (m, 2H) , 7,78 (br s, 1H) , - 7, 56 (d, 1H) , 7,51 (br s 1H) , 6,79-7,0 0 (m, 2H) 6, 62-6 , 66 (m, 1H) , 3,86 (s , 6H) 2,82 (s, 3H), 2,59 (s, 3H) ppm; MS (Ql) 448,0 (M)+.
Exemplo 5 N- (4-cloro-3-(5-metilquinoxalin-3-il)fenil)-3,5-dimetoxibenzamida 59 0 procedimento D foi realizado utilizando N-(3-(2-bromoacetil)-4-clorofenil)-3,5-dimetoxibenzamida (0,023 g, 0,06 mmol), 2,3-diaminotolueno (0,027 g, 0,22 mmol) e DIPEA (0,05 mL, 0,30 mmol). N-(4-cloro-3-(5-metilquinoxalin-3-il)fenil)-3,5-dimetoxibenzamida foi um pó claro cuja regioquimica foi determinada por analogia ao exemplo 10. RMN (CDCI3, 400 MHz) δ 9,26 (s, 1H) , 8,00 -8,03 (m, 1H), 7, 96 (d, 1H), 7,89-7,91 (m, 1H) , 7 , 85 (dd, 1H) , 7,65-7,74 (m, 2H) , 7,514 (d, 1H) , 6,96-7 ,98 (m, 2H) , 6, 61- -6,62 (m, 1H) , 3, 83 (s, 6H), 2,85 (s, 3H) ppm; : MS (Ql) 434,0 (M)+.
Exemplo 6 N- (4-cloro-3-(5,6-dimetilquinoxalin-3-il)fenil)-3,5-dimetoxibenzamida OMe
OMe O processo D foi realizado utilizando N-(3-(2-bromoacetil)-4-clorofenil)-3,5-dimetoxibenzamida (0,034 g, 0,08 mmol), 3,4-dimetilbenzeno-l,2-diamina (0,017 g, 0,12 mmol) e DIPEA (0,042 mL, 0,24 mmol). N-(4-chloro-3-(5,6- dimetilquinoxalin-3-il)fenil)-3,5-dimetoxibenzamida foi um pó claro cuja regioquimica foi determinada por analogia ao exemplo 10. ΧΗ RMN (CDC13, 400 MHz) δ 9,26 (s, 1H) , 8, 00-8,03 (m, 1H) , 7,96 (d, 1H) , 7,89-7,91 (m, 1H) , 7,85 (dd, 1H) , 7,65-7,74 (m, 2H) , 7,514 (d, 1H) , 6, 96-7, 98 (m, 2H) , 6,61-6,62 (m, 1H), 3,83 (s, 6H), 2,85 (s, 3H) ppm; MS (Ql) XXX (M)+. 60
Exemplo 7 N-(4-cloro-3-(quinoxalin-3-il)fenil)-6- (trifluorometil)-2-metilpiridina-3-carboxamida
0 procedimento B foi realizado utilizando 1-(5-amino-2-clorofenil)etanona (0,4 g, 2,4 mmol), trietilamina (0,7 mL, 5,0 mmol) e cloreto de 2-metil-6-(trifluorometil)piridina-3-carbonilo (0,76 g, 3,4 mmol). 0 procedimento C foi realizado utilizando N- (3-acetil-4-clorofenil)-6-(trifluorometil)-2-metilpiridina-3-carboxamida (0,1 g, 0,3 mmol) e Br2 (0,017 mL, 0,33 mmol) para se obter N- (3-(2-bromoacetil)-4-clorofenil)-3,5-dimetoxibenzamida. O procedimento D foi realizado utilizando N-(3-(2-bromoacetil)-4-clorofenil)-6-(trifluorometil)-2-metilpiridina-3-carboxamida (0,029 g, 0,07 mmol), 1,2-fenilenodiamina (0,021 g, 0,19 mmol) e DIPEA (0,042 mL, 0,24 mmol) para se obter N-(4-cloro-3-(quinoxalin-3-il)fenil)-3,5-dimetoxibenzamida como um pó castanho claro. RMN (CDC13, 400 MHz) δ 9,30 (s, 1H) , 8,17- -8,24 (m, 2H) 7,95-8, 0 0 (m, 2H) , 7,84-7,90 (m, 3H) , 7,59- 7, 64 (m, 3H) 2,81 (s, 3H) ppm, MS (Ql) 443,1 (M)+.
