PL205608B1 - Adiuwanty szczepionki lub nieswoiste immunostymulanty dla koni, kompozycje do immunostymulacji dla koni, kompozycje immunogenne lub szczepionki dla koni, zastosowanie nieswoistego immunostymulanta oraz zastosowanie adiuwanta szczepionki - Google Patents
Adiuwanty szczepionki lub nieswoiste immunostymulanty dla koni, kompozycje do immunostymulacji dla koni, kompozycje immunogenne lub szczepionki dla koni, zastosowanie nieswoistego immunostymulanta oraz zastosowanie adiuwanta szczepionkiInfo
- Publication number
- PL205608B1 PL205608B1 PL352484A PL35248400A PL205608B1 PL 205608 B1 PL205608 B1 PL 205608B1 PL 352484 A PL352484 A PL 352484A PL 35248400 A PL35248400 A PL 35248400A PL 205608 B1 PL205608 B1 PL 205608B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- equine
- vaccine
- preparation
- immunogen
- csf
- Prior art date
Links
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 title claims abstract description 84
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 title claims abstract description 60
- 102000004457 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 title claims abstract description 51
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims abstract description 15
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims abstract description 14
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims abstract description 13
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims abstract description 13
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims abstract description 10
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims description 58
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 50
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 50
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 45
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 44
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 claims description 26
- 229960001438 immunostimulant agent Drugs 0.000 claims description 22
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 claims description 22
- 239000012646 vaccine adjuvant Substances 0.000 claims description 21
- 229940124931 vaccine adjuvant Drugs 0.000 claims description 21
- 241000283086 Equidae Species 0.000 claims description 17
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 16
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 15
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 14
- 244000052769 pathogen Species 0.000 claims description 14
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims description 12
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 11
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 7
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 claims description 6
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 claims description 6
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 claims description 5
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 4
- 241000700663 Avipoxvirus Species 0.000 claims description 3
- 241000230501 Equine herpesvirus sp. Species 0.000 claims description 3
- 241000700638 Raccoonpox virus Species 0.000 claims description 3
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 claims description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 3
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 claims description 3
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 claims description 3
- 241001137864 Camelpox virus Species 0.000 claims description 2
- 241000178270 Canarypox virus Species 0.000 claims description 2
- 241000700565 Swinepox virus Species 0.000 claims description 2
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 abstract description 5
- 230000036039 immunity Effects 0.000 abstract description 3
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 abstract 1
- 239000002269 analeptic agent Substances 0.000 abstract 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 21
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 19
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 18
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 8
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 8
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 5
- 241000894007 species Species 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 4
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- WALUVDCNGPQPOD-UHFFFAOYSA-M 2,3-di(tetradecoxy)propyl-(2-hydroxyethyl)-dimethylazanium;bromide Chemical group [Br-].CCCCCCCCCCCCCCOCC(C[N+](C)(C)CCO)OCCCCCCCCCCCCCC WALUVDCNGPQPOD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 2-(2-methoxy-5-methylphenyl)ethanamine Chemical compound COC1=CC=C(C)C=C1CCN SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N Acrylic acid Chemical compound OC(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 3
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 3
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N Methacrylic acid Chemical compound CC(=C)C(O)=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 108010008038 Synthetic Vaccines Proteins 0.000 description 3
- 239000007984 Tris EDTA buffer Substances 0.000 description 3
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 3
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 3
- 229960001631 carbomer Drugs 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 3
- FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N maleic anhydride Chemical compound O=C1OC(=O)C=C1 FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- -1 quaternary ammonium cationic lipid Chemical class 0.000 description 3
- 229940124551 recombinant vaccine Drugs 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 3
- GHUXAYLZEGLXDA-UHFFFAOYSA-N 8-azido-5-ethyl-6-phenylphenanthridin-5-ium-3-amine;bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N=[N+]=[N-])=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 GHUXAYLZEGLXDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000589969 Borreliella burgdorferi Species 0.000 description 2
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000006825 Eastern Equine Encephalomyelitis Diseases 0.000 description 2
- 201000005804 Eastern equine encephalitis Diseases 0.000 description 2
- 206010014587 Encephalitis eastern equine Diseases 0.000 description 2
- 206010014611 Encephalitis venezuelan equine Diseases 0.000 description 2
- 206010014614 Encephalitis western equine Diseases 0.000 description 2
- 241000701081 Equid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 2
- 241000701089 Equid alphaherpesvirus 4 Species 0.000 description 2
- 108091005904 Hemoglobin subunit beta Proteins 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 102000011931 Nucleoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108010061100 Nucleoproteins Proteins 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 241000711798 Rabies lyssavirus Species 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 2
- 208000002687 Venezuelan Equine Encephalomyelitis Diseases 0.000 description 2
- 201000009145 Venezuelan equine encephalitis Diseases 0.000 description 2
- 208000005466 Western Equine Encephalomyelitis Diseases 0.000 description 2
- 201000005806 Western equine encephalitis Diseases 0.000 description 2
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 108010006025 bovine growth hormone Proteins 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000005757 colony formation Effects 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 2
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 2
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 108010051110 tyrosyl-lysine Proteins 0.000 description 2
- RFIMISVNSAUMBU-UHFFFAOYSA-N 2-(hydroxymethyl)-2-(prop-2-enoxymethyl)propane-1,3-diol Chemical compound OCC(CO)(CO)COCC=C RFIMISVNSAUMBU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000954 2-hydroxyethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])O[H] 0.000 description 1
- 125000003903 2-propenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C([H])[H] 0.000 description 1
- NKDFYOWSKOHCCO-YPVLXUMRSA-N 20-hydroxyecdysone Chemical compound C1[C@@H](O)[C@@H](O)C[C@]2(C)[C@@H](CC[C@@]3([C@@H]([C@@](C)(O)[C@H](O)CCC(C)(O)C)CC[C@]33O)C)C3=CC(=O)[C@@H]21 NKDFYOWSKOHCCO-YPVLXUMRSA-N 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- WKOBSJOZRJJVRZ-FXQIFTODSA-N Ala-Glu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O WKOBSJOZRJJVRZ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- IIFDPDVJAHQFSR-WHFBIAKZSA-N Asn-Glu Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O IIFDPDVJAHQFSR-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- YVXRYLVELQYAEQ-SRVKXCTJSA-N Asn-Leu-Lys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N YVXRYLVELQYAEQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- YZQCXOFQZKCETR-UWVGGRQHSA-N Asp-Phe Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 YZQCXOFQZKCETR-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- MNQMTYSEKZHIDF-GCJQMDKQSA-N Asp-Thr-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O MNQMTYSEKZHIDF-GCJQMDKQSA-N 0.000 description 1
- XFTWUNOVBCHBJR-UHFFFAOYSA-N Aspergillomarasmine A Chemical compound OC(=O)C(N)CNC(C(O)=O)CNC(C(O)=O)CC(O)=O XFTWUNOVBCHBJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282836 Camelus dromedarius Species 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 108010062580 Concanavalin A Proteins 0.000 description 1
- YFXFOZPXVFPBDH-VZFHVOOUSA-N Cys-Ala-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CS)C(O)=O YFXFOZPXVFPBDH-VZFHVOOUSA-N 0.000 description 1
- NXTYATMDWQYLGJ-BQBZGAKWSA-N Cys-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CS NXTYATMDWQYLGJ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 108010041986 DNA Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 229940021995 DNA vaccine Drugs 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102100036912 Desmin Human genes 0.000 description 1
- 108010044052 Desmin Proteins 0.000 description 1
- 241000283087 Equus Species 0.000 description 1
- 241000201862 Equus sp. Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241001646716 Escherichia coli K-12 Species 0.000 description 1
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- 208000000666 Fowlpox Diseases 0.000 description 1
- 101150082239 G gene Proteins 0.000 description 1
- OPAINBJQDQTGJY-JGVFFNPUSA-N Glu-Gly-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)C(=O)O OPAINBJQDQTGJY-JGVFFNPUSA-N 0.000 description 1
