PL4259B1 - Sposób wytwarzania srodka przeciwcukrzycowego. - Google Patents

Description

Wynalazek niniejszy dotyczy wytwa¬ rzania w postaci stalej i skoncentrowanej pewnej substancji, posiadajacej wlasnosci fizjologiczne i lecznicze zwalczania cukrzy¬ cy, odpowiadajace wlasnosciom zasady przeciwcukrzycowej, czyli hormonu, odgry¬ wajacego doniosla role w procesie przetwa¬ rzania cukru w organizmie zwierzecym i u- suwajacego glówne objawy cukrzycy. Wy¬ nalazek polega na wytwarzaniu pomienio- nej substancji w postaci czystej, wolnej od zanieczyszczen.Inne zadanie wynalazku polega na wy¬ dzieleniu z trzustki metoda stracania czyn¬ nego skladnika (hormonu) bez dodatku to¬ warzyszacych mu, a zanieczyszczajacych go lub jadowitych domieszek, zawierajacych zwiazki azotowe, od których dotychczas niepodobna bylo oddzielic skladnik ten tak dokladnie, jak to pozwala uczynic sposób niniejszy.Wiadomo bylo oddawna, ze trzustka zwierzat ladowych oraz ryb chrzastkowych i odpowiednie gruczoly ryb oscistych wy¬ dzielaja w postaci wydzieliny wewnetrznej czynna substancje hormonowa, odgrywaja¬ ca glówna role w procesie przetwarzania cukru w organizmie zwierzecym, przyczem objawy cukrzycy wystepuja wlasnie wtedy, gdy te wydzieliny ustaja, albo sa zbyt szczuple. Dlatego tez oddawna poszukiwa^- no sposobu wydobycia z trzustki owego ak¬ tywnego czynnika w takiej postaci, aby mozna go bylo stosowac z pomyslnym skut¬ kiem przy zwalczaniu cukrzycy u ludzi.Dopiero jednak prace Banting'a, Besfa i Collip'a na uniwersytecie w Toronto daly wyniki powazniejsze.Opracowac przez nich metoda opiera sie zasadniczo na zabiegach nastepujacych. 1) Wyciaganie soku trzustkowego; za¬ nim zawarty w nim skladnik czynny, hor¬ mon, nie ulegl zniszczeniu pod wplywem trypsyny i innych enzynów. Do tego celu sluzyl rozpuszczalnik, który badzto nie za¬ wieral trypsyny i innych enzynów, badz ^ 1^%te^awial ^e spkodiiwego ich dzialania na 2) Zlnienianie stezenia roztwóróyr za- pomoca rozpuszczalnika pierwotnego lub wtórnego albo obu tych rozpuszczalników i odpowiedniego przesaczania, w celu stra¬ cania 'czastkowego ^poszczególnych wycia¬ gnietych skladników. Do czastkowego stra¬ cania stosowano z dobremi wynikami alko¬ hol i csad, -powstajacy przez stracanie alko¬ holem 80% do 90%, zawieral po usunieciu zen osadów, powstajacych przy wiekszych rozcienczeniach spirytusu, najwieksza sto¬ sunkowo ilosc skladnika czynnego—hormo¬ nu przeciwcukrzycowego. 3) Rozpuszczanie zawierajacego hor¬ mon osadu w wodzie. 4) Ustalanie stoptaia aktywnosci prze- ciwcukrzycowej otrzymanego rczczynu, przyczem za jednostke przyjmowano taka ilosc rozczynu, jaka po zastrzyknieciu nor¬ malnemu królikowi, wazacemu 1 kg, obni¬ zala zawartosc cukru we krwi ponizej 0,045% w ciagu szesciu godzin, wywolujac przytem konwulsje.Produkt otrzymywany sposobem po¬ wyzszym zawieral na jednostke aktywnosci przeciwcukrzycowej w najlepszym razie od 0,2 do 1,0 mg azotu, ale czestokroc bywalo go znacznie wiecej, a poza tern napotykano w preparacie sole nieorganiczne. Preparat