PL233525B1

PL233525B1 - Przeszczep oraz sposób przygotowania przeszczepu do regeneracji tkanek, zwłaszcza w obrębie jamy ustnej

Info

Publication number: PL233525B1
Application number: PL405263A
Authority: PL
Inventors: Henryk Bursig; Paweł Lampe; Stanisław Dyląg; Jacek Żurek; Agnieszka Galwas-Żurek
Original assignee: Henryk Bursig; Dylag Stanislaw; Galwas Zurek Agnieszka; Lampe Pawel; Regionalne Centrum Krwiodawstwa I Krwiolecznictwa; Zurek Jacek
Priority date: 2013-09-06
Filing date: 2013-09-06
Publication date: 2019-10-31
Also published as: PL405263A1

Abstract

Przeszczep do regeneracji tkanek, zwłaszcza w obrębie jamy ustnej, charakteryzuje się tym, że stanowi go, wyodrębniona z wycinka tkanki błona tkankowa, korzystnie błona łączno - tkankowa, zbudowana z natywnego kolagenu grubości 0,1-5 mm, uwodniona, przebadana pod kątem obecności chorób zakaźnych i oczyszczona z przyległych tkanek, aż do uzyskania jednolitej struktury kolagenowej, sterylizowana radiacyjnie, korzystnie wzbogacona o naniesione produkty lecznicze. Sposób przygotowania przeszczepu do regeneracji tkanek, zwłaszcza w obrębie jamy ustnej, polegający na pobieraniu tkanek, zamrażaniu i konserwacji w alkoholu, płukaniu i pakowaniu w 0,9% roztworze NaCl oraz wyjaławianiu, charakteryzuje się tym, że przebadaną tkankę po znanej obróbce, oczyszcza się mechanicznie przy pomocy tnących narzędzi chirurgicznych z przyległych tkanek, aż do uzyskania jednolitej struktury kolagenowej, w celu uzyskania błony o grubości 0,1-5 mm, po czym błonę przycina się odpowiednio do wielkości leczonej powierzchni i wytrawia się w alkoholu, dogodnie etylowym. Następnie płucze się co najmniej dwukrotnie w płynie infuzyjnym dla wymycia resztek alkoholu i otrzymany przeszczep kieruje się do sterylizacji radiacyjnej, a na końcu przechowuje się w płynie infuzyjnym.

Description

Opis wynalazku

Przedmiotem wynalazku jest przeszczep do regeneracji tkanek, zwłaszcza w obrębie jamy ustnej, przeznaczony dla niemal wszystkich dziedzin medycznych. Ponadto przedmiotem wynalazku jest sposób przygotowania przeszczepu do regeneracji tkanek, zwłaszcza w obrębie jamy ustnej.

Znany jest z polskiego opisu patentowego nr 140197 sposób przygotowania biostatycznego przeszczepu powięzi wołowej polegający na pobraniu powięzi z młodych zwierząt rzeźnych, konserwacji w mieszaninie alkoholu etylowego i glutaraldehydu i płukaniu w roztworze NaCl oraz wyjaławianiu. Istota wynalazku polega na tym, że płaty powięzi po procesie płukania nacina się tak, aby po ich rozciągnięciu powstała siatka.

Ponadto znane jest z polskiego opisu patentowego nr 206261 zastosowanie oczyszczonego materiału kolagenowego pochodzącego z tkanki zawierającej naturalny kolagen, do wytwarzania wielowarstwowego arkusza kolagenowego materiału membranowego i wielowarstwowy arkusz kolagenowy materiału membranowego do regeneracji błony śluzowej. Zastosowanie oczyszczonego materiału kolagenowego polega na tym, że materiał membranowy zawiera warstwę zaporową mającą zewnętrzną powierzchnię gładką i przeciwległą powierzchnię włóknistą, a także warstwę matrycową materiału kolagenowego, utworzoną przez liofilizację zawiesiny materiału kolagenowego, nałożonej na powierzchnię włóknistą warstwy zaporowej, przez co warstwa matrycowa przylega do powierzchni włóknistej warstwy zaporowej i ma otwartą strukturę gąbczasto podobną.