Exemplo 8 N-(4-cloro-3-(6-metilquinoxalin-2-il)fenil)-6-(trifluororne til)-2-metilpiridina-3-carboxamida 61
0 procedimento D foi realizado utilizando N-(3-(2-bromoacetil)-4-clorofenil)-6-(trifluorometil)-2-metilpiridina-3-carboxamida (0,042 g, 0,10 mmol), 4-metil-1,2-fenilenodiamina (0,025 g, 0,20 mmol) e DIPEA (0,052 mL, 0,30 mmol). A N-(4-cloro-3-(6-metilquinoxalin-2-il)fenil)- 6- (trifluorometil)-2-metilpiridina-3-carboxamida resultante era um pó claro e consistia de uma mistura de produtos 6- e 7- metilados. 2H RMN (CDC13, 400 MHz) δ 9,22 (s, 1H) , 8,09 (d, 1H) , 7,86-7,98 (m, 4H) , 7,77 (br s, 1H) , 7,71 (d, 1H) , 7, 56-7, 62 (m, 2H), 2,80 (s, 3H), 2,64 (s, 3H) ppm; MS (Ql) 457,1 (M)+.
Exemplo 9 N- (4-cloro-3-(5,7-dimetilquinoxalin-3-il)fenil)-6-(trifluorometil)-2-metilpiridina-3-carboxamida
O procedimento D foi realizado utilizando N-(3-(2-bromoacetil)-4-clorofenil)-6-(trifluorometil)-2-metilpiridina-3-carboxamida (0,038 g, 0,09 mmol), 3,5-dimetil-1,2-fenilenodiamina (0,029 g, 0,26 mmol) e DIPEA' (0,052 mL, 0,30 mmol). A N-(4-cloro-3-(5,7-dimetilquinoxalin-3-il)fenil)-6-(trifluorometil)-2-metilpiridina-3-carboxamida resultante era um pó claro cuja regioquimica foi determinada por analogia ao exemplo 10. 62 RMN (DMSO, 400 MHz) δ 11,05 (s, 1H) , 8,41 (s, 1H) , 8,22 (d, 1H) , 7,92 (d, 1H) , 7,81-7 ,86 (m, 1H) , 7, 77 (d, 1H) , 7,68 (d , 1H), 7,57 (br s, 1H), 6, 81 (d, 1H) , 2, 66 (s, 3H) , 2,51 (s, 3H); MS (Ql) XXX (M)+.
Exemplo 10 N-(4-cloro-3-(5-metilquinoxalin-3-il)fenil)-6-(trifluorometil)-2-metilpiridina-3-carboxamida
0 procedimento D foi realizado utilizando N- (3- (2-bromoacetil)-4-clorofenil)-6-(trifluorometil)-2-metilpiridina-3-carboxamida (0,026 g, 0,06 mmol), 2,3-diaminotolueno (0,018 g, 0,15 mmol) e DIPEA (0,05 mL, 0,30 mmol) . N- (4-cloro-3-(5-metilquinoxalin-3-il)fenil)-6- (trifluorometil)-2-metilpiridina-3-carboxamida era um pó cujo regioquímica foi determinada por observação de transferência de magnetização a partir do metilo de quinoxalina para o protão na posição 2 do anel fenilo central e sem transferência para o protão na posição 2 de quinoxalina durante o decurso de uma experiência ROESY. ΧΗ RMN (CDC13, 400 MHz) δ 9,26 (s, 1H) , 8,00-8,03 (m, 1H) , 7,96 (d, 1H) , 7,89-7,91 (m, 1H) , 7,85 (dd, 1H) , 7,65-7,74 (m, 2H) , 7,514 (d, 1H) , 6, 96-7, 98 (m, 2H) , 6,61-6,62 (m, 1H), 3,83 (s, 6H), 2,85 (s, 3H) ppm; MS (Ql) 457,1 (M)+.