bywal bardzo czesto nietrwaly i rozkla¬ dal sie w nieoczekiwanych i nie¬ przewidzianych agory warunkach. Nie mozna wiec bylo liczyc z pewnoscia na jegofskutecznosc. Podczas gdy sam juz hormon zawiera prawdopodobnie azot, za¬ nieczyszczenia, o jakich mowa, skladaly sie prawie wylacznie z protein i ze zwiazków, powstajacych wskutek ich rozszczepienia, co prowadzilo do niepozadanych objawów, jak bolesnosc i stwardnienie przy zastrzy- kiwaniu. Zanieczyszczenia zawieraly poza tern substancje fosforowe, oraz substancje grup purynowej i pyrimidynowej.Nowa metoda pozwala wytwarzac pro¬ dukt, który mozna stosowac bez zastrze¬ zen i bez zawodu przy zwalczaniu cukrzy¬ cy. Produkt ten odznacza sie staloscia i nie wykazuje zmian po uplywie nawet trzech lub wiecej miesiecy. Preparat tak jest czy¬ sty, ze tysiace pacjentów, którym go stoso¬ wano, a miedzy innemi i tacy, którzy do¬ swiadczali bólu i kurczów przy najlepszych nawet preparatach dawniejszych, nie od¬ czuwali w tym wypadku najmniejiszej bole- snosci.Metoda niniej sza polega na procesie stracania czynnej substancji przeciwcu¬ krzycowej w bardzo czystym i nie ulegaja¬ cym rozkladowi stanie z roztworu, zawiera¬ jacego zwykle zanieczyszczenia skladnika, o który nam chodzi. Resztki azotu w prepa¬ racie stanowia znacznie mniejszy odsetek i nie przewyzszaja 0,1 mg na jednostke ak¬ tywnosci przeciwcukrzycowej preparatu, a bardzo czesto stanowia zaledwie 0,005 do 0,05 mg na jednostke pomienionej aktyw¬ nosci. Takmalej zawartosci azotu dotychczas nie osiagano nigdy w preparatach dawniej¬ szych, gdyz zawsze przekraczala ona 0,1 mg na jednostke. Dla otrzymania takiej czystosci konieczne jest wielokrotne stracanie. Otrzy¬ muje sie przytem róznorodne zawartosci azotu, Po osiagnieciu jednak pewnego kre¬ su dalsze powtarzanie zabiegu nie prowadzi juz do doskonalszego oczyszczenia. Prepa¬ rat i jego rozczyny nie zawieraja przytem domieszek rozpuszczalnych w wodzie, a wiec soli nieorganicznych, fosforu i substan- cyj grup puryny i piramidyny, które zawie¬ raja nieuniknienie preparaty dotychczaso¬ we. Ostateczny roztwór jest zupelnie prze¬ zroczysty i w niewielkich ilosciach zupelnie bezbarwny, jak woda. Preparaty dawniej¬ sze byly zawsze zlekka zabarwione. — 2 —Czystosc nowego preparatu zalezy wi¬ docznie od tego, ze osad „substancji anty- djabetycznej" zawiera wylacznie hormon i pewne blisko z nim spokrewnione substan¬ cje, które nie wywoluja ujemnego wplywu ani na stalosc preparatu, ani na jego sile i wlasnosci aktywne przy zwalczaniu cukrzy¬ cy. Cala masa zanieczyszczen (proteiny, produkty rozczepienia protein, inne zwiazki azotowe, sole nieorganiczne i t. p.) pozo^ staja w roztworze i zostaja oddzielone od produktu.Ze wzgledu na znaczna czystosc, sku¬ tecznosc preparatu zalezy prawie wylacz¬ nie od stopnia rozwoju choroby i stosowa¬ nie jego nie pociaga za soba niepozadanych zjawisk twardnienia i bclesnosci.Do oczyszczenia preparatu moga pro¬ wadzic rózne metody. Najodpowiedniejsza jest metoda, polegajaca na przystosowaniu