PL217151B1 - Homogenat komórkowy z komórek macierzystych wyprowadzonych z rosnącego poroża jeleniowatych, sposób jego otrzymywania i zastosowanie - Google Patents
Homogenat komórkowy z komórek macierzystych wyprowadzonych z rosnącego poroża jeleniowatych, sposób jego otrzymywania i zastosowanieInfo
- Publication number
- PL217151B1 PL217151B1 PL390272A PL39027210A PL217151B1 PL 217151 B1 PL217151 B1 PL 217151B1 PL 390272 A PL390272 A PL 390272A PL 39027210 A PL39027210 A PL 39027210A PL 217151 B1 PL217151 B1 PL 217151B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- cells
- homogenate
- deer
- skin
- mic
- Prior art date
Links
- 241000282994 Cervidae Species 0.000 title claims abstract description 29
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 29
- 210000003056 antler Anatomy 0.000 title claims abstract description 20
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 title description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 57
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 claims abstract description 27
- 102100040896 Growth/differentiation factor 15 Human genes 0.000 claims abstract description 18
- 101710194460 Growth/differentiation factor 15 Proteins 0.000 claims abstract description 18
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 13
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 claims abstract description 5
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 claims abstract description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 27
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 10
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 5
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 claims description 5
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 34
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 11
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 11
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 9
- 210000004209 hair Anatomy 0.000 description 9
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 6
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 5
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 5
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 5
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 4
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 4
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 241000282985 Cervus Species 0.000 description 3
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 3
- 230000003659 hair regrowth Effects 0.000 description 3
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 3
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 230000001256 tonic effect Effects 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000001764 biostimulatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 210000002308 embryonic cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 230000003779 hair growth Effects 0.000 description 2
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 2
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 2
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 2
- 238000011587 new zealand white rabbit Methods 0.000 description 2
- 239000003883 ointment base Substances 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 210000000963 osteoblast Anatomy 0.000 description 2
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 2
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 2
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 2
- 230000037380 skin damage Effects 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- KZDCMKVLEYCGQX-UDPGNSCCSA-N 2-(diethylamino)ethyl 4-aminobenzoate;(2s,5r,6r)-3,3-dimethyl-7-oxo-6-[(2-phenylacetyl)amino]-4-thia-1-azabicyclo[3.2.0]heptane-2-carboxylic acid;hydrate Chemical compound O.CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1.N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 KZDCMKVLEYCGQX-UDPGNSCCSA-N 0.000 description 1
- 208000002874 Acne Vulgaris Diseases 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000283007 Cervus nippon Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 206010020565 Hyperaemia Diseases 0.000 description 1
- 208000005230 Leg Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- 206010000496 acne Diseases 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 230000003712 anti-aging effect Effects 0.000 description 1
- 230000001153 anti-wrinkle effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000008081 blood perfusion Effects 0.000 description 1
- 230000036770 blood supply Effects 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 210000001612 chondrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000036576 dermal application Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000009395 genetic defect Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 210000003780 hair follicle Anatomy 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 210000003593 megakaryocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000002894 multi-fate stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002346 musculoskeletal system Anatomy 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 201000001245 periodontitis Diseases 0.000 description 1
- 235000019271 petrolatum Nutrition 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000017363 positive regulation of growth Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000009993 protective function Effects 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 239000004065 semiconductor Substances 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 230000037394 skin elasticity Effects 0.000 description 1
- 230000037393 skin firmness Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008719 thickening Effects 0.000 description 1
- 230000008467 tissue growth Effects 0.000 description 1
- 230000036269 ulceration Effects 0.000 description 1
- 210000001215 vagina Anatomy 0.000 description 1
- 208000019553 vascular disease Diseases 0.000 description 1
- 201000002282 venous insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003871 white petrolatum Substances 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Cosmetics (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Przedmiotem wynalazku jest homogenat komórkowy uzyskany z komórek macierzystych z rosnącego poroża jeleniowatych, sposób jego otrzymywania i zastosowanie. Przedmiot wynalazku stanowi również kompozycja farmaceutyczna lub kosmetyczna zawierająca powyższy homogenat komórkowy.
Ze stanu techniki wiadomo o podejmowanych od lat licznych próbach izolacji i uzyskania stabilnych linii komórek macierzystych, na bazie których możliwe byłoby sporządzenie trwałych preparatów o różnych profilach działania.
