PL60075B1 - - Google Patents

Description

Pierwszenstwo: 16. II. 1967 Niemiecka Republika Demokratyczna C\Z Y l L L NIA Opublikowano: 10. VI. 1970 **£) 60075 KI. 6 a, 22/04 MKP O iii ' ^^Uftftn^^fto '«i ~l| Wspóltwórcy wynalazku: dr Karl Zickrick, dr Johann Huber, Rainer Pippig Wlasciciel patentu: Forschungsinstitut fur die Garungsindustrie, Enzy- mologie und technische Mikrobiologie, Berlin (Nie¬ miecka Republika Demokratyczna) Sposób biotechnicznego wytwarzania preparatu enzymatycz¬ nego, majacego glównie zdolnosc wytracania bialka mleka lub dzialajacego przede wszystkim proteolitycznie Przedmiotem wynalazku jest biotechniczny spo¬ sób wytwarzania preparatu enzymatycznego, wy¬ tracajacego bialko , mleka albo wywierajacego przede wszystkim dzialanie proteolityczne. En¬ zym ten moze znatezc zastosowanie przy pro¬ dukcji serów zamiast podpuszczki, w przemy¬ sle pralniczym i przemysle skórzanym, Jak rów¬ niez i w medycynie.•Istnieja wskazówki w literaturze,' ze kazdy enzym majacy zdolnosc scinania bialka w mleku przejawia równoczesnie pewne dzialanie prote¬ olityczne. Nie stwierdzono jednak dotychczas, ze stosunek ctbu tych komponentów enzymu moze byc zmieniany przez zmiane warunków hodowla¬ nych podczas wytwarzania enzymu, a zwlasz¬ cza przez zmiane skladu pozywki hodowlanej.Wynalazek ma na celu opracowanie sposobu wytwarzania preparatu enzymatycznego, który glównie scina bialko mleka lub wywiera przede wszystkim dzialanie proteolityczne. Cecha spo¬ sobu wedlug wynalazku jest to, ze przez odpo¬ wiednie przechowywanie mikroorganizmów wy¬ twarzajacych enzym i hodowanie inoculum w ta¬ kim samym srodowisku, w jakim przechowuje sie mikroorganizmy, w nastepnym srodowisku produkcyjnym uzyskuje sie zgodnie z wyna¬ lazkiem enzym z wysoka wydajnoscia. Zmienia¬ jac sklad srodowiska produkcyjnego wytwarza sie preparat silniej scinajacy bialko mleka ii o slabszych wlasciwosciach proteolitycznych lub preparat o silnych wlasciwosciach proteoli¬ tycznych i slabej zdolnosci scinania bialka mle¬ ka.Zmieniajac wartosc pH srodowiska, w którym 5 stosuje sie preparat, mozna dalej zwiekszac lub zmniejszac proteolityczne dzialanie tego prepa¬ ratu. Mianowicie, preparat wytwarzany sposobem wedlug wynalazku wykazuje najsilniejsze dzia¬ lanie proteolityczne przy stosowaniu go w srodo- io wisku o wartosci pH 6,0—8,5, podczas gdy w sro¬ dowisku o wartosci pH 4,0—6,0 dzialanie pro¬ teolityczne preparatu jest slabsze niz zdolnosc scinania bialka mleka.Zgodnie z wynalazkiem jako srodowisko do przechowywania bakterii grupy Mesentericus eub- tilis, wytwarzajacych preparat enzymatyczny i jako srodowisko do przygotowywania szczepion¬ ki stosuje sie odtluszczone swieze mleko. Dzieki przechowywaniu w mleku mikroorganizmów wy¬ twarzajacych enzym pobudza sie bowiem dzia¬ lanie tych mikroorganizmów. W zaleznosci od zadanej skutecznosci enzymatycznej preparatu stosuje sie rózny sklad srodowiska produkcyj¬ nego. W celu wytwarzania preparatu, który glów¬ nie scina bialko mleka, stosuje sie srodowisko produkcyjne zawierajace oprócz odtluszczonego swiezego mleka srute owsiana lub jeczmienna, otreby pszenne i sole nieorganiczne. Ndtottiiast przy wytwanzaniu enzymu o dzialaniu glównie 30 proteolitycznym stosuje sie srodowisko produk- 15 20 25 600753 60075 4 cyjne zawierajace surowe ziernniaki, srute jecz¬ mienna, otreby pszenne, srute owsiana, wywar kukurydziany, krochmal ziemniaczany i sól mi¬ neralna.Proces fermentacji prowadzi sie jako hodowle wglebna z 'zastosowaniem napowietrzania, przy czym do tanków fermentacyjnych doprowadza sie w ciagu 1 minuty 0,25—0,50, a korzystnie 0,3 litra powietrza na % litr roztworu hodowlanego, - stosujac mieszadlo o 100—250, a korzystnie o 150 obrotach/minute i majace srednice, której sto¬ sunek do srednicy tanku wynosi 1:3. Roztwór zawierajacy enzym odwirowuje sie i zageszcza pod obnizojDyjca_jcj&nieniftm w stosunku 1:8 do 1 :14, 4 korzystnie lTASi preparat wedlug wyna¬ lazku stosuje sie w postaci takiego koncentratu lub te^ wytraca sie enzrm znanymi sposobami z roztworu* pofel^etltac^jiego i suszy. Przy sto¬ sowaniu , ^osoibul«4weil«gi wynalazku wydajnosc enzymu juz po uplywie 28 godzin fermentacji jest tak wysoka, ze proces ten nadaje sie na skale przemyslowa. Praktyka wykazala, ze otrzy¬ many sposobem wedlug wynalazku preparat en- zymowy do stracania bialka mleka, zastosowany do wytwarzania twarogu