PL249575B1 - Modyfikowany liposom do przenoszenia leków, zwłaszcza o działaniu antynowotworowym - Google Patents

Modyfikowany liposom do przenoszenia leków, zwłaszcza o działaniu antynowotworowym

Info

Publication number
PL249575B1
PL249575B1 PL444722A PL44472223A PL249575B1 PL 249575 B1 PL249575 B1 PL 249575B1 PL 444722 A PL444722 A PL 444722A PL 44472223 A PL44472223 A PL 44472223A PL 249575 B1 PL249575 B1 PL 249575B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
emetine
liposome
liposomes
weight
dopc
Prior art date
Application number
PL444722A
Other languages
English (en)
Other versions
PL444722A1 (pl
Inventor
Olga Święch
Agata KRZAK
Agata Krzak
Joanna PIETRAS
Joanna Pietras
Weronika PIOTROWSKA
Weronika Piotrowska
Anna Boguszewska-Czubara
Mateusz Psurski
Joanna Wietrzyk
Ewa OLISZEWSKA
Ewa Oliszewska
Joanna JAROSZ
Joanna Jarosz
Wojciech Smoron
Renata Bilewicz
Original Assignee
Bs Biotechna Spółka Z Ograniczoną Odpowiedzialnością
Biotechna Spółka Akcyjna
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Bs Biotechna Spółka Z Ograniczoną Odpowiedzialnością, Biotechna Spółka Akcyjna filed Critical Bs Biotechna Spółka Z Ograniczoną Odpowiedzialnością
Priority to PL444722A priority Critical patent/PL249575B1/pl
Priority to CN202480044870.0A priority patent/CN121443273A/zh
Priority to EP24740621.8A priority patent/EP4704811A1/en
Priority to PCT/PL2024/000024 priority patent/WO2024228633A1/en
Priority to IL324425A priority patent/IL324425A/en
Publication of PL444722A1 publication Critical patent/PL444722A1/pl
Publication of PL249575B1 publication Critical patent/PL249575B1/pl

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/13—Amines
    • A61K31/135—Amines having aromatic rings, e.g. ketamine, nortriptyline
    • A61K31/136—Amines having aromatic rings, e.g. ketamine, nortriptyline having the amino group directly attached to the aromatic ring, e.g. benzeneamine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/4738—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/4745—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems condensed with ring systems having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. phenantrolines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A61K31/553—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole having at least one nitrogen and one oxygen as ring hetero atoms, e.g. loxapine, staurosporine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/24—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing atoms other than carbon, hydrogen, oxygen, halogen, nitrogen or sulfur, e.g. cyclomethicone or phospholipids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Synthetic bilayered vehicles, e.g. liposomes or liposomes with cholesterol as the only non-phosphatidyl surfactant
    • A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes or liposomes coated or grafted with polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Synthetic bilayered vehicles, e.g. liposomes or liposomes with cholesterol as the only non-phosphatidyl surfactant
    • A61K9/1277—Preparation processes; Proliposomes
    • A61K9/1278—Post-loading, e.g. by ion or pH gradient
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2121/00—Preparations for use in therapy

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

Przedmiotem zgłoszenia jest modyfikowany liposom do przenoszenia leków charakteryzujący się tym, że złożony jest z trzech głównych lipidów, to jest DPPC w ilości od 48,6% do 70,7% wagowych, cholesterolu w ilości od 18,3% do 18,6% wagowych, DSPE-PEG(2000)aminy w ilości od 10,6% do 10,7% wagowych oraz co najmniej jednego lipidu z grupy obejmującej DOPC i DOPG, przy czym zawartość DOPC w liposomie wynosi nie więcej niż 22,4% wagowych, a zawartość DOPG w liposomie wynosi nie więcej niż 22,6% wagowych. Kolejnymi przedmiotami zgłoszenia jest powyższy liposom do zastosowania do przenoszenia co najmniej jednego leku, zwłaszcza o działaniu antynowotworowym oraz sposób ładowania liposomu lekami zwłaszcza o działaniu antynowotworowym.

