PL249469B1 - Bioinokulat i sposób otrzymywania bioinokulatu - Google Patents

Bioinokulat i sposób otrzymywania bioinokulatu

Info

Publication number
PL249469B1
PL249469B1 PL449224A PL44922424A PL249469B1 PL 249469 B1 PL249469 B1 PL 249469B1 PL 449224 A PL449224 A PL 449224A PL 44922424 A PL44922424 A PL 44922424A PL 249469 B1 PL249469 B1 PL 249469B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
biochar
bioinoculum
bacteria
labedella
strain
Prior art date
Application number
PL449224A
Other languages
English (en)
Other versions
PL449224A1 (pl
Inventor
Katarzyna Hrynkiewicz
Edyta Deja-Sikora
Dominika Thiem
Ewa Węgrzyn
Original Assignee
Uniwersytet Mikołaja Kopernika W Toruniu
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Uniwersytet Mikołaja Kopernika W Toruniu filed Critical Uniwersytet Mikołaja Kopernika W Toruniu
Priority to PL449224A priority Critical patent/PL249469B1/pl
Priority to EP25154284.1A priority patent/EP4678734A1/en
Publication of PL449224A1 publication Critical patent/PL449224A1/pl
Publication of PL249469B1 publication Critical patent/PL249469B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
    • C05F—ORGANIC FERTILISERS NOT COVERED BY SUBCLASSES C05B, C05C, e.g. FERTILISERS FROM WASTE OR REFUSE
    • C05F11/00—Other organic fertilisers
    • C05F11/02—Other organic fertilisers from peat, brown coal, and similar vegetable deposits
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
    • C05F—ORGANIC FERTILISERS NOT COVERED BY SUBCLASSES C05B, C05C, e.g. FERTILISERS FROM WASTE OR REFUSE
    • C05F11/00—Other organic fertilisers
    • C05F11/08—Organic fertilisers containing added bacterial cultures, mycelia or the like
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
    • C05F—ORGANIC FERTILISERS NOT COVERED BY SUBCLASSES C05B, C05C, e.g. FERTILISERS FROM WASTE OR REFUSE
    • C05F17/00—Preparation of fertilisers characterised by biological or biochemical treatment steps, e.g. composting or fermentation
    • C05F17/20—Preparation of fertilisers characterised by biological or biochemical treatment steps, e.g. composting or fermentation using specific microorganisms or substances, e.g. enzymes, for activating or stimulating the treatment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
    • C05G—MIXTURES OF FERTILISERS COVERED INDIVIDUALLY BY DIFFERENT SUBCLASSES OF CLASS C05; MIXTURES OF ONE OR MORE FERTILISERS WITH MATERIALS NOT HAVING A SPECIFIC FERTILISING ACTIVITY, e.g. PESTICIDES, SOIL-CONDITIONERS, WETTING AGENTS; FERTILISERS CHARACTERISED BY THEIR FORM
    • C05G5/00—Fertilisers characterised by their form
    • C05G5/10—Solid or semi-solid fertilisers, e.g. powders
    • C05G5/12—Granules or flakes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
    • C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
    • C12N11/04—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier entrapped within the carrier, e.g. gel or hollow fibres

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)

