PT101111B

PT101111B - Processo para a preparacao de diacetilreina e composicao farmaceutica que a contem

Info

Publication number: PT101111B
Application number: PT10111192A
Authority: PT
Inventors: Wolf Grimminger; Alfons Carcasona; Pentti Hietala; Klaus Witthohn; Helga Zaeske
Original assignee: Madus Ag
Priority date: 1992-12-07
Filing date: 1992-12-07
Publication date: 1999-10-29
Also published as: PT101111A

Description

Descriç;ao referente à Patente cie

Invenção de MADAUS AKT1EMGE-S E L L S C Η A F T , a 1 e rn a , i n d u s t r i a 1 e comercial com sede em Ostrnerheimer

Strasse

198, 5000

Koln 91,

Republica

Federal

Alemã, (Inventores::

Dr.. Alfons

Carcasona,

D r.. W o 1 f G r i rn m i n ger, r e s i d entes na A1 e rn a n h a , D r.. P e n 111 H i e t a 1 a, residente na Finlândia, Dr.. Klaus Witthohn e Helga Zaeske, residentes na Alemanha), para PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE DIACETILREÍNA

D.....E......S.....C.....R_I......GL..S.....0

A invenção refere-se a um processa para a preparação de diacetilreína com grau de pureza farmacológico, com um teor residual total em derivado de aloemodina indese..... Jados inferior a 20 ppm, à própria diacetilreína preparada segundo este processo, e a uma composição farmacêutica contendo este composto..

II o

ê um ingrediente activo medicamentoso que p os s u i a c t i v i cl a cl e a n t i ··· a r t r i t i c a, a n t i—i n f 1 a rn a t ô r i a, a n t i— pirêtica e analgésica.. A diacetilreína é por isso utilizada para o tratamento cie doenças 'artríticas, veja-se por exemplo a DE-A 2? 11 493 e US-A.....4 244 998..

A diacetilreína pode preparar-se, por e~xernplo, por acetilaçao da barbaloina e oxidação, com trióxido de crómio, da barbaloina peracetilada obtida.. Além disso, a diacetilreína pode preparar.....se por acetilaçao da reina, que se pode obter, por exemplo, a partir da droga sena.

A diacetilreína preparada segundo este processo contêm, como componentes secundários indesejados, derivados de aloemodina, que resultam de uma oxidação incompleta corn trióxido de crómio ou que são extraídos conjuntamente na.extração da droga sena,. Estes componentes secunda..... rios aparecem em quantidades relativamente pequenas e são por isso muito difíceis de remover pelas operações de purificação clássicas.. Alem disso, o processo acima mencionado deixa resíduos de crómio que têm de ser removidos por métodos apropriados ..

A presente invenção tem assim como objectivo um processo para a preparação de diacetilreína que seja fácil de efectuar e que tenha um elevado rendimento, pelo qual se obtenha a diacetilreína com um grau de pureza farma..... cológica, com um teor residual total em derivados de aloern o d i n a indesejáve i s i n f e r i o r a 20 p p m..

Este objectivo atinge-se corn o processo de acordo com a invenção, que se cáracteriza por::

A) se submeter reína-9-antrona.....8-glucõsido contendo componentes de aloemodina (isto é, aloemodina e/ou seus derivados ) a urna extração líquido-líquido, corn urn solvente orgânico polar apenas parcialmente rniscível com água, a partir da fase aquosa.

B) se oxidar, após a extracçao, o reina.....

.....9 -· a n t r o n a -·· 8 ··· g 1 li c õ s i d o

C) se remover o grupo glucosido na posi.....

ção 8 do reina.....8.....glucósido, em meio ácido, e

D) se acetilar a reina obtida, obtendo-se assim a diacetilreina..

U rn a f o n t e de r e 1 n a - 9.....a n t r o n a ··· 8 - g 1 u c ó s i d o são os senosidos.contidos na droga sena. Uma forma preferencial de concretização da invenção é por isso um processo para a preparação de diacetilreina, completamente isenta de deri.....

vados de aloernodina, que se caracteriza por::

A) se submeter uma mistura de senisidos a uma redução para se obterem os compostos correspondentes reína-9-antrona-8.....glucósido e aloemodina-9~antrona-8-glucó— sido,

13) se efectuar uma extracção liquido.....líquido dos compostos obtidos, com urn solvente orgânico polar apenas parcialmente rniscível com água, a partir da fase aquosa,

C) se oxidar os compostos reina.....9.....antro.....

na-8-glucósido, contidos na fase aquosa, aos compostos antraquiηona corresponden tes,

D) se remover o grupo glucosilo na posição 8 do composto antraquinónico, em meio acido, e

E) se acetilar a 1,8.....di-hidroxiantraqui- n o n a o b t i d a ã d i ··- a c e ti 1 r e 1 n a..

Em

seguida, serão detalhados cada um dos passos do processo.

Redução dos......senosidos

A mistura de senosidos que se utilizou como material de partida pode obter-se, por exemplo, a partir da droga sena.

A droga sena consiste nas folhas e frutos secos da planta sena, por exemplo da sena indiana (cassia angnotifolia) e da sena egípcia (cassia acutifolia) .. A droga sena contêm diantronoglucõsidos da reina e da aloe-emodina. Os mais importantes são os senosidos A, B, Al, C, D e Dl.. Os senosidos correspondem à formula seguinte::

Nos senosidos A, B e Al R ê COOU e nos senosidos 0., D e Dl R é CI-^OH. Os senosidos A, Be Al ou 0, D e Dl são estereoisõmeros e distinguem.....se uns dos outros pela configuração nos ã tom os de. carbono 10 e 10’..