Ujawniono rozwiązania dotyczące pozyskiwania komórek macierzystych różnicujących się w osteoblasty wyłącznie z różnego typu ludzkich tkanek. W zgłoszeniach WO 2005/085422, US 2005/0048644 ujawniono komórki macierzyste, izolowane z tkanki tłuszczowej, wykorzystywane w leczeniu chorób układu mięśniowo-szkieletowego. W zgłoszeniu WO 2005/038012 ujawniono metodę pozyskiwania komórek macierzystych, zdolnych do różnicowania się w osteoblasty lub chondroblasty z ludzkich tkanek poporodowych. Zgłoszenie US 2007/0122902 ujawnia metodę izolacji i hodowli multipotentnych komórek macierzystych otrzymywanych z krwi pępowinowej. Podejmowano również próby genetycznej modyfikacji komórek zdolnych do regeneracji tkanki chrzestnej i kostnej, co zostało ujawnione w opisie patentowym US 6398816. Najwięcej kontrowersji natury etycznej budzą zgłoszenia dotyczące komórek macierzystych pozyskiwanych z tkanki embrionalnej (WO03068937A2, WO02064755A2, WO0038583A1).
Stosowanie ludzkich komórek macierzystych szeroko opisywanych w stanie techniki wiąże się z występowaniem wielu problemów, które stanowią o silnej potrzebie prowadzenia dalszych badań w tym kierunku. Do głównych przeszkód należą kwestie etyczne związane ze stosowaniem komórek embrionalnych, niebezpieczeństwo powstania defektów genetycznych oraz zagrożenie transferem chorób wirusowych i nowotworowych. Istnieje więc pilne zapotrzebowanie na linie komórek macierzystych, których stosowanie wykluczyłoby ryzyko wystąpienia powyższych przeszkód.
Ze stanu techniki znane są własności tkanki poroża jeleniowatych rozpoznawanej jako najszybciej rosnąca postać kości wśród tkanek ssaczych. Podejmowano próby wykorzystania własności wzrostowych tkanki przede wszystkim poprzez izolację czynników wzrostu. W zgłoszeniu WO 93/19085 ujawniono sposób izolacji czynnika wzrostu, jako substancji zdolnej do regeneracji uszkodzonej tkanki kostnej. Ujawniono sposób pozyskiwania ekstraktu izolowanego z poroży jelenia wschodniego (Cervus nippon), który stymuluje wzrost hematopoetycznych komórek macierzystych i megakariocytów. Zgłoszenie WO 2004/112806 ujawnia kompozycję do leczenia zaburzeń neuronalnych sporządzoną w oparciu o markery czynnika wzrostu pozyskiwane z poroża jeleniowatych.
W 2005 r. Twórcy przedmiotowego wynalazku rozpoczęli badania procesów wzrostu poroża u jelenia szlachetnego (Cervus elafus). W toku przeprowadzonych eksperymentów, z rosnącego poroża jelenia szlachetnego wyprowadzono linię komórek macierzystych MIC-1. Stabilną linię komórkową zdeponowaną w DSMZ pod numerem DSM ACC2854. W 2006 roku dokonano zgłoszenia patentowego
P. 378963, którego przedmiotem są nowe linie komórek macierzystych o symbolu MIC-1 z rosnącego poroża jeleniowatych (Cervidae), zastosowania tkanki z końcowych bocznych fragmentów wzrastającego poroża jeleniowatych do produkcji stabilnej linii komórek macierzystych, a także zastosowania tych komórek do rekonstrukcji ubytków kostnych i chrzestnych u ludzi i zwierząt. Obecnie jednym z głównych kierunków badań jest poszukiwanie źródeł preparatu stymulującego procesy regeneracyjne tak złożonego organu jakim jest skóra. Badania nad fizjologią starzenia się tkanek i procesami regeneracji doprowadziły do odkrycia roli komórek macierzystych w tych procesach.
Celem wynalazku jest dostarczenie preparatu i jego produktów opartego na bazie komórek macierzystych, które wpływają korzystnie na proces samoregeneracji skóry i odbudowy jej elementów.
Nieoczekiwanie okazało się, że homogenat komórkowy z komórek należących do linii komórek macierzystych MIC-1 wykazuje szczególnie korzystne działanie na stymulację procesów wzrostu i odbudowy chorych lub uszkodzonych elementów i przydatków skóry.
Przedmiotem wynalazku jest homogenat komórkowy otrzymany w wyniku rozbicia komórek należących do linii komórek macierzystych MIC-1 wyprowadzonej z rosnącego poroża jeleniowatych (Cervidae) zdeponowanej w DSMZ pod numerem DSM ACC2854.
Korzystnie, rozbicie komórek w homogenacie następuje w wyniku działania ultradźwiękami. Rozbicie porożogennych komórek macierzystych uwalnia zawarte w nich substancje czynne aktywujące procesy regeneracji.
