PL243704B1 - 4-(4-fenyloazofenylo)-1-(2-nitrobenzylo)-tiosemikarbazyd, sposób jego wytwarzania oraz jego pierwsze zastosowanie medyczne - Google Patents
4-(4-fenyloazofenylo)-1-(2-nitrobenzylo)-tiosemikarbazyd, sposób jego wytwarzania oraz jego pierwsze zastosowanie medyczne Download PDFInfo
- Publication number
- PL243704B1 PL243704B1 PL439882A PL43988221A PL243704B1 PL 243704 B1 PL243704 B1 PL 243704B1 PL 439882 A PL439882 A PL 439882A PL 43988221 A PL43988221 A PL 43988221A PL 243704 B1 PL243704 B1 PL 243704B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- thiosemicarbazide
- phenylazophenyl
- nitrobenzyl
- general formula
- activity
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 8
- -1 4-(4-phenylazophenyl)-1-(2-nitrobenzyl)-thiosemicarbazide Chemical compound 0.000 title description 23
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 23
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 23
- 102100040061 Indoleamine 2,3-dioxygenase 1 Human genes 0.000 claims abstract description 21
- 101710120843 Indoleamine 2,3-dioxygenase 1 Proteins 0.000 claims abstract description 20
- 150000003583 thiosemicarbazides Chemical class 0.000 claims abstract description 18
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 claims abstract description 14
- 102000007537 Type II DNA Topoisomerases Human genes 0.000 claims abstract description 5
- 108010046308 Type II DNA Topoisomerases Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 claims abstract description 4
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims abstract description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 4
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims description 4
- ZTXNMMXJFVCQPD-UHFFFAOYSA-N (4-isothiocyanatophenyl)-phenyldiazene Chemical compound C1=CC(N=C=S)=CC=C1N=NC1=CC=CC=C1 ZTXNMMXJFVCQPD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- LYGGDXLOJMNFBV-UHFFFAOYSA-N 2-nitrobenzohydrazide Chemical compound NNC(=O)C1=CC=CC=C1[N+]([O-])=O LYGGDXLOJMNFBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000009835 boiling Methods 0.000 claims description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 2
- 239000002798 polar solvent Substances 0.000 claims description 2
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 claims description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 24
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 16
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 16
- 101710183280 Topoisomerase Proteins 0.000 description 9
- 229960005420 etoposide Drugs 0.000 description 9
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 8
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 8
- VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N etoposide Chemical compound COC1=C(O)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H]4O[C@H](C)OC[C@H]4O3)O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N 0.000 description 8
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 4
- 102200082402 rs751610198 Human genes 0.000 description 4
- WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 5-bromodeoxyuridine Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(Br)=C1 WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 1
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 1
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 1
- 101001037261 Homo sapiens Indoleamine 2,3-dioxygenase 2 Proteins 0.000 description 1
- 102100040062 Indoleamine 2,3-dioxygenase 2 Human genes 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 101150057615 Syn gene Proteins 0.000 description 1
- 206010062129 Tongue neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000009702 cancer cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000007877 drug screening Methods 0.000 description 1
- 238000002451 electron ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001952 enzyme assay Methods 0.000 description 1
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 102000006639 indoleamine 2,3-dioxygenase Human genes 0.000 description 1
- 108020004201 indoleamine 2,3-dioxygenase Proteins 0.000 description 1
- 239000012160 loading buffer Substances 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 238000007423 screening assay Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 201000006134 tongue cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C337/00—Derivatives of thiocarbonic acids containing functional groups covered by groups C07C333/00 or C07C335/00 in which at least one nitrogen atom of these functional groups is further bound to another nitrogen atom not being part of a nitro or nitroso group
- C07C337/06—Compounds containing any of the groups, e.g. thiosemicarbazides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C243/00—Compounds containing chains of nitrogen atoms singly-bound to each other, e.g. hydrazines, triazanes
- C07C243/24—Hydrazines having nitrogen atoms of hydrazine groups acylated by carboxylic acids
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
Przedmiotem zgłoszenia jest nowa pochodna tiosemikarbazydu, o wzorze ogólnym (1) przedstawionym na rysunku, będąca jednoczesnym inhibitorem ludzkiej topoizomerazy II oraz indoloamino-2,3-dioksygenazy 1 (IDO 1), wykazująca działanie przeciwnowotworowe. Zgłoszenie obejmuje także sposób wytwarzania pochodnej tiosemikarbazydu o wzorze ogólnym (1) oraz jej zastosowanie w leczeniu chorób nowotworowych.
