PL227591B1 - Sposób otrzymywania nierozpuszczalnego preparatu lipazy oraz sposób wytwarzania estrów kwasów tłuszczowych w obecności tego preparatu jako katalizatora enzymatycznego - Google Patents
Sposób otrzymywania nierozpuszczalnego preparatu lipazy oraz sposób wytwarzania estrów kwasów tłuszczowych w obecności tego preparatu jako katalizatora enzymatycznego Download PDFInfo
- Publication number
- PL227591B1 PL227591B1 PL404593A PL40459313A PL227591B1 PL 227591 B1 PL227591 B1 PL 227591B1 PL 404593 A PL404593 A PL 404593A PL 40459313 A PL40459313 A PL 40459313A PL 227591 B1 PL227591 B1 PL 227591B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- parts
- medium
- preparation
- mucor circinelloides
- hours
- Prior art date
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 35
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 title claims description 33
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 title claims description 33
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 title claims description 33
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 title claims description 33
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 30
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 15
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title claims description 10
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title claims description 10
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 title claims description 7
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 title claims description 7
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 title claims description 7
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 title claims description 6
- -1 fatty acid esters Chemical class 0.000 title claims description 5
- 241000306281 Mucor ambiguus Species 0.000 claims description 44
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 43
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 40
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims description 21
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 20
- 239000008399 tap water Substances 0.000 claims description 20
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 claims description 20
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 claims description 19
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 claims description 19
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 claims description 19
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 claims description 19
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 claims description 18
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 17
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 claims description 14
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 14
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 12
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 12
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 11
- GLDOVTGHNKAZLK-UHFFFAOYSA-N octadecan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCO GLDOVTGHNKAZLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- QPRQEDXDYOZYLA-UHFFFAOYSA-N 2-methylbutan-1-ol Chemical compound CCC(C)CO QPRQEDXDYOZYLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 9
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 9
- 239000003925 fat Substances 0.000 claims description 9
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 8
- 238000007670 refining Methods 0.000 claims description 8
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 8
- 239000002699 waste material Substances 0.000 claims description 8
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims description 7
- PRNCMAKCNVRZFX-UHFFFAOYSA-N 3,7-dimethyloctan-1-ol Chemical compound CC(C)CCCC(C)CCO PRNCMAKCNVRZFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 claims description 6
- 235000019484 Rapeseed oil Nutrition 0.000 claims description 6
- MWKFXSUHUHTGQN-UHFFFAOYSA-N decan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCO MWKFXSUHUHTGQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- ZSIAUFGUXNUGDI-UHFFFAOYSA-N hexan-1-ol Chemical compound CCCCCCO ZSIAUFGUXNUGDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N isoamylol Chemical compound CC(C)CCO PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000011049 filling Methods 0.000 claims description 5
- XXMIOPMDWAUFGU-UHFFFAOYSA-N hexane-1,6-diol Chemical compound OCCCCCCO XXMIOPMDWAUFGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- GOQYKNQRPGWPLP-UHFFFAOYSA-N n-heptadecyl alcohol Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCO GOQYKNQRPGWPLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 5
- 241000238557 Decapoda Species 0.000 claims description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 4
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims description 4
- 239000005968 1-Decanol Substances 0.000 claims description 3
- 238000003818 flash chromatography Methods 0.000 claims description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 3
- 239000003921 oil Substances 0.000 claims description 3
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000013587 production medium Substances 0.000 claims description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 3
- 238000005273 aeration Methods 0.000 claims description 2
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 claims description 2
- 238000006136 alcoholysis reaction Methods 0.000 claims description 2
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 claims description 2
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 claims description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 2
- 238000000227 grinding Methods 0.000 claims description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 2
- 240000002791 Brassica napus Species 0.000 claims 1
- 235000004977 Brassica sinapistrum Nutrition 0.000 claims 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims 1
- 238000005187 foaming Methods 0.000 claims 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 claims 1
- 239000010499 rapseed oil Substances 0.000 claims 1
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 11
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 8
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N glycerol group Chemical group OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 235000005687 corn oil Nutrition 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- BXWNKGSJHAJOGX-UHFFFAOYSA-N hexadecan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCO BXWNKGSJHAJOGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 4
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 4
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 3
- 235000019626 lipase activity Nutrition 0.000 description 3
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- FPVVYTCTZKCSOJ-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol distearate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCCOC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC FPVVYTCTZKCSOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 229920005830 Polyurethane Foam Polymers 0.000 description 2
- 239000011942 biocatalyst Substances 0.000 description 2
- 229960000541 cetyl alcohol Drugs 0.000 description 2
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 235000021588 free fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 229940100608 glycol distearate Drugs 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 239000011496 polyurethane foam Substances 0.000 description 2
- 239000012451 post-reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 2
- DCXXMTOCNZCJGO-UHFFFAOYSA-N tristearoylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC DCXXMTOCNZCJGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 2
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 1
- 230000036983 biotransformation Effects 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000002361 compost Substances 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 125000004494 ethyl ester group Chemical group 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 230000001050 lubricating effect Effects 0.000 description 1
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 238000005192 partition Methods 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest sposób otrzymywania nierozpuszczalnego preparatu lipazy oraz sposób wytwarzania estrów kwasów tłuszczowych w obecności tego preparatu jako katalizatora e nzymatycznego.