PL 217 151 B1
W korzystnej realizacji wynalazku jedna jednostka homogenatu zawiera ekstrakt z 1 miliona komórek.
Kolejnym przedmiotem wynalazku jest sposób uzyskiwania bioaktywnego homogenatu komórkowego charakteryzujący się tym, że prowadzi się hodowlę komórek, oddziela się komórki od podłoża, rozbija się komórki ultradźwiękami, przy czym jako komórki wykorzystuje się komórki z linii komórek macierzystych MIC-1 wyprowadzonej z rosnącego poroża jeleniowatych (Cervidae) zdeponowanej w DSMZ pod numerem DSM ACC2854.
Korzystnie, w sposobie według wynalazku prowadzi się hodowlę płytkową lub komórki hoduje się w zawiesinie.
Korzystnie, w sposobie według wynalazku uzyskuje się homogenat mianowany zawierający w jednej jednostce ekstrakt uzyskany z 1 miliona komórek.
Innym przedmiotem wynalazku jest zastosowanie homogenatu uzyskanego z komórek należących do linii komórek macierzystych MIC-1 wyprowadzonej z rosnącego poroża jeleniowatych (Cervidae) zdeponowanej w DSMZ pod numerem DSM ACC2854 do wytwarzania preparatu do pielęgnacji i/lub leczenia skóry. Skóra jako narząd graniczny, ze względu na swą funkcję ochronną jest szczególnie podatna na schorzenia i urazy. Procesy naprawcze dokonują się w niej przez całe życie. Dzięki swoim biostymulującym własnościom ekstrakt znajduje zastosowanie w szeroko pojętej medycynie regeneracyjnej i kosmetologii. Homogenat komórkowy komórek macierzystych należących do linii komórkowej MIC-1 wpływa korzystnie na szybką epitelizację, aktywuje proces gojenia ran i uszkodzeń skóry, aktywuje mieszki włosowe, stymuluje produkcję włókien kolagenowych, wywołuje zintensyfikowane namnażania fibroblastów i aktywuje unaczynienie skóry. Homogenat z komórek macierzystych linii komórkowej MIC-1 wykazuje własności wpływające na samoregenerację skóry i jej odnowę biologiczną, dzięki czemu umożliwia odbudowę zniszczonych struktur pojawiających się z wiekiem. Homogenat komórkowy i oparte na jego bazie preparaty wykazują szerokie zastosowanie jako środki przeciwzmarszczkowe, liftingujące i przeciwstarzeniowe, regenerujące skórę uszkodzoną promieniowaniem słonecznym, rewitalizujące skórę, zwiększające jędrność i elastyczność skóry, oraz jako kosmetyki do pielęgnacji błon śluzowych.
Ponadto homogenat komórkowy i oparte na jego bazie preparaty znajdują zastosowanie jako środki na trudno gojące się rany powstające przykładowo w przebiegu cukrzycy, owrzodzenia podudzi powstające w przebiegu zaburzeń naczyniowych takich jak niewydolność żył, choroba Reno, środki niwelujące zmiany popromienne i uszkodzenia skóry po chemioterapii. Homogenat komórkowy stanowiący przedmiot wynalazku oraz powstające na jego bazie preparaty znajdują kolejno zastosowanie w medycynie estetycznej, dermatologii i medycynie sportowej, w szczególności jako środki stymulujące regenerację zmian potrądzikowych, gojące oparzenia, leczące zaburzenia ukrwienia w zmianach pourazowych.
Przedmiot wynalazku znajduje zastosowanie również jako preparat biostymulujący błonę śluzową zwłaszcza w przypadkach paradontozy, owrzodzenia błony śluzowej przykładowo jamy ustnej, nosa, pochwy. Homogenat komórkowy stanowiący przedmiot niniejszego wynalazku oraz jego preparaty znajdują również zastosowanie w medycynie weterynaryjnej przyspieszając gojenie się ran oraz odrost sierści.
Korzystnie preparat przeznaczony jest do podawania naskórnie lub śródskórnie. Kolejnym przedmiotem wynalazku jest kompozycja farmaceutyczna lub kosmetyczna zawierająca substancję aktywną i farmaceutycznie dopuszczalny nośnik, charakteryzująca się tym, że substancję aktywną stanowi homogenat uzyskany z komórek należących do linii komórek macierzystych MIC-1 wyprowadzonej z rosnącego poroża jeleniowatych (Cervidae) zdeponowanej w DSMZ pod numerem DSM ACC2854.
W korzystnej realizacji kompozycji jedna jednostka homogenatu zawiera ekstrakt z 1 miliona komórek.