Description

Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest modyfikowany liposom do przenoszenia leków, zwłaszcza o działaniu antynowotworowym.
Liposomy są powszechnie wykorzystywane jako nośniki w chemioterapii z użyciem leków cytostatycznych, ze względu na ich zdolność do transportowania tych leków do miejsc docelowych w organizmie. Są to sferyczne pęcherzyki zbudowane z jednej lub kilku dwuwarstw fosfolipidowych otaczających płynne wnętrze. Skład lipidowy liposomów ma kluczowe znaczenie dla ich stabilności i właściwości fizykochemicznych. Wybór odpowiednich lipidów oraz ich stosunek wpływa na rozmiar, kształt, stabilność i właściwości powierzchniowe liposomów. Wielkość i właściwości powierzchniowe liposomów są natomiast kluczowe dla ich biodostępności, stabilności oraz ich selektywności dostarczania leków do docelowych tkanek i komórek (https://doi.org/10.1016/j.addr.2012.09.037). Glikol polietylenowy (PEG) jest powszechnie stosowany w modyfikacji powierzchni liposomów w celu zwiększenia ich stabilności w osoczu krwi, poprawy biodostępności i wydłużenia czasu krążenia (DOI:10.1016/j.jconrel.2013.07.026). Ponadto długość łańcucha glikolu polietylenowego (PEG) może mieć wpływ na miejsce akumulacji leku w organizmie człowieka oraz na wydajność celowania terapii (10.1016/j.biomaterials.2011.04.082). Najczęściej stosowanym glikolem polietylenowym do modyfikacji liposomów jest polimer zakończony terminalną grupą metoksylową (-O-CH3) tzw. mPEG. Inne modyfikacje takie jak terminalna grupa aminowa (-NH2), czy też grupa karboksylowa (-COOH) stosowane są zazwyczaj jako półprodukty do dalszej modyfikacji białkami lub innymi cząsteczkami naprowadzającymi liposomy na określoną komórkę (https://doi.org/10.1038/s41598-021-86860-5) a ich potencjał do generowania ładunku powierzchniowego w zmiennym środowisku nowotworu był do tej pory pomijany. Z drugiej strony wiadome jest, że ładunek powierzchniowy liposomów może wpływać na miejsce ich akumulacji w organizmie, a w szczególności na ich akumulację w tkankach nowotworowych. Badania pokazują, że liposomy obdarzone ładunkiem dodatnim charakteryzują się lepszą akumulacją i penetracją nośnika w tkankach guza oraz lepszym wychwytem komórkowym w porównaniu z nanocząstkami obojętnymi i obdarzonymi ładunkiem ujemnym (https://doi.org/10.1016/i.nantod.2016.04.008). Obecność ładunku dodatniego na powierzchni liposomów jest zatem kluczowa w zapewnieniu wydajnego i specyficznego transportu do tkanek nowotworowych.
Emetyna jest lekiem niskocząsteczkowym wykazującym działanie przeciwnowotworowe. Lek ten był testowany w badaniach klinicznych fazy I i II jako oddzielny chemioterapeutyk, a także w połączeniu z innymi terapeutykami. Badania wykazały, że indeks terapeutyczny emetyny jest bardzo ograniczony, a zwiększenie dawki powodowało wystąpienie toksyczności sercowej co zahamowało dalszy rozwój prac nad stosowaniem emetyny w terapii przeciwnowotworowej. Pomimo to szereg badań wskazuje na wysoki potencjał emetyny w leczeniu szeregu nowotworów ze szczególnym uwzględnieniem raka piersi (doi:10.17179/excli2016-280; DOI:10.3892/or.2019.7290). Pojawia się zatem duża potrzeba poszukiwania nośników leków zdolnych do wydajnego wiązania i przenoszenie emetyny. Dotychczasowe badania wykazały, że emetyna pomimo lekkich właściwości zasadowych ładuje się do nośników lipidowych z użyciem gradientu pH i gradientu stężeń jedynie na poziomie 50%. Dodatkowo podczas ładowania potencjał Zeta liposomów znacznie rośnie co sugeruje wiązanie się emetyny z powierzchnią liposomów, a nie ładowanie leku do jego wnętrza (DOI:10.1016/j.ejpb.2014.04.002). Oddziaływanie powierzchniowe skutkuje natomiast szybkim wyrzutem leku w obecności białek osocza, a tym samym brak ochronnego działania nośnika i wysoką toksyczność terapii.
Istota rozwiązania według pierwszego wynalazku polega na tym, że liposom złożony jest z trzech głównych lipidów, to jest DPPC (1,2-dipalmitoilo-sn-glicero-3-fosfocholina) w ilości od 48,6 do 70,7% wagowych, cholesterolu w ilości od 18,3 do 18,6% wagowych, DSPE-PEG(2000)aminy w ilości od 10,6 do 10,7% wagowych oraz co najmniej jednego lipidu z grupy obejmującej DOPC (dioleoilofosfatydyloglicerol) i DOPG(dioleoilofosfatydylocholina), przy czym zawartość DOPC (dioleoilofosfatydyloglicerol) w liposomie wynosi nie więcej niż 22,4% wagowych, a zawartość DOPG (dioleoilofosfatydylocholina) w liposomie wynosi nie więcej niż 22,6% wagowych. Korzystnie zawartość DOPC (dioleoilofosfatydyloglicerol) w liposomie mieści się w przedziale od 7,5 do 22,4% wagowych. Korzystnie zawartość DOPG (dioleoilofosfatydylocholina) w liposomie mieści się w przedziale od 7,5 do 22,6% wagowych. Korzystnie powierzchnia zewnętrzna liposomu pokryta jest warstwą albuminy z surowicy ludzkiej (HSA).