Abstract

Przedmiotem zgłoszenia jest bioinokulat zawierający szczep bakterii endofitycznej oraz biowęgiel, mający zastosowanie jako biopreparat o przeznaczeniu rolniczym. Bioinokulat zawierający szczep bakterii endofitycznej oraz biowęgiel charakteryzuje się tym, że szczep bakterii należy do rodzaju Labedella. Przedmiotem zgłoszenia jest także sposób otrzymywania bioinokulatu zawierającego szczep bakterii endofitycznej oraz biowęgiel, mający zastosowanie jako biopreparat o przeznaczeniu rolniczym. Sposób otrzymywania bioinokulatu według wynalazku powyżej charakteryzuje się tym, że wyjściową płynną hodowlę bakterii rodzaju Labedella przenosi się do sterylnej płynnej pożywki w proporcji 1 ml hodowli bakteryjnej do 100 ml pożywki i inkubuje na wytrząsarce przy 120 - 145 rpm w temperaturze w zakresie 24°C - 26°C do osiągnięcia przez bakterie logarytmicznej fazy wzrostu, następnie biowęgiel przesiewa się przez sito o oczkach co najwyżej 0,75 mm, po czym biowęgiel miesza się z zawiesiną bakteryjną w stosunku 5:100 w/v w warunkach sterylnych i wytrząsa przez 2h na wytrząsarce przy 120 - 145 rpm w temperaturze w zakresie 24°C - 26°C, następnie dodaje się 2% w/v alginianu sodu w warunkach sterylnych i kontynuuje wytrząsanie przez 1h do uzyskania jednorodnej mieszaniny, otrzymaną zawiesinę wkrapla się do wymieszanego i wysterylizowanego 2% w/v roztworu chlorku wapnia na mieszadle magnetycznym z wysokości od 15 cm do 20 cm, następnie otrzymane granulki pozostawia się w roztworze chlorku wapnia na 24h w 4°C do stwardnienia, a następnie zebrane granulki przepłukuje się sterylną wodą i poddaje liofilizacji przez 12 – 20 h.