Wielowarstwowy arkusz kolagenowego materiału membranowego charakteryzuje się tym, że stanowi warstwę zaporową mającą jedną powierzchnię gładką i przeciwległą powierzchnię włóknistą, a także warstwę matrycową materiału kolagenowego, przylegającą do powierzchni włóknistej warstwy zaporowej. Warstwa matrycowa ma otwartą strukturę gąbczastą i zawiera kolagen i/lub mieszaninę kolagenu I i II.

Dotychczas w stomatologii dla augmentacji dziąsła, poszerzenia strefy dziąsła zrogowaciałego oraz pokrycia recesji dziąsłowych stosuje się zabieg zużyciem przeszczepu autogennej tkanki łącznej pobranej z podniebienia. Przy wykonywaniu tego zabiegu, zachodzi konieczność wytworzenia dwóch miejsc zabiegowych: w miejscu pobrania tkanki i w miejscu jej przeszczepienia.

Problem w pobraniu tkanki łącznej z podniebienia, wynika z jej niejednoznacznej budowy anatomiczno-histologicznej (mała grubość tkanki miękkiej - wymagane jest minimum 2,5-3 mm, wysokie sople nabłonkowe, obecność tkanki tłuszczowej i gruczołowej, zmienny przebieg tętnicy podniebiennej, jak i różny stopień wysklepienia podniebienia).

Alternatywę dla konieczności wytworzenia dwóch miejsc zabiegowych stwarzają tkanki z naturalnego kolagenu, które ponadto wywierają pozytywny wpływ na gojenie ran i na integrację tkanek. Tego rodzaju tkanki mają zastosowanie w ortopedii, okulistyce i innych dziedzinach medycyny.

Niedogodnością stosowania tych tkanek jest konieczność używania formy liofilizowanej, co utrudnia sposób aplikacji (wymagają wcześniejszego uwodnienia) i wydłuża czas zabiegu.

Celem i zadaniem wynalazku jest opracowanie tkanki-przeszczepu, nadającej się do bezpośredniego użycia na leczoną powierzchnię (ubytku) w technikach medycznych takich jak: stomatologia, ortopedia, chirurgia naczyniowa oraz sposobu przygotowania gwarantującego stabilność przeszczepu w organizmie biorcy. Okazało się, że można to osiągnąć dzięki uwodnieniu i odpowiedniej obróbce tkanki.

Istotą wynalazku jest przeszczep do regeneracji tkanek, zwłaszcza w obrębie jamy ustnej, który stanowi wyodrębniona z wycinka tkanki pobranej od dawcy błona tkankowa, korzystnie błona łącznotkankowa, z natywnego kolagenu o grubości 0,1-5 mm, wstępnie zamrożona, poddana w tym czasie diagnostyce w celu wykluczenia obecności patogenów, rozmrożona, uwodniona poprzez płukanie w soli fizjologicznej w warunkach sterylnych, oczyszczona z przyległych tkanek do jednolitej struktury kolagenowej, wytrawiona w etanolu, płukana co najmniej dwukrotnie w płynie infuzyjnym, sterylizowana radiacyjnie, korzystnie wzbogacona o naniesione na jej powierzchnię produkty lecznicze.

Korzystnie błona jest utrzymywana w stanie uwodnionym i przechowywana w temperaturze od 16°C do 30°C.

Korzystnie błona jest sterylizowana radiacyjnie dawką 25-50 kGy.

Korzystnie błona jest pochodzenia ludzkiego bądź zwierzęcego.

Korzystnie przeszczep na powierzchni błony, posiada czynniki wzrostu. Korzystnie przeszczep na powierzchni błony, posiada białka.

