PL241125B1 - Kompozycja farmaceutyczna do zastosowania jako środek do pobudzania regeneracji lub gojenia ran - Google Patents
Kompozycja farmaceutyczna do zastosowania jako środek do pobudzania regeneracji lub gojenia ran Download PDFInfo
- Publication number
- PL241125B1 PL241125B1 PL423672A PL42367217A PL241125B1 PL 241125 B1 PL241125 B1 PL 241125B1 PL 423672 A PL423672 A PL 423672A PL 42367217 A PL42367217 A PL 42367217A PL 241125 B1 PL241125 B1 PL 241125B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- zebularin
- regeneration
- mice
- dna
- injury
- Prior art date
Links
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 title claims abstract description 72
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 title claims abstract description 29
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 title claims abstract description 29
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 title claims abstract description 22
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 7
- RPQZTTQVRYEKCR-WCTZXXKLSA-N zebularine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)N=CC=C1 RPQZTTQVRYEKCR-WCTZXXKLSA-N 0.000 title description 6
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 title description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims abstract description 5
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims abstract description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 5
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 5
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 claims abstract description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 claims description 56
- 229960001727 tretinoin Drugs 0.000 claims description 36
- 229930002330 retinoic acid Natural products 0.000 claims description 35
- SHGAZHPCJJPHSC-YCNIQYBTSA-N all-trans-retinoic acid Chemical compound OC(=O)\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C SHGAZHPCJJPHSC-YCNIQYBTSA-N 0.000 claims description 34
- 230000035876 healing Effects 0.000 claims description 7
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 claims description 5
- 230000005855 radiation Effects 0.000 claims description 3
- 208000002249 Diabetes Complications Diseases 0.000 claims description 2
- 206010012655 Diabetic complications Diseases 0.000 claims description 2
- 208000005764 Peripheral Arterial Disease Diseases 0.000 claims description 2
- 208000030831 Peripheral arterial occlusive disease Diseases 0.000 claims description 2
- 208000004210 Pressure Ulcer Diseases 0.000 claims description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 2
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 claims 1
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 11
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 abstract description 6
- 230000003685 thermal hair damage Effects 0.000 abstract 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 55
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 50
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 35
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 20
- 210000005069 ears Anatomy 0.000 description 18
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 18
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 17
- 102000016397 Methyltransferase Human genes 0.000 description 14
- 108060004795 Methyltransferase Proteins 0.000 description 14
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 14
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 14
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 12
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 12
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 11
- NMUSYJAQQFHJEW-KVTDHHQDSA-N 5-azacytidine Chemical compound O=C1N=C(N)N=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 NMUSYJAQQFHJEW-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 10
- 230000007067 DNA methylation Effects 0.000 description 9
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 9
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 9
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 description 9
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 230000008569 process Effects 0.000 description 7
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 7
- 230000035131 DNA demethylation Effects 0.000 description 6
- 208000012868 Overgrowth Diseases 0.000 description 6
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 6
- 102000006639 indoleamine 2,3-dioxygenase Human genes 0.000 description 6
- 108020004201 indoleamine 2,3-dioxygenase Proteins 0.000 description 6
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 6
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 5
- 229960002756 azacitidine Drugs 0.000 description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 description 5
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 5
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 5
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 5
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 5
- NMUSYJAQQFHJEW-UHFFFAOYSA-N 5-Azacytidine Natural products O=C1N=C(N)N=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 NMUSYJAQQFHJEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LRSASMSXMSNRBT-UHFFFAOYSA-N 5-methylcytosine Chemical compound CC1=CNC(=O)N=C1N LRSASMSXMSNRBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 4
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 4
- UHDGCWIWMRVCDJ-ZAKLUEHWSA-N cytidine Chemical class O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-ZAKLUEHWSA-N 0.000 description 4
- 230000001973 epigenetic effect Effects 0.000 description 4
- 230000030279 gene silencing Effects 0.000 description 4
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 4
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 4
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 4
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 4
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 4
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 4
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 4
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 4
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 4
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 4
- XAUDJQYHKZQPEU-KVQBGUIXSA-N 5-aza-2'-deoxycytidine Chemical compound O=C1N=C(N)N=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 XAUDJQYHKZQPEU-KVQBGUIXSA-N 0.000 description 3
- 102100026846 Cytidine deaminase Human genes 0.000 description 3
- 108010031325 Cytidine deaminase Proteins 0.000 description 3
- 102100036279 DNA (cytosine-5)-methyltransferase 1 Human genes 0.000 description 3
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 3
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 3
- 102000055027 Protein Methyltransferases Human genes 0.000 description 3
- 108700040121 Protein Methyltransferases Proteins 0.000 description 3
- 101100247004 Rattus norvegicus Qsox1 gene Proteins 0.000 description 3
- 108010022394 Threonine synthase Proteins 0.000 description 3
- 102000005497 Thymidylate Synthase Human genes 0.000 description 3
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- GGCUJPCCTQNTJF-FRCNGJHJSA-N all-trans-4-oxoretinoic acid Chemical compound OC(=O)\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)C(=O)CCC1(C)C GGCUJPCCTQNTJF-FRCNGJHJSA-N 0.000 description 3
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 3
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 3
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012649 demethylating agent Substances 0.000 description 3
- 239000003968 dna methyltransferase inhibitor Substances 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 3
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 3
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 3
- 230000009719 regenerative response Effects 0.000 description 3
- 230000036573 scar formation Effects 0.000 description 3
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 3
- UHDGCWIWMRVCDJ-UHFFFAOYSA-N 1-beta-D-Xylofuranosyl-NH-Cytosine Natural products O=C1N=C(N)C=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- -1 2 (1H) -pyrimidinone riboside Chemical class 0.000 description 2
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XZZHOJONZJQARN-UHFFFAOYSA-N 4-oxo-1h-1,10-phenanthroline-3-carboxylic acid Chemical compound C1=CN=C2C(NC=C(C3=O)C(=O)O)=C3C=CC2=C1 XZZHOJONZJQARN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 2
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101150041972 CDKN2A gene Proteins 0.000 description 2
- 108091029430 CpG site Proteins 0.000 description 2
- UHDGCWIWMRVCDJ-PSQAKQOGSA-N Cytidine Natural products O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-PSQAKQOGSA-N 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- 108010009540 DNA (Cytosine-5-)-Methyltransferase 1 Proteins 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 2
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 2
- DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N Uridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N 0.000 description 2
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 2
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 230000017858 demethylation Effects 0.000 description 2
- 238000010520 demethylation reaction Methods 0.000 description 2
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 230000007608 epigenetic mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000006718 epigenetic regulation Effects 0.000 description 2
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 150000004712 monophosphates Chemical class 0.000 description 2
- 230000000324 neuroprotective effect Effects 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 239000002342 ribonucleoside Substances 0.000 description 2
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 2
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 description 2
- 235000011178 triphosphate Nutrition 0.000 description 2
- UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N triphosphoric acid Chemical compound OP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IHWDSEPNZDYMNF-UHFFFAOYSA-N 1H-indol-2-amine Chemical compound C1=CC=C2NC(N)=CC2=C1 IHWDSEPNZDYMNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091023020 Aldehyde Oxidase Proteins 0.000 description 1
- 102100036826 Aldehyde oxidase Human genes 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 101150035467 BDNF gene Proteins 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010007710 Cartilage injury Diseases 0.000 description 1
- 108010078140 Cation Transport Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018832 Cytochromes Human genes 0.000 description 1
- 108010052832 Cytochromes Proteins 0.000 description 1
- 230000030933 DNA methylation on cytosine Effects 0.000 description 1
