CN118006594A - 一种用于修复农药污染土壤的炭基菌剂及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本申请公开一种用于修复农药污染土壤的炭基菌剂的制备方法与应用，该炭基菌剂由降解菌（枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、桑肠杆菌）、生物炭、氨基酸、微量元素、矿物质组成；游离氨基酸可以为微生物生长提供氮素，通过调控氨基酸的含量可以更好的促进微生物生长，进而提高土壤中残留的农药污染物噻虫嗪修复，同时促进植物生长；该炭基微生物菌剂制备简单，耗时短，更适宜于工业化生产。
Description
技术领域
本发明属于炭基微生物菌剂技术领域，特别是涉及一种增效修复受农药污染土壤、促进作物生长的炭基菌剂的制备方法、菌剂及其应用。
背景技术
噻虫嗪作为新烟碱类农药的代表性品种，以其作为有效成分的登记产品共计684项，被广泛用于防治蔬菜、水稻等作物上害虫。而噻虫嗪施用后近70％左右药物活性成分通过降雨、地表径流等方式残留于土壤及水体，导致土壤环境恶化。此外，噻虫嗪对蚯蚓、蜜蜂和水生动物等具有生物毒性。由新烟碱类农药引发的土壤污染问题，对生态环境和人体健康造成严重威胁。
农药污染修复技术主要分为物理法、化学法和生物法。物理修复技术包括热脱附、电动修复和超声波降解等，化学修复主要包括化学氧化、土壤淋洗和溶剂萃取等技术，虽然物理修复和化学修复效果良好，但存在对土壤结构破坏较大、成本较高、易造成二次污染等弊端。而生物降解作为有机污染物的主要降解途径，存在微生物生存增殖受限、可利用营养物有限、与原生微生物竞争等局限性。生物质炭作为重要的微生物固定化材料，因其比表面积大、孔隙度高、性能稳定、参与土壤中碳封存以实现固碳减排等优点，在土壤原位修复领域获得了得天独厚的优势。然而，生物质炭对不同微生物的活性、生物量的影响存在菌株差异性，且在营养供给等方面相对不足，从而限制了其在污染土壤修复中的应用。
目前，已有研究通过氨基酸修饰生物质炭制备了功能炭材料，而有关利用其强的电荷性能吸附微生物的报道，以及针对同步完成生物炭改性与微生物负载的方案尚未见报道。
发明内容
针对上述问题，本发明的目的旨在创制一种可以高效修复噻虫嗪残留、促进作物生长的炭基微生物菌剂，利用氨基酸强的电荷性能吸附微生物，同步完成生物炭改性与微生物负载，通过定向调控生物质炭性能以提高降解菌固定量、促进污染物降解。
本发明通过以下技术方案来实现上述目的，具体步骤如下：
首先，本申请提供了一种用于修复农药污染土壤的炭基菌剂，该菌剂以质量百分比计，由以下成分组成：菌含量为1010 cfu/mL的降解菌菌悬液10％-15％、生物炭50％-70％、复合氨基酸2％-4％、微量元素5％-10％、以矿物质补足至100％；上述降解菌包括枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、桑肠杆菌中的至少一种。
优选的，上述降解菌由枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、桑肠杆菌等比例混合后获得。
优选的，上述复合氨基酸为含有谷氨酸、赖氨酸、酪氨酸、精氨酸、脯氨酸中的至少一种；优选谷氨酸、赖氨酸、酪氨酸、精氨酸、脯氨酸以等比例混合，制备获得复合氨基酸。
优选的，上述微量元素包括包括EDTA螯合锌、EDTA螯合铁、EDTA螯合铜、EDTA螯合锰中的至少一种；优选加入的质量比为EDTA螯合锌:EDTA螯合铁:EDTA螯合铜:EDTA螯合锰＝1:2:1:1。
上述矿物质包括硫酸镁、硫酸锌、硫酸钾中的至少一种；优选加入的质量比为硫酸镁：硫酸锌：硫酸钾＝1:1:1；
上述生物炭优选稻壳生物炭。
其次，本申请提供了上述炭基菌剂的制备方法，其具体步骤如下：
1)将降解菌置于LB液体培养液中30 oC，培养12 h，以PBS缓冲液调节其菌含量为1010 cfu/mL，获得降解菌悬液。
