PL91579B1 - - Google Patents

Description

Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarza¬ nia nowych soli sulfoglikopeptydów z a-amino- kwasami. Sole te maja cenne wlasciwosci far¬ makologiczne.Znane sa sole wieloestrów kwasu siarkowego z glikopeptydami, to jest tak zwanych sulfogli¬ kopeptydów z metalami alkalicznymi, metalami ziem alkalicznych lub metalami ciezkimi. Sole te maja wlasciwosci przeciwzapaleniowe, ale ze wzgledu na ich toksycznosc nalezy je przed u- syciem podawac specjalnej obróbce lub stoso¬ wac w specjalny sposób, aby zmniejszyc te to¬ ksycznosc. Odnosi sie to w szczególnosci do so¬ li z metalami ciezkimi i z metalami ziem alka¬ licznych, takimi jak bar, gdyz toksycznosc ich jest stosunkowo wysoka.Celem wynalazku jest opracowanie sposobu wy¬ twarzania soli sulfoglikopeptydów praktycznie bio¬ rac nietoksycznych, a równoczesnie wykazujacych dzialanie przeciwzapaleniowe silniejsze od odpo¬ wiedniego dzialania znanych soli.Cel ten zostal osiagniety przez opracowanie spo¬ sobu wedlug wynalazku wytwarzania soli sul¬ foglikopeptydów z naturalnymi lub syntetyczny¬ mi a-amino-kwasami.Sposób wedlug wynalazku polega na tym, ze sulfoglikopeptyd w postaci wolnego kwasu pod¬ daje sie reakcji w jednym lub z wieloma na¬ turalnymi lub syntetycznymi aminokwasami w ich wolnej postaci. Sulfoglikopeptyd w postaci wolnego kwasu wytwarza sie korzystnie prze¬ puszczajac roztwór wodny soli amoriowej lub so¬ li z metalem alkalicznego lub ziem alkalicznych sulfoglikopeptydu przez zloze silnie kationowej zywicy, na przyklad zywicy Amberlite I R 120 produkcji firmy Rohm and Haas. Otrzymany wodny roztwór jest silnie kwasny, mianowicie jego wartosc pH wynosi mniej niz 1. Do roztwo¬ ru tego dodaje sie bezposrednio wolny a-ami- nokwas, jezeli jest on dostepny w postaci wolnej, a jezeli wystepuje on w postaci pochodnej, na przyklad soli, to sól te uprzednio przeprowadza' sie w wolny a-aminokwas. Ilosc dodanego a-ami- nokwasu powinna byc korzystnie nieco wieksza, na przyklad o 5Vo, od ilosci wynikajacej z obli¬ czen stechiometrycznych, przy czym sole amono¬ we lub sole metali alkalicznych lub ziem alka¬ licznych sulfoglikopeptydów otrzymuje sie w zna¬ ny sposób obejmujacy hydrolize blony sluzowej zoladka lub dwunastnicy swin w wodzie, w tem¬ peraturze 50°C -100°C w ciagu 10—45 minut, przy pH 1—10, usuwanie na drodze kwasnej hydroli¬ zy produktów ubocznych pierwszej hydrolizy, roz¬ cienczanie otrzymanego produktu za pomoca nie- rozpuszczalnika w celu wytracenia glikopeptydu, zawieszenie wytraconego glikopeptydu w trzecio¬ rzedowej zasadzie heterocyklicznej o temperatu¬ rze wrzenie 100°C -200°C oraz kontaktowanie uzy- skalnej zawiesiny ze srodkiem sulfonujacym takim jak kwas siarkowy, oleum, kwas chlorosulfonowy 9157991579 lub addukt bezwodnika kwasu siarkowego ze zwiazkiem organicznym w temperaturze od —40°C do 0°C, a nastepnie w temperautrze 50°C—80°C z wytworzeniem sulfonowego produktu i poddawa¬ nie wytworzonego sulfonowanego produktu reak- 6 cji z wodorotlenkiem amonowym, wodorotlenkiem metalu alkalicznego lub ziem alkalicznych w celu przeprowadzenia sulfonowanego produktu w sól amonowa, sól