PT100200A - Quelatos de amidas, os seus complexos metalicos, bem como a sua utilizacao no diagnostico e terapia - Google Patents

Description

Descrição referente à patente de invenção de Institut fttr Diagnostikforschung GmbH, instituto de pesquisa e diagnóstico alemão, com domicílio em Freien Universitât Berlin, Klinikum Rudolf Virchow, Spandauer Damm 130, D-1000 Berlin 19, República Federal Alemã, (inventores: Dr. Reinhard Neumeier, Dr. Wolfgang Kramp e Dr. Gerhard Rohlfs, residentes na República Federal Alemã, para: "QUELATOS DE AMIDAS. OS SEUS COMPLEXOS METÁLICOS. BEM COMO A SUA UTILIZAÇÃO NO DIAGNÓSTICO E TERAPIA”.

Descrição

Desde há muito tempo são utilizados iães metálicos radioactivos, principalmente associados a um complexan-te, para o diagnóstico in vivo. De entre estes o tecnócio-99“» (Tc-99m)i devido às suas propriedades físicas praticamente ideais para estes objectivos - boa absorção da radiação nos respectivos aparelhos de detecção (câmara gama, aparelho SPECT) relativamente a uma reduzida absorção no organismo humano, e uma fácil disponibilidade através de um gerador molibdenico/ /tecnecio - á o radio-nuclido mais frequentemente utilizado na prática clínica da medicina nuclear. 0 seu curto período de semi- vida de 6,02 horas garante uma sobrecarga muito fraca do pa- 1 =

ciente com radiação gama, e ainda porque também o nuclido resultante, tecnécio-99» possui apenas uma radiação residual não prejudicial. Um inconveniente do tecnécio é, sobretudo, a sua química de complexos complicada e ainda não completamente compreendida. 0 tecnécio pode existir numa série de graus de oxidação (+7 a -l) que podem alterar acentuadamente as propriedades farmacológicas por modificação da carga de um complexo. Ê por conseguinte necessário sintetizar complexos que liguem o tecnécio num grau de oxidação definido, e impedir reacções re-dox que possam conduzir a uma redistribuição do fármaco. έ já conhecida uma série destes complexantes de Tc-99m, que são empregues clinicamente· Quanto aos complexos neutros, trata-se sobretudo de sistemas nos quais o Tc-99m está ligado a um número compreendido entre 2 e k átomos de azoto e O a 2 de átomos de enxofre (complexos de , de N^S e propilenoaminooxima), mas é sobretudo a insuficiente estabilidade destes complexos de Tc-99m um inconveniente importante (Hung, J.C. et al; J. Nucl. Med, 29; I5Ó8, 1938). Na utilização clínica tem pois que ser aplicado, por exemplo HMPAO (hexametil-propilenoaminooxi-ma), imediatamente depois da sua marcação com pertecnetato, para que a fracção dos produtos de decomposição, que diminuem o poder de visualização de diagnóstico, não se torne demasiado alta. Não é possível realizar um acoplamento destes quelatos ou agentes quelantes a outras substancias que se acumulem selecti-vamente na área da doença. Por consequência, a maioria dos complexos mencionados distribui-se em conformidade com a irrigação sanguínea e/ou a actividade metabólica de um órgão (ver por exemplo Especificação de Patente Europeia 0 13k 84-3)» de modo que por exemplo as regiões necróticas ou isquémicas, após um in farte ou uma síncope, podem ser representadas num cintilograma.

Para um diagnóstico bem sucedido de tumores, de doenças neurológicas ou de doenças cardiovasculares são no entanto mais promissoras as substâncias que podem representar as alterações moleculares dos tecidos doentes, ligando-se espe-cificamente a estes tecidos doentes, ou as que tomam parte no seu metabolismo. Os conhecimentos das pesquisas básicas, biológicas e bioquímicas, permitem a escolha de uma série de substan 2

cias que se acumulam selectivamente nas áreas da doença: diversos tumores desenvolvem concentrações superficiais, quer aumentadas quer mais reduzidas, de receptores, por exemplo para fac-tores de crescimento ou hormonas esteroides (Sledge, G. ¥·$

Adv. Câncer Res. 38* 61-75 Também no caso de doenças neurológicas se presencia uma alteração da concentração de receptores para neurotransmissores em determinadas zonas do cérebro (Frost, J.J.; Trends Pharmacol. Sei. 7*490-496 / 19827)· ra além disso as células doentes, lesionadas ou transformadas em células de tumores, apresentam frequentemente alterações pro, nunciadas do seu metabolismo e uma carência de oxigénio no int£ rior do tumor. 0 recurso a estas particularidades fisiológicas pode servir para o diagnóstico in vivo, acoplando-se por exemplo hormonas, neurotransmissores ou determinados produtos do metabolismo, tais como ácidos gordos, sacarídeos, peptídeos ou aminoácidos, a quelantes para Tc-99m. Também substâncias, tais como o misonidazol (um radiossensibilizador) ou outros compostos que se convertem em radicais na ausência de oxigénio, podem ser utilizados para um enriquecimento específico de isótopos ra dioactivos e podem servir, por consequência, para a representação por imagem de tumores ou de regiões isquémicas. Finalmente, também é possível realizar-se o acoplamento a anticorpos mono-clonais que, devido à sua alta especificidade, se tomaram num instrumento promissor no diagnóstico de tumores.

Para a preparação de adentes de diagnóstico de acordo com o princípio descrito é necessário que os agentes quelatantes para os iões metálicos radioactivos, especialmente Tc-99m, possam ser acoplados a substâncias que se acumulam selectivamente nos tecidos doentes.

Gomo os isótopos do rénio (Re-188 e Re-186) possuem propriedades químicas análogas às do Tc-99m» os quelatantes também podem ser utilizados para a complexação destes isótopos. Os referidos isótopos de rénio são emissores de radia ção β . Por consequência, as substâncias que se acumulam selecti vamente, complexadas com rénio em vez de tecnécio, também são \ utilizáveis na terapia de tumores* * 3 * 1

Os preparados conhecidos ate ao presente para acoplamento de quelantes a substâncias que se acumulam selecti-vamente, podem ser considerados, em muitos casos, como não satisfatórios, Se os grupos funcionais do complexante forem utilizados para a ligação do quelatante à referida molécula, pro-duz-se frequentemente uma diminuição da estabilidade do complexo, isto ó, uma parte do isótopo, intolerável em diagnóstico, e libertada do conjugado (Brechbiel, Μ. V. et al, Znorg. Chem. 25*2772 C198Ó7). Ê por conseguinte necessário preparar comple-xantes bifuncionais, isto ó, complexantes que transportem tanto grupos funcionais para uma ligação por coordenação do ião metálico pretendido, como também um outro grupo funcional para ligação da molécula que se acumula selectivamente. Estes ligantes bifuncionais possibilitam uma ligação específica, quimicamente definida, do tecnécio aos mais diversos materiais biológicos, mesmo também quando se realiza uma chamada pré-marcação (pre-la beling), Como, de acordo com este método, se realiza primeiro a marcação com Tc-99m e o isolamento dos complexos, e só num sje gundo passo este complexo é acoplado a uma molécula que se acumula selectivamente, obtém-se os compostos marcados com um alto grau de pureza.

Foram descritos alguns quelatantes acoplados a anticorpos monoclonais (por exemplo nos Pedidos de Patente Europeia 0 2^7 866 e 0 188 256) ou a ácidos gordos (Pedido de Patente Europeia 0 200 492), Como quelatantes são utilizados, todavia, os já referidos sistemas NgSg que, devido a sua fraca estabilidade, são pouco apropriados. Os quelatos com N^S, um pouco mais estáveis, quando acoplados a anticorpos monoclonais não apresentaram uma perda tão forte do Tc-991» dos conjugados (j, Lister-James; J, Nucl, Med, 30*793 © Pedido de Patente Europeia 0 28¾ 071).

Como as substâncias que se acumulam selectivamente são muito diferentes entre si, tanto nas suas propriedades como também nos mecanismos segundo os quais se acumulam, e ainda necessário variar os quelatantes aptos ao acoplamento e • poder adaptar-se às exigências fisiológicas dos parceiros do . acoplamento, no que se refere à lipofilia e hidrofilia, permea-

bilidade ou impermeabilidade das membranas, etc.

Por estas razões subsiste uma drástica necessidade de compostos complexos estáveis que estejam acoplados, ou sejam aptos ao acoplamento, aos mais diversos compostos que se acumulam selectivamente, 0 objectivo da invenção á por conseguinte por à disposição quelatantes estáveis que contêm um grupo funcional para acoplamento a um composto que se acumula selectivamente, ou um composto que se acumula selectivamente acoplado com auxílio destes grupos funcionais·

Be acordo com a invenção este problema á solucionado pelos compostos de fórmula geral I,

na qual •i R representa hidrogénio ou um radical alquilo com 1 a 6 átomos de carbono eventualmente substituído por 1 ou 2 grupos hidroxilo, representa um radical alquileno com 1 a 6 átomos de carbono, eventualmente substituído por um grupo hidroxilo, representa um átomo de hidrogénio ou um radical alquilo com 1 a 6 átomos de carbono, k , , R representa um atomo de hidrogénio, um radical alquilo com 1 a 6 átomos de carbono eventualmente substituído por um grupo hidroxilo, ou tem o significado indicado para RX, = 5 * 1

R' representa um átomo de hidrogénio ou um radical alquilo com la 6 átomos de carbono»

B representa um radical pirrolilo, um radical fenilo substituído de fórmula II ou um radical piridino substituído de fórmula III

(III) nas quais Z representa um grupo hidroxilo, amino ou mercapto e Y representa um átomo de hidrogénio» um radical carboxi ou um radical sulfonilo »

ou representa um radical nitrosometilo de fórmula IV

NOH

na qual R representa um radical alquilo com 1 a 6 átomos de h carbono que eventualmente» conjuntamente com R » esta cicliza-do na forma de um anel de 5 eu ê membros através de grupos tri-metileno ou tetrametileno, e  representa um radical amino» um radical mercapto» um radical hidrazino» um radical carbohidrazino» um radical carboxi» um radical alcinilo ou alcenilo tendo em cada caso 2 a 6 átomos , de carbono» um radical oxiranilo» um radical fenoxicarbonilo fluorado» um radical succinimidooxicarbonilo eventualmente subs = 6 = tituido por um radical sulfato de sódio, representa um radical aminofenilo ou um radical isotiocianatofenilo, podendo os grupos fenilo estar eventualmente substituídos adicionalmente por um grupo carboxi, um grupo clorosulfonilo ou um radical de ura ácido sulfónico, ou contém um composto T - eventualmente ligado através de um radical de ligação L bifuncional com auxílio dos grupos funcionais citados - e que se acumula selectivamente em lesões ou em determinados tecidos, sendo T um anticorpo monoclonal ou os seus fragmentos, hormonas, enzimas, ligantes para receptores de membranas celulares, esteroides, neurotransmissores, lípidos, sacarídeos, aminoácidos e oligopeptídeos, biotina, bem como radiossensibilizadores, como por exemplo misonida-zol, assim como os seus complexos com iões metálicos radioactivos -- apropriados para o diagnóstico e terapia de tumores - assim como os seus sais com ácidos orgânicos e inorgânicos. São preferidos de acordo com a invenção os 4 5 compostos de harmonia com a reivindicação 1 nos quais R e R representam átomos de hidrogénio ou radicais metilo, assim como os compostos de acordo com a reivindicação 1 nos quais A representa um grupo amino, um grupo mercapto, um grupo carboxi, um grupo alcinilo ou alcenilo tendo em cada caso 2a 6 átomos de carbono, um grupo oxiranilo, um grupo fenoxicarbonilo fluo-rado, radical succinimidooxicarbonilo eventualmente substituido por um radical sulfato de sódio, um radical aminofenilo ou iso-tiocianatofenilo, podendo os grupos fenilo estar substituídos por um outro radical de ácido carboxílico ou de ácido sulfónico, e em que o composto T que se acumula selectivamente, eventualmente contido em &, representa anticorpos monoclonais, os seus fragmentos, biotina ou misonidazol.