- 229940126190 DNA methyltransferase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 230000004543 DNA replication Effects 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 208000001034 Frostbite Diseases 0.000 description 1
- 101000931098 Homo sapiens DNA (cytosine-5)-methyltransferase 1 Proteins 0.000 description 1
- 102000000521 Immunophilins Human genes 0.000 description 1
- 108010016648 Immunophilins Proteins 0.000 description 1
- 102100040061 Indoleamine 2,3-dioxygenase 1 Human genes 0.000 description 1
- 101710120843 Indoleamine 2,3-dioxygenase 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100040062 Indoleamine 2,3-dioxygenase 2 Human genes 0.000 description 1
- 101710120841 Indoleamine 2,3-dioxygenase 2 Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 101100310657 Mus musculus Sox1 gene Proteins 0.000 description 1
- 201000003793 Myelodysplastic syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000033776 Myeloid Acute Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 101150098334 NOG gene Proteins 0.000 description 1
- 206010067482 No adverse event Diseases 0.000 description 1
- 102000013901 Nucleoside diphosphate kinase Human genes 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 229940078467 Prolyl hydroxylase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 206010072170 Skin wound Diseases 0.000 description 1
- 235000019486 Sunflower oil Nutrition 0.000 description 1
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 description 1
- 102100040653 Tryptophan 2,3-dioxygenase Human genes 0.000 description 1
- 101710136122 Tryptophan 2,3-dioxygenase Proteins 0.000 description 1
- 101710100179 UMP-CMP kinase Proteins 0.000 description 1
- 101710119674 UMP-CMP kinase 2, mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 102000007410 Uridine kinase Human genes 0.000 description 1
- 101710168490 Uridine-cytidine kinase Proteins 0.000 description 1
- 102000013814 Wnt Human genes 0.000 description 1
- KLGQSVMIPOVQAX-UHFFFAOYSA-N XAV939 Chemical compound N=1C=2CCSCC=2C(O)=NC=1C1=CC=C(C(F)(F)F)C=C1 KLGQSVMIPOVQAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 230000009056 active transport Effects 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000676 anti-immunogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N beta-L-uridine Natural products O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N 0.000 description 1
- 239000003124 biologic agent Substances 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 230000006931 brain damage Effects 0.000 description 1
- 231100000874 brain damage Toxicity 0.000 description 1
- 208000029028 brain injury Diseases 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000004413 cardiac myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000011712 cell development Effects 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 1
- 239000013043 chemical agent Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000002301 combined effect Effects 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 210000004087 cornea Anatomy 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000032459 dedifferentiation Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000001177 diphosphate Substances 0.000 description 1
- XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J diphosphate(4-) Chemical compound [O-]P([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 235000011180 diphosphates Nutrition 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 1
- 230000008995 epigenetic change Effects 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 235000003642 hunger Nutrition 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 1
- 229960003444 immunosuppressant agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001861 immunosuppressant effect Effects 0.000 description 1
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 1
- 125000001041 indolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000003680 myocardial damage Effects 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 1
- 108091006527 nucleoside transporters Proteins 0.000 description 1
- 102000037831 nucleoside transporters Human genes 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000005305 organ development Effects 0.000 description 1
- 230000008212 organismal development Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 210000000578 peripheral nerve Anatomy 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 230000029279 positive regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 125000000714 pyrimidinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000011552 rat model Methods 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000014493 regulation of gene expression Effects 0.000 description 1
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 1
- 238000002271 resection Methods 0.000 description 1
- 210000001525 retina Anatomy 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 230000037351 starvation Effects 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000002600 sunflower oil Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 210000002435 tendon Anatomy 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 1
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000036269 ulceration Effects 0.000 description 1
- DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N uracil arabinoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940045145 uridine Drugs 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940121396 wnt pathway inhibitor Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
- A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
- A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
- A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
- A61K31/7068—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
- A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
- A61K31/20—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having a carboxyl group bound to a chain of seven or more carbon atoms, e.g. stearic, palmitic, arachidic acids
- A61K31/203—Retinoic acids ; Salts thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P41/00—Drugs used in surgical methods, e.g. surgery adjuvants for preventing adhesion or for vitreum substitution
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Surgery (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Przedmiotem zgłoszenia jest kompozycja farmaceutyczna, która zawiera zebularynę i/lub jej farmaceutycznie dopuszczalną sól oraz co najmniej jeden dopuszczalny farmaceutycznie nośnik i/lub rozcieńczalnik. Przedmiotem zgłoszenia jest też zastosowanie kompozycji określonej powyżej jako środka leczniczego do regeneracji lub leczenia ran wywołanych przez uszkodzenia mechaniczne i/lub chemiczne i/lub termiczne i/lub operacje chirurgiczne. Zgłoszenie obejmuje także sposób pobudzania gojenia ran i ich regeneracji, który obejmuje podanie terapetycznie skutecznej dawki kompozycji farmaceutycznej zdefiniowanej powyżej.
Description
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest kompozycja farmaceutyczna, która zawiera zebularynę do zastosowania medycznego.
Regeneracja to zdolność do odtwarzania uszkodzonych lub utraconych tkanek i organów, co wiąże się z odzyskaniem ich struktury i funkcji. W przypadku powstawania blizny, które jest innym typem odpowiedzi na zranienie, w miejsce uszkodzonych struktur powstaje włóknista tkanka łączna. Zdolności regeneracyjne u ssaków obniżają się wraz z rozwojem organizmu. U dorosłych ssaków zachodzi regeneracja fizjologiczna, jak w przypadku wątroby, naskórka, nabłonka, jelita, ale nie są one zdolne do regeneracji epimorficznej, czyli odtwarzania utraconych narządów.
Obniżenie zdolności do regeneracji i gojenia ran, występowanie ran przewlekłych (Frykberg and Banks 2015) może wiązać się ze stosowaniem radioterapii (Gieringer et al. 2011), chemioterapii (Falcone and Nappi 1984), a także z rozmaitymi stanami chorobowymi, zwłaszcza nowotworami (McCaw 1989, Rybiński et al. 2014), cukrzycą i niedokrwieniem (Brem et al. 2003, Blakytny and Jude 2006).
Bezbliznowe gojenie ran skóry obserwowane u płodów (Podolak-Popinigis et al. 2016) u różnych gatunków ssaków, pełna naprawa uszkodzeń mięśnia sercowego po częściowej resekcji odkryta u noworodków myszy (Porrello et al. 2011) i regeneracja rdzenia kręgowego po całkowitej transekcji u noworodków oposów krótkoogonowych (Fry et al. 2003) to spektakularne przykłady obrazujące olbrzymi potencjał regeneracyjny ssaków, który ulega wyciszeniu u osobników dorosłych.
Metoda wycinania otworów o średnicy 2 mm w środkowej części małżowiny usznej umożliwia trwałe znakowanie myszy laboratoryjnych. Gojenie się tych otworów prowadzi do pewnego zmniejszenia ich średnicy, ale pozostają one do końca życia. W odróżnieniu od przeważającej części szczepów laboratoryjnych, mysz MRL/MpJ wykazuje zdolności do pełnego zamknięcia takich otworów po 30 dniach od uszkodzenia (Clark et al. 1998). Następuje odtworzenie architektury tkanki złożonej obejmujące nie tylko skórę, ale naczynia krwionośne, mięśnie, chrząstkę i nerwy obwodowe (Buckley et al. 2011), które, co więcej, wydaje się wiązać z podwyższoną odpowiedzią regeneracyjną w innych tkankach, w tym w sercu (Leferovich et al. 2001), kikutach palców po amputacji (Chadwick et al. 2007), siatkówce (Xia et al. 2011), rogówce (Ueno et al. 2005), rdzeniu kręgowym (Thuret et al. 2012), ścięgnach (Lalley et al. 2015) i chrząstce stawów (Fitzgerald et al. 2008).
Zjawisko zarastania otworu w małżowinie usznej można uważać zatem za wyznacznik potencjału regeneracyjnego całego organizmu. Regenerację małżowiny usznej można stymulować farmakologicznie u myszy laboratoryjnych, które nie wykazują spontanicznej zdolności do zamykania otworów w uszach.
Zamykanie otworów w uszach myszy po zewnętrznym podaniu GM284, liganda immunofilin przedstawiono w opisie wynalazku US 2009/0093528 A.
W następnych latach opisano stymulację częściowego zamykania otworów wyciętych w małżowinie usznej przy wykorzystaniu inhibitora szlaku Wnt, XAV-939 (Bastakoty et al. 2015) oraz inhibitora hydroksylazy prolilowej, 1,4-DPCA (kwas 4-okso-1H-1,10-fenantrolino-3-karboksylowy (Zhang et al. 2015).
Rozwój organizmu i jego organów zależy od regulacji epigenetycznej. Ponadto, zmiany epigenetyczne determinują indukcję pluripotencji w komórkach somatycznych. Epigenetyczne podstawy potencjału regeneracyjnego (Gornikiewicz et al. 2013, Gornikiewicz et al. 2016, Podolak-Popinigis et al. 2016) i udział mechanizmów epigenetycznych w procesach regeneracji był przedmiotem kilku prac badawczych (Yakushiji et al. 2007, Powell et al. 2013, Sim et al. 2015). Jednak próby użycia czynników epigenetycznych do pobudzenia procesów regeneracyjnych nie zakończyły się znaczącymi sukcesami (Wang et al. 2010, Tan et al. 2015).