PL 233 525 B1

Istotą wynalazku jest również sposób przygotowania przeszczepu do regeneracji tkanek, zwłaszcza w obrębie jamy ustnej polegający na zamrażaniu i konserwacji w alkoholu tkanek pobranych od dawcy, płukaniu i pakowaniu w 0,9% roztworze NaCl oraz wyjaławianiu, charakteryzujący się tym, że przebadaną tkankę po znanej obróbce czyli po zamrożeniu, rozmrożeniu, płukaniu w płynie infuzyjnym przykładowo 0,9% roztworze NaCl, oczyszcza się mechanicznie przy pomocy tnących narzędzi chirurgicznych z przyległych tkanek, aż do uzyskania jednolitej struktury kolagenowej, w celu uzyskania błony o grubości 0,1-5 mm, po czym błonę przycina się do pożądanej wielkości i wytrawia się w alkoholu, dogodnie etylowym, następnie płucze się co najmniej dwukrotnie w płynie infuzyjnym dla wymycia resztek alkoholu, sterylizuje radiacyjnie i umieszcza się w płynie infuzyjnym.

Korzystnie błonę przycina się wzdłuż włókien kolagenowych, bądź poprzecznie do włókien kolagenowych.

Korzystnie błonę przycina się odpowiednio do wielkości ubytku, z naddatkiem o wielkości najwyżej 3 mm.

Korzystnie błonę wytrawia się za pomocą alkoholu o stężeniu co najmniej 70% przez okres 24-96 godzin.

Korzystnie do wymycia resztek alkoholu stosuje się płyn infuzyjny w ilości 1,1-1,5 co najmniej dwukrotnie.

Korzystnie sterylizację radiacyjną przeszczepu prowadzi się stosując dawkę 25-50 kGy.

Korzystnie po sterylizacji radiacyjnej na błonę nanosi się komórki autologiczne, bądź komórki allogeniczne.

Korzystnie po sterylizacji radiacyjnej na błonę nanosi się komórki ksenogeniczne.

Korzystnie po sterylizacji radiacyjnej na błonę nanosi się czynniki wzrostu.

Korzystnie po sterylizacji radiacyjnej na błonę nanosi się produkt leczniczy.

Korzystnie dla przechowania, przeszczep pakuje się do pojemnika foliowego z płynem infuzyjnym, dogodnie 0,9% roztworem NaCl w ilości 0,5-5:1 względem powierzchni przeszczepu i przechowuje się w temperaturze od 16°C do 30°C.

Zaletą wynalazku jest to, że po wyjęciu z opakowania nadaje się do bezpośredniego zastosowania użycia na leczoną powierzchnię (ubytku) w technikach medycznych takich jak: stomatologia, ortopedia, chirurgia naczyniowa. Przeszczep według proponowanego rozwiązania zachowuje właściwości tzn. kształt i elastyczność natywnej tkanki i nie wymaga użycia żadnych technik przed zastosowaniem. Zaletą takiego rozwiązania jest skrócenie czasu zabiegu wszczepienia oraz szybsza integracja z organizmem biorcy i zaleczenie urazu.

Przedmiot wynalazku zostanie bliżej objaśniony w następujących przykładach.