Description

Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest bioinokulat zawierający szczep bakterii endofitycznej oraz biowęgiel, mający zastosowanie jako biopreparat o przeznaczeniu rolniczym. Przedmiotem wynalazku jest także sposób otrzymywania bioinokulatu zawierającego szczep bakterii endofitycznej oraz biowęgiel, mający zastosowanie jako biopreparat o przeznaczeniu rolniczym.
Bakterie endofityczne to mikroorganizmy żyjące wewnątrz tkanek roślin, nie wywołując u nich chorób. Są to bakterie, które zasiedlają wnętrza roślin, takie jak liście, łodygi, korzenie czy nasiona, i utrzymują z roślinami symbiotyczne, często korzystne dla obu stron relacje. Dostarczają roślinom różnych korzyści, takich jak zwiększona odporność na stres, lepsze przyswajanie składników odżywczych, czy produkcja hormonów wzrostu. Stosowane jako biologiczne nawozy zwiększają efektywność przyswajania składników odżywczych przez rośliny.
Biowęgiel wykorzystywany jest jako nośnik dla mikroorganizmów w celach rolniczych i środowiskowych, np. w bioremediacji gleby. Dzięki szorstkiej i porowatej powierzchni biowęgla mikroorganizmy mają zapewnioną przestrzeń do kolonizacji.
Z chińskiego opisu patentowego CN117363527A znane jest inokulum drobnoustrojów zawierające Pseudomonas fluorescens, Enterobacter carcinomatosis oraz Azotobacter bailii i biowęgiel. W tym wynalazku biowęgiel ze skórki granatu stosuje się do współhodowli z mikroorganizmami w celu adsorbowania i unieruchomienia mikroorganizmów, dzięki czemu działanie ochronne biowęgla na mikroorganizmy w glebie zostaje wzmocnione. Metoda otrzymywania inokulum polega na hodowli trzech szczepów bakterii (Pseudomonas fluorescens, Enterobacter carcinomatosis i Azotobacter bailii), połączeniu ich w równych proporcjach oraz dodaniu wysterylizowanego biowęgla w proporcji 100 g biowęgla na 1 L pożywki fermentacyjnej i wspólnej hodowli w temperaturze 28-30 st.C na wytrząsarce, przy obrotach 150-200 obr/min przez 28-30 dni, po czym następuje suszenie w celu uzyskania środka mikrobiologicznego.
Z chińskiego opisu patentowego CN117487715A znane jest inokulum drobnoustrojów na bazie biowęgla ze słomy kukurydzianej zawierające szczep Pantoea ZHJ28 i sposób wytwarzania inokulum drobnoustrojów na bazie biowęgla. Stosunek biowęgla do czynnika mikrobiologicznego wynosi 0,5-1 g do 2,5 ml, a stężenie komórek drobnoustroju wynosi od 1x10A8 do 1x10A9 cfu/g. Metoda przygotowania inokulum drobnoustrojów na bazie biowęgla obejmuje hodowanie szczepu Pantoea ZHJ28, przygotowanie biowęgla, a następnie mieszanie i wspólną fermentację biowęgla i czynnika mikrobiologicznego. Inokulum drobnoustrojów na bazie biowęgla można zastosować do rekultywacji gleby skażonej mikroplastikiem i wspomagania wzrostu upraw, zwłaszcza orzeszków ziemnych. Eksperymenty wykazały, że poprawia parametry wzrostu orzeszków ziemnych i fotosyntezę w porównaniu do kontroli.
Celem wynalazku jest dostarczenie naturalnego dla środowiska bioinokulatu opartego na bakterii endofitycznej w połączeniu z biowęglem oraz opracowanie nowoczesnego sposobu formulacji takiego bioinokulatu.
Istotą wynalazku jest bioinokulat zawierający szczep bakterii endofitycznej oraz biowęgiel charakteryzujący się tym, że szczep bakterii należy do rodzaju Labedella. Bakterie Labedella uczestniczą w biodegradacji zanieczyszczeń organicznych w glebie, pomagając w oczyszczaniu środowiska rolniczego z toksyn i zanieczyszczeń. Labedella uczestniczy również w detoksykacji metali ciężkich. Bakterie te współdziałają z nawozami poprawiając ich efektywność i ograniczając stosowanie nawozów chemicznych oraz wspierają rośliny w warunkach stresu.
Korzystnym jest, gdy bioinokulat zawiera biowęgiel i szczep bakterii Labedella w proporcji 5:100 w/v. Taki stosunek wagowo-objętościowy zapewnia odpowiednią koncentrację bakteryjną.
