PL182446B1 - Sprawdziany, wzorce lub standardy dla chemii klinicznej - Google Patents
Sprawdziany, wzorce lub standardy dla chemii klinicznejInfo
- Publication number
- PL182446B1 PL182446B1 PL95318885A PL31888595A PL182446B1 PL 182446 B1 PL182446 B1 PL 182446B1 PL 95318885 A PL95318885 A PL 95318885A PL 31888595 A PL31888595 A PL 31888595A PL 182446 B1 PL182446 B1 PL 182446B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- standards
- gauges
- triglycerides
- pstg
- triglyceride
- Prior art date
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/96—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood or serum control standard
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
- C12Q1/44—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving esterase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/61—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving triglycerides
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/92—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving lipids, e.g. cholesterol, lipoproteins, or their receptors
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/10—Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
- Y10T436/104165—Lipid, cholesterol, or triglyceride standard or control
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/10—Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
- Y10T436/106664—Blood serum or blood plasma standard or control
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
1 . Sprawdziany, wzorce lub standardy dla chemii klinicznej, stanowiace substraty li- pazy i stosowane w analizach wykrywajacych obecnosc trój glicerydów lub oznaczajacych ich ilosc, znamienne tym, ze zawieraja zamienniki trój glicerydów stanowiace jedno-, dwu- lub trójglicerydy kwasów tluszczowych o dlugosci lancucha C3-C1 8 i albo ich mieszaniny, nie wydzielane ze zwierzecych, ludzkich lub innych zródel naturalnych, lecz wytworzone przez estryfikacje kwasów tluszczowych o dlugosci lancucha C3-C1 8 za pomoca gliceryny, przy czym glicerydy te sa rozpuszczalne w roztworach bialek. PL
Description
Przedmiotem wynalazku są sprawdziany, wzorce lub standardy dla chemii klinicznej.
Stwierdzono, że pewne mieszaniny, stanowiąc zamienniki trójglicerydów (pseudotrójglicerydy, PSTG), nadają się do stosowania w sprawdzianach, wzorcach, standardach i tym podobnych preparatach chemii klinicznej. Te materiały zastępcze stanowią mieszaniny kwasów tłuszczowych o średniej długości łańcucha węglowego (Cj-C^), zestryfikowanych gliceryną. Mieszaniny te są stosunkowo tanie, co czyni je użytecznymi w materiałach sprawdzianowych. Stwierdzono ponadto, że pojedyncze składniki stosowane w różnych dziedzinach chemii sąużyteczne w rozwiązaniu według wynalazku, bez potrzeby stosowania emulgatorów. W rozwiązaniu według wynalazku stosuje się te materiały zastępcze.
Oznaczanie zarówno lipazy, jak i trójglicerydów, jest ważne w chemii klinicznej jako wskaźnik występowania schorzenia trzustki, hiperlipemii, choroby wieńcowej itd. Lipaza jest enzymem, który hydrolizuje trójglicerydy, toteż można stosować jeden test do oznaczania tych obydwu czynników. Jeśli składnik lipazowy utrzymuje się stały, to test ten można stosować do oznaczania trójglicerydów w próbce. I odwrotnie, jeśli utrzymuje się stałą zawartość trójglicerydów, to można oznaczać poziom lipazy.
Glicerydy stanowią specjalne substraty dla enzymu lipazy (lipaza trzustkowa, EC 3.1.1.3, acylohydrolaza trójacylogliceryny), toteż sposoby postępowania przy oznaczaniu lipazy wymagają stosowania trójglicerydów, np. oczyszczonej oliwy z oliwek, naturalnie występującego glicerynowego estru kwasu oleinowego (trójoleinianu gliceryny), do pomiaru aktywności tego enzymu. Wprawdzie oleje trójglicerydowe typu oliwy z oliwek nie są drogie, ale są one nierozpu182 446 szczalne w wodzie i wydzielają się z macierzy białkowej podczas przechowywania, co powoduje niedopuszczalnąniepowtarzalność odczytów przy ich stosowaniu w sprawdzianach lub wzorcach.
Istnieje obszerna literatura na temat stosowania trój glicerydów w chemii klinicznej. Trójglicerydy te wydziela się z żółtka jaja albo z krwi, zwierzęcej lub ludzkiej. Podane niżej właściwości tych mieszanin powodująwystępowanie nieodłącznych trudności podczas ich stosowania.
1. Są one nieodporne na obróbkę przez zamrażanie i rozmrażanie.
2. Mogąone stt^i^t^ićó się , a to sstrą^t^ćuik; nieodłązniie wpływa na inne wzorce anaihyczne tokie, jak wapń i fosforany.
3. Wykazująone ^łłRnnośść do łatwego i szyblnego zakiżecnia się drobnoushojami , a totoe zakażenie ujemnie wpływa na produkty, w których je się stosuje.
