PL215832B1 - Diestry arylowe kwasów 1-aminoalkanofosfonowych i ich peptydowe pochodne oraz sposób ich wytwarzania i zastosowanie - Google Patents
Diestry arylowe kwasów 1-aminoalkanofosfonowych i ich peptydowe pochodne oraz sposób ich wytwarzania i zastosowanieInfo
- Publication number
- PL215832B1 PL215832B1 PL385481A PL38548108A PL215832B1 PL 215832 B1 PL215832 B1 PL 215832B1 PL 385481 A PL385481 A PL 385481A PL 38548108 A PL38548108 A PL 38548108A PL 215832 B1 PL215832 B1 PL 215832B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- acid
- methyl
- ester
- brine
- boc
- Prior art date
Links
- -1 aryl diesters Chemical class 0.000 title claims description 42
- 239000002253 acid Substances 0.000 title claims description 28
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 16
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 title claims description 12
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims description 12
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 7
- 239000003541 chymotrypsin inhibitor Substances 0.000 title description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 60
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 49
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 45
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 42
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 39
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 38
- 239000012267 brine Substances 0.000 claims description 33
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 33
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 25
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims description 24
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims description 24
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 23
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 22
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 20
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 claims description 19
- 108090000317 Chymotrypsin Proteins 0.000 claims description 17
- 229960002376 chymotrypsin Drugs 0.000 claims description 17
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 claims description 16
- DTUQWGWMVIHBKE-UHFFFAOYSA-N phenylacetaldehyde Chemical compound O=CCC1=CC=CC=C1 DTUQWGWMVIHBKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 108090000787 Subtilisin Proteins 0.000 claims description 15
- YGHRJJRRZDOVPD-UHFFFAOYSA-N 3-methylbutanal Chemical compound CC(C)CC=O YGHRJJRRZDOVPD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 14
- PUJDIJCNWFYVJX-UHFFFAOYSA-N benzyl carbamate Chemical compound NC(=O)OCC1=CC=CC=C1 PUJDIJCNWFYVJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 claims description 12
- FAIAAWCVCHQXDN-UHFFFAOYSA-N phosphorus trichloride Chemical compound ClP(Cl)Cl FAIAAWCVCHQXDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims description 11
- OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L potassium sulfate Chemical compound [K+].[K+].[O-]S([O-])(=O)=O OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 11
- 229910052939 potassium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 11
- 235000011151 potassium sulphates Nutrition 0.000 claims description 11
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 claims description 11
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 claims description 11
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims description 10
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 9
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims description 9
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims description 9
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 9
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 9
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 7
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 7
- JWAZRIHNYRIHIV-UHFFFAOYSA-N 2-naphthol Chemical compound C1=CC=CC2=CC(O)=CC=C21 JWAZRIHNYRIHIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- ZQEBQGAAWMOMAI-ZETCQYMHSA-N (2s)-1-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonyl]pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical group CC(C)(C)OC(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O ZQEBQGAAWMOMAI-ZETCQYMHSA-N 0.000 claims description 5
- BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 3-azaniumyl-2-hydroxypropanoate Chemical compound NCC(O)C(O)=O BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 5
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- HVLLSGMXQDNUAL-UHFFFAOYSA-N triphenyl phosphite Chemical compound C=1C=CC=CC=1OP(OC=1C=CC=CC=1)OC1=CC=CC=C1 HVLLSGMXQDNUAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229950011260 betanaphthol Drugs 0.000 claims description 3
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims description 3
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 3
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 125000000066 S-methyl group Chemical group [H]C([H])([H])S* 0.000 claims description 2
- 238000005830 amidoalkylation reaction Methods 0.000 claims description 2
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 claims description 2
- 238000009835 boiling Methods 0.000 claims description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 2
- HBGGXOJOCNVPFY-UHFFFAOYSA-N diisononyl phthalate Chemical group CC(C)CCCCCCOC(=O)C1=CC=CC=C1C(=O)OCCCCCCC(C)C HBGGXOJOCNVPFY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims description 2
- UNYVEYHRHORMRB-UHFFFAOYSA-N trinaphthalen-2-yl phosphite Chemical compound C1=CC=CC2=CC(OP(OC=3C=C4C=CC=CC4=CC=3)OC=3C=C4C=CC=CC4=CC=3)=CC=C21 UNYVEYHRHORMRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000004474 valine Substances 0.000 claims description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims 2
- 125000001622 2-naphthyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2C([H])=C(*)C([H])=C([H])C2=C1[H] 0.000 claims 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 150000003009 phosphonic acids Chemical class 0.000 claims 1
- OJMIONKXNSYLSR-UHFFFAOYSA-N phosphorous acid Chemical compound OP(O)O OJMIONKXNSYLSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N Trichloro(2H)methane Chemical compound [2H]C(Cl)(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N 0.000 description 54
- 239000000047 product Substances 0.000 description 52
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 48
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 37
- 150000002148 esters Chemical group 0.000 description 29
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 22
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 18
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 18
- 238000001394 phosphorus-31 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 17
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 16
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 16
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 15
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 11
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 10
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 10
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 9
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 8
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 8
- ABLZXFCXXLZCGV-UHFFFAOYSA-N Phosphorous acid Chemical compound OP(O)=O ABLZXFCXXLZCGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 125000006267 biphenyl group Chemical group 0.000 description 7
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 7
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 7
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229960003136 leucine Drugs 0.000 description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 5
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 5
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 5
- 229940100595 phenylacetaldehyde Drugs 0.000 description 5
- 229960005190 phenylalanine Drugs 0.000 description 5
- 150000002993 phenylalanine derivatives Chemical class 0.000 description 5
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 4
- 239000010779 crude oil Substances 0.000 description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 4
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 4
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 4
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 4
- NWVVVBRKAWDGAB-UHFFFAOYSA-N p-methoxyphenol Chemical compound COC1=CC=C(O)C=C1 NWVVVBRKAWDGAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 4
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 4
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 3
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical class Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 3
- SZXBQTSZISFIAO-ZETCQYMHSA-N (2s)-3-methyl-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]butanoic acid Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OC(C)(C)C SZXBQTSZISFIAO-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 2
- QWBBPBRQALCEIZ-UHFFFAOYSA-N 2,3-dimethylphenol Chemical compound CC1=CC=CC(O)=C1C QWBBPBRQALCEIZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FDQQNNZKEJIHMS-UHFFFAOYSA-N 3,4,5-trimethylphenol Chemical compound CC1=CC(O)=CC(C)=C1C FDQQNNZKEJIHMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ASHGTJPOSUFTGB-UHFFFAOYSA-N 3-methoxyphenol Chemical compound COC1=CC=CC(O)=C1 ASHGTJPOSUFTGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QASBCTGZKABPKX-UHFFFAOYSA-N 4-(methylsulfanyl)phenol Chemical compound CSC1=CC=C(O)C=C1 QASBCTGZKABPKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HXDOZKJGKXYMEW-UHFFFAOYSA-N 4-ethylphenol Chemical compound CCC1=CC=C(O)C=C1 HXDOZKJGKXYMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000007832 Na2SO4 Substances 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- 235000010290 biphenyl Nutrition 0.000 description 2
- 239000004305 biphenyl Substances 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 2
- 150000005690 diesters Chemical class 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 2
- 150000002614 leucines Chemical class 0.000 description 2
- GSYSFVSGPABNNL-UHFFFAOYSA-N methyl 2-dimethoxyphosphoryl-2-(phenylmethoxycarbonylamino)acetate Chemical group COC(=O)C(P(=O)(OC)OC)NC(=O)OCC1=CC=CC=C1 GSYSFVSGPABNNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- IWDCLRJOBJJRNH-UHFFFAOYSA-N p-cresol Chemical compound CC1=CC=C(O)C=C1 IWDCLRJOBJJRNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZUOUZKKEUPVFJK-UHFFFAOYSA-N phenylbenzene Natural products C1=CC=CC=C1C1=CC=CC=C1 ZUOUZKKEUPVFJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- SULKGYKWHKPPKO-RAJPIYRYSA-N (4s)-4-[[(2r)-2-[[(2s,3r)-2-[[(2s)-4-amino-4-oxo-2-[[(2s)-pyrrolidine-2-carbonyl]amino]butanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-sulfanylpropanoyl]amino]-5-[[(2s,3s)-1-[[(2r)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2r)-1-[[(2s,3r)-1-[[2-[[(1r)-1-carboxy Chemical compound N([C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O)[C@@H](C)O)C(=O)[C@@H]1CCCN1 SULKGYKWHKPPKO-RAJPIYRYSA-N 0.000 description 1
- XYHKNCXZYYTLRG-UHFFFAOYSA-N 1h-imidazole-2-carbaldehyde Chemical compound O=CC1=NC=CN1 XYHKNCXZYYTLRG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GWYFCOCPABKNJV-UHFFFAOYSA-M 3-Methylbutanoic acid Natural products CC(C)CC([O-])=O GWYFCOCPABKNJV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- LKDMKWNDBAVNQZ-UHFFFAOYSA-N 4-[[1-[[1-[2-[[1-(4-nitroanilino)-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]carbamoyl]pyrrolidin-1-yl]-1-oxopropan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC(=O)CCC(=O)NC(C)C(=O)NC(C)C(=O)N1CCCC1C(=O)NC(C(=O)NC=1C=CC(=CC=1)[N+]([O-])=O)CC1=CC=CC=C1 LKDMKWNDBAVNQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 8-[3-(1-cyclopropylpyrazol-4-yl)-1H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-5-yl]-3-methyl-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octan-2-one Chemical class C1(CC1)N1N=CC(=C1)C1=NNC2=C1N=C(N=C2)N1C2C(N(CC1CC2)C)=O HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010003210 Arteriosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108090000617 Cathepsin G Proteins 0.000 description 1
- 102000004173 Cathepsin G Human genes 0.000 description 1
- 108090000227 Chymases Proteins 0.000 description 1
- 102000003858 Chymases Human genes 0.000 description 1
- 229940122644 Chymotrypsin inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 101710137926 Chymotrypsin inhibitor Proteins 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010078321 Guanylate Cyclase Proteins 0.000 description 1
- 102000014469 Guanylate cyclase Human genes 0.000 description 1
- 101800004305 Guanylin Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 150000008544 L-leucines Chemical class 0.000 description 1
- 241000187479 Mycobacterium tuberculosis Species 0.000 description 1
- 235000019502 Orange oil Nutrition 0.000 description 1
- ZKQOUHVVXABNDG-IUCAKERBSA-N Pro-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 ZKQOUHVVXABNDG-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- IWIANZLCJVYEFX-RYUDHWBXSA-N Pro-Phe Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H]1NCCC1)C1=CC=CC=C1 IWIANZLCJVYEFX-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- 108010022999 Serine Proteases Proteins 0.000 description 1
- 102000012479 Serine Proteases Human genes 0.000 description 1
- 101710174704 Subtilisin-like serine protease Proteins 0.000 description 1
- CLZISMQKJZCZDN-UHFFFAOYSA-N [benzotriazol-1-yloxy(dimethylamino)methylidene]-dimethylazanium Chemical compound C1=CC=C2N(OC(N(C)C)=[N+](C)C)N=NC2=C1 CLZISMQKJZCZDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 208000011775 arteriosclerosis disease Diseases 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003782 beta lactam antibiotic agent Substances 0.000 description 1
- GWYFCOCPABKNJV-UHFFFAOYSA-N beta-methyl-butyric acid Natural products CC(C)CC(O)=O GWYFCOCPABKNJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 239000003601 chymase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 210000002249 digestive system Anatomy 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940072185 drug for treatment of tuberculosis Drugs 0.000 description 1
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 1
- 210000001842 enterocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 235000019256 formaldehyde Nutrition 0.000 description 1
- 102000018009 guanylin Human genes 0.000 description 1
- 150000002367 halogens Chemical group 0.000 description 1
- 208000019622 heart disease Diseases 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 208000028774 intestinal disease Diseases 0.000 description 1
- 230000003871 intestinal function Effects 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 125000001624 naphthyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 1
- 239000010502 orange oil Substances 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 125000001476 phosphono group Chemical group [H]OP(*)(=O)O[H] 0.000 description 1
- PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-N phosphoramidic acid Chemical compound NP(O)(O)=O PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910001414 potassium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 108010090894 prolylleucine Proteins 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- 102000027257 transmembrane receptors Human genes 0.000 description 1
- 108091008578 transmembrane receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- 239000002132 β-lactam antibiotic Substances 0.000 description 1
- 229940124586 β-lactam antibiotics Drugs 0.000 description 1
- 150000003952 β-lactams Chemical class 0.000 description 1
Description
Przedmiotem wynalazku są nowe diestry arylowe kwasów 1-aminoalkano-fosfonowe i ich peptydowe pochodne, które są analogami leucyny i fenyloalaniny, sposób wytwarzania diestrów arylowych kwasów 1-aminoalkanofosfonowych oraz ich zastosowanie do wytwarzania preparatów inhibitujących chymotrypsyny.
