PL402764A1 - Sposób wyznaczania wydajności podwójnego znakowania dwuniciowego DNA barwnikiem fluorescencyjnym z zastosowaniem spektroskopii korelacji fluorescencji oraz jego zastosowanie w analizie biochemicznej - Google Patents

Abstract

Przedmiotem wynalazku jest sposób wyznaczania wydajności podwójnego znakowania dwuniciowego DNA barwnikiem fluorescencyjnym z zastosowaniem spektroskopii korelacji fluorescencji, obejmujący następujące kroki, gdzie a) przygotowuje się pierwszą próbkę poprzez wygrzewanie, a następnie powolne chłodzenie mieszaniny dwóch komplementarnych jednoniciowych DNA: znakowanego ssDNA A i znakowanego ssDNA B, barwnikiem fluorescencyjnym, oraz b) przygotowuje się drugą próbkę poprzez wygrzewanie, a następnie chłodzenie mieszaniny złożonej z nieznakowanego jednoniciowego ssDNA A i nieznakowanego jednoniciowego ssDNA B, oraz znakowanego jednoniciowego ssDNA A i znakowanego jednoniciowego ssDNA B barwnikiem fluorescencyjnym, przy czym w obu próbkach stężenie i ilość wszystkich stosowanych składników są takie same; potem c) dokonuje się pomiaru oddzielnie dla obu powyższych próbek z zastosowaniem spektroskopii korelacji fluorescencji w wyniku tego pomiaru uzyskuje się krzywe funkcji autokorelacyjnych G(?), gdzie ? oznacza czas przebywania cząstki w ognisku konfokalnym, z których to krzywych odczytuje się parametry stanowiące wartości G1(0), G2(0) funkcji autokorelacyjnych dla każdej z próbek w punkcie r=0, a także wartości frakcji stanów trypletowych p i p2, po czym d) wylicza się wartości GA(0) i GB(0), a następnie e) wyznacza się wydajność x podwójnego znakowania dwuniciowego DNA, na podstawie uzyskanych z pomiaru w etapie c) i wyliczonych w etapie d) wartości, uzyskując wartość x, będącą ułamkiem właściwym określającym wydajność podwójnego znakowania dwuniciowego DNA. Wynalazek obejmuje ponadto zastosowanie wydajności podwójnego znakowania DNA wyznaczonego, wyżej opisanym sposobem, w ilościowej analizie biochemicznej, zwłaszcza w analizie aktywności enzymu, oraz do weryfikacji zmierzonej wartości wydajności podwójnego znakowania DNA, jak również w badaniach cięcia łańcucha DNA.