- CQGBSALYGOXQPE-HTUGSXCWSA-N Glu-Thr-Phe Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)O CQGBSALYGOXQPE-HTUGSXCWSA-N 0.000 description 1
- NSTUFLGQJCOCDL-UWVGGRQHSA-N Gly-Leu-Arg Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N NSTUFLGQJCOCDL-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- MAJYPBAJPNUFPV-BQBZGAKWSA-N His-Cys Chemical compound SC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 MAJYPBAJPNUFPV-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- KDDKJKKQODQQBR-NHCYSSNCSA-N His-Val-Asp Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)N KDDKJKKQODQQBR-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- 101000746373 Homo sapiens Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Proteins 0.000 description 1
- IAJFFZORSWOZPQ-SRVKXCTJSA-N Leu-Leu-Asn Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O IAJFFZORSWOZPQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- YOKVEHGYYQEQOP-QWRGUYRKSA-N Leu-Leu-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O YOKVEHGYYQEQOP-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- BGZCJDGBBUUBHA-KKUMJFAQSA-N Leu-Lys-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O BGZCJDGBBUUBHA-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- AIRUUHAOKGVJAD-JYJNAYRXSA-N Leu-Phe-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O AIRUUHAOKGVJAD-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- GJJQCBVRWDGLMQ-GUBZILKMSA-N Lys-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O GJJQCBVRWDGLMQ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- ATIPDCIQTUXABX-UWVGGRQHSA-N Lys-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN ATIPDCIQTUXABX-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 101000746372 Mus musculus Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Proteins 0.000 description 1
- SITLTJHOQZFJGG-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-valine Natural products CC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O SITLTJHOQZFJGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700006640 OspA Proteins 0.000 description 1
- UEXCHCYDPAIVDE-SRVKXCTJSA-N Phe-Asp-Cys Chemical compound SC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 UEXCHCYDPAIVDE-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- PEFJUUYFEGBXFA-BZSNNMDCSA-N Phe-Lys-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 PEFJUUYFEGBXFA-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- 102000013566 Plasminogen Human genes 0.000 description 1
- 108010051456 Plasminogen Proteins 0.000 description 1
- FELJDCNGZFDUNR-WDSKDSINSA-N Pro-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 FELJDCNGZFDUNR-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- CGBYDGAJHSOGFQ-LPEHRKFASA-N Pro-Ala-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@@H]2CCCN2 CGBYDGAJHSOGFQ-LPEHRKFASA-N 0.000 description 1
- RCYUBVHMVUHEBM-RCWTZXSCSA-N Pro-Pro-Thr Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O RCYUBVHMVUHEBM-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 241000714474 Rous sarcoma virus Species 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 1
- 206010043376 Tetanus Diseases 0.000 description 1
- 108010055044 Tetanus Toxin Proteins 0.000 description 1
- HYLXOQURIOCKIH-VQVTYTSYSA-N Thr-Arg Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N HYLXOQURIOCKIH-VQVTYTSYSA-N 0.000 description 1
- IQHUITKNHOKGFC-MIMYLULJSA-N Thr-Phe Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 IQHUITKNHOKGFC-MIMYLULJSA-N 0.000 description 1
- KPMIQCXJDVKWKO-IFFSRLJSSA-N Thr-Val-Glu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O KPMIQCXJDVKWKO-IFFSRLJSSA-N 0.000 description 1
- VYVBSMCZNHOZGD-RCWTZXSCSA-N Thr-Val-Val Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O VYVBSMCZNHOZGD-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 1
- LYMVXFSTACVOLP-ZFWWWQNUSA-N Trp-Leu Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C([O-])=O)=CNC2=C1 LYMVXFSTACVOLP-ZFWWWQNUSA-N 0.000 description 1
- AOLHUMAVONBBEZ-STQMWFEESA-N Tyr-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 AOLHUMAVONBBEZ-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- MNSSBIHFEUUXNW-RCWTZXSCSA-N Val-Thr-Arg Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N MNSSBIHFEUUXNW-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 1
- QYKIQEUNHZKYBP-UHFFFAOYSA-N Vinyl ether Chemical compound C=COC=C QYKIQEUNHZKYBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003929 acidic solution Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 230000000240 adjuvant effect Effects 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229940086737 allyl sucrose Drugs 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical class [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 108010060035 arginylproline Proteins 0.000 description 1
- 108010069205 aspartyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 1
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical compound [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 210000000038 chest Anatomy 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000009918 complex formation Effects 0.000 description 1
- 238000010668 complexation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 229920006037 cross link polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 210000004292 cytoskeleton Anatomy 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 210000005045 desmin Anatomy 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000001976 enzyme digestion Methods 0.000 description 1
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- 229940052303 ethers for general anesthesia Drugs 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 102000046157 human CSF2 Human genes 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000004731 jugular vein Anatomy 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 238000010841 mRNA extraction Methods 0.000 description 1
- 210000003593 megakaryocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 1
- 238000001823 molecular biology technique Methods 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000007764 o/w emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 229920000058 polyacrylate Polymers 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000007115 recruitment Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 238000007790 scraping Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 239000000021 stimulant Substances 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 229940031626 subunit vaccine Drugs 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229940118376 tetanus toxin Drugs 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 108010080629 tryptophan-leucine Proteins 0.000 description 1
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 108010009962 valyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 229960000834 vinyl ether Drugs 0.000 description 1
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/53—Colony-stimulating factor [CSF]
- C07K14/535—Granulocyte CSF; Granulocyte-macrophage CSF
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5256—Virus expressing foreign proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55522—Cytokines; Lymphokines; Interferons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Transition And Organic Metals Composition Catalysts For Addition Polymerization (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Description
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku są adiuwanty szczepionki lub nieswoiste immunostymulanty dla koni, kompozycje do immunostymulacji dla koni, kompozycje immunogenne lub szczepionki dla koni, zastosowanie nieswoistego immunostymulanta oraz zastosowanie adiuwanta szczepionki.
Pierwsze odkrycie czynnika stymulującego tworzenie kolonii granulocytów i makrofagów (ang. Granulocyte-Macrophage Colony Stimulating Factor lub GM-CSF) nastąpiło w roku 1977 (Burgess A.W. i wsp. J. Biol. Chem. 1977. 252. 1998-2003). Jest to mysi GM-CSF, oczyszczony z supernatantów hodowli płuc myszy.
Aktywności biologiczne GM-CSF wykazano w badaniach nad GM-CSF mysim i ludzkim (Clark S.C. i wsp. Science 1987. 230. 1229; Grant S. M. i wsp. Drugs.1992. 53. 516).
GM-CSF ma wiele ról fizjologicznych (Dy M. w „Les cytokines” Cavaillon, J.M. 1996, red. Masson, Paryż, Francja, 43-56). W szczególności GM-CSF stymuluje produkcję, rozwój i tworzenie kolonii granulocytów, makrofagów, eozynofili i megakariocytów. GM-CSF indukuje w szczególności cytotoksyczność makrofagów i stymuluje aktywność cytotoksyczną zależną od przeciwciał (ADCC) i rekrutację leukocytów w miejscach zapalnych.
Przedstawiono już GM-CSF różnych gatunków zwierząt.
Wielkości sekwencji nukleotydowych kodujących znane GM-CSF u różnych gatunków są w zakresie od 381 do 432 nukleotydów. Sekwencje nukleotydowe ludzkie i mysie mają stopień homologii 69%. Stopień homologii wynosi 54% na poziomie sekwencji aminokwasowej (Cantrell M.A. i wsp. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1985. 82. 6250-6254). Jednak ta homologia nie pozwala na żadną aktywność krzyżową między dwoma gatunkami ludzkim i mysim (Metcalf D. i wsp. Blood 1986. 67. 37-45).
Podanie heterologicznego GM-CSF tj.GM-CSF pochodzącego od gatunku innego niż leczony, nie pozwala na uzyskanie optymalnego efektu adiuwantu w szczególności stymulacji aktywności komórek hematopoetycznych i znacznego zwiększenia odpowiedzi odpornościowej.
Dotychczas nie było możliwe przedstawienie GM-CSF konia. Jednak ta cytokina ma znaczną wartość dla zastosowania terapeutycznego i szczepionkowego do użycia u koni.
Zgłaszającemu udało się wyizolować i zsekwencjonować gen GM-CSF konia. Ten gen był wyizolowany po reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR) z zastosowaniem oligonukleotydów opisanych w przykładach.
Gen GM-CSF konia ma wielkość 432 nukleotydów (Sekw. Id. Nr 8 i figura 1) i koduje 144-aminokwasowe białko (Sekw. Id. Nr 9 i figura 2). Białko kodowane przez ten gen ma homologię przynajmniej 75% z sekwencjami polipeptydowymi GM-CSF innych gatunków zwierząt.
Wynalazek dotyczy adiuwanta szczepionki lub nieswoistego immunostymulanta dla koni obejmującego wektor do ekspresji in vivo zawierający sekwencję nukleotydową jak przedstawiona w Sekw. Id. Nr: 8 kodującą koński GM-CSF w warunkach umożliwiających ekspresję u konia funkcjonalnego białka GM-CSF.
Korzystnie wektor jest wektorem wirusowym lub plazmidem.