W literaturze patentowej i naukowej nie są opisane podstawione diestry kwasów 1-aminoalkanofosfonowych, poza kilkoma przykładami pochodnych fenyloalaniny podstawionych chlorowcem w estrowych pierścieniach fenylowych znanych z publikacji Boduszek B, Brown A.D, Powers J.C, J. Enz. Inhib. Med. Chem., 1994, 8, 147-158. Nie są też znane właściwości biologiczne i sposoby wytwarzania związków z innymi niż halogenowe podstawnikami w pierścieniu fenylowym diestrów. Znany jest z publikacji Oleksyszyn J, Powers JC, Biochemistry, 1991, 30, 485-493 oraz ze zgłoszenia w trybie PCT nr PCT/JP2004/006384 inhibitor chymotrypsyny z grupy pochodnych kwasów 1-aminoalkanofosonowych, Suc-Val-Pro-PheP(OPh)2, w którym symbol Phep oznacza fosfonowy analog fenyloalaniny, czyli kwas 1-amino-2-benzylo-etanofosfonowy, a Phep(OPh)2 oznacza ester difenylowy kwasu 1-amino-2-benzylo-etanofosfonowego.
Diestry arylowe kwasów 1-aminoalkanofosfonowych i ich peptydowe pochodne, o wzorze ogólnym 1, w którym W oznacza grupę benzyloksykarbonylową (Cbz), albo resztę peptydową składającą się z jednego, dwóch lub trzech aminokwasów, R1 oznacza podstawnik analogiczny do łańcucha bocznego naturalnych aminokwasów, w szczególności leucyny lub fenyloalaniny, zaś X1, X2, X3, X4 i X5 są takie same lub rożne i oznaczają metyl, etyl, benzyl, O-metyl i S-metyl.
Istotą wynalazku jest również zastosowanie diestrów arylowych kwasów 1-aminoalkanofosfonowych i ich peptydowych pochodnych, o wzorze ogólnym 1, do wytwarzania preparatów do hamowania aktywności chymotrypsyny i subtylizyny.
Inhibitory subtylizyny mogą stanowić nową generację skutecznych leków przeciw gruźlicy. Subtylizyna jest bakteryjną serynową proteazą o specyficzności chymotrypsyny. Niektóre bakterie jak np. gram dodatnie Bacillus subtilis produkują subtilizynę i jej inhibitory posiadają silne właściwości bakteriostatyczne. Mutanty Bacillus subtilis wydzielające duże ilości proteaz mają zwiększoną tolerancję do antybiotyków β-laktamowych. Inhibitory tych proteaz, należących do rodziny subtilizyny zwiększają wrażliwość tych szczepów na β-laktamy. Bakterie z rodzaju Mycobacterium tuberculosis odpowiedzialne za gruźlicę produkują aż pięć subtylizyno-podobnych serynowych proteaz, mycosyny 1-5.
Sposób wytwarzania podstawionych diestrów arylowych kwasów 1-aminoalkanofosfonowych i ich peptydowych pochodnych o wzorze ogólnym 1, polega na tym, że w pierwszym etapie na drodze syntezy z fenolu zawierającego jeden z podstawników: 4-S-metylowy, 3,4,5-trietylowy, 4-metylowy, 3-metoksylowy, 4-etylowy, 4-metoksylowy, 2,3-dimetylowy bądź 2-naftol w acetonitrylu bądź benzenie i w obecności chlorku fosforu (III) w temperaturze wrzenia rozpuszczalnika otrzymuje się fosforyn trifenylowy zawierający jeden z podstawników w każdym pierścieniu aromatycznym: 4-S-metylowy, 3,4,5-trietylowy, 4-metylowy, 3-metoksylowy, 4-etylowy, 4-metoksylowy, 2,3-dimetylowy bądź fosforyn tri(2-naftylowy). Następnie otrzymany fosforyn triarylowy poddaje się reakcji amidoalkilowania z karbaminianem benzylu, aldehydem izowalerianowym bądź aldehydem fenylooctowym w lodowatym kwasie octowym w temperaturze 90°C i w otrzymanym w wyniku przeprowadzonej reakcji diarylowym estrze N-benzyloksykarbonylowym kwasu 1-aminofosfonowego odblokowuje się grupę aminową przy użyciu roztworu kwasu bromowodorowego (33%) w kwasie octowym, a następnie sprzęga go z proliną zawierającą zablokowaną N-końcową grupą aminową przez grupę tert-butoksykarbonylową (t-Boc), przy użyciu heksafluorofosforanu O-benzotriazoI-1-ylo-N,N,N,N-tetra-metylo-uroniowego (HBTU), trójetyloaminy i acetonitrylu jako rozpuszczalnika, a po reakcji sprzęgania w temperaturze pokojowej, mieszaninę poreakcyjną zalewa się solanką, ekstrahuje octanem etylu i przemywa się kolejno siarczanem potasu (5%), solanką, wodorowęglanem sodu (5%) i solanką. Przy czym w celu syntezy pochodnych tripeptydowych w otrzymanych fosfonowych dipeptydach, zawierających N-końcową resztę N-Boc-proliny oraz jeden z podstawników w każdym estrowym pierścieniu aromatycznym pochodnej kwasu 1-aminoalkanofosfonowego, z grupy: 4-S-metylowy, 3,4,5-trietylowy, 4-metylowy, 3-metoksylowy, 4-etylowy, 4-metoksylowy, 2,3-dimetylowy bądź estry naftyIowe, usuwa się grupę N-Boc, przy użyciu roztworu kwasu trófluorooctowego (TFA) i dichlorometanu po prowadzonej w temperaturze pokojowej reakcji sprzęgania, mieszaninę poreakcyjną zalewa się solanką, ekstrahuje dwukrotnie octanem etylu i przemywa kolejno siarczanem potasu (5%), solanką, wodorowęglanem sodu (5%) i solanką.
PL 215 832 B1
Zgodnie wynalazkiem w przypadku wytwarzania estrów difenylowych kwasów 1-aminoalkanofosfonowych z nowymi podstawnikami przy aromatycznych pierścieniach fenylowych, prowadzi się reakcję syntezy fosforynu triarylowego z karbaminianem benzylu, aldehydem fenylooctowym bądź izowalerianowym w kwasie octowym. Reakcje prowadzi się w temperaturze 90°C.
W przypadku wytwarzania dipeptydowych pochodnych diestrów arylowych kwasów 1-aminoalkanofosfonowych stosuje się bromowodorki estrów difenylowych pochodnych kwasów 1-aminoalkanofosfonowych jako substraty reakcji, które uzyskuje się uprzednio w reakcji syntezy estrów difenylowych pochodnych kwasów 1-aminoalkanofosfonowych z roztworem kwasu bromowodorowego (33%) w kwasie octowym w temperaturze pokojowej. Następnie przeprowadza się reakcję sprzęgania bromowodorków estrów difenylowych pochodnych kwasów 1-aminoalkanofosfonowych z proliną z zablokowaną N-końcową grupą aminową przez grupę tert-butoksykarbonylową (t-Boc), przy użyciu heksafluorofosforanu O-benzotriazol-1-ylo-W,W,W',W-tetrametylouroniowego (HBTU), trójetyloaminy i acetonitrylu jako rozpuszczalnika. Reakcje sprzęgania przeprowadza się w temperaturze pokojowej. Następnie mieszaninę poreakcyjną zalewa się solanką, ekstrahuje dwukrotnie octanem etylu i przemywa się kolejno dwukrotnie siarczanem potasu (5%), solanką, dwukrotnie wodorowęglanem sodu (5%) i solanką. Do warstwy octanowej dodaje się siarczanu magnezu i powstały produkt oczyszcza się metodą chromatografii kolumnowej. W efekcie otrzymuje się odpowiednie dipeptydy, zawierające w swej strukturze resztę estru difenylowego fosfonowego analogu leucyny lub fenyloalaniny, z zablokowaną grupą a-aminową.
W przypadku wytwarzania pochodnych tripeptydowych estrów difenylowych kwasów 1-aminoalkanofosfonowych stosuje się dipeptydowe pochodne diestrów arylowych kwasów 1-aminoalkanofosfonowych jako substraty reakcji. Następnie usuwa się z pochodnych dipeptydowych grupę blokującą tert-butoksykarbonylową (t-Boc), przy użyciu roztworu kwasu trójfluorooctowego (TFA) i dichlorometanu (CH2CI2) w stosunku objętościowym 1:1 i prowadzi się reakcję addycji kolejnego aminokwasu -waliny z zablokowaną grupą α-aminową przy użyciu odczynnika sprzęgającego heksafluorofosforanu O-benzotriazol-1-ylo-N,N,N',N'-tetrametylo-uroniowego (HBTU), trójetyloaminy i acetonitrylu jako rozpuszczalnika. Reakcje sprzęgania przeprowadza się w temperaturze pokojowej. Następnie mieszaninę poreakcyjną zalewa się solanką, ekstrahuje dwukrotnie octanem etylu i przemywa kolejno dwukrotnie siarczanem potasu (5%), solanką, dwukrotnie wodorowęglanem sodu (5%) i solanką. Do warstwy octanowej dodaje się siarczanu magnezu i powstały produkt oczyszcza się metodą chromatografii kolumnowej.
