PL92975B1 - - Google Patents

Description

Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarza¬ nia nowego antybiotyku — 31559 RP, jego soli z metalami lub zasadami azotowymi.Antybiotyk 31.559 RP jest szczególnie interesuja¬ cy ze wzgledu na aktywnosc przeciwkokcydiowa, przejawiajaca sie obok dzialania przeciwbakteryj- nego i przeciwmalarycznego. Jest on równiez szcze¬ gólnie interesujacy jako czynnik wzrostu zwierzat przezuwajacych oraz jako srodek do zwalczania czerwonki u swin.Antybiotyk 31.559 RP moze byc otrzymany z od¬ powiednich srodowisk hodowlanych nowego mi¬ kroorganizmu, zidentyfikowanego bardziej szczegó¬ lowo ponizej, nalezacego do rodzaju Streptomyces i okreslonego nazwa Streptomyces hygiroscopicus DS 24.367 (NRRL 5787).Antybiotyk 31.559 RP zawiera wegiel, wodór i azot. Sklad elementarny jego soli sodowej jest 20 w przyblizeniu nastepujacy: C°/o=63,2; H°/o=8,8; 0°/o=24,3; Na*/o=2,9. Równowaznik obojetny tej soli, okreslony przez oznaczenie soli sodowej w srodowisku kwasu octowego za pomoca kwasu nadchlorowego, wynosi836. aa Wedlug analizy elementarnej i widm NMR pro¬ tonu i wegla 13c, sól sodowa antybiotyku 31.559 RP odpowiada prawdopodobnie wzorowi su¬ marycznemu" C44H73_7501,_14Na. Z drugiej strony, widima NMR protonu i wegla 13C pozwalaja na 3° wykazanie obecnosci czterech grup metoksylowych w czasteczce.Sól sodowa antybiotyku 31.559 RP charakteryzu¬ je sie ponadto nastepujacymi wlasnosciami fizyko¬ chemicznymi: — wyglad: bialy proszek mikrokrystaliczny — rozpuszczalnosc (wg Pharmacopee Francaise, wydanie IX, czesc 2, str. 13 (1972): praktycznie nierozpuszczalna w wodzie, malo rozpuszczalna w rozpuszczalnikach weglo¬ wodorowych takich, jak: heksan, rozpuszczalna w alkoholach takich, jak meta¬ nol, w ketonach takich, jak aceton, w dwumetylo- formamidzie i w octanie etylu, latwo rozpuszczalna w rozpuszczalnikach chlo¬ rowanych takich, jak chlorek metylenu i chloro¬ form — temperatura topnienia (oznaczona za pomoca lawy Koflera): 220°C (z rozkladem) — zdolnosc skrecania: (c=1,050; metanol) [a]D = +51,2°± 1° Mus = +101°± 1,5° Mmi = +167°± 2° — widmo w ultrafiolecie: (oznaczenie dla roztwo¬ ru w etanolu o stezeniu 0,950 mg/ml) brak cha¬ rakterystycznej absorpcji do 210 nm 9297592975 3 Tablica 2 Badane organizmy bakteryjne Staphylococcus aureus, szczep 209p-ATCC 6538P Staphylococcus aureus, szczep Smitha Sarcina lutea — ATCC 9341 Streptococcus faecalis — ATCC,8043 Streptococcus pyogenes hemolyti- cus, szczep Dig 7 (Instytut Pa¬ steura) Diplococcus pneuimoniae, szczep TUI (Instytut Pasteura) Neisseria catarrhalis (A 152, In¬ stytut Pasteura) *" Bacillus subtilis — ATCC 6633 Bacillus cereus — ATCC 6630 Mycobacteriuni species — ATCC 607 Escherichia coli — ATCC 9637 Shdgella dysenteriae, Shiga L (In¬ stytut Pasteura) | Salmonella paratyphi A (szczep 1 Lacasse, Instytut Pasteura) i Salmonella schottimuelleri (para- htypi B), (szczep Fougenc, Insty¬ tut Pasteura) Proteus vulgaris Pseudomonas aeruginosa Minimalne stezenia bakterio¬ statyczne (w.ji/g/cm3) 0,8 2,5 1,9 0,5 0,8 0,2 50 0,8 0,5 150 _ 150 150 150 150 150 — widimo w podczerwieni: (oznaczenie dla table¬ tek zmieszanych z KBr). Widmo to jest przedsta¬ wione na rysunku, na którym na osi odcietych naniesiono z jednej strony dlugosc fali w mikro¬ nach (skala wyzsza), a z drugiej strony liczby fa¬ lowe wv crn^1 (skala! nizsza), zas na osi rzednych gestosci optyczne.W tablicy 1 zestawiono podstawowe pasma ab¬ sorpcyjne w podczerwieni dla omawianego pro¬ duktu, wyrazone w liczbach falowych (am_1), przy czym uzyte w tej tablicy skróty maja nastepujace znaczenie: b.s. — bardzo silne; sr. — srednie; b,sl. — bardzo slabe; s. — silne; sl. — slabe; prz. — przegiecie.Tablica 1 3430 s. 3180 s. 2970 b.s. 2935 s. 2925 prz. 2800 s. 2825 sr. 2600 prz. 2060 prz. 1045 bjsl. 1850 bjsl. 1760 bjsl. 1730 bil. 1630 prz. 1590 s. 1450 s. 11398 s. 1380 s. 1372 prz. 1362 prz. 1350 prz. 1335 prz. 1298 prz. 1292 sr. 1260 prz. 1238 s: 1220 prz. 1200 s. 1190 prz. 1185 prz. 1170 s. 1152 sl. 1140 prz. 1150 s. 1108 prz. 1092 b:s. 1090 rprz, i 1072 s. 1065 prz. 1040 s. 1018 s. 1000 prz. 985 s. 968 b.s. 940 s. 928 sr. 912 s. 890 sr. ' 816 s. 852 sr. 828 sr. 815 prz. 792 prz. 788 sr. 775 trz. 765 prz. 748 sr. 705 sr. 655 prz. 635 sr. 610 sl. 590 b.sl. 670 prz. 565 sl. 850 sl. 535 sl. 600 b.sl. 482 bjsl. 420 sr. 378 sl. 350 sr.— Toksycznosc: Dawka smiertelna soli sodowej antybiotyku 31.559" RP wyrazona w wartosci LD50 wynosi dla kurczecia 15Ó mg/kg p.o. przy podaniu jednorazo¬ wym;. * ' — Dzialanie przeciwkokcydiowe: Dzialanie przeciwkokcydiowe soli sodowej anty¬ biotyku 31.559 RP oznaczono dla kurczecia zaka¬ zonego zwlaszcza przez Eimeria tenella i Eimeria aceryulina.Dzialanie przeciwkokcydiowe soli sodowej an¬ tybiotyku 31.559 RP wprowadzonej do pokarmu objawia sie przy stezeniach nie toksycznych, za¬ wartych pomiedzy 0,005 i 0,04% wagowych pro¬ duktu, zawartego w pokarmie.