PL21686B1 - - Google Patents

Description

Wykryto, ze hormon cialka zóltego (cor¬ pus luteum) mozna oczyscic, zadajac prepa¬ raty, zawierajace ten hormon, odczynnikami karbonylowemi, oddzielajac produkt reak¬ cji od skladników, które nie wziely udzialu w reakcji, i odszczepiajac hormon od tego pro¬ duktu. Jako odczynniki karbonylowe moze znalezc zastosowanie np. dwusiarczyn, hy- droksylamina lub hydrazyna i ich pochodne, jak np. semikarbazyd, kwas fenylohydra- zynosulfonowy i zwiazki podobne.Oddzielenie otrzymanych produktów reakcji od substancyj, które nie wziely u- dzialu w reakcji, jest mozliwe mianowicie wówczas, gdy obie grupy tych cial róznia sie bardzo swa rozpuszczalnoscia. Po od- szczepieniu uzytego odczynnika karbonylo- wego, otrzymuje sie wogóle hormon cialka zóltego (corpus luteum) juz w postaci kry¬ stalicznej, która mozna ewentualnie oczy¬ scic jeszcze lepiej, przekrystalizowujac ja zapomoca ponownie dodanych odczynni¬ ków karbonylowych, jak hydroksylaminy, lub przez sublimacje w wysokiej prózni.Przyklad I. 2,5 g wyciagu cialka zól¬ tego, otrzymanego wedlug patentu Nr 21580 przez oczyszczanie mocnym np. 75%-owym kwasem siarkowym, rozpuszcza sie w 60 cm1 alkoholu absolutnego, dodaje roztwór 2,23 g chlorowodorku semikarbazydu i 2,72 g kry¬ stalicznego octanu sodowego w 60 cm3 wo¬ dy i utrzymuje w temperaturze wrzenia wciagu 2 godzin. Powstaly osad po odstaniu w ciagu kilku godzin w niskiej temperaturze odsacza sie, poczem w celu oczyszczenia wy¬ ciaga sie go ponownie zapomoca alkoholu u- wodnionego, a nastepnie alkoholu absolut¬ nego. Semikarbazon, otrzymany w ten spo¬ sób, rozpuszcza sie w 6 cm3 lodowatego kwa¬ su octowego i po dodaniu 80 cm3 20%-owe¬ go kwasu siarkowego ogrzewa na wrzacej kapieli wodnej, czesto poruszajac. Przy stygnieciu powstaja krysztaly w postaci igiel, rozpuszczalnych w eterze. Przezlwy- ciagniecie produktu reakcji eterem i odpa¬ rowanie wyciagu eterowego otrzymuje sie hormon cialka zóltego w postaci krysztalów, które przez wielokrotne przekrystalizowanie lub zabieg podobny daja sie rozdzielic na swe skladniki: wlasciwy hormon cialka zól¬ tego o wzorze: C21if80O2 oraz jego oksyke- ton o wzorze: C21H3±02.Przyklad II. 4,16 g preparatu cialka zóltego (corpus luteum), otrzymanego i o- czyszczonego wedlug W. M. Allen'a (J.Biol. Chem. 98, 591, 1932), rozpuszcza sie w 100 cm3 alkoholu absolutnego i ogrzewa w ciagu 3 godzin z roztworem 2,8 g chloro¬ wodorku hydroksylaminy i 5,6 g krystalicz¬ nego octanu sodowego w 60 cm3 wody. Na¬ stepnie mieszanine reakcyjna odparowuje sie do objetosci mniej wiecej 50 cm3. Wy¬ dzielajacy sie przy tern gesty olej wyciaga sie przedewszystkiem, w celu usuniecia do¬ mieszek nieorganicznych, kilkakrotnie wo¬ da, poczem rozpuszcza na goraco w alkoho¬ lu metylowyni i powstaly roztwór zadaje woda az do wystapienia zmetnienia. Podczas stania*w niskiej temperaturze krystalizuje z roztworu tego oksym surowy. Pozotale jego ilosci otrzymuje sie z lugów macierzystych tej masy krystalicznej.Surowy oksym mozna pr^zekrystalizowac z alkoholu rozcienczonego i absolutnego.Otrzymany zwiazek o punkcie topnienia 240°C na podstawie wyników analitycznych stanowi dwuoksym dwuketonu o wzorze: C21#30O2. Przez dalsze przekrystalizowy- wanie mozna go jednak ewentualnie roz¬ dzielic na dwa dwuoksymy o wyzszym punkcie topnienia.W celu zmydlenia powyzsza pochodna oksymu o punkcie topnienia 240°C wpro¬ wadza sie do goracego 15-owego kwasu sol¬ nego, ogrzewa