Surpreendentemente, muitos dos quelatos sinte^ tizados e marcados com Tc-99m, apresentavam uma maior estabilidade do que os quelatos análogos de NgSg» N^S e propilenoamino- = 7 =

oxima. Assim, por exemplo, para uma substância de acordo com a invenção (exemplo 2) que foi acoplada a biotina através de um radical aminofenilo, não foram observados quaisquer produtos de decomposição após 5 horas, enquanto que isto aconteceu no caso de HMPAQ conhecido da literatura, comparável (Hung, J« 6« et al; J. Nucl. Med. 29j1568, 1988). Também se pode determinar por ensaios de competição, que os quelatos descritos na presente invenção complexam Tc-99m melhor do que os quelatos comparáveis de NgS2» N^S e propilenoaminooxima. Os quelatos descritos na presente invenção, por conseguinte, são nitidamente mais apropriados para fins de diagnóstico e terapêuticos do que os quelatos conhecidos até ao presente. Á preparação dos compostos de acordo com a reivindicação 1 é realizada,

fazendo-se reagir halogenetos de ácido malónico substituídos, de preferencia cloreto de ácido malónico, de fórmula geral V R1 R2A' X xoc cox (v) 12« na qual R , R tem os significados mencionados acima, X representa halogéneo e A1 representa A ou um radical transformável em A,

com uma amina de fórmula VI B-G -R5 NHR3 (VI) 3 4 5 Λ na qual R , R , R^ e B tem os significados citados acima e os grupos funcionais contidos em B estão presentes eventualmente numa forma bloqueada, num dissolvente aprótico, de preferencia diclorometano, a tem- = 8 =

peraturas compreendidas desde 0 a 180° C, de preferência à temperatura ambiente, durante 2 a 24 horas, de preferência 4 horas, eventualmente com adição de bases apropriadas, por exemplo trietilamina, e dissociando-se os grupos de bloqueio presentes, e nos compostos assim obtidos eventualmente se converter o grupo A' em A - eventualmente gerado depois do bloqueio dos grupos amino livres e dos grupos Z funcionais com iões de bloqueio, por exemplo como complexos de cobre - e em seguida, se desejado, se acoplarem os compostos assim obtidos, através destes grupos funcionais, a compostos T capazes de se acumularem selec tivamente nos tecidos, e se complexarem os substituintes B, se desejado, com os isótopos radioactivos pretendidos em cada casq eliuminando-se os iões de bloqueio eventualmente presentes an-teriormente no produto de acordo com métodos conhecidos da literatura, e podendo alterar-se a sequência dos passos complexa-ção com isótopos radioactivos e acoplamento ao composto T.

Como grupos de bloqueio de hidroxi interessam por exemplo os grupos benzilo, 4-metoxibenzilo, 4-nitrobenzilo, tritilo, difenilmetilo, trimetilsililo, dimetil-t-butilsililo e difenil-t-butilsililo. No caso de poliois os grupos hidroxi podem também ser protegidos na forma de cetais, por exemplo com acetona, acetaldeído, ciclohexanona ou benzaldeído· Além disso os grupos hidroxi podem também estar presentes por exemplo como éter de THP, éter de c<-alcoxietilo, éter de MEM, ou como éster com ácidos carboxílicos aromáticos ou alifaticos, como por exemplo ácido acético ou ácido benzoico· Os grupos de bloqueio de hidroxi podem ser postos na forma livre de acordo com métodos conhecidos dos especialistas e descritos na literatura, por exemplo por hidrogenélise, dissociação reductiva com látio/ /amoníaco, tratamento por ácidos dos éteres e cetais, ou tratamento em meio alcalino dos ésteres (ver por exemplo "Protecti-ve Groups in Organic Synthesis", T. ¥. Greene, John líiley and Sons 1981)·

Como grupos de bloqueio de amino interessam por exemplo radicais trifluoracetilo, t-butoxicarbonilo, 2,2,2-tricloroetoxicarbonilo, benzoxicarbonilo e acetilo. Os

grupos de bloqueio de amino podem ser dissociados de harmonia com métodos conhecidos da literatura, por exemplo por hidrólise básica ou ácida, dissociação reductiva com zinco em ácido acéti, co ou hidrogenólise·

Como grupos de bloqueio de mercapto interessam radicais alquilo com 1 a 6 átomos de carbono ou tioéteres de benzilo* A dissociação dos grupos de bloqueio de mercapto e rea lizada, consoante desejado, com alquiltiolatos alcalinos, alcoo. latos alcalinos ou metais alcalinos, de preferência com metil-tiolato de sódio num dissolvente polar, de preferência em HMPT, dimetilformamida ou dimetilacetamida, ou por dissociação reductiva com sódio/amoníaco. 0 grupo funcional no radical A é apropriado pa ra realizar uma ligação estável a proteínas ou a outras moléculas que se acumulem selectivamente· Através da escolha correspondente dos grupos funcionais no radical A consegue-se realizar o acoplamento em condições de reacção vantajosas que não in fluenciam a função biológica e/ou a selectividadé. 0 acoplamento aos compostos pretendidos é realizado eventualmente de acordo com métodos conhecidos por si (ver por exemplo Fritzberg et al; J. Nucl. Med.: 26, 7 C19827) por exemplo por reacção dos grupos funcionais correspondentes no radical A com grupos nucleófilos da molécula que se acumula selectivamente ou, se no que se refere ao correspondente grupo funcional no radical A se tratar mesmo de um grupo nucleófilo, com grupos activados da molécula que se acumula se-lec tivamente· 0 acoplamento a esteroides com uma função 17** -iodovinilo pode ser realizado através de uma função etinilo do complexante. Neste caso é irrelevante que seja utilizado o composto E ou Z. A eliminação dos grupos de bloqueio eventualmente existentes pode ser realizada tanto antes como também depois do acoplamento. De acordo com a invenção são preferidos o 17 o^-eti, nilestradiol, bem como a 170<-etinilnortestosterona. Estes com-, postos têm importância para a diagnose de tumores dependentes | de esteroides j_ J«K« Mazaitis, B.E. Francis, W.C. Eckelmann, 10 =

R.E. Gibson, R.C. Reba, J.¥. Barnes, G.E. Bentley, P.M. Grant, H.A. Q*Brien jr.; J. Labelled Compd. Radiopharm. 1980, 18, 103Í7· A obtenção dos esteroides de 17-iodovinilo pode ser realizada de acordo com processos conhecidos da literatura 2f”ver por exemplo H. Hofmeister, H. Laurent, P.-E. Schulze e R. Wiechert, Tetrahedron 42, 3575 (l986j[7·

Os grupos funcionais no radical A representam os substituintes que, por um lado, permitem um acoplamento a moléculas que se acumulam selectivamente, em condições moderadas (por exemplo por acilação ou amidação), bem como os grupos acti-vados que podem reagir com grupos nucleéfilos de proteínas, de anticorpos, de hormonas ou de outras biomoléculas, tais como os grupos amino, fenol, sulfidrilo, formilo ou imidazol. Por grupos activados entende-se uma função que está apta a reagir, com formação de um conjugado, com um substituinte nucleófilo de uma molécula que se acumula selectivamente ou do ligante do complexo, mesmo em solução aquosa, no decurso de um determinado período de tempo curto, em condições de reacção que não tenham como consequência nem a desnaturação, nem a perda da actividade biológica. São exemplos destes ésteres de imida, de alquilimida, de amidoalquilimida, de succinimida, acilssuccinimidas, ésteres fenólicos, ésteres fenólicos substituídos, ésteres de tetra-fluorfenol, anidridos e aceitantes de Michael. Os grupos funcionais no radical A são de preferência um éster activado (tal como um éster de fenol ou imida) um mercaptano ou isotiocianato, especialmente para o acoplamento com grupos nucleéfilos de ami-noácidos, ou de uma amina primária alifática ou aromática para o acoplamento a radicais de carbohidratos de proteínas.