— Dzialanie przeciwmalaryczne: Sól sodowa antybiotyku 31,559 RP wykazuje rów¬ niez dzialanie przeciwmalaryczne w stosunku do eksperymentalnych zakazen plasmodium u kurcze¬ cia i myszy.Organizmem, produkujacym antybiotyk 31.559 RP, jest szczep promieniowca, wyizolowany z próbki ziemi pobranej z Indii, któremu przypisano symbol DS 24.367. Próbka zostala zlozona w Nor¬ thern Regional Research Laboratory Departamen¬ tu Rolnego w Preorii, 111. (USA), gdzie zarejestro¬ wano ja pod symbolem NRRL 5787.Sól sodowa antybiotyku 31.559 RP moze byc równiez scharakteryzowana za pomoca chromato¬ grafii wystepujacej na cienkiej'warstwie silika- 40 zelu, z zastosowaniem dwóch ukladów mieszanin rozpuszczalników: — 1) octan etylu — cykloheksan — wóda — bu¬ tanol (50—50—25—5 objetosciowo); w ukladzie tym 4'5 sól sodowa 31.559 RP ma Rf=0,5. — 2) chlorek metylenu — metanol (94—5 obje¬ tosciowo); w ukladzie tym sól sodowa anty¬ biotyku .31.559 RP ma R*=0,7. . — dzialanie" bakteriostatyczne in vitro: 50 Antybiotyk 31.559 RP wykazuje dzialanie bakte- riostatyczrie, zwlaszcza w stosunku do niektórych bakterii, przyjmujacych zabarwienie Grama.Dzialanie bakteriostatyczne soli sodowej anty¬ biotyku 31.559 RP w stosunku do pewnej ilosci M bakterii oznaczono za pomoca jednej z metod roz¬ cienczania, stosowanych zazwyczaj, do tego' celu.Dla kazdego zarazku oznaczono najmniejsze ste¬ zenie substancji aktywnej, które w okreslonych warunkach calkowicie przerywa widoczny wzrost 6° w stosowanym bulionie odzywczym.Wyniki róznych oznaczen zestawiono w podanej nizej tablicy 2, w której minimalne stezenia bak¬ teriostatyczne wyrazono w mikrogramach substan¬ cji na cm3 badanego srodowiska. ra5 92975 6 Wyizolowanie tego szczepu prowadzono wedlug ogólnej metody, polegajacej na wytworzeniu za¬ wiesiny malej ilosci ziemi w sterylnej wodzie de¬ stylowanej, rozcienczeniu zawiesiny do róznych 5 stezen i na wylaniu malejv objetosci kazdej rozcien¬ czonej próbki na powierzchnie szalek Petriego, za¬ wierajacych agarowe srodowisko odzywcze. Po kil¬ kudniowej inkubacji w temperaturze 25°C, pozwa¬ lajacej na rozwiniecie sie mikroorganizów, pobie- 10 ra sie kolonie, które pragnie sie wyizolowac w celu prowadzenia dalszych badan i wszczepia sie je do agaru odzywczego skosnego, dla uzyskania obfitszych hodowli.Szczep promieniowca DS 24.367 wiaze sie z ga- ^ tunkiem Streptomyces hygroscopicus, którego pod¬ stawowa charakterystyke podali H.D. TRESNER i E.J. BACKUS (Applied Microboliogy, 4, 243— 250, 1956) i S.A. WAKSMAN (The actinomycetes, II, The Williams and Wilkims Company, Baltimo- 20 re, 1961, str. 230—23/1) i dlatego tez okreslono go nazwa Streptomyces hygroscopicus, szczep D 24.367.S. hygroscopicus DS 24.367 posiada w istocie trzy cechy, odpowiadajace trzem charakterysty¬ kom, którymi H.D. TRESNER i E.J. BACHUS, a 25 takze S.A. WAKSMAN okreslili gatunek S. Hygro¬ scopicus. Cechy te isa nastepujace: a) jego sporofory zakonczone sa zazwyczaj scis¬ lymi spiralami posiadajacym kilka zwojów; te spi¬ ralne sporofory sa zazwyczaj zgrupowane wzdluz 30 nitki, tworzac grono bardziej lub mniej wydluzo¬ ne, b) jego grzybnia powietrzna owocujaca, dopro¬ wadzona do dobrego okresu rozwojowego, wyka¬ zuje ciemnoszare zabarwienie odpowiadajace za- as barwieniu, które daje gatunek S. hygroscopicus, c) na niektórych srodowiskach hodowlanych, po¬ zwalajacych na dobry rozwój grzybni powietrznej pojawiaja sie podczas starzenia na powierzchni przetrwainików czarne, blyszczace strefy, z wy- 40 gladu wilgotne, charakterystyczne dla gatunku S. hygroscopicus.W przypadku S. hygroscopicus DS 24.367 powsta¬ wanie powietrznej grzybni zachodzi czesto w spo¬ sób malo obfity, a wsród pewnej liczby srodowisk hodowlanych ma miejsce nawet uszkodzenie. Jesli powietrzna grzybnia staje sie szara, wówczas two¬ rzenie sie przy starzeniu stref czarnych, o ile ma miejsce, odbywa sie zazwyczaj w sposób stosun¬ kowo dyskretny i ogranicza sie do malych punktów lub malych stref, rozmieszczonych w, zakamar¬ kach grzybni powietrznej w wiekszym stopniu, niz na jej calej powierzchni. Ma to zwlaszcza miej¬ sce i moze byc zaobserwowane na agarze z ekstra¬ ktem drozdzy Pridhama, na agarze z maka owsia¬ na i z ekstraktem pomidorowym Pridhama, oraz na agarze glukozowo-asparaginowyim.Przytoczony przez S.A. WAKSMANA w „The Actinomycetes" szczep S.! hygroscopicus jako szczep odniesienia, wykazuje, w niektórych srodowiskach hodowlanych gdzie Jego budowa morfologiczna jest okreslona, kilka niewielkich róznic w stosunku do szczepu DS 24.367, z których najbardziej istotne polegaja na tym, ze tworzy on grzybnie powietrz¬ na na agarze z azotanem lub z sacharoza i na aga¬ rze odzywczym, podczas gdy szczep DS 24.367 nie tworzy jej. Ponadto w srodowisku, zawierajacym sacharoze jako zródlo wegla, S. hygroscopicus nie redukuje azotanów, podczas gdy w tych samych warunkach szczep DS 24.367 silnie redukuje azo¬ tany do