PL50665B1 - - Google Patents

Description

Opublikowano: 30.1.1966 50665 KI 12p, 4/01 MKP C 07 d 69/2^ UKD I B L ? O f "S K A !' Wspóltwórcy wynalazku: Robert Bennet Morin, Biliy Grinnel Jackson, Edwin Harold Flynn, Roger William Roeske Wlasciciel patentu: Eli Lilly and Company Indianapolis, Indiana (Stany Zjednoczone Ameryki) Sposób wytwarzania kwasu 7-aminocefalosporanowego i Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarza¬ nia kwasu 7-aminocefalosporanowago z antybio¬ tyków cefalosporyny C.Cefalosporyny sa substancjami antybiotycznymi wytwarzanymi z gatunku Cephalosporium sp. 5 ATCC 11,550. Cecha charakterystyczna struktury tych substancji jest podstawiony uklad dwupier- scieniowy skladajacy sie z pierscienia 5,6-dwuhy- dro-l,3-tiazyny skondensowanego w. pozycji 2,3 z pierscieniem beta-lakitamowym. Znana substan- i0 cja antybiotyczna z tej grupy zwiazków jest cefa- losporyna C .Cefalosporyna C jest kwasem 7-(5'-aminoadypi- loamino)-cefalosporanowym o wzorze 1. Sposób wytwarzania tego zwiazku na drodze fermentacji 15 pozywki z odpowiednim szczepem Cephalosporium i wyosobnienia cefalosporyny C z produktu fer¬ mentacji jest opisany w brytyjskim opisie paten¬ towym nr SIO 196.Cefalosporyna C jest antybiotykiem o nizszej 20 aktywnosci nig penicylina. Jest ona jednak aktyw¬ na zarówno wobec Gram-dodatnich jak i Gram- ujemnych ustrojów, jest niewrazliwa na penicyli- nazy i jest bardziej stabilna w srodowisku kwas¬ nym od penicyliny. Z tych wzgledów zwiazek ten 25 jest bardzo uzyteczny do celów terapeutycznych pomimo niskiej aktywnosci antybiotycznej.Nie stwierdzono jaka cecha strukturalna cefalo¬ sporyny C ma zasadnicze znaczenie dla jej aktyw¬ nosci antybiotycznej, prawdopodobnie gra tu role 30 7-aminopochodna dwuipierscieniowej czasteczki.W celu podniesienia aktywnosci antybiotycznej zainteresowano sie wytworzeniem innych 7-amino- pochodnych dwupierscieniowego ukladu cefalospo¬ ryny C, które poddawano wstepnym badaniom eliminacyjnym na ich wlasciwosci antybiotyczne.Pochodne takie wytwarza sie latwo droga acylo- wania grupy 7-aminowej kwasu 7-aminocefalo- sporanowego i jego odmian. Dotychczas nie znano sposobu otrzymywania wiekszej ilosci kwasu 7- -aminocefalosporanowego stanowiacego surowiec wyjsciowy dla jego pochodnych. Zagadnienie to rozwiazuje sposób wedlug wynalazku.Sposób wedlug wynalazku polega na dzialaniu na zwiazek o dwupierscieniowym ukladzie cefalo¬ sporyny C z grupa 7-aminowa zwiazana z kwasem d-aminoadypinowym jako lancuchem bocznym, substancja reagujaca z grupa 5'aminowa lancucha bocznego, przy czym lancuch boczny zostaje prze¬ ksztalcony w zwiazek posredni o niedoborze elek¬ tronów przy atomie wegla w pozycji 5', co powo¬ duje jego samorzutna cyklizacje, po czym tak utworzona grupe cykliczna poddaje sie hydroli- tycznemu odszczepieniu, otrzymujac odpowiedni pierscien kwasu 7-aminocefalosporanowego.Istnieje kilka odmian sposobu wedlug wynalaz¬ ku. Wedlug jednej odmiany sposobu wedlug wy¬ nalazku cefalosporyne C zawiesza sie w obojetnym heteropolarnym rozpuszczalniku organicznym, (czyli w takim rozpuszczalniku cefalosporyny C, 506653 50665 4 który w warunkach procesu nie reaguje w sposób szkodliwy z cefalosporyna C ani z innymi substan¬ cjami bioracymi udzial w procesie, pólproduktami oraz produktami) i zawiesine te traktuje sie