Bardziej korzystnie wektor jest wybrany z grupy składającej się z wirusa ospy, adenowirusa i wirusa opryszczki. Korzystnie wirus opryszczki jest wirusem opryszczki końskiej, a wirus ospy jest wybrany z grupy składającej się z wirusa krowianki, wirusa ospy kanarków, wirusa ospy ptasiej, wirusa ospy świń, wirusa ospy szopów i wirusa ospy wielbłądów.
Wynalazek dotyczy również kompozycji do immunostymulacji dla koni obejmującej nieswoisty immunostymulant według wynalazku określony powyżej i dopuszczalną weterynaryjnie substancję pomocniczą lub nośnik.
Ponadto w zakres wynalazku wchodzi kompozycja immunogenna lub szczepionka dla koni obejmująca adiuwant według wynalazku, preparat immunogenu lub szczepionki przeciw patogenowi końskiemu i dopuszczalną weterynaryjnie substancję pomocniczą lub nośnik.
Korzystnie preparat immunogenu lub szczepionki jest wybrany z grupy składającej się z preparatu inaktywowanego, preparatu żywego atenuowanego, preparatu podjednostkowego i preparatu rekombinowanego.
Wynalazek dotyczy też kompozycji immunogennej lub szczepionki dla koni obejmującej adiuwant szczepionki według wynalazku, w którym wektor do ekspresji dodatkowo zawiera co najmniej jedną sekwencję nukleotydową kodującą co najmniej jeden koński immunogen lub co najmniej immunologicznie aktywny fragment immunogenu patogenu końskiego i dopuszczalną weterynaryjnie substancję pomocniczą lub nośnik.
PL 205 608 B1
Wynalazek obejmuje też kompozycję immunogenną lub szczepionkę dla koni obejmującą adiuwant szczepionki według wynalazku i co najmniej jeden immunogen koński lub co najmniej jeden immunologicznie aktywny fragment immunogenu patogenu końskiego i dopuszczalną weterynaryjnie substancję pomocniczą lub nośnik.
W zakres wynalazku wchodzi też adiuwant szczepionki lub nieswoisty immunostymulant dla koni składający się z białka końskiego GM-CSF wytworzonego przez układ ekspresyjny zawierający i wyraż ają cy sekwencję nukleotydową jak przedstawiona w Sekw. Id. Nr: 8.
Korzystnie układ ekspresyjny jest wektorem ekspresyjnym in vitro pochodzenia wirusowego lub plazmidowego.
Korzystnie wirusowym układem ekspresyjnym in vitro jest bakulowirus.
W zakres wynalazku wchodzi też kompozycja do immunostymulacji dla koni zawierająca nieswoisty immunostymulant według wynalazku i dopuszczalną weterynaryjnie substancję pomocniczą lub nośnik.
Wynalazek obejmuje też immunogenną kompozycję lub szczepionkę dla koni zawierającą adiuwant szczepionki według wynalazku, preparat immunogenu lub szczepionki przeciw patogenowi konia i dopuszczalną weterynaryjnie substancję pomocniczą lub nośnik.
Korzystnie preparat immunogenu lub szczepionki jest wybrany z grupy składającej się z preparatu inaktywowanego, preparatu żywego atenuowanego, preparatu podjednostkowego i preparatu zrekombinowanego.
Wynalazek dotyczy również zastosowania nieswoistych immunostymulantów według wynalazku do wytwarzania kompozycji do immunostymulacji dla koni.
Ponadto wynalazek obejmuje zastosowanie adiuwantów szczepionki według wynalazku do wytwarzania immunogennej kompozycji lub szczepionki dla koni, dodatkowo zawierającej immunogen koński lub preparat immunogenu lub szczepionki.
Sekwencja nukleotydowa może być wstawiona do konwencjonalnych układów ekspresyjnych in vivo pochodzenia wirusowego, takich jak bakulowirus, w szczególności namnażany w komórkach owadów, lub komórkach pochodzenia prokariotycznego (na przykład, Escherichia coli) lub eukariotycznego, w szczególności drożdży, zwłaszcza Saccharomyces cerevisiae, w komórkach eukariotycznych ssaków, zwłaszcza w komórkach chomika (na przykład, komórki jajnika chomika lub CHO) i komórkach koni. Układy ekspresyjne są transformowane sekwencją kodującą koński GM-CSF i w ten sposób produkowane jest białko GM-CSF konia, które wchodzi w skład stosowanego adiuwantu szczepionki i niespecyficznego stymulatora odporności.
Korzystnie, sekwencja wykorzystana w niniejszym wynalazku jest wprowadzana do tych wektorów ekspresyjnych in vivo w warunkach pozwalających na ekspresję u konia funkcjonalnego białka GM-CSF konia i ewentualnie sekwencji nukleotydowej kodującej przynajmniej jeden immunogen lub przynajmniej jeden fragment immunologicznie aktywny. Te wektory ekspresyjne mogą być plazmidami, wektorami wirusowymi, takimi jak wirus ospy, na przykład, wirus krowianki, wirusy ospy ptasiej (ospa kanarka, Fowl Pox), w tym wirusów ospy specyficznych w stosunku do gatunku (ospa świń, ospa szopów, ospa wielbłądów), adenowirusy i wirusy opryszczki, takie jak wirusy opryszczki konia.
Określenie „plazmid” obejmuje dowolną jednostkę transkrypcji DNA w postaci sekwencji polinukleotydowej zawierającej sekwencję genu końskiego GM-CSF i elementów wymaganych do jego ekspresji in vivo. Korzystna jest postać kolista plazmidu, superzwinięta lub nie. Postać liniowa także mieści się w zakresie tego wynalazku.
Każdy plazmid zawiera promotor zdolny do zapewnienia w komórkach gospodarza ekspresji genu wstawionego pod jego kontrolą. Chodzi na ogół o silny promotor eukariotyczny i w szczególności o wczesny promotor cytomegalowirusa CMV-IE, pochodzenia ludzkiego lub mysiego, lub ewentualnie innego pochodzenia, takiego jak szczur, świnka morska. Bardziej ogólnie promotor jest pochodzenia wirusowego albo pochodzenia komórkowego. Jako promotor wirusowy inny niż CMV-IE można wymienić wczesny lub późny promotor wirusa SV40 lub promotor LTR wirusa mięsaka Rousa. Może to być również promotor wirusa, z którego pochodzi gen, na przykład, własny promotor genu. Jako promotor komórkowy można wymienić promotor genu cytoszkieletu, taki jak, na przykład, promotor desminy lub promotor aktyny. Gdy kilka genów jest obecnych na tym samym plazmidzie, mogą one być obecne w tej samej jednostce transkrypcyjnej lub w dwóch różnych jednostkach.
Plazmidy mogą także zawierać inne elementy regulacji transkrypcji, takie jak, na przykład, sekwencje stabilizujące, takie jak intron, korzystnie intron II genu β-globiny królika (van Ooyen i wsp., Science, 1979, 206: 337-344), sekwencja sygnałowa białka kodowanego przez gen tkankowego aktywatora
PL 205 608 B1 plazminogenu (tPA; Montgomery i wsp. Cell. Mol. Biol. 1997, 43: 285-292) i sygnał poliadenylacji (poliA) w szczególności z genu bydlęcego hormonu wzrostu (bGH) (US-A-5 122 458) lub z genu β-globiny królika.
Wynalazek obejmuje również kompozycje immunogenne i szczepionki zawierające końskie białko GM-CSF a i przynajmniej jeden preparat immunogenu lub szczepionki konia i zaróbkę lub nośnik dopuszczalny w weterynarii. Pojęcie preparatu immunogenu obejmuje tu dowolny preparat, który jest zdolny po podaniu koniowi do indukowania odpowiedzi odpornościowej skierowanej przeciwko rozważanemu końskiemu patogenowi, która jest wzmagana przez obecność białka GM-CSF. Korzystnie jest to preparat szczepionki zdolny do indukcji skutecznej ochrony lub pewnego stopnia ochrony przed patogenem, stopnia ochrony, który jest zwiększany przez obecność białka końskiego GM-CSF. Preparaty immunogenu i szczepionki będące składnikiem kompozycji według wynalazku obejmują wszystkie znane typy, takie jak inaktywowane preparaty, żywe atenuowane preparaty, preparaty podjednostkowe i preparaty rekombinantowe (przy użyciu wektora do ekspresji in vivo, w szczególności pochodzenia wirusowego lub plazmidowego). Jak widać powyżej, białko GM-CSF można dodać jako takie do preparatu immunogenu lub szczepionki, aby wytworzyć, w obecności zarobki lub nośnika dopuszczalnego w weterynarii, kompozycję immunogenną lub szczepionkę gotową do podania. Białko GM-CSF można też połączyć z systemem do przedłużonego uwalniania zaprojektowanym do stopniowego uwalniania białka.