metalu alkalicznego lub ziem alka¬ licznych, a nastepnie wyodrebnienie otrzymanej 10 soli przez wytracenie jej z mieszaniny reakcyj¬ nej acetonem lub metanolem.Wartosc 1)H otrzymanego roztworu wodnego produktu zalezy od rodzaju uzytego a-aminokwa- su i w przypadku a-aminokwasów obojetnych lub 15 kwasnych wynosi przewaznie mniej niz 3, zas w przypadku a-aminokwasów zasadowych zbliza sie do 7. W celu usuniecia z otrzymanego roztworu nadmiaru a-aminokwasu i ewentualnie obecnych soli mineralnych, przed wyodrebnieniem produk- 10 tu roztwór ten poddaje sie dializie.Wyodrebnianie i oczyszczanie otrzymanej soli sulfoglikopeptydu z a-aminokwasem mozna pro¬ wadzic dwiema drogami. Pierwsza z nich polega na tym, ze otrzymany roztwór rozciencza sie » selektywnym nierozpuszczalnikiem, to jest mie¬ szajacym sie z woda, lecz nie rozpuszczajacym soli sulfoglikopeptydu z a-aminokwasem, po czym sól te odsacza sie i suszy pod zmniejszonym ci¬ snieniem w temperaturze okolo 50°C. Drugi spo- so sób polega na tym, ze otrzymany roztwór wod¬ ny soli steza sie pod zmniejszonym cisnieniem i liofilizuje.W procesie prowadzonym sposobem wedlug wy¬ nalazku szczególnie korzystnie stosuje sie sulfo- 33 glikopeptydy otrzymane z organów lub tkanek zwiazanych sposobem podanym w opisie patento¬ wym Stanów Zjed. Am. nr 3 518 243.Sposób wedlug wynalazku zostal blizej zilus¬ trowany w ponizszych przykladach. 40 Przyklad I. Sól sulfoglikopeptydu z histy- dyna. g soli sodowej sulfoglikopeptydu rozpuszcza sie w 200 ml destylowanej wody i przepuszcza przez zloze kationowego wymieniacza zywiczne- 45 go Amberlite I R 120 (H+) majace postac slupa o srednicy 25 mm. Zywice przemywa sie nastepnie 150 ml destylowanej wody i popluczyny laczy z roztworem. Otrzymany roztwór traktuje sie roz¬ tworem histydyny, otrzymanym przez dzialanie 50 3,7 g wodorotlenku sodowego do roztworu 18 g chlorowodorku histydyny w 100 ml wody. Otrzy¬ many roztwór rozciencza sie 1500 ml etanolu, odwirowuje osad i przemywa go trzykrotnie roz¬ tworem etanolu w wodzie w stosunku objetoscio- 55 wym 3:1. Produkt w postaci proszku suszy sie pod zmniejszonym cisnieniem w temperaturze 50°C, otrzymujac 22 g soli sulfoglikopeptydu z histamina. Analiza produktu daje nastepujace wy¬ niki w procentach wagowych: histydyna — 35% sulfoglikopeptyd ' ' — 65% azot — 11,65% siarkasulfonowa — 10,16% sód - 1,45% u 60 heksozy — 9,9% heksozaminy — 12,8% grupy acetylowe — 3,4% kwas N-acetyloneuraminowy — 1,85% bialka proste —1 6,3% wilgoc — 4,5% Przyklad II. Sól sulfoglikopeptydu z lizyna.Proces prowadzi sie w sposób analogiczny do o- pisanego w przykladzie I, stosujac 16 g mono- chlorowodorku lizyny i 20 g sulfoglikopeptydu w postaci soli sodowej. Otrzymuje sie 21,7 g soli sulfoglikopeptydu z lizyna. Analiza produktu da¬ je nastepujace wyniki w procentach wagowych: lizyna — 34% sulfoglikopeptyd — 66% siarka sulfonowa — 10,24% sód —¦ 2,01% azot — 8,78% heksozy — 10,2% heksozaminy —¦ 13,5% grupy acetylowe —¦ 3,6% kwas N-acetyloneuraminowy — 1,92% bialkaproste — 6,4% wilgoc — 4,7% Przyklad III. -Sól sulfoglikopeptydu z gluta¬ mina. 2,5 g soli sodowej sulfoglikopeptydu roz¬ puszcza sie w 