chlor¬ kiem nitrozylu lub innym srodkiem nitrozujacym 5 w ilosci wystarczajacej do calkowitego przereago- wania grupy 5'-aminowej w lancuchu bocznym.Po zakonczeniu reakcji nieprzereagowany czyn¬ nik nitrozujacy rozklada sie lub usuwa. Wartosc pH mieszaniny reakcyjnej ustala sie na okolo 2,5— 10 —5 przy pomocy rozcienczonego wodnego lugu w celu hydrolitycznego odszczepienia lancucha bocznego i utworzenia wewnetrznej soli kwasu 7-aminocefalosporanowego, która krystalizuje.Krystaliczny produkt wyodrebnia sie z mieszaniny, 15 przemywa i suszy.Wedlug innej odmiany sposobu wedlug wyna¬ lazku cefalosporyne C rozpuszcza sie w odpowied¬ nim rozpuszczalniku i roztwór ten poddaje sie reakcji z N-bromosiukcynimidem lub inna sub- 20 stancja dajaca dodatni chlorowiec, w ilosci wystar¬ czajacej do calkowitego przereagowania grupy 5'-aminowej. Produkt tej reakcji cyklizuje w pozy¬ cji 5* poprzez tlen grupy amidowej bocznego lan¬ cucha tworzac iminolakton. Cykliczny lakton lat¬ wo odszczepia sie hydrolitycznie od azotu grupy iminowej, z którym lakton ten jest zwiazany, two¬ rzac zadany kwas 7-aminocefalosporanowy.Wedlug innej odmiany sposobu wedlug wyna¬ lazku, rozpuszcza sie cefalosporyne C w odpowied- 3Q nim rozpuszczalniku i roztwór ten poddaje sie reakcji z chlorkiem benzenodwuazoniowym lub z inna sola arylodwuazoniowa w ilosci wystarcza¬ jacej do przereagowania grupy S^aminow^ej. W wy¬ niku tej reakcji grupa 5'-aminowa przeksztalca sie w liniowa trójazynopochodna, która latwo od¬ szczepia sie w temperaturze 0°—100°C, pozostawia¬ jac niedobór elektronów w pozycji 5'. Powstaly zmodyfikowany lancuch boczny cyklizuje sie na iminolakton,i po hydrolitycznym odszczepieniu te¬ go laktonu od azotu grupy 7-aminowej, z którym jest zwiazany, otrzymuje sie zadany kwas 7-amino- eefalosporanowy jako produkt koncowy.Odmiana sposobu wedlug wynalazku z zastoso¬ waniem chlorku nitrozylu jako srodka nitrozuja- cego polega na tym, ze cefalosporyne C rozpuszcza sie w wodnym 98%-owym kwasie mrówkowym o stezeniu okolo 30%-owego wagowo. Roztwór ten miesza sie i ochladza w kapieli lodowej do tempe¬ ratury okolo 10°C, po czym dodaje sie chlorek ni- 50 trozylu w stosunku molowym do cefalosporyny C okolo 2:1, przy czym chlorek ten dodaje sie por¬ cjami w postaci 10%-owego roztworu w wodnym roztworze 98%-owego kwasu mrówkowego, w cia¬ gu okolo 1 minuty, w temperaturze ponizej 50°C. 55 Mieszanie prowadzi sie jeszcze okolo 5 minut po zakonczeniu dodawania chlorku nitrozylu.Nastepnie mieszanine reakcyjna odparowuje sie pod zmniejszonym cisnieniem w temperaturze po¬ kojowej w celu. usuniecia prawie calej zawartosci 60 kwasu • mrówkowego. Pozostala substancje miesza sie z okolo 5 objetosciami wody i ustala sie pH uzyskanego roztworu na okolo 3,5—4 przy pomocy rozcienczonego wodnego roztworu wodorotlenku sodowego, dzieki czemu straca sie kwas 7-amino- 65 cefalosporanowy w postaci jego jonu amfoterycz- nego, w której to postaci jest on najslabiej roz¬ puszczalny w wodzie. Uzyskany produkt odsacza sie, wymywa wodnym roztworem acetonu i suszy.Sposób wedlug wynalazku mozna stosowac do traktowania substancji o dwucyklicznym pierscie¬ niu cefalosporyny C wlacznie z sama cefalospory¬ na C, cefalosporyna CA, cefalosporyna Cc i dez- acetylocefalosporyna C.Stosowana jako substancje wyjsciowa cefalospo¬ ryne C uzywa