A obtenção dos senosidos a partir da droga sena encontra.....se descrita por exemplo na DE-A.....32 00 131, ã qual se farã aqui referência ern toda a sua extensão. Para tal, extrai-se primeiro a droga sena com metanol aquoso.. 0 concentrado obtido após remoção completa do metanol contêm os

senõsidos na fornia de sal de potássio.. Este concentrado é adepilado como material de partida para . o processo de acordo com a invenção. Pode ainda purificar.....se o concentrado por ext r a c ç ã o 1 i q u i d o.....1 i q u i d o c o rn a 1 c o ó i s o u c e t o n a s p a r c i a 1 m e n t e solúveis ern agua ( p„ ex. ,2-butanol, 2-butanona ) obtendo-se um produto refinado.. 0 refinado acidifica-se a um valor de pH de cerca de l,b a 2,0 e, através de nucleaçãoconsegue precipitar-se os senõsidos na forma de cristais., A mistura bruta de senõsidos obtida é tambérn utilizável como material de partida para o processo de acordo com a invenção.. Se se desejar pode ainda recristalizar-se mistura bruta de senõsidos

E rn alternai i v a, pode utilizar—se como material de partida o concentrado misturado com um álcool ou cetona parcialmente solúvel, ern água, em especial

2-butanol..

Na extracção da droga sena a relação clro ga/solvente de extracção é de 1::4 a 1::15., em especial de 1:4 a 1::10..

A extracção efectua.....se de preferência na pre.....sença de um tampão, por exemplo citrato tri—sòdico, gli— cina, bicarbonato de sódio cu sacarose.

Segundo o processo de acordo com a invenção submetem.....se estes materiais de partida a uma redução com-ρ1eta a o s co rrespon den tés reí n a-9-an tron a-8-g1ucõsido (R=COOH) e aloernodina-9—antrona-8 glucõsido (R-CH gOH), de f õrrnula:

“ COOHj

Redutores com um potencial de reduçrao adequado sao, por exemplo cloreto de estanho (II), diõxido de enxofre, boro.....hidrates de metais alcalinos e, de preferência, ditionitos de metais alcalinos, ern especial ditionito de sódio..

Para a execução da redução pode colocar..... -se o material de partida em solução ou suspenção aquosa e adicionar o agente redutor na forma sólida ou dissolvida em ãgua. Pode também trabalhar-se numa mistura de 2 fases, à qual se adiciona um solvente orgânico polar parcialmente miscível com ãgua, em especial 2-butanol ou acetona.

Pode fazer.....se a redução ã temperatura ambiente ou a temperatura mais elevada. É conveniente efectuar a redução a 40-60° C, em especial a 50-55° C. Trabalha™ -se com a solução ou suspensão de senosidos de partida a urn valor de pH ligeiramente acido ou ligeiramente alcalino, de preferência a pH 7™9„ Se se desejar, pode repetir-se a redu..... çSo várias vezes.

□ s 9 -· a n t r o n a ·· 8 g 1 ú c i cl o s f o r rn a d o s p r e c i p i tarn-se por adição de um acido, por exemplo ácido sulfúrico, até pH 4 a 4,5. É conveniente que a temperatura não seja superior a 40° C.. É conveniente, no caso da precipitação dos 9.....antrona.....θ-glúcidos e seu isolamento (por exemplo por filtração), trabalhar-se sob atmosfera de azoto, para evitar uma oxidação incontrolada destes compostos.

È necessário que a redução ocorra completamente.. E por isso conveniente empregar o agente redutor em grande excesso. Quando se utiliza ditionito de sódio utiliza™ .....se em geral de 1 a 4 vezes em peso a quantidade de ditionito de sódio ern relação ao conteúdo do material cie partida ern senosidos. Alérn disso, deixa-se áctuar o agente redutor pelo rnenos durante 2 horas, de preferência durante pelo menos 3 . ..... 6 horas. Ern geral, a reacção não dura mais que 10 horas. De preferência, repete-se a redução nas rnesmas condições..

produto obtido ê purificado antes da sua utilização no passo seguinte, dissolvendo.....o numa solução aquosa por adição de urna base (MaOH, KOI-I) até um valor de pl-l cerca de 6-7, extraindo a solução aquosa com 2-butanol, ace..... tona ou 2-butanona, e precipitando.....se de novo o produto por adição de um acido até um valor de pH’de cerca de 2--4..

Extracçãolíquido..... liquido

Nesta etapa removem.....se os componentes de aloernodina, em especial o aloernodina.....9.....antrona-8-glucósido.. Para tal © efectua.....se urna extracção líquido.....líquido do pro..... duto obtido com um solvente orgânico polar apenas parcialmente rniscível corn água e corn urna fase aquosa.. Solventes orgânicos polares adequados são alcalinois.....C4-C5 e dialquil-C-|-Cg-cetonas, como acetona, 1-butanol, 2-butanol e 2-butanona.. Utilizam-se de preferência 2-butanol ou acetona..

De preferência, adiciona.....se ã fase aquosa urn agente redutor de forrna a conferir ã fase aquosa, durante a extracção líquido-líquido, um potencial redox de -210mV ou mais negativo.. È conveniente usar o mesrno agente redutor do passo A, Quando se utiliza um ditionito de metal alcalino corno agente redutor é em geral suficiente uma solução de 2-4% ern peso, a um pH de 7 a 11, para manter as condições de potencial referidas.

A razão de volumes entre a. fase aquosa (fase densa ) © a fase orgânica (fase leve) situa-se em geral na garna de 1::5 a 1::40..

De preferência, ©fectua-s© a extracção líquido.....líquido ern contracorrente.. A rnistura dos compostos de

.... 7 .....

ί antrona é fornecida na forma da solução obtida após a redução ou, quando se isolam os compostos de antrona, na forma de urna solução a 3.....15% em peso..

Apôs a extração o reína-9-antrona-8-glucosido desejado encontra.....se na fase aquosa.. Precipita-se por adição de um acido até um valor de pH de cerca de 2 a 4., e recupera.....se da forma habitual...