Z opisu zgłoszenia patentowego P. 396515 jest znany sposób otrzymywania nierozpuszczalnego preparatu lipazy Mucor circinelloides katalizującego syntezę strukturyzowanych triacylogliceroli, w drodze hodowli selektanta pleśni Mucor circinelloides T66/IBPUA 100, którego zarodniki hoduje się na podłożu stałym zawierającym agar, brzeczkę piwowarską, tristearynian glicerolu, hodowlę inokulum selektanta prowadzi się w podłożu ciekłym zawierającym oliwę z oliwek lub olej, namok kukurydziany, wodę wodociągową, a nadto tristearynian glicerolu, zaś hodowlę produkcyjną selektanta prowadzi się na podłożu ciekłym zawierającym oliwę z oliwek lub olej, namok kukurydziany i wodę wodociągową, zaszczepionym inokulum użytym w ilości 10% objętościowych stosunku do objętości podłoża, przy mieszaniu zawartości fermentera za pomocą mieszadła, do którego przymocowuje się rozłącznie porowaty nośnik hodowanego selektanta w postaci prostopadłościennych płatów pianki poliuretanowej, a otrzymane w wyniku hodowli płaty pianki z przerośniętą biomasą selektanta Mucor circinelloides T66/IBPUA 100 oddziela się od cieczy pohodowlanej, przemywa się wodą destylowaną, odwadnia acetonem schłodzonym do temperatury 4°C, ekstrahuje eterem naftowym i suszy w temperaturze pokojowej lub przemywa wodą destylowaną, zamraża do temperatury -45°C, liofilizuje, przemywa acetonem, eterem naftowym i suszy w temperaturze pokojowej.
W opisie patentowym P. 396516 ujawniono sposób otrzymywania nierozpuszczalnego preparatu lipazy Mucor circinelloides katalizującego hydrolizę oligolipidów, w drodze hodowli selektanta pleśni Mucor circinelloides M58/IBPUH 120, którego zarodniki hoduje się na podłożu stałym zawierającym agar, brzeczkę piwowarską, a nadto distearynian glikolu polietylenowego, hodowlę inokulum selektanta prowadzi się w podłożu ciekłym zawierającym oliwę z oliwek lub olej, namok kukurydziany, wodę wodociągową, a nadto distearynian glikolu polietylenowego, stosując 1 cm2 zarodników na 100 cm2 podłoża, zaś hodowlę produkcyjną prowadzi się na podłożu ciekłym zawierającym oliwę z oliwek lub olej, namok kukurydziany i wodę wodociągową, zaszczepionym inokulum użytym w ilości 10% objętościowych stosunku do objętości podłoża, przy mieszaniu zawartości fermentera za pomocą mieszadła, do którego przymocowuje się rozłącznie porowaty nośnik hodowanego selektanta w postaci prostopadłościennych płatów pianki poliuretanowej, zaś otrzymane w wyniku hodowli płaty pianki z prz erośniętą biomasą selektanta Mucor circinelloides M58/IBPUH 120 oddziela się od cieczy pohodowlanej, przemywa się wodą destylowaną, odwadnia acetonem schłodzonym do temperatury 4°C, ekstrahuje eterem naftowym i suszy w temperaturze pokojowej lub przemywa wodą destylowaną, zamraża do temperatury -45°C, liofilizuje, przemywa acetonem, eterem naftowym i suszy w temperaturze pokojowej.
Z opisu patentowego PL 206173 znany jest sposób wytwarzania estrów etylowych wyższych kwasów tłuszczowych z olejów roślinnych i etanolu w obecności immobilizowanej lipazy Mucor circinelloides jako katalizatora enzymatycznego, w którym olej i etanol zmieszane w stosunku molowym od 1:10 do 10:1 poddaje się transestryfikacji w środowisku samych substratów lub w środowisku rozpuszczalnika organicznego zastosowanego w stosunku objętościowym do substratów od 1:10 do 10:1, w obecności lipazy Mucor circinelloides użytej w ilości 0,1-10% w stosunku do masy mieszaniny reakcyjnej, w temperaturze 10-80°C w czasie 1-96 godzin, po czym z mieszaniny poreakcyjnej oddziela się enzym, nadmiar etanolu i w przypadku użycia rozpuszczalnika także rozpuszczalnik i poddaje ją rozdzieleniu na dwie warstwy, z których górną stanowi ester, zaś dolną glicerol.
Natomiast z opisu patentowego PL 206174 jest znany sposób wytwarzania estrów metylowych wyższych kwasów tłuszczowych z olejów roślinnych i metanolu w obecności immobilizowanej lipazy Mucor circinelloides jako katalizatora enzymatycznego, w którym olej i metanol zmieszane w stosunku molowym od 1:10 do 10:1 poddaje się transestryfikacji w środowisku samych substratów lub w środ owisku rozpuszczalnika organicznego zastosowanego w stosunku objętościowym do substratów od 1:10 do 10:1, w obecności lipazy Mucor circinelloides użytej w ilości 0,1-10% w stosunku do masy mieszaniny reakcyjnej, w temperaturze 10-80°C w czasie 1-96 godzin, po czym z mieszaniny poreakcyjnej oddziela się enzym i w przypadku użycia rozpuszczalnika także rozpuszczalnik i poddaje mieszaninę poreakcyjną rozdzieleniu na dwie warstwy, z których górną stanowi ester, zaś dolną glicerol.