isie w postaci surowej oczyszczonej i (albo) w postaci wolnego kwasu lub jego soli, zalez¬ nie od rozpuszczalnosci w srodowisku reakcyjnym.Odpowiednimi solami sa sól sodowa, potasowa, li¬ towa i sole innych metali. Mozna równiez zastoso¬ wac sole cefalosporyny C i podstawione sole amo¬ nowe, takie jak sól jednometyloamonowa, dwu- metyloamonowa, dwuetyloamonowa, dwuizopropy- loamonoway. trójmetyloamonowa, czterometyloamo- nowa, czteroetyloamoinowa, metylodwuizo/propylo- amonowa itp. Sposró nich najkorzystniejszymi sa trzecio- i czwartorzedowe sole amonowe ze wzgle¬ du na ich mniejsza wrazliwosc na substancje bio¬ race udzial w reakcji.Korzystnym srodowiskiem reakcyjnym jest he- . teropolarna ciecz organiczna, obojetna w stosowa¬ nych warunkach reakcji, w której przynajmniej czesciowo rozpuszcza sie cefalosporyne C. Przez ciecz obojetna rozumie sie taka, która nie reaguje z substancjami wyjsciowymi, substancjami reak¬ cyjnymi i produktami reakcji w warunkach, w których przebiega proces. Cefalosporyna C powin¬ na rozpuszczac sie w srodowisku reakcyjnym w ilosci co najmniej 0,5% wagowych, lecz zasadniczo reakcje mozna przeprowadzic juz w srodowiskach, w których rozpuszczalnosc cefalosporyny C wy¬ nosi zaledwie 0,1% wagowych.W zaleznosci od zastosowanego reagentu, mie¬ szanina reakcyjna moze zawierac mniej lub wie¬ cej wody, przy czym przy zastosowaniu srodków nitrozujacyeh srodowisko reakcyjne, nie powinno zawierac wiecej niz 25% wagowych wody, ko¬ rzystnie nie wiecej niz 10°/o wagowych. Przy za¬ stosowaniu soli benzenodwuazoniowych srodowis¬ kiem reakcyjnym moze byc w calosci woda. Ko¬ rzystnym srodowiskiem reakcyjnym przy zastoso¬ waniu srodka nitrozujacego jest kwas mrówkowy.Innymi srodowiskami odpowiednimi dla róznych reagentów sa kwas octowy, kwas propionowy, kwas trójfluorooctowy, sulfotlenek dwumetylowy itp. Mozna równiez stosowac mieszane srodowis¬ ka reakcyjne takie jak mieszaniny kwasu mrów¬ kowego z kwasem octowym, kwasu octowego z bezwodnikiem octowym, dwumetyloformamidu 2 woda, acetonitrylu z woda, sulfotlenku dwumety- lowego z woda itp.Odpowiednimi substancjami, które moga byc zastosowane do reakcji odbudowy lancucha boczne¬ go znajdujacego sie w polozeniu 7 sa: 1) czynniki nitrozujace jak chlorek nitrozylu, bromek nitrozy¬ lu, kwas azotawy, dwutlenek azotu, czterotlenek azotu, trójtlenek azotu (NON02), azotyny alkilowe, N-nitrozo-3-nitrokarbazol, kwas nitrozylosiarkowy, fluoroboran nitrozylu itp., przy czym korzystnym czynnikiem jest chlorek nitrozylu; 2) substancje50665 5 S dajace dodatni halogen w warunkach reakcji jak N-bromosukcynimid, N-chlorosukcynimid, N-bro- moftalimid, N-chloroftalimid, N-bromoacetamid itp. oraz 3) isole arylodwuazoniowe takie jak chlo¬ rek benzenodwuazoniowy, chlorek naftalenodwu- azoniowy itp.. Ilosc stosowanego reagentu winna byc co naj¬ mniej równomolowa dla wejscia w reakcje z gru¬ pa 5'-aminowa cefalosporyny C. Korzystne jest za¬ stosowanie stosunku molowego 2 :1, jezeli srodo¬ wisko reakcyjne jest bezwodne lub prawie bez¬ wodne. Natomiast, jezeli srodowisko to zawiera wode, to w tych warunkach, zarówno grupa 5'-ami- nowa lancucha bocznego jak i grupa 7-aminowa znajdujaca sie przy pierscieniu jest podatna na dzialanie reagentu, co powoduje mozliwosc rozkla¬ du zadanego produktu. W tym przypadku pozada¬ ne