Metylacja DNA należy do podstawowych mechanizmów epigenetycznej regulacji ekspresji genów i odgrywa istotną rolę w szeregu procesów biologicznych jak rozwój, organogeneza, starzenie się, różnicowanie i odróżnicowanie. Zaburzenia metylacji DNA najpierw odkryte w nowotworach, znaleziono później w wielu innych chorobach. Generalnie metylacja regionów promotorowych skutkuje wyciszeniem ekspresji genów. Inhibicja metylotransferaz DNA prowadzi do pasywnej demetylacji DNA wraz z kolejnymi rundami replikacyjnymi, co umożliwia aktywację tranksrypcyjną genów wyciszonych przez metylację DNA. Wyciszenie ekspresji genu przez metylację DNA spotyka się w różnych stanach patologicznych, stąd inhibitory metylotransferaz DNA są przedmiotem badań jako potencjalne leki nie tylko w nowotworach, ale też w zaburzeniach immunologicznych i neurodegeneracyjnych.
PL 241 125 B1
Wśród inhibitorów metylotransferaz DNA wyróżnić można inhibitory nukleozydowe i nienukleozydowe. Inhibitory nukleozydowe są analogami naturalnych inhibitorów i są inkorporowane do DNA podczas replikacji. Wiązanie zmodyfikowanych nukleozydów inkorporowanych do DNA przez metylotransferazę DNA skutkuje jej nieodwracalną inhibicją. Aktywność inhibitorów nienukleozydowych nie wymaga inkorporacji do DNA, zatem mogą blokować metylotransferazy DNA w komórkach nie dzielących się. Inhibitory nukleozydowe z kolei mogą po inkorporacji do DNA pozostać w komórkach dłużej niż nienukleozydowe.
5-aza-2’-deoksycytydyna (decytabina) i 5-azacytydyna (azacytydyna) są wykorzystywane w leczeniu zespołów mielodysplastycznych i ostrych białaczek szpikowych. Aktywność przeciwnowotworowa wiązana jest z efektami cytotoksyczności oraz demetylacji DNA, przy czym ten ostatni stymulować różnicowanie komórek.
Zebularyna jest analogiem cytydyny pozbawionym grupy aminowej przy atomie węgla 4 w pierścieniu pirymidynowym. Inhibicja metylotransferaz DNA przez zebularynę wymaga uprzedniej inkorporacji tego nukleozydu do DNA, co z kolei poprzedza złożona aktywacja metaboliczna obejmująca: fosforylację zebularyny do monofosforanu przez kinazę urydynowo-cytydynową, dalszą fosforylację do dwufosforanu przez kinazę monofosforanów nukleozydów i redukcję przez reduktazę rybonukleotydów do dwufosforanu deoksyzebularyny oraz kolejną fosforylację przez kinazę dwufosforanów nukleozydów do trójfosforanu deoksyzebularyny (Ben-Kasus et al. 2005), który jest substratem polimerazy DNA. Zebularyna jest włączana do DNA podczas jego syntezy głównie w miejsce cytydyny i paruje się nieprawidłowo z adeniną (Lee et al. 2004). Zebularyna inkorporowana do łańcucha DNA tworzy stabilny addukt kowalencyjny z metylotransferazą DNA(ale w odróżnieniu od 5-aza-2’deoksy-cytydyny podczas inhibicji nie ulega metylacji). W efekcie dochodzi do obniżenia poziomu metylotransferaz DNA prowadzące do hypometylacji (Cheng et al. 2004). Zebularyna wnika do komórki w drodze transportu aktywnego, ale jednocześnie zachodzić może jej usuwanie za pośrednictwem białek transporterowych (Arimany-Nardi et al. 2014). Powstawaniu trójfosforanu deoksyzebularyny, substratu inkorporowanego do DNA, przeciwdziałają procesy utleniania zebularyny przez cytozolową oksydazę aldehydową mające miejsce głównie w wątrobie oraz inkorporację do RNA, przy czym szacuje się, że inkorporacja do RNA jest siedmiokrotnie wyższa niż do DNA (Ben-Kasus et al. 2005). Ponadto cytydyna może hamować kompetytywnie fosforylację zebularyny (Ben-Kasus et al. 2005).
W odróżnieniu od dwóch stosowanych klinicznie leków epigenetycznych, 5-azacytydyny i 5-aza-2’-deoksy-cytydyny, zebularyna wykazuje wysoką stabilność w wodzie gdzie jej czas półtrwania wynosi 508 h w 37°C, przy pH 7,4 (Cheng et al. 2003) oraz bardzo niską cytotoksyczność tak w hodowlach komórkowych (Ben-Kasus et al. 2005), jak i w modelu zwierzęcym. U myszy traktowanych dawką 400 mg/kg wagi ciała zebularyny podawanej dożylnie przez 78 kolejnych dni (Herranz et al. 2006) nie zaobserwowano efektów toksycznych.
Ograniczenia związane z metaboliczną aktywacją odpowiadają prawdopodobnie za konieczność stosowania wysokich dawek zebularyny (kilkaset mg/kg wagi ciała), ale też jej niską toksyczność. Niską toksyczność zebularyny tłumaczy też fakt, że jej metabolity są substancjami endogennymi Beumer et al. 2006). Poza wymogiem użycia Bardzo wysokich dawek, zastosowanie zebularyny komplikuje jej działanie jako inhibitora syntazy tymidylanowej i deaminazy cytydynowej (Yoo et al. 2008).
Z uwagi na te wady zebularyna, choć wykazuje interesujące właściwości jako potencjalny lek, nie weszła nigdy ani do użycia medycznego, ani nawet do prób klinicznych. Niemniej jednak zebularyna była badana pod kątem zastosowań medycznych, głównie, jako lek przeciwnowotworowy na modelach komórkowych i zwierzęcych (Herranz et al. 2006, Tan et al. 2013, Yang et al. 2013). Wykazano działanie na różne typy nowotworów przy stosowaniu samej zebularyny lub jej użyciu jako senzybilizatora (Andrade et al. 2014).
Wskazywano też na inne możliwe zastosowania medyczne zebularyny. Znaleziono anty-immunogenne działanie zebularyny wywierane prawdopodobnie poprzez indukcję 2,3-deoksygenazy indoleaminowej w śledzionie, co może zostać wykorzystane w leczeniu chorób autoimmunologicznych lub w celu zapobiegania odrzuceniu przeszczepu (Nittby et al. 2013).
Podanie zebularyny bezpośrednio do miejsca uszkodzenia mózgu wywiera efekt neuroprotekcyjny, co obserwowano w modelu udaru wywołanym u szczura (Dock et al. 2015). Ponadto wykazano, że zebularyna stymuluje transdyferencjację mezenchymalnych komórek macierzystych do kardiomiocytów (Naeem et al. 2013).
Wskutek demetylacji DNA może dojść do reaktywacji wyciszonych genów, w tym genów zdolnych do indukcji pluripotencji lub transdyferencjacji komórek.
PL 241 125 B1
W opisie wynalazku US2011/0076678 A Zebularyna wymieniana jest pośród innych inhibitorów metylotransferaz DNA jako jeden z czynników demetylujących, które indukują pluripotencję, natomiast w opisie wynalazku US 2011/0206644 A zebularyna wymieniana jest pośród innych inhibitorów metylotransferaz DNA jako jeden z czynników demetylujących, które indukują transdyferencjację.
Chociaż rozważano jej wykorzystanie w terapiach komórkowych, zebularyny nie użyto dotąd w celu pobudzania regeneracji w modelu zwierzęcym.
W odniesieniu do podłoża aktywności proregeneracyjnej, rozważyć należy nie tylko demetylację DNA, ale też działanie neuroprotekcyjne, cytotoksyczne w odniesieniu do wybranych typów komórek i immunomodulujące zebularyny. Zebularyna nie jest wyłącznie inhibitorem metylotransferaz DNA, ale też deaminazy cytydynowej i syntazy tymidylanowej.
Zebularyna jest nukleozydowym inhibitorem metylotransferaz DNA jak również deaminazy cytydynowej lub syntazy tymidylanowej znanym także pod następującymi nazwami: pyrimidin-2-one β-D-ribofuranoside, 2(1H)-pyrimidinone riboside, ribosylpyrimidin-2-one, 4-Deoxyuridine, 1-(e-D-Ribofuranosyl)-1,2-dihydropyrimidin-2-one, 2-Pyrimidone-1 -β-D-riboside.