W kolekcji Instytutu Biochemii Technicznej Politech niki Łódzkiej znajduje się szczep pleśni Mucor circinelloides TB, wyodrębniony z pancerzy krewetek.
PL 227 591 B1
Sposób otrzymywania nierozpuszczalnego preparatu lipazy Mucor circinelloides w drodze hodowli pleśni Mucor circinelloides, polegający na hodowli zarodników pleśni na wysterylizowanym, stałym podłożu zawierającym agar w temperaturze 29-31°C w czasie 3-5 dni, następnie zmyciu wyhodowanych zarodników sterylną solą fizjologiczną z dodatkiem surfaktanta, zaszczepieniu zawiesiną zarodników wysterylizowanego, ciekłego podłoża aktywującego zawierającego namok kukurydziany i wodę wodociągową, o wyjściowym pH 4,6-5,0 i prowadzeniu w tym podłożu hodowli wstrząsanej inokulum w temperaturze 28-31°C w czasie 18 godzin przy stopniu napełnienia kolb 20% i szybkości obrotowej wstrząsarki 220 minut- , następnie zaszczepieniu otrzymanym inokulum wysterylizowanego i wstępnie napowietrzonego sterylnym powietrzem, ciekłego podłoża produkcyjnego zawierającego namok kukurydziany i wodę wodociągową i prowadzeniu hodowli produkcyjnej w temperaturze 28-31°C w czasie 72 godzin w obecności środków przeciwdziałających pienieniu, w trakcie mieszania i napowietrzania podłoża sterylnym powietrzem doprowadzanym w ilości 1,2 części objętościowa na 1 część objętościową podłoża w czasie 1 minuty, oddzieleniu otrzymanego preparatu w postaci biomasy od cieczy pohodowlanej, przemyciu wodą destylowaną w celu odmycia rozpuszczalnych produktów metabolizmu, odwodnieniu acetonem schłodzonym do temperatury 4°C, suszeniu w temperaturze pokojowej w czasie 48 godzin i rozdrobnieniu w młynie udarowym, według wynalazku charakteryzuje się tym, że preparat otrzymuje się w drodze hodowli selektanta pleśni Mucor circinelloides TB80301 A, którego zarodniki hoduje się na podłożu stałym zawierającym w częściach wagowych: agaru 20 części, a nadto 3,66 części namoku kukurydzianego, 1 część zemulgowanej frakcji tłuszczów kanałowych stanowiącej odpad przy rafinacji oleju rzepakowego (TK) i 1000 części wody wodociągowej. Hodowlę inokulum selektanta prowadzi się w podłożu ciekłym zawierającym w częściach wagowych: namoku kukurydzianego 36,6 części, wody wodociągowej 1000 części, a nadto 13,5-67,5 części TK, stosując 1 cm zarodników na 100 cm podłoża. Hodowlę produkcyjną selektanta prowadzi się na podłożu ciekłym o składzie jak podłoże inokularne, zaszczepionym inokulum użytym w ilości 10% objętościowych w stosunku do objętości podłoża.
Selektant pleśni Mucor circinelloides TB80301A otrzymuje się ze szczepu pleśni Mucor circinelloides TB wyizolowanego z pancerzy krewetek, który poddaje się aktywacji na wysterylizowanym po dłożu stałym o składzie w częściach wagowych: I część zemulgowanej TK, 3,66 części namoku kukurydzianego, 20 części agaru, 1000 części wody destylowanej, w temperaturze 30°C, w czasie 72 godzin, po czym wyrosłe kolonie poddaje się selekcji w drodze hodowli wstrząsanej na wysterylizowanym podłożu ciekłym o składzie w częściach wagowych: 13,5-67,5 części TK, 36,6 części namoku kukurydzianego, 1000 części wody wodociągowej, o wyjściowym pH = 4,6-5,0 w temperaturze 29-31 °C w czasie 24 godzin przy stopniu napełnienia kolb 20% objętościowych i szybkości obrotowej wstrzą-1 sarki 220 minut- , przy czym procedurę aktywowania i selekcji pleśni Mucor circinelloides powtarza się 3-krotnie. Otrzymany selektant przechowuje się na podłożu stałym o składzie w częściach wagowych 0,5 części TK, 20 części agaru, 1000 części brzeczki piwowarskiej o stężeniu 8°Be, w temperaturze 4°C.