Zgodnie z bardziej korzystnym wykonaniem wynalazku korzystne jest jednak wyrażanie białka GM-CSF in vivo przy użyciu wektora do ekspresji in vivo, takiego jak opisano powyżej. W tym przypadku korzystne jest także, aby preparat immunogenu lub szczepionki był typu rekombinantowego, opartego na zastosowaniu wektora ekspresyjnego in vivo, tego samego lub innego typu. Można również stosować ten sam wektor ekspresyjny in vivo zawierający i wyrażający przynajmniej jeden immunogen końskiego patogenu i końskiego białka GM-CSF.
Zalety stosowania GM-CSF do szczepień polegają w szczególności na zmniejszaniu dawki używanego immunogenu lub wektora lub DNA. Ponadto u niektórych zwierząt, które nie reagują w czasie podawania zwykłej szczepionki, zastosowanie GM-CSF pozwala na stymulację odpowiedzi odpornościowej i jej zwiększenie aż do poziomu ochronnego.
Obecny wynalazek obejmuje więc korzystnie kompozycje immunogenne i szczepionki zawierające:
- wektor do ekspresji in vivo zawierający sekwencję nukleotydową kodującą koński GM-CSF, w warunkach pozwalających na ekspresję u konia funkcjonalnego białka końskiego GM-CSF,
- przynajmniej jeden wektor do ekspresji in vivo zawierający przynajmniej jedną sekwencję nukleotydową kodującą przynajmniej jeden koński immunogen; przy czym rozumie się, że ten wektor lub niektóre lub wszystkie te wektory (gdy jest kilka wektorów kodujących różne immunogeny) mogą w ten sposób stanowić także wektor GM-CSF (wektor zawiera przynajmniej jedną sekwencję GM-CSF i jedną sekwencję immunogenną), i
- zaróbkę lub nośnik dopuszczalny w weterynarii.
Przykłady konstruktów plazmidowych do stosowania w tym wynalazku zawierających koński immunogen, są podane w publikacji WO-A-9803198. Wynalazek obejmuje także szczepionki DNA zawierające plazmid kodujący i wyrażający równocześnie koński GM-CSF i przynajmniej jeden koński immunogen.
Wynalazek dotyczy wszystkich końskich patogenów. Można wymienić bardziej konkretnie następujące patogeny: wirus opryszczki końskiej typu 1 lub typu 4 (a korzystnie kombinacja obu typów), wirus grypy końskiej, tężec, Borrelia burgdorferi, wschodnie, zachodnie i wenezuelskie końskie zapalenie mózgu, wirus wścieklizny. Dla szczepionek podjednostkowych i szczepionek zrekombinowanych, końskie immunogeny są korzystnie wybrane z grupy zawierającej glikoproteiny gB, gC i gD wirusa opryszczki końskiej typu 1 lub typu 4, hemaglutyniny (HA) i nukleoproteiny (NP) wirusa grypy końskiej, fragment podjednostkowy C toksyny tężca, białko OspA Borrelia burgdorferi, geny E2 i C wschodniego, zachodniego i wenezuelskiego końskiego zapalenia mózgu i gen G wirusa wścieklizny.
Przedmiotem obecnego wynalazku są również kompozycje, które są nieswoistymi stymulatorami odporności tj. mogą być stosowane jako ogólny stymulator odporności u koni.
Kompozycje te podawane są zarówno w obecności jak i w nieobecności deklarowanych warunków patologicznych, na ogół niezależnie od jakiejkolwiek szczepionki, w celu wzmocnienia mechanizmów obronnych konia. Kompozycje te zawierają GM-CSF we wszystkich postaciach opisanych powyżej, białko lub rekombinant, korzystnie rekombinant (wirusowy lub plazmidowy wektor do ekspresji in vivo) i zaróbkę lub podłoże dopuszczalne w weterynarii. Cechy tych wektorów były już opisane.
PL 205 608 B1
Kompozycje, które są nieswoistymi stymulatorami i kompozycje immunogenne i szczepionki według wynalazku mogą także zawierać jeden lub więcej adiuwantów odporności, w szczególności wybranych z tych, zwyczajowo stosowanych w szczepieniu koni przeciw rozważanemu patogenowi (om). Kompozycje stymulujące i konwencjonalne (inaktywowane, żywe atenuowane, podjednostki) kompozycje immunogenne i szczepionki mogą też zawierać jako klasyczny adiuwant związki typu karbomer lub wodorotlenek glinu, lub być formułowane w postaci emulsji olej w wodzie. Dla kompozycji stymulujących i kompozycji immunogennych i szczepionek zrekombinowanych opartych na wirusowym wektorze ekspresyjnym odpowiednie są emulsje olej-w-wodzie.
Zgodnie z korzystnym sposobem wykonania wynalazku dla kompozycji stymulujących typu plazmidowego i kompozycji immunogennych i szczepionek typu plazmidowego, plazmid kodujący i wyrażający koński GM-CSF, plazmid kodujący i wyrażający GM-CSF i przynajmniej jeden koński immunogen jak i mieszaniny plazmidów zawierających ten ostatni i przynajmniej jeden koński immunogen mogą być korzystnie formułowane z użyciem lipidu kationowego zawierającego czwartorzędową sól amoniową, o wzorze:
ch3
R. - O - CH2 - CH - CH2 - N--R2 - X
OR. CH3 w którym R1 oznacza liniową resztę alifatyczną, nasyconą lub nienasyconą, mającą 12 do 18 atomów węgla. R2 oznacza inną resztę alifatyczną zawierającą 2 lub 3 atomy węgla, a X oznacza grupę hydroksylową lub aminową.
Korzystnie jest to DMRIE (N-(2-hydroksyetylo)-N,N-dimetylo-2,3-bis(tetradecyloksy)-1-propanoamoniowy; WO-A-9634109), korzystnie sprzężony z obojętnym lipidem, w szczególności DOPE (dioleilo-fosfatydylo-etanolamina), aby korzystnie tworzyć DMRIE-DOPE. Korzystnie mieszaninę zrekombinowanego wektora z tym adiuwantem przyrządza się bezpośrednio przed użyciem i korzystnie pozostawia do skompleksowania, na przykład, przez czas w zakresie od 10 do 60 minut, konkretnie około 30 minut przed podaniem jej zwierzęciu.
Gdy DOPE jest obecny, stosunek molarny DMRIE- DOPE wynosi korzystnie od 95 : 5 do 5 : 95, bardziej szczególnie 1 : 1.
Stosunek wagowy plazmid : adiuwant DMRIE i/lub DMRIE : DOPE może być w zakresie od 50 : 1 do 1 : 10 szczególnie od 10 : 1 do 1 : 5, korzystnie od 1 : 1 do 1 : 2.
Według innego korzystnego wykonania wynalazku dla kompozycji stymulujących typu rekombinowanego i kompozycji immunogennych i szczepionek typu rekombinowanego (wektor wirusowy lub plazmid) można stosować jako adiuwant polimery kwasu akrylowego lub metakrylowego lub kopolimery bezwodnika maleinowego i pochodnej alkenylowej. Korzystne są usieciowane, polimery kwasu akrylowego lub metakrylowego w szczególności korzystne są etery polialkenylowe cukrów lub polialkoholi. Związki te są znane jako karbomer (Pharmeuropa vol. 8, nr 2, czerwiec 1996). Specjalista w dziedzinie może też odnieść się do US-A-2 909 462, w którym opisane są takie polimery akrylowe usieciowane przez związek polihydroksylowany mający przynajmniej 3 grupy hydroksylowe, korzystnie nie więcej niż 8, i w którym przynajmniej trzy hydroksylowe atomy wodoru są zastąpione przez nienasycone reszty alifatyczne mające przynajmniej dwa atomy węgla. Korzystne są te reszty, które zawierają 2 do 4 atomów węgla, na przykład, winylowe, allilowe i inne grupy etylenowo nienasycone. Reszty nienasycone mogą same zawierać inne podstawniki, takie jak metyl. Szczególnie odpowiednie są produkty sprzedawane pod nazwą Carbopol® (BF Goodrich, Ohio, USA). Są one usieciowane przez alilosacharozę lub allilopentaerytritol. Wśród tych produktów można wymienić Carbopol® 974P, Carbopol®934P i Carbopol®971P.