Główną zaletę zmodyfikowanych liposomów będących nośnikami leków stanowi fakt, iż dzięki dodatniemu ładunkowi generowanemu przez obecność terminalnej grupy aminowej następuje skuteczna akumulacja nośnika z lekiem w guzach litych, a tym samym terapia przeciwnowotworowa przy użyciu tychże leków jest dużo skuteczniejsza. Zostało to udowodnione w badaniach in vitro dla nanocząstek ładowanych emetyną i mitoksantronem oraz samym mitoksantronem. W przypadku tych badań uzyskano 3-4 razy wyższą skuteczność terapii, skutkującej zmniejszeniem guza przy zastosowaniu dwukrotnie niższej dawki w porównaniu z wolnymi lekami. Opracowane nośniki pozwalają na ładowanie emetyny na poziomie nawet powyżej 95% dla stosunku leku do lipidów na poziomie 0,1, co stanowi wartość dwukrotnie wyższą niż podawana w literaturze. Przy wyższym stężeniu początkowym leku liposomy pozwalają na uzyskanie nawet czterokrotnie wyższego stosunku leku do lipidów niż liposomy opisywane w publikacjach. Przyczyną tak dobrego załadunku jest specyficzna struktura lipidowa zawierająca terminalną grupę aminową w cząsteczce glikolu polietylenowego. Nośniki te zapewniają ładowanie emetyny do wnętrza liposomów, a nie osadzanie się jej na powierzchni na co wskazuje brak istotnych zmian wartości potencjału Zeta liposomów po procesie ładowania leku. Dodatkowe badania liposomów załadowanych emetyną w obecności albumin ludzkiej i szczurzej potwierdzają brak nagłego wyrzutu leku w warunkach badań in vitro. Nośniki te pozwalają również na wiązanie emetyny w obecności innych leków, takich jak mitoksantron i staurosporyna bez drastycznego spadku wartości współczynnika enkapsulacji %EE emetyny. Obecność 5 krotnego nadmiaru mitoksantronu (leku z grupy antracykin) pozwala zachować %EE emetyny na poziomie 95-99%, podczas gdy wartości literaturowych nośników liposomalnych zawierających mieszaninę antracykliny z emetyną w tych stężeniach wskazują na spadek %EE do wartości niższych od 30%. Nośniki te zapewniają także znaczne ograniczenie toksyczności emetyny zamkniętej w liposomach w stosunku do emetyny wolnej. Wskazują na dużo niższe wartości współczynnika LC50 dla leków zamkniętych w nośnikach. Wartość LC50 obliczana dla emetyny zamkniętej w liposomie jest po 24 h od dawkowania 12-krotnie wyższa od wartości obliczonej dla wolnego leku. Stwarza to możliwość znacznego ograniczenia toksyczności tego leku a tym samym umożliwienie stosowania tego leku w terapiach przeciwnowotworowych.
Rozwiązania według wynalazków zilustrowane zostały poniższymi przykładami wykonania oraz rysunkiem, gdzie:
Fig. 1.1. przedstawia przykładowy rozkład wielkości promieni hydrodynamicznych liposomów 14pH EM po syntezie na urządzeniu mikroprzepływowym, mierzony za pomocą dynamicznego rozproszenia światła dla próbki rozcieńczonej 10 razy;
Fig. 1.2. - przykładowy rozkład wielkości promieni hydrodynamicznych liposomów 14pH EM po wymianie roztworu zewnętrznego na bufor PBS o pH 7,4, mierzony za pomocą dynamicznego rozproszenia światła dla próbki rozcieńczonej 10 razy;
Fig. 1.3. - przykładowy rozkład wielkości promieni hydrodynamicznych liposomów 14pH EM po ładowaniu emetyna i oczyszczaniu, mierzony za pomocą dynamicznego rozproszenia światła dla próbki rozcieńczonej 10 razy;
Fig. 1.4. - przykładowy rozkład potencjału Zeta dla liposomów 14 pH po syntezie na urządzeniu mikroprzepływowym, mierzony za pomocą dynamicznego rozproszenia światła dla próbki rozcieńczonej 20 razy;
Fig. 1.5. - przykładowy rozkład wielkości promieni hydrodynamicznych liposomów 14pH po wymianie roztworu zewnętrznego na bufor PBS o pH 7,4, mierzony za pomocą dynamicznego rozproszenia światła dla próbki rozcieńczonej 20 razy;
Fig. 1.6. - przykładowy rozkład potencjału Zeta dla liposomów 14 pH po ładowaniu leku i końcowym oczyszczaniu, mierzony za pomocą dynamicznego rozproszenia światła dla próbki rozcieńczonej 20 razy;
Fig. 1.7. - przykładowy rozkład wielkości promieni hydrodynamicznych liposomów 14HSA po syntezie na urządzeniu mikroprzepływowym, mierzony za pomocą dynamicznego rozproszenia światła dla próbki rozcieńczonej 10 razy;
Fig. 1.8. - przykładowy rozkład wielkości promieni hydrodynamicznych liposomów 14HSA po wymianie roztworu zewnętrznego na bufor PBS o pH 7,4, mierzony za pomocą dynamicznego rozproszenia światła dla próbki rozcieńczonej 10 razy,
Fig. 1.9. - przykładowy rozkład wielkości promieni hydrodynamicznych liposomów 14HSA po ładowaniu emetyną i oczyszczaniu, mierzony za pomocą dynamicznego rozproszenia światła dla próbki rozcieńczonej 10 razy;
Fig. 1.10. - przykładowy rozkład potencjału Zeta dla liposomów 14HSA po syntezie na urządzeniu mikroprzepływowym, mierzony za pomocą dynamicznego rozproszenia światła dla próbki rozcieńczonej 20 razy;
PL 249575 Β1
Fig. 1.11. - przykładowy rozkład wielkości promieni hydrodynamicznych liposomów 14HSA po wymianie roztworu zewnętrznego na bufor PBS o pH 7,4, mierzony za pomocą dynamicznego rozproszenia światła dla próbki rozcieńczonej 20 razy;
Fig. 1.12. - przykładowy rozkład potencjału Zeta dla liposomów 14HSA po ładowaniu leku i końcowym oczyszczaniu, mierzony za pomocą dynamicznego rozproszenia światła dla próbki rozcieńczonej 20 razy;