Sposób wytwarzania estrów kwasów tłuszczowych i alkoholi w reakcji syntezy i alkoholizy, w obecności nierozpuszczalnego preparatu lipazy Mucor circinelloides jako katalizatora enzymatycznego, w środowisku rozpuszczalnika organicznego, według wynalazku, charakteryzuje się tym, że estry wytwarza się z TK i alkoholu cetylowego, 1,6-heksanodiolu, alkoholu stearylowego, 1-dekanolu, alkoholu izoamylowego, 2-metylo-1-butanolu, 3,7-dimetylooktanolu lub 1-heksanolu, przy stosunku molowym TK do alkoholu 1:2, w obecności nierozpuszczalnego preparatu lipazy w postaci grzybni selektanta pleśni Mucor circinelloides TB80301A otrzymanego wyżej określonym sposobem, użytego w ilości 2-4% w stosunku do masy substratów, w środowisku eteru naftowego użytego w nadmiarze
1,4-2,0 w stosunku do masy substratów, w temperaturze 30°C w czasie 24-48 godzin mieszając za-1 wartość reaktora z szybkością 120 minut- , a po zakończeniu reakcji z mieszaniny reakcyjnej odsącza się części stałe enzymu, odparowuje rozpuszczalnik i izoluje otrzymane estry metodą flash chromatografii. TK jest frakcją tłuszczów kanałowych stanowiącą odpad przy rafinacji oleju rzepakowego, zawierającą, obok nasyconych i nienasyconych wolnych kwasów tłuszczowych , także mono-, di- i triacyloglicerole.
Biokatalizator otrzymywany w procesie hodowli selektanta Mucor circinelloides TB80301A na podłożu zawierającym w swym składzie TK wykazuje wysoką katalityczną aktywność i trwałość w biotransformacji in vitro TK do użytecznych estrów. Otrzymany preparat enzymatyczny może być stosowany kilkadziesiąt razy w procesach wytwarzania estrów. W odróżnieniu do znanych preparatów immobilizowanych lipaz łatwo ulega całkowitej biodegradacji w środowisku ziemi lub kompostu. Sposobem według wynalazku otrzymuje się estry kwasów tłuszczowych z wydajnością 64-99% mierzoną
PL 227 591 B1 metodą GC i liczoną w stosunku do ilości użytej frakcji TK, w której stężenie wolnych kwasów tłus zczowych nie przekracza 0,2%.
Estry otrzymane sposobem według wynalazku mogą być wykorzystane do wytwarzania smarów lub uszlachetniania baz smarowniczych.
Sposób według wynalazku ilustrują bliżej podane niżej przykłady.
P r z y k ł a d 1
W celu otrzymania selektanta pleśni Mucor circinelloides TB80301A szczep pleśni Mucor circinelloides TB, wyizolowany z pancerzy krewetek, poddano aktywacji na wysterylizowanym termicznie, w czasie 15 minut w temperaturze 121°C, podłożu stałym o składzie w częściach wagowych; 1 część TK, 3,66 części namoku kukurydzianego, 20 części agaru, 1000 części wody destylowanej, w temperaturze 30°C, w czasie 72 godzin, po czym wyrosłe kolonie poddano selekcji w drodze hodowli wstrząsanej na wysterylizowanym podłożu ciekłym o składzie w częściach wagowych: 13,5 części TK, części namoku kukurydzianego, 1000 części wody wodociągowej, o wyjściowym pH = 4,6 w temperaturze 29-31°C w czasie 24 godzin przy stopniu napełnienia kolb 20% objętościowych i szybkości obrotowej wstrząsarki 220 minut- , przy czym procedurę aktywowania i selekcji pleśni Mucor circinelloides powtórzono 3-krotnie.
W celu otrzymania grzybni selektanta pleśni Mucor circinelloides TB80301A zawierającej preparat lipazy, selektant Mucor circinelloides TB80301 A, wysiano na wysterylizowane termicznie w czasie 15 minut w temperaturze 121°C podłoże stałe o składzie w częściach wagowych: 1 część TK, 3,66 części namoku kukurydzianego, 20 części agaru, 1000 części wody wodociągowej i po 3 dniach hodowli w temperaturze 29-31 °C zarodniki selektanta zmywano sterylną solą fizjologiczną zawierającą 0,01% Tritonu X-100 stosując 8 ml soli fizjologicznej na 1 skos. Otrzymaną zawiesiną zarodników szczepiono wysterylizowane w czasie 30 minut w temperaturze 121°C, podłoże hodowlane o składzie w częściach wagowych: 13,5 części TK, 36,6 części namoku kukurydzianego oraz 1000 części wody wodociągowej, o wyjściowym pH 4,6, stosując 1 cm zarodników na 100 cm podłoża i prowadzono hodowlę wstrząsaną w temperaturze 28-31°C, w czasie 18 godzin, przy stopniu na-1 pełnienia kolb 20% objętościowych i szybkości obrotowej wstrząsarki 220 minut- . Otrzymanym w wyniku tej hodowli inokulum zaszczepiono, uprzednio wysterylizowane w czasie 30 minut w temperaturze 121°C, podłoże produkcyjne o objętości 18 litrów wprowadzone do fermentora o objętości całkowitej 241, o składzie w częściach wagowych: 13,5 części TK, 36,6 części namoku kukurydzi anego, 1000 części wody wodociągowej, wstępnie napowietrzone sterylnym powietrzem, stosując 10% objętościowych inokulum w stosunku do objętości podłoża. Hodowlę produkcyjną prowadzono w temperaturze 28-31°C w czasie 72 godzin, w obecności środków przeciwdziałających pienieniu, przy mieszaniu z szybkością obrotową 240 minut- , doprowadzając powietrze w ilości 1,2 części objętościowych na 1 część objętościową podłoża w czasie 1 minuty. Otrzymaną w wyniku hodowli produkcyjnej biomasę Mucor circinelloides TB80301 A, po oddzieleniu od cieczy pohodowlanej na drodze filtracji, przemywano wodą w celu odmycia rozpuszczalnych produktów metabolizmu, zal ewano kolejno 3 porcjami acetonu schłodzonego do temperatury 4°C, stosowanego w ilości 5 części wagowych na 1 część wagową biomasy, mieszając z szybkością obrotową mieszadła 120 minut- 3 w reaktorze chemicznym o pojemności 1 dm przez 10 minut i następnie ekstrahowano eterem naftowym użytym w ilości jak podczas ekstrakcji acetonem. Odwodnioną i odlipidowaną biomasę s uszono na powietrzu w czasie 48 godzin w temperaturze pokojowej i rozdrabniano w młynku udar owym na drobiny o wymiarach 5-10 μm.