P r z y k ł a d I

Fragment tkanki powięzi uda o rozmiarze 200 cm², po pobraniu od dawcy, poddaje się zamrażaniu w temp. poniżej -20°C do 6 miesięcy. W tym czasie surowicę dawcy, diagnozuje się pod względem obecności chorób zakaźnych: HIV, wirusa B i C wątroby, kiły i innych pochodzenia wirusowego i bakteryjnego, i w przypadku uzyskania wyników ujemnych (zakwalifikowaniu dawcy) - tkankę rozmraża się w temperaturze lodówki czyli około 8°C i po rozmrożeniu płucze się w roztworze soli fizjologicznej (0,9% NaCl), dwukrotnie w ilości 500 ml x 2 przez okres 15 minut x 2. Wszelkie czynności wykonuje się w warunkach sterylnych. Wypłukaną tkankę oczyszcza się mechanicznie przy pomocy skalpela z przyległych tkanek, aż do uzyskania jednolitej struktury kolagenowej dla uzyskania błony o grubości 3 mm. Uzyskaną błonę przycina się wzdłuż włókien kolagenowych, odpowiednio do wielkości defektu dziąsłowego, czyli do wielkości defektu kostnego przekraczającego go o 3 mm, po czym wytrawia się w 50 ml alkoholu etylowego o mocy 70% przez okres 48 godzin. Następnie ponownie płucze się w soli fizjologicznej dwukrotnie 2 x 50 ml dla wymycia resztek alkoholu. Po wypłukaniu błonę pakuje się do pojemnika foliowego, nakleja wskaźnik sterylizacji radiacyjnej i kieruje się do sterylizacji radiacyjnej stosując dawkę promieniowania 35 kGy przez 5 minut. Po sterylizacji przeszczep wyjmuje się z opakowania foliowego na sali zabiegowej i wszczepia do ubytku dziąsłowego pacjenta.

P r z y k ł a d II

Fragment tkanki z osierdzia o rozmiarze 300 cm², pobrany od młodej jałówki rzeźnej, zamraża się w temp. poniżej -30°C na okres 1 miesiąca. W tym czasie diagnozuje się na obecność chorób odzwierzęcych. Po zakwalifikowaniu, pobraną tkankę zamraża się w temperaturze lodówki około 8°C i po rozmrożeniu płucze się dwukrotnie w roztworze soli fizjologicznej w ilości 2 x 350 ml przez okres 2x10 minut. Wszelkie czynności wykonuje się w warunkach sterylnych. Wypłukaną tkankę, oczyszcza się

PL 233 525 B1 mechanicznie przy pomocy skalpela z przyległych tkanek, aż do uzysk ania jednolitej struktury kolagenowej tak, aby uzyskać błonę o grubości 4 mm. Uzyskaną błonę przycina się w poprzek włókien odpowiednio do wielkości przyzębia zęba, czyli do wielkości 1 cm x 4 cm, po czym wytrawia się w 65 ml alkoholu etylowego o mocy 70% przez okres 72 godzin. Ponownie płucze się w 0,9% roztworze NaCl dwukrotnie w ilości 2 x 70 ml dla wymycia resztek alkoholu. Bezpośrednio po wymyciu, otrzymany przeszczep allogeniczny poddaje się sterylizacji radiacyjnej dawką promieniowania 35 kGy przez okres 10 minut dla oczyszczenia od ewentualnych patogenów i usieciowaniu kolagenu. Następnie na wysterylizowany przeszczep nanosi się za pomocą pipety komórki ksenogeniczne. Otrzymany przeszczep allogeniczny pakuje się do pojemnika foliowego z 10 ml medium hodowlanego i przechowuje w temperaturze od 4°C do 8°C.