Se no caso de grupos funcionais no radical A se tratar precisamente de um grupo nucleófilo, este pode ser levado a reagir com grupos activados de uma molécula que se acumule selectivamente, incluindo-se também com os grupos da molécula reagidos com os chamados "cros-linking-reagents", tais como imi-doésteres homobifuncionais, ésteres de N-hidroxissuccinimida ho-• mobifuncionais (NHS) e com MCross-linkerM heterobifuncionais 11 *

que contem grupos funcionais diferentes, tais como NHS-ésteres, dissulfuretos de piridilo e halogéneos activados, tais como tx -ceto-halogenetos. Estes Cross-Linker são obtidos comercialmente ·

Como parceiro de acoplamento («composto T) propõem-se entre outros diversas biomoléculas: ligantes que se ligam a receptores específicos e que podem deste modo reconhecer um tecido modificado na sua densidade de receptor; pertencem a esta classe, entre outros, hormonas peptídicas e esteroides e neurotransmissores· Com ligantes para receptores de hormonas esteroides foi demonstrada a possibilidade de se realizar um diagnóstico aperfeiçoado de carcinomas da mama e da próstata (S· J. Brandes & J. A. Katzenellenbogen, Nucl. Med· Biol. 15:53» 1988)· Frequentemente foi possível recorrer a ligantes para neurorre-ceptores, marcados com isótopos emissores de positrões, para o diagnóstico de diversas doenças cerebrais (J. J· Forst, Trends in Pharmacol. Sei· 7:490, 1987)· Outras biomoléculas são degradadas no metabolismo das células na forma de metabolitos que per mitem identificar um metabolismo alterado; pertencem a este grupo por exemplo ácidos gordos, sacarídeos, peptídeos e aminoáci-dos. Os ácidos gordos acoplados aos quelatantes instáveis de foram descritos na Especificação EPA 0 200 492. Outros produtos do metabolismo, tais como sacarídeos (desoxiglucose), lactatos, piruvatos e aminoácidos (leucina, metilmetionina, glici-na) foram identificados com auxílio da técnica PET para a representação por imagem de órgãos de metabolismo alterado (R, Weinreich, Swiss Med, 8, 10, 1986)· Também substâncias não biológicas, como por exemplo, misonidazol e os seus derivados, que se ligam irreversivelmente aos constituintes celulares em tecidos ou partes de tecidos com reduzida concentração de oxigénio, podem ser tomados em consideração para uma acumulação específica de isótopos radioactivos e consequentemente para a representação por imagem de tumores ou de regiões isquémicas (μ. E. Shelton, J· Nucl» Med. 30:351» 1989)· Finalmente, é também possível realizar-se o acoplamento de quelantes bifuncionais a an-, ticorpos monoclonais ou aos seus fragmentos· Os compostos de * acordo com a invenção contendo biotina possibilitam a ligação e * 12 a

dos conjugados radioactivos a substâncias avidina ou estrepta-vidina. Este facto pode ser utilizado para se fazerem acumular conjugados anticorpo-estreptavidina no tumor e aplicar apenas mais tarde os componentes contendo biotina radioactiva, o que conduz a uma exposição mais reduzida do paciente à radiação radioactiva (D. J. Hnatowich et al, J. Nucl. Med. 28:1294, 1987)· Por complexação dos conjugados com isótopos de Tc-99m ou de ré-nio toma-se possível um diagnostico e terapia de tumores· é irrelevante que a marcação dos quelantes com Tc-99m ou com um isótopo de rénio seja realizada ou antes ou depois do acoplamento a molécula que se acumula selectivamente. Para um acoplamento à molécula que se acumula selectivamente depois de uma complexação, pressupõe-se no entanto que a reacção do complexo radioactivo com o composto que se acumula se processa rapidamente, em condições favoráveis e quase quantitativamente, assim como não se torna necessária uma purificação posterior· A preparação das composições farmacêuticas de acordo com a invenção é realizada de forma conhecida por si, dissolvendo-se em meio aquoso os complexantes de acordo com a invenção, com adição de um reductor, de preferência sais de es-tanho-(ll), tais como o cloreto ou o tartarato - e eventualmente com adição das substâncias auxiliares correntes na técnica galénica - e em seguida esterilizando por filtração.

Os aditivos apropriados são por exemplo tampões fisiologicamente aceitáveis (por exemplo trometamina), pequenas adições de electrólitos (por exemplo cloreto de sódio), estabilizadores (por exemplo gluconato, fosfatos ou fosfonatos). Os agentes farmacêuticos de acordo com a invenção são apresentados na forma de uma solução ou numa forma liofilizada, e são misturados imediatamente antes da aplicação com uma solução de pertecnetato de Tc-99m, eluida de geradores produzidos comercial mente, ou com uma solução de perrenato.

Na aplicação in vivo em medicina nuclear os . agentes farmacêuticos de acordo com a invenção são aplicados ] doseadamente em quantidades de Í.IO"’** até 5.10 ^ nmol/kg de peso = 13 =

corporal, de preferência em quantidades compreendidas entre 1.10 e 5*10 nmol/kg de peso corporal. Pressupondo-se um peso corporal médio de 70 kg, a quantidade de radioactividade para utilização em diagnóstico estará compreendida entre 0,05 © 50 mCi, de preferência 5 a 30 mCi por aplicação. Para uma utilização terapêutica são aplicados entre 5 © 500 mCi, de preferência 10 a 350 mCi. A aplicação é realizada normalmente por via intravenosa, intraarterial, peritoneal ou intratumural, por in-jecção de 0,1 a 2 ml de uma solução do agente farmacêutico de acordo com a invenção, á preferida a aplicação intravenosa.

Os exemplos adiante servem para uma melhor elu cidação dos objectivos da presente invenção.

Exemplo 1: 2-metil-2-(4-nitrobenzil)-malonato de dimetilo

Introduzem-se 11,5 g (0,5 mol) de sódio, sob uma corrente de azoto, num balão de três tubuladuras de 1000 ml de capacidade, bem seco, equipado com um refrigerante de refluxo e tubo desidratante, bem como um funil de carga conta-gotas com equilíbrio de pressão. Em seguida adicionam-se-lhe cuidado-samente 350 ml de metanol e agita-se por um período de tempo suficiente para que o sódio se dissolva completamente· X solução ainda tépida de metanolato de sódio adiciona-se muito lentamente, gota a gota, a solução metanólica de 87 g (0,5 mol) de me-tilmalonato de dietilo. Depois de terminada esta adição agita--se ainda 30 minutos e seguidamente adicionam-se às porções, com auxílio de um funil para pó, o brometo de 4-nitrobenzilo. Depois de todas as substâncias se terem dissolvido, aquece-se ao refluxo primeiro durante duas horas, e em seguida agita-se por uma noite à temperatura ambiente. 0 dissolvente é extraído em evaporador rotativo, o resíduo é misturado com água e é extraído várias vezes com acetato de etilo (250 ml de cada vez).

Os extractos orgânicos depois de reunidos são lavados com uma solução saturada de cloreto de sódio e secam-se com sulfato de sódio. Depois da extracção do dissolvente ficam como resíduo • cristais levemente amarelados. A recristalização é realizada em ) dimetilformamida (DMF)/água, = 1¾ =

Ponto de fusãos 9^»5-95*0° C Rendimento: 74$

Dados de 1H-NMR em DMSO/TMS 1.4 ppm (s, 3H, Me); 3,5 ppm (s, 2H, GHgAr); 3,8 ppm (s, 6H, MeOOC); 7,2 ppm (d, 2H, ArH); 8,2 ppm (d, 2H, ArH) ácido 2~metil-2~(4l-nitrotoenzil)-malónico

Dissolvem-se 28,1 g de 2-metil-2-(4'-nitroben-zil)-malonato de etilo (o,l mol) em 100 ml de metanol e adiciona- se- lhe gota a gota uma solução de 20 g de hidróxido de sódio (O,5 mol) em 50 ml de água, lentamente. Em seguida aquece-se duas horas em banho-maria a 50° C, extrai-se o dissolvente em evaporador rotativo e toma-se o resíduo em água. Acidifica-se com ácido clorídrico semi-concentrado e o ácido carboxílico livre I extraído com clorofórmio, é lavado e seco.

Rendimento: 98$

dados de 1H-NMR em DMSO/TMS 1.4 ppm (s, 3H, Me); 3»1 ppm (d, 2H, CHgAr); 7,4 ppm (d, 2H, ArH); 8,2 ppm (d, 2H, ArH). dicloreto de ácido 2-metil-2-(4l-nitrobenzil)-malónico [_ A mistura de 25,3 g do composto e 35,7 g de cloreto de tionilo e uma gota de dimetilformamida ó aquecida à ebulição mediante agitação, na ausência total de humidade. Depois do termo da libertação gasosa o excesso de cloreto de tio nilo ó extraído em vácuo à temperatura ambiente e o resíduo ó imediatamente submetido a. reacção seguinte.

Rendimento t 91$

Diamida do ácido N.N*-bis-^-metoxibenzi^^-metil··^-^'-nitro-benzil)-malónico Z~i7 λ solução de 5,5 g de 2-metoxibenzilamina (40 mmol) e 4,3 g de trietilamina (42 mmol) em 100 ml de cloreto de • metileno adiciona-se cuidadosamente, gota a gota, na ausência de , humidade, a solução de 7,1 g do composto £ (24 ramol) em 100 * 15 *

ml de cloreto de metileno· Em seguida agita-se 6 horas à temperatura ambiente e a mistura reactiva é lavada várias vezes com água, á seca, concentrada e é recristalizada em 2-propanol

Rendimento: 78$

dados de 1H-NMR em CDCl^TMS 1.3 ppm (s, 3H, CH3)j 3,2 ppm (s, 2H, CHgAr); 3,8 ppm (s, 6H, CH^OAr); 4,4 ppm (d, 4H, ArCH2NH)j 6,8-7,4 ppm (m, 10H, ArH)$ 7,8 ppm (d, 2H, ArH)

Diamida do ácido N,N,-bis-(2-hidroxibenzil)-2-metil-2-(4'-nitro benzil)-malonico

A uma solução de 4,90 mg do composto cs (lO mmol) em 150 ml de cloreto de metileno anidro adicionam-se gota o a gota e lentamente, a 0 C, sob atmosfera de argon, 17 g de tri brometo de boro (70 mmol) dissolvidos em 200 ml de cloreto de metileno e em seguida aquece-se a 40° C. Passadas 2 horas hidro-lisa-se com água, alcaliniza-se com solução de carbonato de potássio e extrai-se com cloreto de metileno. Depois da secagem e extracção do dissolvente obtém-se iam resíduo amarelo claro que é recristalizado em 2-propanol.

Rendimento $ 80$

dados de 1H-NMR em CDCl^/TMS 1.3 ppm (s, 3H, CH3)j 3,0 ppm (s, 2H, CHgAr); 4.4 ppm (d, 4H, ArCHgNH); 6,3 ppm (d, 2H, ArH); 6,6 ppm (d, 2H, ArH); 6,8 ppm-7,3 ppm (m, 6H,

ArH); 7,8 ppm (d, 2H, ArH); 9,0 ppm (s, 2H, NH)

Diamida do ácido N.N1-bis-(2-hidroxibenzil)-2-(4,-aminobenzil)-

-2-metilmalénico CS

Num balão de duas tubuladuras, de 250 ml, põem-se em suspensão 230 mg de paládio/carvão a 10$ em 80 ml de metanol e saturam-se com hidrogénio. Em seguida adiciona-se atra vés de um septo, por meio de uma seringa de injecção de 5 ml, * a solução de 1,15 g do composto / (2,5 mmol) em 4 ml de meta = 16 =

nol. Depois do termo da absorção de hidrogénio separa-se o cata lizador e o dissolvente é extraído em vácuo· Como resíduo obtêm-se cristais brancos. A recristalização destes é realizada em metanol.