Fig. 1.13. - przykładowy rozkład wielkości promieni hydrodynamicznych liposomów HPCD02 po syntezie na urządzeniu mikroprzepływowym, mierzony za pomocą dynamicznego rozproszenia światła dla próbki rozcieńczonej 10 razy;
Fig. 1.14. - przykładowy rozkład wielkości promieni hydrodynamicznych liposomów HPCD02 po wymianie roztworu zewnętrznego na bufor PBS o pH 7,4, mierzony za pomocą dynamicznego rozproszenia światła dla próbki rozcieńczonej 10 razy;
Fig. 1.15. - przykładowy rozkład wielkości promieni hydrodynamicznych liposomów HPCD02 po ładowaniu emetyną i oczyszczaniu, mierzony za pomocą dynamicznego rozproszenia światła dla próbki rozcieńczonej 10 razy;
Fig. 1.16. - przykładowy rozkład potencjału Zeta dla liposomów HPCD02 po syntezie na urządzeniu mikroprzepływowym, mierzony za pomocą dynamicznego rozproszenia światła dla próbki rozcieńczonej 20 razy;
Fig. 1.17. - przykładowy rozkład potencjału Zeta dla liposomów HPCD02 po dializie w buforze PBS o pH 7,4 przed etapem ładowania leku, mierzony za pomocą dynamicznego rozproszenia światła dla próbki rozcieńczonej 20 razy;
Fig. 1.18. - przykładowy rozkład potencjału Zeta dla liposomów HPCD02 po ładowaniu leku i końcowym oczyszczaniu, mierzony za pomocą dynamicznego rozproszenia światła dla próbki rozcieńczonej 20 razy;
Fig. 2.1. - porównanie toksyczności po 24 godzinach ekspozycji na emetynę i liposomy z emetyną;
Fig. 2.2. - porównanie toksyczności po 48 godzinach ekspozycji na emetynę i liposomy 14pH EM z emetyną;
Fig. 2.3. - strukturę emetyny znakowanej fluorescencyjnie;
Fig. 2.4. - wyniki 4 godzinnej absorbcji emetyny oraz emetyny w liposomach 15pH EM, 2 dniowe larwy zanurzone w: buforze (E3), roztworze emetyny znakowanej fluorescencyjnie (EM) oraz emetyny znakowanej fluorescencyjnie zamkniętej w liposomach typu pH. (LIPO+EM);
Fig. 3.1. - przykładowy rozkład wielkości promieni hydrodynamicznych liposomów 15pH MX po syntezie na urządzeniu mikroprzepływowym, mierzony za pomocą dynamicznego rozproszenia światła dla próbki rozcieńczonej 10 razy.
Fig. 3.2. - przykładowy rozkład wielkości promieni hydrodynamicznych liposomów 15pH MX po wymianie roztworu zewnętrznego na bufor PBS o pH 7,4, mierzony za pomocą dynamicznego rozproszenia światła dla próbki rozcieńczonej 10 razy.
Przykład I
Tabela 1. Skład lipidowy fazy organicznej i fazy wodnej stosowane do syntezy liposomów wraz z warunkami mikroprzepływu.
Lp. Kod Skład Liposomów (stosunki molowe lipidów) Masy lipidów w fazie organicznej mg/ml Warunki przepływu Faza wodna
DP PC Choles terol DSPEPEG(200 0)NH2 DO PC D 0 P G
1 PH DPPC/Cholesterol/D SPE-PEG(2000)NH2 (1/0.5/0,04) 70, 7 18,61 10,74 - - FRR 5ml/min, TFR 9:1 350m M (NH4) 2SO4
PL 249575 Β1
L.p. Kod Skład Liposomów (stosunki molowe lipidów) Masy lipidów w fazie organicznej mg/ml Warunki przepływu Faza wodna
DP PC Choles terol DSPEPEG(200 0)NH2 DO PC D O P G
2 HPCD DPPC/Cholesterol/D SPE-PEG(2000)NH2 (1/0.5/0,04) 70, 7 18,61 10,74 - - FRR 5ml/min, TFR9:1 10 mg/ml HPCD w 350m M (NH4) 2SO4
3 DOPC DPPC/DSPEPEG(2000)NH2/Chol esterol/DOPC (0,7/0,04/0,5/0,3) 34 ,1 12,83 7,41 15, 7 FRR 5ml/min; TFR9:1 350m M (NH4) 2SO4 lub 250m M (NH4)2 SO4
4 DOPC _2 DPPC/DSPE- PEG(2000)NH2/Chol esterol/DOPC (0,9/0,04/0,5/0,2) 19 ,6 6,45 3,72 5,2 4 - FRR 5ml/min; TFR9:1 350 m M (NH4) 2SO4
5 DOPC _3 DPPC/DSPE- PEG(2000)NH2/Chol esterol/DOPC (0,9/0,04/0,5/0,1) 22 ,1 6,48 3,74 2,6 3 FRR 5ml/min; TFR9:1 350 m M (NH4) 2SO4
6 DOPC/ HPCD DPPC/DSPEPEG(2000)NH2/Chol esterol/DOPC (0,7/0,04/0,5/0,3) 17, 0 6,42 3,7 7,8 2 - FRR 5ml/min; TFR9:1 10 mg/ml HPCD w 250m M (NH4) 2SO4
7 DOPG DPPC/Cholesterol/D SPEPEG(2000)NH2/DOP G (0,7/0,5/0,04/0,3) 34, 0 12,8 7,4 - 15 ,8 FRR 5ml/min, g t 350 m M (NH4) 2SO4 lub 250m M (NH4)2 SO4
8 BpH DPPC/Cholesterol/D SPE-PEG(2000)NH2 (1/0,5/0,04) 70, 7 18,61 10,74 - - FRR 103 ml/min TFR 5:1 350 m M (NH4) 2SO4
PL 249575 Β1
Przykład II
Tabela 2. Przykładowe warunki ładowania liposomów chlorowodorkiem emetyny wraz z parametrami fizykochemicznymi (średnica hydrodynamiczna - HR, współczynnik polidyspersji - PDI) oraz współczynnikami enkapsulacji leków %EE.
L. Pł Kod liposomów Kod syntezy Faza wodna Warunki ładowania Stężenie lipidów P° syntezie [mg/ ml] Dodatek leku ładcwnale aktyw· ne HR (SD) PDI (SD) 'iS-'
gradient Temperatura [C] Czas [min] EM mg
pH pocz^tko * we pH końcowe
1 pH 14pH EM 350mM (NH4)2SO4 5,5 7,4 ©0 15 10 1 82, 05 1, 74 o.o 14 0,0 12
2 pH pH 01 EM m 350mM (NH4)2SO4 5,3 7,4 60 30 10 0.5 85, 12 0, 21 o.o 21 0,0 16 «śik ή n
3 pH pH 02 EM 350mM (ΝΗΦ5Ο4 2,62 8,5 60 15 10 0,5 80, 23 0, 77 0.0 17 0,0 07 sei.
4 pH pH 03 EM 350mM (NHdjzSOd 2,62 7,4 60 15 10 0,5 86. 45 1, 07 0.0 16 0.0 07
5 pH 293EM 350mM (NH4J2SO4 5,3 6,5 60 30 10,0 1,2 88, 63 0, 24 0,0 29 0,0 1
6 HPCD HPCD 02 EM 10 mg*ml HPCD w 350mM (NH4)2SO4 5,3 7,4 60 30 10 1 87, 43 0, 13 0,0 19 0,0 17
7 HPCD HPCD D3 EM 10 mg/ml HPCD w 350mM [NH4J2SU4 5,3 8,5 60 30 10 0,4 86. 98 0. 65 0.0 21 0.0 2
8 pH/HSA 14 HSA EM 350mM (NH4)2SO4 5,3 7,4 60 30 10 1 82 1, 6 0.0 43 0.0 12