Korzystnie, kompozycja przeznaczona jest do podawania naskórnie lub śródskórnie.
Zalety tego wynalazku, to przede wszystkim standardowe warunki hodowli komórek o dużym potencjale proliferacyjnym oraz brak problemów natury etycznej jakie są formułowane wobec badań na ludzkich komórkach embrionalnych.
Przedmiot wynalazku uwidoczniono na figurach, na których fig. 1a przedstawia przekrój styczny skóry po 21 dniowej aplikacji śródskórnej homogenatu.
Obserwuje się zwiększenie ilości włosów wtórnych w kępkach włosowych oraz obecne liczne pęczki włókien kolagenowych.
PL 217 151 B1
Fig. 1b przedstawia kontrolny styczny przekrój skóry po 21 dniowej aplikacji soli fizjologicznej (kontrola).
Fig. 2 przedstawia przekrój styczny skóry właściwej po 21 dniowej aplikacji śródskórnej homogenatu. Barwienie Van Gieson uwidoczniło nowo wytworzone włókna kolagenowe.
Fig. 3 przedstawia wygojoną ranę w 5 dobie po pobraniu wycinka obejmującego wszystkie warstwy skóry.
Fig. 4 przedstawia aktywne fibroblasty uczestniczące w syntezie kolagenu.
Przedmiot wynalazku przedstawiono w przykładach wykonania nie ograniczających jego zakresu ochrony.
P r z y k ł a d 1.
Otrzymywanie homogenatu zawierającego mezenchymalne komórki macierzyste MIC-1 z poroża jeleniowatych
Hodowlę prowadzi się w inkubatorze w standardowych warunkach to jest w temperaturze +37°C i atmosferze z dodatkiem 5% CO2. Komórki porożogenne są komórkami adherentnymi, rosną w butel2 kach o pojemności 175 cm2 firmy (BD Falcon Cell Culture Flask) w medium hodowlanym - MEM firmy Cambrex z dodatkiem 10% płodowej surowicy bydlęcej, penicyliny 100 U.l/ml i streptomycyny 0,1 mg/ml. Uzyskiwana wydajność z 1 butelki to około 30 milionów komórek w 14 dniowym cyklu hodowlanym. Po uzyskaniu pełnego monolayeru, komórki odkleja się od dna butelki hodowlanej przy użyciu 0,05% trypsyny z 0,02% kwasem etylenodiaminotetraoctowym (EDTA) i przenosi się do probówek wirówkowych. Zawartość trypsyny w probówkach jest inaktywowana przez dodanie 10 ml supernatantu. Komórki są następnie dwukrotnie przepłukiwane w PBS i odwirowywane. Wirowanie prowadzi się w wirówce firmy Hereus przez 10 minut przy około 1000 obr/min. Odwirowany płyn zlewa się otrzymując gotowy pelet komórkowy. Jest on zawieszany w 0,9% chlorku sodu w ilości 1 miliard komórek na 50 ml płynu. Jednorodną zawiesinę ochładza się w komorze homogenizacyjnej chłodzonej wodą do temperatury ok. 4°C. W komorze stalowej z ciągłym chłodzeniem wodnym, za pomocą ultradźwięków o częstotliwości 20 kHz w ciągu 30 sekund przeprowadza się proces rozbicia komórek (Ultrasonic desintegrator typ UD - 20 automatic firmy Techpan). Roztwór jest mianowany w jednostkach biologicznych - za 1 jednostkę przyjmuje się ekstrakt uzyskany z 1 miliona komórek. Homogenat jest składowany w zamrożeniu do - 80°C.
P r z y k ł a d 2.
Otrzymywanie postaci homogenatu komórkowego zawierającego mezenchymalne komórki macierzyste MIC-1 z poroża jeleniowatych
Preparat uzyskany na bazie homogenatu komórkowego może występować w postaci maści, kremu, toniku lub innej dowolnej postaci nadającej się do aplikacji naskórnej. Preparat może mieć również zastosowanie śródskórne. Przykładowe podłoże maściowe to preparat Haskobaza lub inne znane i zwyczajowo stosowane przez specjalistów z dziedziny podłoża maściowe typu Lekobaza, Euceryna bezwodna, maść cholesterolowa, wazelina biała (Farmacja stosowana, red. Stanisław Janicki i Adolf Flebig, PZWL Warszawa 1996). Do 10 gramów zawiesiny zawierającej 50 jednostek homogenatu dodano 40 gramów podłoża. Mieszaninę homogenizowano za pomocą Miksera Półautomatycznego PA200 Alpina (Polska). Homogenizację prowadzono przez 5 minut w dedykowanym pojemniku o pojemności 50 ml według ustawienia automatycznego.