Q^hjação do reina—9—antrona—8—cjluçôsido reína-9.....antrona-8.....glucósido obtido oxida-se então a reína-8.....glucósido, de fórmula:

Oxidantes apropriados para este fim sao, p.. ex.. , oxigénio, peróxidos (peróxido de hidrogénio) e compostos de manganês, crómio ou ferro no estado de oxidação mais elevado„ Utiliza—se de preferência um sal de ferro III, em especial, sulfato de ferro IV.. E conveniente trabalhar a tem.....

peratura elevada, rnas abaixo de 60°.. . Evita.....se assim a formação de produtos de oxidação indesejáveis e indefinidos.. Terminada a oxidação isola-se o reina-8-gJ..icòsido formado da maneira habitual...

Cisão do......grupoglucosilo grupo glucosilo na posição δ remove-se em meio ácido.. E conveniente trabalhar a cerca de 85 a 95°C..

produto obtido isola.....se da maneira habitual...

É conhecido que os senosiclos, após hidrólise ácida, se transformam directamente em reina por reacção com cloreto de ferro III, veja.....se por exemplo a DE-A-27 11 493.. Mo entanto, o rendimento é de apenas cerca de 10% e, além disso, a reina formada é difícil de separar..

No processo de acordo com a invenção efectua-se a cisão redutiva dos senusidos, a oxidação dos compostos de antrona formados aos componentes de antraquinanona e a cisão do grupo glucosilo na posição 8 dos compostos antraquinónicos em passos separados.. A seguir ã cisão redutiva removem-se todos os compostos, que nos passos seguintes poderiam levar ã formação de aloernodina ou seus derivados, de uma forma quantitativa, por meio de extracção líquido-líqui..... do.. Além disso, é possível efectuar a oxidação a temperaturas moderadas, evitando a formação de produtos de oxidação indesejados e indefinidos.. Há ainda a vantagem de se poder, por este processo reaccional recuperar quase quantativamente o sal de ferro utilizado e reutilizá-lo após reoxidação.. A se..... paraçao dos passos de oxidação e de hidrólise permite, devido â maior solubilidade em água dos glucõsidos de antrona em comparação com os aglicois correspondentes, efectuar suavemente a oxidação ã temperatura ambiente abaixo de 60° C, evitando a formaç:ao de produtos secundários indefinidos que οι:: o r r e ria η outras con diçoes.

Ace^Íl^^ .....de 1,8-di_r hidr oxian tr aguin on a

A acetilação dos compostos de 1,8.....d hidroxi.....antraquinona efectua.....se do modo habitual.. Por exemplo, pode acetilar-se com anidrido acético na presença de acetato de sódio, como descrito em Arch.. Pharm. 241,607(1903).. A acetilação pode efectuar-se também por outros métodos conhecidos do especialista, por exemplo por reacção com cloreto de acetito, etc:..

.... g h diacetilreína obtida desta forma está praticamente isenta de aloemodina e seus derivados,, 0 teor destas impurezas é ainda de cerca de 50 ppm ( determinado de acordo com os métodos de análise descritos nos exemplos )., U teor destas impurezas pode ainda diminuir.....se r©cristalizando a diacetilreína obtida,, do seguinte modo;:

Transforma-se a diacetilreína num sal de metal alcalino, tratando-a corn uma base arpopriada.. Urna base apropriada &, por exemplo, urn acetato de metal alcalino, de preferência acetato de potássio.. Empregam.....se de preferência quantidades equirnolares da base e urn alcool-C-j-C^ aquoso, por exemplo etanol a 80-90%, corno meio reaccional. Deixa-se cristalizar o sal de rnetal alcalino da diacetilreína a frio, torna-se este num álcool-Cg.....C3 aquoso e precipita-se por adição de urn ácido até um valor de pH de cerca de 3.. A diace~ tilreína precipitada isola-se então e processa.....se do rnodo habitual..

produto assim obtido contém menos do que 20 ppm das impurezas acima mencionadas. Além disso, o produto encontra-se na forrna de cristais de aciculares, que são particularrnente adequados para a formulação farmacêutica..

produto pode secar-se do rnodo habitual.. É conveniente efectuar primeiro a secagem em vácuo a urna tem..... peratura relativarnente baixa, por exemplo não superior a 40°C, durante o tempo suficiente para o teor em água do pro..... duto ser de cerca de 3% ou menos. Ern seguida pode elevar.....se a temperatura até 70 - 110° C„

A invenção refere-se tarnbérn a diacetilreína pura, obtida pelo processo.de acordo corn a invenção, bem corno a urna composição farmacêutica que contém este composto.. Os domínios de aplicação, a dose a administrar e as

7

formas cie dosagem adequadas são conhecidos; veja-se US.....A

-4244968, 4346103, 4950687, DE-A-2711493 e ainda.Drugs Exptl..

Clin .. Res 6 (1) 53 a 64 (1980).,

Os exemplos seguintes destinam-se a ilus.....

•brar a invenção.

Exemplo.,.1

Obtenção da mistura de senosidos utilizada como material de partida::

Colocam.....se 40 Kg de droga sena (teor em senosidos:: cerca de 1,5% ) em cada urn de dois perculadores ligados em série, com um volume de 250 1, e cobre-se com uma placa de aço perfurada... Como solvente para a extracção utiliza-se metanol a 70%, que se faz incidir sobre a droga no primeiro perculador.. A solução formada no primeiro perculador conduz.....se para a droga que se encontra no segundo perculador.. Deixa-se então o solvente fluir livremente pelo primeiro perculador ..