Nowe związki są mieszaninami racemicznymi w przypadku prostych analogów fosfonowych fenyloalaniny i leucyny oraz mieszaninami diastereoizomerów w przypadku pochodnych di- i tri-peptydowych.
Zasadnicze korzyści wynikające z wynalazku polegają na otrzymaniu związków, które wykazują silną aktywność biologiczną hamującą aktywność chymotrypsyny takich jak ludzka sercowa chymaza, katepsyna G i subtylizyna. Niekontrolowana aktywność tych enzymów jest związana z stanami patologicznymi prowadzącymi do chorób. Dla przykładu aktywność chymotrypsyny w przewodzie trawiennym ludzi prowadzi do szybkiej inaktywacji guanyliny. Guanylina jest jelitowym peptydem produkowanym jako 115 aminokwasów proproteina. Wiąże się ona z transmembranowym receptorem aktywującym cyklazę guanylową. Receptor ten obecny jest w membranie enterocytów jelitowych. Aktywacja receptora prowadzi do wzrostu stężenia c-GMP. Wzrost stężenia c-GMP powoduje zmniejszenie absorpcji wody i wzrost wydzielania jonów chlorkowych i potasowych prowadząc do zmian w transporcie płynów i elektrolitów jelitowych oraz skutkuje normalizacją pracy jelit.
Aktywna forma guanyliny składająca się tylko z 15 aminokwasów, stymuluje uwalnianie jonów chlorkowych i jest szybko hydrolizowana w przewodzie pokarmowym przez znajdującą się tam chymotrypsynę. Inhibitory chymotrypsyny zapobiegając hydrolizie aktywnej guanyliny wydłużają i poprawiają jej działanie, prowadząc do efektów terapeutycznych w szeregu schorzeń jelitowych.
Inhibitory chymazy z ludzkiego serca mają własności protekcyjne dla ludzkiego serca i mogą być używane jako leki przy całym szeregu komplikacji kardiologicznych np. przy arteriosklerozie, po ataku serca lub operacjach serca. Nowe związki będące przedmiotem wynalazku charakteryzują się znacznie lepszą efektywnością w inhibitowaniu chymotrypsyny, dlatego mogą znaleźć zastosowanie terapeutyczne w chorobach sercowych, komplikacjach układu trawiennego i jako nowe substancje antybakteryjne. Stwierdzono, że z enzymami reaguje tylko jedna forma optyczna - ta, która opowiada izomerowi L-fenyloalaniny czy L-leucyny. Nowe związki można z łatwością rozdzielić na enancjomery lub diastereoizomery jedną z dobrze znanych metod: na przykład przy zastosowaniu HPLC,
PL 215 832 B1 wysokociśnieniowej chromatografii cieczowej i korzystnie stosować tylko jeden, reaktywny izomer optyczny.
Przedmiot wynalazku jest przedstawiony w przykładach otrzymywania wybranych estrów difenylowych kwasów 1-aminoalkanofosfonowych z nowymi podstawnikami przy aromatycznych pierścieniach fenolowych, bez ograniczania jego zakresu.
P r z y k ł a d I
Wytwarzanie estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)izobutylometanofosfonowego, przedstawionego wzorem 2, prowadzi się w dwóch etapach.
Etap 1. Otrzymywanie fosforynu trój-4-metylomerkaptofenylowego.
W tym celu do kolby okrągłodennej dodaje się 4,20 g (30 mmola) 4-metylomerkaptofenolu i rozpuszcza w 100 ml benzenu. Do powstałego, lekko różowego roztworu dodaje się 4,15 ml (30 mmola) trójetyloaminy (Et3N) i mieszając wkrapla 0,87 ml (10 mmola) chlorku fosforu (III). Początkowo reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej. Jednakże, gdy roztwór zaczyna się samoistnie ogrzewać chłodzi się go wodą z lodem. Powstałą galaretowatą zawiesinę miesza się przez 12 godzin w temperaturze pokojowej. Następnie całość ekstrahuje się czterokrotnie wodą i suszy z 3 g siarczanu sodu (Na2SO4). Lotne rozpuszczalniki odparowuje się na wyparce rotacyjnej i otrzymuje mleczny olej, który wykorzystuje się bezpośrednio (bez oczyszczania) do reakcji syntezy estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu N-(benzyloksy-karbonylamino)-izobutylo-metano-fosfonowego.
Etap 2. Otrzymywanie estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu N-(henzyloksy-karbonylamino)-izobutylo-metanofosfonowego.
Do kolby okrągłodennej - wyposażonej w mieszadło magnetyczne, wprowadza się fosforyn trój-4-metylomerkapto-fenylowy powstały bezpośrednio w etapie 1 i dodaje 1,34 g (8,8 mmola) karbaminianu benzylu i 1 ml (9,2 mmola) aldehydu izowalerianowego. Po rozpuszczeniu wszystkich składników w 20 ml lodowatego kwasu octowego całość ogrzewa się pod chłodnicą zwrotną w temperaturze 90°C przez 4,5 godziny. Następnie pod zmniejszonym ciśnieniem z lekko zielonego roztworu usuwa się lotne składniki mieszaniny na wyparce rotacyjnej a pozostałość rozpuszcza się w 200 ml metanolu i umieszcza w temperaturze -20°C na 12 godzin w celu krystalizacji produktu. Uzyskany produkt przesącza się pod zmniejszonym ciśnieniem, przemywa metanolem i suszy na powietrzu do stałej wagi. Uzyskuje się 1,6 g (38% wagowo) śnieżnobiałego produktu w postaci estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu N-(benzyloksy-karbonylamino)-izobutylo-metano-fosfonowego, przedstawionego 31 wzorem 2. Wzór sumaryczny: C27H32O5S2NP. Masa cząsteczkowa: 545,645g/mol. Widmo 31P NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 20.37(s). Widmo 1HNMR (roztwór W CDCl3, δ [ppm]): 0,98 (d, J=5,79 Hz,
6H, 2xCH3), 1,61-2,16 (m, 3H, CH2, CH), 2,47 (s, 6H, 2xCH3), 4,61 (m, 1H, CHP), 5,18 (s, 1H, NH), 5,06 (m, 2H, ArCH2O), 6,9-7,3 (m, 13H, aromat.). Temperatura topnienia: 126°C.
P r z y k ł a d II
Sposób wytwarzania estru di-3,4,5-trimetylofenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)-izobutylo-metanofosfonowego przedstawionego wzorem 3.
Etap 1. Otrzymywanie fosforynu trój-3,4,5-trimetylofenylowego.
W tym celu do kolby okrągłodennej wyposażonej w mieszadło magnetyczne dodaje się 11,3 g (76 mmol) 3,4,5-trimetylofenolu i 20 ml acetonitrylu. Po rozpuszczeniu całość ogrzewa się pod chłodnicą zwrotną w temperaturze 90°C przez 10 minut. Następnie do mieszaniny reakcyjnej dodaje się
2,36 ml (25 mmol) chlorku fosforu (III). Całość ogrzewa się przez dwie godziny w temperaturze wrzenia. Następnie pod zmniejszonym ciśnieniem usuwa się lotne składniki mieszaniny na wyparce obrotowej. Powstały surowy produkt w postaci oleju wykorzystuje się bezpośrednio, bez oczyszczania do reakcji syntezy estru di-3,4,5-trimetylofenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)-izobutylometano-fosfonowego.
Etap 2. Otrzymywanie estru di-3,4,5-trimetylofenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)izobutylo-metanofosfonowego.
Do kolby okrągłodennej - zawierającej fosforyn trój-3,4,5-trimetylofenylowy powstały bezpośrednio w etapie 1 - wyposażonej w mieszadło magnetyczne wprowadza się 3,88 g (25 mmol) karbaminianu benzylu i 2,64 ml (25 mmol) aldehydu izowalerianowego. Po rozpuszczeniu wszystkich składników w 30 ml lodowatego kwasu octowego całość ogrzewa się pod chłodnicą zwrotną w temperaturze 90°C przez 2 godziny. Następnie pod zmniejszonym ciśnieniem usuwa się lotne składniki mieszaniny na wyparce rotacyjnej a pozostałość rozpuszcza w 250 ml metanolu i umieszcza w temperaturze -20°C na 15 godzin w celu krystalizacji produktu.
PL 215 832 B1
Uzyskany produkt odsącza się pod zmniejszonym ciśnieniem i suszy na wolnym powietrzu. Uzyskuje się 5,72g (51% wagowo) surowego estru di-3,4,5-trimetylofenylowego kwasu N-(benzyloksy-karbonylamino)-izobutylo-metanofosfonowego, przedstawionego wzorem 3 w postaci białego osadu.
Od
Wzór sumaryczny: C31H38O5NP. Masa cząsteczkowa: 537,633 g/mol. Widmo 31P NMR (roztwór w CDCI3, 5[ppm]): 18,75 (s). Widmo 1H NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 0,99 (d, J=5,52 Hz, 6H, 2xCH3), 1,83 (m, 3H, CH2, CH), 2,41 (d, J=13,92 Hz, 18H, 6xCH3), 4,58 (m, 1H, CHP), 5,11 (s, 1H, NH), 5,03 (m, 2H, ArCH2O), 6,50-7,37 (m, 9H, aromat.). Temperatura topnienia: 111°C.
P r z y k ł a d III
Sposób wytwarzania estru di-4-metylofenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)-izobutylo-metanofosfonowego przedstawionego wzorem 4.
Etap 1. Otrzymywanie fosforynu trój-4-metylofenylowego.
W tym celu do kolby okrągłodennej wyposażonej w mieszadło magnetyczne dodaje się 8,97 g (83 mmol) 4-metylofenolu i 20 ml acetonitrylu. Po rozpuszczeniu całość ogrzewa się pod chłodnicą zwrotną w temperaturze 80°C przez 10 minut. Następnie do mieszaniny reakcyjnej dodaje się 2,55 ml (28 mmol) chlorku fosforu (III). Całość ogrzewa się przez dwie godziny w temperaturze wrzenia. Następnie pod zmniejszonym ciśnieniem usuwa się lotne składniki mieszaniny na wyparce obrotowej. Powstały surowy produkt w postaci oleju wykorzystuje się bezpośrednio, bez oczyszczania do reakcji syntezy estru di-4-metylofenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)-izobutylo-metanofosfonowego.
Etap 2. Otrzymywanie estru di-4-metylofenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)-izobutylo-metanofosfonowego.