jest ograniczenie reagentu do takiej ilosci, przy której nastepuje calkowite przeksztalcenie grupy 5'-aminowej, grupa 7-aminowa natomiast jest nie¬ naruszona. W srodowisku wodnym pozadane jest na ogól ograniczenie molowego stosunku reagentu do cefalosporyny C do ponizej 2:1, na przyklad 1,1 :1—1,5 :1.Odbudowy lancucha bocznego dokonuje sie do¬ godnie w temperaturze zblizonej do pokojowej, np. 20°—30°C. Dopóki mieszanina reakcyjna pozo¬ staje plynna, mozna stosowac nizsza temperature, na przyklad —10°C lub nizsze. Wyzsza temperatura (powyzej 50°C) powoduje zmniejszenie wydajnosci wskutek reakcji rozkladowych. Krótki czas reakcji sprzyja uzyskiwaniu wysokiej wydajnosci, a zatem korzystne jest jak najszybsze dodawanie reagentu, korzystnie w czasie 1—5 minut lub krótszym i jak najkrótsze pozostawianie produktu reakcji w kon¬ takcie z nieprzereagowanym reagentem Jezeli mieszanina reakcyjna zawiera wode, to produkt cyklizacji lancucha bocznego samorzutnie ulega hydrolitycznemu odszczepieniu przy azocie aminowym, z którym jest zwiazany, dajac zadany kwas 7-aminocefalosporanowy. Kiedy mieszanina reakcyjna zawiera niewielka ilosc lub wcale nie zawiera wody, odszczepienia dokonuje sie przez dodanie wody.Jezeli po zakonczeniu reakcji pozostaje w mie¬ szaninie nieprzereagowany czynnik nitrozujacy, wówczas mozna go usunac przez destylacje, o ile czynnik ten jest dostatecznie lotny albo przez roz¬ klad za pomoca dostatecznej ilosci amoniaku, pierwszorzedowej aminy lub mocznika wprowadzo¬ nych do mieszaniny reakcyjnej. Substancje te, o ile nie wystepuja w znacznych ilosciach, nie przeszkadzaja w wyosobnieniu kwasu 7-amino- cefalosporanowego.Kwas 7-aminocefalosporanowy wyosabnia sie sie latwo z masy poreakcyjnej wieloma sposobami.Wedlug jednego z nich, srodowisko reakcji od¬ parowuje sie pod zmniejszonym cisnieniem w nor¬ malnej temperaturze a pozostaly surowy produkt reakcji w postaci oleju, paki, zywicy lub substancji stalej rozpuszcza sie w wodzie, co hydrolizuje pro¬ dukt odbudowy. Do roztworu tego dodaje sie wod¬ ny roztwór wodorotlenku sodowego lub inny roz¬ twór alkaliczny do ustalenia wartosci pH okolo 2,5—5, korzystnie okolo 3,7. Kwas 7-aminocefalo¬ sporanowy straca sie wtedy w postaci jonu amfo- terycznego, który odsacza sie, wymywa kolejno zimna woda i wodnym roztworem acetonu i suszy.Wedlug innego sposobu, produkt reakcji, po hydrolitycznym odszczepieniu przy pomocy dosta¬ tecznej ilosci wody, rozciencza sie antyrozpuszczal¬ nikiem kwasu 7-aminocefalosporanowego w ilosci wystarczajacej do stracenia tego kwasu. Surowy produkt odsacza .sie, odwirowuje itp. i oczyszcza przez rozpuszczenie w wodzie i ponowne stracenie przy pH = 2,5-^5.Przykladowo, produkt otrzymany w wyniku re¬ akcji z zastosowaniem 90%-owego kwasu mrówko¬ wego jako srodowiska reakcyjnego rozciencza sie 1—5 objetosciami eteru dwuetylowego, przy czym straca sie surowy kwas 7-aminocefalosporanowy.Kwas ten wyosobnia sie, rozpuszcza w wodzie, ustala sie pH = 3,7 i rekrystalizuje. Eter wyosobnia sie z kwasu mrówkowego, po czyim zarówno eter jak i kwas mrówkowy zawraca ,sie do obiegu.Wedlug innej odmiany tego sposobu, wodny roztwór surowego kwasu 7-aminocefalosporanowe¬ go traktuje sie weglem aktywowanym, który ad- sorbuje kwas 7-aminocefalosporanowy. Wegiel przemywa sie woda, po czym kwas 7-aminocefalo- sporanowy