Tonik przygotowano do 50 ml etanolu 96% dodano 50 ml zawiesiny zawierającej 100 jednostek biologicznych homogenatu. Przygotowane preparaty przechowywano w warunkach chłodniczych.
P r z y k ł a d 3.
Badanie wpływu homogenatu komórkowego na skórę po podaniu jednorazowym naskórnym oraz śródskórnym
Badanie wpływu homogenatu komórkowego na skórę po podaniu jednorazowym naskórnym oraz śródskórnym prowadzono kolejno na dwóch z czterech grup zawierających po 6 osobników wybranych z grupy 24 królików rasy białej Nowozelandzkiej.
2
Podczas podawania naskórnego, na 6 cm2 powierzchni zdepilowanej, nieuszkodzonej skóry jednego boku królika (na wysokości klatki piersiowej) naniesiono 0,5 ml preparatu. Na taką samą powierzchnie drugiego boku (kontrola) naniesiono odpowiednie podłoże. Miejsce podania kontrolowano w czasie 96 godzin.
2
Podczas podawania śródskórnego, w obrębie 6 cm2 zdepilowanej, nieuszkodzonej skóry jednego boku królika (na wysokości klatki piersiowej) w oznaczone pole, śródskórnie wstrzyknięto 0,5 ml
PL 217 151 B1 preparatu. W pole drugiego boku wstrzyknięto 0,5 ml soli fizjologicznej. Stan skóry oceniono w ciągu 96 godzin.
Po dawce pojedynczej obserwowano niewielkie zaróżowienie skóry od 2 dnia obserwacji, które ustąpiło po 10 dniach. Tolerancja obu postaci była dobra.
P r z y k ł a d 4.
Badanie wpływu homogenatu komórkowego na skórę po podaniu wielokrotnym naskórnym oraz śródskórnym
Badanie wpływu homogenatu komórkowego na skórę po podaniu wielokrotnym naskórnym oraz śródskórnym prowadzono kolejno na dwóch z czterech grup zawierających po 6 osobników wybranych z grupy 24 królików rasy białej Nowozelandzkiej.
2
Podczas podawania naskórnego, na 6 cm2 powierzchni zdepilowanej, nieuszkodzonej skóry jednego boku królika (na wysokości klatki piersiowej) nanoszono 0,5 ml preparatu raz dziennie przez 28 kolejnych dni. Na taką samą powierzchnię drugiego boku (kontrola) nanoszono odpowiednie podłoże w taki sam sposób jak preparaty badane. Miejsce podania kontrolowano wielokrotnie w czasie pierwszych 8 godzin od podania, a następnie codziennie przez 21 dni. Podczas podawania śródskórne2 go, na 6 cm2 powierzchni zdepilowanej, nieuszkodzonej skóry jednego boku królika (na wysokości klatki piersiowej) nanoszono 0,5 ml preparatu raz dziennie przez 14 kolejnych dni. Na taką samą powierzchnię drugiego boku (kontrola) nanoszono odpowiednie podłoże w taki sam sposób jak preparaty badane. Miejsce podania kontrolowano wielokrotnie w czasie pierwszych 8 godzin od podania, a następnie codziennie przez 21 dni. W 14 dniu obserwacji u 6 zwierząt z grup podania wielokrotnego pobrano wycinki skóry z miejsc intensywnego wzrostu włosów do badania histologicznego. U trzech zwierząt z grupy kontrolnej pobrano wycinki skóry z miejsc gdzie podano sól fizjologiczną do badania histologicznego. Podanie homogenatu śródskórnie nie powodowało uszkodzenia skóry i było dobrze tolerowane. W preparatach obserwowano w porównaniu z grupą kontrolną zwiększenie ilości włosów w fazie wzrostowej, pogrubienie włosa w obrębie cebulki włosa. W skórze właściwej obserwowano zwiększenie ilości włókien kolagenowych. Najwyraźniej procesy te obserwowano w grupie otrzymującej homogenat komórek MIC-1 śródskórnie.
W obszarze skóry, w którym podano komórki obserwowano szybszy odrost włosów niż w polu gdzie podano sól fizjologiczną. Widoczną różnice zanotowano od 6 dnia obserwacji. Całkowity odrost włosów do długości właściwej dla danego osobnika tj. od 35 do 42 mm, następował po ok. 10 do 14 tygodniach. Przyrosty włosa w okresie do 2, 3 tygodni były większe i wynosiły ok. 4 mm tyg. (w grupie kontrolnej w tym czasie nie odnotowano zauważalnego przyrostu) następnie od 2-3 mm na tydzień. Podanie homogenatu śródskórnie nie powodowało uszkodzenia skóry i było dobrze tolerowane. W preparatach histologicznych po aplikacji homogenatu w porównaniu z grupą kontrolną obserwowano znaczny wzrost ilości włosów wtórnych, wzrost ilości nowo zsyntetyzowanych włókien kolagenowych.