Exemplo 11 N- (4-cloro-3-(5,6-dimetilquinoxalin-3-il)fenil)-6-(trifluorometil)-2-metilpiridina-3-carboxamida 63
0 procedimento D foi realizado utilizando 17-(3-(2-bromoacetil)-4-clorofenil)-6-(trifluorometil)-2-metilpiridina-3-carboxamida (0,018 g, 0,04 mmol), 3,4-dimetilbenzeno-1,2-diamina (0,01 g, 0,07 mmol) e DIPEA (0,052 mL, 0,3 mmol). A N- (4-cloro-3-(5,6-dimetilquinoxalin-3-il)fenil)-6-(trifluorometil)-2-metilpiridina-3-carboxamida era um pó cuja luz regioquimica foi determinada por analogia ao exemplo 10.
2H RMN (CDC13, 400 MHz) δ 9,18 (s, 1H) , 7,89-7, 98 (m, 3H) , 7,83-7, 87 (m, 1H) , 7,68 (br s, 1H) , 7,64 (d, 1H) , 7,64-7,61 (m, 2H) , 2,78 (s, 3H) , 2,75 (s, 3H) , 2,54 (s, 3H) ppm; MS (Ql) 471,3 (M)+.
Exemplo 12 Procedimento Geral O composto do exemplo 13 foi preparado de acordo com o seguinte procedimento geral.
64 A: procedimento de bromação A uma solução agitada magneticamente da acetofenona apropriada (1 eq) em 40 mL de benzeno a 0 °C foram adicionados lentamente 40 mL de HBr a 30% em HOAc, mantendo a temperatura. Br2 (1,05 eq) foi então adicionado gota a gota, e a solução resultante foi agitada a 0 °C durante 15 min. A reação foi vertida em gelo e, em seguida extraída com EtOAc (3 x 30 mL). Os orgânicos combinados foram secos com MgS04 anidro sólido, e em seguida, foram concentrados. O produto em bruto resultante alfa-bromoacetofenona foi purificado por cromatografia em coluna flash. B: procedimento de formação de quinoxalina A uma solução agitada magneticamente da alfa-
bromoacetof enona apropriada (1 eq) em 200 mL de etanol adicionou-se a 1,2-fenilenodiamina apropriada (2,4 eq) , seguida de adição de acetato de sódio sólido (3 eq) . A solução resultante foi aquecida até ao refluxo e agitada de um dia para o outro com uma atmosfera de ar. O produto formou precipitados, e assim a reação foi filtrada sob vácuo, e os sólidos foram lavados com 50 mL de etanol frio seguido por lavagem com 50 mL de 0,1 N de HC1. O produto foi continuado sem purificação adicional. C: procedimento de redução A uma suspensão agitada magneticamente do nitroaromático apropriado (1 eq) em 100 mL de HOAc foi adicionado pó de ferro de 325 malhas (3 eq) numa única porção. A suspensão resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h, tempo durante o qual os orgânicos se dissolveram por completo, formando uma solução vermelha escura. A reação 65 foi então vertida em gelo, e a solução resultante foi extraida com EtOAc (3 x 200 mL) . Os orgânicos combinados foram lavados com NaHC03 saturado (3 x 200 mL) , secos com MgS04 anidro sólido, e em seguida, foram concentrados. O produto em bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash para se obter a anilina desejada. D: procedimento de acilação A uma solução agitada magneticamente do ácido apropriado (1,05 eq) em 20 mL de DMF, foi adicionado EDC (2,0 eq) e DIPEA (2,0 eq) , seguido por 6-cloro-hidroxibenzotriazole(2 eq). A solução resultante foi agitada durante 30 minutos à temperatura ambiente, em seguida, a anilina apropriada foi adicionada e a agitação continuou durante a noite à temperatura ambiente. A reação foi diluída com 100 mL de água e extraída com EtOAc (3 x 50 mL) . Os orgânicos combinados foram lavados com água (3 x 100 mL) , secos com MgS04 anidro sólido, e em seguida, foram concentrados. O produto em bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash para se obter a amida desejada.