9 DO PC 167EM 250mM (NH4)2SO4 5,3 8,0 4 1440 7,00 1,2 90. 91 3, 39 0.0 65 0.0 27
1 0 DO PC 171EM G 250mM (NH4)2SO4 5,3 9,0 45 1440 7,00 1,2 89, 64 3, 24 0,0 75 0,0 2 gggy
1 1 DO PC 173EM L C 250mM (NH4)2SO4 5,3 8,5 4 1440 7,00 1,2 95, 24 1, 43 0,0 9 0,0 31
1 2 DO PC 173EM L 1/2 250mM (NH4)2SO4 5,3 8,5 4 1440 7,00 0,6 88, 8 0. 51 0,0 77 0,0 1
1 3 DO PC 173EM P 3/4 250mM (NH4)2SOa 5,3 8,5 22 1440 7,00 0,9 95, 88 3, 06 0,0 5 0,0 19
1 4 DO PC 173EM P 1/2 250mM (NH4)2SO4 5.3 8.5 22 1440 7.00 1.2 86, 9 3, 35 0,0 62 0,0 49
1 5 DO PC 181EM L 250mM (NH4)2SO4 5,3 8,0 4 1440 3,5 1,2 10 3,5 0, 71 o.o 18 0,0 23 98,6’
1 6 DOPC/H PCD 201 EM CD (1:3) C G 250rmM (NH4)2SO4 5,3 9,0 60 60 7 1,3 10 5,2 0,0 02
1 7 DOPC/H PCD 201 EM CD (1:3) C L 250rmM (NH4)2SO4 5,3 9,0 4 1440 7 1,3 10 5,7 0,0 06
1 8 DOPG S264EM 250mM (NH4)2SO4 5.3 8.5 4 1440 7 1.2 69, 72 1, 23 0,0 52 0,0 09
1 9 DOPG S273EM 250mM (NH4)2SO4 5.3 8.5 60 15 7 1.2 89, 05 0, 58 0,0 36 0,0 29
2 0 DOPG S274EM 250mM (NH4)2SO4 5.3 8.5 60 30 7 1.2 87, 33 0, 86 o.o 48 0,0 11
2 1 DOPG 294EM 350mM (ΝΗ4)?3Ο4 5,3 8,5 60 30 7 1,2 84, 85 1, 96 0.1 15 0,0
2 2 BpH BES 350mM (NH^SGl 5,3 7,4 4 1440 10 1 10 8,9 1, 23 0.1 2 0,0 26 -Λ Χ.Α
Przykład VII
Porównanie toksyczności samej emetyny i emetyny w liposomach 14pH EM - badania in vivo
W celu porównania toksyczności emetyny i liposomów 14pH EM z emetyną przeprowadzono test toksyczności ostrej na Zebrafish (Danio rerio). Badanie miało na celu określenie ostrej lub śmiertelnej toksyczności preparatów na stadia embrionalne ryb. W skrócie, larwy Zebrafish 2 dpf poddano działaniu Emetyny i liposomów 14pH EM z emetyną przez okres 24 i 48 godzin w zakresie stężeń od 0,73 μΜ do 125 μΜ obliczonych dla emetyny. W eksperymencie zastosowano układ statyczny, gdyż zmiany stężeń roztworów nie przekraczały zakresu 20% wartości stężeń nominalnych. Wodą do hodowli zarodków oraz przygotowania roztworów była pożywka do hodowli zarodków (roztwór E3: 5 mmol/L NaCI, 0,17 mmol/L KCI, 0,33 mmol/L CaCh i 0,33 mmol/L MgSCU, niezawierający błękitu metylenowego, i o wartości pH około 7,2). Eksperyment przeprowadzono na 24-studzienkowych płytkach, po 5 zarodków na studzienkę, po 10 na grupę. Płytkę przykryto i trzymano w inkubatorze ustawionym na 28 ± 0,5°C z okresem światła/ciemności 12/12 godzin. W okresie narażenia larwy śledzono co 24 godziny, a cztery obserwacje wzrokowe, w tym: koagulację zapłodnionych jaj, brak powstawania somitów, brak oddzielenia pączka ogonowego od woreczka żółtkowego i brak bicia serca, rejestrowano jako wskaźniki śmiertelności. Pod koniec okresu narażenia (24 i 48 h) określono toksyczność ostrą na podstawie pozytywnego wyniku dowolnej z czterech zarejestrowanych obserwacji wzrokowych i obliczono LC50. Rysunek l_9 przedstawia porównanie toksyczności po 24 godzinach ekspozycji na emetynę i liposomy z emetyną. Połowa maksymalnego stężenia śmiertelnego (LC50) obliczona dla emetyny wyniosła 7,207 gM, natomiast dla emetyny zamkniętej w liposomach 14pH EM wyniosła 87,49 gM czyli 12 razy więcej. Wyniki przedstawione zostały na rysunku Fig. 2.1. i Fig. 2.2. W próbie przedstawionej na rysunku Fig. 2.1. połowa maksymalnego stężenia śmiertelnego (LC50) obliczona dla emetyny wyniosła 7,207 gM, natomiast dla emetyny zamkniętej w liposomach 14pH EM wyniosła 87,49 gM czyli 12 razy więcej. Natomiast w próbie zilustrowanej rysunkiem Fig. 2.2. połowa maksymalnego stężenia śmiertelnego (LC50) obliczona dla emetyny wyniosła 5,636 gM, natomiast dla emetyny zamkniętej w liposomach wyniosła 31,04 gM czyli 5,5 razy więcej.
Przykład V III
Porównanie wchłaniania samej emetyny i emetyny w liposomach 14 pH EM - badania in vivo Dla porównania wchłaniania emetyny i liposomów typu pH z emetyną larwy Zebrafish eksponowano na znakowaną fluorescencyjnie wolną emetynę i fluorescencyjnie znakowaną emetynę zamkniętą w liposomach typu pH (synteza tożsama z syntezą 14pHEM) przez okres 4 i 48 godzin w zakresie stężeń od 0,73 gM do 14,7 gM dla emetyny i 4,41 gM do 8,82 gM dla liposomów typu pH z emetyną fluorescencyjną w przeliczeniu na emetynę. Zdjęcia ryb z każdej grupy wykonano w końcowym punkcie czasowym, aby monitorować intensywność fluorescencji pochodzącej z wchłoniętej emetyny. Do obserwacji wykorzystano stereoskopowy mikroskop optyczny Discovery V8 oraz sprzęt firmy Zeiss. Struktura emetyny znakowanej fluorescencyjnie użytej w eksperymencie została przedstawiona na Rysunku 3.1. Wyniki przedstawiono na Rysunkach 3.2. Ilość wchłoniętej emetyny zwiększa się wraz z dawką (1,47, 3,67, 7,35 gM (1,2,5, 5 gg/ml)). Obserwuje się ją w obrębie żółtka larw, zwłaszcza w okolicy wątroby i jelita. Jednak gdy emetyna znajdowała się w liposomach pH, wchłanianie znacznie wzrosło. Poza żółtkiem, pewne ilości wykryto w części głowy ryb. Stężenie emetyny zamkniętej w liposomach wynosiło 4,41 i 8,82 gM.
W wyniku przeprowadzonych obserwacji należy stwierdzić, że liposomy pH poprawiają bezpieczeństwo stosowania emetyny oraz jej wchłanianie.