250 ml destylowanej wody i prze¬ puszcza przez slup kationowego wymieniacza zy¬ wicznego. Amberlite I R 120 (H-*-) o srednicy mm. Zywice przemywa sie nastepnie 150 ml destylowanej wody i popluczyny laczy z roztwo¬ rem kwasu sulfoglikopeptydowego. Do roztworu dodaje sie mieszajac 15,5 g 1-glutaminy, otrzy¬ mujac roztwór o wartosci pH 2,5. Roztwór ten dializuje sie w ciagu nocy w temperaturze 4°C, destylowana woda przez przepone z regenerowa¬ nej celulozy majacej grubosc 0,03 mm. Otrzyma¬ ny roztwór steza sie pod zmniejszonym cisnieniem w temperaturze 40°C do objetosci 200 ml i lio¬ filizuje. Otrzymuje sie 35 g soli sulfoglikopepty¬ du z glutamina, a analiza produktu daje naste¬ pujace wyniki w procentach wagowych: glutamina — 42% sulfoglikopeptyd — 58% azot — 10,04% siarka sulfonowa — 9,05% sód — 0,5% heksozy — 8,9% heksozaminy — 10,8% grupy acetylowe — 2,9% kwas N-acetyloneuraminowy — 2,9% bialka proste — 5,4% wilgoc — 4,4% Przyklad IV. Sól sulfoglikopeptydu z metiomi- na. 25 g soli sodowej sulfoglikopeptydu rozpuszcza sie w 250 ml destylowanej wody i przepuszcza przez zloze kationowej zywicy Amberlite I R 120 (H+) o srednicy 25 mm. Zywice plucze sie w 150 ml destylowanej wody i popluczyny laczy sie z roztworem. Do otrzymanego roztworu dodaje sie mieszajac 15 g d, 1-metioniny i dializuje roztwór w ciagu 12 godzin w temperaturze 4°C, destylowa¬ na woda przez przepony z regenerowanej celulozy o grubosci 0,03 mm, a nastepnie steza roztwór pod zmniejszonym cisnieniem w temperaturze 40°C9157$ . ¦ '." 5 do objetosci 200 ml i liofilizuje. Otrzymuje sie 36,4 g soli sulfoglikopeptydu z metionina, a ana¬ liza produktu daje nastepujace wyniki w procen¬ tach wagowych: metionina — 43,4§/t sulfoglikopeptyd — 56,5f/t azot .— 6f/t siarka sulfonowa — 9,95f/# sód — 0,5#/t heksozy — 8,7*/t heksozaminy — 10,5*/o grupy acetylowe — 2,8Vt kwas N-acetyloneuraminowy — l,5f/o bialkaproste — 5,3*/» wilgoc — 4,6f/« Przyklad V. Sól sulfoglikopeptydu z aspara- gina. Proces prowadzi sie w sposób analogiczny do opisanego w przykladzie III i IV. Analiza otrzy¬ manej soli sulfoglikopeptydu z asparagina daje na¬ stepujace wyniki w procentach wagowych: asparagina — 35°/§ sulfoglikopeptyd — 65% azot — 9,6D/« siarka sulfonowa — 10,l°/t sód — 0,4»/o heksozy — 9,4f/t heksozaminy — 13,00°/« grupy acetylowe — 3,4°/t kwas N-acetyloneuraminowy — l,8°/o bialkaproste — 6,2°/o wilgoc — 4,5°/o Postepujac w sposób analogiczny do opisanego w przykladach III i IV wytwarza sie sole sulfogli¬ kopeptydu z a-aminokwasami wymienionymi w ta¬ blicy. W tablicy tej podano równiez wyniki ana¬ lizy otrzymanych produktów. 6 /kg hamuja miejscowy obrzek wywolany mchem islandzkim, serotonina lub kaolinem, a stosowa¬ ne dozylnie w dawkach 1 mg/kg hamuja nad¬ mierne wydzielanie, spowodowane histamina, ga- stryna lub betanecholem, to jest karbinoilo-P-me- tylocholina. Przy doustnym podawaniu tych soli szczurom i myszom w dawkach pojedynczych 3000 mg/kg nie stwierdzono objawów toksycznosci. PL PL

Claims (3)