azotynów. Róznice te sa jednak zbyt male, aby wydzielic szczep DS 24,367 z gatunku S. hy¬ droscopicus, posiadajacego podstawowe cechy, slu¬ zace do zdefiniowania tego szczepu.S. hygroscopicus DS 24.367 tworzy lancuchy prze¬ trwalników, które zazwyczaj zakonczone sa scisly¬ mi spiralami o ograniczonej liczbie zwojów, rzadko wyzszej od 3 do 4, chociaz mozna niekiedy zaob¬ serwowac tworzenie sie spiral o znacznej liczbie zwojów, lub tez kilka lancuchów przetrwalników po prostu zwinietych ze soba w czesci koncowej bez tworzenia pelnego zwoju, lub wreszcie spirale mniej lub bardziej rozluznione i odwiniete. Aparat przetrwalnikowy posiada strukture grona spiral¬ nych sporoforów, zdolnych do rozgaleziania, choc wcisnietych wzdluz glównej nitki, która moze o- siagac znaczna dlugosc. Przetrwalniki sa owalne do cylindrycznych i posiadaja wymiary 0,8—l,0|x (0,6—08|i).Badania mikroskopowe wykazaly identyczna or¬ ganizacje aparatu przetrwalnikowego na agarze Bennetta oraz na agarze owies—pomidor Pridha¬ ma. Poprzez sposób tworzenia przetrwalników, S. hygroscopicus DS 24.367 miesci sie w Sekcji Spira klasyfikacji Pridhama.S. hygroscopicus DS 24.367 rozwija sie dobrze w temperaturze 25°C, slabiej w temperaturze 37°C i nie rozwija sie wcale w temperaturze 50°C. W hodowli prowadzonej w temperaturze 25°C posia¬ da on charakterystyke biochemiczna, przedstawio¬ na w tablicy 3.W tablicy 4 zestawiono cechy hodowli Strepto¬ myces hygroscopicus DS 24.367. Saj to cechy hodo^ wli, która osiagnela dojfore stadium j rozwojowe, tzn< okolo 2—3 tygodni w temperturze j 25qC, o ile nie zaznaczono inaczej. Cechy te zaobserwowano ha wa¬ garach odzywczych i < na bulionach, stosowanych! J zazwyczaj do oznaczania cech morfologicznych! szczepów promieniowca, przy czym hódowle/iwi srodowiskach agarowych prowadzono na agarach skosnych. '-'" 1r) j 40 45 50 55 60 Tablica 3 Wytwarzanie melaniny Wytwarzanie HjS Tyrozinaza ! Uplynnianie zelatyny Zastosowanie celulozy Wytwarzanie azotynów z azotanów Hydroliza amidonu Hodowla na mleku '\ — ujemne — ujemne — ujemna — dodatnie — dodatnie " ' " ¦ '" * — silnie dodatnie — dodatnia — peptymizacja bez koagulacji; niewielka zmiana pH Tjy ciagu *1 mifesiaca92975 7 8 Tablica 4 1 Srodowisko [ hodowlane 1 1 1 Agar ] Bennetta (Odn. A) AgarHic- keyaiTres- nera | (odn. B) Agar.Emersona j (Odn. C) Agar z eks¬ traktem z drozdzy 1 Agarzma- f ka owsiana i z ekstrak¬ tem z pomi¬ dorów Pridhama (Odn. E) 1 Agarglu- kozowo- -ipeptonowy (W-6) Agar od¬ zywczy (W-5) 1 Agartyro- 1 zyna-eks- I trakt 1 1 z drozdzy do utworze¬ nia melaniny ( (Odn. F) ) I Agarzjabl- 1 czanem wa¬ pnia Krain- skyego (Odn. G) 1 Stopien rozwoju 1 2 dobry 1 umiar¬ kowany dobry dosc dobry dosc dobry umiar¬ kowany umiar- 1 kowany bardzo slaby bardzo slaby Grzybnia roslinna 1 3 zólto-bra- zowawa do brazowo- -zóltej 1 brajzowo- -zólta 1 brazowo- -zólta jasna 1 brazowo- -zólta zólto- wa do brazo- wo-zoltej szaro-zóltawa do brazowo- -zóltej brazowo- 1 -zólta brazowo- 1 -zólta do brazowo-po- maranczowej bezbarwna 1 do szarawej Aparat powietrzny (zawierajacy calosc grzybni powietrz¬ nej i przetrwaini- ków) 1 4 bialawy do szarego.Bardzo slabo roz¬ winiety bialawy. W stanie sladowym. bialawy. W stanie sladowym. bialawy do szarego.Bardzo slabo roz¬ winiety. Przy sta¬ rzeniu pojawianie sie malych czarnych punktów, charak¬ terystycznych dla gatunku „S. hy- groscópicus" bialawy do szarego.Stosunkowo slabo rozwiniety. Przy starzeniu sie poja¬ wianie sie malych czarnych punktów charakterystycz¬ nych dla gatunku „S. hygroscopicus" bialawy. W stanie sladowym. , zerowy zerowy 1 zerowy 1 Pigment rozpuszczalny 1 5 brazowo- - 1 brazowo- -zólty slaby 1 zaden lub brazowawy bardzo slaby brazowo- -zóltawy. bardzo slaby brazowawy bardzo slaby zólto-brazo- wawy slaby do brajzowo- -zóltego sla¬ bego zerowy brazowo- 1 -szarawo- -fiolkowy zerowy 1 Obserwacje i wlas¬ nosci fizykochemiczne 1 6 - 1 aparat przetrwalni- kowy w gronach.Lancuchy przetrwal- ników zakonczone sci¬ slymi spiralami. Spo¬ ry owalne do cylin¬ drycznych o wymia¬ rach 0,8—l,0n,/0,6— —0,8n ' | - aparat przetrwalni- kowy w gronach.Lancuchy przetrwal- ników zakonczone sci¬ slymi spiralami. Prze- trwalniki owalne do cylindrycznych o wy¬ miarach 0,8—lfl\il0fi - powstawanie melani- 1 ny: ujemne (odczyty prowadzone wedlug za¬ lecen autora) rozpuszczalnosc jabl- 1 czanu wapnia: dodat¬ nia, ale slaba [9 92975 1 * Agar z o- walbumina (W-12) Agar glu¬ koza-aspa- ragina (W-2) Agarglice- -ryna-aspa- ragina (W-3) Agarami- don - sole mineralne Pridhama 1 (Odn. H) Agar araii- don-azotan [ (W-10) 1 Agar synte¬ tyczny Czap¬ ka na sa¬ charozie (W-l) Agar synte¬ tyczny Czap¬ ka z glu¬ koza 1 (Odn. I) . 