Niniejszy wynalazek dotyczy sposobu wytwarzania preparatu do zwalczania a- nemji, a w szczególnosci takiego preparatu, który ulatwia odbudowe hemoglobiny we krwi. Jak wiadomo, hemoglobina zawiera zelazo jako jeden z zasadniczych skladni¬ ków. Juz dawniej próbowano zwalczac ane- mje, a zwlaszcza regenerowac hemoglobine przez wprowadzanie do organizmu zelaza pod róznemi postaciami. Przedmiotem ni¬ niejszego wynalazku jest sposób otrzymy¬ wania srodka leczniczego, który wzbogaca krew w hemoglobine i skutecznie zwalcza anemje.Srodek leczniczy wedlug wynalazku za¬ wiera zwiazek zelaza, najlepiej w postaci proteidu, a zwlaszcza polaczenie nukleino¬ we lub peptonowe zelaza, oraz skladnik dzialajacy prawdopodobnie katalitycznie w procesie przemiany zelaza w organizmie lub tworzenia hemoglobiny. Tym kataliza¬ torem jest odpowiedni zwiazek miedzi, jak np. polaczenie proteinowe miedzi, a najle¬ piej polaczenie nukleinowe lub kazeinowe miedzi lub tez ich mieszanina.Najwlasciwiej jest, gdy preparat za¬ wiera zelazo i miedz w jednej lub wiecej z przytoczonych postaci. Stwierdzono, iz kazdy z nastepujacych preparatów dziala skutecznie przy zwalczaniu anemji. 1. Roztwór zwiazku nukleinowego mie¬ dzi i zwiazku nukleinowego zelaza,2. roztwór zwiazku nukleinowego zela¬ za i zwiazku peptonowego zelaza, ' 3. roztwór zwiAzku kazeinowego miedzi i zwiazku peptonowego zelaza, Z powyzszych preparatów najlepszy jest roztwór, zawierajacy polaczenia nu¬ kleinowe miedzi i zelaza. Nukleoproteidy w ogólnosci, a w szczególnosci kwas nukleino¬ wy odgrywa wazna role w rozwoju organi¬ zmu. Przez wprowadzenie zelaza i miedzi w postaci wyzej wymienionych zwiazków ulatwia sie przyswaj&oie tych pierwiastków przez organizm, co dziala skutecznie na proces tworzenia sie hemoglobiny. Ponad¬ to zwiazki zelaza i miedzi posiadaja naogól wlasnosci toksyczne, dzieki wprowadzeniu jednak tych pierwiastków w postaci orga¬ nicznych polaczen, a zwlaszcza w postaci proteidów, usuniete zostaja w znacznej mierze powyzsze niekorzystne wlasci¬ wosci.Ponizej podane dane przedstawiaja wynik doswiadczen z anemicznemi szczu¬ rami.Celem wywolania anemji u szczurów doswiadczalnych okazalo sie korzystnem u- trzymanie matek na djecie z dodatkiem cieplego mleka, przygotowanego z spro¬ szkowanego pelnego mleka, lecz bez roslin albo miesa w czasie okresu karmienia mlo¬ dych szczurów. W dwudziestym pierwszym dniu odlaczono od matki mlode szczury i dawano im pelne krowie mleko. U trak¬ towanych w ten sposób doswiadczalnych szczurów mozna bylo zauwazyc wyrazne objawy niedokrwistosci w okresie od 3—4 tygodnia, co stwierdzono na podstawie ko¬ loru oczu, po uszach, nogach i ogonie. Prze¬ cietna zawartosc hemoglobiny wynosila u szczurów pod koniec tego okresu okolo 5 gramów na 100 cm3 krwi.Poczawszy od tego okresu umieszczono szczury w osobnych klatkach i dawano co¬ dziennie, przez 6 dni w tygodniu, jeden cm3 roztworu srodka wedlug wynalazku w 5 cm3 mleka. Po spozyciu tej porcji otrzymywal kazdy szczur dodatkowo 50 cm3 mleka dziennie. Oznaczenie hemoglobiny wykony¬ wano co tydzien przy pomocy hemoglobi- nomierza Newcomer'a z próbki krwi, wzie¬ tej z ogona szczura. Podczas doswiadczenia wazono szczury co tydzien.Tablica pierwsza podaje przecietne wy¬ niki oznaczenia hemoglobiny i wage trzech szczurów doswiadczalnych i trzech kon¬ trolnych. Zwierzeta doswiadczalne otrzy¬ mywaly, jak widac z tablicy I, 0,25 mg mie¬ dzi w postaci zwiazku nukleinowego (29,72% Cu) i 0,50 mg zelaza w postaci zwiazku nukleinowego (8,89% Fe). Tablica wykazuje, ze w ciagu jednego tygodnia, pod wplywem zwiazków zelaza i miedzi, wzrasta hemoglobina z 6,7 gramów do 14,6 gramów na 100 cm3 krwi.Tablica I. Srednie wagi i zawartosci he¬ moglobiny u zwierzecia, otrzymujacego 0,25 g miedzi w postaci polaczenia nu¬ kleinowego miedzi (29,72% Cu) i 0,50 mg zelaza w postaci polaczenia nukleinowego zelaza (8,89% Fe).Doswiadczalne zwierzeta (trzy).Hemoglobina w gra¬ mach na waga 100 cm3 w gra- krwi mach Na poczatku doswiadczenia 6,7 71 Koniec 1 tygodnia 14,6 80 „ 2 „ 14,2 94 „ 3 „ 15(2 103 „ 4 „ 16,3 111 Kontrolne (trzy). lemoglobina w gra¬ mach na 100 cm3 krwi 6,1 4,9 4,1 3,9 .4,1 waga w gra¬ mach 76 86 96 99 100 — 2 -Tablica II zawiera wyniki srednie z oznaczen hemoglobiny i wag czterech szczu¬ rów doswiadczalnych, otrzymujacych po¬ dobna ilosc miedzi i zelaza jako polaczenia nukleinowe miedzi (29,72 % Cu) i polacze¬ nia peptonowe zelaza (17,5% Fe).Tablica II. Srednie wagi i zawartosci hemoglobiny u zwierzat, otrzymujacych 0,25 mg miedzi w postaci polaczenia (nu¬ kleinowego miedzi (29,72% Cu) i 0,50 mg zelaza w postaci polaczenia peptonowego zelaza (17,5% Fe).Doswiadczalne zwierzeta (cztery). w gra¬ mach na waga 100 cm3 w gra- Hemoglobina krwi mach Na poczatku doswiadczenia 7,0 61 Koniec 1 tygodnia 13,4 71 „ 2 „ 13,7 71 „ 3 „ 14,4 89 Tablica III zawiera przecietne wyniki z oznaczen hemoglobiny i wag czterech do¬ swiadczalnych zwierzat otrzymujacych po¬ dobna ilosc miedzi i zelaza, w postaci po¬ laczenia nukleinowego miedzi (9,82% Cu) polaczenia peptonowego zelaza. (17,5% Fe).Tablica III. Srednie wagi i zawartosci hemoglobiny zwierzat, otrzymujacych 0,25 mg miedzi w postaci polaczenia nukleino¬ wego miedzi (9,82% Cu) i 0,50 mg zelaza w postaci polaczenia peptonowego zelaza (17,5% Fe).Doswiadczalne zwierzeta (cztery), w gra¬ mach na waga 100 cm3 w gra Hemoglobina krwi mach Na poczatku doswiadczenia 3,7 80 Koniec 1 tygodnia 9,9 84 „ 2 „ 13,8 104 „ 3 „ 14,3 133 Tablica IV i V zawiera srednie wyniki oznaczen hemoglobiny i wagi szesciu do- siriadczateyeh v zwierzat, otrzymujacych 0,25 mg miedzi w postaci polaczenia ka¬ zeinowego miedzi (4,83 % Cu) i 0,50 mg ze¬ laza w postaci polaczenia peptonowego ze¬ laza (17,5% Fe).Tablica IV i V. Srednie wagi i zawarto¬ sci hemoglobiny u szczurów, otrzymujacych 0,25 mg miedzi w postaci polaczenia ka¬ zeinowego miedzi (4,87% Cu) i 0,50 mg ze¬ laza w postaci polaczenia peptonowego ze¬ laza (17,5% Fe).Tablica IV.Doswiadczalne zwierzeta (dwa). w gra¬ mach na waga 100 cm3 w gra- Hemoglobina krwi mach Na poczatku doswiadczenia 3,5 99 po 4 dniach 7,6 100 po 11 