2)将生物炭、氨基酸、微量元素和矿物质均置于PBS溶液中，调节pH至7.0，灭菌20min；然后取出沥干，即获得载体材料；
3)将降解菌菌悬液与步骤1)获得的载体材料混合均匀，孵育12 h，-40 oC真空冷冻干燥24 h，即获得用于修复农药污染土壤的炭基菌剂；
所述降解菌包括枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、桑肠杆菌中的至少一种；优选三者等比例混合；
上述氨基酸包括谷氨酸、赖氨酸、酪氨酸、精氨酸、脯氨酸中的至少一种；优选加入的质量比为谷氨酸：赖氨酸：酪氨酸：精氨酸：脯氨酸＝1:1:1:1:1；
所述微量元素包括EDTA螯合锌、EDTA螯合铁、EDTA螯合铜、EDTA螯合锰中的至少一种；优选加入的质量比为EDTA螯合锌:EDTA螯合铁:EDTA螯合铜:EDTA螯合锰＝1:2:1:1；
上述矿物质包括硫酸镁、硫酸锌、硫酸钾中的至少一种；优选加入的质量比为硫酸镁：硫酸锌：硫酸钾＝1:1:1；
所加入降解菌菌悬液、稻壳生物炭、氨基酸、微量元素、矿物质的质量比优选10-15:50-70:2-4:5-10:13-21。
第三，本申请提供了上述炭基菌剂在降解土壤噻虫嗪中的应用。
第四，本申请提供了上述炭基菌剂在促进作物生长中的应用；上述述作物优选绿叶蔬菜，如青菜。
本申请提供的炭基微生物菌剂，添加了生物炭、氨基酸、微量元素和矿物质等，菌株和载体材料同时具有促进农药降解的作用，有助于实现农药的高效修复；其中，游离氨基酸可以为微生物生长提供氮素，通过调控氨基酸的含量可以更好的促进微生物生长，进而提高污染物的修复效果，进而促进植物生长。同时，实施例小青菜盆栽实验结果表明，接种该炭基菌剂可以提高作物叶绿素含量，具有显著地植物促生长作用，有助于解决设施蔬菜面临的土壤污染、植物产量品质下降等问题；同时该炭基微生物菌剂制备简单、耗时短，更适宜于工业化生产。
附图说明
图1为实施例修复农药污染土壤的炭基菌剂的制备方法流程图。
图2是实施例1中施用炭基微生物菌剂后植物生长的影响。
图3是实施例2中施用炭基微生物菌剂后植物生长的影响。
图4为桑肠杆菌的扫描电镜图：其中，(A)为CJ组；(B)为ACJ组。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述，但本发明并不限于以下实施例。所述方法如无特别说明均为常规方法。所述原材料如无特别说明均能从公开商业途径获得。
LB液体培养基(1L)：5.0 g酵母粉，10.0 g胰蛋白胨，10.0 gNaCl，去离子水定容至1000 mL，pH 6.8-7.2；121℃条件下，高压蒸汽灭菌20 min后备用。
固体富集培养基(LB固体培养基)：在液体富集培养基中加入琼脂粉至其终浓度为15 g/L，pH值为7.0-7.2；121℃条件下，高压蒸汽灭菌20 min后备用。
实施例涉及的菌株及原料：
噻虫嗪降解菌选自申请人实验室已筛选出的枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、桑肠杆菌等，通过扩繁后得到的各个菌株发酵液；所获得的降解菌菌剂含菌数不低于1×109cfu/g。
其中，实施例使用的枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis HB-T2(CGMCCNo.16233)：为中国发明专利(201910079682.2)公开的枯草芽孢杆菌菌株Bacillus subtilis HB-T2；该菌株已于2018年8月8日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101。