Do kolby okrągłodennej - zawierającej fosforyn trój-4-metylofenylowy powstały bezpośrednio w etapie 1 - wyposażonej w mieszadło magnetyczne wprowadza się 4,23 g (28 mmol) karbaminianu benzylu i 2,92 ml (28 mmol) aldehydu izowalerianowego. Po rozpuszczeniu wszystkich składników w 30 ml lodowatego kwasu octowego całość ogrzewa się pod chłodnicą zwrotną w temperaturze 90°C przez 2,5 godziny. Następnie pod zmniejszonym ciśnieniem usuwa się lotne składniki mieszaniny na wyparce rotacyjnej a pozostałość rozpuszcza w 200 ml metanolu i całość umieszcza w temperaturze 20°C na 12 godzin w celu krystalizacji produktu. Uzyskany produkt przesącza się i suszy na powietrzu do stałej wagi. Uzyskuje się 3,43 g (38% wagowo) surowego estru di-4-metylofenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)-izobutylo-metanofosfonowego przedstawionego wzorem 4 w postaci białego proszku. Wzór sumaryczny: C27H32O5NP. Masa cząsteczkowa: 467,50 g/mol. Widmo 31P NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 18,82 (s). Widmo 1H NMR (roztwór w CDCl3, δ [ppm]): (d, J=5,86 Hz, 6H, 2xCH3), 1,77 (m, 3H, CH2, CH), 2,31 (t, J=19,79 Hz, 6H, 2xCH3), 4,61 (m, 1H, CHP), 5,11 (s, 1H, NH), 5,14 (m, 1H, 2H, ArCH2O), 6,96-7,35 (m, 13H, aromat.). Temperatura topnienia: 118°C.
P r z y k ł a d IV
Sposób wytwarzania estru di-3-metoksyfenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)-izobutylo-metanofosfonowego przedstawionego wzorem 5.
Etap 1. Otrzymywanie fosforynu trój-3-metoksyfenylowego.
W tym celu do kolby okrągłodennej wyposażonej w mieszadło magnetyczne dodaje się 7,5 g (60 mmola) 3-metoksyfenolu i 20 ml acetonitrylu. Po rozpuszczeniu całość ogrzewa się pod chłodnicą zwrotną w temperaturze 90°C przez 10 minut. Następnie do mieszaniny reakcyjnej dodaje się 1,8 ml (20 mmola) chlorku fosforu (III). Całość ogrzewa się przez dwie godziny w temperaturze wrzenia. Następnie pod zmniejszonym ciśnieniem usuwa się lotne składniki mieszaniny na wyparce obrotowej. Powstały surowy produkt w postaci oleju wykorzystuje się bezpośrednio, bez oczyszczania do reakcji syntezy estru di-3-metoksyfenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)-izobutylo-metano-fosfonowego.
Etap 2. Otrzymywanie estru di-3-metoksyfenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)-izobutylo-metanofosfonowego.
Do kolby okrągłodennej - zawierającej fosforyn trój-3-metoksyfenylowy powstały bezpośrednio w etapie 1 - wyposażonej w mieszadło magnetyczne wprowadza się 3,05 g (20 mmola) karbaminianu benzylu i 2,3 ml (21 mmola) aldehydu izowalerianowego. Po rozpuszczeniu wszystkich składników w 30 ml lodowatego kwasu octowego całość ogrzewa się pod chłodnicą zwrotną w temperaturze 90°C przez 3 godziny. Następnie pod zmniejszonym ciśnieniem usuwa się lotne składniki mieszaniny na wyparce rotacyjnej a pozostałość rozpuszcza w 200 ml metanolu i umieszcza w temperaturze -20°C na 24 godziny w celu krystalizacji produktu. Uzyskany produkt odsącza się pod zmniejszonym ciśnieniem i suszy na powietrzu. Uzyskuje się 2,31 g (31% wagowo) surowego estru di-3-metoksyfenylowego kwasu N-(benzyloksy-karbonylamino)-izobutylo-metanofosfonowego przed6
PL 215 832 B1 stawionego wzorem 5, w postaci białego osadu. Wzór sumaryczny: C27H32O7NP. Masa cząsteczkowa: 513,525 g/mol. Widmo 31P NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 18,76 (s). Widmo 1H NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 0,98 (d, 1=5,68 Hz, 6H, 2xCH), 1,69-2,3 (m, 3H, CH2, CH), 3,80 (dd, 1=16,06/11,17 Hz, 6H, 2xCH3), 4,65 (m, 1H, CHP), 5,19 (s, 1H, NH), 5,13 (m, 2H, ArCH2O), 6,4-7,33 (m, 13H, aromat.). Temp. topnienia: 59°C.
P r z y k ł a d V
Sposób wytwarzania estru di-4-etylofenylowego kwasu N-(benzyloksy-karbonylamino)-benzyloetanofosfonowego przedstawionego wzorem 6.
Etap 1. Otrzymywanie fosforynu trój-4-etylofenylowego.
W tym celu do kolby okrągłodennej wyposażonej w mieszadło magnetyczne dodaje się 10,2 g (83 mmola) 4-etylofenolu i 20 ml acetonitrylu. Po rozpuszczeniu całość ogrzewa się pod chłodnicą zwrotną w temperaturze 90°C przez 10 minut. Następnie do mieszaniny reakcyjnej dodaje się 2,55 ml (28 mmola) chlorku fosforu (III). Całość ogrzewa się przez dwie godziny w temperaturze wrzenia. Następnie pod zmniejszonym ciśnieniem usuwa się lotne składniki mieszaniny na wyparce obrotowej. Powstały surowy produkt w postaci oleju wykorzystuje się bezpośrednio, bez oczyszczania do reakcji syntezy estru di-4-etylofenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)-benzylo-etanofosfonowego.
Etap 2. Otrzymywanie estru di-4-etylofenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)-benzyloetanofosfonowego.
Do kolby okrągłodennej - zawierającej fosforyn trój-4-etylofenylowy powstały bezpośrednio w etapie 1 - wyposażonej w mieszadło magnetyczne odważa się 4,23 g (28 mmola) karbaminianu benzylu i 3,12 ml (28 mmola) aldehydu fenylooctowego. Po rozpuszczeniu wszystkich składników w 20-30 ml lodowatego kwasu octowego całość ogrzewa się pod chłodnicą zwrotną w temperaturze 90°C przez 4 godziny. Następnie pod zmniejszonym ciśnieniem usuwa się lotne składniki mieszaniny na wyparce rotacyjnej a pozostałość rozpuszcza w około 200 ml metanolu i umieszcza się w temperaturze -20°C na 12 godzin w celu krystalizacji produktu. Uzyskany produkt odsącza się pod zmniejszonym ciśnieniem i suszy na powietrzu do stałej wagi. Uzyskuje się 4,79 g (47% wagowo) surowego estru di-4-etylofenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)-benzylo-etanofosfonowego, przedstawionego wzorem 6 w postaci białego osadu. Wzór sumaryczny: C24H29O5NP. Masa cząsteczkowa: 543,596. Widmo 31P NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 17,58 (s). Widmo 1H NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 1,18 (m, 6H, 2 x CH3), 1,32 (m, 4H, 2 xCH2,), 2,8-3,3 (m, 2H, CH2), 4,7 (dd, 1=4,44 Hz, 1=4,53 Hz, 1H, CHP), 5,14 (d, 1=10,2 Hz, 1H, NH), 4,92 (s, 2H, ArCH2O), 6,91-7,23 (m, 18H, aromat.). Temperatura topnienia: 112°C.
P r z y k ł a d VI
Sposób wytwarzania estru di-4-metoksyfenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)-benzylo-etanofosfonowego przedstawionego wzorem 7.
Etap 1. Otrzymywanie fosforynu trój-4-metoksyfenylowego.
W tym celu do kolby okrągłodennej wyposażonej w mieszadło magnetyczne dodaje się 10,3 g (83 mmola) 4-metoksyfenolu i 30 ml acetonitrylu. Po rozpuszczeniu całość ogrzewa się pod chłodnicą zwrotną w temperaturze 80-90°C przez 2 minuty. Następnie do mieszaniny reakcyjnej dodaje się
2,55 ml (28 mmola) chlorku fosforu (III). Całość ogrzewa się przez dwie godziny w temperaturze wrzenia. Następnie pod zmniejszonym ciśnieniem usuwa się lotne rozpuszczalniki mieszaniny na wyparce obrotowej. Powstały surowy produkt w postaci oleju wykorzystuje się bezpośrednio, bez oczyszczania do reakcji syntezy estru di-4-etylofenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)benzylo-etanofosfonowego.
Etap 2. Otrzymywanie estru di-4-metoksyfenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)benzylo-etanofosfonowego.
Do kolby okrągłodennej - zawierającej fosforyn trój-4-metoksyfenylowy powstały bezpośrednio w etapie 1 - wyposażonej w mieszadło magnetyczne wprowadza się 4,23 g (28 mmola) karbaminianu benzylu i 3,12 ml (28 mmola) aldehydu fenylooctowego. Po rozpuszczeniu wszystkich składników w 30 ml lodowatego kwasu octowego całość ogrzewa się pod chłodnicą zwrotną w temperaturze 80-90°C przez 5 godzin. Następnie pod zmniejszonym ciśnieniem usuwa się lotne składniki mieszaniny na wyparce rotacyjnej a pozostałość rozpuszcza się w 150 ml metanolu i całość umieszcza w temperaturze -20°C na 24 godziny w celu krystalizacji produktu. Uzyskany produkt odsącza się pod zmniejszonym ciśnieniem i suszy na powietrzu. Uzyskuje się 0,91 g (8,8% wagowo) surowego estru di-4-metoksyfenylowego kwasu N-(benzyloksy-karbonylamino)-benzylo-etanofosfonowego przedstaPL 215 832 B1 wionego wzorem 7 w postaci białego osadu. Wzór sumaryczny: C23H27O6NP. Masa cząsteczkowa:
547,541. Widmo 31P NMR (roztwór w CDCl3, δ [ppm]): 18,11 (s). Widmo 1H NMR (roztwór w CDCl3, δ [ppm]): 2,09 (s, 3H, CH3), 3,30 (m, 2H, CH2), 3,69 (d, J=8,24 Hz, 6H, 2xCH3), 4,70 (m, 1H, CHP), 5,12 (d, J=10,57 Hz, 1H, NH), 4,92 (s, 2H, ArCH2O), 6,65-7,23 (m, 18H, aromat.). Temperatura topnienia: 99-102°C.
P r z y k ł a d VII
Sposób wytwarzania estru di-2,3-dimetylofenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)-benzylo-etanofosfonowego przedstawionego wzorem 8.
Etap 1. Otrzymywanie fosforynu trój-2,3-dimetylofenylowego.
W tym celu do kolby okrągłodennej wyposażonej w mieszadło magnetyczne dodaje się 10,26 g (83 mmola) 2,3-dimetylofenolu i 20 ml acetonitrylu. Po rozpuszczeniu całość ogrzewa się pod chłodnicą zwrotną w temperaturze 80-90°C przez 2 minuty. Następnie do mieszaniny reakcyjnej dodaje się
2,55 ml (28 mmola) chlorku fosforu (III). Całość ogrzewa się przez dwie godziny w temperaturze wrzenia. Następnie pod zmniejszonym ciśnieniem usuwa się lotne składniki mieszaniny na wyparce obrotowej. Powstały surowy produkt w postaci oleju wykorzystuje się bezpośrednio, bez oczyszczania do reakcji syntezy estru di-2,3-dimetylofenylowego kwasu N-(benzyloksy-karbonylamino)-benzylo-etanofosfonowego.
Etap 2. Otrzymywanie estru di-2,3-dimetylofenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)benzylo-etanofosfonowego.