1. Zastrzezenia patentowe 1. Sposób wytwarzania nowych soli sulfogliko- peptydów z a-aminokwasami, w którym poddaje sie hydrolizie Mone sluzowa zoladka lub dwuna¬ stnicy swin w wodzie, w temperaturze 50°C— 100°C w ciagu 10—45 minut przy pH 1—10, na¬ stepnie za pomoca kwasnej hydrolizy usuwa sie produkty uboczne pierwszej hydrolizy, otrzymany produkt rozciencza za pomoca nierozpuszczalni- ka, w celu wytracenia glikopeptydu, który za¬ wiesza sie w trzeciorzedowej, zasadzie heterocy¬ klicznej o temperaturze wrzenia 100°C—200°C, u- zyskana zawiesine kontaktuje sie ze srodkiem sul¬ fonujacym takim jak kwas siarkowy, oleum, kwas chlorosulfonowy lub addukt bezwodnika kwasu siarkowego ze zwiazkiem organicznym w tempera¬ turze od —40°C do 0°C, a nastepnie w tempera¬ turze 50°C—80°C uzyskujac sulfonowany produkt, który poddaje sie reakcji z wodorotlenkiem ta¬ kim jak wodorotlenek metalu alkalicznego, wo¬ dorotlenek metalu ziem alkalicznych lub wodo¬ rotlenek amonu, przy czym sulfonowany produkt zostaje przeprowadzony w odpowiednia sól metalu alkalicznego, ziem alkalicznych lub amonowa, która traktuje sie acetonem lub alkoholem mety- Tablica Numer przy¬ kladu VI VII VIII IX X 1 xi Aminokwas Arglnina Cysteina Prolina Seryna Treonina Tryptofan Wyniki analizy w procentach wagowych 1 Amino¬ kwas 44,0 36,0 37,0 32,6 36,0 66,0 Azot 16,5 6,16 6,5 6,6 6,2 9,1 Siarka sullonowa 9,0 10,0 9,8 10,62 10,04 6,8 Sód 0,5 0,7 0,5 0.4 0,5 0,5 Heksozy 8,7 9,0 9,6 10,5 9,0 8,6 Hekso¬ zaminy 10,0 12,7 13,2 13,3 12,6 8,6 Grupy acety¬ lowe 2,8 3,3 3,5 3,6 3,4 2,1 Kwas N-ace¬ tyloneura¬ minowy 1*5 1,7 1,77 1,9 1,55 1,25 Bialko proste 5,3 6,0 5,9 6,4 6,0 4,2 | Sole sulfoglikopeptydów z naturalnymi lub syn¬ tetycznymi a-aminokwasami maja silne dzialanie przeciwzapalne i moga byc szczególnie skutecz¬ ne jako srodki kliniczne przy schorzeniach wrzo¬ dowych zoladka lub dwunastnicy. Badania prze¬ prowadzone na zwierzetach doswiadczalnych wy¬ kazaly, ze sole wytwarzane sposobem wedlug wy¬ nalazku podawane dootrzewnowo w dawkach 10—20 mg/kg lub doustnie w dawkach 50—100 mg/kg zmniejszaja wrzody spowodowane podwia- zaniami odzwiernika, stosowane doustnie in vivo w dawkach 50 mg/kg, a invitro lOOug/ml hamuja trawiace dzialanie raka zoladkowego, zas stoso¬ wane doustnie w dawkach dziennych okolo 100 mg/kg przyspieszaja zabliznianie sie przewleklych wrzodów wywolanych sztucznie. Poza tym bada¬ nia przeprowadzone na szczurach wykazaly, ze so¬ le podawane pozajelitowo w dawkach 3—5 mg/ 50 65 65 lowym wytracajac sól, znamienny tym, ze roz¬ twór wodny soli amonowej lub soli metalu alka¬ licznego lub ziem alkalicznych sulfoglikopeptydu przepuszcza sie przez zloze silnie kationowej zy¬ wicy jonowymiennej w celu przeprowadzenia so¬ li sulfoglikopeptydu w wolny kwas, a nastepnie otrzymany w postaci wolnego kwasu sulfogliko¬ peptyd poddaje sie reakcji z a-aminokwasem ta¬ kim jak glutamina, metionina, histydyna, lizyna, asparagina, cysteina, prolina, seryna, tronina lub tryptofan.

2. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze uzyskany produkt wydziela sie przez wytraca¬ nie selektywnym rozpuszczalnikiem i suszenie pod próznia.

3. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze produkt wydziela sie przez zatezenie pod zmniej¬ szonym cisnieniem i nastepnie liofilizuje. PL PL