巨大芽孢杆菌Bacillus megaterium DGB(CGMCCNo.11477)：为文献“内生菌定殖水稻对稻田土壤中毒死蜱降解的影响”(詹红林等，江苏农业科学，2020)所公开的巨大芽孢杆菌Bacillus megaterium DGB。该菌株已于2015年10月09日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101。
桑肠杆菌Enterobacter mori TMX-13(CGMCCNo.16236)：为中国发明专利(201910525694.3)公开的桑肠杆菌Enterobacter mori TMX-13。该菌株已于2018年08月08日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101。
以上三种菌株均由江苏省农业科学院实验室直接保藏提供。
稻壳生物质炭购自于南京市勤丰众成生物质新材料有限公司。
谷氨酸、赖氨酸、酪氨酸、精氨酸、脯氨酸均采购于上海麦克林生化科技股份有限公司。
微量元素EDTA螯合锌、螯合铁、螯合铜、螯合锰，均采购于郑州市紫熙化工有限公司。
矿物质硫酸镁、硫酸锌、硫酸钾均为市售产品。
实施例1
一种修复农药污染土壤的炭基菌剂，其制备过程流程图如图1所示，具体步骤如下：
1)炭基微生物菌剂制备
1.1)菌悬液的制备
将桑肠杆菌TMX-13在固体LB平板培养基上划线接种30 oC恒温培养箱中培养1d；用接种环从斜面上剥取单菌落接入200 mL LB液体培养液中30 oC恒温培养箱中培养12 h，得到菌悬浮液，采用酶标液测定其OD600数值，最终将菌悬液的OD600稀释为1.00，菌含量为1010 cfu/mL作为待用桑肠杆菌TMX-13菌悬液，备用。
1.2)将载体材料(稻壳生物炭70 kg、谷氨酸0.4 kg、赖氨酸0.4 kg、酪氨酸0.4kg、精氨酸0.4 kg、脯氨酸0.4 kg、EDTA螯合锌1 kg、EDTA螯合铁2 kg、EDTA螯合铜1 kg、EDTA螯合锰1 kg、硫酸镁4 kg、硫酸锌3 kg、硫酸钾6 kg)置于PBS溶液中，并调节上清液pH至7.0(以0.1 M盐酸或氢氧化钠调节)，于121 oC灭菌20 min，然后取出沥干，备用；该处理可以促进复合菌株生长。
1.3)将步骤1.1)获得的桑肠杆菌TMX-13菌悬液10 kg与步骤1.2)处理后的载体材料混合后孵育12 h，于-40 oC真空冷冻干燥24 h收集样本，制备获得炭基微生物菌剂ACJ；同时，以相同方法制备不添加微生物的对照组记作AC。
此外，将桑肠杆菌TMX-13菌悬液10 kg、稻壳生物炭70 kg混合后于-40 oC真空冷冻干燥24 h，制备获得炭基微生物菌剂CJ；同时，将稻壳生物炭70 kg于-40 oC真空冷冻干燥24 h，记作对照组C。
1)盆栽实验：将菌剂、载体材料、炭基菌剂和蛭石-土壤混合物(蛭石与土壤的质量比1:5)充分混合后装入14.5 cm×11 cm×17 cm的聚乙烯塑料花盆。本实施例中，设置了7种处理，分别为CK(未处理，仅添加终浓度5.21 ppm噻虫嗪的污染土壤)、J(每千克污染土壤添加25 g桑肠杆菌TMX-13的菌悬液)、C(每千克污染土壤添加占其质量百分数2％的C)、CJ(每千克污染土壤添加占其质量百分数2％的CJ)、AC(每千克污染土壤添加占其质量百分数2％的AC)、ACJ(每千克污染土壤添加占其质量百分数2％的ACJ)。
其中，污染土壤制备方法为：将1 kg过筛细土装入玻璃器皿中，倒入300 mL丙酮溶解噻虫嗪原药并用玻璃棒搅拌均匀，置于通风橱待丙酮挥发24 h，并最终测定土壤中的噻虫嗪浓度为5.21 ppm。
以土培实验中方法维持土壤含水率，在温室环境中稳定一周。