Para a extracção de 40 Kg de droga sena utiliza-se um total de 160 1 de solvente.. Após se ter conduzido este volume de metanol-a 70% através dos dois perculadores e se ter recolhido a quantidade correspondente de per..... culado, liga.....se o tubo de descarga do perculador a um contentor para pós-perculado fazem.....se fluir mais 60 1 de metanol a 70% através dos perculadores.. Em seguida conduz-se o restante solvente livre do primeiro perculador para a parte superior do segundo perculador e recolhe-se o pós-perculado até perfazer um volume total de 120 1.. Despeja-se então o primeiro perculador, enche.....se novamente com 40 Kg de droga sena e bornbeia-se o pós-perculado sobre a droga, bastando 120 1 de pós-perculado para cobrir a droga no perculador.. Em seguida, ajusta.....se a temperatura da solução a +30^6..

7' a

Liga-se este perculador com o anteriormente extraído e efectua.....se a extracçao como descrito acima.

Por cada 40 Kg de droga recolhem-se 160 1 de perculado,. do qual se remove o metanol num evaporador ro.....

tativo de vácuo provido com uma coluna de enchimento sólido.. Obtêm-se cerca de 30 1 de produto bruto.. Extrai-se este concentrado com o mesmo volume de 2-butanol saturado em água.

Passo A:

Redução......dos......senosidos......a......reina-9-an tron a.....8.....g1ucósidos

AJusta-se o pH de 1,0 de concentrado extraído a '7,5 com hidróxido de sódio a 48%.. Aquece.....se a solução a 60°C e adicionam-se, sob agitação durante meia hora, 90 g de ditionito de sódio na forma sólida.. Terminada a adição agita-se durante mais uma hora.. Em seguida, adiciona.....se, sob agitação, ácido sulfurico concentrado até um pH de 2.. Arrefece.....se até a temperatura ambiente, durante 2 horas, filtra•••••se o precipitado cristalino formado e lava-se este com agua contendo dióxido de enxofre..

Se se desejar precipita-se o reína-9.....ant r o n a ···- 8 g 1 u c õ s i d o b r u t o.. D i s s o 1 ve-se o f i 11 r a d o a i n d a h ú m i d o numa misturei de 15 partes em volume de 2-butanol e 85 partes em volume de água, contendo 0,5% em peso de pirossulfito de sódio, de modo a obter-se, por adição de uma solução de hidróxido de sódio a 48% até pH '7, uma solução a 10% (pe..... so/volurne ) .. Acidifica-se esta solução com ácido clorídrico concentrado até pH 2,8 ou abaixo e deixa-se em repouso durante 2 horas.. Filtra-se o precipitado obtido, lava-se com água contendo dióxido, de enxofre ou pirossulfito de sódio, e seca-se..

Rendimento:: 90%..

Com o produto obtido deste modo efectua·····

-se urna nova redução (pós-redução) , do seguinte modo::

Dissolvem-se 3,0 g de reína-9.....antrona-8..... .....glucósido seco bruto, ou a quantidade correspondente de pro..... duto húmido, juntamente com 1,4 g de ditionito de .sódio e 2,3 ml de NaDI-^M, em 15 ml de ãgua.. Em seguida, perfaz-se o volume corn água atê 24 ml e aquece-se a solução durante 20 minutos a 55°C.. Em seguida, adicionam-se 0,9 ml de NaOHgN e 1,5 g de ditionito de sódio.. Após 20 minutos de aquecimento a 55°C adiciona.....se novamente 0,9 ml de NaOH^IsL A solução obtida utiliza.....se directamente na extracção líquido-líquido subse..... quente..

Passo B:

Separação dos componentes de aloernodina

A separação dos componentes de aloernodina efectua-se por extracção líquido-líquido dos antrona-8-glucõsidos ern contracorrente por meio de um equipamento corn 60 unidades rnistura-separação (aparelho Mixer.....Settler) .. Corno fase pesada, aquosa, utiliza-se urna solução de 3,0 g de ditionito de sódio em 3,5 ml de NaOl-b^N e 96 rnl de água. Como fase leve, orgânica, utiliza.....se 2.....butanol ou acetona (satu..... rados em agua) .. Colocarn-se as duas no aparelho de rnodo que a razão de volurne da fase pesada para a fase leve seja de 1::10..

A mistura a separar aplica-se ao aparelho na forma da solução acabada de reduzir ou na forma de uma solução de pH e concentração correspondentes, que contêm os 9-antrona-8-glucõcidos obtidos no passo A, de modo a utilizar por unidade de volume da mistura a separar 30 partes em volume da fase orgânica.

volurne de jol-l da solução contendo a mistura mantém-se a 9-9,5 por meio de urn tampão de glicina. 0 tarnpão, constituído por 3 partes ern volume de urna solução de glicina a 7,5%, 1 parte em volume de NaOH 1 N, adiciona-se numa quantidade de 240 ml de solução tampão por 150 g de reína-9-antrona.....8-glucôsido bruto.. Os compostos de aloemodina indesejados acumulam···-se na fase orgânica, enquanto que o rei— na-9-antrona.....8-glucõsido permanece na fase aquosa.. A fase aquosa acidifica.....se com ácido sulf úrico até pH 2,8, filtra-se o precipitado formado, lava-se . oom água e acetona e seca-se ao ar à temperatura ambiente.. Obtém.....se desta forma o reína-9..... -antrona-8-glucósido com um teor em componentes de aloemodina de 4.1 pprn, determinado como aloemodina, segundo um método que se descreverá no fim desta patente.. Rendimento:: 97%, em relação ao reina.....9-antrona-8-glucõsido ..

Passo C:

Oxidação a......reina - 8 - glucõsido produto do passo B (relativo a urn teor de 3,0 Kg de senosidos A,A-| e B) suspende-se numa solução de 184 1 de água desmineralizada e 75,5 Kg de sulfatidrato de Ferro III (22% de Fe³¹\ Aquece-se a suspensão a 55 - 62°C e oxida.....se durante 14 horas utilizando um dispersor de alta velocidade.. Terminada a oxidação, filtra-se o reina-8-glucósido formado e lava-se com sal de água desmineralizada ajustada a pH 2 com acido sulfurico..