Rendimento: 9**$

dados de 1H-NMR em CDCl^/TMS 1.3 ppm (s, 3H, CH^)} 3,0 ppm (s, 2H, CHgAr); ppm (d, 4H, Ai<5H2NH)í 6,3 ppm (d, 2H,

ArH); 6,6 ppm (d, 2H, ArH); 6,8 ppm-7»3 ppm (m, 8H, ArH)} 9,0 ppm (s, 2H, NH)

Diamida do ácido N.Nt-bis-(2-hidroxibenzil)-2-(4l-isotiociana-to-benzil)-2-metilmalónico /™27

Uma solução a 85$ de tiofosgeno em tetracloreto de carbono (0,2 ml, 2,23 mmol) é adicionada à solução de 257 mg do composto cg (0 ,5 mmol) em 4 ml de ácido clorídrico (3 M). A mistura reactiva é agitada 3 horas à temperatura ambiente e seguidamente é concentrada em vácuo até à secura.

Rendimento s 86$.

1H-NMR em CDCiyTMS 1.3 ppm (s, 3H, CH^)} 3,0 ppm (s, 2H, CHgAr)} ^,3 ppm (d, 4H, ArCHgNH); 6,7 ppm-7,3 ppm (m, 12H, ArH); 7,7 ppm (t, 2H, NH)} 8,8 ppm (s, 2H, OH)

Exemplo la

Diamida do ácido N,N' -bis-(2-hidroxibenzil)-2-^ V^biotinocar-bamoil)-benzil7-2-metilmalónico £8J A uma solução de 51¾ mg do composto ^ 6/ (l mmol) em 10 ml de sulfóxido de dimetilo adicionam-se 680 mg de NHS-biotina (2 mmol) mediante agitação, e aquece-se 3 horas a 50° C. Depois do arrefecimento até à temperatura ambiente agi-ta-se ainda por 15 horas. Seguidamente o dissolvente é extraído , em vácuo e o resíduo é purificado por MPLC (sílica-gel, diclo-* rornetano/etanol/amónia concentrada 10t20:l). = 17 =

Rendimento: 59$

dados de 1H-NMR em DMSO/TMS 1.3 ppm (s, 3H, CH^); 1,3-1,7 pm (m, ÓH, CHg); 2.3 ppm (t, 2H, CH2C0)í 2,8 ppm (m, 2H, CHgS); 3.0 ppm (s, 2H, CH2Ar); 3,1 ppm (m, 1H, CHS); 4.1 ppm (m, 1H, CHNHCO); 4,3 ppm (m, 5H, ArCHgNH + CHNHCO); 6,7 Ppm-7,3 ppm (m, 12H, ArH).

Exemplo lb

Diamida do ácido N,N*-bis-(2-hidroxibenzil)-2-^ 4*- ·(£ 4-(N-~maleimidometil)-ciclohexano]· -carbamoil} -benzil/-2-metilmaló- nico

CS

Este composto é preparado de forma idêntica à do composto £ §J,

Rendimento: 45$

dados de 1H-NMR em DMSO/TMS 1.3 ppm (s, 3H, CH^); 1,1-1,9 ppm (m, 9H, CH2); 2,5 ppm (m, 1H, CHCO); 3,0 ppm (s, 2H, CHgAr); 3.3 ppm (CHCHgN); 4,4 ppm (d, 4H, ArCHgNH); 6.3 ppm (d, 2H, ArH); 6,6 ppm (d, 2H, ArH); 6,8 ppm-7,3 ppm (m, 10H, ArH+CH=CH).

Exemplo lc

Complexo de Tc-99m do composto ca

Uma solução de 5,0 mg do composto CS em 5 ml de água é completada com etanol até 10 ml. Misturam-se 400 μΐ desta solução com 80 μΐ de uma solução saturada de tartarato de estanho e 8 mCi de pertecnetato de Tc-99m obtido a partir de um gerador Mo99/Tc99m e deixa-se repousar 5 minutos. Em seguida a solução é extraída três vezes, com 2 ml de clorofórmio de cada vez, a fase orgânica é seca através de uma curta coluna de sulfato de sódio, mistura-se com 5® pl de tiofosgeno e procede--se à incubação 5 minutos à temperatura ambiente. Em seguida mistura-se com 100 μΐ de isopropanol, remove-se o clorofórmio = 18 = 4'

por vaporização com argon e adicionam-se ao resíduo 900 /il de uma solução a Vjo de FVP em água.

Acoplamento do complexo de Tc-99m contendo isotiocianato a proteínas 0 anticorpo purificado (lO mg/ml) e tratado a pH 3»5 durante 2 horas com 25 pg/ml de pepsina e em seguida e isolado por meio de FPLC. Antes do acoplamento com o quela— tante os fragmentos são dialisados a 4° C durante 12 a 24 horas contra 0,1 Μ ΚΗ,,ΡΟ^/0,1 M NaHCO^, pH 8,5· A concentração de pro teína 0 ajustada a 10 mg/ml. 0 complexo de Te-99m preparado 0 adicionado numa relação molar 1:10 (complexo: proteína), à solução de proteína. Para a formação do conjugado a mistura e incubada 1 hora a 37° C.

Exemplo 2

Diamida do ácido N,N,-bis-/~(5-»carboxi-2-metoxi)-benzil<27-2-me-til-2-(4*-nitrobenzil)-malonico /*"10/

Este composto é preparado de forma correspondente à do composto Λ7.

Rendimento: 56$

dados de 1H-NMR em DMSO/TMS 1»3 ppm (s, 3H, CH^h 3,2 ppm (s, 2H, CHgAr)} 3,8 ppm (s, 6H, CH^OAr); 4,5 ppm (d, 4H, ArCHgNH)} 6,9-8,0 ppm (m, 8H, ArH)} 8,2 ppm (d, 2H, ArH)

Diamida do ácido N,N'-bis-/ (5t-carboxi-2>-hidroxi)-benzil7-2--(4'-nitrobenzil)-2-metilmalánico 11J

Este composto 0 preparado de forma correspondente à do composto /_ ·

Rendimento: 79#

dados de ^H-NMR em DMSO/TMS 1.3 ppm (s, 3H, GH^); 3,1 ppm (s, 2H, CHgAr); 4.4 ppm (d, 4H, ArCHgNH); 6,8-8,0 ppm (m, 10H, ArH). = 19 =

Diamida do ácido N,Ν' -bis-/”"( 51 -carboxi-2' -hidroxi)-benzil7-2-~(4>~aminobenzil)-2~metilmalonico / 1jj

Esto composto é preparado de forma correspondente à do composto

Rendimento: 92$

dados de ^I-NMR em DMSG/TMS 1.3 ppm (s, 3H, CH3)j 3,0 ppm (s, 2H, CHgAr); 4.4 ppm (d, 4H, ArCHgNH); 6,8 - 7,9 ppm (m, 10H, ArH).

Diamida do ácido N,Ν'-bis-/ (5'-carboxi-2·-hidroxi)-benzilT-2--(41-isotiocianatobenzil)-2-metilmalónico /""1

Este composto é preparado de forma correspondente à do composto ca

Rendimento: 83$

dados de 1H-NMR em DMSO/TMS 1.3 ppm (s, 3H, CH^); 3,0 ppm (s, 2H, CHgAr); 4.4 ppm (d, 4H, ArGH^NH); 6,8 - 7,9 ppm (m, 10H, ArH).

Exemplo 3 2-/~4*-(tetrahidro-2-piraniloxi)-butil7~malonato de dimetilo

7,9 g (o,3 mol) de sódio são introduzidos, sob uma corrente de azoto, num balão de 3 tubuladuras de 500 ml de capacidade, equipado com refrigerante de refluxo e um tubo desidratante, assim como com um funil de carga conta-gotas com igualização de pressão. Em seguida adiciona-se gota a gota, cuidadosamente, 250 ml de metanol anidro e agita-se por um período de tempo suficiente para que o sódio fique completamente dissolvido. Na solução ainda tépida de metanolato de sódio adi-ciona-se gota a gota, muito lentamente, a solução metanólica de 95,4 g (0,58 mol) de malonato de dietilo. Depois do termo desta adição ferve-se ao refluxo ainda durante 1 hora e em seguida • adicionam-se gota a gota, lentamente, 0,5 mol de l-cloro-4-te- = 20 = trahidro-piraniloxibutano. Depois do termo da adição ferve-se ao refluxo durante uma noite. 0 dissolvente é extraído em eva-porador rotativo, o resíduo ó misturado com água e ó extraído várias vezes com acetato de etilo. Os extractos orgânicos depois de reunidos são lavados com uma solução saturada de cloreto de sódio e secam-se com sulfato de sódio. Depois da extrac-ção do dissolvente fica como resíduo um óleo incolor. Depois da destilação em vácuo obtêm-se 66,4 g do ester malónico substituí do*

Rendimento s 70$

dados de 1H-NMR em CDC1_/TMS

J 1,6-2 ppm (m, 12H, 0¾)} 3,5-3,7 PP® (m, 5H, CH+OTHP); 3,7 ppm (s, 6H, GOOMe)} 4,6 ppm (t, 1H, OTHP) ácido 2-£ 4>-(tetrahidro~2-piraniloxi)-butil7-malónico £ 1

Este composto e preparado de forma correspondente à do composto £ zj,

Rendimentoi 93$

dados de 1H-NMR em DMSO/TMS 1,3-2,1 ppm (m, 12H, CH^); 3,1-4,0 ppm (m, 5H, CH, OTHP); 4,5 ppm (t, 1H, OTHP)}

Cloreto de 2-^"'4t-(tetrahidro-2-piraniloxl)-butil7-malonilo

Este composto ó preparado de forma correspondente à do composto ·

Rendimento s 89$·

Diamida do ácido N,N'-bis-/ 2-(nitrobenzilj7"2-/ 4'-(tetrahi-dro-2-piraniloxi) -butij^-malónico /"*vfj A uma solução de 6,3 g do composto /”l€J (12 mmol) e 2,5 g de trietilamina em 100 ml de diclorometano adicionam-se gota a gota e lentamente 3,5 g de 2-nitrobenzilamina ¢23 mmol) em 150 ml de diclorometano, no decurso de 1 hora. Á solu-. ção ó em seguida arrefecida a 0° C, e misturada com água e a fa- α 21 a

se aquosa é extraída várias vezes com diclorometano e e seca com sulfato de sódio. Depois da extracção do dissolvente ficam como resíduo um óleo amarelo.

