PL212617B1 - Sposób namnażania entomopatogenicznych nicieni dla potrzeb badawczych w ochronie roślin - Google Patents

Description

Opis wynalazku

Przedmiotem wynalazku jest sposób namnażania entomopatogenicznych nicieni dla potrzeb badawczych w ochronie roślin.

Dotychczasowy sposób namnażania nicieni w warunkach laboratoryjnych polegał na przenoszeniu martwych larw owadów z widocznymi objawami porażenia przez nicienie entomopatogeniczne na szkiełka zegarkowe wyłożone wilgotną bibułą filtracyjną, które umieszczane były w szalkach Petri'ego, z niewielką zawartością wody. Na szkiełkach zegarkowych panowały warunki beztlenowe. Panujące warunki beztlenowe pomiędzy ciałem owada, a wilgotną bibułą filtracyjną prowadziły do zamierania larw nicieni i rozwoju mikroorganizmów niesprzyjających dla rozwoju nicieni. Bibuła po pewnym czasie wysychała i utrudnione były warunki migracji nicieni z organizmu owada do środowiska zewnętrznego.

Z publikacji “Large scale production, storage and transport of the insect-parasitic nematodes Neoaplectana spp. and Heterorhsabditis spp.” (Bedding R.A.. Annals od Applied Biology. 1984. 104, str. 117-120). publikacji Mass Production of the Entomogenous Nematode Heterorhabditis heliothidis (Nematoda: Heterorhabditidae) on Artificial Media (Wouts W.M. J. Nematol. 1981. 13(4). str. 467-469) oraz z opisu patentowego JP 63072612 znane jest stosowanie porowatego podłoża w hodowli nicieni, po wcześniejszym porażeniu larwami owadów. Jako porowate podłoże stosuje się gąbki poliuretanowe. Obie z cytowanych wyżej publikacji dotyczą hodowli nicieni na skalę przemysłową, w autoklawach. W opisie wynalazku JP nicienie są hodowane na gąbce poliuretanowej, w roztworze wodnym z dodatkiem glikolu etylenowego, który to roztwór ma na celu zapobieganie wysychaniu nicieni w celu poprawy ich przeżywalności. Żadna z tych metod nie odnosi się jednak do warunków badawczych, w których hodowlę nicieni rozpoczyna na się na szklanym sterylnym podłożu wyłożonym bibułą, sprzyjającym powstaniu warunków beztlenowych.

Sposób namnażania entomopatogenicznych nicieni dla potrzeb badawczych w ochronie roślin, przy użyciu martwych larw owadów uprzednio porażonych larwami nicieni, z wykorzystaniem elastycznego, porowatego podłoża, w temperaturze 18-25°C, według wynalazku charakteryzuje się tym, że martwe larwy porażonych owadów umieszcza się na sterylnym elastycznym porowatym podłożu na szalkach Petri'ego z wodnym roztworem formaliny o stężeniu nieprzekraczającym 0,015%. sięgającym do wysokości 1/3 - 1/2 elastycznego porowatego podłoża, przy czym pomiędzy larwą owada a wiekiem płytki Petri'ego pozostawia się wolną przestrzeń. Jako porowaty elastyczny materiał korzystnie stosuje się sterylną gąbkę poliuretanową.

W sposobie według wynalazku zastosowano specyficzny układ, w którym połączono sterylne szklane podłoże, elastyczne podłoże porowate oraz niewielką ilość roztworu wodnego formaliny. Szklane sterylne podłoże zapewnia brak rozwoju drobnoustrojów, podłoże porowate zapewnia przewietrzalność i brak warunków beztlenowych, istotnych dla rozwoju niekorzystnych obcych organizmów, a wodny roztwór formaliny poprawia przeżywalność młodych larw nicieni. Obecność porowatego podłoża oraz przestrzeń pomiędzy grzbietem owada a wieczkiem szalki, znacząco zwiększa powierzchnię powietrzną, która jest niezwykle istotna w jednym z najważniejszych etapów hodowli nicieni, jakim jest migracja młodych larw do środowiska zewnętrznego. Dzięki stosowaniu sposobu według wynalazku istnieje tylko minimalne ryzyko zakażenia środowiska mikroorganizmami, a ciągła wilgotność środowiska zapewnia bezpieczną migrację nicieni do środowiska zewnętrznego. Ponadto, zastosowanie słabego roztworu formaliny pozwala na bezpośrednie przelewanie larw wraz z w/w roztworem do pojemników do przechowywania nicieni i przetrzymywanie w określonej temperaturze, przez długi czas. w bardzo dobrej kondycji tych zwierząt.

Sposób namnażania entomopatogenicznych nicieni dla potrzeb badawczych w ochronie roślin jest bliżej opisany w przykładzie wykonania.

P r z y k ł a d

Larwy owadów Galleria mellonella uznane za martwe, zarażone uprzednio przez nicienie Heterorhabditis megidis lub Steinernema feltiae umieszcza się na sterylnych wilgotnych poliuretanowych gąbkach i przenosi się do szalki Petri'ego. Do szalki Petri‘ego nalewa się 0.015% wodny roztwór formaliny o temperaturze 18-25°C do wysokości połowy wysokości gąbki. Rozmiar gąbki uprzednio dostosowuje się do rozmiaru larwy owada lub grupy larw owadów zarażonych przez nicienie. Pomiędzy wiekiem płytki Petri‘ego a larwą owada zostawia się wolną przestrzeń. W miarę namnażania larwy nicieni opuszczają ciało żywiciela i migrują do środowiska zewnętrznego. Wyizolowane larwy nicieni służą do dalszych badań patogenicznych szkodliwych owadów oraz do produkcji bioinsektycydów.

Claims (2)

1. Sposób namnażania entomopatogenicznych nicieni dla potrzeb badawczych w ochronie roślin, przy użyciu martwych larw owadów uprzednio porażonych larwami nicieni, z wykorzystaniem elastycznego, porowatego podłoża, w temperaturze 18-25°C, znamienny tym, że martwe larwy porażonych owadów umieszcza się na sterylnym elastycznym porowatym podłożu na szalkach Petri'ego z wodnym roztworem formaliny o stężeniu nieprzekraczającym 0.015% sięgającym do wysokości 1/3 - 1/2 elastycznego porowatego podłoża, przy czym pomiędzy larwą owada a wiekiem płytki Petri'ego pozostawia się wolną przestrzeń.

2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że jako elastyczny porowaty materiał stosuje się sterylną gąbkę poliuretanową.