koncentracji jonów wodoru w zawierajacym hormon roztworze do pewnego izoelektrycz- nego punktu, w jakim nastepuje stracanie osadu, zawierajacego hormon lub polaczo¬ nego z ta substancja.Banting, Best i Collip stosowali, jak wiadomo, w swych pracach zasade stracania izoelektrycznego. Poslugiwali sie nia jed¬ nak do rozmaitych oelów i otrzymywali nie¬ jednolite wyniki. Przedewszystkiemi pra¬ gneli ja zastosowac do stracenia z roztworu niepozadanych zanieczyszczen w tym celu, aby w roztworze pozostawic czysty hormon przeciwcukrzycowy. W metodzie niniejszej sposób ten sluzy przeciwnie do stracenia czystego hormonu i pozostawienia wszyst¬ kich domieszek w stanie rozpuszczonym.Usilowania w tym kierunku mozna uwazac za skuteczne, o ile uda sie na tej drodze wyeliminowac wszelkie zanieczyszczenia.Okazalo sie dalej, ze rczczyn, który po¬ przednio stanowil produkt ostateczny, mo¬ ze ulegac pod wzgledem swej stalosci szko¬ dliwym wplywom jonów wodoru. Jezeli koncentracja jonów wodoru znajduje sie w szeregu PH w granicach 4 do 7, nastepuje niszczenie aktywnosci preparatu w stopniu zaleznym od koncentracji jonów wodoru.Wieksza jednak czesc masy preparatu .nie stanowi zobojetnionego hormonu. Na¬ stepuje rozklad samego preparatu i tworzy sie powoli osad hormonu, co w dalszym ciagu oslabia aktywnosc roztworu. Szybkosc tworzenia sie takich osadów zalezy od kon¬ centracji jonów wodoru i wzrasta w miare zblizania sie z tej lub owej strony do punk¬ tu izoelektrycznego. Po ustaleniu tego punktu powstawanie osadu zostaje przy¬ spieszone, a wydajnosc jego wzrasta tern silniej, im roztwór zawiera mniej zanieczy¬ szczen. Osad w sprzyjajacych warunkach zaczyna sie tworzyc, gdy PH odpowiada 4, wydziela sie najszybciej przy P(, wyno- szacem od 4,5 do 5,5, a rozpuszcza sie pra¬ wie calkowicie zpowrotem przy P H wy- noszacem od 6,5 do 7. Wyjatek stanowia roztwory tak zanieczyszczone, ze osad, któ¬ ry w innych warunkach zaczalby sie two¬ rzyc, pozostaje w roztworze. W takich ra¬ zach nalezy roztwór rozcienczyc i osad zacznie sie wydzielac.Metoda niniejsza moze przeto posilko¬ wac sie dla otrzymania stalych i czystych substancyj antycukrzycowych sposobem, który poprzednio byl przyczyna powaznych trudnosci.Mozna jednak postepowac inaczej. Za¬ leca sie rozpoczynac prace z preparatami przygotowanemi wedlug jednego ze spo¬ sobów znanych dawniej. Chodzi o to,ze stra¬ canie hormonu na drodze izoelektrycznej zostaje znacznie ulatwione, jezeli skladnik ten pozbawi sie znacznej czesci jego zanie¬ czyszczen. Nowa metode mozna stosowac w obu wypadkach. Jezeli jednak stosowac ja tylko do oczyszczania preparatów juz przygotowanych, to przy pomocy jej mozna otrzymac wyniki znacznie korzystniejsze, dzieki usunieciu domieszek szkodliwych metodami znanemi.Koncentracja jonów wodoru wedlug najkorzystniejszej metody—o ile oczyszcza — 3 —sie dawniejsze preparaty ostateczne—usta¬ la sie w ten sposób, by straceniu ulegl je¬ dynie skladnik czynny w mozliwie czystym i stalym stanie. Koncentracje jonów ustala sie przeto