Przedmiotem niniejszego wynalazku jest pierwsze zastosowanie epigenetycznej terapii regeneracyjnej w organizmie ssaka polegające na podaniu kompozycji farmaceutycznej zawierającej zebularynę kwas retinowy lub ich farmaceutycznie dopuszczalne sole oraz co najmniej jeden znany dopuszczalny farmaceutycznie nośnik lub rozcieńczalnik do zastosowania jako środek do pobudzania regeneracji lub gojenia ran wywołanych przez uszkodzenia mechaniczne, chemiczne, termiczne, operacje chirurgiczne lub stany patologiczne.
Kompozycja farmaceutyczna według drugiego wynalazku zawiera zebularynę i kwas retinowy lub ich farmaceutycznie dopuszczalne sole oraz co najmniej jeden znany dopuszczalny farmaceutycznie nośnik lub rozcieńczalnik do zastosowania jako środek leczniczy do regeneracji lub leczenia ran wywołanych przez uszkodzenia mechaniczne lub chemiczne lub termiczne lub radiacyjne lub operacje chirurgiczne lub inne stany patologiczne.
Korzystnie zastosowanie dotyczy odleżyn, ran jako powikłań cukrzycowych lub powikłań choroby tętnic obwodowych.
W tym aspekcie zebularyna jako analog cytydyny może być włączana do nowosyntetyzowanego łańcucha DNA i działa jako inhibitor metylotransferaz DNA.
Istnieją cztery zasady budujące cząsteczkę DNA: cytozyna, guanina, adenina i tymina. Cytozyny wchodzące w skład dinukleotydów CpG mogą być metylowane do 5-metylocytozyny. Takie modyfikacje w regionach promotorowych genu prowadzą często do jego wyciszenia. Po replikacji DNA jedna z jego nici jest zmetylowana (nić macierzysta), a druga niezmetylowana (nić potomna) i taka cząsteczka DNA określana jest jako hemimetylowana. Po zahamowaniu aktywności metylotransferaz DNA, w wyniku replikacji powstaną nici potomne, która pozostaną niezmetylowane, co z czasem prowadzi do biernej demetylacji.
W powiązanym aspekcie, metody i kompozycje przedstawione w niniejszym wynalazku stymulują silnie regenerację tkanki złożonej po zranieniu. Użycie przedmiotowych kompozycji może hamować metylację DNA, jak również modulować działanie systemu immunologicznego podczas wczesnych etapów gojenia rany.
Demetylacja DNA pod wpływem zebularyny może prowadzić do aktywacji wyciszonych genów w tym geny odpowiedzialne za gojenie ran i regenerację, takie jak geny pluripotencji.
Zebularyna może zwiększać wytwarzanie 2,3 dioksygenazy indoleaminowej (IDO), która jest naturalnym czynnikiem immunosupresyjnym.
2,3- dioksygenaza indoleaminowa (IDO) rozkłada grupę indolową tryptofanu i inicjuje wytwarzanie neuroreaktywnych metabolitów regulujących działanie układu odpornościowego, znanych pod ogólną nazwą kynurenin.
Immunosupresyjne działanie IDO można tłumaczyć: (i) głodzeniem tryptofanowym; (ii) bezpośrednim działaniem toksycznym wspomnianych metabolitów(katabolitów), które indukują apoptozę komórek układu odpornościowego; (iii) stymulacją komórek pomocniczych T do immunosupresyjnych komórek regulatorowych.
Zebularyna może wywierać efekt cytotoksyczny na wybrane grupy komórek w rejonie uszkodzenia eliminując w ten sposób komórki odpowiedzialne za szkodliwy stan zapalny oraz wytwarzanie blizny i w ten sposób pobudzając regenerację.
PL 241 125 B1
Celem niniejszego wynalazku jest dostarczenie nowych kompozycji i sposobów, które mogłyby być zastosowane do regeneracji tkanek złożonych po uszkodzeniu. Nieoczekiwanie problem ten został rozwiązany w istotnym stopniu w niniejszym wynalazku.
Określenia stosowane w niniejszym opisie i zastrzeżeniach patentowych, mają następujące znaczenie:
Określenie “rana” obejmuje każdy rodzaj uszkodzenia żywej tkanki wywołany przez uderzenie lub ucisk i inne czynniki mechaniczne, oparzenie, odmrożenie, promieniowanie, czynniki chemiczne, niedokrwienie i inne czynniki biologiczne. W szczególności termin “rana” obejmuje uszkodzenia skóry, ale też innych tkanek i organów.
Określenie “gojenie ran” odnosi się do pouszkodzeniowego procesu naprawczego, który obejmuje oczyszczenie obszaru rany z ciał obcych i martwych tkanek i proliferację komórek prowadzącą do odtworzenia ciągłości tkanki bądź to z wytworzeniem blizny lub bez.
Określenie “regeneracja” oznacza proces odtworzenia utraconych tkanek, struktur i przydatków zachodzące spontanicznie lub pod działaniem stymulacji farmakologicznej.
Określenie “tkanka złożona” odnosi się do tkanki zawierającej co najmniej dwa różne współdziałające typy komórek.
Określenie “rana przewlekła” lub “rana niegojąca się” odnosi się do ran, które nie wykazują wyraźnego gojenia w czasie przekraczającym normalne gojenie; typowo rany, które nie goją się w ciągu 3 miesięcy są określane jako przewlekłe. Rany przewlekłe lub rany niegojące się są często związane z niedokrwieniem lub owrzodzeniem u pacjentów cukrzycowych, ale nie są ograniczone do tej grupy.
Określenie „miejsca CpG ” i „CpG” odnoszą się do sekwencji nukleotydowej DNA, gdzie nukleotyd cytozynowy poprzedza nukleotyd guaninowy w orientacji 5' ^ 3.
Określenie „metylotransferaza DNA” lub “DNMT” odnoszą się do białek DNMT1, DNMT3a i DNMT3b. DNMT1 jest zachowawczą metylotransferazą DNA, czyli odpowiedzialną za kopiowanie wzorów metylacyjnych DNA na nić potomną po replikacji, natomiast DNMT3a and DNMT3b znane są jako metylotransferazy DNA „de novo”, które kształtują wzory metylacji DNA we wczesnych etapach rozwoju organizmu.
Określenie “IDO” odnosi się do trzech różnych białek, które mogą przetwarzać tryptofan: IDO-1, IDO-2 i TDO.
W przypadku, gdy zebularyna jest podawana we wczesnej fazie gojenia ran, należy rozumieć, że określenie “faza wczesna” obejmuje odpowiedź immunologiczną bezpośrednio po zranieniu, ale przed etapem remodelingu.
OPIS FIGUR
Figura 1. - przedstawia reprezentatywne fotografie zamykania małżowiny usznej wykonane w 42 dniu po uszkodzeniu u myszy traktowanych zebularyną i kontroli otrzymujących vehiculum.
Otwory w małżowinie usznej myszy, którym podawano zebularynę w postaci zastrzyków dootrzewnowych ulegały niemal całkowitemu zamknięciu w ciągu około 30 dni po uszkodzeniu, podczas gdy u kontroli traktowanych zastrzykami dootrzewnowymi z soli fizjologicznej ulegały one nieznacznemu zmniejszeniu w porównaniu do początkowo wyciętego koła o średnicy 2 mm. Zebularynę podawano 7 razy (1000 mg/kg wagi ciała): w dniu uszkodzenia bezpośrednio po jego wykonaniu, a następnie 1,2, 3, 4, 7 i 10 dni po uszkodzeniu.
Figura 2. - przedstawia wyniki regeneracji małżowiny usznej u 47 myszy traktowanych zebularyną (n = 94 uszy) i 48 myszy kontrolnych (n = 95 uszu) przedstawione jako procent zamknięcia otworu w dniu 42 po uszkodzeniu.
Istotność statystyczną wyników wyznaczono przy użyciu heteroskedastycznego dwuskrzydłowego testu t- Studenta. Różnice o istotności statystycznej p < 0.001 są oznaczone trzema gwiazdkami (***).
Zebularynę podawano 7 razy (1000 mg/kg wagi ciała): w dniu uszkodzenia bezpośrednio po jego wykonaniu, a następnie 1,2, 3, 4, 7 i 10 dni po uszkodzeniu.
Figura 3. - przedstawia przebieg zamykania otworów w małżowinie usznej wyznaczony w dniu uszkodzenia bezpośrednio po jego wykonaniu i w 7, 14, 21,28, 35 oraz 42 dniu po uszkodzeniu u 47 myszy traktowanych zebularyną (n = 94 uszy) i 48 myszy kontrolnych (n = 95 uszu).