本实施例使用的青菜(上海青)种子购自南京绿领种业有限公司，挑选颗粒均一且饱满的无明显损伤的青菜种子，每个穴盘中放入4颗种子，加入足量的水，于25 oC黑暗条件下进行发芽。待培育10天后幼苗长至三叶一心，选择长势一致的上海青幼苗将根用超纯水清洗，移栽到装有农药土壤的盆栽中，每盆移栽1颗，期间每天浇水保持土壤湿度，每个处理组三个平行。移栽35天后，从土壤中取出青菜，其植物生长情况如图3所示。图3中，A表示不同处理组的盆栽俯视图，B表示不同处理组的盆栽主视图，C表示代表性植株的整株生长情况。3)土壤中噻虫嗪降解效果：称取约2 g土壤样品至冷冻干燥机冻干处理，并准确称取1 g土壤样品加入50 mL离心管中，加入5 mL乙腈后充分震荡10 min，5000 rpm离心5分钟后取2mL上清液至5 mL离心管中，依次加入50 mg PSA、100 mg MgSO4，涡旋2 min后静置，取1 mL上清液过0.22μm有机系滤膜至进样小瓶，使用液相色谱-质谱联用进行定量分析，为文献“内生菌定殖水稻对噻虫嗪降解的影响”(詹红林，青岛科技大学，2020)所公开的测定方法，其中降解率的计算公式如下：
Re＝[(Co-Ce)/Co]×100％
式中，Co：土壤中噻虫嗪的初始浓度(mg/L)；Ce：土壤样品中噻虫嗪的残余浓度(mg/L)。检测结果如表1所示。
表1土壤中噻虫嗪降解效果
结果表明：ACJ的降解效果优于材料AC、J及其他处理组、菌株的降解效果，固定化菌剂表现出优势，推测可能由于微生物固定后生物炭为其提供了庇护所，同时为其提供营养元素，进一步通过生物炭对农药的强吸附作用，从而增强了微生物对农药等污染物的降解作用。
4)植物促生长效果：株高和鲜重用常规方法测量；叶绿素和氮含量的测定采用叶绿素仪测定。
表2植物促生长情况分析表
| 处理组 | 生物量/g/株 | 株高/cm/株 | 叶绿素/SPDA | N/％ |
| CK | 5.25 | 7.10 | 31.10 | 12.47 |
| J | 8.76 | 9.60 | 35.43 | 13.83 |
| C | 4.19 | 7.80 | 31.27 | 12.53 |
| CJ | 10.39 | 15.41 | 33.63 | 13.33 |
| AC | 20.11 | 18.60 | 40.43 | 15.43 |
| ACJ | 20.34 | 19.23 | 36.23 | 14.10 |
结果：较其他处理组，AC和ACJ的生物量表现出明显优势，ACJ的叶绿素含量最高；氮含量变化趋势与叶绿素的保持一致；因此，噻虫嗪菌株J有一定的促生效果，同时，噻虫嗪因其含氮可以为J生长提供更多氮源。
5)菌株生长情况：使用场发射扫描电子显微镜，表征TMX-13在炭基材料上的形貌结构差异。
TMX-13在培养液和炭基材料上的形貌结构如图4所示，SEM图显示，TMX-13从培养液中分离收集后呈现典型的肠杆菌结构，即杆状、椭球状。稻壳生物质炭因其Zeta电位高、比表面积和孔隙度大，更容易吸附微生物并为微生物提供良好的栖息地，当TMX-13在其表面附着时，情况如图(图4中A-1和A-2)，而TMX-13在AC表面附着时(图4中B-1和B-2)，其数量显著增加，虽然不同部位的附着量存在差异，但整体上，显著提高了TMX-13的固定量，其经过精氨酸改性可使生物质炭与细菌的结合更紧密(Zhang,M.,He,L.,Zhang,X.,Wang,S.,Zhang,B.,Hsieh,L.,Yang,K.,Tong,M.,2022.Improved removal performance of gram-negative and gram-positive bacteria insandfiltration system with argininemodified biochar amendment.Water Research211:118006.)，因此，表现出良好的促生和降解效果。
综上，本实施例制备的生物炭基菌剂，可以通过增加降解菌TMX-13的固定量而提高农药降解率、促进作物生长。
实施例2
一种修复农药污染土壤的炭基菌剂，其制备步骤如下：
1)炭基微生物菌剂制备
1.1)菌悬液的制备