dniach 13,1 108 po 18 pniach 14,4 108 Tablica V, Doswiadczalne zwierzeta (cztery). w gra¬ mach na waga 100 cm3 w gra- Hemoglobtna krwi mach Na poczatku doswiadczenia 6;6 61 Koniec 1 tygodnia 12,1 72 „ 2 „ 12,9 78 „ 3 „ 14,0 85 Przygotowanie zwiazku nukleinowego miedzi z drozdzy.Zwiazek nukleinowy miedzi przygoto¬ wano z suchych drozdzy browarnianych nastepujacym sposobem. Dwiescie gramów drozdzy zadano 1000 cm3 destylowane} wody i mieszano, dodajac 100 gramów NoOH w postaci stezonego roztworu. Na¬ stepnie chlodzono lodem, okolo 80% lugu zobojetniono stezonym HCl (20 gramów) a nastepnie zakwaszano az do zabarwienia papierka lakmusowego przy pomocy 30% kwasu octowego. Celem opadniecia osadu - 3 —pozostawiono mieszanine przez noc, a na¬ stepnie roztwór klarowny saczono przez sa¬ czek faldowany i dodano tyle chemicznie czystego siarczanu miedzi, aby roztwór za¬ wieral go 41/£%f poczem mieszano silnie, az caly siarczan miedzi przeszedl do roztwo¬ ru. Powstal natychmiast jasno niebiesko- zielony pulchny osad, który pozostawiono celem osadzenia sie. Plyn z nad osadu de- kantowano i osad przemyto dwukrotnie, de- kantujac wode. Pozostalosc saczono na lej¬ ku Buchnera przy pomocy pompy ssacej i przemyto starannie woda destylowana az do zaniku reakcji na siarczany. Nastepnie osad roztarto z 95% alkoholem w szkla¬ nym mozdzierzu, odsaczono zapomoca pompy i po przemyciu dwukrotnie alkoho¬ lem traktowano w podobny sposób eterem.Osad wysuszono wreszcie na powietrzu, kladac go na papierze do filtrowania i o- trzymano go w postaci jasno niebiesko-zie- lonego bezpostaciowego proszku. Wydaj¬ nosc zwiazku nukleinowego miedzi wynosi 6,24 gramów. Analitycznie stwierdzono w otrzymanym zwiazku 29,72% Cu i 10,3% fosforu; siarczanów nie mozna bylo wyka¬ zac.Przygotowanie zwiazku nukleinowego zelaza z drozdzy.Zwiazek nukleinowy zelaza przygoto¬ wano z drozdzy browarnianych w mniej wiecej podobny sposób, jak zwiazek mie¬ dzi, uzywajac zamiast siarczanu miedzi, chemicznie czysty chlorek zelaza. Zwia¬ zek zelaza nalezy stracic w 60% alkoholu wskutek czesciowej rozpuszczalnosci zwiaz¬ ku nukleinowego zelaza. Po przemyciu osa¬ du 60% alkoholem i 95% alkoholem, osad przemyto nastepnie eterem, jak zwiazek miedzi. Otrzymano bezpostaciowy jasno bronzowy zwiazek, w którym analitycznie stwierdzono 8,89% zelaza i 4,21% fosforu.Wydajnosc z dwustu gramów drozdzy wy¬ nosi 7,0 gramów.Przygotowanie zwiazku nukleinowego miedzi z kwasu nukleinowego. 5 gramów kwasu nukleinowego dodano do 300 cm3 destylowanej wody w zlewce na 800 cm3, nastepnie dodano roztworu NaOH malemi dawkami, az sie nie rozpu¬ scil kwas nukleinowy. Roztwór zakwaszo¬ no nastepnie slabo 30% kwasem octowym i dodawano siarczan miedzi chemicznie czysty, stale mieszajac, az nie przestal wy¬ dzielac sie osad. Natychmiast utworzyl sie zielony osad. Po opadnieciu osadu dekan- towano plyn z nad osadu. Pozostalosc prze¬ myto dwukrotnie przez dekantacje az do zaniku reakcji na siarczany. Nastepnie roz¬ tarto osad z 95% alkoholem w szklanym mozdzierzu, odsaczono i przemyto alkoho¬ lem. To postepowanie powtórzono z ete¬ rem. Otrzymano jasno zielony bezpostacio¬ wy proszek, zawierajacy 9,82% miedzi i 7,05% fosforu. Wydajnosc 5,08 gramów.Przygotowanie zwiazku kazeinowego miedzi z kazeiny. 