1 Agar synte¬ tyczny Czap- ka-na gli¬ cerynie | (Odn. J) Bulion amidon-azo- tan 1 Bulion syn¬ tetyczny Czapka z sa¬ charoza (W-18) 1 Bulion syn¬ tetyczny Czapka z glu¬ koza (Odn. K) Bulion syn- 1 tetyczny Czapka na celulozie (Odn. L) 1 2 bardzo slaby umiar¬ kowany umiar¬ kowany • umiar¬ kowany slaby slaby slaby slaby slaby slaby slaby slaby 1 1 3 bezbarwna do bialo-sza- rawej zólta lekko zielonkawa szarawo-zól- tawa slaba do zóltej szaro-zóltawa do brazowo- -zóltej szaro-bra- zowawa slaby szaro-zólto- -brazowawa bardzo slaba zólto-brazo- wawa bardzo slaba zólto-brazo- wawa slaba bialawa hodowla klaczkowata bialawa hodowla klaczkowata bialawa 1 4 zerowy bialawy do szarego.Bardzo umiarkowa¬ nie rozwiniety. Przy starzeniu pojawia¬ nie sie malych czarnych punktów, charakterystycz¬ nych dla gatunku „S. hygroscopicus" bialawy do szara¬ wego. W stanie sladowym. bialawy do szara¬ wego. W stanie sladowym. zerowy zerowy zerowy zerowy zerowy zerowy szary. Bardzo 1 umiarkowanie rozwiniety na bi¬ bule, zanurzonej w bulionie 1 5 zerowy zólto-szara- wy slaby zerowy lub brazowawy slaby zerowy lub brazowawy bardzo slaby zerowy zólto-brazo- wawy slaby zólto-brazo- wawy slaby zólto-brazo- wawy slaby zerowy zerowy zerowy 1 zerowy 1 1 6 ~ hydroliza amidonu: dodatnia tworzenie azotynów: 1 silnie dodatnie tworzenie azotynów: 1 silnie dodatnie tworzenie azotynów: 1 silnie dodatnie tworzenie azotynów: 1 silnie dodatnie, zasto¬ sowanie celulozy: do¬ datnie92975 I 1 Bulion od¬ zywczy z azotanem (Odn. M) Hodowlana ziemniakach | (W-27) 1; Zelatyna , czysta 12°/o |(Odn. N) Mleko od¬ tluszczone AgarTres- < nera i Danga (Odn. P) 11 1 2 slaby bardzo umiar¬ kowany dobry dobry bardzo umiar¬ kowany 1 3 ' otoczka brazowo- -zóltawa szaro-brazo- wawa slaba bialawa do brazowawej jasnej otoczka bia- lo-zóltawa, przechodzacy wzólto-bra- zowawa pod koniec 1 mie¬ siaca hodowli brazowo- -zóltawa slaba 1 4 zerowy bialawy. W stanie sladowym. zerowy zerowy zerowy 12 zerowy szaro-brazo- wawa slaba zerowy zerowy ¦ 6 " 1 tworzenie azotynów: silnie dodatnie uplynnianie dodatnie, 1 dobre peptonizacja bez ko- 1 agulacji: brak dostrze¬ galnych zmian pH w ciagu 1 miesiaca, lub bardzo lekkie zakwa¬ szenie wytwarzanie H2S: u- jemne (zapisy prowa¬ dzono wedlug wska¬ zówek autora) | Niektóre z zastosowanych srodowisk hodowla¬ nych otrzymano wedlug przepisów, podanych w „The Actinomycetes" (S. A. Waksman, str. 193— 197, Chrondca Botanica Company, Waltham, Mass., USA, 1950; w. tym przypadku oznaczone sa one litera W po numerze, przypisanym im w „The Actinomycetes". Odnosniki lub sklady innych sro¬ dowisk hodowli sa nastepujace: — Odnosnik A — „Bennettfs Agar" — S. A. Wa- ksanan — The Actinomycetes, t. 2, sfer. 331, nr 30— The Williams and Wilkins Company, Baltimore, 1961 — Odnosnik B — „Hickey and Tresner's Agar" — T. G. Pridham i wspólprac-Antibiotics Annual, 1956—1957, str. 950.— Odnosnik C — formula W-23, z dodatkiem 2% agaru — Odnosnik D — „YeastExtract Agar" — T.G.Pridham i wspólprac, Antibiotics Annual, 1956— 1957, str. 950.— Odnosnik E —' „Tomato Paste Oatmeal A- gar" — T. G. Pridham i wspólprac., Antibiotics Annual, 1956-^1957, str. 950 — Odnosnik F — „Melanin formation medium" — S.A. Waksman — The Actinomycetes, t. 2, str. 333 — nr 42 — The Williams and Wilkins Compa¬ ny, Baltimore, 1961 — Odnosnik G — W. E. Grundy i wspólprac, Antibiotics and Chem., 2, 401, 1952 ; — Odnosnik H — „Inorganic Salts Starch A- gar" — T.D. Pridham i wspólprac, Antibiotics An¬ nual, 1956—.1957, str. 951 — Odnosnik I — odpowiada formule W-l, w której 30 g sacharozy .zastapiono 15 g glukozy — Odnosnik J,— odpowiada formule W-l, w. której 30, g_ sacharozy zastapiono 15 g gliceryny — Odnosnik K -— odpowiada formule W-18, w której 30 g sacharozy zastapiono 15 g glukozy 40 45 50 55 65 — Odnosnik L — odpowiada formule W-l8, w której cala sacharoze zastapiono malymi wstazka¬ mi bibuly filtracyjnej, zanurzonej czesciowo w cieczy * — Odnosnik M — „Manual of Methods for Pure Culture Study of Bacferia" — Society of Ameri¬ can Bacteriologists, Genewa, N.Y., II60-18 — Odnosnik N — „Plain Gelatin" — otrzymany wedlug wskazówek zawartych w „Manual of Me¬ thods for pure Cultury Study of Eacteria" t— So¬ ciety of American Bacteriologists,^ Genewa N.Y., IIso-18 v : — Odnosnik P — odtluszczone mleko w prosz¬ ku, handlowe, przetworzone : wedlug wskazówek producenta — Odnosnik Q — srodowisko zalecane do badan nad wytwarzaniem H£ przez: H.D. Tresner i F.Danga -r- Journal of Bacteriology, 76,-239—244, 1958.Zdolnosc Streptomyces hygroscopicus DS 24.367 do wykorzystywania róznych zródel wegla i azotu dla zapewnienia swego rozwoju oznaczono wedlug zasad metody Pridhama i Gottlieba (J. of Bact. 56, 107—114, 1948); stopien irozwoju obserwowano, po uplywie odpowiedniego czasu inkubacji w tem¬ peraturze 25°C, w srodowisku podstawowym wska¬ zanym przez autorów, zastepujac ibadz glukoze .róz¬ nymi zródlami wegla odpowiednio dobranymi, badz (NH4)2S04 róznymi zródlami azotu odpowiednio dobranymi. Wyniki zestawiono w tablicy 5.Proces wytwarzania antybiotyku 31.559 RP pole¬ ga zasadniczo na hodowli Streptomyces hygro- scopicus DS 24867 we wlasciwym srodowisku