Średnia powierzchnia otworów w małżowinie usznej myszy traktowanych zebularyną i kontrolnych była podobna w początkowych dniach po uszkodzeniu. W dniu 14 po uszkodzeniu u zwierząt, które otrzymywały zebularynę, średnia powierzchnia była nieco większa, gdy od dnia 21 odnotowywano,
PL 241 125 B1 że jest wyraźnie mniejsza względem kontroli. Maksymalne zamknięcie otworów w małżowinie usznej obserwowano w dniu 35 po uszkodzeniu.
Zebularynę podawano 7 razy (1000 mg/kg wagi ciała): w dniu uszkodzenia bezpośrednio po jego wykonaniu, a następnie 1,2, 3, 4, 7 i 10 dni po uszkodzeniu.
Istotność statystyczną wyników wyznaczono przy użyciu dwuskrzydłowego testu Manna-Whitneya. Różnice o istotności statystycznej p < 0,001 są oznaczone trzema gwiazdkami (***).
Figura 4. - przedstawia rozkład powierzchni otworów w małżowinie usznej u 47 myszy traktowanych zebularyną (n = 94 uszy) i 48 myszy kontrolnych (n = 95 uszu) w dniu 42 po uszkodzeniu. Każda kropka reprezentuje jedno ucho.
Zebularynę podawano 7 razy (1000 mg/kg wagi ciała): w dniu uszkodzenia bezpośrednio po jego wykonaniu, a następnie 1, 2, 3, 4, 7 i 10 dni po uszkodzeniu. Istotność statystyczną wyników wyznaczono przy użyciu dwuskrzydłowego testu Manna-Whitneya. Różnice o istotności statystycznej p < 0,001 są oznaczone trzema gwiazdkami (***).
Figura 5. - przedstawia efekt dawki zebularyny na regenerację małżowiny usznej u myszy.
Średnią powierzchnię otworów w małżowinie usznej wyznaczono po podaniu zebularyny w dawkach 250, 500 i 1000 mg/kg wagi ciała dla dnia 42 po uszkodzeniu. Zebularynę podawano 7 razy: w dniu uszkodzenia bezpośrednio po jego wykonaniu, a następnie 1,2, 3, 4, 7 i 10 dni po uszkodzeniu.
Istotność statystyczną wyników wyznaczono przy użyciu dwuskrzydłowego testu Manna-Whitneya. Różnice o istotności statystycznej p < 0,001 są oznaczone trzema gwiazdkami (***).
Figura 6. - przedstawia efekt podskórnego i dootrzewnowego podania zebularyny na regenerację małżowiny usznej myszy.
Średnią powierzchnię otworów w małżowinie usznej wyznaczono dla dnia 42 po uszkodzeniu. Zebularynę (1000 mg/kg) podawano 7 razy: w dniu uszkodzenia bezpośrednio po jego wykonaniu, a następnie 1, 2, 3, 4, 7 i 10 dni po uszkodzeniu. Istotność statystyczną wyników wyznaczono przy użyciu dwuskrzydłowego testu Manna-Whitneya. Różnice o istotności statystycznej p < 0,001 są oznaczone trzema gwiazdkami (***).
Figura 7. - przedstawia zmiany ekspresji genów związanych z pluripotencją, rozwojem i cyklem komórkowym obserwowane po podaniu zebularyny w rejonie uszkodzenia i regeneracji.
Względne zmiany ekspresji genów wyznaczono metodą ilościowego PCR w czasie rzeczywistym stosując Tbp i Actb jako transkrypty referencyjne. Średnie wartości stosunku ekspresji genu względem genów referencyjnych wyznaczono dla 6 myszy (n = 8 uszu) dla każdego z dni pomiarowych.
Istotność statystyczną wyników wyznaczono przy użyciu dwuskrzydłowego testu Manna-Whitneya. Różnice o istotności statystycznej p < 0.05 są oznaczone gwiazdką (*).
Figura 8. - przedstawia spadek metylacji DNA w rejonie uszkodzenia i regeneracji po podaniu zebularyny.
Średnią zawartość 5-metylocytozyny wyznaczano dla 5 myszy (n = 8 uszu) dla każdego z dni pomiarowych. Istotność statystyczną wyników wyznaczono przy użyciu heteroskedastycznego dwuskrzydłowego testu t- Studenta. Różnice o istotności statystycznej p < 0.001 są oznaczone trzema gwiazdkami (***).
Figura 9. - przedstawia reprezentatywne fotografie przedstawiające całkowite regeneracyjne zamknięcie otworów w uszach myszy pod wpływem synergistycznego działania kwasu retinowego (RA) i zebularyny.
Kompletne zamknięcie otworów w małżowinie usznej u myszy traktowanej zebularyną i kwasem retinowym w postaci iniekcji dootrzewnowych w ciągu 21 dni po uszkodzeniu. Zebularynę (1000 mg/kg wagi ciała) podawano 7 razy: w dniu uszkodzenia bezpośrednio po jego wykonaniu, a następnie 1,2, 3, 4, 7 i 10 dni po uszkodzeniu. Kwas retinowy RA (16 mg/kg wagi ciała) podawano 6 razy: w dniu uszkodzenia bezpośrednio po jego wykonaniu, a następnie 2, 4, 7, 9 i 11 dni po uszkodzeniu. Kontrole, którym podawano vehiculum nie wykazywały znaczącego zamykania otworów, natomiast częściowe zamykanie otworów miało miejsce u myszy traktowanych tylko RA.
Figura 10. - przedstawia synergistyczny efekt działania pro-regeneracyjny zebularyny i kwasu retinowego.
Przebieg zamykania otworów w małżowinie usznej myszy wyznaczono bezpośrednio po uszkodzeniu oraz w dniu 7, 14, 21, 28, 35 i 42 po jego wykonaniu u 12 myszy (n = 24 uszy) traktowanych zebularyną w kombinacji z kwasem retinowym (ZEB+RA), 6 myszy (n = 12 uszu) otrzymujących jedynie kwas retinowy (RA), 6 myszy (n = 12 uszu) otrzymujących kwas 4-keto-retinowy (4-keto-RA) i 12 myszy
PL 241 125 B1 (n = 24 uszy), którym podawano vehiculum (ZEB+RA contrl). Na te wykresy nałożono przebieg zamykania otworów w uszach u myszy traktowanych tylko zebularyną (ZEB, Rysunek 3). Całkowite zamknięcie otworów w uszach odnotowano w dniu 21 po uszkodzeniu jedynie u myszy, którym podawano kombinację zebularyny i kwasu retinowego. Zebularynę (1000 mg/kg wagi ciała) podawano 7 razy: w dniu uszkodzenia bezpośrednio po jego wykonaniu, a następnie 1,2, 3, 4, 7 i 10 dni po uszkodzeniu. Kwas retinowy RA (16 mg/kg wagi ciała) podawano 6 razy: w dniu uszkodzenia bezpośrednio po jego wykonaniu, a następnie 2, 4, 7, 9 i 11 dni po uszkodzeniu.
Figura 11. - przedstawia działanie 5-azacytydyny na zamykanie otworów w małżowinie usznej myszy.
5-azacytydynę (5-azaC) (0,25 mg/kg wagi ciała) podawano 7 razy: w dniu uszkodzenia, bezpośrednio po uszkodzeniu i w 1,2, 3, 4, 7, 10 dniu po uszkodzeniu. Średnią powierzchnię otworu w małżowinie usznej wyznaczono dla dnia 42 po uszkodzeniu. Wyniki porównano z rezultatami otrzymanymi dla myszy traktowanych zebularyną (1000 mg/kg wagi ciała) oraz kontrolami, które otrzymywały sól fizjologiczną według tego samego schematu. Istotność statystyczną wyznaczono przy użyciu dwuskrzydłowego testu Manna-Whitneya. Różnice o istotności statystycznej p < 0,001 są oznaczone trzema gwiazdkami (***).
Wynalazek ilustrują następujące przykłady wykonania, nie stanowiące jego ograniczenia
P r z y k ł a d 1
Wpływ zebularyny na regenerację tkanki złożonej
W celu określenia działania zebularyny na proces regeneracji tkanki złożonej, w środkowej części małżowiny usznej u dwumiesięcznych samic myszy BALB/c wycięto otwory o średnicy 2 mm przy użyciu laboratoryjnego dziurkacza nożyczkowego. Myszy losowo podzielono na dwie grupy po 6 osobników. Myszom z pierwszej grupy podawano dootrzewnowo 7 dawek zebularyny (1000 mg/kg wagi ciała) w soli fizjologicznej (50 mg/ml), w dniu zranienia bezpośrednio po wykonaniu uszkodzenia oraz 1, 2, 3, 4, 7, 10 dni po zranieniu. Myszom z drugiej grupy, kontrolnej, podawano dootrzewnowo sól fizjologiczną.