Rendimento: 68$

dados de 1H-NMR em CDCl^/TMS 1.6- 2 ppm (m, 12H, CH,,); 3,5-3,7 ppm (m, 5H, CH+OTHP); 4,5 ppm (s, 4h, NHCHgAr)$ 4,6 ppm (t, 1H, OTHP); 7,7-7,9 ppm (m, 6H, ArH)j 8,3 ppm (d, 2H, ArH)

Diamida do ácido N,N,-bis-^”2-(nitrobenzil^7“2-(4-hidroxibu-til)-malónico ]_ 18/

Uma solução de 26 g do composto Z""ll7 (50 mmol) em 50 ml de metanol ó adicionada gota a gota a uma solução de 8 ml de ácido sulfúrico em 150 ml de metanol, e agita-se à temperatura ambiente durante 15 horas. Arrefece-se a 0° C, neutraliza-se, extrai-se com diclorometano, seea-se e concentra--se.

Rendimento: 69$

dados de 1H-NMR em CDCl^/TMS 1,4-1,6 ppm (m, 6H, CH2); 3,5 ppm (t, 1H, CH)} 3,6 ppm (t, 2H, CHgOH); 4,5 ppm (s, 4H, NCH2Ai); 7.7- 7,9 ppm (m, 6h, ArH)$ 8,3 ppm (d, 2H, ArH)

Diamida do ácido N,N»<-bis-Z 2-(nitrobenzil)7-2-(4-metanossulfo-nilbutil)-malónico Z“X27 A uma solução de 1,8 g do composto Z (4 mmol) e 6θ6 mg de trietilamina (6 mmol) em 25 ml de diclorome-tano adicionam-se a 0° C 500 mg de cloreto de metanossulfonilo· Passadas 2 horas a solução ó misturada com água gelada e e extraída várias vezes com diclorometano, é lavada e seca. Depois da concentração fica como resíduo um óleo amarelo.

Rendimento: 90$

• dados de 1H-NMR em CDC1„/TMS • Js α 22 s 1.4- 1,6 ppm (m, 6H, CH2); 3,0 ppm (s, 3H, Me); 3.5 ppm (t, 1H, CH); 4,0 ppm (t, 2H, CHgOR); 4.5 ppm (s, 4H, NCH2Ar); 7,7-7,9 PP*n (m, 6H, ArH); 8,3 ppm (d, 2H, ArH)

Diamida do ácido N,N* -bis-/"2-(nitrobenzil)7-2-(4-tiocianatobu-til)-malónico ^207 A uma solução de 22,5 g do composto (^3 mmol) em 100 ml de metanol adlciona-se um excesso de tiocianato de potássio (100 mmol) e aquece-se ao refluxo durante 36 horas. Bm seguida concentra-se à secura e o resíduo é tomado em clorofórmio e e purificado por cromatografia instantânea por coluna (clorofórmio)·

Rendimento: 64$

dados de 1H-NMR em eDCl3/TMS 1.4- 1,6 ppm (m, 6H, CH2); 3,1 PPm CH2SCN); 3,5 ppm (t, 1H, CH); 4,5 PP» (s, 4H, NCH2Ar); 7,7-7,9 ppm (m, 6H, ArH); 8,3 ppm (d, 2H, ArH)

Diamida do ácido N,N’-bis-^~2-(aminobenzilj7-2-(4-tiocianatobu-til)-malónico [_ 21/

Este composto e preparado de forma correspondente à do composto / 6J,

Rendimento i 78$

dados de XH NMR em DMSO/TMS 1.4- 1,6 ppm (m, 6H, CH2); 3,1 ppm (t, 2H, CHgSCN); 3,5 ppm (t, 1H, CH); 4,3 ppm (s, 4H, NCHgAr); 6,6-7,6 ppm (m, 8H, ArH)

Diamida do ácido N,N-bis-/ 2-(aminobenzilj7-2-(4-meroaptobu-til)-malónico

Uma solução de 13 g do composto /"*207 (28 mmol) em metanol é adicionada gota a gota, lentamente, a uma . solução de 2,7 g de borohidreto de sódio (70 mmol) em 50 ml de * 23 *

agua. Depois de terminada a adição agita-se ainda 2 horas a 50° C, arrefece-se, neutraliza-se com ácido clorídrico 2 N e extrai-se várias vezes com diclorometano. Depois da secagem com sulfato de sódio e concentração fica como resíduo um óleo amare lo.

Rendimento: klfí

dados de 1H-NMR em CDCl^/TMS 1,4-1,6 ppm (m, ÓH, CH2)j 2,4 ppm (t, 2H, CH^SH)} 3,4 ppm (t, 1H, CH); 4,5 ppm (s, 4H, NCH2Ar)} 6,6-7,6 ppm (m, 8H, ArH)

Exemplo 4s 2-(4-nitrobenzil)-malonato de dietilo / 2

Adicionam-se 21,4 g de lítio-diisopropilamida a 210 ml de tetrahidrofurano anidro, sob corrente de azoto, num balão de 3 tubuladuras seco, equipado com tubo desidratante e funil de carga conta-gotas, com igualização de pressão. Em seguida, à temperatura ambiente, adicionam-se gota a gota 5&»0 g de malonato de dietilo dissolvido em 100 ml de tetrahidrofurano anidro, durante 40 minutos. Passados 30 minutos a solução reac-tiva ó arrefecida a -62° C e adicionam-se gota a gota e lentamente 39,1 g de brometo de 4-nitrobenzilo dissolvido em tetrahi drofurano, mediante agitação forte, agita-se ainda 1 hora a -62° C e em seguida o sedimento formado ó filtrado a frio. O filtrado ó evaporado em evaporador rotativo, o resíduo e dissolvido em 300 ml de etanol a 65o C e separa-se o resíduo insolúvel. Depois do arrefecimento obtem-se 34,7 g de cristais levemente amarelados.

Rendimento: 65$

dados de 1H-NMR era CDCl^/TMS 1,2 ppm (t, 6H, CH2CH3)? 3,3 ppm (d, 2H, CHgAr); 3,6 ppm (t, 1H, CH)5 4,1 ppm (q, 4H, CH2CH3)í 7,4 ppm (d, 2H, ArH)5 8,1 ppm (d, 2H, ArH) = 24 =

.ácido 2~( 4-nitrobenzil) -malónico / 2\±]

Este composto e preparado de forma correspondente à do composto ·

Rendimento : 98$

dados de 1H-NMR em DMSO/TMS 3.1 ppm (d, 2H, CHgAr); 3,4 ppm (t, 1H, CH); 7.1 ppm (s, 4H, NH2)j 7,4 ppm (d, 2H, ArH); 8.2 ppm (d, 2H, ArH)

Dicloreto de 2-(4-nitrobenzil)-malonilo

Este composto é preparado de forma correspondente à do composto cu.

Rendimento: 76$

Diamida do ácido ΚΓ,Ν* -bis-/~metil-2 -pirrolil^-2-(4 *-nitroben-zil)-malónico /“~267 λ solução de 3»8 g de 2-aminometilpirrol (40 mmol) e 4,3 g de trietilamina (42 mmol) em 100 ml de cloreto de metileno, adiciona-se cuidadosamente gota a gota, com total exclusão de humidade, uma solução de 6,6 g do composto c*c (24 mmol) em 100 ml de cloreto de metileno. Em seguida agita-se durante 6 h à temperatura ambiente e a mistura reactiva é lavada várias vezes com água, é seca, concentrada e recristalizada em 2-propanol.

Rendimento: 76$

dados de 1H-NMR em DMSO/TMS 3,1 ppm (d, 2H, CHgAr); 3,4 ppm (t, 1H, CH); 3,7 ppm (s, 4H, ArCHgNH); 6,1-6,7 ppm (m, 6h, ArH); 7,4 ppm (d, 2H, ArH); 8,2 ppm (d, 2Ή, ArH)

Diamida do ácido N,N,-bis-^fmetil-2-pirroli37“2-(4,-aminoben-zil)-malónico jQ^fJ • Este composto é preparado de forma correspon- ] dente à do composto CS. = 25 «

Rendimento: 75$

dados de 1H-NMR em DMSO/TMS 3.1 ppm (d, 2H, CHgAr)} 3,k ppm (t, 1H, CH); 3»7 ppm (s, te, ArGHgNH)} 6,2-6,9 ppm (m, 10H,

ArH)

Diamida do ácido N,Ν' -bis-/ metil^-pirrolilT-S-^^isotiQcia-natobenzil)-malónico / 28/

Este composto e preparado de forma correspondeu te à do composto Z"Í7· Rendimento: 69$

dados de ^NMR em DMSO/TMS 3.1 ppm (d, 2H, CH^Ar); 3»^ ppm (t, 1H, CH); 3.7 ppm (s, 4H, ArCHgNH); 6,2-7,0 ppm (m, 10H, ArH)

Exemplo 5

Diamida do ácido N,Nl-bis-/”(2-(benziltio)-benzi^/r-2-metil-2--(4*-nitrobengil)-malónico / 2%J

Este composto é preparado de forma correspondente a do composto / 47·

Rendimento: 72$

dados de 1H-NMR em CDCl^/TMS 1.8 ppm (s, 3H, Me); 3,1 ppm (d, 2H, CHgAr); 4.1 ppm (s, 4H, ArCHgS); 4,3 ppm (s, 4H, ArCHgNH); 7,1-7,6 ppm (m, 18H, ArH); 8,3 ppm (m, 4H, ArH).

Diamida do ácido N.N*-bis-(2-meΓcaptobenzil)-2-metil-2-(4,-ni-trobenzil)-malónico [_ 3θ7 A uma solução, arrefecida a -50° C, de 5,1 g do composto em 5° ml de tetrahidrofurano e 100 ml de amo níaco líquido adiciona-se cuidadosamente 3,5 g de sódio e agita -se durante 4 b, O excesso de sódio e decomposto cuidadosamente . com cloreto de amónio e em seguida deixa-se aquecer lentamente s 26

até à temperatura ambiente. 0 resíduo e tomado em água e é extraído várias vezes com diclorometano, seca-se a fase orgânica e concentra-se.

Rendimento: 59$

dados de "hl-NMR em CDGl^/TMS 1,5 ppm (s, 3H, Me); 3,1 ppm (d, 2H, CHgAr); 4.1 ppm (s, 4H, ArCHgNH); 7,0-7,5 ppm (m, 10H, ArH); 8,2 ppm (d, 2H, ArH).