i runkach oraz na oddzieleniu produktu, utworzo¬ nego podczas hodowli. ~ Hodowla Streptomyces hygroscopicus DS 24.367 moze byc prowadzona kazdym sposobem hodowli tlenowej na powierzchni lub w glebi, przy czym ; ten ostatni sposób jest korzystniejazy ze wzgledu13 92975 14 Tablica 5 Próbowa- zródla wegla D-ksyloza L-arabi- noza L-ramno- za p-gluko- za p-galak- toza p-fruk- toza ¦ p-man- noza L-sorboza laktoza maltoza sacharoza trehaloza celobioza amidon glikogen _ gliceryna ery.tritol adonitol- . dulcytol D-mannit p-sorbit \ \ , inozyt salicyna iZastoso¬ wanie dodatnie, lecz powolne dodatnie dodatnie dodatnie , dodatnie lecz powolne dodatnie dodatnie lecz powolne ujemne dodatnie ujemne dodatnie dodatnie dodatnie * dodatnie dodatnie dodatnie ujemne dodatnie ujemne dodatnie ujemne ujemne ujemne ¦ Próbowane zródla azotu NaNO, NaN02 (NH4)2S04 (NH4)2HP04 mocznik.L-aspara- gina glukoza- mina glikokol sarkozyna DL-alani- na DL-walina kwas DL-aspa- raginowy kwas L-gluta- minowy DL-treo- nina DL-metio- nina tauryna DL-feny^ loalanina L-tyro- zyna DL-pro- lina L-hydro- ksypro- lina L-histy- dyna L-trypto- fan betaina Zastoso¬ wanie dodatnie dodatnie dodatnie dodatnie | dodatnie • • dodatnie dodatnie dodatnie dodatnie dodatnie dodatnie dodatnie . dodatnie | dodatnie 1 1 dodatnie ujemne dodatnie, lecz powolne "dodatnie, dodatnie dodatnie dodatnie, dodatnie. lecz powolne ujemne na wygode. Stosuje sie do tego celu rózne typy aparatów, znajdujacych sie obecnie w uzyciu w przemysle fermentacyjnym.Mozna zwlaszcza zastosowac nastepujaca kolej¬ nosc prowadzenia operacji: Streptomyces hygroscopicus DS 24,367 — magazyn hodowla na agarze ............ t . : . . . hodowla w fiolce z mieszaniem ¦ \ hodowla inoculum w fermentorze 4 hodowla produkujaca w fermentorze Srodowisko fermentacyjne powinno zawierac w zasadzie przyswajalne zródlo wegla i zródlo azo¬ tu, pierwiastków mineralnych, a uwlaszcza- chlor* ków i ewentualnie zródlo czynników wzrostowych, przy czym wszystkie te skladniki winny byc wpro¬ wadzone w postaci produktów scisle okreslonych lub zlozonych mieszanin, takich, jakie spotyka sie w produktach biologicznych róznego pochodzenia.Jako zródla wegla przyswajalnego mozna stoso¬ wac weglowodany, takie jak glukoza, dekstryny, skrobia lub inne substancje weglowodanowe, jak alkohole typu gliceryny jak niektóre kwasy organiczne: kwasy mlekowy, cytrynowy. Niektóre oleje zwierzece lub roslin¬ ne, takie jak tluszcz ze sloniny lub olej sojowy, moga korzystnie zastapic wymienione zródla we¬ glowodanowe lub byc do nich przylaczone* Dogodne zródla przyswajalnego azotu sa bardzo zróznicowane. Moga to byc bardzo proste substancje chemiczne, jak mineralne lub organiczne sole amo¬ nowe, mocznik, niektóre aminokwasy. Zródla te moga byc równiez wprowadzane z substancjami zlozonymi, zawierajacymi glównie azot w postaci bialkowej: z kazeina, albumina mleka, glutenem lub ich hydrolizatami, z majka sojowa, arachido¬ wa, rybna, z ekstraktami z miesa, drozdzy, z roz¬ puszczalnymi odpadami gorzelnianymi I z wycia¬ gami z kukurydzy.Niektóre z dodawanych skladników mineralnych moga miec wplyw buforujacy lub zobojetniajacy, jak" fosforany alkaliczne lub ziem alkalicznych, badz weglany wapnia lub magnezu. Inne 2 kolei, jak chlorki i siarczany metali alkalicznych i ziem alkalicznych, zaprowadzaja równowage' jonowa, potrzebna do rozwoju Streptomyces hygroscopicus DS 24.367 i dla wytworzenia 31.559 RK I wreszcie, niektóre dzialaja bardziej specyficznie, jak akty¬ watory reakcji metabolicznych Streptomyces hy¬ groscopicus DS 24.367, a sa to sole cynku, kobaltu", zelaza, miedzi i manganu. 'Czynnikami wzrostu sa produkty o budowie witaminowej takie,* jak rybo*- flawina, kwas foliowy, kwas pantotenowy. x pH srodowiska fermentacyjnego wyjsciowej ho¬ dowli winno byc zawarte pomiedzy 5,8 i 7,8, a" ko¬ rzystniej pomiedzy 6,2 i 7,4. Optymalna temperatu¬ ra fermentacji jest zawarta pomiedzy 25 i 30°C, lecz zadowalajaca produkcje otrzyma sie juz w za¬ kresie1 23—33°C. Przewietrzenie fermentacji moze wahac sie w dosc szerokim zakresie. Stwierdzono jednakze, ze szczególnie korzystne jest przewie¬ trzanie od 0,3 do 3 litrami powietrza na litr bulio¬ nu i na minute. Optymalna wydajnosc antybioty¬ ku 31.559 RP uzyskuje sie po 2—8 dnia hodowli, iprzy czyim Czas ten zalezy bardzo scisle od uzy¬ tego srodowiska.Jak wynika z powyzszego opisu, ogólne warun- 40 45 50^ 55 6092975 16 ki hodowli Sireptomyces hygroscopicus DS 24.367 w celu uzyskania antybiotyku 31,550 RP moga wa¬ hac sie w dosc szerokich granicach i moga byc przystosowane do poszczególnych potrzeb. Anty- 5 biotyk 31.559 RP moze byc wyizolowany z brzecz¬ ki fermentacyjnej w sposób nastepujacy.Brzeczke odsacza sie przy pH nizszym od 7, za¬ zwyczaj przy pH = 3—6, a korzystnie przy pH bliskim 5. Aktywnosc, zatrzymana w placku fil- 10 tracyjnym, jest z niego wyekstrahowywana, za po¬ moca odpowiedniego