将农药降解菌(枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、桑肠杆菌TMX-13)分别在固体LB平板培养基上划线接种30 oC恒温培养箱中培养1 d；用接种环从斜面上剥取单菌落接入200mL LB液体培养液中30 oC恒温培养箱中培养12 h，以含菌量1：1：1混匀得到混合的菌悬浮液，采用酶标液测定其OD600数值，最终用PBS缓冲液将菌悬液的OD600稀释为1.00，混合菌含量为1010 cfu/mL作为待用混合噻虫嗪降解菌菌悬液，备用。
1.2)将载体材料(稻壳生物炭50 kg、氨基酸4 kg(谷氨酸、赖氨酸、酪氨酸、精氨酸、脯氨酸等比例混合)、EDTA螯合锌2 kg、EDTA螯合铁4 kg、EDTA螯合铜2 kg、EDTA螯合锰2kg、硫酸镁7 kg、硫酸锌7 kg、硫酸钾7 kg)置于PBS溶液中，并调节上清液pH至7.0(以0.1 M盐酸或氢氧化钠调节)，于121 oC灭菌20 min，以复合菌株适宜生长；
1.3)将混合噻虫嗪降解菌菌悬液15 kg与步骤1.2)灭菌处理后的载体材料，混合后孵育12 h，于-40 oC真空冷冻干燥24 h收集样本，制备炭基微生物菌剂ACJ3；同时，制备不添加微生物的对照组记作AC。
此外，将噻虫嗪降解菌混合菌悬液15 kg、稻壳生物炭50 kg混合后，-40 oC真空冷冻干燥24 h，制备对照组炭基微生物菌剂CJ3；以及，将稻壳生物炭50 kg于-40 oC真空冷冻干燥24 h，制备对照组C。
2)盆栽实验：将菌剂、载体材料、炭基菌剂和自然风干的、过2 mm筛的供试土壤分别充分混合后装入14.5 cm×11 cm×17 cm的聚乙烯塑料花盆。
本实施例中，设置了7种处理，分别为CK(未处理，仅为5.21 ppm噻虫嗪污染土壤)、J3(每千克污染土壤添加25 g混合噻虫嗪降解菌菌悬液)、C(每千克污染土壤添加占其质量百分数2％的C)、CJ3(每千克污染土壤添加CJ3)、AC(每千克污染土壤添加占其质量百分数2％的AC)、ACJ3(每千克污染土壤添加占其质量百分数2％的ACJ3)。
其中，污染土壤的制备方法及噻虫嗪的测定分析方法同实施例1。
以土培实验中方法维持土壤含水率，在温室环境中稳定一周。
本实施例使用的青菜(上海青)种子购自南京绿领种业有限公司，挑选颗粒均一且饱满的无明显损伤的青菜种子，每个穴盘中放入4颗种子，加入足量的水，于25 oC黑暗条件下进行发芽。待培育10天后幼苗长至三叶一心，选择长势一致的上海青幼苗将根用超纯水清洗，移栽到装有农药土壤的盆栽中，每盆移栽1颗，期间每天浇水保持土壤湿度，每个处理组三个平行。植物生长情况如图2所示，图2中，A表示不同处理组的盆栽俯视图，B表示不同处理组的盆栽主视图，C表示代表性植株的整株生长情况。
3)土壤中噻虫嗪降解效果的实验方法及噻虫嗪的测定分析方法同实施例1。
表3土壤中噻虫嗪降解效果
结果表明：对比实施例1组结果，复合菌株J3的噻虫嗪效果显著高于单菌株J，同时，ACJ3的降解效果优于实施例1中的ACJ，表明降解菌复合后表现出显著的增效作用，同时ACJ3的降解效果高于单菌株J材料AC、J3及其他处理组，表明，生物炭载体的高比表面积、电荷性能和孔隙度等为微生物的附着、固定和定殖提供了位点，微生物则利用载体上的营养物质来提供生命活性，进而达到了微生物持续代谢和生物炭持续吸附效果，实现了目标污染物的高效去除。
4)植物促生长效果：株高和鲜重用常规方法测量；叶绿素和氮含量的测定采用叶绿素仪测定。
表4植物促生长情况分析表
| 处理组 | 生物量/g/株 | 株高/cm/株 | 叶绿素/SPDA | N/％ |
| CK | 8.29 | 16.83 | 38.53 | 14.83 |
| J3 | 12.72 | 15.50 | 45.00 | 16.87 |
| C | 20.25 | 21.55 | 39.60 | 15.50 |
| CJ3 | 21.47 | 19.70 | 36.20 | 14.13 |
| AC | 30.10 | 21.50 | 37.53 | 14.20 |