Uszy fotografowano co 7 dni przez 42 dni, a przebieg zarastania otworu śledzono wyznaczając jego powierzchnię za pomocą komputerowej analizy wykonanych zdjęć. Eksperyment powtórzono ośmiokrotnie. Ogółem eksperyment objął 47 myszy traktowanych zebularyną i 48 myszy kontrolnych, które otrzymywały sól fizjologiczną. O ile u osobników kontrolnych odnotowano nieznaczne zamykanie otworów w małżowinie usznej, podobne do wyników prezentowanych w literaturze, rozległe odtworzenie małżowiny usznej obserwowano u zwierząt traktowanych zebularyną, w postaci szerokich kręgów nowoodtworzonej tkanki otaczającej region uszkodzenia, co jest widoczne na zdjęciach (Fig. 1).
Średnie powierzchnie otworu w małżowinie usznej wyznaczone w dniu 42 po uszkodzeniu wynosiły odpowiednio dla myszy traktowanych zebularyną i kontroli otrzymujących sól fizjologiczną 0,53+/-0,3 i 1,77+/-0,48 mm2. Wyniki przedstawiono jako procent zamknięcia rany wynoszący 83,2% i 43,6%, odpowiednio dla myszy traktowanych zebularyną i kontrolnych (Fig. 2). Przebieg postępu procesu regeneracyjnego przedstawia Fig. 3.
Statystycznie lepsze zarastanie otworów w małżowinie usznej u myszy traktowanych zebularyną odnotowywano od dnia 21 po zranieniu, a maksymalne zarastanie obserwowano w dniu 35. Rozkłady powierzchni zarastania małżowiny usznej w 42 dniu po zranieniu przedstawione są w formie diagramów, gdzie każda kropka reprezentuje jedno ucho (Fig. 4). Diagram ten nie tylko pokazuje wariancję biologiczną, ale wyraźnie obrazuje kontrast pomiędzy grupą kontrolną a grupą traktowaną zebularyną, gdzie rozrzut wyników jest wyraźnie mniejszy. W celu oceny czy efekt regeneracyjny zależy od dawki zebularyny, porównano działanie dawek 250, 500 i 1000 mg/kg wagi ciała (Fig. 5). Porównano też efekt dootrzewnowego i podskórnego podania zebularyny na zarastanie małżowiny usznej. Podskórne zastrzyki dały wyraźną odpowiedź, ale zdecydowanie słabszą niż podanie dootrzewnowe (Fig. 6).
P r z y k ł a d 2
Wpływ działania zebularyny na ekspresję genów związanych z pluripotencją i rozwojem organizmu
W celu określenia działania zebularyny na ekspresję genów pluripotencji oraz związanych z rozwojem i cyklem komórkowym, zbadano w rejonie uszkodzenia u myszy traktowanych zebularyną i kontrolnych w dniu 7, 14, 21 i 42 po uszkodzeniu a także w niezranionej małżowinie usznej w dniu 0 poziomy transkryptów dla panelu genów związanych z pluripotencją i rozwojem organizmu obejmującego Cdkn2a, Msx1, Nanog, Sox2, Bdnf, Sox1,Nog i Myt11.
W tym celu, zwierzęta poddano terminacji w odpowiednich punktach czasowych, pobrane tkanki umieszczono w roztworze RNAlater (Qiagen) i przechowywano w temp. -80°C. Pierścienie otaczające
PL 241 125 B1 otwory w małżowinie usznej wycinano przy pomocy 3 mm sztancy biopsyjnej i izolowano z nich RNA przy użyciu zestawu RNeasy (Qiagen). Poziomy wybranych transkryptów wyznaczono przy użyciu metody ilościowego PCR w czasie rzeczywistym przy wykorzystaniu Tbp i Actb jako transkryptów referencyjnych dla sześciu myszy (8 uszu) dla każdego punktu czasowego. Sekwencje nukleotydowe starterów do PCR zestawiono w Tabeli 1. Silny wzrost ekspresji badanych genów obserwowano w dniu 7 po uszkodzeniu u myszy traktowanych zebularyną. Szczególnie spektakularny wzrost ekspresji w porównaniu z myszami kontrolnymi dotyczy genów pluripotencji Nanog i Sox2 (Fig. 7).
P r z y k ł a d 3
Wpływ zebularyny na poziom metylacji cytozyny w genomowym DNA w rejonie uszkodzenia i regeneracji
Metylacja regionów promotorowych jest kluczowym epigenetycznym mechanizmem regulacji ekspresji genów polegającym zwykle na represji. W celu wyznaczenia poziomu demetylacji DNA w tkankach regenerujących się, zawartość 5-metylocytozyny porównano u zwierząt traktowanych zebularyną i w kontrolach. W tym celu pobierano uszy po terminacji zwierząt w dniach 7, 14, 21 i 42 po uszkodzeniu przy pomocy 3 mm sztancy biopsyjnej i wycinano z nich pierścienie tkanki otaczającej otwory w małżowinie usznej. Dodatkowo pobrano próbki małżowiny usznej od myszy nie poddanych uszkodzeniu. Z tak uzyskanych próbek izolowano genomowe DNA przy pomocy zestawu DNeasy (Qiagen). Zawartość 5-metylcytozyny wyznaczano dla próbek 100 ng genomowego DNA przy użyciu zestawu 5-mC DNA ELISA (ZYMO, D5325). Wykazano znaczący spadek metylacji DNA w dniu 7 po zranieniu u zwierząt traktowanych zebularyną (Fig. 8), co pokazuje, że odpowiedzi regeneracyjnej towarzyszy demetylacja DNA w regionie uszkodzenia.
P r z y k ł a d 4
Synergistyczne stymulacja regeneracji przez zebularynę i kwas retinowy (RA)
Podczas gdy kwas retinowy stymuluje ekspresję szeregu genów uczestniczących w procesach rozwojowych, można założyć, że zebularyna, jako czynnik demetylujący odblokowuje metylacyjne wyciszenie genów zachodzące wraz z rozwojem organizmu. Dlatego można przyjąć, że połączenie tych dwóch czynników potęguje odpowiedź regeneracyjną w małżowinie usznej myszy. Efekt połączonego podania zebularyny i kwasu retinowego na zarastanie otworów w małżowinie usznej porównano z rezultatami uzyskanymi po podaniu samego kwasu retinowego lub samej zebularyny.
W celu zbadania połączonego działania zebularyny i kwasu retinowego na proces regeneracji tkanki złożonej, w środkowej części małżowinie usznej dwumiesięcznych samic myszy BALB/c wycięto otwory o średnicy 2 mm przy użyciu laboratoryjnego dziurkacza nożyczkowego.
Myszy losowo podzielono grupy po 6 osobników. Myszom z pierwszej grupy podano dootrzewnowo zebularynę (1000 mg/kg wagi ciała) oraz kwas retinowy (16 mg/kg wagi ciała).
Zebularynę podawano w soli fizjologicznej (50 mg/ml), w dniu zranienia bezpośrednio po jego wykonaniu oraz w 1,2, 3, 4, 7, 10 dni po zranieniu, natomiast RA podawano zawiesinie dimetylosulfotlenku w oleju słonecznikowym w dniu zranienia bezpośrednio po jego wykonaniu oraz w 2, 4, 7, 9 i 11 dniu po zranieniu.
Myszom z drugiej grupy podawano tylko RA (16 mg/k wagi ciała), grupy trzeciej kwas keto-retinowy (4-keto RA, 16 mg/k wagi ciała) - pochodną RA i jego komórkowy metabolit powstający w procesie utleniania RA przez cytochromy. Myszom z grupy czwartej, kontrolnej, tylko vehiculum wg tego samego schematu.
Uszy fotografowano co 7 dni przez 42 dni po uszkodzeniu, a przebieg zarastania otworu śledzono wyznaczając jego powierzchnię za pomocą komputerowej analizy wykonanych zdjęć.
Częściowe zamknięcie otworu w małżowinie usznej odnotowano w grupach otrzymujących tylko RA lub tylko 4-keto RA, natomiast bardzo nieznaczne zarastanie u myszy kontrolnych otrzym ujących vehiculum.
W rezultacie połączonego podania zebularyny i kwasu retinowego nastąpiło całkowite zamknięcie otworów w małżowinie usznej w ciągu 21 dni od uszkodzenia, co pokazano na reprezentatywnych zdjęciach (Fig. 9). Przebieg zamknięcia otworu w małżowinie usznej u zwierząt traktowanych kombinacją RA i zebularyny zestawiono z w ynikami uzyskanymi dla RA, 4-keto-RA, vehiculum i zebularyny (Fig. 10).