Passo D:

Hidrólise. „a...._reina filtrado húmido do passo b suspende-se em 200 Kg de uma solução de acido sulfúrico a 20% em peso e agita-se durante 8 horas a 88....... 92°C. A reina formada filtra.....se e pode armazenar-se após secagem a 1 mbar de vácuo duran..... te 48 horas a 40°C ou, no estado húmido, utiliza-se imediatamente para acetilaçao no passo E..

Rendimento global para os passos A a D::

79%, em relação aos senosidos A, A-j e 13 utilizados no passo

A..

Passo E:

AçêMlâSáoLa.....diac^Mlreína

Suspendern-se 6,5 Kg de reina do passo D em 100 1 de anidrido acético durante 10 minutos, adicionam.....se 2. Kg cie acetato de potássio, aquece-se a mistura a 95°C sob agitação, adiciona-se 0,65 Kg de carvão activado e agita-se durante meia hora a 90-95°C. 0 carvão activado remove.....se da solução quente por filtração e coloca-se o filtrado, a 90°C, em 2,1 Kg de uma solução de acido sulfurico a 96.....98% em peso.. Em seguida, arrefece-se até 20°C, sob agitação, tão depressa quanto possível,. Filtra-se a suspensão resultante.. Lava-se o resíduo com agua desmineralizada isenta de sulfato.

Rendimen to:: 83%..

Passo F:

Recristalização, secagem,_____moagem

Suspendem-se, sob agitação rápida, 7,5 Kg de diacetilreína do passo E (em relação à substância seca) em 375 1 de etanol a 90% em volume.. Aquece-se a suspensão a 70°C e adiciona.....se depois 3,75 Kg de acetato de potássio.. Por ar..... refecimento a 0-2°C cristaliza o sal de potássio puro da diacetilreína, a partir da solução clara entretanto formada..

Filtra-se o sal de potássio e dissolve-se em 300 1 de etanol a 40% em volume, sob adição de 3 Kg de acetato de potássio, a 20.....30°C. Ajusta.....se o pH da solução clara a 3,0 com uma solução de ácido sulfurico a 10% em peso.. Filtra-se a diacetilreína cristalizada e lava-se com agua desmineralizada isenta de sulfato..

A secagem elo produto efectua-se primeiro em vácuo a 1 rnbar e 40°C, durante 24 horas.. Quando o teor residual em água descer abaixo de 3%, pulveriza-se o material e seca—se de novo ao vácuo de 1 rnbar e 70° LI, durante 24 horas..

Finalmente passa.....se por um peneiro de 0,5 mm e seca-se mais uma vez a 1 rnbar e 70°C para remoção de vestíg 1 os de so 1 vente ..

Rendimento:: 95%.

Exemplo 2 • Repetem-se a extracção da droga sena e a redução dos senosidos descritas no exemplo 1... A pôs redução faz.....se agora do seguinte modo::

Dissolvern-se 14,0 g de sacarose, 4,5 g de ditionito de sódio (a 85%) e 13,3 g de acetato de potássio em 133 ml de água e adiciona.....se 1,3 ml de uma solução de hidrogénio de sódio a 48% e 17,3 g de carboneto de potássio.. Em seguida adicionam-se 293 ml de acetona e - 50 ml de água.. Agita-se a mistura numa ampola de decantação e separam-se as fases, obtendo—se 375 ml de fase superior (fase de acetona) e 130 ml de fase inferior.

Em 98 ml da fase inferior dissolvem.....se

1,4.ml da solução de hidróxido de sódio a 48% e 10 g de reina-9.....antrona.....8.....glucósido bruto.. Aquece-se a 45.....50°C e mantém...... -se 20 a 30 minutos a esta temperatura.. Em seguida adicionarn-se 1,0 ml da solução de hidróxido de sódio a , 48% e 3,4 g de ditionito de sódio e aquece.....se durante mais 20.....30 minutos a 45-50 °C. Finalmente, adiciona-se de novo 1,0 ml de hidróxido de sódio a 48% e 3,4 g de ditionito de sódio e aquece.....se du..... rante 20 a 30 minutos a 45.....50 °C..

A separação dos componentes de aloemodina efectua-se por extracção líquido-líquido da solução reduzida, em contracorrente; com a fase acima referida (fase de acetona) .. A fase descendente, refinada, contendo reina-9-antrona— -8.....glucõsxdo, dilui-se a 400 rnl e adiciona-se lhe 20 ml de 2-butanol.. Adiciona-se. acido clorídrico ou acido sulfúrico ate um valor de pH de 4,0 a 4,2.. Filtra-se o precipitado f orrnado, lava.....se com 40 rnl de agua e 30 rnl de acetona e seca.....se depois.. A oxidação subsequente processa-se como descrito no exemplo 1.

Exemplo 3

Ao concentado obtido após a extracção da droga sena adiciona-se cerca de 2 ml de 2-butanol.. A redução da mistura de concentrado de sena / 2-butanol efectua-se então em 7 passos, sob atmosfera protectora de azoto.. Após o passo de redução I efectua.....se uma precipitação do reína-9-ant r on a.....8~glucósido..