do celów spozywczych, przewyzsza znany preparat pepsynowy.Wynalazek jest blizej wyjasniony w nizej po- „ danych przykladach.Przyklad I. Przyklad ten omawia wytwa¬ rzanie na skale laboratoryjna preparatu enzy¬ matycznego o dzialaniu glównie scinajacym bial¬ ko mleka.Aktywny szczep bakterii grupy Mesentericus subtiiis posiewa sie na odtluszczone mleko i in- kubuje jako hodowle stojaca w temperaturze 30?C. Po 30 godzinach inkubacji przesiewa sie do kolib na trzesawce, zawierajacych równiez odtluszczone mleko. Gdy przy zaczynajacej sie peptonizacji mleka w hodowli trzesawkowej osiaga sie liczbe bakterii 108/ml, wówczas, stosu¬ je sie ten material jako inoculum dla srodowi¬ ska produkcyjnego o nastepujacym skladzie: 20% odtluszczonego mleka, l°/o sruty owsianej, 1% otrab pszennych, 1% sruty jeczmiennej, 0,01% KH2PO4, 0,05% (NH4)2S04, 0,01% MgS04, maja¬ cego wartosc pH po wyjalowieniu okolo 6,8.Ilosc materialu potrzebna do posiewu wynosi 1%. Jako naczynia do fermentacji stosuje sie kuliste kolby stojace o pojemnosci po 500 ml, zawierajace po 150 ml pozywki. Po posianiu in- kubuje sie hodowle w ciagu 24 godzin na trze¬ sawce przy okolo 220 wstrzasach na minute.Nastepnie pobiera sie próbki i oznacza aktyw¬ nosc scinania bialka odtluszczonego mleka w za¬ leznosci od czasu.Przyklad II. Preparat enzymatyczny, maja¬ cy przede wszystkim wlasciwosci proteolityczne.W celu otrzymania enzymu o przewazajacym dzialaniu proteolitycznym, postepuje sie w spo¬ sób podobny do opisanego w przykladzie I, ale stosuje sie pozywke zawierajaca 1% sruty jecz¬ miennej, 0,8% otrab pszennych, 0,7% sruty owsianej, 1,2% utartych surowych ziemniaków i 0,01% CaCl2.Przyklad III. Preparat enzymatyczny, ma¬ jacy przede wszystkim zdolnosc wytracania bial¬ ka mlecznego, wytwarzany na skale przemyslo¬ wa. Jako naczynia fermentacyjne stosujesie 500 5 litrowe tanki ze stali V2-A, w których przygo¬ towuje sie pozywke o podanym ponizej skladzie i stale mieszajac za pomoca mieszadla o 150 obrotach/minute wyjalawia w temperaturze 120°C w ciagu okolo 45 minut. Sklad pozywki: 10 l% sruty jeczmiennej, 1% sruty owsianej, 20% odtluszczonego slodkiego mleka, 0,5% krochmalu ziemniaczanego, 0,02% CaC03, 0,01% MgS04, przy czym wartosc pH po wyjalowieniu wynosi 6,5— 7,0, a przewaznie 6,8. 15 Po posiewie hodowla otrzymana w sposób opi¬ sany w przykladzie I, w tanku znajduje sie ogó¬ lem 250 litrów cieklej hodowli, która przewie¬ trza sie przy ciaglym mieszaniu za pomoca mie¬ szadla o 120 obrotach/minute. Ilosc powietrza 20 mierzona przy odlocie wynosi 90 litrów/minute.Powstawaniu piany podczas procesu fermentacji zapobiega sie za pomoca olejów lub tluszczów roslinnych albo zwierzecych lob odpiemiaiczy si¬ likonowych. Najwieksza zawartosc enzymu osiaga 25 sie po 18—28, a przewaznie po 24 godzinach.Wówczas przesacza sie hodowle i przesacz za¬ geszcza dziesieciokrotnie lub bardziej, otrzymu¬ jac odpowiedni dla przemyslu mleczarskiego kon¬ centrat o aktywnosci 1:10000 do 1:20000, a prze- 30 waznie 1:12000, albo produkt stracony o mocy podpuszczkowej 1:100000.Przyklad IV. Preparat enzymatyczny, ma¬ jacy przede wszystkim dzialanie proteolityczne, wytwarzany na skale przemyslowa. Powtarza sie 35 postepowanie opisane w przykladzie III, lecz sto¬ suje sie pozywke zawierajaca 1% sruty jeczmien¬ nej, l°/o sruty owsianej, 1% otrab pszennych, 1% utartych surowych ziemniaków, 0,05 namoku ku¬ kurydzianego o zawartosci 50% suchej substancji, 40 0,2% glukozy i 0,01% CaCl2. Jako inoculum sto¬ suje sie 20-godzinna hodowle trzesawkowa na od¬ tluszczonym mleku slodkim. Hodowla do posiewu posiada przed posianiem brazowe zabarwienie, a liczba bakterii wynosi 3 X 108/ml. Korzystnie jest 45 utrzymywac wartosc pH srodowiska 6,5. Ilosc po¬ wietrza doprowadzanego w ciagu 1 minuty do tanku o pojemnosci 500 litrów, wykonanego ze stali V2-A, przy 300 obrotach/minute mieszadla wynosi 0,3 litra na 1 litr roztworu hodowlanego. 50 Po osiagnieciu maksymalnej zawartosci enzymu przerywa sie fermentacje i oddziela ciecz hodow¬ lana od bakterii, substancji zawieszonych i czesci stalych. Ciecz te zageszcza sie w lagodnych wa¬ runkach, wytraca acetonem w temperaturze 4°C, odsacza i suszy. Wytracony produkt moze znalezc nastepnie zastosowanie w przemysle pralniczym i paszowym. Do zastosowan medycznych prepara¬ tów enzymów proteolitycznych konieczne sa dal¬ sze stopnie oczyszczania* PL