Diamida do ácido N.Nl-bis-(2-mercaptobenzil)-2-metil-2-(4t--aminobenzil)-malénico /""

Este composto é preparado de forma correspondente à do composto £“§]·

Rendimento s 69$

dados de 1H-NMR em CD01 /TMS 1.4 ppm (s, 3H, Me); 3,0 ppm (d, 2H, CHgAr)} 4.1 ppm (s, 4H, ArCH2NH); 7,0-7,4 ppm (m, 10H, ArH)·,

Diamida do ácido N.N1-bis-(2-mercaptobenzil)-2-metil-2-(4l--isotiocianato-benzil)-malénico £“32/

Este composto é preparado de forma correspondente à do composto / χ7·

Rendimento: 49$

dados de 1H-NMR em DMSO/TMS 1.4 ppm (s, ^H, Me)} 3,0 ppm (d, 2H, CHgAr)} 4.1 ppm (s, 4H, ArCH2NH)} 7,0-7,5 ppm (m, 1ΘΗ, ArH)}

Exemplo 6 2-metil-2-(2-propinil)-malonato de dietilo /*"3,27

Este composto é preparado de forma correspondente ao composto a 27 a

Rendimento t 66$

dados de ^H-NMR em CDCl^/TMS 1,5 ppm (s, 3H, Me)? 2,0 ppm (t, 1H, CCH)j 2.8 ppm (m, 2H, CH^)? 3»8 ppm (s, 6H, COOMe)

Xcido 2-metil-2-(2-propinil)-malónico / Jh?

Este composto é preparado de forma correspondente à do composto /"1 227·

Rendimento: 8l$

dados de 1H-NMR em CDCl^/TMS 1.4 ppm (s, 3H, Me)? 2,6 ppm (d, 2H, CH2); 2.9 ppm (t, 1H, CCH)?

Cloreto de 2-metil-2-(2-propinil)-malonilo /"3

Este composto é preparado de forma correspondente a do composto CC-

Rendimento: 91$·

Diamida do ácido N,N2-bis-^7(2-benz±ltio)-benzi^-2-metil-2--(2~propinil)-malonico [_ 3^7

Este composto é preparado de forma correspondente à. do composto ^ 47·

Rendimento: 67$·

dados de XH-NMR em CDCl^/TMS 1.5 ppm (s, 3H, CH3)? 2,0 ppm (t, 1H, CCH)? 2,8 ppm (d, 2H, CHgCC)? 4,1 ppm (s, 4H, ArCHgS); 4,2 ppm (s, 4H, ArCHgNH); 7,1-7,6 ppm (m, 18H, ArH)·

Diamido do ácido N,M2-bis-^”(2-mercaptobenzil^7"2",n®2il“2-(2--propinil)-malonico /7yfj 1

Este composto é preparado de forma correspon- 2 dente à do composto CnJ-a 28 a

Rendimento: 70$

dados de 1H-NMR em CDC1-/TMS

J 1,5 PP» (s, 3H, CH3)? 2,0 ppm (t, 1H, CCH); 2,8 ppm (d, 2H, GH2CC); 4,0 ppm (s, 4H, ArCH2S)j 7,0-7,5 ppm (m, 8H, ArH).

Exemplo 7

Diamida do ácido N,N*-bis-/ (2-benziltio-3-piridil)-metil7-2--metil-2-(4t-nitrobenzil)-malónico / 3,§7

Este composto é preparado de forma correspondente à do composto / kj·

Rendimento: 60$

dados de 1H-NMR em CDOl^/TMS 1.2 ppm (s, 3H, Me); 3,5 ppm (s, 2H, CHgAr); 4.3 ppm (s, 4H, ArCHgS); 4,4 ppm (s, 4h, ArCHgNH)$ 7,1-7,5 ppm (m, 1ÓH, ArH); 8,3--8,5 ppm (m, 4h, ArH)

Diamida do ácido N,N*-bis-^"(2'-tio-3*-piridil)-metilT-2-nie-til-2-(4M-nitrobenzil)-malónico [_ 3

Este composto á preparado de forma correspondente à do composto 30/·

Rendimento: 61$

dados de 1H-NMR em DMSO/TMS 1.2 ppm (s, 3H, Me); 3»^ PP® (s, 2H, CHgAr); 4.3 ppm (s, 4H, ArCHgNH); 7,1-7,5 ppm (m, 6H, ArH); 8,3-8,5 ppm (m, 4H, ArH).

Diamida do ácido NylNM-bis-/ (2l-tio-3*-piridil)-metij^-2-me-til-2-(4t>-aminobenzil)-malónico / kÒJ

Este composto á preparado de forma correspondente à do composto £"£1·

Rendimento: 66$ = 29 =

dados de 1H-NMR em DMSO/TMS 1.2 ppm (s, 3H, Me)} 3,3 ppm (s, 2H, CH2Ar)j k,3 ppm (s, te, ArCHgNH)} 7,1-7,5 ppm (m, 8H, AtfH)} 8,5 ppm (d, 2H, ArH).

Diamida do ácido N,N»-bis-/ (21~tio~3t-piridil)-metiJk7-2-me-til-2-»(4lt-isotiocianatobenzil)«»malónico / kl£

Este composto é preparado de forma correspondente à do composto £ "fj.

Rendimento : 82$

dados de 1H-NMR em DMSO/TMS 1.3 ppm (s, 3H, Me)} 3,3 ppm (s, 2H, GHgAr); k, 3 ppm (s, te, ArCH2NH)í 7,2-7,5 ppm (m, 8H, ArH); 8,5 ppm (d, 2H, ArH).

Exemplo 8

Diamida do ácido N.Nl-bis-(2-metoxibenzil)-2-metil-2-(2-propx-nil)-malónico

Este composto é preparado de forma correspondente à do composto ·

Rendimento s 76$

dados de 1H-NMR em CDCl^/TMS l, 5 ppm (s, 3H, CH3); 2,0 ppm (t, 1H, CCH)} 2,8 ppm (m, 2H, CE^); 3,8 ppm (s, ÔH, CH^OAr)$ ppm (d, te, ArCHgNH); 6,8-7,½ ppm (m, 8H, ArH)·

Exemplo 8a 2-metil-2-(propa-l-inil)-l.3-bis-(2-hidroxi-benzilamido)-pro-pano 200 mg de 2-metil-2-(propa-l-inil)-1,3-bis--(2-metoxi-benzilamido)-propano £ hzj foram dissolvidos em k ml de diclorometano anidro. Sob atmosfera de azoto adicionaram-* -se gota a gota 3,8 ml de uma solução 1 molar de tribrometo de = 30 =

boro em diclorometano. A mistura foi aquecida 4 h a 40° C. Depois do arrefecimento procedeu-se à hidrólise, separaram-se as fases e extraiu-se por 2 vezes, eliminou-se o dissolvente, e cromatografou-se através de sílica gel com diclorometano/ace-tona (0-30$). Obteve -se um óleo viscoso.

Rendimento: 70$

dados de XH-NMR em CDCl^/TMS 1,53 ppm (s, 3H, Me)$ 1.97 ppm (t, 1H, CCH)} 2.77 ppm (d, 2H, CH2-CC); 4,85 ppm (m, 4H, ArCH2NC0); 6.80-7.30 ppm (m, 8H, ArH)j 8.90 ppm (s, 2H, 0H)

Exemplo 9 17 β-ΜάΓοχί-17&-/"”6,6-Μ8-(Ν,Ν'-^ o-metoxij1 -benzil-amino-car-bonil)-hepta-1-(E)-eno-3-ino7-3-me toxi-1,3,5-e stratrieno fhhj 40 mg de (E)-17j0-hidroxi-17oC-(2-iodovinil)--3-metoxi-l,3»5-estratrieno e 48 mg do complexante /”427 foram dissolvidos, conjuntamente com 3»2 mg de dicloreto de bis-(tri-fenilfosfino)-paládio e 2,6 mg de iodeto de cobre (l), em 1 ml de tolueno (p.a.), misturou-se com 22 mg de isopropilamina e agitou-se, sob atmosfera de azoto, a 50° C durante 3 h. Decorrido este período de tempo deixou-se arrefecer, eliminou-se o dissolvente e purificou-se por cromatografia líquida através de sílica-gel com hexano/acetato de etilo (líl) como eluente.

Rendimentos 65$

dados de 1H-NMR em CDCl^/TMS 0.92 ppm (s, 3H, Me/ 18/)} 1.20-3.00 ppm (m, 15H, esteroide); 1.55 ppm (s, 3H, Me)$ 2.85 ppm (d, 2H, GH2-CC)} 3.78 ppm (s, 3H, este-roide-OMe); 3.85 ppm (s, 6H, Ar-OMe); 4.45 ppm (m, 4H, ArCHgNCO)$ 5*55 e 6.23 ppm (AB, 2H, CHsCH); 6.60-7.35 ppm (m, 11H, Ar)j 31 = 17 β -hidroxi-17 & -£“6,6-bis-(N,N* - { o-hidroxi} -benzil-amino--carbonil) -hepta-l-(B)-eno-3-ino7-3"metoxi-l,3,5-estratrieno Z>Í7 7,1 4 mg da (E)-17|J-hidroxi-17<X-(2-iodovi-nil)-3-metoxi-l,3»5-estratrieno e 8 mg do complexante £ h^J foram dissolvidos, conjuntamente com 0,56 mg de dicloreto de bis-(trifenilfosfino)-paládio e 0,46 mg de iodeto de cobre (i), em 0,5 ml de tolueno (p.a·), misturou-se com 4 mg de isopro-pilamina e sob atmosfera de azoto agitou-se 3 h a 50° C. Decorrido este período de tempo deixou-se arrefecer, eliminou-se o dissolvente e purificou-se o todo através de 5 placas prontas de HPTLC (Merck, sílica-gel 60, 20 x 20 cm, com zona de concentração) utilizando-se como eluente hexano/acetato de etilo (l:l).