Korzystnym jest, gdy wielkość cząstek biowęgla wynosi co najwyżej 0,75 mm, korzystnie w zakresie 0,50 mm - 0,75 mm. Takie rozdrobnienie biowęgla zapewnia jego łatwiejsze łączenie się z zawiesiną bakteryjną i uzyskanie jej jednorodności.
Korzystnym jest, gdy bioinokulat jest w postaci granulatu.
Bioinokulat według wynalazku poprawia wzrost i rozwój roślin oraz zwiększa plony i podnosi tolerancję roślin na niekorzystne warunki środowiskowe. Opracowany bioinokulat prezentuje nowatorskie podejście łączące dwa przyjazne dla środowiska elementy: bakterie Labedella promujące wzrost roślin i biowęgiel.
Istotą wynalazku jest również sposób otrzymywania bioinokulatu według wynalazku powyżej, charakteryzujący się tym, że wyjściową płynną hodowlę bakterii rodzaju Labedella przenosi się do sterylnej płynnej pożywki w proporcji 1 ml hodowli bakteryjnej do 100 ml pożywki i inkubuje na wytrząsarce przy 120-145 rpm w temperaturze w zakresie 24-26°C do osiągnięcia przez bakterie logarytmicznej fazy wzrostu. Następnie biowęgiel przesiewa się przez sito o oczkach co najwyżej 0,75 mm, aby łatwo łączył się on z zawiesiną bakteryjną. Następnie biowęgiel miesza się z zawiesiną bakteryjną w stosunku 5:100 w/v w warunkach sterylnych i wytrząsa przez 2 h na wytrząsarce przy 120-145 rpm w temperaturze w zakresie 24-26°C. Następnie dodaje się 2% w/v alginianu sodu w warunkach sterylnych i kontynuuje wytrząsanie przez 1 h, do uzyskania jednorodnej mieszaniny. Otrzymaną zawiesinę wkrapla się do wymieszanego i wysterylizowanego 2% w/v roztworu chlorku wapnia na mieszadle magnetycznym z wysokości od 15 cm do 20 cm. Otrzymane granulki pozostawia się w roztworze chlorku wapnia na 24 h w 4°C do stwardnienia. Zebrane granulki przepłukuje się sterylną wodą i poddaje liofilizacji przez 12-20 h. Dodanie alginianu sodu stabilizuje zawiesinę bakteryjną, zaś wkraplanie do roztworu chlorku wapnia i niskie rozdrobnienie biowęgla umożliwia utworzenie równomiernych granulek.
Korzystnym jest, gdy wyjściowa płynna hodowla bakterii rodzaju Labedella ma gęstość optyczną równą 1. Przy tej wartości liczba komórek bakteryjnych wynosi 3 x 10Λ8 CFU/ml. Utrzymanie OD=1 sprzyja efektywnej produkcji bioinokulatu, ponieważ zapewnia odpowiednią ilość żywych i aktywnych komórek bakteryjnych, które są niezbędne do skutecznego otrzymania bioinokulatu.
Korzystnym jest, gdy jako płynną pożywkę stosuje się pożywkę R2A. Pożywka R2A redukuje stres bakteryjny oraz zapewnia optymalny wzrost drobnoustrojów.
Sposób wytwarzania bioinokulatu według wynalazku umożliwia uzyskanie stabilnych granulek, które mogą być używane jako preparat do wzbogacenia gleby, na której uprawiane są rośliny wykorzystywane w rolnictwie. Otrzymuje się bioinokulat zwiększający plony i podnoszący tolerancję na niekorzystne warunki środowiskowe. Opracowany bioinokulat ma zastosowanie w niekorzystnych warunkach środowiskowych (stres abiotyczny), np. susza oraz dla różnych roślin. Metodologia jego tworzenia jest uniwersalna. W jednym bioinokulacie zastosowano bakterię Labedella promującą wzrost roślin oraz biowęgiel, uzyskując podwójną korzyść dla wzrostu i rozwoju roślin.
Wynalazek przedstawiono poniżej w przykładach jego wykonania, które mają charakter ilustracyjny i w żadnej mierze nie ograniczający zastrzeganego wynalazku.
Przykład I
Bioinokulat według wynalazku stanowi granulat zawierający szczep bakterii Labedella endophytica oraz biowęgiel o zawartości 5 g biowęgla w 100 ml zawiesiny bakteryjnej szczepu Labedella endophytica. Bioinokulat zawiera cząstki biowęgla o wielkości 0,50 mm - 0,75 mm.
Przykład II