4. Zazwyczaj stanowią one słabo zdefiniowane mieszaniny, co powoduje problemy z odtwarzalnością.
5. Ich analizowane wartości nie są trwałe i wzrastają z czasem.
Niektórzy wytwórcy sprawdzianów dla chemii klinicznej próbują obejść te problemy zastępując trójglicerydy gliceryną. Taka zmiana daje niewielkie efekty, gdyż eliminuje się tu etap hydrolizy, który jest podstawowy w określonych analizach, a w niektórych analizach, wymagających oznaczenia zhydrolizowanych kwasów tłuszczowych, glicerynajest zupełnie nieodpowiednia. W innych materiałach sprawdzianowych stosuje się różne środki powierzchniowo czynne, w celu utrzymania trójglicerydów, zwykle nierozpuszczalnych, w postaci roztworu lub emulsji.
Ujawniono również inne materiały, które dobrze działają jako substraty lipazy i byłyby ewentualnie korzystne jako zamienniki trójglicerydów w materiałach sprawdzianowych, wzorcowych, standardowych itp. Niektórymi spośród takich syntetycznych analogów trójglicerydów są: trójmaślan 2,3-dwumerkaptopropan-1-olu, laurynian beta-naftylu, mirystynian beta-naftylu, laurynian fenylu i estry sorbitanowe fenylu, mirystynian metyloumbelliferonu i mirystynian N-metyloindoksylu. Każdy z tych związków stosowano jako substrat lipazy i, teoretycznie, związki te mogłyby służyć jako zamienniki naturalnych trójglicerydów w sprawdzianach, ale wszystkie one są o wiele za drogie i/lub nierozpuszczalne w surowicy, aby mogły być użyteczne w praktyce.
Sprawdziany, wzorce lub standardy dla chemii klinicznej, stanowiące substraty lipazy i stosowane w analizach wykrywających obecność trójglicerydów lub oznaczających ich ilość, zgodnie z wynalazkiem charakteryzują się tym, że zawierają zamienniki trójglicerydów stanowiące jedno-, dwu- lub trójglicerydy kwasów tłuszczowych o długości łańcucha C3-C18, albo ich mieszaniny, nie wydzielane ze zwierzęcych, ludzkich lub innych źródeł naturalnych, lecz wytworzone przez estryfikację kwasów tłuszczowych o długości łańcucha C3-C,8 za pomocą gliceryny, przy czym glicerydy te są rozpuszczalne w roztworach białek.
Korzystnie, roztwór białka stanowi ludzką surowicę lub surowicę innego zwierzęcia.
Korzystnie, roztwór białka stanowi ludzką albuminę lub albuminę innego zwierzęcia.
Korzystnie, roztwór białka stanowi płyny zawierające białko, ludzkie lub innego zwierzęcia.
Korzystniej, roztwór białka jako płyn stanowi mocz, płyn kręgowy lub ślinę.
Korzystnie, sprawdziany, wzorce lub standardy jako zamienniki trójglicerydów zawierają glicerydy wybrane z grupy, obejmującej jednolinolan glicerydu, trójpropionian gliceryny, jednokapryloiloglicerynę, trójmaślan glicerylu oraz mieszaniny jedno- i dwuglicerydów kaprylanowych i kaprynianowych.
Korzystnie, sprawdziany, wzorce lub standardy jako zamienniki trójglicerydów zawierają mieszaninę jedno- i dwuglicerydów kaprylanowych i kaprynianowych, wytworzoną przez estryfikację mieszaniny kwasów kaprylowego i kaprynowego gliceryną.
W sprawdzianach, wzorcach, standardach i podobnych im preparatach do analiz w chemii klinicznej według wynalazku zastosowano materiały zastępcze dla trójglicerydów ludzkich, zwierzęcych lub z żółtka jaja. Stwierdzono nieoczekiwanie, że te materiały, które uprzednio znalazły zastosowanie w innych dziedzinach chemii, są użytecznymi substratami lipazy. Te materiały zastępcze obejmują kwasy tłuszczowe o średniej długości łańcucha węglowego (C3-C18), zestryfikowane gliceryną, w celu utworzenia mieszanin jedno-, dwu- i trójglicerydów. Mieszaniny te obecnie stosuje się w przemyśle jako podłoża do produkcji leków nierozpuszczalnych w wodzie, a rozpuszczalnych w olejach oraz jako oleje zmiękczające do kremów do twarzy i in4
182 446 nych kosmetyków. Sąone rozpuszczalne w wodnych roztworach białek i zapewniają niezmienne oznaczenia trój glicerydów podczas przechowywania, bez dodatkowych stabilizatorów, wymaganych w przypadku innych preparatów. Korzystne materiały, które również można stosować, nie ograniczając się do nich, obejmująjednolinolan gliceryny, trójpropionian gliceryny, jedno-, dwu- lub trójglicerydy kaprylanu lub kaprynianu, jednokaproiloglicerynę oraz trójmaślan gliceryny. Stosując te materiały unika się problemów braku odporności na zamrażanie i odmrażanie, strącania, zanieczyszczenia drobnoustrojami oraz niedokładnej charakterystyki (a w związku z tym problemu powtarzalności wyników), z którymi spotyka się w przypadku znanych materiałów. Te nowe materiały są ponadto znacznie tańsze od znanych, a zatem nadają się do praktycznego wykorzystania przy wytwarzaniu klinicznych materiałów sprawdzianowych (materiałami sprawdzianowymi nazywa się sprawdziany, wzorce, standardy i tym podobne preparaty chemii klinicznej).