Wśród kopolimerów bezwodnika maleinowego i pochodnej alkenylu, korzystne są EMA® (Monsanto), które są kopolimerami bezwodnika maleinowego i etylenu, liniowymi lub usieciowanymi, na przykład, usieciowanymi przez eter diwinylowy. Można odnieść się do publikacji J. Fields i wsp. Nature,
PL 205 608 B1
186: 778-780, 4 czerwca 1960. Pod względem ich budowy polimery kwasu akrylowego lub metakrylowego i EMA® są złożone korzystnie z jednostek podstawowych o następującym wzorze:
τ τ
----ę-(CH2) χ-ę-(CH2) y---COOH COOH
- w którym R1 i R2, które mogą być takie same lub różne, oznaczają H lub CH3, x = 0 lub 1, korzystnie x = 1, y = 1 lub 2, przy czym x + y = 2.
Dla EMA® x = 0 i y = 2. Dla karbomerów x = y = 1.
Przez rozpuszczenie tych polimerów w wodzie otrzymuje się kwaśny roztwór, który zostaje zobojętniony, korzystnie do pH fizjologicznego, i tworzy się roztwór adiuwantu, do którego będzie włączona sama szczepionka jako taka. Grupy karboksylowe polimeru są wówczas częściowo w postaci COO-.
Korzystnie wytwarza się roztwór karbomeru lub EMA® w wodzie destylowanej, korzystnie w obecności chlorku sodu, a otrzymany roztwór ma kwaśne pH. Ten roztwór wyjściowy rozcieńcza się dodając go lub znaczną jego część do wymaganej ilości (dla uzyskania żądanego stężenia końcowego) wody z dodatkiem NaCl, korzystnie soli fizjologicznej (NaCl 9 g/l) w całości lub w kilku partiach wraz z równoczesnym lub późniejszym zobojętnieniem (pH 7,3 do 7,4), korzystnie za pomocą NaOH. Ten roztwór o pH fizjologicznym będzie użyty, jako taki, do zmieszania z preparatem immunogenu lub szczepionką w szczególności konserwowaną w postaci zliofilizowanej, ciekłej lub zamrożonej.
Stężenie polimeru w końcowej kompozycji szczepionki będzie w zakresie od 0,01% do 2% wagowo/objętościowych, zwłaszcza od 0,06 do 1% wagowo/objętościowego, najbardziej korzystnie od 0,1 do 0,6% wagowo/objętościowego.
W innym wykonaniu wynalazku podaje się nieswoisty immunostymulant lub adiuwant wykorzystany w zastosowaniach według wynalazku w celu stymulowania odporności i/lub immunizacji, i/lub szczepienia gatunków koni. Podanie jest korzystnie przeprowadzane na drodze pozajelitowej, takiej jak droga domięśniowa, doskórna lub podskórna. Można je przeprowadzić jeden raz lub wielokrotnie.
Ilość DNA stosowana w kompozycjach stymulujących i kompozycjach immunogennych i szczepionkach według wynalazku wynosi około 10 μg do około 2000 μg, a korzystnie około 50 μg do około 1000 μg dla danego plazmidu. Specjalista ma odpowiednie kompetencje, aby dokładnie określić skuteczną dawkę DNA do stosowania dla każdego protokołu terapeutycznego lub szczepienia.
Jeśli stosowany jest żywy wektor, dawki mogą być w zakresie między 104 i 1010 pfu (jednostek tworzących łysinki), korzystnie między 106 i 108 pfu.
Dla kompozycji zawierającej białko GM-CSF dawki mogą być w zakresie między 1 μg i 5 mg, korzystnie między 50 μg i 1 mg.
Objętości dawek mogą być konkretnie w zakresie między 0,5 i 5 ml, korzystnie między 2 i 3 ml.
W opisie wyraz „zawiera” lub „zawierający” należy rozumieć jako obecność określonego elementu, liczby całkowitej lub etapu, lub grupy elementów, liczb całkowitych lub etapów, ale nie wykluczenie jakiegoś innego elementu, liczby całkowitej lub etapu lub grupy elementów, liczb całkowitych lub etapów.
Wynalazek będzie obecnie omówiony bardziej szczegółowo za pomocą sposobów wykonania jako nieograniczających przykładów i odnoszących się do rysunków, w których:
Fig. 1: Sekwencje genu i białka końskiego GM-CSF,
Fig. 2: Mapa restrykcyjna plazmidu pJP097.
Lista sekwencji Sekw. Id. Nr dla konstruktów
Sekw. Id. Nr 1 Oligonukleotyd JP705
Sekw. Id. Nr 2 Oligonukleotyd JP706
Sekw. Id. Nr 3 Oligonukleotyd JP729
Sekw. Id. Nr 4 Oligonukleotyd JP730
Sekw. Id. Nr 5 Oligonukleotyd JP731
Sekw. Id. Nr 6 Oligonukleotyd JP734
PL 205 608 B1
Sekw. Id. Nr 7 Oligonukleotyd JP735
Sekw. Id. Nr 8 Sekwencja genu końskiego GM-CSF (patrz Fig. 1)
Sekw. Id. Nr 9 Sekwencja białka końskiego GM-CSF (patrz Fig. 1)
P r z y k ł a d y
Wszystkie konstrukty plazmidowe wytworzono stosując standardowe techniki biologii molekularnej (klonowanie, trawienie enzymami restrykcyjnymi, synteza komplementarnego DNA jednoniciowego, reakcja łańcuchowa polimerazy, wydłużanie oligonukleotydu przez polimerazę DNA itd.) opisane przez Sambrook i wsp. (Molecular Cloning: A Laboratory Manual, wyd. 2. Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, Nowy Jork, 1989). Wszystkie fragmenty restrykcyjne stosowane w tym wynalazku jak i różne fragmenty po reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR) wyizolowano i oczyszczono za pomocą zestawu „Geneclean®” (BIO101 Inc. La Jolla, CA).
P r z y k ł a d 1. Przygotowanie całkowitego RNA z końskich limfocytów stymulowanych mitogenami in vitro
Krew konia zebrano w probówce zawierającej EDTA przez pobranie krwi z żyły szyjnej. Komórki jednojądrzaste zebrano przez wirowanie w gradiencie Ficollu, a następnie umieszczono je w hodowli na szalce Petri'ego o średnicy 60 mm. Końskie komórki jednojądrzaste w hodowli stymulowano następnie albo konkanawaliną A (conA) (stężenie końcowe około 5 μg/ml) albo fitohemaglutyniną (PHA) (stężenie końcowe około 10 μg/ml). Po stymulacji limfoblasty „ConA” i „PHA” zebrano przez zeskrobanie z szalek hodowlanych, a całkowity RNA z tych komórek ekstrahowano stosując zestaw „mRNA isolation kit for White Blood Wells” (Boehringer Mannheim/Roche Cat # 1 934 325).
P r z y k ł a d 2. Izolacja genu kodującego koński GM-CSF
Zsyntetyzowano oligonukleotydy JP705 i JP706 o następujących sekwencjach:
JP705 (Sekw. Id. Nr 1) (20 merów)
5' TGGGCACTGTGGYCTGCAGC 3'
JP706 (Sekw. Id. Nr 2) (17 merów)
5' AGCATGTGRATGCCATC 3'
Te oligonukleotydy stosowano z zestawem 5'/3'RACE (Boehringer Mannheim/Roche Cat # 1 734 792), aby wygenerować klony 3'RACE 6S4, 6W6 i 6W7. Sekwencja konsensusowa 3' uzyskana na podstawie tych 3 klonów była stosowana do syntezy oligonukleotydów JP729, JP730 i JP731, które miały posłużyć do wytwarzania odpowiednich klonów 5'RACE:
JP729 (Sekw. Id. Nr 3) (21 merów)
5' AGCTCCCAGGGCTAGCTCCTA 3'
JP730 (Sekw. Id. Nr 4) (21 merów)
5' CCCTGTTTGTACAGCTTCAGG 3'
JP731 (Sekw. Id. Nr 5) (21 merów)
5' TGTTGTTCAGAAGGCTCAGGG 3'
Odpowiednie klony 5'RACE, które uzyskano, były klonami 7D2 i 7D10. Sekwencje konsensusowe wygenerowane na podstawie klonów 3'RACE i klonów 5'RACE zastosowano do amplifikacji całej sekwencji genu końskiego GM-CSF zgodnie z techniką odwrotnej transkrypcji, po której nastąpiła PCR. Całkowity RNA wyekstrahowany z końskich limfocytów stymulowanych ConA lub PHA (przykład 1) był stosowany jako matryca do syntezy pierwszej nici DNA komplementarnego. Ta pierwsza nić DNA komplementarnego była wytworzona przez wydłużenie oligonukleotydu p(dT)15 (Boehringer Mannheim/Roche Cat # 814 270). Uzyskany jednoniciowy komplementarny DNA zastosowano następnie jako matrycę do reakcji PCR z następującymi oligonukleotydami:
JP734 (Sekw. Id. Nr 6) (44 mery)
5' CATCATCATGTCGACGCCACCATGTGGCTGCAGAACCTGCTTCT 3' i
JP735 (Sekw. Id. Nr 7) (41 merów)
5' CATCATCATGCGGCCGCTACTTCTGGGCTGCTGGCTTCCAG 3', aby zamplifikować fragment PCR wielkości około 500 par zasad (bp). Ten fragment oczyszczono za pomocą elektroforezy w żelu agarozowym (= fragment A).