Description
Przedmiotem wynalazku jest nowa pochodna tiosemikarbazydu o wzorze ogólnym 1, przedstawionym na rysunku, charakteryzująca się jednoczesnym działaniem inhibitującym aktywność topoizomerazy IIa i indoloamino-2,3-dioksygenazy 1, wykazująca aktywność przeciwnowotworową, sposób jej wytwarzania oraz jej pierwsze zastosowanie medyczne.
Znane są z literatury naukowej pochodne tiosemikarbazydu, inne niż wskazana w wynal azku, wykazujące aktywność przeciwnowotworową (Anticancer Agents Med Chem 2016, 16, 1288-1300; Anticancer Agents Med Chem 2018, 18, 529-540; Molecules 2019, 24, 2065; Molecules 2020, 25, 2980). Dla pojedynczych pochodnych tiosemikarbazydu wykazano, że aktywność przeciwnowotworowa wynika, przynajmniej częściowo, z zahamowania aktywności ludzkiej topoziomerazy IIa (Anticancer Agents Med Chem 2018, 18, 529-540). Istnieje również pojedyncze doniesienie naukowe stwierdzające, że niektóre pochodne tiosemikarbazyd u, lecz podstawione wyłącznie w pozycji 1 i nie zawierające podstawników w pozycji 4, mogą hamować aktywność enzymu - indoloamino-2,3-dioksygenazy 1 (Eur J Med Chem 2014, 82, 96-105). Dla związków wskazanych w powyższym źródle (Eur J Med Chem 2014, 82, 96-105) brak jest jednak danych potwierdzających ich aktywność przeciwnowotworową. Brak jest również dotychczas jakichkolwiek doniesień literaturowych, w tym opisów patentowych, dotyczących pochodnych tiosemikarbazydu charakteryzujących się jednoczesną zdolnością do hamowania obu wskazanych wcześniej enzymów, tj. topoizomerazy IIα i indoloamino-2,3-dioksygenazy 1. Tym bardziej brak jest doniesień naukowych na temat aktywności przeciwnowotworowej takich pochodnych.
Zahamowanie obu wspomnianych enzymów wydaje się korzystne z klinicznego punktu widzenia, gdyż inhibicja topoizomerazy IIa prowadzi do zahamowania proliferacji komórek nowotworowych a inhibicja indoloamino-2,3-dioksygenazy 1 - zwiększa skuteczność ludzkiego układu immunologicznego w walce z nowotworem. Zgodnie z danymi Światowej Organizacji Zdrowia (WHO) rocznie stwierdza się blisko 20 milionów nowych przypadków zachorowań na nowotwory a ryzyko rozwoju nowotworów u osób w przedziale wiekowym 0-74 lat wynosi 20,2%. Choroby nowotworowe są drugą w kolejności przyczyną śmierci, lecz zgodnie z przewidywaniami WHO - w roku 2060 staną się podstawową przyczyną śmierci ludzi na całym świecie (J Epidemiol Glob Health 2019, 9, 217-222). W związku z tych istotne jest wprowadzenie do praktyki klinicznej nowych le ków skutecznie hamujących rozwój chorób nowotworowych.
Celem wynalazku jest 4-(4-fenyloazofenylo)-1-(2-nitrobenzylo)-tiosemikarbazyd, o wzorze ogólnym 1 przedstawionym na rysunku, hamujący aktywność ludzkiej topoizomerazy IIa i indoloamino-2,3-dioksygenazy 1, co znacząco wpływa na jego aktywność i skuteczność przeciwnowotworową. Aktywność ta umożliwia zastosowanie tego związku z leczeniu nowotworowym.