W rozwiązaniu według wynalazku stosuje się materiały, pochodzące z nowego źródła PSTG. Stwierdzono, że korzystnymi PSTG są takie materiały, które są tanie, a więc nadające się do praktycznego wytwarzania ekonomicznych materiałów sprawdzianowych. Te PSTG są także bezpieczne podczas posługiwania się nimi. Materiały te stanowią zazwyczaj raczej mieszaniny niż czyste, pojedyncze składniki.
PSTG analizowano w macierzach na bazie białkowej w celu określenia charakterystyki ich działania, jak to pokazano dalej w przykładach. Do analizy tych roztworów wykorzystywano dostępne w handlu kliniczne analizatory, np. Ektachem (produkowane przez firmę Kodak), Dimension D-380 (z firmy DuPont), Express (z firmy Ciba Corning) oraz ACA (z firmy DuPont) w celu mierzenia poziomu trójglicerydów w surowicy. Sposób postępowania polega na specjalnym oznaczaniu gliceryny po hydrolizie fragmentów zawierających kwasy tłuszczowe. Zamienniki te obejmowały jedno-, dwu- i trójglicerydy kwasów tłuszczowych o średniej długości łańcucha węglowego (C3-C18): Capmul MCM i Capmul MCM-90 (znaki towarowe firmy Karlshamns Inc.) 1-monodekanoilo-rac-glicerynę, trójmaślan gliceryny (trójbutyrynę), trójpropionian gliceryny (trójpropionian), jednokaproiloglicerynę (Sigma Chemical Co.) i jednogliceryd kwasu linolowego (np. Myverol z firmy Eastman Chemical Co). Stwierdzono, że szczególnie korzystne są tu mieszaniny C3-C18 jedno-, dwu- lub trójglicerydów, nie wydzielane ze źródeł zwierzęcych, ludzkich lub innych naturalnych. Powyższy wykaz jest reprezentatywny, ale nie wyczerpuje listy możliwych zamienników. Stwierdzono, że na rozpuszczalność tych związków wpływa nie tylko liczba podstawników glicerynowych, lecz także długość łańcucha każdego podstawnika. Jeśli np. wszystkie trzy grupy hydroksylowe gliceryny sązestryfikowane, to rozpuszczalność glicerydów podstawników zawierających więcej niż 6 węgli (C6) w swej długości staje się na tyle niska, że okazują się one bezużyteczne bez dodatku emulgatorów (środków powierzchniowo czynnych), jeśli zaś tylko j edna grupa hydroksylowajest zestryfikowana, to pozostałe dwie grupy hydroksylowe polepszają rozpuszczlaność i można stosować glicerydy z podstawnikami o łańcuchach kwasów tłuszczowych o długości do C,8.
Wspomniano wyżej, że stosowane tu materiały często sąmieszaninami. Np. Capmul MCM stanowi mieszaninę > 80% jednoglicerydu i < 20% dwuglicerydu. Jej skład kwasów tłuszczowych jest bliżej nieokreśloną mieszaniną kwasów kaprylowego i kaprynowego, zestryfikowanych gliceryną z utworzeniem wyżej wymienionych kompozycji glicerydów. Zawiera ona< 1% wolnego kwasu tłuszczowego i < 1% wolnej gliceryny. Capmul MCM MCM-90jest mieszaninąo następującym składzie: > 90% jednoglicerydu i < 10% dwuglicerydu. Jej skład kwasów tłuszczowych stanowi bliżej nieokreśloną mieszaninę kwasów kaprylowego i kaprynowego, zestryfikowanych glicerynąz utworzeniem wyżej wymienionej kompozycji glicerydów. Zawiera ona< 1 % wolnego kwasu tłuszczowego i < 1% wolnej gliceryny.
Poziom trójglicerydów w normalnej surowicy człowieka będącego na czczo wynosi 44-210 mg/100 cm3. W celu określenia, czy można byłoby symulować normalne i nienormalne poziomy trójglicerydów stosując te materiały zastępcze, sporządzono serię rozcieńczeń ze stężonego roztworu Capmul MCM w surowicy ludzkiej (patrz przykład III). Wyniki tych prób wykazały liniowość oraz ilościowe odzyskiwanie PSTG w bazie ludzkiej surowicy (patrz przykład III). Okazuje się, że ilościowy odzysk nie zależy od czasu (patrz przykład I).
182 446
Ponadto wykonano dalsze prace w celu określenia, że wyniki ilościowego odzyskiwania
PSTG są zgodne w przypadku większości klinicznych analizatorów i wielu materiałów PSTG (patrz przykłady IV-VII).