Do kolby okrągłodennej - zawierającej fosforyn trój-2,3-metylofenylowy powstały bezpośrednio w etapie 1 - wyposażonej w mieszadło magnetyczne wprowadza się 4,23 g (28 mmola) karbaminianu benzylu i 3,12 ml (28 mmola) aldehydu fenylooctowego. Po rozpuszczeniu wszystkich składników w 30 ml lodowatego kwasu octowego całość ogrzewa się pod chłodnicą zwrotną w temperaturze 80-90°C przez 5 godzin. Następnie pod zmniejszonym ciśnieniem usuwa się lotne składniki mieszaniny na wyparce rotacyjnej a pozostałość rozpuszcza się w 200 ml metanolu i całość umieszcza się w temperaturze -20°C na 24 godziny w celu krystalizacji produktu. Uzyskany produkt odsącza się pod zmniejszonym ciśnieniem i suszy na powietrzu. Uzyskuje się 3,64 g produktu. Z uzyskanego przesączu odparowuje się metanol na wyparce rotacyjnej. Powstały olej ponownie rozpuszcza się w metanolu i pozostawia do rekrystalizacji. Wówczas otrzymuje się osad o masie 0,44 g. Po połączeniu produktów otrzymuje się 4,08 g (40% wagowo) estru di-2,3-dimetylofenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)-benzylo-etanofosfonowego, przedstawionego wzorem 8, w postaci białego osadu. Wzór sumaryczny: C24H29O5NP. Masa cząsteczkowa: 549,982 g/mol. Widmo 31P NMR (roztwór w CDCl3, δ [ppm]): 17,08 (s). Widmo 1H NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 2,17 (m, 12H, 4xCH3), 2,9-3,4 (m, 2H, CH2), 4,8 (m, 1H, CHP), 5,15 (d, J=20,42 Hz, 1H, NH), 4,90 (m, 2H, ArCH2O), 6,86-7,28 (m, 16H, aromat.). Temperatura topnienia: 103°C.
P r z y k ł a d VIlI
Sposób wytwarzania estru di-2-naftalenowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)-benzyloetanofosfonowego przedstawionego wzorem 9.
Etap 1. Otrzymywanie fosforynu trój-2-naftalenowego.
W tym celu do kolby okrągłodennej wyposażonej w mieszadło magnetyczne dodaje się 12 g (83 mmola) 2-naftolu i 20 ml acetonitrylu. Po rozpuszczeniu całość ogrzewa się pod chłodnicą zwrotną w temperaturze 80-90°C przez 3 minuty. Następnie do mieszaniny reakcyjnej dodaje się
2,55 ml (28 mmola) chlorku fosforu (III). Całość ogrzewa się przez dwie godziny w temperaturze wrzenia. Następnie pod zmniejszonym ciśnieniem usuwa się lotne składniki mieszaniny na wyparce obrotowej. Powstały surowy produkt w postaci oleju wykorzystuje się bezpośrednio, bez oczyszczania do reakcji syntezy estru di-2-naftalenowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)benzylo-etanofosfonowego.
Etap 2. Otrzymywanie estru di-2-naftalenowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)-benzyloetanofosfonowego.
Do kolby okrągłodennej - zawierającej fosforyn trój-2-naftalenowy powstały bezpośrednio w etapie 1 - wyposażonej w mieszadło magnetyczne wprowadza się 4,23 g (28 mmola) karbaminianu benzylu i 3,12 ml (28 mmola) aldehydu fenylooctowego. Po rozpuszczeniu wszystkich składników w 20-30 ml lodowatego kwasu octowego całość ogrzewa się pod chłodnicą zwrotną w temperaturze 80-90°C przez 4,5 godziny. Następnie pod zmniejszonym ciśnieniem usuwa się lotne składniki mieszaniny na wyparce rotacyjnej a pozostałość rozpuszcza się w 200-250 ml metanolu i prowadzi krystalizację produktu w temperaturze -20°C przez 24 godziny. Uzyskany produkt odsącza się pod
PL 215 832 B1 zmniejszonym ciśnieniem i suszy na powietrzu. W celu rekrystalizacji produkt rozpuszcza się w minimalnej ilości chloroformu na gorąco, po czym zalewa metanolem (około 200 ml) i ponownie krystalizuje w temperaturze - 20°C. Produkt sączy się i suszy na powietrzu do stałej wagi. Uzyskuje się 0,63 g (5,2% wagowo) surowego estru di-2-naftalenowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)benzyloetanofosfonowego przedstawionego wzorem 9, w postaci białego osadu. Wzór sumaryczny: C36H30O5NP. Masa cząsteczkowa: 587,608 g/mol. Widmo 31P NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 17.77 (s). Widmo 1H NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 2,98-3,82 (m, 2H, CH2), 4,79 (m, 1H, CHP), 5,18 (d, J=10,16 Hz, 1H, NH), 4,94 (m, 2H, ArCH2O), 6,91-7,73 (m, 24H, aromat). Temperatura topnienia: 122°C.
P r z y k ł a d IX
Sposób wytwarzania estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)benzylo-etanofosfonowego przedstawionego wzorem 10.
Etap 1. Otrzymywanie fosforynu trój-4-metylomerkaptofenylowego.
W tym celu do kolby okrągłodennej wprowadza się 1,8 g (13 mmola) 4-metylo-merkaptofenolu i rozpuszcza w 100 ml benzenu. Do powstałego roztworu dodaje się 1,8 ml (13 mmola) trójetyloaminy (Et3N) i mieszając wkrapla 0,38 ml (4,5 mmola) chlorku fosforu (III). Początkowo reakcje prowadzi się w temperaturze pokojowej. Jednakże, gdy roztwór zaczyna się samoistnie ogrzewać chłodzi się go wodą z lodem. Powstałą galaretowatą zawiesinę miesza się przez 12 godzin w temperaturze pokojowej. Następnie całość ekstrahuje się czterokrotnie wodą i suszy z 3 g siarczanu sodu (Na2SO4). Lotne rozpuszczalniki odparowuje się na wyparce rotacyjnej i otrzymuje się olej, który wykorzystuje się bezpośrednio (bez oczyszczania) do reakcji syntezy estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu N-(benzyloksy-karbonyl-amino)-benzylo-etanofosfonowego.
Etap 2. Otrzymywanie estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu N-(benzyloksy-karbonylamino)-benzylo-etanofosfonowego.
Do kolby okrągłodennej - zawierającej fosforyn trój-4-metylomerkaptofenyIowy powstały bezpośrednio w etapie 1 - wyposażonej w mieszadło magnetyczne odważa się 0,67 g (4,5 mmola) karbaminianu benzylu i 0,58 ml (4,5 mmola) aldehydu fenylooctowego. Po rozpuszczeniu wszystkich składników w 30 ml lodowatego kwasu octowego całość ogrzewa się pod chłodnicą zwrotną w temperaturze 80-90°C przez 4 godziny. Po przeprowadzeniu reakcji z jasnożółtego roztworu powstaje ciemnopomarańczowy olej. Następnie pod zmniejszonym ciśnieniem usuwa się lotne składniki mieszaniny na wyparce rotacyjnej a pozostałość rozpuszcza w około 200 ml metanolu i umieszcza w temperaturze -20°C na 24 godziny w celu krystalizacji produktu. Produkt przesącza się i suszy na powietrzu do stałej wagi. Uzyskuje się 0,72 g (40% wagowo) surowego estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)-benzylo-etanofosfonowego, przedstawionego wzorem 10, w postaci białego osadu. Wzór sumaryczny: C30H30O5S2NP. Masa cząsteczkowa: 564,623. Widmo 31P NMR (roztwór w CDCl3, δ [ppm]): 18,98 (s). Widmo 1H NMR (roztwór w CDCl3, δ [ppm]): 2,40 ( d, J=6,52 Hz, 6H, 2xCH3), 2,9-3,36 (m, 2H, CH2), 4,7 (m, 1H, CHP), 4,93 (s, 2H, CH2O), 5,07 (s, 1H, NH), 6,69-7,28 (m, 18H, aromat). Temperatura topnienia: 97-99°C.
P r z y k ł a d X
Sposób wytwarzania dipeptydowej pochodnej estru di-4-metoksyfenylowego kwasu N-(Bocproliloamino)-izobutylo-metanofosfonowego: Boc-Pro-Leup(-O-C6H4-4-O-CH3)2) przedstawionego wzorem 11.
Etap 1. Otrzymywanie fosforynu trój-4-metoksyfenylowego.
W tym celu do kolby okrągłodennej wyposażonej w mieszadło magnetyczne dodaje się 10,3 g (83 mmola) 4-metoksyfenolu i 30 ml acetonitrylu. Po rozpuszczeniu całość ogrzewa się pod chłodnicą zwrotną w temperaturze 90°C przez 2 minuty. Następnie do mieszaniny reakcyjnej dodaje się 2,55 ml (28 mmola) chlorku fosforu (III). Całość ogrzewa się przez trzy godziny w temperaturze wrzenia. Następnie pod zmniejszonym ciśnieniem usuwa się lotne składniki mieszaniny na wyparce obrotowej. Powstały surowy produkt w postaci zielonego oleju wykorzystuje się bezpośrednio, bez oczyszczania do reakcji syntezy estru di-4-metoksyfenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)-izobutylometanofosfonowego.
Etap 2. Otrzymywanie estru di-4-metoksyfenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)-izobutylo-metanofosfonowego.
Do kolby okrągłodennej - zawierającej fosforyn trój-4-metoksyfenylowy powstały bezpośrednio w etapie 1 - wyposażonej w mieszadło magnetyczne wprowadza się 4,3 g (28 mmola) karbaminianu benzylu i 2,9 ml (28 mmola) aldehydu izowalerianowego. Po rozpuszczeniu wszystkich
PL 215 832 B1 składników w 30 ml lodowatego kwasu octowego całość ogrzewa się pod chłodnicą zwrotną w temperaturze 90°C przez 4 godziny. Następnie pod zmniejszonym ciśnieniem usuwa się lotne składniki mieszaniny na wyparce rotacyjnej a pozostałość rozpuszcza się w 200-250 ml metanolu i umieszcza w temperaturze -20°C na 24 godziny w celu krystalizacji produktu. Uzyskany produkt odsącza się pod zmniejszonym ciśnieniem i suszy na powietrzu. Uzyskuje się 7,9 g surowego produktu (77% wagowo) w postaci białego osadu. Wzór sumaryczny: C27H32O7NP. Masa cząsteczkowa: 513,525 g/mol. Widmo 31P NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 19,52 (s). Widmo 1H NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 0,88 (m, 6H, 2xCH3), 1,37 (s, 9H, 3xCH3), 1,65-1,90 (m, 6H, 3xCH2), 3,70 (m, 3H, CH2, CH), 4,40 (m, 1H, CHP), 4,9 (s, 1H, NH), 6,72-7,19 (m, 8H, aromat.). Temperatura topnienia: 116-118°C.
Etap 3. Otrzymywanie bromowodorku estru di-4-metoksyfenylowego kwasu N-amino-izobutylometanofosfonowego.