Zgłaszający prowadzili badania mające na celu uzyskanie pochodnych tiosemikarbazydu łączących zdolność hamowania topoizomerazy IIa i indoloamino-2,3-dioksygenazy 1, które są enzymami istotnymi z punktu widzenia skutecznego działania przeciwnowotworowego. Uzyskane wyniki wskazują na silną aktywność przeciwnowotworową pochodnej tiosemikarbazydu, będącej przedmiotem wynalazku, wobec badanych linii komórek nowotworowych. Działanie to jest wynikiem jednoczesnego zahamowania w komórkach nowotworowych aktywności enzymów topoizomera zy II a i indoloamino-2,3-dioksygenazy 1. Co istotne, pochodna tiosemikarbazydu, będąca przedmiotem wynalazku, wykazywała działanie silniejsze od leku przeciwnowotworowego - etopozydu, względem zastosowanych w badaniu linii komórek nowotworowych. Otrzymane wyniki pozwalają oczekiwać, że będąca przedmiotem wynalazku pochodna tiosemikarbazydu może stać się obiecującym kandydatem na lek przeciwnowotworowy.
Przedmiotem wynalazku jest 4-(4-fenyloazofenylo)-1-(2-nitrobenzylo)-tiosemikarbazyd, hamujący aktywność ludzkiej topoizomerazy IIa i indoloamino-2,3-dioksygenazy 1, wykazujący aktywność przeciwnowotworową.
Przedmiotem wynalazku jest również sposób wytwarzania nowej pochodnej tiosemikarbazydu o wzorze ogólnym 1 przedstawionym na rysunku, polegający na tym, że hydrazyd 2-nitrobenzoesowy (o wzorze ogólnym 2) poddaje się reakcji z izotiocyjanianem 4-fenyloazofenylu (o wzorze ogólnym 3), przy czym reakcję prowadzi się w rozpuszczalnikach organicznych, korzystnie we wrzącym bezwodnym etanolu, przez 10-30 minut. Postęp reakcji kontroluje się w oparciu o wyniki chromatografii cienkowarstwowej. Po zakończeniu reakcji mieszaninę reakcyjną schładza się a powstały osad odsącza się, suszy a następnie krystalizuje z rozpuszczalników polarnych, korzystnie z etanolu.
Wynalazek dotyczy także zastosowania pochodnej tiosemikarbazydu o wzorze ogólnym 1 przedstawionym na rysunku w leczeniu chorób nowotworowych.
Pochodna tiosemikarbazydu według wynalazku może być wykorzystywana do wytwarzania leków i produktów leczniczych o działaniu przeciwnowotworowym.
Przykład 1:
0,01 Mola hydrazydu 2-nitrobenzoesowego rozpuszczono w 20 mL bezwodnego etanolu, po czym do otrzymanego roztworu dodano 0,01 mola izotiocyjanianu 4-fenyloazofenylu. Całość ogrzewano w kolbce okrągłodennej pod chłodnicą zwrotną wodną przez 20 minut, po czym mieszaninę reakcyjną schłodzono a wytrącony osad odsączono, wysuszono i przekrystalizowano z etanolu. Otrzymano 4-(4-fenyloazofenylo)-1-(2-nitrobenzylo)-tiosemikarbazyd (o wzorze ogólnym 1) z wydajnością 87%. Strukturę chemiczną związku określono w oparciu o wyniki analizy widm 1H-NMR, IR oraz MS.
Parametry fizykochemiczne i spektralne pochodnej tiosemikarbazydu o wzorze ogólnym 1:
Wydajność reakcji: 87%; temp. topnienia: 168-170°C; 1H-NMR (600 MHz): 7.24 - 7.96 (m, 13H, ArH), 9.52 (s, 1H, NH), 9.92 (s, 1H, NH), 10.36 (s, 1H, NH); IR (ν, cm-1): 3319 (NH), 1660 (C=O), 1334 (C=S); EI-MS (m/z): 420 [M+].
Przedmiotem wynalazku jest również 4-(4-fenyloazofenylo)-1-(2-nitrobenzylo)-tiosemikarbazyd do zastosowania w leczeniu chorób nowotworowych. Związek według wynalazk u wykazuje silne działanie przeciwnowotworowe, w związku z czym może znaleźć zastosowanie do wytwarzania nowych leków mających zastosowanie w terapii chorób nowotworowych.