Kliniczne materiały muszą spełniać warunki minimalnej trwałości, aby były użyteczne, np. po 10 dniach przechowywania w chłodni (2-8°C) powinno się osiągać odzysk plus lub minus 10%, jeśli PSTG wprowadza się do bazy białkowej na poziomie normalnym lub nienormalnym. Wyniki badań trwałości wskazują, że te PSTG mogłyby być ekonomicznie użyteczne jako sprawdziany, wzorce lub standardy (patrz przykład II). Próbki musząponadto ulegać liniowemu rozcieńczaniu, aby były użyteczne, gdyż ludzkie próbki kliniczne o wysokich stężeniach rozcieńcza się w celu znalezienia się w zakresie stężeń analitycznych dla atestowania.
(Przykład III).
Gdy wykazano ilościowe odzyskiwanie oraz odpowiednią trwałość PSTG wprowadzanych do podłoża białkowego, to materiał ten używano w licznych zastosowaniach, w których inne laboratoria stosowały trójglicerydy wydzielone z żółtka jaja albo z ludzkiej lub zwierzęcej krwi, aby opracować materiały, które mogłyby być użyteczne jako sprawdziany w analizach klinicznych dla ilościowego i jakościowego oznaczania trójglicerydów w ludzkiej surowicy (patrz przykłady IV i VIII). Materiały te sąużyteczne nie tylko w przypadku ludzkiej surowicy, ale również w przypadku macierzy zbudowanych z surowicy innych zwierząt, ludzkiej albo zwierzęcej albuminy lub ich mieszanin, moczu, płynu kręgowego, śliny lub innych płynów zawierających białko, albo z mieszanin wyżej wymienionych płynów.
Wyżej opisano najlepszy obserwowany przez wynalazców sposób zastosowania materiałów z PSTG. Zaobserwowano jednak, że PSTG można używać zamiast trójglicerydów wydzielonych z żółtka jaja, albo wydzielonych z krwi zwierzęcej lub ludzkiej, we wszystkich procedurach analitycznych, włączając w to bez ograniczeń testy radioimmunologiczne, ELISA i inne metody analityczne. Na przykład większość testów radioimmunologicznych dla identyfikacji antygenów stosuje się albo znakowany antygen, albo znakowane przeciwciało. Antygeny lub przeciwciała z PSTG można znakować stosując różne znane metody, np. dodawanie znaczników promieniotwórczych, znaczników enzymatycznych, znaczników fluorescencyjnych, znaczników chemoluminescencyjnych lub innych znaczników, które mogą utworzyć materiał użyteczny w immunochemicznych metodach analitycznych. Znacznik miałby służyć jako informator w testach immunologicznych. Zaobserwowano także, iż PSTG można oczyszczać i stosować, a być może nawet stosować bez oczyszczania, w innych metodach analitycznych, w których obecnie można stosować trójglicerydy wydzielane z żółtka jaja, albo wydzielane ze zwierzęcej lub ludzkiej krwi.
Ponadto zaobserwowano, że PSTG można stosować jako immunogeny w celu wytwarzania przeciwciał. Poliklonalne, monoklonalne i inne przeciwciała mogłyby powstawać przeciw zamiennikom trójglicerydów. Technologia wytwarzania przeciwciał poliklonalnych i monoklonalnych jest dobrze rozwinięta. (Patrz np. Immunology, 2 wydanie, I. Roitt i in., Gower Medical Publishing, Londyn, 1989, strona 8.2).
Zarówno PSTG, jak i przeciwciała z nich wytworzone można zatrzymywać na stałym podłożu. Można stosować liczne podłoża, np. żywice agarozowe (Sepharose itd.), szklane paciorki itd. Zatrzymane przeciwciała trójglicerydów mogą służyć do szybkiego i skutecznego oczyszczania trójglicerydów otrzymanych z surowych źródeł, w celu wytworzenia czystych trójglicerydów. Podobnie można otrzymywać czyste przeciwciała, stosując materiał z zatrzymanymi PSTG. Takie, związane z immunologią, metody chromatograficzne są dobrze znane w literaturze. Powyższe ilustruje, jak można zastosować zatrzymane ligandy, ale nie należy tego interpretować jako ograniczenia ich przydatności. Przykładowo, zatrzymane przeciwciała zamienników trójglicerydów można stosować jako czynniki wymywające, w celu otrzymywania surowic wolnych od trójglicerydów.
Przedstawione tu materiały i sposoby można stosować również do oznaczania poziomu lipazy. W tym przypadku trójglicerydy byłyby utrzymywane na stałym poziomie, a oznaczanie obejmowałoby czynności, wymienione niżej.
1. Obróbkę surowicy zai wieraj ąc ej lipazę , ktttij^a ma być oznaczana , przez dodanie świńskiej kolipazy (kofaktor lipazy, który przyspiesza reakcję hydrolizy lipazy) i fluorku fenylometylosulfonylowego (który powstrzymuje esterazę nielipazową, która w innym przypadku mogłaby
182 446 także reagować z podłożem; patrz np. Teitz, N. W., „Textbook of Clinical Chemistry”, W. B. Saunders Company, Filadelfia, USA (1986), str. 739).