Passo de redução I

Colocam-se 100 rnl de mistura concentrado de sena / 2-butanol, contendo cerca de 4 Kg de sen.osidos, nurn contentor com agitação e guardam-se sob atmosfera de azoto. Sob agitação, adicionam-se sucessivamente 6 1 de hidróxido de sódio a 20% (em peso) e depois 350 1 de 2-butanol saturado em água (por exemplo, do passo II) e agita.....se a mistura durante 15 minutos. Aquece.....se a mistura a 42-50°C e adiciona-se.....lhe 7 Kg de ditionito de sódio.. Agita-se durante mais 45 minutos.. Mantém-se o pH a 7,5-8 com hidróxido de sódio a 20% (em peso).. Caso seja necessário, rnantém-se o potencial de redução (contra o electrodo de Ag / AgCl) abaixo de -630 mV por adição de ditionito de sódio.. Após arrefecimento a 30-35°C procede-se ã precipitação com ácido sulfúrico a 10% (em peso) até pll<4, durante 1,5 horas.. A suspenção resultante agita-se

lentamente a urna temperatura inferior a 25°C durante cerca de 10 horas. Filtra-se o precipitado obtido. Suspende.....se o pre.....

cipitado em 60 1 de 2-butanol a 15% (em peso), agita-se durante 30 minutos a 50-60°C e filtra.....se em seguida.. Lava-se o resíduo com 100 1 de agua desmineralizada.. 0 rendimento bruto de rei na—9—antrona—8—glucósido, em re..l..aç;ao aos senosidos de partida, é superior a 82%..

Passo de.....redução II

Suspendem-se 3,3 Kg de reína-9.....antrona-8—glucósido bruto, obtido no passo I, numa mistura de 42 1 de agua desmineralizada e 7,4 de 2-butanol.. Dissolve-se a suspensão com 2 1 de hidróxido de sódio a 20% (em peso) e 9,9 Kg de citrato trissôdico, e adiciona-se-llne ern seguida 3,3 Kg de ditionito de sódio e 350 1 de 2-butanol saturado em agua ( p.. ex.. , do passo III ) .. Aquece.....se a mistura a 42 ..... 45°C.. Mantém-se o valor de pH a 8,5-9 com hidróxido de sódio a 20% (em peso).. Caso seja necessário, mantém-se o potencial de redução (contra o electrodo de Ag / AgCl) abaixo de......750 mV por adição ditionito de sódio.

Após 30 minutos de repouso remove-se a fase e utiliza.....se a fase inferior para o processo do passo

III..

Passo deredução III

Com a fase inferior do passo III repetese o processo de redução / extracção descrito no passo II, utilizando os seguintes reagentes::

1,65 Kg de ditionito de sódio

0,8 1 de hidróxido de sódio a 20% (em peso)

350 1 de 2-butanol saturado em água (p. ex.. , do passo

IV)..

Passos de redução IV.....VII

Com a fase inferior de cada um dos passos anteriores repetem.....se as operaçaoes de redução / extracção descritas no passo II, utilizando os seguintes reagentes::

0,825 Kg de ditionito de sódio

0,4 1 de hidróxido de sódio a 20% ( ern peso )

350 1 de 2 - butanol saturado em ãgua ( pex., do passo anterior respectivo;

princípio da contra corrente ) ..

A fase inferior separada no passo VII arrefece.....se a 30-35°C e precipita-se o reína-9-antrona-8-glu.....

cosido, como descrito no passo I.. Filtra.....se o precipitado formado e lava-se com 100 1 de ãgua desmineralizada.. Em seguida cobre-se com 10 1 de urna solução de sulfato de ferro

III (para a preparação ver passo 13 do exemplo I).

r e í n a -· 9 a n t r o n a - 8 g 1 u c ó s i d o c on ver te s e e n t ã o no senos i d o, c o m o descrito η o s exem p 1 o s 1. ou 2 ..

Testes F a v rn a c ol ó g i cos

A eficácia da diacetilreína determina-se em modelos de inflamação crónica, após administração oral..

Utilizaram.....se os seguintes modelos de teste::

Granulorna Cotton-Pellet no rato e artrose provocada por aplicação intra-articular de vitamina A no coelho,.

a) Granulorna Cotton-Pellet no rato

Aplicam.....se a ratos Jovens sexualmente adultos (n = .10) 25,50 ou 100 mg de diacetilreína/Kg ou 5 mg de indornetacina/Kg ou 100 mg de ácido acetilsalicílico/Kg, diariamente, durante b dias,,. Ereparou—se também um grupo de controle tratado apenas com agua,, A implantação dos “Pellets ocorreu no primeiro dia de tratamento.. Us pesos fresco e seco e dos granulornas experimentais mostraram uma diminuição clara e significativa, dependente da dose, em comparação com o grupo de controle. Verificou.....se que o efeito de 100 mg de dia···cetilreína/Kg era mais ou menos equivalente ao efeito de 5 mg de indometacina ou de 100 mg de acido acetilsalicílico.. Os pesos da tiroide e das cápsulas supra-renais não variaram d u r a n t e o t r a t a m e n t o..

b) Artrose provocada pela vitamina A

Provocou-se uma alteração artritica das articulações em dois grupos de 10 coelhos cada (raça branca neozelandesa), por meio de três injecções intra.....articulares de 30000 IE de vitamina A, durante 9 dias.. Cinquenta e seis dias mais tarde trataram.....se 10 animais corn 3 mg de diacetil..... reína/Kg/dia, durante 8 semanas.. Em comparação com o grupo de controle, as alterações das articulações macroscópica e microscopicamente reconhecíveis no grupo de tratamento estavam significativamente diminuídas..

.0 efeito terapêutico da diacetilreína comparou.....se ainda com o do ácido acetilsalicílico ern grupos de 7 coelhos que, após pré tratamento durante 6 dias com três doses de 10000 IE de vitamina A e um período sem tratamento de 26 dias, foram tratados durante 8 semanas com 5 mg de diacetilreína/Kg/dia (grupo de teste), 15 mg de ácido acetilsalicílico/Kg/dia (grupo de controle positivo) ou que perrnane..... cerarn sem tratamento (grupo de controle negativo) .. Em todos os três grupos ocorreram, 24 dias após a última injecção de vitamina A, distúrbios de movimento comparáveis, na forma de urn arrastamento das partes traseiras. Mo grupo de controle negativo acentuaram.....se, durante as 8 semanas seguintes, os sinais clínicos de uma artrose manifesta,,

No grupo de teste e no grupo de contole positivo estes sirnptornas melhoraram significativarnente, durante o tratamento de oito semanas..