Badanie właściwości przeciwnowotworowych 4-(4-fenyloazofenylo)-1-(2-nitrobenzylo)-tiosemikarbazydu przeprowadzono przy zastosowaniu dwóch niezależnych metod: testu MTT oraz testu BrdU. W badaniach wykorzystano następujące linie komórek nowotworowych: MCF-7 (komórki raka sutka), MDA-MB-231 (komórki raka sutka), SCC-25 (komórki raka języka), FaDu (komórki raka przełyku), A549 (komórki raka płuc), AGS (komórki raka żołądka), T98G (komórki glejaka), LS180 (komórki raka jelita grubego), HT29 (komórki raka jelita grubego), A375 (komórki czerniaka). Hodowle komórek nowotworowych prowadzono na płytkach 96-dołkowych stosując podłoża hodowlane dedykowane do danego typu linii komórkowej. Na płytki zawierające dany typ komórek dodawano wzrastające stężenia 4-(4-fenyloazofenylo)-1-(2-nitrobenzylo)-tiosemikarbazydu (od 1 do 100 μg/ml), prowadzono 24-godzinną inkubację, po czym aktywność przeciwnowotworową oceniano na podstawie stopnia zahamowania aktywności metabolicznej (test MTT) lub zahamowania biosyntezy DNA (test BrdU). Jako kontroli dodatniej użyto leku przeciwnowotworowego - etopozydu.
Przykład 2:
Linie komórek nowotworowych (MCF-7, MDA-MB-231, SCC-25, FaDu, A549, AGS, T98G,
LS180, HT29, A375), zakupione od certyfikowanego dostawcy (ATCC), hodowano w rekomendowanych do tego celu pożywkach wzbogaconych w 10% FBS, penicylinę (100 U/mL) and streptomycynę (100 μg/mL). Hodowlę prowadzono w atmosferze zawierającej 5% CO2, w temperaturze 37°C. Zawiesinę komórek nowotworowych przenoszono do dołków na płytkach 96-dołkowych (100 μl/dołek), stosując gęstość zawiesiny 1x105 komórek/ml. Po 24 godzinach wymaganych do całkowitego przyklejenia się komórek do podłoża, na płytki dodawano roztwory zawierające wzrastające od 1 do 100 g g/ml stężenia 4-(4-fenyloazofenylo)-1-(2-nitrobenzylo)-tiosemikarbazydu lub etopozydu (kontrola dodatnia), całość inkubowano przez kolejne 24 godziny, po czym dodawano roztwór odczynnika MTT. Po trwającej kolejne 3 godziny inkubacji, do dołków dodawano roztwór 10% SDS. Po całonocnej inkubacji odczytywano absorbancję roztworów w dołkach przy długości fali 570 nm, stosując czytnik mikropłytek (Epoch, BioTek). Wyniki przedstawiono w postaci wartości IC50, określających stężenie związku niezbędne do zahamowania wzrostu komórek o 50%. Wyniki zestawiono w Tabeli 1.
PL 243704 BI
Tabela 1. Aktywność przeciwnowotworową 4-(4-fenyloazofenylo)-1-(2-nitrobenzylo)-tiosemikarbazydu i etopozydu (kontrola dodatnia), wyrażona w postaci wartości ICso (pg/ml), określona na podstawie testu MTT.