2. Dodawanie odczynnika stanowiącego trójgliceryd lub zamiennik trójglicerydów, zawierający kwasy tłuszczowe C3-C18 estryfikowane glicerynąz utworzeniemjedno-, dwu- lub trójglicerydów, nie wydzielane ze zwierzęcych, ludzkich lub innych źródeł naturalnych albo ich mieszanin, do roztworu białka z jednym lub większą liczbą odczynników wskaźnikowych.
3. Oznaczanie jednego z produktów reakcji hydrolizy (gliceryny lub kwasów tłuszczowych) wybranymi metodami (patrz np. Peace, A. J. i Kaplan, L. A. „Methods in Clinical Chemistry”, C. V. Mosby Company, St. Louis (1987). str. 849) po ustalonym czasie reakcji i porównanie tak oznaczonej ilości z ilością wytworzoną przez standardową ilość lipazy w tym samym czasie. Aktywność lipazy w próbie będzie proporcjonalna do ilości tych produktów reakcji. Zmiany w procedurze analizy lipazy mogą przewidywać specjaliści w danej dziedzinie.
Następujące przykłady przedstawiają aspekty trwałości i przydatności PSTG, oceniane za pomocą różnych przyrządów. Materiały te oraz produkty z nich wytworzone są również użyteczne w metodach manualnych (ogólne omówienie sposobów postępowania w przypadku trójglicerydów patrz np.: „Methods of Clinical Chemistry”, A. J. Pesce i in., Mosby Co., St. Louis, 1987, rozdział 18, strony 1215-1227). Przykłady te nie mająjednak na celu ograniczenia użyteczności PSTG ani sposobów ich stosowania.
Przykład I
Wpływ czasu na rozpuszczanie:
Stosując surowicę ludzkąjako wybraną macierz, do 30 cm3 tej surowicy w kolbie szklanej dodaje się 7,5 mg PSTG firmy Karlshamn (Capmul® MCM, partia #30418-6) i miesza na mieszarce bębnowej w pokojowej temperaturze. Stężenie dodanego Capmul wynosi 25 mg/100 cm3. Nie stosuje się dodatkowych środków solubilizujących. Próbki roztworu pobiera się okresowo i oznacza w nich stężenie trójglicerydu, stosując analizę zawierającą lipazę specyficzną dla trój glicerydów z użyciem analizatora Ciba Corning Express 550, stosowanego w chemii klinicznej. Następująca niżej tabela wykazuje, że materiał ten daje takie stężenia trójglicerydu oznaczane analizatorem Express, które dowodzą, że rozpuszczenie jest całkowite po upływie 94 minut i że oznaczone stężenia pozostają stałe z biegiem czasu. Ponadto stężenia oznaczone analizatorem Express 550 wynoszą 212% dodanej ilości, co świadczy o tym, że PSTG reaguje tak, jakby był mocniejszy niż trójgliceryd endogenny. (Różnice danych odnośnie stężeń są powodowane nieprecyzyjnością metody oznaczania i zawierają się w zakresie precyzji przewidywanej dla Express 550).
Tabela 1
Czas (minuty) | Stężenie trójglicerydów (mg/100 cm) | Dodany PSTG netto (mg/100 cm3) |
Trójglicerydy endogenne (linia podstawowa) | 138 | 0 |
0 | 191 | 53 |
94 | 194 | 56 |
331 | 187 | 49 |
1424 | 189 | 51 |
Przykład II
Wpływ czasu i temperatury na aktywność PSTG:
Podobnie, jak wyżej w przykładzie 1, dodaje się 15 mg PSTG do 30 cm3 ludzkiej surowicy w brązowych kolbach. Roztwory analizuje się, oznaczając w nich stężenie trójglicerydów na urządzeniu Express 550, i pobrane próbki umieszcza się w temperaturach 5°C, 23°C i 30°C. Próbki te analizuje się, oznaczając w nich stężenie trójglicerydów w różnych odstępach czasu aż do 12 dni. Następująca niżej tabela przedstawia wyniki. Wszystkie stężenia podaje się w mg/100 cm3. Dane te wykazują że materiały sprawdzianowe, przechowywane w 5°C, są trwałe przez około
182 446 lata, co wynika z ekstrapoltacji niżej przedstawionych badań trwałości podczas przechowywania, przyspieszonych w 30°C.
Tabela 2
Czas (dni) | Przechowywanie w 5°C Sprawdzian PSTG | Przechowywanie w 23°C Sprawdzian PSTG | Przechowywanie w 30° C Sprawdzian PSTG | |||
0 | 140 | 245 | 135 | 243 | 131 | 248 |
0,25 | 128 | 241 | 128 | 243 | 131 | 251 |
0,50 | 128 | 241 | 128 | 242 | 131 | 243 |
2 | 128 | 243 | 132 | 241 | 135 | 248 |
4 | 135 | 245 | 137 | 253 | 143 | 267 |
6 | 136 | 250 | 143 | 262 | 152 | 272 |
11 | 145 | 256 | 159 | 282 | 176 | 301 |
12 | 172 | 282 | 191 | 300 | 206 | 322 |
Przykład III
Wpływ stężenia na aktywność PSTG:
Do 30 cm3 ludzkiej surowicy dodaje się 32 mg PSTG. Mieszaninę tę miesza się przez obracanie przez 60 godzin w 5°C, a następnie pobiera próbki i rozcieńcza je dalej ludzką surowicą. Oznacza się aktywność trójglicerydu w końcowych roztworach z użyciem klinicznego analizatora Du Pont ACA III. Następująca tabela przedstawia uzyskane dane. Jednostką stężenia jest mg/100 cm3.