Alterações damucosadoestômago

Enquanto que a administração única de 400 mg de diacetilreína/Kg ou do solvente ao rato não provocam qualquer erosão da rnucosa do estômago, verificam—se nítidas erosões pontuais pequenas (1 rnrn de diâmetro) até grandes (3 mm de diâmetro) desta mucosa após administração de ibuprofeno (200 rng/Kg) ou indornetacina (20 rng/Kg) .. Também a dupla administração diária de 100 mg de diacetilreina/Kg, durante 3 dias não, provocou quaisquer danos da rnucosa, mas tal verificou-se com a administração correspondente de 10 mg de indornetacina/Kg.. Neste caso observaram.....se erosões de 1-3 mm de diâmetro..

I9><icologia

A t o x ::i„ c i d a d e a g u d a - L Dg θ - v a r i a, c o n f o r rn e a espécie testada (ratazana, rato, gato), apôs administração oral, de 1,9 a 7,9 g/Kg.. A ratazana revelou.....se a espécie me..... nos sensível.. Após administração parenteral (i.v:; i„p.) os valores de LDggj nestas espécies variam entre 119 e 339 rng/Kg..

Testes_clínicos

1.. Nurn ensaio ern branco duplo com naproxeno seguido de põs-tratarnento corn placebos, deterrninou-se o efeito da diacetilreína na artrose da coxa e na gonartrose em 95 (49/46) pacientes.. A dose aplicada foi de 50 mg de diace3S '»>

A cluraçao do tratamento foi de 60 dias após 7 dias de periodo de wash-out 0 tratamento subsequente com placebos estendeu-se durante 60 dias..

Os parâmetros testados foram os simptomas de dor e de mobilidade, segundo uma escala padrão, as limitações funcionais e a assimilibilidade..

Nos dois grupos de tratamento (diacetilreína/naproxeno) verificou-se ern todos os parâmetros testados uma taxa de melhoramento estatística significativa ( p < 0,01 ou p < 0,05 ) em comparação com os valores iniciais.. Após interrupção do tratamento e posterior administração de placebos verificou-se contudo, para o grupo diacetilreína/placebo, nos dias 60 e 120, em relação aos parâmetros dôr espontânea, dôr de movimento activa e passiva uma superioridade estatística significativa ( p < 0,01 ) em comparação com o grupo naproxeno/placeboEsta diferença, ao nível de cerca de 5%, verificou-se também para as variáveis dôr nocturna e dor sob pressão, 30 dias após a interrupção do tratamento com diacetilreína..

2...Num estudo de evolução aberto, com controle, investigou.....se o efeito da diacetilreína sobre a osteoartrose da coluna vertebral e do Joelho, em 70 (35/35) pacientes.. A dose aplicada foi de 100 mg de diacetilreína por dia.. 0 tratamento durou 60 dias e a observação 75 dias.. Os parâmetros testados foram a dôr e a limitação de movimento.. Calculararn-se os valores por meio de um sistema padrão..

grupo de controle abrangia 35 pacientes, aos quais se aplicaram apenas tratamentos de fisiotera pia.. No grupo de tratamento com diacetilreína efectuou-se também f i s i o t e r a p i a..

A 'interpretação dos resultados revelou ern relação a todos os parâmetros uma superioridade estatística significativamente do grupo de tratamento ern relação ao grupo d e c o n t r o 1 e.. M e s rn o a p ó s a s u s p e n s a o d o t r a t a rn e n t o v e r i f i c o u— .....se, para o grupo de tratamento corn diacetilreína, urn efeito terapêutico residual (efeito de ”hang.....over”.

3.. Num ensaio ern branco simples, cruzado, corn naproxeno, estudou.....se o efeito da diacetilreína sobre a artrose localizada, em 20 pacientes.. Separavam.....se estes em dois grupos, administrando-se ao primeiro grupo, ern primeiro lugar, 2 vezes 50 rng de diacetilreína, durante 20 dias.. Ern seguida, ocorreu uma fase de wash-out durante 3 dias e urn novo tratamento com 2 vezes 250 rng de naproxeno por dia, durante mais 20 dias.. Mo segundo grupo inverteu-se esta ordem de tratamento.. 0 tratamento total decorreu durante 43 dias.. Os parâmetros testados foram a dor, a dor de movimento passiva, a limitação funcional e a turnefacção, de acordo corn um sistema padrão..

A interpretação de resultados mostrou urna superioridade do tratamento com diacetilreína em comparação corn o tratamento corn naproxeno. Não se observaram quaisquer efeitos secundários significativos nem alterações dos parârn e tr o s cl í n i c o s ..

4.. Num ensaio aleatório duplo branco (técnica double-dummy) , corn naproxeno, testou-se o efeito da diacetilreína ern 23 (12/11) pacientes com osteoartrose (estudo de assirnilibilidade) .. A dose aplicada foi de 2 vezes 50 mg de diacetilreína por dia e 3 vezes 250 rng de naproxeno por dia.. 0 tratamento decorreu durante quatro semanas.. Os par â rn e t r o s t e s t a d os f o r a rn a o b s e r v a ç a o e s ó f a g o - g a s t r o.....d u o d e η o r cópica antes e depois da terapia.. Consideraram-se apenas pa.....

cientes corn diagnósticos normais de mucosa ou corn lesões ligeiras da mucosa (grau 1) para este estudo.

Após 4 semanas as endoscopias revelaram urn caso (10%)., no grupo de tratamento com diacetilreína, cora lesões de mucosa do grau 2, enquanto que no grupo de tratamento com naproxeno 5 pacientes (50%) apresentavam lesões de mucosa dos graus 2,3. e 4.. Ern todos os casos, existia ante··r i o r m & n t e u rn d i a g n õ s t i c ο η o r m a 1..