P r z y k ł a d 5
Działanie 5-azacytydyny na zarastanie otworów wyciętych w małżowinie usznej myszy
5-azacytydyna, podobnie jak zebularyna jest nukleozydowym inhibitorem metylotransferaz DNA. Efekt podania zebularyny na zamykanie otworu w małżowinie usznej myszy badano wg takiego samego
PL241 125 BI schematu jak dla zebularyny, z tym że użyto znacznie niższej dawki (0,25 mg/kg wagi ciała), gdyż 5-azacytydyna, w odróżnieniu od zebularyny, nie ulega metabolicznej konwersji do urydyny, w wyniku czego wykazuje znacznie wyższą aktywność, ale też i toksyczność.
Porównanie wyników otrzymanych dla 6 myszy, którym podawano dootrzewnowo 5-azacytydynę z rezultatami uzyskanymi uprzednio dla zebularyny i soli fizjologicznej, wskazują że 5-azacytydyna nie stymuluje zamykania, ale, przeciwnie, hamuje normalny fizjologiczny proces zarastania otworów w małżowinie usznej (Fig. 11), jakie jest obserwowane u myszy kontrolnych. Przykład ten pokazuje, że zebularyna jako czynnik pro-regeneracyjny nie może zostać zastąpiona dowolnym inhibitorem metylotransferaz DNA.
Tabela 1
Sekwencje nukleotydowe starterów użytych do badania poziomów wybranych transkryptów metodą PCR w czasie rzeczywistym.
Gen | Primer sensowny | Primer antysensowny |
Actb | GGCTGTATTCCCCTCCATCG | CCAGTTGGTAACAATGCCATGT |
Bdftf | ATTAGCGAGTGGGTCACAGC | ATTGCGAGTTCCAGTGCCTT |
Cdkn2a | TGTGTACCGCTGGGAACG | GCTCTGCTCTTGGGATTGG |
Msxl | TCCCCGCTTCTCCCCGCCC | CGGTTGGTCTTGTGCTTGC |
Mytll | CGGAACCCAGACATGGAGGT | CTACAGGCAAGTCCCAGCAA |
Nanog | TACCTCAGCCTCCAGCAGAT | CCAGATGCGTTCACCAGATA |
Nog | CCAGCACTATCTACACATC | i?1 |
Soxl | CTTCATGGTGTGGTCCCG | TTGCTGATCTCCGAGTTGTG |
Sox2 | GGGAGAAAGAAGAGGAGAGAGA | CGATTGTTGTGATTAGTTTTTGGA |
Tbp | GAGAGCCACGGACAACTGCG | GGGAACTTCACATCACAGCTC |
Literatura cytowana w opisie
Andrade, A. F., et al. (2014). Zebularine induces chemosensitization to methotrexate and efficiently decreases AhR gene methylation in childhood acute lymphoblastic leukemia cells. Anticancer drugs 25(1): 72-81.
Arimany-Nardi, C., et al. (2014). Nucleoside transporters and human organie cation transporter I determine the cellular handling of DNA-methyltransferase inhibitors. British journal of pharmacology 171(16): 3868-3880.
Bastakoty, D., et al. (2015). Inhibition of Wnt/p-catenin pathway promotes regenerative repair of cutaneous and cartilage injury. The FASEB Journal 29(12): 4881-4892.
Ben-Kasus, T., et al. (2005). Metabolie activation of zebularine, a novel DNA methylation inhibitor, in human bladder carcinoma cells. Biochemical pharmacology 70(1): 121-133.
Beumer, J. H., et al. (2006). A mass balance and disposition study of the DNA methyltransferase inhibitor zebularine (NSC 309132) and three of its metabolites in mice. Clinical cancer research 12(19): 5826-5833.
Buckley, G., et al. (2011). Peripheral nerve regeneration in the MRL/Mpj ear wound model. J Anat 218(2): 163-172.
Chadwick, R. B., et al. (2007). Digit tip regrowth and differential gene expression in MRL/Mpj, DBA/2, and C57BL/6 mice. Wound Repair Regen 15(2): 275-284.
Cheng, J. C., et al. (2003). Inhibition of DNA methylation and reactivation of silenced genes by zebularine.Journal of the National Cancer Institute 95(5): 399-409.
Cheng, J. C., et al. (2004). Preferential response of cancer cells to zebularine. Cancer celi 6(2): 151-158.
Clark, L. D., et al. (1998). A new murine model for mammalian wound repair and regeneration. Clin Immunol Immunopathol 88(1): 35-45.
PL 241 125 B1
Dock, H., et al. (2015). DNA methylation inhibitor zebularine confers stroke protection in ischemic rats. Translational stroke research 6(4): 296-300.
Fitzgerald, J., et al. (2008). Evidence for articular cartilage regeneration in MRL/MpJ mice. Osteoarthritis Cartilage 16(11): 1319-1326.
Fry, E. J., et al. (2003). Regeneration of supraspinal axons after complete transection of the thoracic spinal cord in neonatal opossums (Monodelphis domestica). J Comp Neurol 466(3): 422-444.
Gornikiewicz, B., et al. (2016). Changes in gene methylation patterns in neonatal murine hearts: Implications for the regenerative potential. BMC Genomics 17: 231.
Gornikiewicz, B., et al. (2013). Epigenetic basis of regeneration: analysis of genomic DNA methylation profiles in the MRL/MpJ mouse. DNA Res 20(6): 605-621.
Herranz, M., et al. (2006). The novel DNA methylation inhibitor zebularine is effective against the development of murine T-cell lymphoma. Blood 107(3): 1174-1177.
Lalley, A. L., et al. (2015). Improved biomechanical and biological outcomes in the MRL/MpJ murine strain following a full-length patellar tendon injury. J Orthop Res 33(11): 1693-1703.
Lee, G., et al. (2004). Mutagenicity of the cytidine analog zebularine in Escherichia coli. DNA repair 3(2): 155-161.
Leferovich, J. M., et al. (2001). Heart regeneration in adult MRL mice. Proc Natl Acad Sci U S A 98(17): 9830-9835.
Liu, H., et al. (2007). Low dose Zebularine treatment enhances immunogenicity of tumor cells. Cancer Lett 257(1): 107-115.
Naeem, N., et al. (2013). DNA Methylation Inhibitors, 5-azacytidine and Zebularine Potentiate the T ransdifferentiation of Rat Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells into Cardiomyocytes. Cardiovascular therapeutics 31(4): 201-209.
Nittby, H., et al. (2013). Zebularine induces long-term survival of pancreatic islet allotransplants in streptozotoein treated diabetic rats. PLoS One 8(8): e71981.
Podolak-Popinigis, J., et al. (2016). The methylome and transcriptome of fetal skin: implications for scarless healing. Epigenomics 8(10): 1331-1345.
Porrello, E. R., et al. (2011). Transient regenerative potential of the neonatal mouse heart. Science 331(6020): 1078-1080.
Powell, C., et al. (2013). Analysis of DNA methylation reveals a partial reprogramming of the Muller glia genome during retina regeneration. Proc Natl Acad Sci U S A 110(49): 19814-19819. Sim, C. B., et al. (2015). Dynamic changes in the cardiac methylome during postnatal development. Faseb j 29(4): 1329-1343.
Tan, S. J., et al. (2015). Muscle tissue engineering and regeneration through epigenetic reprogramming and scaffold manipulation. Sci Rep 5: 16333.
Tan, W., et al. (2013). The DNA methyltransferase inhibitor zebularine induces mitochondriamediated apoptosis in gastric cancer cells in vitro and in vivo. Biochemical and biophysical research communications 430(1): 250-255.
Thuret, S., et al. (2012). Enhanced functional recovery in MRL/MpJ mice after spinal cord dorsal hemisection. PLoS One 7(2): e30904.
Ueno, M., et al. (2005). Accelerated wound healing of alkali-burned corneas in MRL mice is associated with a reduced inflammatory signature. Invest Ophthalmol Vis Sci 46(11): 4097-4106. Wang, G., et al. (2010). The effects of DNA methyltransferase inhibitors and histone deacetylase inhibitors on digit regeneration in mice. Regenerative medicine 5(2): 201-220.
Xia, H., et al. (2011). Enhanced retinal pigment epithelium regeneration after injury in MRL/MpJ mice. Exp Eye Res 93(6): 862-872.
Yakushiji, N., et al. (2007). Correlation between Shh expression and DNA methylation status of the limb-specific Shh enhancer region during limb regeneration in amphibians. Dev Biol 312(1): 171-182.