Exemplo 13 N-(4-cloro-3-quinoxalin-2-il-fenil)-4- metanossulfonil-benzamida
O procedimento A foi realizado com 2'-cloro-5' -nitro-acetofenona (4,0 g, 20 mmol) e bromo (1,13 mL, 22 mmol). 0 produto em bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash em sílica gel eluindo com EtOAc: hexanos (0:1 a 1:4) 66 para se obter a 2-bromo-2'cloro-5' -nitroacetofenona desejada (5,4 g, 19,2 mmol). 0 procedimento B foi realizado com 2-bromo-2' cloro-5' -nitroacetofenona (14,16 g, 50 mmol), 1,2-fenilenodiamina (13,1 g, 120 mmol) e NaOAc (12,4, 150 mmol) para se obter a 2-(2-cloro-5-nitro-fenil)-quinoxalina desejada (8,6 g, 30 mmol). 0 procedimento C foi realizado utilizando quinoxalina (8,6 g, 30 mmol) e Fe (5,2 g, 90 mmol) para se obter anilina (5,3 g, 20,7 mmo1). O procedimento D foi realizado utilizando ácido 4-(metilsulf onil) benzoico (102 mg, 0,49 mmol), EDC (186 mg, 0,93 mmol), DIPEA (0,16 mL, 0,93 mmol), 6-cloro- hidroxibenzotriazol (162 mg, 0,93 mmol) e anilina (119 mg, 0,46 mmol) . O produto em bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash em silica gel eluindo com EtOAc:hexanos (0:1 a 3:2) para se obter a 4-cloro-3-quinoxalin-2-il-fenilamina desejada (104 mg, 0,24 mmol). RMN (d6· -DMSO, 300 MHz) δ 10,81 (s, 1H) , 9,25 (s, 1H) 8,23-8, 15 (m, 4H) , 8 ,11-8,00 (m, 3H) , 7, 97- -7, 90 (m, 2H) 7,69 (s, 1H), 3,30 (s, 3H) ppm); MS (Ql) 438,0 (M)+.
Exemplo 14 Ensaios da inibição da sinalização de hedgehog
Linhagem de Células Repórter em Ratinhos - células 10T1/2-GliLuc [S12] (derivadas da linhagem celular C3H10T1 / 2 ATCC # CCL-226); Fibroblastos Embrionários em Ratinhos);
Meio de Crescimento: Meio Eagle Modificado por Dulbecco (DMEM) suplementado com 10% de Soro Fetal Bovino (FBS), 10 67 unidades/mL de penicilina, 100 ug/mL de estreptomicina, 2 mM de glutamina, e 10 mM de HEPES.
Linhagens de Células Repórter Humanas - células HEPM-GliLuc [MZ24] (derivadas de HEPM, Mesênquima Palatino Embrionário Humano ATCC # CRL-1486); Meio de crescimento: Meio
Essencial Mínimo (MEM, com sais de Earle) suplementado com 10-20% de Soro Fetal Bovino (FBS) , 10 unidades/mL de penicilina, lOOug/mL de estreptomicina, 2 mM de glutamina, e 10 mM de HEPES e um pH 7,2.
Sonic hedgehog - conjugado octilado N-terminal SHh humano recombinante.
Placas de Microtitulação (MTPs) - para a luciferase, as células de ensaio são colocadas em placas MTPs de 96 poços (Brancas, de Fundo Chato, de Visibilidade Acessível).
Meio de Ensaio da Luciferase - DMEM suplementado com 0,5% de FBS, 10 unidades/mL de penicilina, lOOug/mL de estreptomicina, 2mM de glutamina, e 10 mM de HEPES a um pH 7,2.
Mistura PBS/Ca/Mg - Tampão fosfato-salino (PBS), suplementado com 0,5 mM de CaCl2 e 1 mM de MgCl2.