| IC50 (pg/ml) ± SD | ||
| Linie nowotworowe | 4-(4-fenyloazofenylo)-l-(2-nitrobenzylo)tiosemikarbazyd | Etopozyd |
| MDA-MB-231 | 10.47 ± 1.02 | >100 |
| MCF-7 | 7.67 ± 0.63 | >100 |
| SCC-25 | 4.75 ±0.33 | 59.06 ±4.49 |
| A549 | 5.37 ±0.47 | > 100 |
| AGS | 5.53 ±0.38 | 50.79 ±3.13 |
| T98G | 3.35 ±0.30 | >100 |
| LS180 | 3.12 ± 0.21 | >100 |
| FaDu | 2.18±0.11 | 12.54 ±0.86 |
| A375 | 1.79 ±0.14 | 10.20 ±0.83 |
| HT29 | 7.36 ±0.12 | 94.49 ±6.64 |
Przykład 3:
Zawiesinę komórek nowotworowych, hodowanych jak w przykładzie 2, nanoszono na płytkę 96dołkową w objętości 100 μΙ/dołek przy zachowaniu gęstości 1x104 komórek/ml. Po 24 godzinach wymaganych do całkowitego przyklejenia się komórek do podłoża, na płytki dodawano roztwory zawierające 4-(4-fenyloazofenylo)-1-(2-nitrobenzylo)-tiosemikarbazyd lub etopozyd (kontrola dodatnia) w stężeniu 25 pg/ml, całość inkubowano przez kolejne 24 godziny, po czym dodawano roztwór odczynnika BrdU. Po 2 godzinach inkubacji odczytywano absorbancję roztworów w dołkach przy długości fali 450 nm, stosując czytnik mikropłytek (Epoch, BioTek). Wyniki przedstawiono w postaci procentowej wartości przeżywalności komórek nowotworowych w porównaniu do hodowli nie poddanej ekspozycji na działanie 4-(4-fenyloazofenylo)-1-(2-nitrobenzylo)-tiosemikarbazydu lub etopozydu. Wyniki zestawiono w Tabeli 2.
Tabela 2. Przeżywalność komórek nowotworowych poddanych ekspozycji na 4-(4-fenyloazofenylo)-1-(2-nitrobenzylo)-tiosemikarbazyd i etopozyd w stężeniu 25 pg/ml.
| % przeżywalności komórek nowotworowych | ||
| Linie nowotworowe | 4-(4-fenyloazofenylo)-l-(2-nitrobenzylo)tiosemikarbazyd (25 pg/ml) | Etopozyd (25 gg/ml) |
| MDA-MB-231 | 120.89 ±7.03 | 97.98±8.11 |
| MCF-7 | 69.69 ± 6.07 | 81.24±7.28 |
| SCC-25 | 3.87 ± 0.28 | 45.71±0.16 |
| A549 | 0.43 ± 0.04 | 5.60±0.25 |
| AGS | 90.00 ± 6.32 | 51.78±5.49 |
| T98G | 8.68 ± 0.63 | 52.83±4.70 |
| LS180 | 18.29 ± 1.79 | 91.67±3.07 |
| FaDu | 17,69 ± 2.42 | 31.75±1.65 |
| A375 | 1.92 ±2.01 | 17.87±2.36 |
| HT29 | 8.48 ± 0.73 | 42.61 ±5.65 |
PL 243704 BI
Zdolność 4-(4-fenyloazofenylo)-1-(2-nitrobenzylo)-tiosemikarbazydu do hamowania aktywności ludzkiej topoizomerazy Hot i indoloamino-2,3-dioksygenazy 1 (IDO1) określono przy zastosowaniu komercyjnie dostępnych zestawów do oznaczania aktywności enzymatycznej: Topoisomerase II Drug Screening Kit (TopoGEN) (dla oznaczenia stopnia inhibicji topoizomerazy lla) oraz Universal IDO1/IDO2/TDO Inhibitor Screening Assay Kit (Biosciences) (dla oznaczenia stopnia inhibicji indoloamino-2,3-dioksygenazy 1).
Przykład 4:
Mieszaninę zawierającą DNA, topoizomerazę II, bufor i 4-(4-fenyloazofenylo)-1-(2-nitrobenzylo)tiosemikarbazyd w stężeniu 50 pg/ml inkubowano przez 30 minut w 37°C. Po dodaniu 10% SDS, proteinazy K i buforu obciążającego przeprowadzono elektroforezę w 1% żelu agarozowym. Po zakończeniu rozdziału elektroforetycznego DNA wybarwiano bromkiem etydyny i analizowano w świetle UV, stosując system dokumentacji żeli (Syngene G:BOX). Wyniki przedstawiono w postaci procentowej wartości zahamowania aktywności enzymu w porównaniu do próby nie zawierającej 4-(4-fenyloazofenylo)-1-(2-nitrobenzylo)-tiosemikarbazydu.