Claims (4)

  1. Zastrzeżenia patentowe
    1. Modyfikowany liposom do przenoszenia leków, znamienny tym, że złożony jest z trzech głównych lipidów, to jest DPPC (1,2-dipalmitoilo-sn-glicero-3-fosfocholina) w ilości od 48,6 do 70,7% wagowych, cholesterolu w ilości od 18,3 do 18,6% wagowych, DSPE-PEG(2000)aminy (sól amonowa 1,2-distearoilo-sn-glicero-3-fosfoetanoloamina-N-[amino(glikol polietylenowy)2000]) w ilości od 10,6 do 10,7% wagowych oraz co najmniej jednego lipidu z grupy obejmującej DOPC (dioleoilofosfatydyloglicerol) i DOPG (dioleoilofosfatydylocholina), przy czym zawartość DOPC (dioleoilofosfatydyloglicerol) w liposomie wynosi nie więcej niż 22,4% wagowych, a zawartość DOPG (dioleoilofosfatydylocholina) w liposomie wynosi nie więcej niż 22,6% wagowych.
  2. 2. Liposom według zastrz. 1, znamienny tym, że zawartość DOPC (dioleoilofosfatydyloglicerol) w liposomie mieści się w przedziale od 7,5 do 22,4% wagowych.
  3. 3. Liposom według zastrz. 1 , znamienny tym, że zawartość DOPG (dioleoilofosfatydylocholina) w liposomie mieści się w przedziale od 7,5 do 22,6% wagowych.
  4. 4. Liposom według zastrz. 1, znamienny tym, że jego powierzchnia zewnętrzna pokryta jest warstwą albuminy z surowicy ludzkiej (HSA).
PL444722A 2023-05-03 2023-05-03 Modyfikowany liposom do przenoszenia leków, zwłaszcza o działaniu antynowotworowym PL249575B1 (pl)