Z 1 litra podłoża hodowlanego otrzymano 23,3 g odwodnionego i odlipidowanego mycelium o aktywności lipaz.
Następnie 3 g otrzymanego preparatu immobilizowanej lipazy w postaci odwodnionej grzybni Mucor circinelloides TB80301A wprowadzono do reaktora chemicznego objętości 1 l zawierającego:
36,6 g alkoholu cetylowego, 75 g TK i 250 g eteru naftowego. Reakcję prowadzono w temperaturze
30°C, przy obrotach mieszadła 150 minut- w czasie 48 godzin, po czym mieszaninę reakcyjną sączono na przegrodzie ze spieku ceramicznego G3 w celu oddzielenia biokatalizatora, który po dwukrotnym przemyciu acetonem i eterem naftowym (stosując na każde przemycie 50 ml rozpuszczalnika) używano powtórnie do syntezy estrów. Z przesączu stanowiącego mieszaninę produktów i nie przer eagowanych substratów oddestylowywano rozpuszczalnik w temperaturze 65°C, pod ciśnieniem normalnym. Otrzymane estry wydzielano z mieszaniny poreakcyjnej metodą flash chromatografii z wyk orzystaniem silikażelu firmy Merck 60A i eluenta heksan: octan etylu (50: 1 v/v).
PL 227 591 B1
Otrzymano frakcję estrów z wydajnością równą 85%, mierzoną metodą GC i liczoną w stosunku do ilości użytej TK.
P r z y k ł a d 2
Lipazę otrzymano postępując jak w przykładzie 1, przy czym hodowlę produkcyjną szczepu prowadzono na podłożu o składzie w częściach wagowych: 67,5 części TK, 36,6 części namoku kukurydzianego, 1000 części wody wodociągowej.
Z 1 litra podłoża hodowlanego otrzymano 22,0 g odwodnionego i odlipidowanego mycelium o aktywności lipazy.
Do reaktora chemicznego o objętości 1 l, zawierającego: 9,8 g 1,6-heksanodiolu, 75 g TK, 250 g eteru naftowego, wprowadzono 3 g preparatu immobilizowanej lipazy w postaci otrzymanej uprzednio, odwodnionej grzybni Mucor circinelloides TB80301 A. Reakcję prowadzono w temperaturze 30°C, przy obrotach mieszadła 150 minut- w czasie 24 godzin.
Dalej postępowano jak w przykładzie 1.
Otrzymano frakcję estrów z wydajnością równą 95%, mierzoną metodą GC i liczoną w stosunku do ilości użytej TK.
P r z y k ł a d 3
Preparat lipazy otrzymano postępując jak w przykładzie 1, przy czym hodowlę produkcyjną szczepu prowadzono na podłożu o składzie w częściach wagowych: 27,0 części TK, 36,6 części namoku kukurydzianego, 1000 części wody wodociągowej.
Z 1 litra podłoża hodowlanego produkcyjnego otrzymano 26,7 g odwodnionego i odlipidowan ego mycelium o aktywności lipazy.
Do reaktora chemicznego o objętości 1 l, zawierającego 40,6 g alkohol stearylowego, 75 g TK, 250 g eteru naftowego, wprowadzono 3 g preparatu immobilizowanej lipazy w postaci otrzymanej uprzednio, odwodnionej grzybni Mucor circinelloides TB80301 A. Reakcję prowadzono w temperatu-1 rze 30°C, przy obrotach mieszadła 150 minut- w czasie 48 godzin.
Dalej postępowano jak w przykładzie 1.
Otrzymano frakcję estrów z wydajnością równą 93,0%, mierzoną metodą GC i liczoną w stosunku do ilości użytej TK.
P r z y k ł a d 4
Preparat lipazy otrzymano postępując w przykładzie 1.
Do reaktora chemicznego o objętości 1 l, zawierającego 23,7 g 1-dekanolu, 75 g TK, 250 g eteru naftowego, wprowadzono 3 g preparatu immobilizowanej lipazy w postaci otrzymanej uprzednio, odwodnionej grzybni Mucor circinelloides TB80301A. Reakcję prowadzono w temperaturze 30°C, przy obrotach mieszadła 150 minut-1 w czasie 24 godzin.