Bioinokulat według wynalazku stanowi granulat zawierający szczep bakterii Labedella endophytica oraz biowęgiel o zawartości 10 g biowęgla w 200 ml zawiesiny bakteryjnej szczepu Labedella endophytica. Bioinokulat zawiera cząstki biowęgla o wielkości 0,30 mm - 0,55 mm.
Przykład III
Sposób otrzymywania bioinokulatu według wynalazku zawiera następujące etapy:
Przygotowanie zawiesiny bakteryjnej szczepu Labedella endophytica:
ml płynnej nocnej hodowli bakterii Labedella endophytica o wartości gęstości optycznej OD=1 przenosi się do 100 ml sterylnej płynnej pożywki R2A. Gęstość optyczna OD jest mierzona na densytometrze. Wartość OD=1 świadczy o komórkach bakteryjnych w liczbie 3 x 10Λ8 CFU/ml. Zawiesinę bakteryjną inkubuje się przez 18 h na wytrząsarce przy 120 rpm w temperaturze 25°C do osiągnięcia przez bakterie logarytmicznej fazy wzrostu.
Przygotowanie biowęgla:
Biowęgiel przesiewa się przez sito o oczkach < 0,75 mm. Wykorzystuje się frakcję biowęgla o wymiarach 0,50 mm - 0,75 mm.
Przygotowania bioinokulatu:
g biowęgla miesza się z 100 ml zawiesiny bakteryjnej szczepu Labedella endophytica w warunkach sterylnych i wytrząsa przez 2 h na wytrząsarce przy 120 rpm w temperaturze 25°C. Następnie dodaje się 2 g alginianu sodu w warunkach sterylnych i kontynuuje wytrząsanie przez 1 h do uzyskania jednorodnej mieszaniny. Otrzymaną zawiesinę wkrapla się do dobrze wymieszanego i wysterylizowanego 2% (w/v) roztworu chlorku wapnia na mieszadle magnetycznym z wysokości 15 cm. Otrzymane granulki pozostawia w roztworze chlorku wapnia na 24 h w 4°C, aby umożliwić im stwardnienie. Następnie zbiera się granulki i przepłukuje je sterylną wodą. Następnie granulki poddaje się liofilizacji przez 12 h. Bioinokulat przechowuje się w temperaturze 4°C do czasu wykorzystania.
Przykład IV
Sposób otrzymywania bioinokulatu według wynalazku zawiera następujące etapy:
Przygotowanie zawiesiny bakteryjnej szczepu Labedella endophytica:
ml płynnej hodowli bakterii Labedella endophytica o wartości gęstości optycznej OD=1 przenosi się do 300 ml sterylnej płynnej pożywki R2A. Zawiesinę bakteryjną inkubuje się przez 22 h na wytrząsarce przy 145 rpm w temperaturze 24°C do osiągnięcia przez bakterie logarytmicznej fazy wzrostu.
Przygotowanie biowęgla:
Biowęgiel przesiewa się przez sito o oczkach < 0,50 mm. Wykorzystuje się frakcję biowęgla o wymiarach 0,35 mm - 0,50 mm.
Przygotowania bioinokulatu:
g biowęgla miesza się z 400 ml zawiesiny bakteryjnej szczepu Labedella endophytica w warunkach sterylnych i wytrząsa przez 2 h na wytrząsarce przy 145 rpm w temperaturze 24°C. Następnie dodaje się 8 g alginianu sodu w warunkach sterylnych i kontynuuje wytrząsanie przez 1 h do uzyskania jednorodnej mieszaniny. Otrzymaną zawiesinę wkrapla się do dobrze wymieszanego i wysterylizowanego 2% (w/v) roztworu chlorku wapnia na mieszadle magnetycznym z wysokości 20 cm. Otrzymane granulki pozostawia w roztworze chlorku wapnia na 24 h w 4°C, aby umożliwić im stwardnienie. Następnie zbiera się granulki i przepłukuje je sterylną wodą. Następnie granulki poddaje się liofilizacji przez 15 h. Bioinokulat przechowuje się w temperaturze 4°C do czasu wykorzystania.
Przykład V
Sposób otrzymywania bioinokulatu według wynalazku zawiera następujące etapy:
Przygotowanie zawiesiny bakteryjnej szczepu Labedella endophytica:
ml płynnej nocnej hodowli bakterii Labedella endophytica o wartości gęstości optycznej OD=1 przenosi się do 200 ml sterylnej płynnej pożywki R2A. Zawiesinę bakteryjną inkubuje się przez 15 h na wytrząsarce przy 130 rpm w temperaturze 26°C do osiągnięcia przez bakterie logarytmicznej fazy wzrostu.
Przygotowanie biowęgla:
Biowęgiel przesiewa się przez sito o oczkach < 0,70 mm. Wykorzystuje się frakcję biowęgla o wymiarach 0,50 mm - 0,70 mm.
Przygotowania bioinokulatu:
g biowęgla miesza się z 140 ml zawiesiny bakteryjnej szczepu Labedella endophytica w warunkach sterylnych i wytrząsa przez 2 h na wytrząsarce przy 120 rpm w temperaturze 26°C. Następnie dodaje się 2,8 g alginianu sodu w warunkach sterylnych i kontynuuje wytrząsanie przez 1 h do uzyskania jednorodnej mieszaniny. Otrzymaną zawiesinę wkrapla się do dobrze wymieszanego i wysterylizowanego 2% (w/v) roztworu chlorku wapnia na mieszadle magnetycznym z wysokości 18 cm. Otrzymane granulki pozostawia w roztworze chlorku wapnia na 24 h w 4°C, aby umożliwić im stwardnienie. Następnie zbiera się granulki i przepłukuje je sterylną wodą. Następnie granulki poddaje się liofilizacji przez 20 h. Bioinokulat przechowuje się w temperaturze 4°C do czasu wykorzystania.
Bioinokulat otrzymany metodą według wynalazku wprowadzono do gleby bezpośrednio po wysianiu nasion rośliny należącej do rodziny wiechlinowatych. Uprawę prowadzono przez 8 tygodni w warunkach fitotronu. Po tym czasie oznaczono parametry wzrostu roślin: długość oraz masę pędów i korzeni.
Przygotowano trzy warianty. W pierwszym wariancie wysiano same nasiona, w drugim i trzecim wariancie wysiano nasiona razem z granulatem. Eksperyment prowadzono w fitotronie przez osiem tygodni. Regularnie podlewano wodą. Po tym czasie z każdego wariantu sprawdzono po 40 roślin, zmierzono długość pędu i korzenia oraz świeżą i suchą masę pędu i korzenia. Otrzymane wartości poddano analizie statystycznej, przeprowadzono test Shapiro-Wilka, Levene'a, test ANOVA rang Kruskala-Wallisa i test post-hoc - test Dunna. Otrzymane wyniki przedstawiono w Tabeli 1.
PL 249469 Β1
Tabela. 1. Średnie wartości z pomiarów długości pędu i korzenia, świeżej masy pędu i korzenia oraz suchej masy pędu i korzenia
G2-Ctrł Długość pędu (cm) 48,26 Długość korzenia (cm) ’ 13,05 : Świeża masa pędu(mg) &β>4* Świeża masa korzenia (mg) 144 38 Sucha masa pędu (mg) h 61,86 J Sucha masa korzenia(mg) 30,99
G2-N2 44,69 14,19 218,26 173,92 79,91 47,73
G2-N2-B1 51,07 X 17,1^ 365,69 285,77 -<““$5,36 _ - / 45,59 .g|i
G2-Ctrl - stanowiący kontrolę, rośliny nieinokulowane
G2-N2 - granulat bez bakterii, z wodą
G2-N2-B1 - granulat bakterii z biowęglem
Parametry, które różniły się istotnie statystycznie to: długość korzenia, świeża masa pędu i korzenia oraz sucha masa pędu i korzenia. Na rysunku przedstawiono wykresy prezentujące wyniki pomiarów poszczególnych parametrów dla 3 wariantów: roślin nieinokulowanych, dla roślin z dodatkiem granulatu bez bakterii oraz dla roślin z dodatkiem bioinokulatu według wynalazku. Na wykresach zaznaczono gwiazdkami, które warianty różnią się istotnie statystycznie od kontroli.
Fig. 1 przedstawia średnią długość pędu i korzenia w poszczególnych wariantach. Wariant z bakterią różni się istotnie statystycznie od kontroli dla długości korzenia.
Fig. 2 przedstawia średnią świeżą masę pędu i korzenia w poszczególnych wariantach. Wariant z bakterią różni się istotnie statystycznie od kontroli w obu przypadkach.
Fig. 3 przedstawia średnią suchą masę pędu i korzenia w poszczególnych wariantach. Zarówno wariant bez bakterii, jak i z bakterią różni się istotnie statystycznie od kontroli w przypadku suchej masy korzenia. Wariant z bakterią różni się także istotnie statystycznie od kontroli w przypadku suchej masy pędu.
Korzenie wykazały istotnie wyższą długość o 31% w porównaniu do wariantu kontrolnego bez bioinokulatu, istotnie wyższą świeżą masę o 98% w porównaniu do wariantu kontrolnego bez bioinokulatu oraz istotnie wyższą suchą masę o 47% w porównaniu do wariantu kontrolnego bez bioinokulatu. Pędy wykazały istotnie wyższą świeżą masę o 36% w porównaniu do wariantu kontrolnego bez bioinokulatu oraz istotnie wyższą suchą masę o 54% w porównaniu do wariantu kontrolnego bez bioinokulatu.