Priority Applications (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PL444722A PL249575B1 (pl) 2023-05-03 2023-05-03 Modyfikowany liposom do przenoszenia leków, zwłaszcza o działaniu antynowotworowym
CN202480044870.0A CN121443273A (zh) 2023-05-03 2024-05-03 用于递送药物的经修饰脂质体、脂质体用于递送药物特别是具有抗癌活性的药物的用途、以及将药物特别是具有抗癌活性的药物负载到脂质体的方法
EP24740621.8A EP4704811A1 (en) 2023-05-03 2024-05-03 Modified liposome for drug delivery, use of liposome for drug delivery, especially with anti-cancer activity, and ways to load liposome with drugs, especially with anti-cancer activity
PCT/PL2024/000024 WO2024228633A1 (en) 2023-05-03 2024-05-03 Modified liposome for drug delivery, use of liposome for drug delivery, especially with anti-cancer activity, and ways to load liposome with drugs, especially with anti-cancer activity
IL324425A IL324425A (en) 2023-05-03 2024-05-03 Modified liposome for drug delivery, use of liposome for drug delivery, especially with anticancer activity, and methods of loading liposome with drugs, especially with anticancer activity

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PL444722A PL249575B1 (pl) 2023-05-03 2023-05-03 Modyfikowany liposom do przenoszenia leków, zwłaszcza o działaniu antynowotworowym

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL444722A1 PL444722A1 (pl) 2024-11-04
PL249575B1 true PL249575B1 (pl) 2026-05-11

Family

ID=91898578

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL444722A PL249575B1 (pl) 2023-05-03 2023-05-03 Modyfikowany liposom do przenoszenia leków, zwłaszcza o działaniu antynowotworowym

Country Status (5)