| ACJ3 | 28.47 | 19.40 | 44.10 | 16.60 |
结果表明：较对照组CK相比，处理组均高于其生物量，生物量从大到小依次为：ACJ3>AC＞CJ3＞C＞J3＞CK，表明，添加菌剂、载体材料、炭基菌剂均有助于小青菜生长。叶绿素含量表现为J3和ACJ3的叶绿素含量最高，因此，菌剂和炭基菌剂有利于叶绿素的积累。同时，对比实施例1的结果，表明，复合菌株J3、炭基菌剂CJ3和ACJ3处理组的小青菜生物量分别比相应的单菌株J、CJ、ACJ处理组提高了45.21％、106.64％和39.97％。
综上，降解菌经过复配后对噻虫嗪起到了增效修复的作用，同时，复合菌株的促生作用明显，而载体材料通过改善土壤结构、提供营养元素等途径促进作物生长、提高产量。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。
Claims (9)
1.一种用于修复农药污染土壤的炭基菌剂，其特征在于，所述菌剂由以下成分组成，以质量百分比计，菌含量为1010 cfu/mL的降解菌菌悬液10%-15%、生物炭50%-70%、氨基酸2%-4%、微量元素5%-10%、以矿物质补足至100%；
所述降解菌菌悬液中的降解菌为枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、桑肠杆菌中的至少一种；
所述氨基酸为谷氨酸、赖氨酸、酪氨酸、精氨酸、脯氨酸中的至少一种；
所述微量元素为EDTA螯合锌、EDTA螯合铁、EDTA螯合铜、EDTA螯合锰中的至少一种；
所述矿物质为硫酸镁、硫酸锌、硫酸钾中的至少一种。
2.根据权利要求1所述用于修复农药污染土壤的炭基菌剂，其特征在于，所述降解菌由相同含菌量的枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、桑肠杆菌混合后获得。
3.根据权利要求1所述用于修复农药污染土壤的炭基菌剂，其特征在于，所述氨基酸由谷氨酸、赖氨酸、酪氨酸、精氨酸、脯氨酸等比例混合后获得。
4.根据权利要求1所述用于修复农药污染土壤的炭基菌剂，其特征在于，所述微量元素由EDTA螯合锌、EDTA螯合铁、EDTA螯合铜、EDTA螯合锰按照质量比1:2:1:1混合后获得。
5.根据权利要求1所述用于修复农药污染土壤的炭基菌剂，其特征在于，所述矿物质由硫酸镁、硫酸锌、硫酸钾按照质量比1:1:1混合后获得。
6.如权利要求1-5任一用于修复农药污染土壤的炭基菌剂的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：
将降解菌置于LB液体培养液中，30℃，培养12 h，以PBS缓冲液调节其菌含量为1010cfu/mL，获得降解菌悬液，备用；
按比例将生物炭、氨基酸、微量元素和矿物质均置于PBS溶液中，调节pH至 7.0，灭菌20min；然后取出沥干，即获得载体材料，备用；
将步骤1）获得的降解菌菌悬液与步骤2）获得的载体材料混合均匀，孵育12 h，-40℃真空冷冻干燥24 h，即获得用于修复农药污染土壤的炭基菌剂。
7.如权利要求1-5任一用于修复农药污染土壤的炭基菌剂在降解土壤噻虫嗪中的应用。
8.如权利要求1-5任一用于修复农药污染土壤的炭基菌剂在促进作物生长中的应用。
9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述作物为绿叶蔬菜。
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Legal Events
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|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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