P r z y k ł a d III

Fragment tkanki powięzi uda o rozmiarze 10 cm², po pobraniu od dawcy, poddaje się zamrażaniu w temp. poniżej -20°C do 6 miesięcy. W tym czasie surowicę dawcy, diagnozuje się pod względem obecności chorób zakaźnych: HIV, wirusa B i C wątroby, kiły i innych pochodzenia wirusowego i bakteryjnego, i w przypadku uzyskania wyników ujemnych (zakwalifikowaniu dawcy) - tkankę rozmraża się w temperaturze lodówki czyli około 8°C i po rozmrożeniu, płucze się w roztworze soli fizjologicznej (0,9% NaCl), dwukrotnie w ilości 500 ml x 2 przez okres 15 minut x 2. Wszelkie czynności wykonuje się w warunkach sterylnych. Wypłukaną tkankę oczyszcza się mechanicznie przy pomocy skalpela z przyległych tkanek, aż do uzyskania jednolitej struktury kolagenowej dla uzyskania błony o grubości 2 mm. Uzyskaną błonę przycina się wzdłuż włókien kolagenowych, odpowiednio do wielkości defektu dziąsłowego, czyli do wielkości defektu kostnego przekraczającego go o 3 mm, po czym wytrawia się w 50 ml alkoholu etylowego o mocy 70% przez okres 48 godzin. Następnie ponownie płucze się w soli fizjologicznej dwukrotnie 2 x 50 ml dla wymycia resztek alkoholu. Po wypłukaniu błonę pakuje się do pojemnika foliowego, nakleja wskaźnik sterylizacji radiacyjnej i kieruje się do sterylizacji radiacyjnej stosując dawkę promieniowania 35 kGy przez 5 minut. Po sterylizacji przeszczep wyjmuje się z opakowania foliowego w sterylnym pomieszczeniu i pod nawiewem laminarnym nanosi się za pomocą pipety komórki autologiczne na powierzchnię przeszczepu. Otrzymany przeszczep allogenicznej błony z komórkami autologicznymi umieszcza się w butelce hodowlanej w medium hodowlanym i przechowuje się w inkubatorze CO2, przez okres 15 dni, zmieniając podłoże hodowlane, co 72 godziny. Po zakończeniu hodowli, pakuje się przeszczep z komórkami do sterylnego pojemnika o objętości 5 ml w podłożu hodowlanym i przechowuje w temperaturze od 4°C do 8°C do 72 godzin do momentu przeszczepienia.

P r z y k ł a d IV

Fragment powięzi brzucha o rozmiarze 3 cm², po pobraniu od dawcy, poddaje się zamrażaniu w temp. poniżej -20°C do 6 miesięcy. W tym czasie surowicę dawcy, diagnozuje się pod względem obecności chorób zakaźnych: HIV, wirusa B i C wątroby, kiły i innych pochodzenia wirusowego i bakteryjnego, i w przypadku uzyskania wyników ujemnych (zakwalifikowaniu dawcy) - tkankę rozmraża się w temperaturze 22°C przez 60 minut. Po rozmrożeniu, płucze się w roztworze soli fizjologicznej (0,9% NaCl), dwukrotnie w ilości 20 ml x 2 przez okres 10 minut x 2. Wszelkie czynności wykonuje się w warunkach sterylnych. Wypłukaną tkankę oczyszcza się mechanicznie przy pomocy skalpela z przyległych tkanek, aż do uzyskania jednolitej struktury kolagenowej dla uzyskania błony o grubości 1 mm. Uzyskaną błonę przycina się wzdłuż włókien kolagenowych, odpowiednio do wielkości defektu dziąsłowego, czyli do wielkości defektu kostnego przekraczającego go o 3 mm, po czym wytrawia się w 50 ml alkoholu etylowego o mocy 70% przez okres 48 godzin. Następnie ponownie płucze się w soli fizjologicznej dwukrotnie 2 x 20 ml dla wymycia resztek alkoholu. Po wypłukaniu błonę pakuje się do pojemnika foliowego, nakleja wskaźnik sterylizacji radiacyjnej i kieruje się do sterylizacji radiacyjnej stosując dawkę promieniowania 35 kGy przez 5 minut. Po sterylizacji przeszczep wyjmuje się z opakowania foliowego na sali zabiegowej bezpośrednio przed zabiegiem przeszczepienia nanosi się za pomocą strzykawki czynniki wzrostu wyizolowane wcześniej z krwi pacjenta.