P r z y k ł a d 3: Konstrukcja plazmidu pJP097 i sekwencji genu końskiego GM-CSF
Fragment A (przykład 2) strawiono Notl i SalI i uzyskany w ten sposób fragment Notl-Sall zligowano z plazmidem pVR1012 (Hartikka i wsp. Human Gene Therapy. 1996. 7. 1205-1217), uprzednio strawionym Notl i SalI, aby uzyskać plazmid pJP097 (5334 bp, Fig. 2). Fragment Notl-Sall sklonowany w tym plazmidzie był zsekwencjonowany w całości. Ta sekwencja (Sekw. Id. Nr 8), która koduje białko o wielkości 144 aminokwasów (Sekw. Id. Nr 9), jest końską cytokiną GM-CSF przedstawioną na Fig. 1.
PL 205 608 B1
P r z y k ł a d 4: Aktywność biologiczna in vitro produktu genu końskiego GM-CSF
Komórki CHO-K1 (komórki jajnika chomika, dostępne z biblioteki szczepów American Type Culture Collection pod numerem dostępu CCL-61) hodowano w podłożu Minimal Essential Medium czyli
MEM (Gibco-BRL) w szalkach Petr'ego o średnicy 60 mm i transfekowano je 5 μg plazmidu pJP097 uprzednio skompleksowanego 10 μl LipofectAmine PLUS® (Nr kat. 10964-013, Gibco-BRL, Cleveland, OH, USA). Warunki tworzenia kompleksów DNA/LipofectAmine® i transfekcji komórek były zgodne z zaleceniami dostawcy (Gibco-BRL). 48 godzin po transfekcji supernatanty hodowli zebrano i zamrożono.
Komórki szpiku kostnego pobrane od świń hodowano na podłożu półstałym Methocult (Kat # H4230 StemCell Technologies). Do tych hodowli następnie dodano lub nie dodano (kontrola negatywna) 10 μl supernatantu z hodowli komórek transfekowanych plazmidem pJP097. Przeprowadzono dwie niezależne transfekcje plazmidem pJP097, którym nadano kody pJP097 T1 i pJP097 T2. Każdy supernatant (10 μl rozcieńczonych dziesięciokrotnie) testowano równolegle na trzech płytkach hodowlanych. Kontrolę negatywną stanowił supernatant z hodowli CHO. Po 14 dniach hodowli płytki badano pod kątem tworzenia się kolonii makrofagów i zliczono powstałe kolonie.
Supernatanty komórek CHO transfekowanych plazmidem pJP097 dały następujące wyniki:
| Plazmid/rozcieńczenie supernatantu | liczba płytek | średnia liczba kolonii na płytkę | odchylenie standardowe |
| kontrola | 3 | 0 | 0 |
| pJP097 T1 (eGM-CSF) | 3 | 12 | 2 |
| pJP097 T2 (eGM-CSF) | 3 | 15 | 0 |
Wyniki te wskazują, że produkt genu końskiego GM-CSF wyrażany przez plazmid pJP097 ma aktywność typu GM-CSF wobec komórek in vitro.
P r z y k ł a d 5: Przygotowanie plazmidów stosowanych w wynalazku
Do przygotowania plazmidów przeznaczonych do szczepienia koni, można stosować dowolną technikę umożliwiającą otrzymanie zawiesiny oczyszczonych plazmidów. Techniki te są dobrze znane specjalistom. Plazmidy te wytwarza się przez hodowanie bakterii Escherichia coli K12 transformowanych plazmidami stosowanymi w niniejszym wynalazku. Można w szczególności wymienić technikę lizy alkalicznej, po której następują dwa kolejne ultrawirowania w gradiencie chlorku cezu w obecności bromku etydyny, jak opisano w Sambrook J i wsp. (Molecular Cloning: A Laboratory Manual, wyd. 2, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY, 1989). Można też odnieść się do zgłoszeń patentowych WO-A-95/21250 i WO-A-96/02658, w których opisano sposoby wytwarzania na skalę przemysłową plazmidów do stosowania do szczepień. Dla celów wytwarzania szczepionek, plazmidy zawiesza się, aby otrzymać roztwory o wysokim stężeniu (>2 mg/ml) odpowiednim do przechowywania. W tym celu plazmidy zawiesza się albo w wodzie ultraczystej albo w buforze TE (10 mM Tris-HCl; 1 mM EDTA; pH 8,0).
P r z y k ł a d 6: Wytwarzanie szczepionek według wynalazku i ich podawanie
Roztwór wyjściowy plazmidu pJP097 rozcieńcza się buforem TE, solą fizjologiczną lub buforem PBS i miesza z różnymi plazmidami szczepionkowymi wyrażającymi ochronne immunogeny. Mogą to być plazmidy, na przykład, cytowane w przykładach zgłoszenia patentowego PCT WO 98/03198.
Konie szczepi się dawkami 100 μg, 250 μg lub 500 μg na plazmid.
Tak otrzymane różne mieszaniny plazmidów „immunogennych” i plazmidu pJP097 „końskiego GM-CSF” są podawane razem drogą domięśniową (strzykawka + igła) do mięśni szyi lub klatki piersiowej. W tym przypadku dawki szczepionek są wstrzykiwane w objętości 2 ml.
Iniekcje domięśniowe można też przeprowadzać stosując aparat do iniekcji typu jet (bez igły), który strzela dawkę, na przykład, 0,5 ml. Jeśli jest to konieczne, można przeprowadzić kilka kolejnych podań u tego samego zwierzęcia, aby wstrzyknąć objętości większe od 0,5 ml. Kolejne strzały przeprowadza się wówczas w różnych miejscach tak, aby strefy wstrzykiwania były rozdzielone o około 1 do 2 centymetrów.
Iniekcje można także przeprowadzić na drodze doskórnej stosując aparat strumieniowy do iniekcji (bez igły) dostarczający dawkę 0,2 ml w pięciu punktach (0,04 ml na miejsce wstrzyknięcia) (na przykład aparat PIGJET® Endoscoptic, Laon, Francja).
PL 205 608 B1
Konie szczepi się typowo podając dwie iniekcje mieszaninami plazmidów, stosowanych w niniejszym wynalazku, przeprowadzone w odstępach 4-5 tygodni.
P r z y k ł a d 7. Formulacja plazmidów stosowanych w wynalazku
Mieszaninę plazmidów stosowanych w niniejszym wynalazku i plazmidu pJP097 rozcieńcza się buforem TE, solą fizjologiczną lub buforem PBS tak, aby otrzymać stężenie 1 mg/ml. Przygotowuje się 0,75 mM roztwór DMRIE-DOPE przez zawieszenie liofilizatu DMRIE-DOPE w odpowiedniej objętości jałowej wody.
Tworzenie kompleksów plazmidowy DNA-lipid przeprowadza się przez rozcieńczenie w równych częściach 0,75 mM roztworu DMRIE-DOPE roztworem DNA 1 mg/ml. Roztwór DNA wprowadza się stopniowo za pomocą sterylnej igły 26G wzdłuż ściany butelki zawierającej roztwór kationowego lipidu, tak aby uniknąć wytwarzania piany. Następnie miesza się łagodnie od momentu, gdy dwa roztwory zmieszają się. Otrzymuje się w końcu kompozycję zawierającą 0,375 mM DMRIE-DOPE i 500 μg/ml DNA.
Jest wskazane, aby wszystkie stosowane roztwory były w temperaturze otoczenia we wszystkich opisanych powyżej operacjach. Kompleksowanie DNA/DMRIE-DOPE przebiega w temperaturze otoczenia przez 30 minut przed immunizacją zwierząt, jak to opisano w przykładzie 6.
Należy rozumieć, że wynalazek określony przez załączone zastrzeżenia nie jest ograniczony do poszczególnych sposobów wykonania wskazanych w powyższym opisie, ale obejmuje warianty, które nie wykraczają poza kontekst ani ducha niniejszego wynalazku.