P r z y k ł a d 5.
Badanie wpływu maści wykonanej na bazie homogenatu komórek macierzystych MIC-1
Badanie wykonano na 9 królikach podzielonych na 3 grupy po 3 zwierzęta. Do badania wykorzystano 3 rodzaje maści o różnych stężeniach: 1 j.m. na 1 g Haskobazy, 0.5 j.m. na 1 g Haskobazy oraz 0,1 j.m. na 1 g Haskobazy. W grupie 1 królików aplikowano maść o tężeniu 1 j.m./1 g, w grupie 2 aplikowano maść o stężeniu 0,5 j.m./1 g, w grupie 3 królików 0,1 j.m./1 g. Wszystkie grupy objęte były 2 następującą procedurą: na 6 cm2 powierzchnie zdepilowanej, nieuszkodzonej skóry jednego boku królika (na wysokości klatki piersiowej) nanosi się 0,5 ml preparatu raz dziennie przez 28 kolejnych dni. Na taką samą powierzchnię drugiego boku (kontrola) nanosi się odpowiednie podłoże (Haskobaza) w taki sam sposób jak preparaty badane. Miejsce podania kontrolowane jest wielokrotnie w czasie pierwszych 8 godzin od podania, a następnie codziennie przez 28 dni.
W grupie otrzymującej maść o stężeniu 0,1 j.m./1 g nie obserwowano intensyfikacji wzrostu włosów. W grupie której aplikowano na skórę maść o stężeniu 0,5 j.m./1 g akceleracje odrostu włosa obserwowano ok. 26 dnia aplikacji. Natomiast najwyższe stężenie wykazywało aktywność ok. 21 dnia aplikacji.
W 1 grupie wykonano pomiary przypływy krwi w skórze boku królika otrzymującego maść i osobnika kontrolnego.
Pomiaru dokonywano z użyciem laserowego przepływomierza dopplerowskiego MBF3D (Moor Instruments Ltd.) i sondy P4s o średnicy 0,46 mm. Urządzenie emituje monochromatyczne światło o długości 780-820 nm wytwarzane przez laser półprzewodnikowy o mocy 1,5 mW. Idea metody laserowodopplerowskiej opiera się na emisji monochromatycznego promieniowania optycznego w głąb tkanki
PL 217 151 B1 i detekcji światła rozproszonego, powracającego na powierzchnię tkanki. Podczas rozpraszania światła na krwinkach znajdujących się w ruchu częstotliwość fali zmienia się w zależności od prędkości krwinki i kąta, jaki tworzą tor ruchu krwinki i fotonu (zjawisko Dopplera). Odpowiedni układ detekcji, przetwarzania i analizy sygnału umożliwia uzyskanie informacji na temat ukrwienia badanej tkanki, zdefiniowanego jako iloczyn lokalnej wartości prędkości i koncentracji krwinek uśredniony w objętości tkanki, w której penetruje światło. Pomiar przepływu krwi w jednym polu skóry trwał 1 minuty. Do analizy wybierano najbardziej spokojny przepływ trwający 20 sekund. Wielkość przepływu krwi (perfuzja) została wyrażona jako iloczyn koncentracji krwinek i ich prędkości, z zastosowaniem jednostki umownej PU (perfusion unit). Zanotowano wzrost perfuzji krwi w skórze o 47% w porównaniu do skóry kontrolnej.
Zastosowanie na skórę maści wykazywało dobrą tolerancję. Obserwowano nieznaczne przekrwienie w obrębie aplikacji, a także szybszy odrost włosów na boku gdzie stosowano maść lub tonik. Rany w miejscach gdzie pobrano wycinki do badania histopatologicznego goiły się znacznie szybciej niż po stronie kontrolnej. W badaniu histologicznym obserwowano podobne zmiany jak w grupie otrzymującej homogenat w postaci iniekcji.
Claims (11)
1. Homogenat komórkowy otrzymany w wyniku rozbicia komórek należących do linii komórek macierzystych MIC-1 wyprowadzonej z rosnącego poroża jeleniowatych (Cervidae) zdeponowanej w DSMZ pod numerem DSM ACC2854.