przez czas pewien na wrza¬ cej kapieli wodnej i zmydlona mieszanine wyciaga az do wyczerpania eterem. Przez odparowywanie i przekrystalizowywanie roztworu eterowego wzglednie przez subli- macje w prózni otrzymuje sie zwiazek dwu- ketonowy, bedacy podstawa dwuoksymu.Z lugów macierzystych dwuoksymów mozna przez zmydlenie otrzymac, jak to o- pisano powyzej, oksyketon cialka zóltego o wzorze: C21H34O2 ° punkcie topnienia 195°C.Przyklad III. 300 mg wyciagu cialka zóltego, otrzymanego wedlug W. M. Allen'a (J. Biol. Chem. 98, 591, 1932), rozpuszcza sie wraz z 300 mg fenylohydrazyny w 10 cm3 alkoholu metylowego i 0,4 cm3 lodowatego kwasu octowego i ogrzewa w ciagu 2 godzin na wrzacej kapieli wodnej. Nastepnie do mieszaniny reakcyjnej dodaje sie na goraco, ostroznie, wody az do rozpoczynajacego sie zmetnienia i pozostawia osad do odstania sie na zimno przez czas dluzszy. Wydzielo¬ ny fenylohydrazon surowy odsacza sie i z odparowanego lugu macierzystego otrzymu¬ je sie pozostale jego ilosci. Mozna go, po¬ dobnie do oksymu surowego, opisanego w poprzednim przykladzie, przekrystalizowac z alkoholu metylowego lub etylowego i roz¬ lozyc przez ogrzewanie z rozcienczonym kwasem.W taki sam sposób otrzymuje sie, stosu* jac p-nitro-fenylohydrazyne, nieco trudniej rozpuszczalny, ciemnoceglastoczerwony p- nitro-fenylohydrazon hormonu cialka zólte¬ go o wzorze: C21Hs0O2 oraz oksyketon o wzorze C21ff3402.Przyklad IV. 100 mg preparatu cialka zóltego, otrzymanego i oczyszczonego we¬ dlug W. M. AllenV(J. Biol. Chem. 98,591, — 2 -1932), rozpuszcza sie w 50 cm3 eteru, wol¬ nego od nadtlenku. Powstaly roztwór etero¬ wy energicznie wyklóca sie pieciokrotnie, kazdorazowo z 20 cm3 dwusiarczynu sodo¬ wego, oddzielajac za kazdym razem warstwe wodna w lejku rozdzielczym od warstwy e- terowej. Roztwór eterowy tworzy po odpa¬ rowaniu olej zóltawy. Polaczone roztwory dwusiarczynu ogrzewa sie z rozcienczonym kwasem nieorganicznym, przepuszczajac przez nie azot, i nastepnie wyciaga eterem. Z roztworu eterowego otrzymuje sie przy ste¬ zaniu go hormon w postaci oczyszczonej.Przyklad V. 100 mg preparatu cialka zóltego (corpus luteum), otrzymanego we¬ dlug G. W. Corner'a i W. M. Allen'a (Amen J. of Physiol. tom 88, 326, 1929) i oczyszczo¬ nego przez adsorbcje czynnych jego sklad¬ ników z roztworu estru etylowego kwasu octowego zapomoca wegla zwierzecego, jak równiez przez wylugowanie srodka adsorb- cyjnego zapomoca mieszaniny alkoholu me¬ tylowego i chloroformu, rozpuszcza sie wraz ze 150 mg kwasu fenylohydrazyno- sulfonowego w 20 cm3 alkoholu 60%-owego (objet.). Roztwór ten ogrzewa sie przez czas dluzszy do wrzenia, poczem odparo¬ wuje w prózni wieksza czesc alkoholu, a pozostalosc, zawierajaca wode, wyciaga sie kilkakrotnie eterem. Polaczone roztwory e- terowe tworza przy odparowywaniu jasno- zólty olej prawie zupelnie nieczynny. Nato¬ miast z fazy wodnej, ogrzanej z dodatkiem kwasu, otrzymuje sie wyciag eterowy, za¬ wierajacy wzbogacony hormon cialka zól¬ tego. PL

Claims (1)

1. Zastrzezenie patentowe. Sposób oczyszczania hormonu cialka zól¬ tego (corpus luteum), znamienny tern, ze preparaty, zawierajace ten hormon, zadaje sie odczynnikami karbonylowemi, nastepnie produkt reakcji oddziela od skladników, które nie wziely udzialu w reakcji, i od pro¬ duktu tego odszczepia hormon. Gesellschaft fur Chemische Industrie in Basel. Zastepca: M. Skrzypkowski, rzecznik patentowy. "T)riik L. Boguslawskiego i Skh, Warszawa* PL