rozpuszczalnika, jakim jest nizszy alkohol, na przyklad metanol, lub rozpusz¬ czalnik chlorowany taki, jak chlorek metylenu.Po odpowiedniej operacji alkalizowania, antybio- is tyk 31.559 RP moze byc wydzielony z wymienio¬ nych wyzej roztworów w postaci soli sodowej przez krystalizacje po uprzednim zatezeniu pod zmniej¬ szonym cisnieniem, a nastepnie ewentualnym roz¬ cienczeniu za pomoca nie rozpuszczalnika lub zle- 20 go rozpuszczalnika i przechowywania w zimnej przestrzeni.Antybiotyk 31.559 RP lub jego sól sodowa moga byc oczyszczane z pomoca zwyklych sposobów, be¬ dacych w uzyciu, takich jak krystalizacja, chroma- 25 tografia na róznych adsorbentach lub rozdzielanie w przeciwpradzie.Nastepujacy przyklad, podany jako nieogranicza- jajcy, ilusitrutje sposób prowadzenia procesu we¬ dlug wynalazku. 30 Przyklad A) Fermentacja Do fermentóra o pojemnosci 170 1 wprowadza sie: peptonu 1200 g ekstraktu z drozdzy 600 g jednowodzianu glukozy 1200 g agaru 240 g wody wodociagowej do uzupelnieniado 110 1 Doprowadza sie pH do 7,30 przez dodanie 70 cm3 n wodorotlenku soctu. Sterylizuje sie srodowisko przez banbotaiz pary w temperaturze I0£2°C iw ciagu 40 minut. Po ochlodzeniu, wobec kondensacji iwody podczas sterylizacji, objetosc bulionu wynosi 120 1, a jego pH = 6,85. Wówczas wysiewa sie 200 cm3 hodowli do kolby stozkowej, zawierajacej Strepto- myces hygroscopicus DS 24.367. Hodowle rozwija sie W temperaturze 27°C w ciagu 25 godzin przy mieszaniu i przewietrzaniu sterylnym powietrzem.Hodowla taka nadaje sie do wysiewu hodowli pro¬ dukujacej.Hodowle produkujaca prowadzi sie w fermen- torze o pojemnosci 800 1, wypelnionym nastepuja¬ cymi substancjami: rozpuszczalne odpady gorzelniane fasola ziarnista gliceryna chlorek sodu roztwór szesciowednego chlorku kobaltu, o stezeniu 20 g/l woda wodociagowa, q.s.ad Doprowadza sie pH srodowiska do 7,50 przez do¬ danie 200 cm3 10-n wodorotlenku sodu, nastepnie sterylizuje sie bulion przez barbotaz pary w tern- 2 kg kg 6 kg 2 kg 0,4 1 365T\ 45 50 65 peraturze 122°C w ciagu 40 minut. Po ochlodzeniu, wobec kondensacji pary podczas sterylizacji, obje¬ tosc bulionu wynosi 390 1. Uzupelnia sie ja do 400 1 przez dodanie 10 1 wodnego sterylnego roz¬ tworu zawierajacego 4 kg jednowodzianu glukozy. pH srodowiska wynosi 6,65; wysiewa sie 40 1 hodowli inoculuim w opisanym wyzej fermentorze o pojemnosci 170 1. Hodowle rozwija sie w tem¬ peraturze 27°C w ciagu 113 godzin przy miesza¬ niu za pomoca turbiny obrotowej o 205 obr/min. i przy przewietrzaniu powietrzem sterylnym w ilos¬ ci 20 m3/godz. Po zakonczeniu operacji, pH ho¬ dowli wynosi 7,65, a jej objetosc 380 1.B/ Ekstrakcja 400 1 brzeczki, otrzymanej jak zaznaczono wyzej, doprowadza sie do pH=5 przez dodanie 2,8 1 6n roztworu kwasu solnego, a nastepnie mieszanie w ciagu pól godziny. Po dodaniu 20 kg sirodka po¬ mocniczego do filtracji, brzeczke filtruje sie na prasie filtracyjnej i przemywa na filtrze placek fil¬ tracyjny za pomoca 100 1 wody, której pH dopro¬ wadza sie do 5 przez dodanie 6n roztworu kwasu solnego. Przesacz i popluczyny usuwa sie.Placek filtracyjny wprowadza sie do 300 1 me¬ tanolu. Otrzymana mieszanine doprowadza sie do pH=7 przez dodanie 200 cm3 6n wodorotlenku so¬ du i mieszanie w ciagu 0,5 godz.Mieszanine filtruje sie na prasie filtracyjnej i placek filtracyjny przemywa sie na filtrze 80 1 metanolu. Filtrat i popluczyny laczy sie i zateza pod zmniejszonym cisnieniem (5—10 mm Hg), tak, aby otrzymac 30 1 koncentratu wodnego. Koncen¬ trat ten doprowadza sie do pH=3 przez dodanie 290 cm3 611 kwasu solnego, a nastepnie mieszanie w ciagu 10 minut w obecnosci 30 1 chlorku me¬ tylenu. Rozdziela sie dwie fazy. Faze wodna eks¬ trahuje sie jeszcze dwukrotnie za pomoca 30 1 chlorku metylenu kazdorazowo, postepujac jak dot przednio.Trzy ekstrakty chlorometytlenowe laczy sie i mie¬ sza z 9 1 wody, zakwaszajac do otrzymania pH=3 warstwy wodnej (20 cm3 6n kwasu solnego). Od¬ dziela sie faze organiczna i przemywa ja 18 1 wo¬ dy, dodajac wodorotlenek sodowy do uzyskania pH=9,5 w warstwie wodnej (20 cm3 6n wodoro¬ tlenku sodu).Faze chlorometylenowa zaiteza sie pod zmniej¬ szonym cisnieniem (5—10 mm Hg) do objetosci 1 1.C) Oczyszczanie Otrzymany poprzednio koncentrat chilorometyle- nowy wprowadza sie powoli do 10 1 heksanu w temperaturze pokojowej. Roztwór saczy sie, otrzy¬ mujac 63 g czesci nierozpuszczonej, nieaktywnej.Przesacz zateza sie pod zmniejszonym cisnieniem (5—10 mm Hg), do objetosci okolo 0,5 1. Roztwór ten miesza sie w ciagu 2 godzin w temperaturze 0°C, a nastepnie pozostawia w spokoju na 24 godziny w temperaturze +4°C.Otrzymane krysztaly oddziela sie przez odwi¬ rowanie roztworu, a nastepnie przemycie 250 cm3 heksanu w temperaturze +4°C i wysuszenie pod zmniejszonym cisnieniem.Wydziela sie w ten sposób 103 g soli sodowej 31.559 RP.92&75 17 18 D) Rekrystalizacja 57 g soli sodowej antybiotyku 31.559 RP, otrzy¬ manej poprzednio, rozpuszcza