Claims (7)

1. Bioinokulat zawierający szczep bakterii endofitycznej oraz biowęgiel znamienny tym, że szczep bakterii należy do rodzaju Labedella.
2. Bioinokulat według zastrz. 1 znamienny tym, że zawiera biowęgiel i szczep bakterii rodzaju Labedella w proporcji 5:100 w/v.
3. Bioinokulat według zastrz. 1 lub 2 znamienny tym, że wielkość cząstek biowęgla wynosi co najwyżej 0,75 mm, korzystnie w zakresie 0,50 mm - 0,75 mm.
4. Bioinokulat według któregokolwiek z zastrz. od 1 do 3 znamienny tym, że jest w postaci granulatu.
5. Sposób otrzymywania bioinokulatu jak określono w zastrz. od 1 do 4 znamienny tym, że wyjściową płynną hodowlę bakterii rodzaju Labedella przenosi się do sterylnej płynnej pożywki w proporcji 1 ml hodowli bakteryjnej do 100 ml pożywki i inkubuje na wytrząsarce przy 120-145 rpm w temperaturze w zakresie 24-26°C do osiągnięcia przez bakterie logarytmicznej fazy wzrostu, następnie biowęgiel przesiewa się przez sito o oczkach co najwyżej 0,75 mm, po czym biowęgiel miesza się z zawiesiną bakteryjną w stosunku 5:100 w/v w warunkach sterylnych i wy trząsa przez 2 h na wytrząsarce przy 120-145 rpm w temperaturze w zakresie 24-26°C, następnie dodaje się 2% w/v alginianu sodu w warunkach sterylnych i kontynuuje wytrząsanie przez 1 h do uzyskania jednorodnej mieszaniny, otrzymaną zawiesinę wkrapla się do wymieszanego i wysterylizowanego 2% w/v roztworu chlorku wapnia na mieszadle magnetycznym z wysokości od 15 cm do 20 cm, otrzymane granulki pozostawia się w roztworze chlorku wapnia na 24 h w 4°C do stwardnienia, zebrane granulki przepłukuje się sterylną wodą i poddaje liofilizacji przez 12-20 h.
6. Sposób otrzymywania bioinokulatu według zastrz. 5 znamienny tym, że płynna wyjściowa hodowla bakterii rodzaju Labedella ma gęstość optyczną równą 1.
7. Sposób otrzymywania bioinokulatu według zastrz. 5 lub 6 znamienny tym, że jako płynną pożywkę stosuje się pożywkę R2A.
PL449224A 2024-07-12 2024-07-12 Bioinokulat i sposób otrzymywania bioinokulatu PL249469B1 (pl)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PL449224A PL249469B1 (pl) 2024-07-12 2024-07-12 Bioinokulat i sposób otrzymywania bioinokulatu
EP25154284.1A EP4678734A1 (en) 2024-07-12 2025-01-27 Bioinoculate and the method of obtaining bioinoculate