Determinação analítica de......aloemodina

Dissolvem.....se 50 mg de diacetilreína em 25,3 ml de NaOH 0,5 M, numa ampola de decantação, e agita.....se durante 10 minutos.. Em seguida, adicionam-se '74,6 ml de uma solução que contérn glicina 0,5 M e NaCl 0,5 M. Obtém—se assim um pH de 9,5..

Extrai-se esta solução 3 vezes com 25 ml de clorofórrnio.. Reunem-se as fases orgânicas e extraem.....sé 1 vez com 10 ml de urn tampão 0,5 M a pH 9,5 (glicina, NaOH, NaCl) e 1 vez com 10 rnl de ácido sulfurico 0,001 M. Remove-se o solvente da fase orgânica e dissolve-se o resíduo em 1 ml de metanol.

Para a solução padrão dissolvern-se 2 mg de aloemodina em 20 rnl de N.....dirnetilacetarnida 1. N e dilui-se com metanol até urna concentração de 2 j.ig/rnl (correspondente a 40 pprn) ..

teor das soluções determina-se por HPLC» A linearidade do método de HPLC comprovou-se com soluções padrão de aloemodina na garna de 0,11 jig/rnl (correspondente a 2,2 pprn) a 53,6 jig/rnl (correspondente a 10'72 pprn) . A determinação dos teores efectuou-se com uma coluna de HPLC Merck Lichrocart 250--4, cheia com Li-Chrospher~100 RP18, 5 jirn, a 40°C, corn urna fase móvel de ácido acético a 1% ern

metanol (v/v), acido acético a 1% em água (v/v) e acetoni trilo, na proporção de 49::-48::5..

Determinação analítica do produto do passo 13, reína-9.....

-antrona.....8-glucósido, com. um teor em componentes de aloemodina de 41 ppm. determinado como aloemodina

A substância a testar transforma.....se, por oxidação com cloreto de Ferro .1..1..1. e hidrólise simultânea com acido clorídrico, numa' mistura bifãsica de uma solução aquosa e tetracloreto de carbono, em reina e aloemodina.. A reina transforrna-se num sal, de modo a poder separar.....se da aloerno..... dina por extracção líquido.....líquido.. A aloemodina que se encontra na fase orgânica determina.....se por HPI....C..

Claims

Processo para a preparação de diacetil a fórmula ·“ '·_· r*3.q

-e—* completamente isenta de componentes de aloemodina, caracteri.....

zado por:

A) se submeter reína-9.....antrona-8-glucósi- do contendo componentes de aloemodina a uma extração liquido—

.....liquido, com um solvente orgânico polar apenas parcialmente miscível com água, a partir da fase aquosa,

Jf ’ « '3*

B) se oxidar, apôs a extracção, o reina.....

-9-antrona-8.....glucósido, contido na fase aquosaa reina.....8.....

glucósido

C) se remover o ção 8 do reina.....8-glucósido, em meio na posiácidoe

D) se acetilar a.reina obtida, obtendo-se assim a diacetilreina..

29 .....

Processo para a preparação de diacetilreina, completamente isenta de componentes de aloernodina, ca racterizado por

A) se submeter urna misturei de senosidos a uma redução para se obterem os compostos correspondentes reina-9-antrona--8.....glucósido e aloernodinan trona.....8.....glucósido,

B) se efectuar urna extracção liquido-liquido dos compostos obtidos, corn um solvente orgânico polar apenas parcialmente miscivel com agua, a partir da fase aquosa ,

C) se oxidar os compostos reina-9-antrona.....8-glucósido, contidos na fase aquosa, aos compostos antraqui η o n a co r r e sponden tes,

D) se remover o grupo glucosilo na posi..... ção 8 do composto antraquinónico,· em meio ácido, e

E) se acetilar a 1,8.....di-hidroxiantraqui..... nona obtida ã diacetilreina..

Processo de acordo com a reivindicação
2, caracterizado por no passo A se utilizar como agente de redu.....

ção um ditionito de metal alcalino..

.... 4a ....

Processo de acordo com a reivindicação
3, caracterizado por se efectuar a reacção a um valor de pH de 7 a 9..

- 5S .....

Processo de acordo com qualquer das rei.....

vindicações 2 a 4, caracterizado por se repetir várias vezes a redução..

..... 63 .....

Processo de acordo com qualquer das reivindicações anteriores, caracterizado por se utilizar corno solvente orgânico polar acetona ou 2.....butanol, para a extracçao líquido-líquido..

..... 7 a .....

Processo de acordo com qualquer das reivindicações anteriores, caracterizado por se utilizar para a extracçao líquido......líquido uma fase aquosa cujo potencial redox seja -210 mV ou mais negativo.

...... 83 .....

Processo de acordo com qualquer das rei.....

vindicações anteriores, caracterizado. por se efectuar a ex.....

tracção líquido......líquido em contracorrente..

- 93 .....

Processo de acordo com qualquer das reivindicações anteriores, caracterizado por se utilizar como
4 ΐ agente cie oxidação um sal de ferro III, de preferência sulfato de ferro III..

..... 10S .....

Processo de acordo, com a reivindicação 2, caracterizado por se obter a mistura de senosidos por extrac— ção a partir da droga sena, com metanol aquoso, de preferên.....

cia na presença de um tampão,, ·· 11Ê ····

Processo. de acordo com qualquer das reivindicações anteriores, caracterizado por se recristalizar a diacetilreína obtida, transformando a diacetilreína num sal de metal alcalino, tornando este sal num alcool-C-j-¾ aquoso, e reprecipitando a diacetilreína por adição de um ácido.

..... 12É Diacetilreína completamente livre de derivados de aloemodina.

..... 13â .....

C o rn p os i ção f a r rn a c ê u t i. ca, c aracterizado por conter como ingrediente activo diacetilreína, de acordo com a reivindicação 13, conforme o caso, em conjunto com veículos e aditivos farmacêuticos usuais..