Tabela 3
Rozcieńczenie surowicą | Ogólne stężenie ACA | Stężenie linii podstawowej | Stężenie PSTG netto | Stężenie PSTG obliczone | Stosunek |
Bez rozcieńczenia | 436 | 130 | 306 | 106,7 | 2,86 |
1:2 | 284 | 130 | 154 | 53,3 | 2,89 |
1:3 | 234 | 130 | 104 | 35,6 | 2,92 |
1:4 | 211 | 130 | 81 | 26,7 | 3,04 |
1:5 | 198 | 130 | 68 | 21,3 | 3,18 |
1:6 | 181 | 130 | 51 | 17,8 | 2,87 |
W tabeli tej stężenie linii podstawowej oznacza aktywność trójglicerydów materiału endogennego w ludzkiej surowicy, a stężenie PSTG obliczone oznacza aktualne stężenie, wynikające z ilości odważonego PSTG. Z tabeli tej wynika jasno, że dla wszystkich tych obliczonych stężeń stosunek, który stanowi różnicę całkowitego stężenia i stężenia linii podstawowej, podzieloną przez stężenie obliczone, pozostaje praktycznie stały na poziomie około 2,9. Stosunek ten może różnić się w zależności od rodzaju analizatora wykonującego pomiary, albo od specyfiki użytego PSTG, ale nadal pozostaje stały.
W tabeli 3 przykładu III wykazano przez obliczanie stosunku, który pozostaje stały na poziomie około 2,9, że odzyskiwanie oznaczanych trójglicerydów z zastosowaniem PSTG jest ilościowe i powtarzalne. Stosunek ten będzie być może różny w zależności od tego, jaki PSTG wybrano do zastosowania, ale dla każdego PSTG będzie się otrzymywać stałe stosunki. Pozwala to więc stosować PSTG jako substancje standardowe lub wzorcowe, a także jako sprawdziany. Substancję wzorcową lub standardową można wytwarzać w następujący sposób: w celu otrzy8
182 446 mania wartości wzorcowej 200 mg/100 cm3 do 1 dm3 surowicy, z której wymyto endogenne trójglicerydy, dodaje się 689,7 mg PSTG (w tym przypadku konkretnie Capmul MCM). Obliczenie jest następujące:
689,7 mg/dm3 x 2,9 x 0,1 dm3/100 cm3 = 200 mg/100 cm3
W celu uzyskania innych wartości wzorcowych stosuje się więcej lub mniej PSTG na dm3 wymytej surowicy. Dla PsTg innych niż Capmul MCM, albo innych sposobów postępowania analitycznego, należy stosować odpowiednie inne współczynniki, aby otrzymać poszukiwane stężenia „trójglicerydów”.
Przykład IV
Aktywność PSTG oznaczana analizatorem DuPont D-380:
Gdy dodaje się PSTG różnych rodzajów do końcowego stężenia, wynoszącego 210 mg/100 cm3 ludzkiej surowicy, która zawiera ilość endogennych trój glicerydów, wynoszącą około 90 mg/100 cm3, i miesza przez 6 godzin w 5°C, to otrzymuje się stałe wartości pStG. Próbki tych roztworów przechowuje się następnie w 5°C i oznacza aktywność trój glicerydów w czasie. Następuj ąca tabela przedstawia dane dla tych PSTG, analizowanych analizatorem DuPont D-380.
Tabela 4
Gatunek PSTG
Czas (dni) | Sprawdzian | Myverol | Tripo | Capmul | Mono-C-8 | Tribut |
0 | 86 | 237 | 248 | 228 | 256 | 234 |
2 | 95 | 230 | 265 | 216 | 245 | 222 |
5 | 95 | 234 | 289 | 221 | 242 | 225 |
9 | 94 | 234 | 293 | 225 | 248 | 222 |
27 | 87 | 239 | 306 | 233 | 256 | 234 |
Myverol oznacza destylowany jednolinolan glicerylu, Tripo oznacza trójpropionian glicerylu, Capmul oznacza mieszaninę jedno- i dwuglicerydów kaprylanowych i kaprynianowych, Mono C-8 oznacza jednokapryloiloglicerynę, a Tribut oznacza trójmaślan glicerylu.
Przykład V
Aktywność PSTG oznaczana analizatorem DuPont ACA III:
Próbki miesza się, jak opisano wyżej w przykładzie IV. Następująca tabela przedstawia dane dla tych PSTG, analizowanych analizatorem DuPont ACA III.