100 gramów oczyszczonej kazeiny do¬ dano do 1500 cm3 wody destylowanej, mie¬ szajac przez pewien czas, poczem dodano 119 cm3 normalnego NaOH dawkami do¬ póty, az kazeina nie rozpuscila sie w zu¬ pelnosci. Nastepnie dodano 21 gramów siarczanu miedzi w 120 cm3 wody, miesza¬ jac az do calkowitego wydzielenia sie osa¬ du. Zwiazek kazeinowy miedzi, który wy¬ dziela sie jako pulchny zielony osad, odsa¬ czono nastepnie przy uzyciu pompy ssacej i przemywano woda az do zaniku reakcji na siarczany. Po przemyciu 50% alkoho¬ lem i 95% alkoholem a nastepnie eterem, wysuszono osad na powietrzu, rozkladajac go na saczku papierowym. Otrzymano nie- bieskawo-zielony krystaliczny proszek, za¬ wierajacy 4,8% miedzi. Wydajnosc 101 gramów.Zwiazek peptonowy zelaza uzyty w tych próbach byl proszkiem N. F. V. (Na¬ tional Formulary Fifth Edition) i zawieral 17,5% zelaza.Jak widac z powyzszego mozna roz¬ tworami wymienionych organicznych zwiaz- — 4 —ków zelaza i miedzi zwalczac skutecznie wszystkie przypadki anemji. Preparat moz¬ na przygotowac w roztworze, który jest nadzwyczaj smaczny, a konieczna dawka dzienna niewielka.Roztwór zwiazku nukleinowego miedzi i zelaza stosowany do doswiadczen przy¬ gotowuje sie w ten sposób, iz preparaty wyzej wymienione zadaje sie odpowiednia iloscia wody destylowanej i dodaje cytry¬ nian sodu, alkohol, syrop cukrowy, glicery¬ ne, olejek pomaranczowy, octan etylowy i waniline tak, aby 1 cm3 roztworu zawieral 0,25 mg Cu, 0,50 mg Fe i 8 mg cytrynianu sodu.Nastepujaca tablica podaje korzystne zestawienie tych skladników w zastosowa¬ niu do ludzkiego organizmu, przyczem za¬ znacza sie, iz zestawienie to podano tylko dla przykladu i ze stosunek poszczególnych skladników moze sie wahac w szerokich granicach, a nawet niektóre z nich moga byc zupelnie pominiete. Istotna ceche spo¬ sobu otrzymywania tych preparatów stano¬ wi to, aby kazdy z nich zawieral miedz i zelazo w postaci odpowiedniej; zelazo wprowadza sie, jak wspomniano wyzej, ce¬ lem odtworzenia hemoglobiny, miedz spel¬ nia tylko prawdopodobnie role kataliza¬ tora.Przyklad.Zwiazek nukleinowy miedzi (29,72% miedzi) 0,421 g zwiazek nukleinowy zelaza (8,89% zelaza) 11,424 „ cytrynian sodu 9,000 ,, alkohol 150,000 cm3 cukier 42,500 g gliceryna 50,000 cm3 olejek pomaranczowy (slodki wloski) 0,160 H eter octowy (octan etylowy) 0,160 ,, wanilina 0,020 g woda destylowana dopelnic do 1000,000 cm3 Powyzszy roztwór zawiera 14,25% al¬ koholu (teoretycznie).Najwieksza dawka = 8 cm3 zawiera okolo: 0,001 g miedzi albo 0,0033 g zwiazku nu¬ kleinowego miedzi, 0,008 g zelaza albo 0,0913 g zwiazku nu¬ kleinowego zelaza.Zamiast uzywac zwiazek nukleinowy miedzi oraz nukleinowy zelaza mozna rów¬ niez stosowac do powyzszych preparatów zwiazek nukleinowy miedzi oraz zwiazek peptonowy zelaza, lub zwiazek kazeinowy miedzi i zwiazek peptonowy zelaza. PL