sie w 1,2 1 acetonu i miesza w ciagu 15 amin. Dodaje sie 2,5 g wegla 5 aktywnego, przemytego kwasem solnym, nastepnie miesza znowu w ciagu pól godziny i wreszcie od¬ dziela wegiel aktywny przez odsaczenie. Przesacz miesza sie powoli i dodaje do niego 750 cm3 wo¬ dy destylowanej. Sól sodowa antybiotyku 31.559 w RP krystalizuje powoli w temperaturze 0°C.Krysztaly oddziela sie przez filtracje, przemywa 159 om3 mieszaniny aceton — woda (50—50 obje¬ tosciowo) i suszy pod zmniejszonym cisnieniem w temperaturze 35°C. Otrzymuje sie 35 g soli sodo- is wej antybiotyku 31.559 RP.Przez zatezenie lugów macierzystych do polowy ich objetosci poczatkowej, a nastepnie ochlodze¬ nie do temperatury 4°C, otrzymuje sie dodatkowo 13,2 g soli sodowej antybiotyku 31.550RP. 20 Antybiotyk, wytwarzany sposobem wedlug wy¬ nalazku i oznaczony symbolem 31.559 RP, znajdu¬ je zastosowanie w kompozycjach przeciwkokcydi- awycih jako taki lub w postaci soli z metalami lub soli z zasadami azotowymi, a zwlaszcza do 25 przyrzadzania pokarmów mieszanych dla zwierzat lub stezonych mieszanek dla pokarmu zwierzece¬ go antybiotyk 31.559 RP lub jego sole z metalami lub zasadami azotowymi, ewentualnie w obecnosci innego srodka przeciwkokcydiowego. Kompozycje 30 te sa szczególnie uzyteczne przy zwalczaniu kok- cydiozy u ptactwa, a zwlaszcza u drobiu.Dawka potrzebna do uzyskania wlasciwego efektu moze zmieniac sie w dosc szerokich granicach, w zaleznosci od wartosci samego pokarmu. Ogólnie, 35 wystarczy by porcje pozywienia podane zwierze¬ tom zawieraly 0,005—0,04% wagowych antybioty¬ ku 31.559 RP lub jego soli z metalami lub z za¬ sadami azotowymi.Antybiotyk 31.559 RP lub jego sole z metalami 40 Lub z zasadami azotowymi moze byc rozprowadzo¬ ny w postaci jednolitej dyspersji w wyzej poda¬ nych dawkach w kompletnym pokarmie gotowym.Antybiotyk 31.559 RP moze byc rozprowadzany w pokarmie uzupelniajacym, w dawce 0,025 — 1%, 46 najczesciej razem z innymi dodatkami, takimi jak witaminy i sole mineralne. Ten uzupelniajacy pokarm moze byc dodany badz do porcji gotowej, zazwyczaj w ilosci 5—20% porcji, badz moze byc spozyty oddzielnie. 50 „Premiksy", stosowane do sporzadzenia kom¬ pletnych porcji lub pokarmów uzupelniajacych, zawieraja zazwyczaj 0,05—20% 31.559 RP lub jego soli z metalami lub z zasadami azotowymi i sa rozcienczane wsadem spozywczym. Stanowia one w wygodny pólprodukt, ulatwiajacy jednolite roz¬ prowadzenie produktu aktywnego w pozywieniu.Same ,,premiksy" otrzymuje sie zazwyczaj z kon¬ centratów, zawierajacych 99,9 do 20% antybiotyku 31.559 RP lub jego sdli z metalami lub z zasadami 6° azotowymi, z dodatkiem jadalnych substancji ska¬ zajacych takich, jak barwniki spozywcze, srodki zapachowe, srodki dyspergujace lub przeciwdzia¬ lajace aglomeracji oraz wsady spozywcze.Koncentraty i ,ypremiksy" sa zazwyczaj sprosz- w kowane. Pokarmy uzupelniajace i pokarmy zlozo¬ ne kompletne moga byc badz sproszkowane, badz moga miec postac granulek wytworzonych znanymi sposobami.Nastepujaca receptura ilustruje kompozycje, w sklad której jako czynny skladnik wchodzi sub¬ stancja, wytworzona sposobem wedlug wynalazku.Receptura A Sporzadza sie pokarm zasadniczy o nastepujacym skladzie: — maka z odpadów zbozowych 13,41% — maka jeczmienna 1341% — majka kukurydziana 13,41% — maka pszenna 31,32% — maka sojowa 8^2% — majka rybna 8,92% — maka paszowa odwodniona 4,56% — ekstrakty z drozdzy 2,33% — mleko w proszku suche 2,68% — chloreksodu 0,09% — chlorek wapnia 0,89% _ — skladniki mineralne 0,06% — kompleks witamionwy: witaminaA 4000 j/kg witaminaD, 1000 j/kg chlorek choliny . 11,5 mg/kg ryboflawina 2,24 mgyfcg Do pokarmu tego dodaje sie i rozprowadza w sposób jednolity 0,0i2% soli sodowej antybiotyku 31.559 RP.Inny przyklad zastosowania wynalazku stanowia kompozycje, stosowane jako czynniki wzrostu u zwierzat przezuwajacyicfh (bydlo, owce, kozy) i jako srodki do zwalczania czerwonki u swin.Kompozycje te skladaja sie z pokarmu miesza¬ nego dla przezuwaczy i swin oraz z mieszanek stezonych dla pozywienia zwierzecego, zavcieraja- cych antybiotyk 31.559 RP lub jego sole.Dawka potrzebna dó uzyskania wlasciwego efek¬ tu moze naturalnie zmieniac sie w szerokich gra¬ nicach w zaleznosci od gatunku zwierzat i od war¬ tosci odzywczej samego pokarmu. Szczególnie ko¬ rzystne jest podawanie do dyspozycji zwierzat do¬ bowej dawki antybiotyku 31.559 RP w ilosci 50— 250 mg/!glowe zwierzecia.Korzystne jest rozprowadzenie antybiotyku 31.559 RP w pokarmie uzupelniajacym, zawierajacym 0,01—^yl tego zwiazku, najczejsciej wraz z innymi dodatkami, takimi jak witaminy i sole mineralne.Takie pokarmy uzupelniajace moga byc badz do¬ dane do porcji badz spozyte oddzielnie. Zazwy¬ czaj stanowia one 1—10% porcji dobowej. Zawar¬ tosc antybiotyku 31-559 RP odpowiada wiec 0,0001— 0,01% wagowych porcji dobowej.