Poziom zahamowania aktywności topoizomerazy Ha przez 4-(4-fenyloazofenylo)-1-(2-nitrobenzylo)-tiosemikarbazyd (50 pg/ml) przedstawiono w Tabeli 3.
Przykład 5:
Przygotowywano mieszaninę reakcyjną zawierającą bufor, 4-(4-fenyloazofenylo)-1-(2-nitrobenzylo)-tiosemikarbazyd w stężeniu 50 pg/ml oraz indoloamino-2,3-dioksygenazę 1 (IDO1) w stężeniu 40 ng/μΙ. Całość inkubowano przez 3 godziny w temperaturze pokojowej. Po inkubacji odczytywano poziom absorbancji roztworu przy długości fali 320 nm, stosując czytnik mikropłytek (Epoch, BioTek). Wyniki przedstawiono w postaci procentowej wartości zahamowania aktywności enzymu w porównaniu do próby nie zawierającej 4-(4-fenyloazofenylo)-1-(2-nitrobenzylo)-tiosemikarbazydu.
Poziom zahamowania aktywności indoloamino-2,3-dioksygenazy 1 (IDO1) przez 4-(4-fenyloazofenylo)-1-(2-nitrobenzylo)-tiosemikarbazyd (50 pg/ml) przedstawiono w Tabeli 3.
Tabela 3. Stopień zahamowania aktywności topoizomerazy lla oraz indoloamino-2,3-dioksygenazy 1 (IDO1) przez 4-(4-fenyloazofenylo)-1-(2-nitrobenzylo)-tiosemikarbazyd w stężeniu 50 μg/ml
| % hamowania aktywności enzymatycznej | ||
| kontrola ujemna | 4-(4-fenyloazofenylo)-1 -(2nitrobenzylo)-tiosemikarbazyd | |
| topoizomcraza 11α | 0% | 42,36% |
| indoloamino-2,3 -dioksy genaza | 0% | 21,43% |
Zastrzeżenia patentowe
Claims (5)
1. Nowa pochodna tiosemikarbazydu, o wzorze ogólnym 1 przedstawionym na rysunku, będąca jednoczesnym inhibitorem ludzkiej topoizomerazy II oraz indoloamino-2,3-dioksygenazy 1 (IDO1), wykazująca działanie przeciwnowotworowe.
Wzór 1
PL 243704 BI
2. Sposób wytwarzania pochodnej tiosemikarbazydu o wzorze ogólnym 1 przedstawionym na rysunku, znamienny tym, że hydrazyd 2-nitrobenzoesowy poddaje się reakcji z izotiocyjanianu 4-fenyloazofenylu, prowadząc reakcję w rozpuszczalnikach organicznych, a postęp reakcji kontroluje się przy użyciu chromatografii cienkowarstwowej, zaś po zakończeniu reakcji mieszaninę reakcyjną schładza się a powstały osad odsącza się, suszy i następnie krystalizuje z rozpuszczalników polarnych.
3. Sposób, według zastrz. 2, znamienny tym, że reakcję prowadzi się we wrzącym bezwodnym etanolu, korzystnie przez 10-30 minut.