Tabela 5
Gatunek PSTG
Czas (dni) | Sprawdzian | Myverol | Tripo | Capmul | Mono-C-8 | Tribut |
0 | 100 | 252 | 269 | 250 | 274 | 251 |
2 | 97 | 257 | 297 | 250 | 275 | 253 |
5 | 102 | 258 | 321 | 257 | 275 | 253 |
9 | 104 | 257 | 326 | 257 | 281 | 257 |
Przykład VI
Aktywność PSTG oznaczana analizatorem Ciba Corning Express 550:
Próbki miesza się, jak opisano wyżej w przykładzie IV. Następująca tabela przedstawia dane dla tych PSTG, analizowanych analizatorem Ciba Corning Express 550.
182 446
Tabela 6
Gatunek PSTG
Czas (dni) | Sprawdzian | Myverol | Tripo | Capmul | Mono-C-8 | Tribut |
0 | 86 | 247 | 263 | 244 | 271 | 249 |
2 | 83 | 246 | 300 | 240 | 272 | 240 |
5 | 90 | 261 | 321 | 239 | 272 | 250 |
9 | 90 | 246 | 323 | 240 | 267 | 248 |
Przykład VII
Aktywność PSTG oznaczana analizatorem Kodak Ektachem 700XRC:
Próbki miesza się, jak opisano wyżej w przykładzie IV. Następująca tabela przedstawia dane dla tych PSTG, analizowanych analizatorem Kodak Ektachem 700XRC. Przedstawiono tu tylkojeden punkt czasowy, ale służy on bardzo dobrze do wykazania, że te PSTG pracują również całkiem dobrze i na tym analizatorze.
Tabela 7
Gatunek PSTG
Czas (dni) | Sprawdzian | Myverol | Tripo | Capmul | Mono-C-8 | Tribut |
23 | 91 | 268 | 335 | 258 | 287 | 260 |
Przykład VIII
Zastosowanie PSTG (Capmul) w pełnym sprawdzianie chemicznym.
Dostatecznąilość Capmul MCM (PSTG) dodaje się do pełnego sprawdzianu chemicznego na bazie ludzkiej surowicy w celu uzyskania końcowego stężenia trój glicerydów, wynoszącego około 200 mg/100 cm3, gdy sprawdzian ten analizuje się analizatorem D-380. Ten sprawdzian chemiczny zawiera około 50 oddzielnych wzorców analitycznych, a przedstawione w następującej tabeli stanowią pięć reprezentatywnych wzorców analitycznych wraz z PSTG działającymi jako składnik zawierający najwięcej trójglicerydu. Materiał sprawdzianowy przechowuje się w temperaturze 5°C, a aktywność różnych wzorców analitycznych oznacza w podanych odcinkach czasu.
Tabela 8
Czas (dni) | ACP | ALP | Bilirubin | CK | AST | ALT | TRIG |
0 | 3,76 | 165 | 7,55 | 251 | 222 | 147 | 212 |
1 | 3,86 | 178 | 7,46 | 233 | 214 | 142 | 218 |
2 | 3,83 | 181 | 7,28 | 227 | 214 | 143 | 227 |
4 | 3,77 | 179 | 7,01 | 231 | 218 | 147 | 233 |
6 | 3,74 | 171 | 6,79 | 232 | 221 | 144 | 217 |
9 | 3,71 | 171 | 6,31 | 218 | 215 | 137 | 238 |
Dane z tej tabeli wyraźnie wykazują trwałość tego PSTG w obecności licznych, innych składników.
182 446
Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 50 egz. Cena 2,00 zł.
Claims (7)
- Zastrzeżenia patentowe1. Sprawdziany, wzorce lub standardy dla chemii klinicznej, stanowiące substraty lipazy i stosowane w analizach wykrywających obecność trój glicerydów lub oznaczających ich ilość, znamienne tym, że zawierają zamienniki trój glicerydów stanowiące jedno-, dwu- lub trójglicerydy kwasów tłuszczowych o długości łańcucha Cj-C^, albo ich mieszaniny, nie wydzielane ze zwierzęcych, ludzkich lub innych źródeł naturalnych, lecz wytworzone przez estryfikację kwasów tłuszczowych o długości łańcucha C3-C18 za pomocą gliceryny, przy czym glicerydy te są rozpuszczalne w roztworach białek.
- 2. Sprawdziany, wzorce lub standardy według zastrz. 1, znamienne tym, że roztwór białka stanowi ludzką surowicę lub surowicę innego zwierzęcia.
- 3. Sprawdziany, wzorce lub standardy według zastrz. 1, znamienne tym, że roztwór białka stanowi ludzką albuminę lub albuminę innego zwierzęcia.
- 4. Sprawdziany, wzorce lub standardy według zastrz. 1, znamienne tym, że roztwór białka stanowi płyny zawierające białko, ludzkie lub innego zwierzęcia.
- 5. Sprawdziany, wzorce lub standardy według zastrz. 4, znamienne tym, że roztwór białka jako płyn stanowi mocz, płyn kręgowy lub ślinę.
- 6. Sprawdziany, wzorce lub standardy według zastrz. 1, znamienne tym, żejako zamienniki trójglicerydów zawierająglicerydy wybrane z grupy, obejmującej jednolinolan glicerydu, trójpropionian gliceryny, jednokapryloiloglicerynę, trójmaślan glicerylu oraz mieszaniny jedno- i dwuglicerydów kaprylanowych i kaprynianowych.