Procedimento de Ensaio
As células S12 e MZ24, geneticamente modificadas para conter um gene repórter da luciferase dirigido pelo promotor Gli sensível a hedgehog, foram mantidas em pratos de cultura de tecidos em Meio de Crescimento a 37 °C e 5% de CO2. As culturas de células foram passadas em sub-confluência a cada 3-4 dias. (1:20 a 1:40 para sl2; 1:3 a 68 1:10 para MZ24). As células foram colhidas e diluiu-se em Meio de Crescimento de tal modo que podiam ser plaqueadas numa placa de microtitulação a 10.000-20.000 células (sl2), ou 20.000-30.000 células (MZ24), por lOOul por poço. As células foram ainda incubadas por ~24-48 horas a 37 °C e a 5% de C02.
Após incubação de ~24-48 horas, o Meio de Crescimento nas placas de microtitulação foi substituido por Meio de Ensaio de Luciferase (100 ul por poço) , com e sem conjuqado de Sonic hedgehog-octilo, a 0,1-0,3 ug/mL (S12) ou 0,5-1,0 ug/mL (MZ24), e compostos de teste. As células foram então adicionalmente incubadas durante mais 24 hrs.
As placas de microtitulação foram então sujeitas ao kit de ensaio do gene repórter de luciferase (LucLite™), com modificações ao procedimento do fabricante em que o meio foi removido e o substrato foi reconstituído com 1:1 de PBS/Ca/Mg: tampão de lise em vez de tampão de lise plano. Em resumo, PBS/Ca/Mg foi misturada a uma razão de 1:1 com tampão de lise e 10 mL foram adicionados a cada frasco de substrato (o kit de ensaio 1000) . Em seguida, o meio da ensaio a partir da placa de microtitulação foi descartado, e adicionou-se lOOul desta mistura de substrato a cada poço. As placas foram incubadas à temperatura ambiente durante 20-30 minutos e, em seguida, as Unidades Relativas de Luz (RLUs) representativas do nível de expressão relativo do gene repórter da luciferase foram determinadas com um leitor TopCount (Packard) ou com um leitor Analyst (Molecular Devices). A tabela 1 que se segue representa a média de valores IC50 para os compostos particulares testados de acordo com os 69 procedimentos em cima, usando linhagens de células repórter Gli de ratinhos [ s12] ou de humanos [MZ24] indicando a inibição da via de sinalização de hedgehog.
Tabela 1
Composto IC5o(pM) Composto IC5o(pM) 6 <1 7 <1 15 <1 18 <1 19 <1 24 <1 27 <1 31 <1 33 <1 34 <1 35 <1 36 <1 37 <1 38 <1 39 <1 40 <1 41 <1 42 <1 43 <1 44 <1 45 <1 46 <1 47 <1 48 <1 50 <1 51 1 <1 52 <1 53 <1 54 <1 55 <1 56 <1
Lisboa, 17 de Setembro de 2012

Claims (9)

  1. 70 REIVINDICAÇÕES 1. Um composto da fórmula I:
    em que A é um carbociclo de
    X é NR4C(0) em que R4 é H ou alquilo; Y é N, CH ou cr3; r4 é selecionado do grupo que consiste em alquilo, cicloalquilo, arilo ou um heterociclo, cada um dos quais é opcionalmente substituído por hidroxilo, halogéneo, amino, nitro, alquilo, acilo, alquilsulfonilo, haloalquilo ou alcoxi; e o referido cicloalquilo, arilo e heterociclo também são opcionalmente substituídos por - (CH2) s- (Q) u_ (CH2) t-Z em que Q é C (0) , S(0), S02, C(0)0, 0C(0), NR4C (0) , NR4C(S), NR4S0, NR4S02, NR4C(0)NH, NR4C(S)NH, C (0)NR4, ou C(S)NR4; e Z é hidroxilo, amino, halogéneo, alquilsulfonilo, alcoxi, alcoxicarbonilo, haloalquilo, um carbociclo, um heterociclo ou um carbociclo ou heterociclo substituído por hidroxilo, halogéneo, amino, nitro, alquilo, acilo, alquilsulfonilo, haloalquilo, hidroxialquilo, alcoxi ou alcoxialcoxi; e s e t são independentemente 0 até 5 e u 71 é 0 ou 1; em que alquilo desiqna um qrupo hidrocarboneto