4. Sposób według zastrz. 2, znamienny tym, że otrzymany osad korzystnie krystalizuje się z etanolu.
5. Pochodna tiosemikarbazydu o wzorze ogólnym 1, przedstawionym na rysunku do zastosowania w leczeniu chorób nowotworowych.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL439882A PL243704B1 (pl) | 2021-12-17 | 2021-12-17 | 4-(4-fenyloazofenylo)-1-(2-nitrobenzylo)-tiosemikarbazyd, sposób jego wytwarzania oraz jego pierwsze zastosowanie medyczne |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL439882A PL243704B1 (pl) | 2021-12-17 | 2021-12-17 | 4-(4-fenyloazofenylo)-1-(2-nitrobenzylo)-tiosemikarbazyd, sposób jego wytwarzania oraz jego pierwsze zastosowanie medyczne |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL439882A1 PL439882A1 (pl) | 2023-06-19 |
| PL243704B1 true PL243704B1 (pl) | 2023-10-02 |
Family
ID=86944973
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL439882A PL243704B1 (pl) | 2021-12-17 | 2021-12-17 | 4-(4-fenyloazofenylo)-1-(2-nitrobenzylo)-tiosemikarbazyd, sposób jego wytwarzania oraz jego pierwsze zastosowanie medyczne |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL243704B1 (pl) |
-
2021
- 2021-12-17 PL PL439882A patent/PL243704B1/pl unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL439882A1 (pl) | 2023-06-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Ning et al. | Discovery of novel naphthoquinone derivatives as inhibitors of the tumor cell specific M2 isoform of pyruvate kinase | |
| Taha et al. | Synthesis of 6-chloro-2-Aryl-1H-imidazo [4, 5-b] pyridine derivatives: antidiabetic, antioxidant, β-glucuronidase inhibiton and their molecular docking studies | |
| JP6064079B2 (ja) | Ｃｄｃ７阻害剤 | |
| Olender et al. | Synthesis of some N-substituted nitroimidazole derivatives as potential antioxidant and antifungal agents | |
| CN117069698B (zh) | 靶向shp2降解的双功能分子及其制备和应用 | |
| Rakesh et al. | Xanthone conjugated amino acids as potential anticancer and DNA binding agents: molecular docking, cytotoxicity and SAR studies | |
| Godlewska et al. | Biological evaluation of ω-(dialkylamino) alkyl derivatives of 6H-indolo [2, 3-b] quinoline-novel cytotoxic DNA topoisomerase II inhibitors | |
| CN104072478A (zh) | 一类萘环4位含1,2,3-三唑的萘酰亚胺衍生物的合成及其应用 | |
| Liu et al. | Design, synthesis and antitumor activity evaluation of trifluoromethyl-substituted pyrimidine derivatives | |
| Zhao et al. | Harmine-inspired design and synthesis of benzo [d] imidazo [2, 1-b] thiazole derivatives bearing 1, 3, 4-oxadiazole moiety as potential tumor suppressors | |
| CN107383004B (zh) | 2-氨基咪唑并吡啶类衍生物及制备和应用 | |
| Jin et al. | Synthesis and antitumor activity of ureas containing pyrimidinyl group | |
| CN114195814B (zh) | 羟基萘酮-苯硼酸类化合物、制备方法和用途 | |
| PL243704B1 (pl) | 4-(4-fenyloazofenylo)-1-(2-nitrobenzylo)-tiosemikarbazyd, sposób jego wytwarzania oraz jego pierwsze zastosowanie medyczne | |
| US11786520B2 (en) | Method for producing benzazoloquinolium (BQs) salts and using the biological activity of the composition | |
| PL243705B1 (pl) | 4-(4-fenyloazofenylo)-1-[(naft-1-ylo)metylo]-tiosemikarbazyd, sposób jego wytwarzania oraz jego pierwsze zastosowanie medyczne | |
| PL243706B1 (pl) | 4-[2,6-(diizopropylo)fenylo]-1-[(naft-1-ylo)metylo]-tiosemikarbazyd, sposób jego wytwarzania oraz jego pierwsze zastosowanie medyczne | |
| Bouchikhi et al. | Synthesis, kinase inhibitory potencies and in vitro antiproliferative activity of isoindigo and 7′-azaisoindigo derivatives substituted by Sonogashira cross-coupling | |
| CN102584679B (zh) | 一类苯并咔唑酰胺类化合物、其制备方法和用途 | |
| Błaszczak-Świątkiewicz et al. | Antiproliferative activity of new benzimidazole derivatives. | |
| US9901570B2 (en) | Breast cancer cell growth-inhibiting enzyme inhibitors, method for the production thereof, and use thereof | |
| CN104910074B (zh) | 一类含有羟肟酸基团的吡唑类衍生物及其制备方法及用途 | |
| CN115073392A (zh) | N,n-二乙基磺酰胺二取代的苯并噻唑类衍生物、其制备方法及应用 | |
| JP6831496B2 (ja) | ベンゾオキサゾール誘導体の結晶 | |
| CN109369676B (zh) | 一种双-氟喹诺酮噁二唑脲类n-乙酰诺氟沙星衍生物及其制备方法和应用 |