Do kolby okrągłodennej odważa się 2,04 g estru di-4-metoksyfenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)-izobutylo-metanofosfonowego (4 mmola) i dodaje się 5,08 ml roztworu kwasu bromowodorowego (33%) w kwasie octowym. Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 2 godziny. Następnie lotne składniki mieszaniny poreakcyjnej usuwa się na wyparce obrotowej a uzyskany olej rozpuszcza w minimalnej ilości metanolu i dodaje eteru dietylowego do pierwszego zmętnienia. Kolbę umieszcza się w temperaturze -20°C na 24 godziny w celu krystalizacji produktu, który odsącza się pod zmniejszonym ciśnieniem i suszy na wolnym powietrzu do stałej wagi. Otrzymuje się 2,02 g (99% wagowo) bromowodorku estru di-4-metoksyfenylowego kwasu N-amino-izobutylo-metanofosfo31 nowego. Wzór sumaryczny: C19H27O5NPBr. Masa cząsteczkowa: 460,302 g/mol. Widmo 31P NMR (roztwór w CDCl3, δ [ppm]): 13,70 (s). Widmo 1H NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 0,93 (m, 6H, 2xCH3), 1,9-2,2 (m, 3H, CH2, CH), 3,66 (d, J=3,47 Hz, 6H, 2xCH3), 4,01 (m, 1H, CHP), 6,62-7,37 (m, 8H, aromat), 8,97 (s, 3H, NH3+Br). Temperatura topnienia: 159°C.
Etap 4. Reakcja syntezy pochodnej dipeptydowej estru di-4-metoksyfenylowego kwasu N-(Bocproliloamino)-izobutylo-metanofosfonowego.
Do kolby okrągłodennej odważa się 1 g (2,2 mmola) bromowodorku estru di-4-metoksyfenylowego kwasu N-amino-izobutylo-metanofosfonowego i dodaje się 0,51 g Boc-Pro-OH (2,4 mmola). Całość zalewa się acetonitrylem (5-10 ml), i po 2 minutach dodaje się 0,75 ml trójetyloaminy (5,4 mmola). Po 10 minutach dodaje się 0,86 g (2,3 mmola) heksafluorofosforanu O-benzotriazol-1-yloN,N,N',N'-tetrametylouroniowego. Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 24 godziny. Następnie mieszaninę poreakcyjną zalewa się solanką, przenosi do rozdzielacza i ekstrahuje się dwukrotnie octanem etylu. Warstwę octanową przemywa się kolejno: dwukrotnie siarczanem potasu (5%), solanką, dwukrotnie wodo rowęglanem sodu (5%) i solanką. Frakcje octanowe suszy się w 3 g bezwodnego siarczanu magnezu. Odparowuje się lotne rozpuszczalniki, a następnie produkt oczyszcza się metodą chromatografii kolumnowej stosując jako eluent chloroform/octan etylu w stosunku objętościowym 4:1. Po zebraniu frakcji zawierających oczekiwany produkt lotne rozpuszczalniki odparowuje się na wyparce rotacyjnej. Następnie powstały produkt rozpuszcza się w dichlorometanie i odparowuje się do spienienia na wyparce rotacyjnej. Otrzymuje się dipeptydową pochodną estru di-4-metoksyfenylowego kwasu N-(Boc-proliloamino)-izobutylometanofosfonowego: BocPro-Leup(-O-C6H4-4-O-CH3)2) przedstawioną wzorem 11, o masie 0,9 g (90% wagowo). Wzór sumaryczny: C29H41O8N2P. Masa cząsteczkowa: 562,598 g/mol. Widmo 31P NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 19,57 (s). Widmo 1H NMR (roztwór w CDCl3, δ [ppm]): 0,88 (m, 6H, 2xCH3), 1,37 (s, 9H, 3xCH3), 1,65-1,90 (m, 6H, 3xCH2), 3,70 (m, 3H, CH2, CH), 4,40 (m, 1H, CHP), 4,9 (s, 1H, NH), 6,727,19 (m, 8H, aromat.). Temperatura topnienia: 96°C.
P r z y k ł a d XI
Sposób wytwarzania dipeptydowej pochodnej estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu N-(Boc-proliloamino)-benzylo-etanofosfonowego: Boc-Pro-Phep(OC6H4-4-SCH3)2 przedstawionego wzorem 12. Sposób wykonania syntezy fosforynu 4-metylomerkaptofenylowego i estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)-benzyloetanofosfonowego jest analogiczny do przykładu X (Etap I i etap II). Kolejnym etapem jest synteza bromowodorku estru 4-metylomerkaptofenylowego kwasu N-amino-benzylo-etanofosfonowego.
Etap 3. Otrzymywanie bromowodorku estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu N-aminobenzylo-etanofosfonowego.
Do kolby okrągłodennej wprowadza się 1,57 g (2,7 mmola) estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)-benzylo-etano-fosfonowego i dodaje się 8 ml roztworu
PL 215 832 B1 kwasu bromowodorowego (33%) w kwasie octowym. Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 3 godziny. Następnie lotne składniki mieszaniny poreakcyjnej usuwa się na wyparce obrotowej a uzyskany olej rozpuszcza się w eterze dietylowym do pierwszego zmętnienia. Kolbę umieszcza się w temperaturze -20°C na 24 godziny w celu krystalizacji produktu, który odsącza się pod zmniejszonym ciśnieniem i suszy na wolnym powietrzu do stałej wagi. Otrzymuje się 1,15 g białego proszku (73% wagowo) - bromowodorku estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu N-amino-benzyloetano31 fosfonowego. Wzór sumaryczny: C22H25O3S2NPBr. Masa cząsteczkowa: 526,441. Widmo 31P NMR (roztwór w CDCl3, δ [ppm]): 15,55 (s). Widmo 1H NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 2,35 (d, J=7,36 Hz, 6H, 2xCH3), 3,23 (m, 2H, CH2), 4,44 (m, 1H, CHP), 6,90-7,36 (m, 13H, aromat), 8,76 (s, 3H, NH3+Br).
Etap 4. Reakcja syntezy pochodnej dipeptydowej estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu N-(Boc-proliloamino)-benzylo-etanofosfonowego.
Do kolby okrągłodennej odważa się 0,8 g (1,5 mmola) bromowodorku estru di-4-metylosulfidofenylowego kwasu N-amino-benzylo-etanofosfonowego i dodaje się 0,36 g (1,65 mmola) Boc-Pro-OH. Całość zalewa się acetonitrylem (5-10 ml) i po 2 minutach dodaje się 0,53 ml trójetyloaminy (3,75 mmola). Po 10 minutach dodaje się 0,61 g (1,57 mmola) heksafluorofosforanu O-benzotriazol-1-ylo-N,N,N',N'-tetrametylouroniowego. Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 24 godziny. Następnie mieszaninę poreakcyjną zalewa się solanką i po przeniesieniu do rozdzielacza, ekstrahuje się dwukrotnie octanem etylu. Warstwę octanową przemywa się kolejno: dwukrotnie siarczanem potasu (5%), solanką, dwukrotnie wodorowęglanem sodu (5%), solanką. Frakcje octanowe suszy się w 3 g bezwodnego siarczanu magnezu. Odparowuje się lotne rozpuszczalniki, a następnie produkt oczyszcza się metodą chromatografii kolumnowej stosując jako eluent chloroform. Po zebraniu frakcji zawierających oczekiwany produkt lotne rozpuszczalniki odparowuje się na wyparce rotacyjnej otrzymując dipeptydową pochodną estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu N-(Boc-proliloamino)-benzyloetanofosfonowego: Boc-Pro-Phep(OC6H4-4-SCH3)2, przedstawioną wzorem 12 w postaci spienionego oleju o masie 0,75 g (90% wagowo). Wzór sumaryczny: C32H39O6S2N2P. Masa cząsteczkowa: 645,582 g/mol. Widmo 31P NMR (roztwór w CDCl3, δ [ppm]): 18,24 (s), 18,16 (s). Widmo 1H NMR (roztwór w CDCl3, δ [ppm]): 1,4 (s, 9H, 3 x CH3), 1,65-1,90 (m, 6H, 3xCH2), 2,35 (s, 6H, 2xCH3), 412 (m, 3H, CH2, CH), 5,00 (m, 1H, CHP), 5,19 (s, 1H, NH), 6,94-7,18 (m, 13H, aromat.). Temperatura topnienia: 49-52°C.
P r z y k ł a d XII
Sposób wytwarzania trójpeptydowej pochodnej estru di-3,4,5-trimetylofenylowego kwasu N-(Boc-walino-proliloamino-izobutylo-metanofosfonowego: Boc-Val-Pro-Leup(-O-C6H3-3,4,5-(CH3)3)2 przedstawionego wzorem 13. Sposób wykonania syntezy fosforynu trój-3,4,5-trimetylofenylowego i estru di-3,4,5-trimetylofenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)-izobutylo-metanofosfonowego jest analogiczny do przykładu III (Etap I i etap II). Kolejnym etapem jest synteza bromowodorku estru di-3,4,5-trimetylofenylowego kwasu N-amino-izobutylo-metanofosfonowego.
Etap 3. Otrzymywanie bromowodorku estru di-3,4,5-trimetylofenylowego kwasu N-amino-izobutylo-metanofosfonowego.
Do kolby okrągłodennej zaopatrzonej w mieszadło magnetyczne odważa się 2,01 g (3,7 mmola) esteru di-3,4,5-trimetylofenylowy kwasu N-(benzyloksy-karbonylamino)-izobutylo-metanofosfonowego i dodaje się 5 ml (5,02 mmola) roztworu kwasu bromowodorowego (33%) w kwasie octowym. Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 3 godziny. Następnie lotne składniki mieszaniny poreakcyjnej usuwa się na wyparce obrotowej a uzyskany olej rozpuszcza się w minimalnej ilości metanolu i dodaje się eteru dietylowego do pierwszego zmętnienia.
Kolbę umieszcza się w temperaturze -20°C na 24 godziny w celu krystalizacji produktu, który odsącza się pod zmniejszonym ciśnieniem i suszy na wolnym powietrzu do stałej wagi. Uznaje się, że substrat w 100% został odblokowany, dlatego powstały produkt w postaci bromowodorku estru di3,4,5-trimetylofenylowego kwasu N-amino-izobutylo-metanofosfonowego używa się bezpośrednio do rekcji syntezy dipeptydowej pochodnej estru di-3,4,5-trimetylofenylowego kwasu N-(Boc-proliloamino)izobutylo-metanofosfonowego.
Etap 4. Reakcja syntezy pochodnej dipeptydowej estru di-3,4,5-trimetylofenylowego kwasu N-(Boc-proliloamino)-izobutylo-metanofosfonowego.