Rendimento: 60$

dados de 1H-NMR em CDCl^TMS 0.93 ppm (s, 3H, Me/"187)} 1.20-3.00 ppm (m, 15H, esteroide); 1.55 ppm (s, 3H, Me); 2.88 ppm (d, 2H, GH2-CC); 3.78 ppm (s, 3H, OMe); 4.37 ppm (m, 4H, ArCHgNCO); 5.40 e 6.20 ppm (AB, 2H, CHsCH); 6.60 - 7.30 ppm (m, 11H, Ar); 8.50 ppm (m, 2H, OH)

3,17 0-dihidroxi-17o( -/~6,6-bis-(N,N,--(.o-hidroxi3 -benzil--amino-carbonil) -hepta-1- (E) -eno-3-ino~J-1,3,5-estratrieno £~h§J 8,63 mg de (b)-3,17 j3-dihidroxi-17<*-(iodovi-nil)-l,3,5-estratrieno e 15 mg do complexante Ai7 foram dissolvidos, conjuntamente com 0,7 mg de dicloreto de bis-(trifenilfosfino) -paládio e 0,58 mg de iodeto de cobre (l), em 0,6 ml de tolueno (p.a.), misturaram-se com 5 mg de isopropilamina e, sob atmosfera de azoto, agitou-se a 60° C durante 12 horas. Eliminou-se o dissolvente e purificou-se o todo através de 5 placas prontas de HPTLC (Merck, sílica-gel 6θ, 20 X 20 cm, com zona de concentração) utilizando-se hexano/acetato de etilo (3*7) como eluente. = 32 =

Rendimento: 35$

dados de 1H-NMR em CDCl^/TMS 0.93 ppm (s, 3H, Me/~187); 1.20-3«00 ppm (m, 15H, esteroide); 1.55 ppm (s, 3H, Me); 2.88 ppm (d, 2H, CH2-CC); 4.36 ppm (m, 4H, ArCHgNCO); 5.40 e 6.20 ppm (AB, 2H, CH=CH); 6.55 - 7.25 ppm (m, 11H, Ar); 8.50 ppm (m, 2H, OH)

Exemplo 10 17β -hidroxi-17 e( 6>6-bis-(N,Nl - { o-metoxi} -benzi 1-amino- -carbonil)-hepta-1-(Z)-eno-3-ino7-4-egtreno-3-ona />r7 50 mg de (E)-17J& -hidroxi-17 c(-(iodovinil)--4-estreno-3-ona e 35 mg do complexante zj são dissolvidos em 2 ml de tolueno (p.a.), conjuntamente com 24 mg de diclore-to de bis-(trifenilfosfino)-paládio e 12,5 mg de iodeto de cobre (i), misturam-se com 23 mg de isopropilamina e sob atmosfera de azoto agita-se 8 horas a 60° C. Depois de mais 60 horas de agitação à temperatura ambiente elimina-se o dissolvente e purifica-se o todo por meio de 10 placas prontas de HPTLC (Merck, sílica-gel 60, 20 x 20 cm com zona de concentração) utilizando-se como eluente hexano/acetato de etilo (317).

Rendimento: 25$

dados de -½ NMR em CDC13/TMS 1.00 ppm (s, 3H, Me/“l87); 1.20-2.60 ppm (m, 20H, esteroide); 1.4θ ppm (s, 3H, Me); 3.23 ppm (AB, 2H, CH2-CC); 3.82 ppm (s, 6H, OMe); 4.45 ppm (m, 4H, ArCHgNCO); 5.83 ppm (s, 1H, c4-esteroide); 6,3k ppm (AB, 2H, CH=CH); 6.80 e 7.20 ppm (m, 8H,

Ar); 17 β -hidroxi-17 ^-/”6,6-bis-(N,N»--{ o-metoxi } -benzil-aminocar-bonil)-hepta-l-(E)-eno-3~ino7"4-estreno-3~ona A#

Este composto foi preparado de forma corres- 1 33 =

pondente à do composto fktf.

Rendimento: 33$

dados de 1H-NMR em GDCl^/TMS 1.00 ppm (s, 3H, Nef 187); 1,20-2,60 ppm (m, 20H, esteroide); 1,50 ppm (s, 3H, Me); 2.92 ppm (m, 2H, CHg-CC); 3*83 ppm (s, ôH, OMe); k.kZ ppm (m, 4h, ArCHgNCO); 5,82 ppm (s, 1H, C^-esteroide); 5.^5 © 5.95 ppm (AB, 2H, CH=CH); 6,85 e 7.20 ppm (m, 8H, Ar); 3,3’-©tilenodioxi-17 β -hidroxi-17 °( 6,6-bis-(N,Nl-( o-metoxij· .. -benzil-amino-carbonil)-hepta-l-(E)-eno-3-ino7'-5(6)-estreno C>*ã7

Este composto foi preparado de forma correspondente à do composto Ax7-

Rendimento: 31$

dados de 1H-NMR em CDCl^/TMS 0.90 ppm (s, 3H, Me/ 187); 0,85- 2,20 ppm (m, 2OH, esteroide); 1,55 ppm (s, 3H, Me); 2.92 ppm (m, 2H, CHg-CC); 3*85 ppm (s, 6H, OMe); 3·95 PP® (®> OCHgCHgO), k,k5 ppm (m, 4H, ArCHgNCO); 5.^5 ppm (s, 1H, C6-es-teroide); 5.50 e 6.18 ppm (AB, 2H, CHsCH); 6,90 e 7.20 ppm (m, 8H, Ar); 17 fl-hidroxi-17o( -/"6,6-bis-(N,N»- (.o-hidroxi} -benzil-amino--carbonil)-hepta-1-(Z)-eno-3-ino7-k-estreno-3-ona r5g7

Este composto foi preparado de forma correspondente à do composto Γκϋ·

Rendimento δ 12$

dados de ^H-NMR em CDCl^/TMS 1.00 ppm (s, 3H, Me/"l87); 1.20-2.60ppm (m,2(H, esteroide); 1.40 ppm (s, 3H, Me); 3,26 ppm (AB, 2H, CH2-CC); 4.^0 ppm (m, íffi, ArCH2NC0); = 3^ =

5.81 ppm (s, 1H, C4-esteroide)} 6,30 ppm (AB, 2H, CHsCH)} 6.80 θ 7.20 ppm (m, 8H,

Ar)} 8.50 ppm (m, 2H, OH) 3,3-etileaodioxi-l? 0 -hidroxi-17 o( ójé-bis-ÍNjN1- ^ o-hidro- xi ^ -benzil~amino-carbonil)«»hepta-l-(E)-eno«-3-,Ano7-^-gstreno~ -3-ona Γ5ΐ7

Este composto foi preparado de forma correspondente à do composto

Rendimento: 18%.

Exemplo 11

Acoplamento e marcação de um quelante contendo isotiooianato a proteínas

Tendo como exemplo os fragmentos de F(ab)2 do anticorpo monoclonal 17-1A, descreve-se o acoplamento de quelantes de tecnécio contendo isotiocianato, composto fèJ, a proteinas. Em vez de fragmentos do anticorpo poderá ser utilizada qualquer outra proteína ou uma substância contendo grupos amino. 0 anticorpo monoclonal 17-IA é obtido de harmonia com os correspondentes métodos conhecidos da literatura, depois de aplicação de 10' das correspondentes células de hibri doma na cavidade ventral de um rato Balb/c e aspiração do líqui do de ascite depois de 7 a 10 dias. A purificação é realizada de acordo com métodos igualmente conhecidos da literatura-, por precipitação com sulfato de amónio e cromatografia de afinidade através de proteína A-Sepharose. 0 anticorpo purificado (10 mg/ml) é tratado a pH 3»5» durante 2 horas, com 25 ^ug/ml de pepsina e em seguida é isolado por meio de FPLC. Antes do acoplamento com o quelante os fragmentos são dializados a 4° C, du rante 12 a 24 horas, contra 0,1 Μ ΚΗ^ΡΟ^/Ο,Ι M NaHCO^, pH 8,5, A concentração de proteina é ajustada a 10 mg/ml. Dissolve-se um excesso 5 vezes molar do quelatente contendo NCS / exemplo 17 na menor quantidade possível do mesmo tampão e adiciona-se • esta solução à solução de proteina. Para a formação do conjuga- = 35 =

do a mistura é incubada durante 3 horas a 37° C. Em seguida o conjugado ó dialisado durante 24 a 48 horas, com substituição de tampão por várias vezes, contra PBS (soro fisiológico tampo-nizado com fosfato) e a concentração de proteína e depois ajustada de novo, se necessário, a 10 mg/ml. Atá à marcação com Tc-99® o conjugado, depois da esterilização por filtração, pode ser conservado a 4° C em recipientes de vidro lavados com ácido. A marcação de 1 mg do fragmento de anticorpo acoplado ao quelatante com Tc-99m ó realizada por adição de 10 mCi da solução de pertecnetato (= 1-2 ml) e 100 jug de cloreto de estanho-Il numa solução de pirofosfato de sódio (l mg/ml) passada por árgon, ou por permuta de ligantes, por exemplo por adição da solução a um "kit” de glucoheptonato obtido comercialmente, misturado com pertecnetato.

Exemplo 12 2-metil-2-/i (3-t-butiloxicarbonil)-meti3^-malonato de dimetilo Z~5g7 À uma suspensão de 600 mg de hidreto de sódio (0,025 mol) em 25 ml de dimetilformamida anidra adiciona-se gota a gota, lentamente, mediante agitação, a solução de 4,36 g de metilmalonato de dimetilo (0,025 mol) em 5 ml de dimetilfor— mamida anidra. Depois de terminada a adição agita-se ainda 30 minutos, em seguida adiciona-se gota a gota uma solução de 5,85 g de bromoacetato de t-butilo (0,030 mol) em 10 ml de dimetilformamida e agita—se ainda mais duas horas à temperatura ambiente (controle por cromatografia de camada fina)· Depois da reacção completa verte-se em 300 ml de água gelada, neutraliza--se e extrai-se com um dissolvente apropriado. Depois da secagem com sulfato de sódio o dissolvente e extraído e destila-se o resíduo.

Rendimento: 70$

dados de 1H-NMR em CDCl^/TMS 1,4 ppm (s, 9H, Me); 1,5 ppm (s, 3H, Me); = 36 =

2,8 ppm (s, 2H, GHgCOO); 3,8 ppm (t, 6H, Me). Ácido 2-metil-2-j£~(3-t-butiloxicarbonil)-metil7-malónico L 527

Este composto foi preparado de forma correspondente à do composto m-

Rendimento: 53$

dados de 1H-NMR em DMSO/TMS 1.4 ppm (s, 9H, Me); 1,5 ppm (s, 3H, Me); 2.6 ppm (s, 2H, CHgCOO).

Dicloreto de 2-metil-2-^~*(3-t-butiloxicarbonil)-metilT-maloni- lo /"547

Este composto foi preparado de forma correspondente à do composto ftf-

Rendimento: 72$

dados de 1H-NMR em CDC1_/TMS 5 1.4 ppm (s, 9H, Me); 1,5 ppm (s, 3H, Me); 2.7 ppm (s, 2H, GH2COO).

Diamida do ácido Ν,Ν'-bis-^ (2-p-metoxibenziltio-3-piridil)--metii^-2-metil-2-i^> 2-(t-butiloxicarbonil)-metiJ^-malónico j_ $77

Este composto foi preparado de forma correspondente à do composto rm.