2. Homogenat według zastrz. 1, znamienny tym, że rozbicie komórek następuje w wyniku działania ultradźwiękami.
3. Homogenat według zastrz. 2 albo 3, znamienny tym, że jedna jednostka homogenatu zawiera ekstrakt z 1 miliona komórek.
4. Sposób uzyskiwania bioaktywnego homogenatu komórkowego, znamienny tym, że prowadzi się hodowlę komórek, oddziela się komórki od podłoża, rozbija się komórki ultradźwiękami, przy czym jako komórki wykorzystuje się komórki z linii komórek macierzystych MIC-1 wyprowadzonej z rosnącego poroża jeleniowatych (Cervidae) zdeponowanej w DSMZ pod numerem DSM ACC2854.
5. Sposób według zastrz. 4, znamienny tym, że prowadzi się hodowlę płytkową lub komórki hoduje się w zawiesinie.
6. Sposób według zastrz. 4 albo 5, znamienny tym, że uzyskuje się homogenat mianowany zawierający w jednej jednostce ekstrakt uzyskany z 1 miliona komórek.
7. Zastosowanie homogenatu uzyskanego z komórek należących do linii komórek macierzystych MIC-1 wyprowadzonej z rosnącego poroża jeleniowatych (Cervidae) zdeponowanej w DSMZ pod numerem DSM ACC2854 do wytwarzania preparatu do pielęgnacji i/lub leczenia skóry.
8. Zastosowanie według zastrz. 7, znamienne tym, że preparat przeznaczony jest do podawania naskórnie lub śródskórnie.
9. Kompozycja farmaceutyczna lub kosmetyczna zawierająca substancję aktywną i farmaceutycznie dopuszczalny nośnik, znamienna tym, że substancję aktywną stanowi homogenat uzyskany z komórek należących do linii komórek macierzystych MIC-1 wyprowadzonej z rosnącego poroża jeleniowatych (Cervidae) zdeponowanej w DSMZ pod numerem DSM ACC2854.
10. Kompozycja według zastrz. 9, znamienna tym, że jedna jednostka homogenatu zawiera ekstrakt z 1 miliona komórek.
11. Kompozycja według zastrz. 9 albo 10, znamienna tym, że przeznaczona jest do podawania naskórnie lub śródskórnie
Priority Applications (14)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL390272A PL217151B1 (pl) | 2010-01-26 | 2010-01-26 | Homogenat komórkowy z komórek macierzystych wyprowadzonych z rosnącego poroża jeleniowatych, sposób jego otrzymywania i zastosowanie |
| AU2011210042A AU2011210042B2 (en) | 2010-01-26 | 2011-01-26 | Cell homogenate from stem cells derived from growing deer antlers, a method of obtaining it and its use |
| HK13105554.2A HK1178457B (en) | 2010-01-26 | 2011-01-26 | Cell homogenate from stem cells derived from growing deer antlers, a method of obtaining it and its use |
| CA2787894A CA2787894A1 (en) | 2010-01-26 | 2011-01-26 | Cell homogenate from stem cells derived from growing deer antlers, a method of obtaining it and its use |
| US13/574,553 US8900859B2 (en) | 2010-01-26 | 2011-01-26 | Cell homogenate from stem cells derived from growing deer antlers, a method of obtaining it and its use |
| PCT/PL2011/050003 WO2011093732A1 (en) | 2010-01-26 | 2011-01-26 | Cell homogenate from stem cells derived from growing deer antlers, a method of obtaining it and its use |
| KR1020127021970A KR20120127468A (ko) | 2010-01-26 | 2011-01-26 | 성장하는 사슴뿔에서 유래한 줄기세포로부터의 세포 균질현탁액, 이의 수득 방법 및 이의 용도 |
| EP11709506.7A EP2528608B1 (en) | 2010-01-26 | 2011-01-26 | Cell homogenate from stem cells derived from growing deer antlers, a method of obtaining it and its use |
| CN201180011547.6A CN102781455B (zh) | 2010-01-26 | 2011-01-26 | 来自来源于正在生长的鹿茸的干细胞的细胞匀浆物、获得其的方法及其用途 |
| NZ601400A NZ601400A (en) | 2010-01-26 | 2011-01-26 | Cell homogenate from stem cells derived from growing deer antlers, a method of obtaining it and its use |
| UAA201210094A UA107482C2 (uk) | 2010-01-26 | 2011-01-26 | Клітинний гомогенат зі стовбурових клітин, отриманих із зростаючих рогів оленя, спосіб його одержання та його використання |
| EA201290577A EA201290577A1 (ru) | 2010-01-26 | 2011-01-26 | Клеточный гомогенат из стволовых клеток, полученных из растущих рогов оленя, способ его получения и применения |
| IL221114A IL221114A0 (en) | 2010-01-26 | 2012-07-25 | Cell homogenate from stem cells derived from growing deer antlers, a method of obtaining it and its use |