Do kolby okrągłodennej zawierającej 1,7 g (3,76 mmola) bromowodorku estru di-3,4,5-trimetylo-fenylowego kwasu N-amino-izobutylo-metanofosfonowego (powstałego w etapie 3) dodaje się 0,81 g (3,76 mmola) Boc-Pro-OH. Całość zalewa się acetonitrylem (5-10 ml), a po 2 minutach dodaje się 1,56 ml (11,3 mmola) trójetyloaminy. Po 10 minutach dodaje się 1,49 g (3,95 mmola) heksafluorofosforanu O-benzotriazol-1-ylo-N,N,N',N'-tetrametylouroniowego. Reakcję prowadzi się
PL 215 832 B1 w temperaturze pokojowej przez 48 godzin. Następnie mieszaninę poreakcyjną zalewa się solanką, przenosi do rozdzielacza i ekstrahuje się dwukrotnie octanem etylu. Warstwę octanową przemywa się kolejno: dwukrotnie siarczanem potasu (5%), solanką, dwukrotnie wodorowęglanem sodu (5%), solanką. Frakcje octanowe suszy się w 3 g bezwodnego siarczanu magnezu. Odparowuje się lotne rozpuszczalniki, a następnie produkt oczyszcza się metodą chromatografii kolumnowej stosując jako eluent chloroform. Po zebraniu frakcji zawierających oczekiwany produkt lotne rozpuszczalniki odparowuje się na wyparce rotacyjnej. Następnie produkt rozpuszcza się w dichlorometanie i ponownie odparowuje się lotny rozpuszczalnik, aż do spienienia produktu.
Otrzymuje się spieniony olej o masie 1,18 g (65% wagowo). Wzór sumaryczny: C33H49O6N2P.
Masa cząsteczkowa: 600,73 g/mol .Widmo 31P NMR (roztwór w CDCl3, δ [ppm]): 18,76 (s), 18,58 (s). Widmo 1H NMR (roztwór w CDCL, δ [ppm]): 0,85 (dd, J=8,56/3,29 Hz, 6H, 2xCH3), 1,33 (s, 9H, 3xCH3), 1,6-1,8 (m, 6H, 2xCH2), 2,21 (s,18H, 6xCH3), 3,3 (m, 3H, CH2, CH), 4,18 (s, 1H, NH), 4,8 (m, 1H, CHP), 5,2 (t, J=5,47 Hz, 1H, CHO), 6,67-7,3 (m, 4H, aromat.). Temperatura topnienia:
48-52°C.
Etap V. Usunięcie grupy t-Boc z pochodnej dipeptydowej estru di-3,4,5-trimetylofenylowego kwasu N-(Boc-proliloamino)-izobutylo-metanofosfonowego.
Do kolby okrągłodennej odważa się pochodną dipeptydową estru di-3,4,5-trimetylofenylowego kwasu N-(Boc-proliloamino)-izobutylo-metano-fosfonowego i rozpuszcza się ją w dichlorometanie (10 ml), a następnie dodaje się powoli 50% roztwór kwasu trójfluoroctowego w dichlorometanie (5 ml). Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 2 godziny, a jej przebieg monitoruje się metodą chromatografii cienkowarstwowej. Następnie lotne składniki mieszaniny poreakcyjnej usuwa się na wyparce obrotowej, uzyskany olej rozpuszcza się w toluenie i ponownie odparowuje rozpuszczalnik, a czynność tą powtarza się dwukrotnie. Powstały olej o kolorze żółtym - o masie 1,02 g - wykorzystuje się jako substrat wyjściowy do otrzymania pochodnej tripeptydowej estru di-3,4,5-trimetylofenylowego kwasu N-(Boc-walino-proliloamino)izobutylo-metanofosfonowego.
Etap VI. Reakcja syntezy pochodnej trójpeptydowej estru di-3,4,5-trimetylofenylowego kwasu N-(Boc-walino-proliloamino)-izobutylo-metanofosfonowego.
Do powstałego w etapie V produktu TFA*Pro-Leup(OC6H3-3,4,5-(CH3)3)2 (m=1,02 g, n=1,66 mmola) dodaje się 0,38g (1,82 mmola) Boc-Val-OH. Całość zalewa się acetonitrylem (5-10 ml), a po 2 minutach dodaje się 0,51 ml (4,14 mmola) trójetyloaminy. Po 10 minutach dodaje się 0,66 g (1,74 mmola) heksafluorofosforanu O-benzotriazol-1 -ylo-N,N,N',N''-tetrametylouroniowego. Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 24 godziny. Następnie mieszaninę poreakcyjną zalewa się solanką, przenosi się do rozdzielacza i ekstrahuje się dwukrotnie octanem etylu. Warstwę octanową przemywa się kolejno: dwukrotnie siarczanem potasu (5%), solanką, dwukrotnie wodorowęglanem sodu (5%) i solanką. Warstwę octanową zlewa się do kolby stożkowej i dodaje 3 g siarczanu magnezu. Następnie produkt oczyszcza się metodą chromatografii kolumnowej stosując eluent octan etylu/chloroform w stosunku objętościowym 1:4. Po zebraniu frakcji zawierających oczekiwany produkt lotne rozpuszczalniki odparowuje się na wyparce rotacyjnej. Powstały olej rozpuszcza się w dichlorometanie i odparowuje się na wyparce rotacyjnej, aż do spienienia produktu, otrzymuje się trójpeptydową pochodną estru di-3,4,5-trimetylofenylowego kwasu N-(Boc-walino-proliloamino)-izobutylo-metanofosfonowego: Boc-Val-Pro-Leup(-O-C6H3-3,4,5-(CH3)3)2 przedstawionego wzorem 13 o masie 0,44 g (43% wagowo). Wzór sumaryczny: C38H59O7N3P. Masa cząsteczkowa : 699,863 g/mol. Widmo 31P NMR (roztwór w CDCl3, δ [ppm]): 18,51 (s). Widmo 1HNMR (roztwór w CDCl3, δ [ppm]): 0,84 (m, 12H, 4xCH3), 1,34 (s, 9H, 3xCH3), 1,65-1,80 (m, 6H, 3xCH2), 2,13 (m, 18H, 6xCH3), 3,50 (m, 3H, CH2, CH), 4,20 (m, 1H, CHCO), 4,36 (m, 1H, NH), 4,7 (m, 1H, CHP), 5,2 (t, J=5,48 Hz, 1H, CHCO[Pro]), 6,70-7,0 (m, 4H, aromat.), 7,1 (d, J=10,05 Hz, 1H, NH). Temperatura topnienia: 59°C.
P r z y k ł a d XIII
Sposób wytwarzania tripeptydowej pochodnej estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu
N-(Boc-walino-proliloamino)-benzylo-etanofosfonowego: Boc-Pro-Phep(OC6H4-4-SCH3)2 przedstawionego wzorem 14. Etap I, II, III, IV syntezy prowadzi się analogicznie do przykładu X. Kolejny etap polega na usunięciu grupy blokującej, tert-butoksykarbonylowej z aminowego końca dipeptydu.
Etap V. Usunięcie grupy t-Boc z pochodnej dipeptydowej estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu N-(Boc-proliloamino)-benzylo-etanofosfonowego.
PL 215 832 B1
Do kolby okrągłodennej odważa się pochodną dipeptydową estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu N-(Boc-proliloamino)-benzylo-etanofosfonowego i rozpuszcza się ją w dichlo rometanie (10 ml), a następnie dodaje się powoli 50% roztwór kwasu trójfluoroctowego w dichlo rometanie (5 ml). Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 2 godziny, a jej przebieg monitoruje się metodą chromatografii cienkowarstwowej. Następnie lotne składniki mieszaniny poreakcyjnej usuwa się na wyparce obrotowej, uzyskany olej rozpuszcza się w toluenie i ponownie odparowuje, a czynność tą powtarza się dwukrotnie. Powstały olej (masa=0,80 g) o kolorze szarym wykorzystuje się jako substrat wyjściowy do otrzymania pochodnej tripeptydowej estru di-4metylomerkaptofenylowego kwasu N-(Boc-walino-proliloamino)-benzylo-etanofosfonowego.
Etap VI. Reakcja syntezy pochodnej trójpeptydowej estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu N-(Boc-walino-proliloamino)-benzylo-etanofosfonowego
Do 0,80 g (1,3 mmola) powstałego w etapie V produktu TFA*Pro-Phep(OC6H4-4-S-CH3)2 dodaje się 0,27 g (1,43 mmoal) Boc-Val-OH. Całość zalewa się acetonitrylem (5-10 ml) po 2 minutach dodaje się 0,43 ml (3,25 mmola) trójetyloaminy. Po 10 minutach dodaje się 0,49 g (1,36 mmola) heksafluorofosforanu O-benzotriazol-1-ylo-N,N,N',N'-tetrametyIouroniowego. Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 12 godzin. Następnie mieszaninę poreakcyjną zalewa się solanką, przenosi się do rozdzielacza i ekstrahuje się dwukrotnie octanem etylu. Warstwę octanową przemywano kolejno: dwukrotnie siarczanem potasu (5%), solanką, dwukrotnie wodorowęglanem sodu (5%) i solanką. Warstwę octanową zlewa się do kolby stożkowej i dodaje się 3 g siarczanu magnezu. Następnie produkt oczyszcza się metodą chromatografii kolumnowej stosując jako eluent chloroform. Po zebraniu frakcji zawierających oczekiwany produkt lotne rozpuszczalniki odparowuje się na wyparce rotacyjnej. Powstały olej rozpuszcza się w dichlorometanie i odparowuje się na wyparce rotacyjnej, aż do spienienia produktu. Otrzymuje się 0,64 g (80% wagowo) tripeptydowej pochodnej estru di-4-metylomerkapto-fenylowego kwasu N-(Boc-walino-proliloamino)-benzylo-etanofosfonowego: Boc-Pro-Phep(OC6H4-4-SCH3)2 przedstawionego wzorem 14 Wzór sumaryczny: C37H48O7N3S2P. Masa cząsteczkowa: 741,91 1 g/mol. Widmo 31P NMR (roztwór w CDCl3, δ [ppm]): 18,30 (s), 18,26 (s). Widmo 1H NMR (roztwór w CDCl3, δ [ppm]): 0,88 (m, 12H, 4xCH3), 1,37 (s, 9H, 3xCH3), 1,65-1,80 (m, 6H, 3xCH2), 2,35 (s, 6h, 2xCH3), 3,5-3,6 (m, 3H, CH2, CH), 4,20 (m, 1H, CHCO), 4,36 (m, 1H, NH), 4,73 (m, 1H, CHP), 5,2 (t, 1=5,48 Hz, 1H, CHCO[Pro]), 6,79-7,01 (m, 8H, aromat.), 7,2 (d, J=0,7 Hz, 1H, NH). Temperatura topnienia: 72-76°C.