Country Link
EP (1) EP4704811A1 (pl)
CN (1) CN121443273A (pl)
IL (1) IL324425A (pl)
PL (1) PL249575B1 (pl)
WO (1) WO2024228633A1 (pl)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017096139A1 (en) * 2015-12-03 2017-06-08 Boston Medical Center Corporation B cell-based cancer immunotherapy
EP3530266A1 (en) * 2018-02-27 2019-08-28 LipoCoat B.V. A lipid-based coating composition, and an object having a lipid-based coating
PL438742A1 (pl) * 2021-08-14 2023-02-20 Bs Biotechna Spółka Z Ograniczoną Odpowiedzialnością Liposom kationowy wiążący i stabilizujący RNA, jego zastosowanie i sposób ładowania liposomu emetyną

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101209243B (zh) * 2006-12-29 2010-12-08 石药集团中奇制药技术（石家庄）有限公司 一种脂质体药物及其制备方法
WO2013086526A1 (en) * 2011-12-09 2013-06-13 The Regents Of The University Of California Liposomal drug encapsulation
CN105451720A (zh) * 2013-03-13 2016-03-30 马林克罗特有限公司 用于癌症疗法的脂质体奥沙利铂组合物

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017096139A1 (en) * 2015-12-03 2017-06-08 Boston Medical Center Corporation B cell-based cancer immunotherapy
EP3530266A1 (en) * 2018-02-27 2019-08-28 LipoCoat B.V. A lipid-based coating composition, and an object having a lipid-based coating
PL438742A1 (pl) * 2021-08-14 2023-02-20 Bs Biotechna Spółka Z Ograniczoną Odpowiedzialnością Liposom kationowy wiążący i stabilizujący RNA, jego zastosowanie i sposób ładowania liposomu emetyną

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHEUNG CCL, AL-JAMAL WT: "Int J Pharm. 2019 Jul 20;566:687-696", STERICALLY STABILIZED LIPOSOMES PRODUCTION USING STAGGERED HERRINGBONE MICROMIXER: EFFECT OF LIPID COMPOSITION AND PEG-LIPID CONTENT, DOI: 10.1016/j.ijpharm.2019.06.033 *

Also Published As

Publication number Publication date
PL444722A1 (pl) 2024-11-04
CN121443273A (zh) 2026-01-30
IL324425A (en) 2026-01-01
EP4704811A1 (en) 2026-03-11
WO2024228633A1 (en) 2024-11-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Ismail et al. Targeted liposomes for combined delivery of artesunate and temozolomide to resistant glioblastoma
Long et al. Alendronate-functionalized hypoxia-responsive polymeric micelles for targeted therapy of bone metastatic prostate cancer
Dong et al. Self-assembly of amphiphilic phospholipid peptide dendrimer-based nanovectors for effective delivery of siRNA therapeutics in prostate cancer therapy
CN112236134B (zh) 类胡萝卜素组合物及其用途
ES3062820T3 (en) Platinum complexes and uses thereof
Jang et al. Nanovesicle-mediated systemic delivery of microRNA-34a for CD44 overexpressing gastric cancer stem cell therapy
Chen et al. Alendronate/folic acid-decorated polymeric nanoparticles for hierarchically targetable chemotherapy against bone metastatic breast cancer
Long et al. Azo-inserted responsive hybrid liposomes for hypoxia-specific drug delivery
BR112017002767B1 (pt) Composição de antifolato lipossomal, seu uso, método de preparação da mesma e kit
Saw et al. Hyper-cell-permeable micelles as a drug delivery carrier for effective cancer therapy
US10272041B2 (en) Acid stable liposomal compositions and methods for producing the same
JP2012529501A (ja) ホスファチジルエタノールアミンを含む音響感受性薬物送達粒子
US20140010879A1 (en) Compositions and methods of treating therapy resistant cancer and uses thereof
KR20230035622A (ko) 리포좀 제형
Zhu et al. Effective therapy of advanced breast cancer through synergistic anticancer by paclitaxel and P-glycoprotein inhibitor
PL226015B1 (pl) Liposomowy preparat zawierajacy przeciwnowotworowa substancje aktywna, sposob jego wytwarzania i zawierajaca go kompozycja farmaceutyczna
Paolino et al. Improved anti-breast cancer activity by doxorubicin-loaded super stealth liposomes
Elhabak et al. Intra-vaginal gemcitabine-hybrid nanoparticles for effective cervical cancer treatment
Fang et al. Enhanced lymphatic delivery of nanomicelles encapsulating CXCR4-recognizing peptide and doxorubicin for the treatment of breast cancer
Tanzadehpanah et al. AS1411 aptamer improves therapeutic efficacy of PEGylated nanoliposomes loaded with gefitinib in the mice bearing CT26 colon carcinoma
ES2897983T3 (es) Liposomas cargados con IPA-3 y procedimientos de uso de los mismos
Karamese et al. FOLFIRINOX-loaded immunoliposome-like particles for localized pancreatic cancer treatment
KR20240154694A (ko) 췌장암의 치료
US20220257514A1 (en) Monosaccharide-tagged nano-liposome drug delivery system, the manufacture and use for drug targeting delivery thereof
US10925831B2 (en) Liposomal formulations of platinum-acridine anticancer agents and methods thereof