| US14/527,254 US9259444B2 (en) | 2010-01-26 | 2014-10-29 | Cell homogenate from stem cells derived from growing deer antlers, a method of obtaining it and its use |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL390272A PL217151B1 (pl) | 2010-01-26 | 2010-01-26 | Homogenat komórkowy z komórek macierzystych wyprowadzonych z rosnącego poroża jeleniowatych, sposób jego otrzymywania i zastosowanie |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL390272A1 PL390272A1 (pl) | 2011-08-01 |
| PL217151B1 true PL217151B1 (pl) | 2014-06-30 |
Family
ID=44510239
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL390272A PL217151B1 (pl) | 2010-01-26 | 2010-01-26 | Homogenat komórkowy z komórek macierzystych wyprowadzonych z rosnącego poroża jeleniowatych, sposób jego otrzymywania i zastosowanie |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL217151B1 (pl) |
| UA (1) | UA107482C2 (pl) |
-
2010
- 2010-01-26 PL PL390272A patent/PL217151B1/pl unknown
-
2011
- 2011-01-26 UA UAA201210094A patent/UA107482C2/uk unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL390272A1 (pl) | 2011-08-01 |
| UA107482C2 (uk) | 2015-01-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US9757422B2 (en) | Methods and compositions for regenerating and repairing damaged or aged tissue or organs using nonviable irradiated or lyophilized pluripotent stem cells | |
| KR102043739B1 (ko) | 인체 지방줄기세포 배양액 추출물과 피디알앤을 함유하는 화장료 조성물 | |
| CN106176563A (zh) | 人脐带msc无血清培养液脂质体冻干粉及其制备和应用 | |
| CN104087551A (zh) | 一种体外分离培养人的表皮细胞的新方法 | |
| Yang et al. | Platelet poor plasma gel combined with amnion improves the therapeutic effects of human umbilical cord‑derived mesenchymal stem cells on wound healing in rats | |
| US9259444B2 (en) | Cell homogenate from stem cells derived from growing deer antlers, a method of obtaining it and its use | |
| PL217151B1 (pl) | Homogenat komórkowy z komórek macierzystych wyprowadzonych z rosnącego poroża jeleniowatych, sposób jego otrzymywania i zastosowanie | |
| Chen et al. | Injectable dual-cross-linked microalgae-silk gel ameliorates diabetic wound healing by promoting oxygenation and ROS clearance and lessening inflammation | |
| CN111040984A (zh) | 脐带间充质干细胞诱导分化形成皮肤成纤维细胞的方法 | |
| Moulin et al. | In vitro culture methods of skin cells for optimal skin reconstruction by tissue engineering | |
| CN109182264A (zh) | 制备人脂肪干细胞培养液的方法及其在美容用品中的应用 | |
| Penuelas Alvarez | Using conditioned media from adipose tissue derivatives and adipose-derived stromal cells to induce vascularisation for soft tissue wound healing | |
| TWI493035B (zh) | Human umbilical cord mesenchymal stem cells in vitro culture method, promote cell growth and wound healing of the relevant components of the manufacturing method and its application. | |
| Aronowitz et al. | Esthetic Surgery Applications for Adipose-Derived Stem Cells | |
| WÓJCIK et al. | Stem cells in wound healing | |
| Shiraishi et al. | Regenerative Therapy | |
| Uzlenkova et al. | THERAPEUTICAL INFLUENCE OF BONE MARROW MESENCHYMAL STROMAL CELLS ON LOCAL SKIN RADIATION INJURIES IN RAT MODEL | |
| AU2023379809A1 (en) | Use of conditioned medium derived from cultivation of mesenchymal stem cells of the umbilical cord for inducing, stimulating and promoting hair growth and regeneration | |
| Cristaldi et al. | Human exfoliated deciduous teeth and oral mucosa: promising applications in tissue regeneration | |
| KARADAĞ | CURRENT AESTHETIC APPLICATIONS OF ADIPOSE-DERIVED STEM CELLS | |
| Farhan et al. | Stem Cell Treatment for Cosmetic Surgery | |
| RU2685472C2 (ru) | Способ подготовки аутологичных моноцитов человека для терапии ожоговых ран | |
| CN1432645A (zh) | 人细胞库及其在自体细胞移植和组织修复中的应用 | |
| JP2025533776A (ja) | ヒト毛包由来馴化培養液およびその製造方法 | |
| Aránega et al. | Therapeutic approaches in regenerative medicine of cardiovascular diseases: from bench to bedside |