Claims

Zastrzeżenia patentowe

1. Przeszczep do regeneracji tkanek, zwłaszcza w obrębie jamy ustnej, znamienny tym, że stanowi go wyodrębniona z wycinka tkanki pobranej od dawcy błona tkankowa, korzystnie błona łącznotkankowa, z natywnego kolagenu o grubości 0,1-5 mm, wstępnie zamrożona, poddana w tym czasie diagnostyce w celu wykluczenia obecności patogenów, rozmrożona, uwodniona

PL 233 525 B1 poprzez płukanie w soli fizjologicznej w warunkach sterylnych, oczyszczona z przyległych tkanek do jednolitej struktury kolagenowej, wytrawiona w etanolu, płukana co najmniej dwukrotnie w płynie infuzyjnym, sterylizowana radiacyjnie, korzystnie wzbogacona o naniesione na jej powierzchnię produkty lecznicze.
2. Przeszczep według zastrz. 1, znamienny tym, że błona jest utrzymywana w stanie uwodnionym i przechowywana w temperaturze od 16°C do 30°C.
3. Przeszczep według zastrz. 1, znamienny tym, że błona jest sterylizowana radiacyjnie dawką 25-50 kGy.
4. Przeszczep według zastrz. 1, znamienny tym, że błona jest pochodzenia ludzkiego bądź zwierzęcego.
5. Przeszczep według zastrz. 1, znamienny tym, że na powierzchni błony posiada czynniki wzrostu.
6. Przeszczep według zastrz. 1, znamienny tym, że na powierzchni błony posiada białka.
7. Sposób przygotowania przeszczepu do regeneracji tkanek, zwłaszcza w obrębie jamy ustnej, polegający na zamrażaniu i konserwacji w alkoholu tkanek pobranych od dawcy, płukaniu i pakowaniu w 0,9% roztworze NaCl oraz wyjaławianiu, znamienny tym, że przebadaną tkankę po znanej obróbce czyli po zamrożeniu, rozmrożeniu, płukaniu w płynie infuzyjnym przykładowo 0,9% roztworze NaCl, oczyszcza się mechanicznie przy pomocy tnących narzędzi chirurgicznych z przyległych tkanek, aż do uzyskania jednolitej struktury kolagenowej, w celu uzyskania błony o grubości 0,1-5 mm, po czym błonę przycina się do pożądanej wielkości i wytrawia się w alkoholu, dogodnie etylowym, następnie płucze się co najmniej dwukrotnie w płynie infuzyjnym dla wymycia resztek alkoholu, sterylizuje radiacyjnie i umieszcza się w płynie infuzyjnym.
8. Sposób według zastrz. 7, znamienny tym, że błonę przycina się wzdłuż włókien kolagenowych, bądź poprzecznie do włókien kolagenowych.
9. Sposób według zastrz. 7, znamienny tym, że błonę przycina się odpowiednio do wielkości ubytku, z naddatkiem o wielkości najwyżej 3 mm.
10. Sposób według zastrz. 7, znamienny tym, że błonę wytrawia się za pomocą alkoholu o stężeniu co najmniej 70% przez okres 24-96 godzin.
11. Sposób według zastrz. 7, znamienny tym, że do wymycia resztek alkoholu stosuje się płyn infuzyjny w ilości 1,1-1,5 co najmniej dwukrotnie.
12. Sposób według zastrz. 7, znamienny tym, że sterylizację radiacyjną przeszczepu prowadzi się stosując dawkę 25-50 kGy.
13. Sposób według zastrz. 7, znamienny tym, że po sterylizacji radiacyjnej na błonę nanosi się komórki autologiczne, bądź komórki allogeniczne.
14. Sposób według zastrz. 7, znamienny tym, że po sterylizacji radiacyjnej na błonę nanosi się komórki ksenogeniczne.
15. Sposób według zastrz. 7, znamienny tym, że po sterylizacji radiacyjnej na błonę nanosi się czynniki wzrostu.
16. Sposób według zastrz. 7, znamienny tym, że po sterylizacji radiacyjnej na błonę nanosi się produkt leczniczy.
17. Sposób według zastrz. 7, znamienny tym, że dla przechowania, przeszczep pakuje się do pojemnika foliowego z płynem infuzyjnym, dogodnie 0,9% roztworem NaCl, w ilości od 0,55:1 względem powierzchni przeszczepu i przechowuje się w temperaturze od 16°C do 30°C.