Dalej postępowano jak w przykładzie 1.
Otrzymano frakcję estrów z wydajnością równą 98,0%, mierzoną metodą GC i liczoną w stosunku do ilości użytej TK.
P r z y k ł a d 5
Preparat lipazy otrzymano postępując jak w przykładzie 2.
Do reaktora chemicznego o objętości 1 l, zawierającego 13,1 g alkoholu izoamylowego, 75 g TK, 250 g eteru naftowego, wprowadzono 3 g preparatu immobilizowanej lipazy w postaci otrzymanej uprzednio, odwodnionej grzybni Mucor circinelloides TB80301A. Reakcję prowadzono w temperaturze
30°C, przy obrotach mieszadła 150 minut-1 w czasie 72 godzin.
Dalej postępowano jak w przykładzie 1.
Otrzymano frakcję estrów z wydajnością równą 69,0%, mierzoną metodą GC i liczoną w stosunku do ilości użytej TK.
P r z y k ł a d 6
Preparat lipazy otrzymano postępując jak w przykładzie 2.
Do reaktora chemicznego o objętości 1 l, zawierającego 13,1 g 2-metylo-1-butanolu, 75 g TK, 250 g eteru naftowego, wprowadzono 3 g preparatu immobilizowanej lipazy w postaci otrzymanej uprzednio, odwodnionej grzybni Mucor circinelloides TB80301A. Reakcję prowadzono w temperaturze
30°C, przy obrotach mieszadła 150 minut-1 w czasie 48 godzin.
Dalej postępowano jak w przykładzie 1.
Otrzymano frakcję estrów z wydajnością równą 70,0%, mierzoną metodą GC i liczoną w stosunku do ilości użytej TK.
PL 227 591 B1
P r z y k ł a d 7
Preparat lipazy otrzymano postępując jak w przykładzie 3.
Do reaktora chemicznego o objętości 1 l, zawierającego 23,8 g 3,7-dimetyIooktanolu, 75 g TK, 250 g eteru naftowego, wprowadzono 3 g preparatu immobilizowanej lipazy w postaci otrzymanej uprzednio, odwodnionej grzybni Mucor circinelloides TB80301A. Reakcję prowadzono w temperaturze 30°C, przy obrotach mieszadła 150 minut- w czasie 48 godzin.
Dalej postępowano jak w przykładzie 1.
Otrzymano frakcję estrów z wydajnością równą 79,0%, mierzoną metodą GC i liczoną w stosunku do ilości użytej TK.
P r z y k ł a d 8
Preparat lipazy otrzymano postępując jak w przykładzie 3.
Do reaktora o objętości 1 l, zawierającego 15,3 g 1-heksanolu, 75 g TK, 250 g eteru naftowego, wprowadzono 3 g preparatu immobilizowanej lipazy w postaci otrzymanej uprzednio, odwodnionej grzybni Mucor circinelloides TB80301A. Reakcję prowadzono w temperaturze 30°C, przy obrotach mieszadła 150 minut-1 w czasie 24 godzin.
Dalej postępowano jak w przykładzie 1.
Otrzymano frakcję estrów z wydajnością równą 98,0%, mierzoną metodą GC i liczoną w stosunku do ilości użytej TK.
P r z y k ł a d 9
Preparat lipazy otrzymano postępując jak w przykładzie 3.
Przygotowano 800 ml roztworu 1,6-heksanodiolu i TK w eterze naftowym, zawierającego 9,8 g 1,6-heksanodiolu i 75 g TK w 250 ml eteru. Przez reaktor kolumnowy o objętości 171 mli wymiarach: długość 20 cm, średnica 3,3 cm, upakowany odwodnioną grzybnią Mucor circinelloides TB80301A w ilości 25 g, przepuszczano przygotowany uprzednio roztwór reagentów z szybkością 1 ml/minutę, w temperaturze 30°C przez 36 godzin. Produkty reakcji odbierano w górnej części kolumny z zastosowaniem recyrkulacji podawanego substratu.
Otrzymano frakcję estrów z wydajnością równą 64,0%, mierzoną metodą GC i liczoną w stosunku do ilości użytego TK.
P r z y k ł a d 10
Preparat lipazy otrzymano postępując jak w przykładzie 3.
Przygotowano 800 ml roztworu alkoholu stearylowego i TK w eterze naftowym, zawierającego 40,6 g alkoholu stearylowego i 75 g TK w 250 ml eteru. Przez reaktor kolumnowy o objętości 171 ml i wymiarach: długość 20 cm, średnica 3,3 cm, upakowany odwodnioną grzybnią Mucor circinelloides TB80301A w ilości 25 g, przepuszczano przygotowany uprzednio roztwór reagentów z szybkością 1 ml/minutę, w temperaturze 30°C przez 36 godzin. Produkty reakcji odbierano w górnej części kolumny z zastosowaniem recyrkulacji podawanego substratu.
Otrzymano frakcję estrów z wydajnością równą 99,0%, mierzoną metodą GC i liczoną w stosunku do ilości użytego TK.