Rendimento: 59$

dados de 1H-NMR em DMSO/TMS 1.4 ppm (s, 9H, Me); 1,5 ppm (s, 3H, Me); 2.7 ppm (s, 2H, CH2C00), 3,7 ppm (s, 6H, OMe); 4,3 ppm (m, 8H, ArCH2S, ArCHgNH); 6.8 ppm (d, 2H, ArH); 7,1 ppm (dd, 2H,

ArH); 7,3 ppm (m, 4H, ArH); 7,6 ppm (d, 2H, ArH); 8,4 ppm (t, 2H, ArH). *37 =

Diamida do ácido NtNl~bis-/~(2-mercapto-3~piridil)~metil7»2--metil-2-(2-carboximetil)-malónico j_ 5^7 A 10 ml de ácido trifluoracético adicioxtam-se à temperatura ambiente 580 mg do composto £5^7 © aquece-se à ebulição. Depois de terminada a reacção o ácido trifluoracético é extraído em vácuo, o resíduo é tomado em clorofórmio, é la vado com água, é seco e concentrado»

Rendimento:

dados de 1H-NMR em DMSO/TMS 1.5 ppm (s, 3H, Me); 2,6 ppm (s, 2H, CHgCOO), 4,2 ppm (m, 4H, ArCHgNH); 6,8 ppm (d, 2H,

ArH); 7,1 ppm (dd, 2H, ArH); 7,3 ppm (m, 4H, ArH); 7,6 ppm (d, 2H, ArH); 8,4 ppm (t, 2H, ArH).

Exemplo 12A

Diamida do ácido N,N*-bis-/ (2-p-metoxibenziltxo-3-piridil)-me-til7-2-metil-2-(2-oarboximetil)-malónico yfj A 10 ml de ácido trifluoracético adicionam-se a -10° C 1,2 g do composto CiU e agita-se a 0° C. Depois de terminada a reacção o ácido trifluoracético é removido em vácuo, o resíduo é tomado em clorofórmio, é lavado com água, é seco e concentrado e cromatografa-se através de sílica-gel.

Rendimento: 59$

dados de 1H-NMR em DMSO/TMS 1.5 ppm (s, 3H, Me); 2,6 ppm (s, 2H, CHgCOO); 3,7 ppm (s, 6H, OMe); 4,3 ppm (m, 8h,

ArCHgS, ArCH^NH); 6,8 ppm (d, 2H, ArH); 7,1 ppm (dd, 2H, ArH); 7,3 ppm (m, 4H, ArH); 7.6 ppm (d, 2H, ArH); 8,4 ppm (t, 2H, ArH). = 38 =

Claims (1)

1. REIVINDICAÇÕES - IS - Compostos de fórmula geral 1

   (I) na qual representa hidrogénio ou um radical alquilo com 1 a 6 átomos de carbono eventualmente substituído por 1 ou 2 grupos hi-droxilo, R representa um radical alquileno com 1 a 6 átomos de carbono, eventualmente substituído por um grupo hidroxilo, R^ representa um átomo de hidrogénio ou um radical alquilo com 1 a 6 átomos de carbono, h , R representa um átomo de hidrogénio, um radical alquilo com la 6 átomos de carbono eventualmente substituído por um grupo hidroxilo, ou tem o significado indicado para R , 5 * f R representa um átomo de hidrogénio ou um radical alquilo com 1 a 6 átomos de carbono, B representa um radical pirrolilo, um radical fenilo substituí· do de fórmula II ou um radical piridino substituído de fórmula III = 39 =

   nas quais Z representa um grupo hidroxilo, amino ou mercapto e Y representa um átomo de hidrogénio, um radical carboxi ou um radical sulfonilo, ou representa um radical nitrosometilo de fórmula IV NOH \* (XV) na qual RX representa um radical alquilo com 1 a 6 átomos de k carbono que eventualmente, conjuntamente com R , esta ciclizado na forma de um anel de 5 ou 6 membros através de grupos trime-tileno ou tetrametileno, e A representa um radical amino, um radical mercapto, um radical hidrazino, um radical carbohidrazino, um radical carboxi, um radical alcinilo ou alcenilo tendo em cada caso 2a 6 átomos de carbono, um radical oxiranilo, um radical fenoxicarbonilo fluorado, um radical succinimidooxicarbonilo eventualmente subs tituído por um radical sulfato de sódio, representa um radical aminofenilo ou um radical isotiocianatofenilo, podendo os grupos fenilo estar eventualmente substituídos adicionalmente por um grupo carboxi, um grupo clorossulfonilo ou um radical de um ácido sulfónico, ou contém um composto T - eventualmente ligado através de um radical de ligação L bifuncional com auxílio dos grupos funcionais citados - e que se acumula selectivamente em lesães = JfO =

   ou em determinados tecidos, sendo T um anticorpo monoclonal ou os seus fragmentos, hormonas, enzimas, ligantes para receptores de membranas celulares, esteroides, neurotransmissores, lípi-dos, sacarxdeos, amino-ácidos e oligopeptídeos, biotina, bem como radiossensibilizadores, como por exemplo misonidazol, assim como os seus complexos com iSes metálicos radioactivos -- apropriados para o diagnóstico e terapia de tumores - assim como os seus sais com ácidos orgânicos e inorgânicos, - 2§ - Compostos de acordo com a reivindicação 1 ca-racterizados por o radical L eventualmente contido em À consistir em ligantes bifuncionais como por exemplo

   = 41 = ο ο Κ ICH2-CNH ο \\ // CO-N ο ο ο ich2-c: V // CO-N ο

   ο

   \\ = hz

   -3·- Gompostos de acordo com a reivindicação 1 ca-racterizados por T representar um anticorpo monoclonal, os seus fragmentos, biotina ou misonidazol. - 4» - Quelatos metálicos de acordo com a reivindica ção 1 com iões radioactivos ligados por ligação coordenativa, dos elementos Tc, Re, Cu, Co, Ga, Y e In, de preferência Tc e Re. - 5* - Utilização dos quelatos de acordo com a reivindicação 4 para o diagnóstico in vivo e a terapia de tumores. - 6* - Composições farmacêuticas caracterizadas por conterem pelo menos um quelato de acordo com a reivindicação 1, eventualmente em combinação com aditivos correntes na técnica galénica. - 7» - Processo para a preparação dos compostos de fórmula geral I

   (I) na qual R1 representa hidrogénio ou um radical alquilo com 1 a 6 átomos de carbono eventualmente substituído por 1 ou 2 grupos hidroxi-lo, = 43=

   R representa um radical alquileno com 1 a 6 átomos de carbono, eventualmente substituído por um grupo hidroxilo, representa um átomo de hidrogénio ou um radical alquilo com 1 a 6 átomos de carbono, R representa um atomo de hidrogénio, um radical alquilo com la 6 átomos de carbono eventualmente substituído por um grupo X hidroxilo, ou tem o significado indicado para R , B , , R-' representa um atomo de hidrogénio ou um radical alquilo com 1 a 6 átomos de carbono, B representa um radical pirrolido, um radical fenilo substi-tuido de fórmula II, ou um radical piridino substituído de fórmula III

   nas quais Z representa um grupo hidroxilo, amino ou mercapto e Y representa um átomo de hidrogénio, um radical carboxi ou um radical sulfonilo, ou representa um radical nitrosometilo de fórmula IV

   (IV) na qual Rx representa um radical alquilo com 1 a 6 átomos de • carbono que eventualmente, conjuntamente com R , esta cicliza-! do na forma de um anel de 5 ou 6 membros através de grupos tri-* kk =

   metileno ou tetrametileno, e A representa um radical amino, um radical mercapto, um radical hidrazino, um radical carbohidrazino, um radical carboxi, um radical alcinilo ou alcenilo tendo em cada caso 2a 6 átomos de carbono, um radical oxiranilo, ura radical fenoxicarbonilo fluorado, um radical succinimidooxicarbonilo eventualmente subs tituido por um radical sulfato de sódio, representa um radical aminofenilo ou um radical isotiocianatofenilo, podendo os grupos fenilo estar eventualmente substituidos adicionalmente por um grupo carboxi, um grupo clorossulfonilo ou um radical de um ácido sulfónico, ou contêm um composto T - eventualmente ligado através de um radical de ligação L bifuncional com auxílio dos grupos funcionais citados - e que se acumula selectiva-mente em lesões ou em determinados tecidos, sendo T um anticorpo monoclonal ou os seus frag mentos, hormonas, enzimas, ligantes para recepto-res de membranas celulares, esteroides, neuritrans missores, lípidos, sacarídeos, aminoácidos e oli-gopeptídeos, biotina, bem como radiossensibiliza-dores, como por exemplo misonidazol, assim como os seus complexos com iões metálicos radioactivos -apropriados para o diagnóstico e terapia de tumores - assim como os seus sais com ácidos orgânicos e inorgânicos, caracterizado por se fazerem reagir halogenetos substituidos do ácido malónico, de preferência cloretos de ácido malónico de fórmula geral V 1 2 R R A»

   1 2 a na qual R , R têm os significados citados acima, X representa halogéneo e A* representa A ou um radical transformável em A, com uma amina de fórmula geral VI = 45 = R k B C R5 VI

   3 4 5 * na qual R , R , R e B tem os significados indicados acima e os grupos funcionais contidos em B estão eventualmente presentes çuma forma bloqueada, num dissolvente aprótico, de preferência diclorometano, a temperaturas de 0 até 180° C, de preferência à temperatura ambiente, no decurso de duas a 2k horas, de preferência 4 horas, even tualmente com adição de bases apropriadas, por exemplo trietila mina, e se dissociarem os grupos de bloqueio existentes, e nos compostos assim obtidos eventualmente se converter o grupo A' em A - eventualmente gerado por bloqueio dos grupos amino livres e dos grupos Z funcionais com iões de bloqueio, por exem pio como complexo de cobre - e em seguida, se desejado, se acoplarem os compostos assim obtidos, através destes grupos funcionais, a compostos T capazes de se acumularem selectivamente nos tecidos, e se complexarem os substituintes B, se desejado, com os isótopos radioactivos pretendidos em cada caso, eliminando--se os iães de bloqueio eventualmente presentes anteriormente no produto de acordo com métodos conhecidos da literatura, e podendo alterar-se a sequência dos passos complexação com isótopos radioactivos e acoplamento ao composto T. A requerente declara que o primeiro pedido desta patente foi depositado na República Federal Alemã em 7 de Março de 1991 sob ο ηδ de Serie P4l 07 571.h. Lisboa, 5 de Março de 1992

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