„Premiksy", stosowane do wytwarzania kom¬ pletnych porcji lub pokarmów uzupelniajacych, zawieraja zazwyczaj 0,1—5% antybiotyku 31.559 RP, rozcienczonego wsadem spozywczym. Stanowia one wygodny pólprodukt, ulatwiajacy jednolite rozpro¬ wadzenie w pokarmie antybiotyku 31.559 RP. Sa¬ me „premiksy" otrzymuje sie zazwyczaj z kon¬ centratów, zawierajacych 99,9—5% antybiotyku 31.559 RP oraz skazajace srodki spozywcze takie, jak barwniki .spozywcze, aromaty, srodki dyspea92»75 19 3P gujace lub zapobiegajace aglomeracji i wsady spo¬ zywcze.Koncentraty i „premiksy" sa zazwyczaj sprosz¬ kowane. Pokarmy uzupelniajace moga wystepowac badz w postaci sproszkowanej, badz w postaci gra¬ nulek, otrzymanych znanymi metodami. W kom¬ pozycjach tych antybiotyk 3L559 BiP lub jego sole moga miec postac badz drobnych czastek wol¬ nych, badz pokrytych srodkiem zaprawiajacym.Nastepujaca receptura ilustruje zastosowanie an¬ tybiotyku 31.559 RP jako czynnika wzrostu.Receptura B Dwanascie mlodych byków rasy Holstein umiesz¬ cza sie w indywidualnych klatkach o sredniej po¬ wierzchni 48 m2, a nastepnie wazy. Badany po¬ karm podaje sie poczawszy od dnia 0, dnia roz¬ poczecia próby. Byki wazy sie nastepnie po 28 dniach i po 56 dniach i oznacza sie,ciezar pokarmu, spozytego w tym okresie.Dla kazdego badanego pokarmu oznacza sie w przedziale 0—28 dni i 28—56 dni srednie przy¬ rosty ciezaru i stopien konwersji spozywczej. Zwie¬ rzeta otrzymuja pozywienie dwa razy dziennie.Dawke dzienna dobiera sie tak, by byki przyjely maksimum pozywienia bez stracenia go.W doswiadczeniu mlode byki dzieli sie na trzy grupy. Kazde zwierze otrzymuje pokarm podsta¬ wowy, skladajacy sie z kukurydzy, siana i dodatku bialkowego.Kazde zwierze z grupy I otrzymuje pokarm podstawowy. Kazde zwierze z grupy II otrzymuje pokarm podstawowy, w kt6rym dodatek bialkowy *'¦ - Przyrost sredniego ciezaru w kg na zwierze Przyrost sredniego ciezaru w kg na dobe na zwierze Srednie spozycie w kg na dobe na zwierze Stopien konwersji II — Zmiany sredniego konwersj 0—28 dni grupa i 40,1 1,43 9,83 6,86 grupa II 40,3 1,44 9,7C 6,77 grupa III 46,4 1,65. 9,84 ,94 grup I 49,3 1,7 11,7 6,7< II — Zmiany sredniego ciezaru i stopien konwersji ;. „:.Przyrost sredniego ciezaru w kg na zwierze Przyrost sredniego ciezaru w kg na dobe na zwierze Srednie spozycie w kg na dobe na zwierze Stopien konwersji 0—28 dni grupa i 40,1 1,43 9,83 6,86 grupa II 40,3 1,44 9,7C 6,77 grupa III 46,4 1,65. 9,84 ,94 28—56 dni grupa I 49,3 1,76 11,78 6,70 grupa . II ' 55,9 1,99 12,5 6,04 grupa III 54 1,93 11,94 6^9 0—56 dni grupa I 89,4 1,59 ,81 6,77 grupa . II 96,2 1,72 ,9 6,34 grupa III,. 100,4 1,79 ,89 - 6,08 I tak, w ciagu pierwszych 28 dni zwierzeta, o- trzymujace 100 mg antybiotyku 31.559 RP na glo¬ we i na dobe, maja o &/* wyzszy przyrost cieza¬ ru i o l,3*/§ nizszy stopien konwersji od zwie¬ rzat — swiadków. Wartosci te dla.zwierzat, otrzy¬ mujacych 200 mg antybiotyku 31.559 RP na glo¬ we i na dobe, wynosza odpowiednio 15,3% i 13,4l0/o» Podczas drugiego okresu (28—56 dni) zwierzeta, otrzymujace 100 mg antybiotyku 31.559 RP na dobe, przewyzszaja, te, które otrzymuja dawke wynosi 100 mg antybiotyku 31.559 RP. Kazde zwie¬ rze z grupy III otrzymuje pokarm podstawowy, w którym dpdatek bialkowy wynosi 200 mg anty¬ biotyku 31.559 RP. ......Srednia dawka dzienna dla zwierzecia ma sklad nastepujacy: Kukurydza .Siano Dodatek bialkowy Antybiotyk 31.550 RP Grupa I Grupa II 8,86 kg 1,46 kg 0,49 kg 0 -8,96 kg 1,45 kg 0,5 kg 100 mg Grupa III 8,91 kg 1,47 kg 0,51 kg 200 mg Zastosowanym dodatkiem bialkowym jest „PRO BLEND 50" firmy Landmairck Inc., o skladzie: calkowity równowaznik bialkowy ^50°/» lipidy ¦!¦/§¦ wlókna roslinne ^9% witamina A 65.000 jedn./kg ' Otrzymane rezultaty zestawiono w ponizszych tablicach.I — Sredni ciezar w kg (na zwierze) grupa I grupa II grupa III W dniu 0 . 285,1 264,9, 286,6 po 28 dniach 325,2 325,2 333 po 56 | dniach 374,5 361,1 . 387 | dwukrotnie silniejsza. Przyrosty ciezaru sa wtecly przy dawce 100 mg/dobe o 13,#/# wyzsze i stopnie konwersji o 9,8°/© nizsze od analogicznych wartosci dla zwierzat — swiadków, a przy dawce 200 mg/ /dobe wynosza one odpowiednio 9,0ty« i 7,6°/t.W ciagu calej pr6by (56 dni), srednie przyrosty dobowe polepszyly sie o 7,8^/0 i o 12,2*/t, a stopnie konwersji o 6,4°/o i 10,2°/© w.stosunku do zwie¬ rzat — swiadków, przy dawkach antybiotyku 31. .559 RP odpowiednio 100 i 200 mg/dobe. t 5 dniegc lwersj grup I 49,3 1,7 11,7 6,7< 6092975 21 PL PL

Claims (1)

1. zastrzezenie patentowe Sposób wytwarzania nowego antybiotyku 31.559 RP oraz jego sold z metalami i z zaisadaimi azoto¬ wymi, znamienny tym, ze hoduje sie w warunkach tlenowych Streptomyces hygroscopicus DS 24.367 (NRRL 5787) w dogodnym srodowisku klasycznym i w warunkach typowych dla tego rodzaju ho¬ dowli, nastepnie oddziela sie 31.559 RP, utworzo¬ ny podczas hodowli, ewentualnie w postaci soli i oczyszcza go. 15 20 30 50 $ 4000 3000 2000 1800 1600 1400 1200 1000 600 600 400 200 Liczby falowe w crn: PL PL