eluuje sie wodnym 10—40°/o-owyim ace¬ tonem.Wedlug jeszcze innej odmiany postepowania, wodny roztwór surowego kwasu 7-aminocefalospo¬ ranowego przepuszcza sie przy pH = 6—7 przez sil¬ na zywice amonitowa, po czym zywice przemywa sie woda i kwas 7-aminocefalosporanowy eluuje sie z niej wodnym roztworem kwasu octowego przy stezeniu wzrastajacym do okolo 1 n.Kwas 7-aminocefalosporanówy mozna wydzie¬ lic z surowego produktu reakcji, równiez przez do¬ danie do produktu reakcji wody i przez oddestylo¬ wanie ze srodowiska reakcyjnego azeotropowej mieszaniny produktu z woda pod zmniejszonym cisnieniem i przy normalnej temperaturze. Otrzy¬ muje sie przy tym wodny roztwór, z którego jed¬ nym z powyzszych sposobów wyosobnia sie kwas 7-aminocefalosporanowy.Wedlug innego sposobu, wodny roztwór suro¬ wego kwasu 7-aminocefalosporanowego acyluje sie w normalnych warunkach tworzac odpowiedni kwas 7-acyloaminocefalosporanowy. Mozna tu sto¬ sowac rózne czynniki acylujace jak chlorek acety¬ lu, chlorek fenyloacetylu, chlorek fenylomerkap- toacetylu, odpowiednie bromki itp. W celu przepro¬ wadzenia acylacji dodaje sie równe objetosci ace¬ tonu do wodnego kwasu 7-aminocefalosporamowe- go, po czym wprowadza sie czynnik acylujacy, w roztworze acetonowym korzystnie w stosunku równomolowym.Acylowanie zachodzi latwo i szybko w tempera¬ turze pokojowej, przy czym pH utrzymuje sie w granicach — 5—9. Z uzyskanej acylowej po¬ chodnej otrzymuje sie dogodnie kwas 7-aiminoce- falosporanowy przez ekstrahowanie przy pH = 2 rozpuszczalnikiem organicznym, takim jak octan etylowy. Acylowa pochodna moze byc dodatkowo oczyszczana przez ekstrakcje ponownie rozpusz¬ czalnikiem organicznym z dodatkiem rozcienczo¬ nego lugu przy p(H <= 5,5—7,5, odparowanie roztwo- 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 6050665 a ru pod zmniejszonym cisnieniem i krystalizacje produktu. Tozsamosc produktu potwierdza analiza w podczerwieni lub w nadfiolecie, elektroforeza bibulowa i chromatografia bibulowa z towarzysza¬ ca analiza bioautograficzna.Produkt koncowy ma strukture o wzorze 2, w którym R' oddzielnie oznacza grupe —OH, grupe acyloksylowa o 1—8 atomów wegla, lub czwarto¬ rzedowa grupe aminowa R" oznacza —OH kiedy R' oznacza —OH, R" oznacza grupe —OH, kiedy R' oznacza grupe acyloksylowa o 1—8 atomów wegla, R" oznacza —O— kiedy R' oznacza czwartorzedowa amine, a R\ R" jednoczesnie oznaczaja —O—.R' moze oznaczac grupe acetoksy propionoksy, bu- tyroksy, kapryloksy, N-pirydyl, N-pirymidyl, gru¬ pe trójimetyloaminowa, trójetyloaminowa, trójbu- tyloaminowa itp.Kwas 7-aminocefalosporanowy ma budowe o wzorze 2, w którym R* oznacza grupe acetylowa, a R" oznacza —OH. W pierscieniu cefalosporyny CA R' oznacza czwartorzedowa amine a R" ozna¬ cza —O—. W pierscieniu cefalosporyny C< R* i R" jednoczesnie oznaczaja ^O— tworzac w pozycji 4,5 skondensowany z pierscieniem lakton.Cefalosporyne C przeksztalca sie latwo w cefa- losporyne Cc przez ogrzewanie pod chlodnica zwrotna w wodnym roztworze kwasów, jak opisa¬ no w belgijskim opisie patentowym nr 593777.W ten sposób usuwa sie grupe acetylowa z punktu jej przylaczenia do grupy metylenowej w pozycji 5 pierscienia tiazyny, przy czym nastepuje samo¬ rzutna laktonizacja dajaca skondensowany w po¬ zycji 4, 5 lakton.Cefalosporyne C przeksztalca sie równiez