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PL449224A PL249469B1 (pl) 2024-07-12 2024-07-12 Bioinokulat i sposób otrzymywania bioinokulatu

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL449224A1 PL449224A1 (pl) 2026-01-19
PL249469B1 true PL249469B1 (pl) 2026-04-27

Family

ID=94870936

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL449224A PL249469B1 (pl) 2024-07-12 2024-07-12 Bioinokulat i sposób otrzymywania bioinokulatu

Country Status (2)

Country Link
EP (1) EP4678734A1 (pl)
PL (1) PL249469B1 (pl)

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20220106316A (ko) * 2021-01-22 2022-07-29 한국해양대학교 산학협력단 커피박 추출물을 포함하는 기능성 퇴비 및 이의 제조방법
WO2023116953A1 (en) * 2021-12-22 2023-06-29 FERTICHAR s.r.o. Method of production of a soil conditioner and the soil conditioner produced by the method
CN117363527A (zh) * 2023-10-13 2024-01-09 有铭生物科技(山东)有限公司 一种包含荧光假单胞菌的微生物菌剂及其制备方法和应用
CN117487715A (zh) * 2023-11-08 2024-02-02 山东农业大学 一种分散泛菌zhj28、生物炭基菌剂及其制备方法
KR20240047011A (ko) * 2022-10-04 2024-04-12 주식회사 경동개발 유기 탄소를 포함하는 가축 분뇨 바이오차 및 그의 제조 방법

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20220106316A (ko) * 2021-01-22 2022-07-29 한국해양대학교 산학협력단 커피박 추출물을 포함하는 기능성 퇴비 및 이의 제조방법
WO2023116953A1 (en) * 2021-12-22 2023-06-29 FERTICHAR s.r.o. Method of production of a soil conditioner and the soil conditioner produced by the method
KR20240047011A (ko) * 2022-10-04 2024-04-12 주식회사 경동개발 유기 탄소를 포함하는 가축 분뇨 바이오차 및 그의 제조 방법
CN117363527A (zh) * 2023-10-13 2024-01-09 有铭生物科技(山东)有限公司 一种包含荧光假单胞菌的微生物菌剂及其制备方法和应用
CN117487715A (zh) * 2023-11-08 2024-02-02 山东农业大学 一种分散泛菌zhj28、生物炭基菌剂及其制备方法

Also Published As

Publication number Publication date
EP4678734A1 (en) 2026-01-14
PL449224A1 (pl) 2026-01-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2020101394A4 (en) Microbial fertilizer with double effects of fertilization and disease-resistance, and preparation method and use thereof
US11312666B2 (en) Mineral solubilizing microorganism infused biochars
CN101054568B (zh) 烟草专用生物有机肥及其制备、使用方法
CN101935249B (zh) 一种颗粒型复合微生物菌剂及其制备方法和应用
KR100869349B1 (ko) 친환경 토양활성제와 그 제조방법
CN105295928B (zh) 一种适用于退化草场的土壤改良剂及制备方法
CN107282628A (zh) 一种修复农田污染土壤的复合改良剂及其制备方法
US20220144717A1 (en) Bio-stimulant and method of producing same
Saxena Efficacy of rhizobacterial strains encapsulated in nontoxic biodegradable gel matrices to promote growth and yield of wheat plants
CN1434004A (zh) 一种生物有机无机复混肥料及其生产方法
CN109749961B (zh) 一种修复大蒜重茬土壤的微生物菌剂及其制备方法与应用
CN102432399A (zh) 提高水稻抗逆性及产量的生物有机肥及其制备方法
Chuen The effects bio-fertilizer and liquid organic fertilizer on the growth of vegetables in the pot experiment
Deshwal et al. Plant growth promoting activity of Pseudomonads in Rice crop
US20220204420A1 (en) Mineral solubilizing microorganism infused biochars
CN103820350A (zh) 餐厨垃圾资源化生产解淀粉芽孢杆菌微生物肥料
CN1315757C (zh) 生物有机全料肥
CN114456811A (zh) 一种农田炭基土壤修复剂及其制备方法
CN118995484A (zh) 一种固氮促生型荧光假单胞菌复合制剂及其制备方法和应用
CN119570653A (zh) 复合微生物肥料及其在大田种植中的应用
CN117049912B (zh) 一种促进小麦生长的有机微生物菌肥及其制备方法
CN111040955A (zh) 一种强化型防病促生炭基菌剂及其制备方法与应用
CN118006594A (zh) 一种用于修复农药污染土壤的炭基菌剂及其制备方法与应用
CN115058252B (zh) 用于酞酸酯污染土壤修复的微生物土壤调理剂及其应用
PL249469B1 (pl) Bioinokulat i sposób otrzymywania bioinokulatu