Aktywność biologiczną estrów difenylowych fosfonowych analogów fenyloalaniny oraz leucyny, a także ich peptydowych pochodnych otrzymanych w przykładach II-XIV przebadano pod kątem zdolności do hamowania proteolitycznej aktywności chymotrypsyny z trzustki wołowej i subtylizyny pochodzącej z bakterii B. subtillis. Wszystkie badania sporządzono na czytniku mikropłytek Molecular Devices Spectramax Gemini XP. Badania rozpoczęto od wyznaczania Km dla substratu w warunkach prowadzonych testów (temperatura 37°C, długość fali ekstynkcji 350 nm i emisji 460 nm). Pomiaru dokonano przy różnych stężen iach substratu w zakresie od 10 μΜ do 500 μΜ przy stałym stężeniu enzymu 25 nM. Odpowiednio, wartości Km dla chymotrypsyny i subtylizyny wynosiły 70 μΜ i 60 μΜ w podanych warunkach. Pomiary aktywności inhibitorowej wykonano przy różnych stężeniach inhibi-torów w zakresie od 50 nM do 2000 nM. W badaniach wykorzystano handlowo dostępny substrat N-Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-AMC, którego używano zarówno przy pomiarach względem chymotrypsyny jak i subtylizyny. Końcowe stężenie substratu wynosiło zarówno dla chymotrypsyny jak i subtylizyny 20 μΜ. Do każdej studzienki odmierzono 100 μΙ enzymu, 50 μl substratu i 50 μl inhibitora. Przy obliczaniu wartości K-ι i k2 wykorzystano dwa modele inhibicji: model regresji hiperbolicznej Salvessena i model klasycznej regresji liniowej według Dorita. Uzyskane wartości K1 i k2 wyliczone dwiema metodami różniły się nieznacznie, dlatego podano ich uśrednioną wartość. Uzyskane wyniki przedstawiono w tabelach, z których tabela 1 przedstawia wyniki badania aktywności inhibitorowej otrzymanych estrów difenylowych analogów fenyloalaniny i leucyny wobec chymotrypsyny i subtylizyny, tabela 2 - wy-niki badania aktywności inhibitorowej otrzymanych dipeptydowych pochodnych estrów difenylowych analogów fenyloalaniny i leucyny wobec chymotrypsyny i subtylizyny, a tabela 3 - wyniki badania aktywności inhibitorowej otrzymanych tripeptydowych pochodnych estrów difenylowych analogów fenyloalaniny i leucyny wobec chymotrypsyny i subtylizyny.
PL 215 832 B1
Tabela 1
Tabela 2
| subtylizyna | chymotrypsyna | |||||
| Ki [μΜ] | k2/K, [M^s'1] | Ki [μΜ] | k2/K, [M s ] | |||
| Boc-Pro-Lcup | °~G~° | 7.7 | 1700 | 0.09 | 250 000 | |
| Boc-Pro-Phe1’ | θ-Ο-® | 2 | 5.4 | 1700 | 0.14 | 120 000 |
PL 215 832 B1
Tabela 3
| subtylizyna | chymotrypsyna | ||||
| Ki [μΜ] | k2/K, [M^s'1] | Ki [μΜ] | k2/Ki [MA1] | ||
| Boc-y.l-Pio-Leu1’- | >20 | <50 | 0.3 | 9 000 | |
| Boc-VaJ-Pro-Phep | 0.098 | 110 000 | 0.05 | 94 600 |
Zastrzeżenia patentowe
Claims (4)
1. Diestry arylowe kwasów 1-aminoalkano-fosfonowych i ich peptydowe pochodne, o wzorze ogólnym 1, w którym W oznacza grupę benzyloksykarbonylową (Cbz), albo resztę peptydową składającą się z jednego, dwóch lub trzech aminokwasów, R1 oznacza podstawnik analogiczny do łańcucha bocznego naturalnych aminokwasów, w szczególności leucyny lub fenyloalaniny, zaś X1, X2, X3, X4 oraz X5 są takie same lub różne i oznaczają metyl, etyl, benzyl, O-metyl i S-metyl.
2. Zastosowanie diestrów arylowych kwasów 1-aminoalkanofosfonowych i ich peptydowych pochodnych, o wzorze ogólnym 1 do wytwarzania preparatów do hamowania aktywności chymotrypsyny i subtylizyny.
3. Sposób wytwarzania diestrów arylowych kwasów 1-aminoalkanofosfonowych i ich peptydowch pochodnych, o wzorze ogólnym 1, znamienny tym, że w pierwszym etapie na drodze syntezy z fenolu zawierającego jeden z podstawników, takich jak: 4-5-metylowy, 3,4,5-trietylowy, 4-metylowy, 3-metoksylowy, 4-etylowy, 4-metoksylowy, 2,3-dimetylowy bądź 2-naftol w acetonitrylu bądź benzenie i w obecności chlorku fosforu(III) w temperaturze wrzenia rozpuszczalnika otrzymuje się fosforyn trifenylowy, zawierający w każdym pierścieniu aromatycznym jeden podstawnik wybrany z grupy obejmującej:
4-S-metylowy, 3,4,5-trietylowy, 4-metylowy, 3-metoksylowy, 4-etylowy, 4-metoksylowy, 2,3-dimetylowy bądź fosforyn tri(2-naftylowy), a następnie otrzymany fosforyn triarylowy poddaje się reakcji amidoalkilowania z karbaminianem benzylu, aldehydem izowalerianowym bądź aldehydem fenylooctowym, w lodowatym kwasie octowym w temperaturze 90°C i w otrzymanym w wyniku przeprowadzonej reakcji diarylowym estrze N-benzyloksykarbonylowym kwasu 1-aminofosfonowego odblokowuje się grupę aminową przy użyciu roztworu kwasu bromowodorowego (33%) w kwasie octowym, a następnie sprzęga go z proliną zawierającą zablokowaną N-końcową grupą aminową przez grupę tert-butoksykarbonylową (t-Boc), przy użyciu heksafluorofosforanu O-benzotriazol-1-ylo-N,N,N',N'tetrametylouroniowego (HBTU), trójetyloaminy i acetonitrylu jako rozpuszczalnika, a po reakcji sprzęgania w temperaturze pokojowej, mieszaninę poreakcyjną zalewa się solanką, ekstrahuje octanem etylu i przemywa się kolejno siarczanem potasu (5%), solanką, wodorowęglanem sodu (5%) i solanką albo w otrzymanych fosfonowych dipeptydach zawierających N-końcową resztę N-Boc-proliny oraz jeden z podstawników w każdym estrowym pierścieniu aromatycznym pochodnej kwasu 1-aminoalkanofosfonowego: 4-S'-metylowy, 3,4,5-trietylowy, 4-metylowy, 3-metoksylowy, 4-etylowy, 4-metoksylowy, 2,3-dimetylowy bądź estry 2-naftylowe usuwa się grupę N-Boc przy użyciu roztworu kwasu trójfluorooctowego (TFA) i dichlorometanu (CH2Cl2) w stosunku objętościowym 1:1 i prowadzi się reakcję addycji kolejnego aminokwasu - waliny z N-Boc zablokowaną grupą a-aminową przy użyciu odczynnika sprzęgającego heksafluorofosforanu O-benzotriazol-1-yIo-N,N,N',N'-tetrametylouroniowego (HBTU), trójetyloaminy i acetonitrylu jako rozpuszczalnika, po prowadzonej w temperaturze pokojowej reakcji sprzęgania, mieszaninę poreakcyjną zalewa się solanką, ekstrahuje dwukrotnie octanem etylu i przemywa kolejno siarczanem potasu (5%), solanką, wodorowęglanem sodu (5%) i solanką.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL385481A PL215832B1 (pl) | 2008-06-20 | 2008-06-20 | Diestry arylowe kwasów 1-aminoalkanofosfonowych i ich peptydowe pochodne oraz sposób ich wytwarzania i zastosowanie |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL385481A PL215832B1 (pl) | 2008-06-20 | 2008-06-20 | Diestry arylowe kwasów 1-aminoalkanofosfonowych i ich peptydowe pochodne oraz sposób ich wytwarzania i zastosowanie |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL385481A1 PL385481A1 (pl) | 2009-12-21 |
| PL215832B1 true PL215832B1 (pl) | 2014-02-28 |
Family
ID=42988683
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL385481A PL215832B1 (pl) | 2008-06-20 | 2008-06-20 | Diestry arylowe kwasów 1-aminoalkanofosfonowych i ich peptydowe pochodne oraz sposób ich wytwarzania i zastosowanie |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL215832B1 (pl) |
-
2008
- 2008-06-20 PL PL385481A patent/PL215832B1/pl unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL385481A1 (pl) | 2009-12-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| De Lombaert et al. | N-Phosphonomethyl dipeptides and their phosphonate prodrugs, a new generation of neutral endopeptidase (NEP, EC 3.4. 24.11) inhibitors | |
| US4918105A (en) | Novel compounds with collagenase-inhibiting activity, a process for their preparation and pharmaceutical compositions in which these compounds are present | |
| US5543396A (en) | Proline phosphonate derivatives | |
| Oleksyszyn et al. | [30] Amino acid and peptide phosphonate derivatives as specific inhibitors of serine peptidases | |
| ES2210377T3 (es) | Inhibidores de cisteina y serina proteasa que contienen fosforo. | |
| PL209670B1 (pl) | Nowy związek, będący acyloaminopiperydyno-1-karboksyamidyną, środek farmaceutyczny zawierający ten związek i zastosowanie tego związku do wytwarzania leku | |
| HUT61032A (en) | Process for producing phosphono-/biaryl-substituted dipeptide derivatives and pharmaceutical compositions comprising same as active ingredient | |
| JPH04330094A (ja) | 有機化学における改良 | |
| AU733420B2 (en) | Peptidyl-2-amino-1-hydroxyalkanesulfonic acid cysteine protease inhibitors | |
| NO311573B1 (no) | Reversible proteasehemmere | |
| MXPA06013373A (es) | Fosforodiamidatos de sulfoniletilo para usarse en el tratamiento del cancer. | |
| NZ233288A (en) | Phosphono- di- and tri- peptide derivatives, medicaments, and intermediates | |
| US5686419A (en) | Basic α-aminoalkylphosphonate derivatives | |
| AU771518B2 (en) | Hydroxamate-containing cysteine and serine protease inhibitors | |
| EP1019434B1 (en) | Inhibitors of metalloproteinases, their therapeutic use, and process for the production of the starting compound in their synthesis | |
| PL215832B1 (pl) | Diestry arylowe kwasów 1-aminoalkanofosfonowych i ich peptydowe pochodne oraz sposób ich wytwarzania i zastosowanie | |
| ES2208260T3 (es) | Pseudopeptidos fosfinicos inhibidores de las metaloproteasas matriciales. | |
| PL227742B1 (pl) | Pochodne estrów diarylowych kwasów 1-aminoalkanofosfonowych, sposób wytwarzania pochodnych estrów diarylowych kwasów 1-aminoalkanofosfonowych oraz ich zastosowanie | |
| US5639732A (en) | Phosphorous-containing cysteine and serine protease inhibitors | |
| IE911165A1 (en) | Novel compounds | |
| Jiménez-Andreu et al. | Synthesis and biological activity of dehydrophos derivatives | |
| US5446187A (en) | Aminoacyl derivatives of gem-diphosphonic acids, a process for the preparation thereof and pharmaceutical compositions containing them | |
| PL212735B1 (pl) | Sposób wytwarzania fosfonowych analogów pseudopeptydów i ich zastosowanie jako preparatów o aktywności przeciwbakteryjnej | |
| PL215209B1 (pl) | Nowe pochodne diestrów arylowych kwasów 1-aminoalkanofosfonowych, sposób wytwarzania pochodnych diestrów arylowych kwasów 1-aminoalkanofosfonowych oraz zastosowanie pochodnych diestrów arylowych kwasów 1-aminoalkanofosfonowych | |
| EP1389624A1 (en) | Phosphorous-containing cysteine and serine protease inhibitors |