Claims (3)
1. Sposób otrzymywania nierozpuszczalnego preparatu lipazy Mucor circinelloides w drodze hodowli pleśni Mucor circinelloides, polegający na hodowli zarodników pleśni na wysterylizowanym, stałym podłożu zawierającym agar w temperaturze 29-31°C w czasie 3-5 dni, następnie zmyciu wyhodowanych zarodników sterylną solą fizjologiczną z dodatkiem surfaktanta, zaszczepieniu zawiesiną zarodników wysterylizowanego, ciekłego podłoża aktywującego zawierającego namok kukurydziany i wodę wodociągową, o wyjściowym pH 4,6-5,0 i prowadzeniu w tym podłożu hodowli wstrząsanej inokulum w temperaturze 28-31°C w czasie 18 godzin przy stopniu napełnienia kolb 20% i szybkości obrotowej wstrząsarki 220 m i-1 nut-1, następnie zaszczepieniu otrzymanym inokulum wysterylizowanego i wstępnie napowietrzonego sterylnym powietrzem, ciekłego podłoża produkcyjnego zawierającego namok kukurydziany i wodę wodociągową i prowadzeniu hodowli produkcyjnej w temperaturze 28-31°C w czasie 72 godzin w obecności środków przeciwdziałających pienieniu, w trakcie mieszania i napowietrzania podłoża sterylnym powietrzem doprowadzanym w ilości 1,2 części objętościowa na 1 część objętościową podłoża w czasie 1 minuty, oddzieleniu otrzym aPL 227 591 B1 nego preparatu w postaci biomasy od cieczy pohodowlanej, przemyciu wodą destylowaną w celu odmycia rozpuszczalnych produktów metabolizmu, odwodnieniu acetonem schłodzonym do temperatury 4°C i suszeniu w temperaturze pokojowej w czasie 48 godzin i następnie rozdrobnieniu w młynie udarowym, znamienny tym, że preparat otrzymuje się w drodze hodowli selektanta pleśni Mucor circinelloides TB80301A, którego zarodniki hoduje się na podłożu stałym zawierającym w częściach wagowych: agaru 20 części, a nadto 3,66 części namoku kukurydzianego, 1 część zemulgowanej frakcji tłuszczów kanałowych stanowiącej odpad w procesie rafinacji oleju rzepakowego i 1000 części wody wodociągowej, hodowlę inokulum selektanta prowadzi się w podłożu ciekłym zawierającym w częściach wagowych: namoku kukurydzianego 36,6 części, wody wodociągowej 1000 części, a nadto 13,5-67,5 części frakcji tłuszczów kanałowych stanowiącej odpad w procesie rafinacji oleju rzepakowego, stosując 1 cm zarodników na 100 cm podłoża, zaś hodowlę produkcyjną selektanta prowadzi się na podłożu ciekłym o składzie jak podłoże inokularne, zaszczepionym inokulum użytym w ilości 10% objętościowych w stosunku do objętości podłoża.
2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że selektant pleśni Mucor circinelloides TB80301A otrzymuje się ze szczepu pleśni Mucor circinelloides TB wyizolowanego z pancerzy krewetek, który poddaje się aktywacji na wysterylizowanym podłożu stałym o składzie w częściach wagowych: 1 część zemulgowanej frakcji tłuszczów kanałowych stanowiącej odpad w procesie rafinacji oleju rzepakowego, 3,66 części namoku kukurydzianego, 20 części agaru, 1000 części wody destylowanej, w temperaturze 30°C, w czasie 72 godzin, po czym wyrosłe kolonie poddaje się selekcji w drodze hodowli wstrząsanej na wysterylizowanym podłożu ciekłym o składzie w częściach wagowych: 13,5-67,5 części frakcji tłuszczów kanałowych stanowiącej odpad w procesie rafinacji oleju rzepakowego, 36,6 części namoku kukurydzianego, 1000 części wody wodociągowej, o wyjściowym pH = 4,6-5,0 w temperaturze 29-31°C w czasie 24 godzin przy stopniu napełnienia kolb 20% objętościowych i szybkości obrotowej wstrząsarki 220 minut- , przy czym procedurę aktywowania i selekcji pleśni Mucor circinelloides powtarza się 3-krotnie, a otrzymany selektant przechowuje się na podłożu stałym o składzie w częściach wagowych 0,5 części frakcji tłuszczów kanałowych stanowiącej odpad w procesie rafinacji oleju rzepakowego, 20 części agaru, 1000 części brzeczki piwowarskiej stężeniu 8°Be, w temperaturze 4°C.