latwo w cefalosporyne CA przez ogrzewanie w wodnym roztworze z nadmiarem pirydyny, na (przyklad jak opisano w wyzej wymienionym belgijskim opisie patentowym. Reakcje te stosuje sie do czwarto¬ rzedowych amin otrzymujac odpowiednie pochodne cefalosporyny CA, w których czwartorzedowa ami¬ na jest przylaczona do grupy metylenowej w pozy¬ cji 5 pierscienia tiazyny i tworzy wewnetrzna sól z grupa karboksylowa w pozycji 4. Tak wiec, po¬ chodne cefalosporyny CA mozna wytworzyc przez poddanie reakcji cefalosporyny C z nikotyna, kwa¬ sem nikotynowym, kwasem izonikotynowym, ami¬ dem kwasu nikotynowego, 2-aminopirydyna, 2- -amino-6-metylopirydyna, 2,4,6-trójmetylopirydy- na, 2-hydroksymetylopirydyna, sulfopirydyna, 3- hydroksypirydyna, kwasem pirydyno-2,3-dwukar- boksylowym, chinolina, sulfadwuazyna, .sulfatiazo¬ lem, kwasem pikolinowym itp.Dezacetylocefalosporyne C wytwarza sie dogod¬ nie przez kilkugodzinne traktowanie cefalospory¬ ny C cytrusowa acetyloesteraza w wodnym bufo¬ rze fosforanowym przy wartosci pH = 6,5—7, we¬ dlug metody Jansena, Janga i MacDonella, (Ar- chiv. Blochem. 1947 — 48, 1516).Ponizsze przyklady blizej objasniaja sposób wy¬ nalazku.Przyklad I. 40 g cefalosporyny C rozpusz¬ czono w 150 ml 98°/o-owego kwasu mrówkowego i roztwór ten przesaczono przez Celit, przy czym filtr i kolbe wymyto 20 ml kwasu mrówkowego.Nastepnie polaczono przesacz i ciecz po plukaniu 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 ochlodzono, mieszajac w kapieli lodowej, po czym w ciagu .2 minut dodano zimny roztwór 11,1 g chlorku nitrozylu w 100 ml 98%-owego kwasu mrówkowego. Mieszanine te mieszano ochladzajac w ciagu dalszych 3 minut, po czym zageszczono przez odparowanie w obrotowej wyparce w tem¬ peraturze pokojowej i pod zmniejszonym cisnie¬ niem.Mase te rozpuszczono w 150 ml wody, ochlodzo¬ no roztwór w kapieli lodowej i wkroplono, mie¬ szajac stezony amoniak do uzyskania pH = 3,5, ?przy czym wytracil sie osad. Uzyskana mieszanine pozostawiono w kapieli lodowej przez 0,5 godziny i odsaczono. Osad wymyto dwukrotnie na filtrze niewielkimi porcjami zimnej wody, a nastepnie dwukrotnie zimnym acetonem i wysuszono. Otrzy¬ mano 6,14 g suchego produktu o maksimum w nad¬ fiolecie przy 264 m ju (e \= 7900). Produkt ten ziden¬ tyfikowano jako kwas 7-aminocefalosporanowy na podstawie chromatografii bibulowej i próby bio- autograficznej.Przyklad II. 5 g cefalosporyny C rozpusz¬ czono w 300 ml lodowatego kwasu octowego i w ciagu 1 minuty dodano 1,4 g chlorku nitrozylu w okolo 50 ml kwasu octowego lodowatego w normal¬ nej temperaturze, po czym w ciagu 10 minut mie¬ szano mieszanine i odparowano do sucha pod zmniejszonym cisnieniem i w temperaturze poko¬ jowej. Nastepnie dodano okolo 100 ml wody de¬ stylowanej uzyskujac czysty pomaranczowo-czer- wony roztwór, do którego dodano rozcienczony wodny roztwór wodorotlenku sodowego do pH = 3,5. Roztwór ten stezono w temperaturze po¬ kojowej i pod zmniejszonym cisnieniem do okolo 20—30 ml kiedy nastapilo stracenie osadu. Osad ten odsaczono, przemyto woda i acetonem i wy¬ suszono. Produkt ten, który wazyl 194 mg i wy¬ kazywal maksimum w nadfiolecie przy 263 mu (e = 7820), zidentyfikowano jako kwas 7-amino¬ cefalosporanowy na podstawie chromatografii bi¬ bulowej i próby bioautograficznej.Przyklad III. 10 mg cefalosporyny.C roz¬ puszczono w 0,5 ml kwasu octowego lodowatego i do tego roztworu dodano 0,36 .ml roztworu N204 w kwasie octowym lodowatym o stezeniu 0,059 rhi- limola N204 na mililitr lodowatego kwasu octowe¬ go. Mieszanine te utrzymywano w ciagu 20 minut w kapieli lodowej w temperaturze 15°—16°, po czym odparowano ja do stanu prawie suchego w temperaturze pokojowej i pod zmniejszonym cis¬ nieniem. Uzyskano 13 mg osadu, który rozpuszczo¬ no w minimalnej ilosci wody i roztwór ten o pH = 2,5 zadano wodnym roztworem wodorotlen¬ ku sodowego, w celu doprowadzenia wartosci pH do 7,3, po czym rozcienczono do 10 ml woda des¬ tylowana i poddano analizie. Chromatografia bi¬ bulowa i próba bioalitograficzna roztworu, po acy- lowaniu chlorkiem i fenoksyacetylu wykazala dwie plamy biologiczne aktywne, podczas gdy przed acylowaniem byla tylko jedna plama. Potwierdza to obecnosc kwasu 7-aminocefalosporanowego.Przyklad IV. Roztwór 10 mg cefalospory¬ ny C w 10 ml kwasu octowego lodowatego zmie-50665 9 PL

Claims (4)

1. Zastrzezenia patentowe 1. Sposób wytwarzania kwasu 7-aminocefalospo- ranowego, znamienny tym, ze na zwiazek o dwuipierscieniowym ukladzie cefalosporyny C z grupa 7-aminowa zwiazana z kwasem alfa- amino-adypinowym jako lancuchem bocznym dziala sie w srodowisku rozpuszczalnika po¬ larnego substancja reagujaca z grupa 5'-ami- nowa lancucha bocznego, przy czym lancuch boczny zostaje przeksztalcony w uklad po¬ sredni o niedoborze elektronów przy atomie wegla w pozycji 5', co powoduje jego cykli- zacje samorzutna, po czym tak utworzona grupe cykliczna odszczepia sie hydrolitycznie od atomu azotu grupy 7-aminowej, z którym jest ta grupa zwiazana, otrzymujac odpowiedni pierscien kwasu 7-aminocefalosporanowego.
2. 2. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze na cefalosporyne C dziala sie sola arylodwu- azoniowa. 15 szano z roztworem 5 mg N-nitrozo-3-nitrokarbazo- lu w 6 ml acetonitrylu i mieszanine te utrzymy¬ wano w ciagu 1 godziny w temperaturze 60°C, po 4. czym wysuszono ja do stanu prawie suchego pod zmniejszonym cisnieniem i w lagodnej temperatu- 5 rze. Uzyskany osad rozpuszczono w wodzie i ekstra- 5. howano octanem etylowym przy pH = 2, a nastep¬ nie osad ekstrahowano z octanu etylowego w wod¬ nym roztworze wodorotlenku potasowego przy pH = 5,5. Koncowy roztwór rozcienczono do 10 ml 10 i poddano analizie. Chromatografia bibulowa i 6. próba bioautograficzna wykazaly obecnosc kwasu 7-aminocefalosporanowego o stezeniu odpowiada¬ jacym 1,1 jednostek penicyliny G na 1 mililitr wodnego roztworu. Przyklad V. 800 mg cefalosporyny C roz¬ puszczono w 35 ml wody przy pH = 5,3 i roztwór doprowadzono do wartosci pH ponizej 2,2 przez dodanie 1 n kwasu solnego i do roztworu tego do¬ dano 300 mg N-bromosukcynimidu, po czym mie¬ szano calosc w ciagu 10 minut w temperaturze po¬ kojowej, w którym to czasie mieszanina nabierala zóltego zabarwienia. Nastepnie przez dodanie wod¬ nego 1 n roztworu wodorotlenku potasowego usta¬ lono wartosc pH na 6,7 i odsaczono mieszanine w celu usuniecia substancji nierozpuszczalnych. Prze¬ sacz odparowano do stanu' suchego pod zmniejszo¬ nym cisnieniem w normalnej temperaturze. Otrzy¬ mano 770 mg produktu, który, jak wykazaly chro¬ matografia bibulowa i próba bioautograficzna, za¬ wieral kwas 7-aminocefalosporanowy. 20 25 30 40 45 50 55 10. 11. 12.