alifático ramificado ou não ramificado, saturado ou insaturado, possuindo até 12 átomos de carbono; cicloalquilo designa um anel alifático mono-, bi-, ou triciclico possuindo 3 até 14 átomos de carbono; arilo designa um grupo aromático carbociclico fundido ou não fundido possuindo o número de átomos de carbono até 14 átomos de carbono; heterociclo designa r2 R- m n qualquer anel aromático (heteroarilo) ou não aromático mono-, bi-, ou triciclico, saturado ou insaturado, possuindo o número desde 5 até 14 átomos de anel, em que os átomos de anel são carbono e pelo menos um heteroátomo (azoto, enxofre ou oxigénio), é halogéneo, hidroxilo, alquilo, acilo ou alcoxi cada um opcionalmente substituído por hidroxilo, halogéneo, amino, nitro, alquilo, acilo, alquilsulfonilo ou alcoxi; é halogéneo, hidroxilo, alquilo, acilo ou alcoxi cada um opcionalmente substituído por hidroxilo, halogéneo, amino, nitro, alquilo, acilo, alquilsulfonilo ou alcoxi; é 0 - 3; é 1; e respetivos sais e solvatos. 2. 0 composto de acordo com a reivindicação 1, em que R2 é Cl ou Me. 0 composto de acordo com a reivindicação 1, em que A é A2a 3. 72 72
    Cl Ala 4. 0 composto de acordo com a reivindicação 1, em que R4 é H ou Me. 5. 0 composto de acordo com a reivindicação 4, em que em que R4 é H. 6. 0 composto de acordo com a reivindicação 1, em que R3 é Me ou F. 7. 0 composto de acordo com a reivindicação 1, em que R3 é Me e m é 1 ou 2. 8. 0 composto de acordo com a reivindicação 1, em que R3 é F e m é 1 ou 2. 9. 0 composto de acordo com a reivindicação 1, em que m é 0 .
  2. 10. O composto de acordo com a reivindicação 1, em que Ri é selecionado a partir do qrupo consistindo da fórmula Ila-IIm;
    Ha nb (Re)0 Λ ~W (Re)o
    Hd > (Re)o
    Ό He Dc
    73
    nj Ilk Π1 Hm em que W é 0, S ou NR7, em que R7 é H ou alquilo; R6 é halogéneo, amino, nitro, alquilo, acilo, alquilsulfonilo ou alcoxi; e o é 0-3. 11. 0 composto de acordo com a reivindicação 10, em que R7 é o grupo da fórmula lia. 12. 0 composto de acordo com a reivindicação 11, em que R6 é alcoxi e o é 1 ou 2.
  3. 13. O composto de acordo com a reivindicação 11, em que R7 é selecionado do grupo da fórmula lia1 - lia28. 74
    75 14. 0 composto de acordo com a reivindicação 10, em que Ri é o grupo da fórmula Ilb.
  4. 15. O composto de acordo com a reivindicação 14, em que Rô é alquilo ou haloalquilo.
  5. 16. O composto de acordo com a reivindicação 14, em que Ri é o grupo da fórmula Ilb1.
    17. 0 composto de acordo com a reivindicação 14, em que R3 é H, Me, ou F. 18. 0 composto de acordo com a reivindicação 14, em que R3 é H.
  6. 19. Uma composição compreendendo um composto de acordo com a reivindicação 1 e um veiculo farmaceuticamente aceitável.
  7. 20. Composição compreendendo uma quantidade eficaz de um composto de acordo com a reivindicação 1, para utilização no tratamento de cancro num mamífero.
  8. 21. Composição de acordo com a reivindicação 20, em que o referido cancro é carcinoma de células basais meduloblastoma, adenocarcinoma do pâncreas, carcinoma de células pequenas do pulmão, carcinoma da mama, rabdomiossarcoma, cancro no esófago, cancro no estômago, cancro do trato biliar. 76
  9. 22. Composição compreendendo uma quantidade eficaz de um composto de acordo com a reivindicação 1, para utilização na inibição da angiogénese num mamifero. Lisboa, 17 de Setembro de 2012
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