PL241 125 BI
Yang, P.-M., et al. (2013). Zebularine inhibits tumorigenesis and sternness of colorectal cancer via p53-dependent endoplasmic reticulum stress. Scientific reports 3: 3219.
Yoo, C. B., et al. (2008). Activation of p16 gene silenced by DNA methylation in cancer cells by phosphoramidate derivatives of 2'-deoxyzebularine. Journal of medicinal chemistry 51(23): 7593-7601.
Zhang, Y., et al. (2015). Drug-induced regeneration in adult mice. Sci TransilMed 7(290): 290ra292.
Claims (3)
1. Kompozycja farmaceutyczna znamienna tym, że zawiera zebularynę i kwas retinowy lub ich farmaceutycznie dopuszczalne sole oraz co najmniej jeden znany dopuszczalny farmaceutycznie nośnik lub rozcieńczalnik do zastosowania jako środek do pobudzania regeneracji lub gojenia ran wywołanych przez uszkodzenia mechaniczne, chemiczne, termiczne, operacje chirurgiczne lub stany patologiczne.
2. Kompozycja farmaceutyczna znamienna tym, że zawiera zebularynę i kwas retinowy lub ich farmaceutycznie dopuszczalne sole oraz co najmniej jeden znany dopuszczalny farmaceutycznie nośnik lub rozcieńczalnik do zastosowania jako środek leczniczy do regeneracji lub leczenia ran wywołanych przez uszkodzenia mechaniczne lub chemiczne lub termiczne lub radiacyjne lub operacje chirurgiczne lub inne stany patologiczne.
3. Kompozycja do zastosowania według zastrz. 2, znamienna tym, że dotyczy odleżyn, ran jako powikłań cukrzycowych lub powikłań choroby tętnic obwodowych
Priority Applications (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
PL423672A PL241125B1 (pl) | 2017-11-30 | 2017-11-30 | Kompozycja farmaceutyczna do zastosowania jako środek do pobudzania regeneracji lub gojenia ran |
PCT/PL2018/000027 WO2019108072A1 (en) | 2017-11-30 | 2018-03-16 | Use of zebularine for promoting wound healing and regeneration |
EP18000264.4A EP3492086B1 (en) | 2017-11-30 | 2018-03-16 | Pharmaceutical composition comprising zebularine (1-(beta-d-ribofuranosyl)-2(1h)-pyrimidinone) for use in promoting regeneration and wound healing |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
PL423672A PL241125B1 (pl) | 2017-11-30 | 2017-11-30 | Kompozycja farmaceutyczna do zastosowania jako środek do pobudzania regeneracji lub gojenia ran |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
PL423672A1 PL423672A1 (pl) | 2019-06-03 |
PL241125B1 true PL241125B1 (pl) | 2022-08-08 |
Family
ID=61691609
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
PL423672A PL241125B1 (pl) | 2017-11-30 | 2017-11-30 | Kompozycja farmaceutyczna do zastosowania jako środek do pobudzania regeneracji lub gojenia ran |
Country Status (3)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP3492086B1 (pl) |
PL (1) | PL241125B1 (pl) |
WO (1) | WO2019108072A1 (pl) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
PL439912A1 (pl) * | 2021-12-20 | 2023-06-26 | Uniwersytet Gdański | Kompozycja farmaceutyczna na bazie formulacji hydrożelowych do zastosowania jako dwuskładnikowy preparat stymulujący regenerację tkanek |
WO2023241715A1 (zh) * | 2022-06-16 | 2023-12-21 | 中国科学院动物研究所 | 视黄酸受体激活剂及其组合在哺乳动物再生修复中的应用 |
Family Cites Families (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU2002322805B2 (en) * | 2001-07-31 | 2007-11-08 | The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Inhibitor of DNA methylation |
US8440460B2 (en) | 2005-07-27 | 2013-05-14 | The Board Of Regents Of The University Of Texas System | Methods for transdifferentiating cells |
US20070042976A1 (en) * | 2005-08-22 | 2007-02-22 | Gideon Strassmann | Method of treating cosmetic and dermatologic conditions by a demethylating agent |
US7795216B2 (en) | 2006-03-24 | 2010-09-14 | Glia Med, Inc. | Methods for promoting composite tissue regeneration and uses thereof |
US8877253B2 (en) * | 2006-05-11 | 2014-11-04 | Regenics As | Cellular extracts |
US9382515B2 (en) | 2007-04-07 | 2016-07-05 | Whitehead Institute For Biomedical Research | Reprogramming of somatic cells |
WO2011132085A2 (en) * | 2010-04-21 | 2011-10-27 | Kalluri, Raghu | Methods and compositions for treating fibrosis |
EP2517731A1 (en) * | 2011-04-07 | 2012-10-31 | Ludwig-Maximilians-Universität München | Method of activating a target gene in a cell |
WO2015139013A1 (en) * | 2014-03-14 | 2015-09-17 | Bo Han | Functional scaffold for tissue repair and regeneration |
-
2017
- 2017-11-30 PL PL423672A patent/PL241125B1/pl unknown
-
2018
- 2018-03-16 EP EP18000264.4A patent/EP3492086B1/en active Active
- 2018-03-16 WO PCT/PL2018/000027 patent/WO2019108072A1/en active Application Filing
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP3492086B1 (en) | 2021-08-25 |
WO2019108072A1 (en) | 2019-06-06 |
PL423672A1 (pl) | 2019-06-03 |
EP3492086A1 (en) | 2019-06-05 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Houle et al. | Repair of chronic spinal cord injury | |
Zhao et al. | Combination treatment with chondroitinase ABC in spinal cord injury—breaking the barrier | |
Alexandre et al. | Intradiscal injection of oxygen-ozone gas mixture for the treatment of cervical disc herniations | |
Dergham et al. | Rho signaling pathway targeted to promote spinal cord repair | |
JP2008502705A (ja) | 発作および発作性障害を処置するための化合物ならびに方法 | |
Tang et al. | Neuroprotective role of an N-acetyl serotonin derivative via activation of tropomyosin-related kinase receptor B after subarachnoid hemorrhage in a rat model | |
RU2008146734A (ru) | Новый подход к лечению компартмент-синдрома | |
KR20100124820A (ko) | 합성 포스포디에스테르 올리고뉴클레오타이드 및 이들의 치료적 용도 | |
PL241125B1 (pl) | Kompozycja farmaceutyczna do zastosowania jako środek do pobudzania regeneracji lub gojenia ran | |
Wei et al. | Inhibiting cortical protein kinase A in spinal cord injured rats enhances efficacy of rehabilitative training | |
Draz et al. | Neurotrophic and antioxidant effects of silymarin comparable to 4-methylcatechol in protection against gentamicin-induced ototoxicity in guinea pigs | |
Simonato et al. | Are the neurotrophic factors a suitable therapeutic target for the prevention of epileptogenesis? | |
Neary et al. | P2 receptor signalling, proliferation of astrocytes, and expression of molecules involved in cell–cell interactions | |
Grasso et al. | Neuroprotective potential of erythropoietin and darbepoetin alfa in an experimental model of sciatic nerve injury | |
Chu et al. | Motor nerve graft is better than sensory nerve graft for survival and regeneration of motoneurons after spinal root avulsion in adult rats | |
AU2005268775A1 (en) | Prodrugs activated by RNA-dependent DNA-polymerases | |
Ma et al. | Recombinant human erythropoietin protects myocardial cells from apoptosis via the janus-activated kinase 2/signal transducer and activator of transcription 5 pathway in rats with epilepsy | |
BRPI0613211A2 (pt) | oligo-nucleotÍdios estimuladores da proliferaÇço de cÉlulas-mçe ou cÉlulas tronco mesenquimatosas e seus usos | |
US20220168300A1 (en) | Methods of Managing Vascular Conditions and Diabetic Peripheral Neuropathies | |
Calancie et al. | A guidance channel seeded with autologous Schwann cells for repair of cauda equina injury in a primate model | |
WO2020225871A1 (ja) | 食道狭窄抑制剤 | |
Cruz‐Martínez et al. | Muscle fiber conduction velocity in situ in hypokalemic periodic paralyses | |
JP2015165772A (ja) | オリゴヌクレオチド、およびオリゴヌクレオチドを有効成分として含有する脂質異常症治療剤 | |
WO2019246520A1 (en) | Aminobisphosphonates as latency reversing agents and combination treatments for hiv cure | |
Brown et al. | Immediate and delayed nerve repair: improved muscle mass and function with leukemia inhibitory factor |