Claims (2)

Zastrzezenia patentowe

1. Sposób biotechnicznego wytwarzania preparatu enzymatycznego, majacego glównie zdolnosc 65 wytracania bialka mleka lub dzialajacego prze-60075 de wszystkim proteolitycznie, na drodze hodowli bakterii z grupy Mesentericus subtilis w sro¬ dowisku odzywczym, znamienny tym, ze jako srodowisko do przechowywania bakterii wy¬ twarzajacych enzym i jako srodowisko do przy- 5 gotowywania inoculum stosuje sie odtluszczone swieze mleko, a enzym wytwarza sie w srodo¬ wisku produkcyjnym na drodze wglebnej ho¬ dowli oapowietrtanej, przy czym doprowadza sie do tanku w ciagu 1 minuty korzystnie 30 10 litrów powietrza na 100 litrów roztworu ho¬ dowlanego i miesza za pomoca mieszadla o ko¬ rzystnie 150 obrotach/minute i majacego sre¬ dnice, której stosunek do srednicy tanku wy¬ nosi 1:3, po czym roztwór hodowlany zawie- 15 rajacy enzym odwirowuje sie i zateza pod zmniejszonym cisnieniem w stosunku 1 :14, a korzystnie 1 :10 lub wytraca enzym z roz¬ tworu hodowlanego znana metoda i suszy. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze jako srodowisko produkcyjne do wytwarzania preparatu majacego glównie wlasciwosci sci¬ nania bialka mleka stosuje sie mieszanine za¬ wierajaca 20% odtluszczonego swiezego mleka, 1% otrab pszennych, 1% sruty jeczmiennej, 1% sruty owsianej, 0,01% KH2P04, 0,05% (NH4)2S04 i 0,01% MgS04. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze jako irodiowisko produkcyjne do wytwarzania preparatu majacego glównie wlasciwosci pro¬ teolityczne stosuje sie mieszanine zawierajaca 1,5% utartych surowych ziemnieków, 1% sru¬ ty jeczmiennej, 1% otrab pszennych, 1% sruty owsianej, 0,03% namoku kukurydzianego, 0,05% krochmalu ziemniaczanego i 0,02% CaCl

2. PL