PL 205 608 B1
Lista sekwencji <110> MERIAL <120> Equine GM-CSF <130> GM-CSF konia <140> numer wynalazku <141> data zgłoszenia wynalazku <160 9 <170 Patentin Ver. 2.1 <210 1 <211> 20 <212> DNA <213> Sekwencja Syntetyczna <220 <223> Opis Sekwencji Syntetycznej: oligonukleotyd <400> 1 tgggcactgt ggyctgcagc 20 <210 2 <211> 17 <212> DNA <213> Sekwencja Syntetyczna <220 <223> Opis Sekwencji Syntetycznej: oligonukleotyd <400 2 agcatgtgra tgccatc 17 <210 3 <211> 21 <212> DNA <213> Sekwencja Syntetyczna <220 <223> Opis Sekwencji Syntetycznej:
oligonukleotyd , <400> 3 agctcccagg gctagctcct a 21 <210> 4 <211> 21 <212> DNA <213> Sekwencja Syntetyczna <220>
<223> Opis Sekwencji Syntetycznej
PL 205 608 B1 oligonukleotyd <400 4 ccctgtttgt acagcttcag g 21 <210> 5 <211> 21 <212> DNA <213> Sekwencja Syntetyczna <220>
<223> Opis Sekwencji Syntetycznej: oligonukleotyd <40 0 5 tgttgttcag aaggctcagg g 21 <210 6 <211> 44 <212> DNA <213> Sekwencja Syntetyczna <220>
<223> Opis Sekwencji Syntetycznej: oligonukleotyd <400> 6 catcatcatg tcgacgccac catgtggctg cagaacctgc ttct 44 <210> 7 <211> 41 <212> DNA <213> Sekwencja Syntetyczna <220>
<223> Opis Sekwencji Syntetycznej: oligonukleotyd <400 7 catcatcatg cggccgctac ttctgggctg ctggcttcca g 41 <210> 8 <211> 435 <212> DNA <213> Equus sp.
<400> 8 atgtggctgc cgccaaccca agccttctga tctgaaacgt cagggcttgc tacaagcagc aaaagtttca ccagcccaga
| agaacctgct | tcttctgggc | actgtggttt | acagcatgcc | cgcacccacc | 60 |
| gccctgtcac | tcggccctgg | cagcatgtgg | atgccatcaa | ggaggccctg | 120 |
| acaacagtag | tgacactgct | gctatcatga | atgaaacagt | agaagtcgtc | 180 |
| ttgacgccga | ggagctgaca | tgcctgcaga | ctcgcctgaa | gctgtacaaa | 240 |
| ggggcagcct | catcaagctc | gaaggcccct | tgaccatgat | ggccagccac | 300 |
| actgcccccc | caccctggaa | acttcctgtg | caacccagat | gatcaccttc | 360 |
| aaaagaacct | gaaggatttt | ctgtttgaga | tcccgtttga | ctgctggaag | 420 |
| agtaa | 435 |
PL 205 608 B1 <210> 9 <211> 144 <212> PRT <213> Equus sp <400> 9
| Met 1 | Trp | Leu | Gin | Asn 5 | Leu | Leu | Leu | Leu | Gly 10 | Thr | Val | Val | Tyr | Ser 15 | Met |
| Pro | Ala | Pro | Thr 20 | Arg | Gin | Pro | Ser | Pro 25 | Val | Thr | Arg | Pro | Trp 30 | Gin | His |
| Val | Asp | Ala 35 | Ile | Lys | Glu | Ala | Leu 40 | Ser | Leu | Leu | Asn | Asn 45 | Ser | Ser | Asp |
| Thr | Ala 50 | Ala | Ile | Met | Asn | Glu 55 | Thr | Val | Glu | Val | Val 60 | Ser | Glu | Thr | Phe |
| Asp 65 | Ala | Glu | Glu | Leu | Thr 70 | Cys | Leu | Gin | Thr | Arg 75 | Leu | Lys | Leu | Tyr | Lys 80 |
| Gin | Gly | Leu | Arg | Gly 85 | Ser | Leu | Ile | Lys | Leu 90 | Glu | Gly | Pro | Leu | Thr 95 | Met |
| Met | Ala | Ser | His 100 | Tyr | Lys | Gin | His | Cys 105 | Pro | Pro | Thr | Leu | Glu 110 | Thr | Ser |
| Cys | Ala | Thr 115 | Gin | Met | Ile | Thr | Phe 120 | Lys | Ser | Phe | Lys | Lys 125 | Asn | Leu | Lys |
| Asp | Phe 130 | Leu | Phe | Glu | Ile | Pro 135 | Phe | Asp | Cys | Trp | Lys 140 | Pro | Ala | Gin | Lys |
Zastrzeżenia patentowe
Claims (18)
- Zastrzeżenia patentowe1. Adiuwant szczepionki lub nieswoisty immunostymulant dla koni, znamienny tym, że obejmuje wektor do ekspresji in vivo zawierający sekwencję nukleotydową jak przedstawiona w Sekw. Id. Nr: 8 kodującą koński GM-CSF w warunkach umożliwiających ekspresję u konia funkcjonalnego białka GM-CSF.
- 2. Adiuwant szczepionki lub nieswoisty immunostymulant według zastrz. 1, znamienny tym, że wektor jest wektorem wirusowym lub plazmidem.
- 3. Adiuwant szczepionki lub nieswoisty immunostymulant według zastrz. 2, znamienny tym, że wektor jest wybrany z grupy składającej się z wirusa ospy, adenowirusa i wirusa opryszczki.
- 4. Adiuwant szczepionki lub nieswoisty immunostymulant według zastrz. 3, znamienny tym, że wirus opryszczki jest wirusem opryszczki końskiej.
- 5. Adiuwant szczepionki lub nieswoisty immunostymulant według zastrz. 3 znamienny tym, że wirus ospy jest wybrany z grupy składającej się z wirusa krowianki, wirusa ospy kanarków, wirusa ospy ptasiej, wirusa ospy świń, wirusa ospy szopów i wirusa ospy wielbłądów.
- 6. Kompozycja do immunostymulacji dla koni, znamienna tym, że obejmuje nieswoisty immunostymulant określony w zastrz. 1-5, i dopuszczalną weterynaryjnie substancję pomocniczą lub nośnik.
- 7. Kompozycja immunogenna lub szczepionka dla koni, znamienna tym, że obejmuje adiuwant określony w zastrz. 1-5, preparat immunogenu lub szczepionki przeciw patogenowi końskiemu i dopuszczalną weterynaryjnie substancję pomocniczą lub nośnik.
- 8. Kompozycja immunogenna lub szczepionka dla koni według zastrz. 7, znamienna tym, że preparat immunogenu lub szczepionki jest wybrany z grupy składającej się z preparatu inaktywowanego, preparatu żywego atenuowanego, preparatu podjednostkowego i preparatu rekombinowanego.PL 205 608 B1
- 9. Kompozycja immunogenna lub szczepionka dla koni, znamienna tym, że obejmuje adiuwant szczepionki określony w zastrz. 1-5, w którym wektor do ekspresji in vivo dodatkowo zawiera co najmniej jedną sekwencję nukleotydową kodującą co najmniej jeden koński immunogen lub co najmniej immunologicznie aktywny fragment immunogenu patogenu końskiego i dopuszczalną weterynaryjnie substancję pomocniczą lub nośnik.
- 10. Kompozycja immunogenna lub szczepionka dla koni, znamienna tym, że obejmuje adiuwant szczepionki określony w zastrz. 1-5 i co najmniej jeden immunogen koński lub co najmniej jeden immunologicznie aktywny fragment immunogenu patogenu końskiego i dopuszczalną weterynaryjnie substancję pomocniczą lub nośnik.
- 11. Adiuwant szczepionki lub nieswoisty immunostymulant dla koni, znamienny tym, że składa się z białka końskiego GM-CSF wytworzonego przez układ ekspresyjny zawierający i wyrażający sekwencję nukleotydową jak przedstawiona w Sekw. Id. Nr: 8.
- 12. Adiuwant szczepionki lub nieswoisty immunostymulant według zastrz. 11, znamienny tym, że układ ekspresyjny jest wektorem ekspresyjnym in vitro pochodzenia wirusowego lub plazmidowego.
- 13. Adiuwant szczepionki lub nieswoisty immunostymulant według zastrz. 12, znamienny tym, że wirusowym układem do ekspresji in vitro jest bakulowirus.
- 14. Kompozycja do immunostymulacji dla koni, znamienna tym, że zawiera nieswoisty immunostymulant określony w zastrz. 11-13 i dopuszczalną weterynaryjnie substancję pomocniczą lub nośnik.
- 15. Immunogenna kompozycja lub szczepionka dla koni, znamienna tym, że zawiera adiuwant szczepionki określony w zastrz. 11-13, preparat immunogenu lub szczepionki przeciw patogenowi konia i dopuszczalną weterynaryjnie substancję pomocniczą lub nośnik.