3. Sposób wytwarzania estrów kwasów tłuszczowych i alkoholi w reakcji syntezy alkoholizy, w obecności nierozpuszczalnego preparatu lipazy Mucor circinelloides jako katalizatora enzymatycznego, w środowisku rozpuszczalnika organicznego, znamienny tym, że estry wytwarza się z frakcji tłuszczów kanałowych stanowiącej odpad w procesie rafinacji oleju rzepakowego oraz alkoholu cetylowego, 1,6-heksanodiolu, alkoholu stearylowego, 1-dekanolu, alkoholu izoamylowego, 2-metylo-1-butanolu, 3,7-dimetylooktanoIu lub 1-heksanolu, przy stosunku molowym frakcji tłuszczów kanałowych do alkoholu 1:2, w obecności nierozpuszczalnego preparatu lipazy w postaci grzybni selektanta pleśni Mucor circinelloides TB80301A otrzymanego sposobem określonym w zastrz. 1, użytego w ilości 2-4% w stosunku do masy substratów, w środowisku eteru naftowego użytego w nadmiarze 1,4-2,0 w stosunku do masy substratów, w temperaturze 30°C w czasie 24-48 godzin mieszając zawartość reaktora z szybkością 120 minut- , a po zakończeniu reakcji z mieszaniny reakcyjnej odsącza się części stałe enzymu, odparowuje rozpuszczalnik i izoluje otrzymane estry metodą flash chromatografii.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL404593A PL227591B1 (pl) | 2013-07-08 | 2013-07-08 | Sposób otrzymywania nierozpuszczalnego preparatu lipazy oraz sposób wytwarzania estrów kwasów tłuszczowych w obecności tego preparatu jako katalizatora enzymatycznego |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL404593A PL227591B1 (pl) | 2013-07-08 | 2013-07-08 | Sposób otrzymywania nierozpuszczalnego preparatu lipazy oraz sposób wytwarzania estrów kwasów tłuszczowych w obecności tego preparatu jako katalizatora enzymatycznego |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL404593A1 PL404593A1 (pl) | 2015-01-19 |
| PL227591B1 true PL227591B1 (pl) | 2018-01-31 |
Family
ID=52305496
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL404593A PL227591B1 (pl) | 2013-07-08 | 2013-07-08 | Sposób otrzymywania nierozpuszczalnego preparatu lipazy oraz sposób wytwarzania estrów kwasów tłuszczowych w obecności tego preparatu jako katalizatora enzymatycznego |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL227591B1 (pl) |
-
2013
- 2013-07-08 PL PL404593A patent/PL227591B1/pl unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL404593A1 (pl) | 2015-01-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Ramos-Sánchez et al. | Fungal lipase production by solid-state fermentation | |
| Li et al. | Rhizopus oryzae IFO 4697 whole cell catalyzed methanolysis of crude and acidified rapeseed oils for biodiesel production in tert-butanol system | |
| JP4043605B2 (ja) | カプサイシン類縁体の製造法 | |
| Eskandari et al. | Recent insight into the advances and prospects of microbial lipases and their potential applications in industry | |
| CN106929501A (zh) | 脂肪酶固定化载体、固定化脂肪酶及其制备方法和应用 | |
| CN103781911A (zh) | 固定于水溶液中的疏水性树脂上的脂肪酶的酶酯交换 | |
| Solarte et al. | Lipase activity and enantioselectivity of whole cells from a wild-type Aspergillius flavus strain | |
| PL227591B1 (pl) | Sposób otrzymywania nierozpuszczalnego preparatu lipazy oraz sposób wytwarzania estrów kwasów tłuszczowych w obecności tego preparatu jako katalizatora enzymatycznego | |
| PL227592B1 (pl) | Sposób otrzymywania nierozpuszczalnego preparatu lipazy oraz sposób wytwarzania estrów kwasów tłuszczowych w obecności tego preparatu jako katalizatora enzymatycznego | |
| Zieniuk et al. | Synthesis of flavor compound ethyl hydrocinnamate by Yarrowia lipolytica lipases | |
| Hlavsová et al. | Geotrichum candidum 4013: Extracellular lipase versus cell-bound lipase from the single strain | |
| Chung et al. | Continuous suspended cell culture of Mentha piperita in cell-recycled air-lift bioreactor | |
| US20180223236A1 (en) | Horizontally inclined trough reactor and uses therefor | |
| Abada | Production and Purification of lipase from Pseudomonas sp. AB2 with potential application in biodiesel production | |
| JP4043581B2 (ja) | Ｎ−バニリル脂肪酸アミドの製造法 | |
| CN117737146B (zh) | 甘油酯型脂肪酸羟基脂肪酸酯及其制备方法 | |
| PL222934B1 (pl) | Sposób otrzymywania strukturyzowanych triacylogliceroli | |
| JP4849967B2 (ja) | 脂肪酸類の製造方法 | |
| PL222419B1 (pl) | Sposób otrzymywania strukturyzowanych triacylogliceroli | |
| PL224012B1 (pl) | Sposób otrzymywania strukturyzowanych triacylogliceroli | |
| PL222870B1 (pl) | Sposób wytwarzania strukturyzowanych triacylogliceroli | |
| PL224013B1 (pl) | Sposób wytwarzania strukturyzowanych triacylogliceroli | |
| PL228104B1 (pl) | Sposób wytwarzania mieszaniny 2 -metylobutylowych estrów wyzszych kwasów tłuszczowych | |
| PL217695B1 (pl) | Sposób otrzymywania nierozpuszczalnego preparatu lipazy Mucor racemosus | |
| Keshavamurthy et al. | ASPERGILLUS LIPASE: A DEEP INSIGHT INTO THE RECENT ADVANCES OF LIPASE PRODUCTION AND ITS INDUSTRIAL APPLICATIONS |