3. 3. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze na 13. cefalosporyne C dziala sie substancja oddaja¬ ca chlorowiec w warunkach reakcji, w ilosci 60 10 wystarczajacej do wejscia w reakcje z grupa aminowa w pozycji 5\ Sposób wedlug zastrz. 3, znamienny tym, ze jako substancje oddajaca chlorowiec stosuje sie N-bromosukcynimid. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze na cefalosporyne C dziala sie czynnikiem ni- trozujacym w ilosci wystarczajacej do wej¬ scia w reakcje z grupa aminowa w pozycji 5'. Sposób wedlug zastrz. 5, znamienny tym, ze jako czynnik nitrozujacy stosuje sie czterotle- nek azotu. Sposób wedlug zastrz. 5, znamienny tym, ze jako czynnik nitrozujacy stosuje sie N-nitrozo- -3-nitrokarbazol. Sposób wedlug zastrz. 1 i 5, znamienny tym, ze cefalosporyne C traktuje sie w obojetnym organicznym rozpuszczalniku heteropolarnym czynnikiem nitrozujacym w temperaturze po¬ nizej 50°C, przy zachowaniu stosunku molo¬ wego czynnika nitrozujacego do cefalosporyny C powyzej 1:1, po czym usuwa sie rozpusz¬ czalnik z produktu reakcji, pozostala miesza¬ nine rozpuszcza sie w wodzie, ustala sie pH roztworu na 2,5—5 i krystalizuje sie z tego roztworu kwas 7-aminocefalosporanowy. Sposób wedlug zastrz. 8, znamienny tym, ze czynnik nitrozujacy wprowadza sie do cefalo¬ sporyny C w stosunku molowym 2 :1 a plH wodnego roztworu doprowadza do wartosci 3,5—
4. 4. Sposób wedlug zastrz. 1, 5—8f, znamienny tym, ze jako obojetny heteropolarny rozpuszczalnik organiczny stosuje sie kwas octowy. Sposób wedlug zastrz. 1, 5—9, znamienny tym, z:e jako rozpuszczalnik stosuje sie kwas mrów¬ kowy. Sposób wedlug zastrz. 1, 5 i 11, znamienny tym, ze cefalosporyne C rozpuszcza sie w kwa¬ sie mrówkowym, do powstalego roztworu wpro¬ wadza isie jako czynnik nitrozujacy chlorek ni- trozylu w stosunku molowym do cefalospory¬ ny C 2:1, w temperaturze ponizej 50°C, ko¬ rzystnie 20—30°C, po czym oddestylowuje sie kwas mrówkowy z produktu reakcji pod zmniejszonym cisnieniem w normalnej tem¬ peraturze, a pozostala mieszanine rozpuszcza sie w wodzie, doprowadza pH roztworu do war¬ tosci 3,5—4 i krystalizuje kwas 7-aminocefalo¬ sporanowy. Sposób wedlug zastrz. 12, znamienny tym, ze stosuje sie kwas mrówkowy zasadniczo bez¬ wodny.50665 CHg^ iCHaH A\ 1 Ls-OH H%, Q O || \i/' I O i OH COOH ,= WZÓR1 7 A H,N — CH- CH 60H I- W ^ i C O | C-fc/; WZÓR.Z ZG ,,Ruch" W-wa, zam. 1538-65 naklad 270 e%i PL