- 16. Immunogenna kompozycja lub szczepionka dla koni według zastrz. 15, znamienna tym, że preparat immunogenu lub szczepionki jest wybrany z grupy składającej się z preparatu inaktywowanego, preparatu żywego atenuowanego, preparatu podjednostkowego i preparatu zrekombinowanego.
- 17. Zastosowanie nieswoistego immunostymulanta określonego w zastrz. 1-5, 11-13 do wytwarzania kompozycji do immunostymulacji dla koni.
- 18. Zastosowanie adiuwanta szczepionki określonego w zastrz. 1-5, 11-13 do wytwarzania immunogennej kompozycji lub szczepionki dla koni, dodatkowo zawierającej immunogen koński lub preparat immunogenu lub szczepionki.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US13884399P | 1999-06-10 | 1999-06-10 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL352484A1 PL352484A1 (en) | 2003-08-25 |
| PL205608B1 true PL205608B1 (pl) | 2010-05-31 |
Family
ID=22483915
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL352484A PL205608B1 (pl) | 1999-06-10 | 2000-06-08 | Adiuwanty szczepionki lub nieswoiste immunostymulanty dla koni, kompozycje do immunostymulacji dla koni, kompozycje immunogenne lub szczepionki dla koni, zastosowanie nieswoistego immunostymulanta oraz zastosowanie adiuwanta szczepionki |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US6645740B1 (pl) |
| EP (1) | EP1185655B1 (pl) |
| JP (1) | JP2003502044A (pl) |
| AT (1) | ATE444366T1 (pl) |
| AU (1) | AU781107B2 (pl) |
| BR (1) | BR0011469A (pl) |
| CA (1) | CA2375619C (pl) |
| CZ (1) | CZ302009B6 (pl) |
| DE (1) | DE60043062D1 (pl) |
| ES (1) | ES2333093T3 (pl) |
| NZ (1) | NZ515989A (pl) |
| PL (1) | PL205608B1 (pl) |
| RU (1) | RU2279476C2 (pl) |
| WO (1) | WO2000077210A1 (pl) |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2823222B1 (fr) | 2001-04-06 | 2004-02-06 | Merial Sas | Vaccin contre le virus de la fievre du nil |
| US20040091503A1 (en) | 2002-08-20 | 2004-05-13 | Genitrix, Llc | Lectin compositions and methods for modulating an immune response to an antigen |
| EP1545575A4 (en) | 2002-09-19 | 2006-04-05 | Us Gov Health & Human Serv | P. ARIASI POLYPEPTIDE, P. PERNICIOSUS POLYPEPTIDES AND METHOD OF USE |
| MXPA05004714A (es) | 2002-10-29 | 2006-03-17 | Us Gov Health & Human Serv | Polipeptidos de lutzomyia longipalpis y metodos de uso. |
| US20050214316A1 (en) | 2003-11-13 | 2005-09-29 | Brown Thomas P | Methods of characterizing infectious bursal disease virus |
| DE602006013117D1 (de) | 2005-04-25 | 2010-05-06 | Merial Ltd | Nipah-virus-impfstoffe |
| US7862821B2 (en) | 2006-06-01 | 2011-01-04 | Merial Limited | Recombinant vaccine against bluetongue virus |
| UA100370C2 (uk) | 2006-12-11 | 2012-12-25 | Мериал Лимитед | Спосіб вакцинації птахів проти salmonella |
| WO2009137577A2 (en) | 2008-05-08 | 2009-11-12 | Merial Limited | Leishmania vaccine using sand fly salivary immunogen |
| US20130197612A1 (en) * | 2010-02-26 | 2013-08-01 | Jack W. Lasersohn | Electromagnetic Radiation Therapy |
| DK2734230T3 (en) | 2011-07-20 | 2019-01-28 | Merial Ltd | RECOMBINANT FELINE LEUKEMIA VIRUS VACCINE CONTAINING OPTIMIZED FELINE LEUKEMIA VIRUS ENVELOPE GENE |
| NZ700470A (en) | 2012-03-20 | 2016-04-29 | Merial Inc | Recombinant equine herpesvirus-1 vaccine containing mutated glycoprotein c and uses thereof |
| MX381717B (es) | 2012-08-30 | 2025-03-13 | Merial Inc | Dispositivo hiperbarico y metodos para producir vacunas inactivadas y para replegar/solubilizar proteinas recombinates. |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5162111A (en) * | 1986-07-30 | 1992-11-10 | Grabstein Kenneth H | Treatment of bacterial diseases with granulocyte-macrophage colony stimulating factor |
| WO1992005255A1 (en) | 1990-09-13 | 1992-04-02 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation | Ovine cytokine genes |
| TNSN93075A1 (fr) | 1992-07-08 | 1994-03-17 | Schering Corp | Utilisation de gm-csf comme adjuvant pour vaccin |
| AUPM543894A0 (en) * | 1994-05-04 | 1994-05-26 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation | An adjuvant |
| FR2751226B1 (fr) | 1996-07-19 | 1998-11-27 | Rhone Merieux | Formule de vaccin polynucleotidique contre les pathologies du cheval |
-
2000
- 2000-06-07 US US09/589,460 patent/US6645740B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-06-08 NZ NZ515989A patent/NZ515989A/xx not_active IP Right Cessation
- 2000-06-08 PL PL352484A patent/PL205608B1/pl unknown
- 2000-06-08 CZ CZ20014377A patent/CZ302009B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2000-06-08 RU RU2002100209/13A patent/RU2279476C2/ru active
- 2000-06-08 DE DE60043062T patent/DE60043062D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-06-08 CA CA2375619A patent/CA2375619C/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-06-08 JP JP2001503654A patent/JP2003502044A/ja active Pending
- 2000-06-08 ES ES00940472T patent/ES2333093T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-06-08 AU AU55403/00A patent/AU781107B2/en not_active Expired
- 2000-06-08 AT AT00940472T patent/ATE444366T1/de not_active IP Right Cessation
- 2000-06-08 WO PCT/FR2000/001590 patent/WO2000077210A1/fr not_active Ceased
- 2000-06-08 BR BR0011469-3A patent/BR0011469A/pt not_active Application Discontinuation
- 2000-06-08 EP EP00940472A patent/EP1185655B1/fr not_active Expired - Lifetime
-
2003
- 2003-07-07 US US10/614,481 patent/US7250161B2/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ATE444366T1 (de) | 2009-10-15 |
| EP1185655A1 (fr) | 2002-03-13 |
| BR0011469A (pt) | 2002-03-05 |
| US7250161B2 (en) | 2007-07-31 |
| AU5540300A (en) | 2001-01-02 |
| JP2003502044A (ja) | 2003-01-21 |
| WO2000077210A1 (fr) | 2000-12-21 |
| ES2333093T3 (es) | 2010-02-17 |
| CZ20014377A3 (cs) | 2002-04-17 |
| PL352484A1 (en) | 2003-08-25 |
| US20050059121A1 (en) | 2005-03-17 |
| AU781107B2 (en) | 2005-05-05 |
| CA2375619C (en) | 2013-01-22 |
| CZ302009B6 (cs) | 2010-09-01 |
| RU2279476C2 (ru) | 2006-07-10 |
| EP1185655B1 (fr) | 2009-09-30 |
| DE60043062D1 (de) | 2009-11-12 |
| US6645740B1 (en) | 2003-11-11 |
| NZ515989A (en) | 2003-06-30 |
| CA2375619A1 (en) | 2000-12-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP7572152B2 (ja) | コンセンサス前立腺抗原、それをコードする核酸分子、ならびにそれを含むワクチンおよび用途 | |
| US20250319178A1 (en) | Cancer Vaccines and Methods of Treatment Using The Same | |
| US6645740B1 (en) | Nucleic acids encodings equine GM-CSF | |
| JP2023510112A (ja) | アフリカ豚熱ウイルスに対するワクチン、およびそれを使用する方法 | |
| EP1425305B1 (en) | Igf-1 as feline vaccine adjuvant, in particular against feline retroviruses | |
| JP2019516741A (ja) | マラリア感染症を予防及び治療するための合成マラリア免疫原、その組み合わせ、及びそれらの使用 | |
| AU2022271441B2 (en) | Cancer vaccines and methods of treatment using the same | |
| US20090274726A1 (en) | Synthetic gene | |
| US7326417B2 (en) | IGF-1 as feline vaccine adjuvant, in particular against feline retroviruses | |
| EA006743B1 (ru) | Стимуляция тимозином генетической иммунизации | |
| HK1262085B (zh) | 癌症疫苗和使用其的治疗方法 | |
| HK40007462B (en) | Recombinant poxviral vectors expressing both rabies and ox40 proteins, and vaccines made therefrom |