mozliwie blisko punktu izoelek- trycznego substancji lub substancyj, zawie¬ rajacych po osadzeniu z roztworu hormon lub towarzyszacych hormonowi przeciwcu- krzycowemu bez wzgledu na to, czy sub¬ stancje te stanowia hormon, czy tez go nie zawieraja. W tym punkcie PH odpowiada granicom od 4 do 7. Okreslenie „substancja przeciwcukrzycowa" oznacza w opisie i w niektórych zastrzezeniach ogólnie hormon przeciwcukrzycowy czy to sam, czy lacznie z pewnemi innemi substancjami, pochodza- cemi z wyciagania trzuski. Dawniejsze pro¬ dukty (roztwory) ostateczne mozna dopro¬ wadzic do pozadanych granic,PH przez od¬ powiednie uzupelnienie procesu pierwotne¬ go. Jezeli wartosc PH byla od poczatku zbyt niska, to mozna ja podniesc przez dodatek alkal jów, najkorzystniej wodorotlenku sodo¬ wego, dopóki nie osiagnie sie bliskosci punk¬ tu izoelektrycznego. Skoro natomiast byla ona za wysoka, nalezy dodac kwasu, najle¬ piej solnego. W chwili powstawania osadu meze nastapic zmiana w koncentracji jo¬ nów wodoru, niema jednak potrzeby utrzy¬ mywania stalej wartosci PH , gdyz aczkol¬ wiek punkt izoelektryczny zdaje sie lezec w granicach od 4,5 do 5,5 skali PH , osad w mniejszym lub wiekszym stopniu po¬ wstaje w granicach PH od 4 do 7, co po¬ zwala przeto stosowac koncentracje jonów w tych wlasnie granicach. Najlepsze wyni¬ ki daje utrzymywanie jej w granicach od 4,5 do 5,5. Po ustaleniu PH jak najblizej punktu izoelektrycznego pozostawia sie roztwór w spokoju dla ulatwienia powsta¬ wania osadu. Potrzeba na to kilka dni albo i calego tygodnia, chociaz czesciowo wy¬ dzielajacy sie osad powstaje juz po kilku godzinach. Jezeli osad wydziela sie zbyt wolno, albo nie powstaje wcale, nalezy roz¬ twór rozcienczyc, podtrzymujac taka kon¬ centracje jonów, jaka jest potrzebna do wy¬ wolania osadu. Osad nalezy od czasu do czasu usuwac, a jednoczesnie koncentracje jonów miarkowac dla zachowania wskaza¬ nego powyzej optimum PH , co ulatwia dal¬ sze wydzielanie sie osadu. Bardzo korzyst- nem bywa równiez studzenie roztworu pod¬ czas odstawania.Osady, otrzymane w ten sposób, rozpu¬ szczaja sie w wodzie, zawierajacej kwas albo zasade. W roli kwasu najodpowied¬ niejszym jest solny, w roli zasady—wodoro¬ tlenek sody. W takim roztworze preparat jest gotów do zastrzykiwan. Koncentracja jonów wodoru PH w tym roztworze ustala sie na wartosc dowolna. Wartosc ta lezy zazwyczaj zewnatrz granic znaczen, wywo¬ lujacych powstawanie osadu, hormon pozo¬ staje przeto w roztworze. Dla zwyklych ce¬ lów leczniczych wystarcza wartosc P H = 3,5, mozna jednak stosowac nizsze jego wartosci. W wielu wypadkach najkorzyst¬ niej bywa stosowac koncentracje PH o wartosci 2, której kwas, w razie poslugiwa¬ nia sie kwasem solnym, nie wywoluje przy zastrzykiwaniu wrazenia uklucia. W pew¬ nych wypadkach mozna stosowac i znacz¬ nie wyzsze wartosci PH , w sasiedztwie punktu izoelektrycznego albo dalekie oden, dochodzac az do 12.Wedlug nowej metody otrzymuje sie do 90% calkowitej zawartosci czynnej sub¬ stancji przeciwcukrzycowej, zawartej