PL50796B1 - - Google Patents

Description

50796 KI. 421, 5/10 MKP G 01 n 33/C?// Opublikowano: 25.11.1966 U Polskiej Izmwim; q u.- Wspóltwórcy wynalazku: mgr inz. Bronislaw Habaj, mgr inz. Kazimierz Hoppe Wlasciciel patentu: Instytut Przemyslu Mleczarskiego (Zaklad Czystych Kultur Mleczarskich), Olsztyn (Polska) Sposób przygotowania wskazników do szybkiego oznaczania miana coli w cieczach, zwlaszcza w mleku Przedmiotem wynalazku jest sposób przygotowa¬ nia wskazników do szybkiego oznaczania stopnia zakazenia bakteriami z grupy coli-aerogenes, zwa¬ nego mianem coli, cieklych produktów, zwlaszcza mleka. Wskazniki te zostaly przez twórców nazwa- 5 ne coliwskazami.Dotychczasowy sposób oznaczania bakterii z gru¬ py coli-aerogenes w przemysle mleczarskim oparty jest na metodzie Kessler-Swenartona. W metodzie tej uzywa sie plynnych pozywek, w sklad których 10 wchodzi pepton tryptoza, laktoza, zólc wolowa i gencjana w okreslonych przez receptury propor¬ cjach. Obecnosc bakterii objawia sie przy hodowli na tej pozywce powstawaniem pecherzyków gazu, które gromadza sie w malej probówce zatopionej 15 do góry dnem w srodowisku z pozywka. Wyniki badan otrzymuje sie po 48 godzinach hodowli pro¬ wadzonej w warunkach laboratoryjnych w tempe¬ raturze 37—38 °C.W wyniku dlugotrwalych badan opracowana pod- 20 loze pozwalajace na otrzymanie wskazników do szybkiego, latwego i prostego w wykonaniu ozna¬ czania miana bakterii z grupy coli aerogenes zwa¬ nego mianem coli. Wskazniki nazwane przez twór¬ ców coliwskazami wykonuje sie z wyjalowionej 25 promieniami ultrafioletowymi bibuly chromato¬ graficznej, korzystnie nr 3 firmy Whatman przez zanurzenie do pozywki o temperaturze 60—70 °C.Pozywka do nasycania bibuly zawiera na 1 litr wody destylowanej 30 g bulionu suchego, 6 g lak- 30 tozy rafinady, 2 g agar-agaru o krzepliwosci w tem¬ peraturze 35 °C oczyszczonego uprzednio w tempe¬ raturze 70—80 °C i przefiltrowanego pod cisnieniem 0,3—0,4 atn oraz wskaznik chlorek 2,3,5-trójfenylo- tetrazoliowy zwany TTC, dodawany przed nasyce¬ niem bibuly w stosunku takim, by stezenie jego w gotowej pozywce wynosilo 1 do 450. Wartosc pH takiej pozywki zawarta jest w granicach 6,6 do 6,7.Nasycona bibule z odpowiednia perforacja pod¬ daje sie suszeniu w suszarce o wymuszonym obie¬ gu powietrza w temperaturze ponizej 40 °C. Wysu¬ szona bibule tnie sie na paski przedzielone perfo¬ racja na dwie nierówne czesci, z których czesc wieksza korzystnie powinna miec powierzchnie 15 cm2 co warunkuje wchloniecie 0,5 ± 0,04 ml ply¬ nu. Poszczególne paseczki wklada sie do worecz¬ ków z folii polietylenowej o wymiarach 5 X 15 cm i grubosci scianki 0,1 do 0,09 mm a nastepnie laczy brzegi zgrzewarka do polietylenu.Uzycie coliwskazów polega na wyciagnieciu pa- seczka z torebki po jej otworzeniu od strony gdzie znajduje sie krótsza czesc paska przedzielonego perforacja, przez uchwycenie go za te czesc palca¬ mi, zanurzenie w badanym plynie, otrzasniecie zwisajacych kropel lub przy cieczach o duzej lep¬ kosci usuniecie nadmiaru plynu specjalnymi uprze¬ dnio wyzarzonymi widelkami i wklada z powrotem do woreczka, przyprasowuje dlonia do jego boków, zamyka nad plomieniem i wstawia do cieplarki o temperaturze 37 °C na 8 godzin. 5079650796 Na rysunku pokazano wyglad coliwskazów po wyjeciu z suszarki. Ilosc wyraznie widocznych punkcików w rzeczywistosci czerwonych pozwala okreslic miano. Brak punktów — coli nieobecne w 1 ml; 1 do 16 punktów — miano coli 0,1; 17 do 105 punktów — miano coli 0,01; 106 do 306 punk¬ tów — miano coli 0,001; powyzej 306 punktów — miano coli ponizej 0,001.Prostota metody pozwala na wykonanie analizy i interpretacje wyników przez pracowników nie¬ wykwalifikowanych w zakresie mikrobiologicznym.Zastosowanie coliwskazów pozwala na szerokie stosowanie kontroli bakteriologicznej w przemysle mleczarskim. Kontrola jest tu 6-krotnie szybsza w stosunku do stosowanej metody Kessler-Swe- nartona, a do wykonania analizy za pomoca coliw¬ skazów nie potrzeba oprócz cieplarki innych urza¬ dzen czy odczynników. Przyklad. Dla przygotowa¬ nia pozywki potrzebnej do nasycania uzyto: 1000 ml wody destylowanej, sterylizowanej, 30 g bulionu suchego, 6 g laktozy rafinady, 2 g agar-agaru, 2,3 g wskaznika TTC.Z przygotowanych 1000 ml wody odmierzono 100 ml, w których rozpuszczono przez dodanie i wytrzasanie 15 2,3 g wskaznika TTC. W pozostalej ilosci wody, to jest 900 ml rozpuszczono suchy bulion, laktoze i agar-agar a nastepnie wyjalowiono przez auto- klawowanie przy 1 atn przez 10 minut. Roztwór wskaznika zmieszano z pozostalym podlozem przed przystapieniem do nasycania odpowiednich arku¬ szy bibuly z zachowaniem warunków aseptycznych. PL

Claims (1)

1. Zastrzezenia patentowe Sposób przygotowania wskazników do szybkiego oznaczania miana coli w cieczach, zwlaszcza w mle¬ ku, znamienny tym, ze wyjalowiona bibule, najko¬ rzystniej firmy Whatman nasyca sie w warunkach aseptycznych w temperaturze 60—70 °C podlozem plynnym zawierajacym w swoim skladzie suchy bulion, laktoze rafinade, agar-agar o krzepliwosci w temperaturze 35 °C oczyszczony uprzednio przez rozpuszczenie go w temperaturze 70—80 °C i prze- filtrowany pod cisnieniem 0,3 do 0,4 atn oraz chlo¬ rek 2, 3, 5 — trójfenylotetrazoliowy jako wskaznik, po czym nasycona bibule suszy sie w suszarce o wymuszonym obiegu powietrza w temperaturze 40 °C i tnie na paski przedzielone perforacja na dwie nierówne czesci, a nastepnie zamyka sie w woreczkach z folii polietylenowej. i i i i 1*1 I J !••* ** '•! I I I I • I I * • J r .*:"' *'* • ¦•'••• F& I I I I 1*1 l'**l r\ •*••* I i i i i i i i%*i r* *'. *-1 I I I I I* I I • • • I•'.¦*"; '•! I I I I I *I 1*1 I •. •! I I I * I I I I • • 1 rl'» *..l i i i i i i i • i i •••*..i Zaklady Kartograficzne, Wroclaw — Zam. 756. naklad 370 egz. PL