w przerabianym rozczynie przed straceniem.Zalezy to od dokladnosci procesu straca¬ nia, od czystosci pierwotnego materjalu, okresu odstawania sie roztworu, chlodze¬ nia roztworu podczas wydzielania osadu, a przedewszystkiem od traktowania roztworu w warunkach bliskich punktu izoelektrycz¬ nego. Jezeli przestrzegac wymienionych warunków, to mozna uniknac wiekszych strat w skutecznosci przeciwcukrzycowej.W kazdym razie wygrywa sie ogromnie na trwalosci i czystosci otrzymanego na tej drodze produktu. — 4 —/ PL

Claims (5)

1. Zastrzezenia patentowe, 1. Sposób wytwarzania srodka przeciw- cukrzycowego z trzustki, znamienny tern, ze trzustka obrabia sie rozpuszczalnikiem, pochlaniajacym czynna zasade przeciwcu- krzycowa czyli hormon bez niszczenia go i powstrzymujacym to zniszczenie zapomoca substancyj poczatkowo polaczonych z hor¬ monem w trzustce, roztwór oddziela sie od pozostalosci trzustki, oddziela hormon od zanieczyszczen zapomoca stracania czast¬ kowego i stezenie alkoholu zmienia frakcje otrzymane pomiedzy 80° i 90° alkoholu, od¬ dziela sie roztwór pomienionej frakcji i re¬ guluje koncentracje jonów wodoru ostat¬ niego tego roztworu tak, aby PH zawieralo sie miedzy 4 i 7 celem wytworzenia osadu zawierajacego zasade przeciwcukrzycowa i wreszcie oddziela sie i zebezpiecza osad otrzymany w ten sposób.
2. 2. Sposób wytwarzania srodka przeciw- cukrzycowego i oddzielania czynnej zasa¬ dy przeciwcukrzycowej czyli hormonu z trzustki od zanieczyszczen, z któremi byl on pierwotnie polaczony w trzustce, wedlug zastrz. 1, znamienny tern, ze koncentracje jo¬ nów wodorowych roztworu zawierajacego pfcmieniona zasade przeciwcukrzycowa czyli hormonu, dobiera sie tak, aby P H zawiera¬ lo sie miedzy 4 i 7 celem wytworzenia osa- du zawierajacego hormon przeciwcukrzy- cowy, a nastepnie oddziela i zabezpiecza wytworzony osad.
3. 3. Sposób wytwarzania srodka przeciw- cukrzycowcgo i oczyszczania przetworu, za¬ wierajacego czynna zasade przeciwcukrzy¬ cowa czyli hormon trzustkowy, wedlug zastrz. 1 i 2, znamienny tern, ze z oddzie¬ lonego osadu wytwarza sie roztwór posia¬ dajacy koncentracje jonów wodoru ze¬ wnatrz P H od 4 do 7 dla zapobiezenia osia¬ daniu zasady przeciwcukrzycowej czyli hormonu z roztworu.
4. 4. Sposób wytwarzania srodka przeciw- cukrzycowego i oczyszczania czynnej za¬ sady przeciwcukrzycowej czyli hormonu z trzustki wedlug zastrz. 2, znamienny tern, ze koncentracje jonów wodoru ustala sie na PH =^5 + 0,5 celem wytworzenia osadu zawierajacego pomieniony hormon lecz po¬ zostawiajacego w roztworze zanieczyszcza¬ jace substancje azotowe a nastepnie oddzie¬ la sie od roztworu.
5. 5. Sposób wytwarzania srodka przeciw- cukrzycowego i oczyszczania czynnej zasa¬ dy przeciwcukrzycowej czyli hormonu we¬ dlug zastrz. 1—4, znamienny tern, ze wy¬ twarza sie roztwór ostatecznego osadu o koncentracji jonów wodorowych tak, aby P H pozostawalo ponizej 4-ch. The Governors of the University of Toronto. Zastepca: M. Skrzypkowski, rzecznik patentowy. Druk L. Boguslawskiego, Warszawa. PL