- 7. Sprawdziany, wzorce lub standardy według zastrz. 1, znamienne tym, że jako zamienniki trójglicerydów zawierają mieszaninę jedno- i dwuglicerydów kaprylanowych i kaprynianowych, wytworzoną przez estryfikację mieszaniny kwasów kaprylowego i kaprynowego gliceryną.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US29881694A | 1994-08-31 | 1994-08-31 | |
PCT/IB1995/000722 WO1996007105A1 (en) | 1994-08-31 | 1995-08-31 | Stable substitute tryglycerides for use in clinical chemistry assay controls or calibrators and process for their preparation |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
PL318885A1 PL318885A1 (en) | 1997-07-07 |
PL182446B1 true PL182446B1 (pl) | 2002-01-31 |
Family
ID=23152107
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
PL95318885A PL182446B1 (pl) | 1994-08-31 | 1995-08-31 | Sprawdziany, wzorce lub standardy dla chemii klinicznej |
Country Status (14)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US5885784A (pl) |
EP (1) | EP0778949B1 (pl) |
JP (1) | JP3547756B2 (pl) |
KR (1) | KR100346645B1 (pl) |
AT (1) | ATE180060T1 (pl) |
AU (1) | AU692908B2 (pl) |
BR (1) | BR9508647A (pl) |
CA (1) | CA2197437A1 (pl) |
DE (1) | DE69509664T2 (pl) |
DK (1) | DK0778949T3 (pl) |
ES (1) | ES2131325T3 (pl) |
MX (1) | MX9701485A (pl) |
PL (1) | PL182446B1 (pl) |
WO (1) | WO1996007105A1 (pl) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE10207897B4 (de) * | 2002-02-20 | 2005-06-30 | Filt Lungen- Und Thoraxdiagnostik Gmbh | Verfahren zur Kalibrierung von Bio-Chemosensoren einer Analyseeinrichtung |
JP6139215B2 (ja) * | 2013-03-29 | 2017-05-31 | シーシーアイ株式会社 | 中性脂肪濃度測定用の標準物質組成物およびその製造方法 |
WO2020214565A1 (en) * | 2019-04-15 | 2020-10-22 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Calibration methods and compositions for biomolecule analysis |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3955925A (en) * | 1973-11-12 | 1976-05-11 | Proksch Gary J | Preparation of optically clear serum |
US4011045A (en) * | 1975-02-14 | 1977-03-08 | Bonderman Dean P | Turbidity reduction in triglyceride standards |
CA1223814A (en) * | 1983-08-22 | 1987-07-07 | Steven N. Buhl | Optically clear serum triglyceride compositions |
US4816411A (en) * | 1984-07-06 | 1989-03-28 | Technicon Instruments Corporation | Method for eliminating turbidity in a biological fluid and reagent therefor |
DE3445010A1 (de) * | 1984-12-10 | 1986-06-19 | Boehringer Mannheim Gmbh | Kontroll- bzw. eichserum fuer die lipid-diagnostik |
-
1995
- 1995-08-31 JP JP50859396A patent/JP3547756B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1995-08-31 AU AU31902/95A patent/AU692908B2/en not_active Ceased
- 1995-08-31 WO PCT/IB1995/000722 patent/WO1996007105A1/en active IP Right Grant
- 1995-08-31 BR BR9508647A patent/BR9508647A/pt not_active Application Discontinuation
- 1995-08-31 AT AT95927946T patent/ATE180060T1/de not_active IP Right Cessation
- 1995-08-31 CA CA002197437A patent/CA2197437A1/en not_active Abandoned
- 1995-08-31 MX MX9701485A patent/MX9701485A/es unknown
- 1995-08-31 ES ES95927946T patent/ES2131325T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1995-08-31 KR KR1019970701348A patent/KR100346645B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1995-08-31 DE DE69509664T patent/DE69509664T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1995-08-31 EP EP95927946A patent/EP0778949B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-08-31 PL PL95318885A patent/PL182446B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1995-08-31 DK DK95927946T patent/DK0778949T3/da active
-
1996
- 1996-01-11 US US08/584,906 patent/US5885784A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP0778949A1 (en) | 1997-06-18 |
ES2131325T3 (es) | 1999-07-16 |
JPH10504904A (ja) | 1998-05-12 |
AU692908B2 (en) | 1998-06-18 |
DE69509664D1 (de) | 1999-06-17 |
WO1996007105A1 (en) | 1996-03-07 |
AU3190295A (en) | 1996-03-22 |
ATE180060T1 (de) | 1999-05-15 |
CA2197437A1 (en) | 1996-03-07 |
JP3547756B2 (ja) | 2004-07-28 |
DK0778949T3 (da) | 1999-11-01 |
MX9701485A (es) | 1998-02-28 |
BR9508647A (pt) | 1997-12-30 |
DE69509664T2 (de) | 2000-02-17 |
PL318885A1 (en) | 1997-07-07 |
EP0778949B1 (en) | 1999-05-12 |
KR100346645B1 (ko) | 2003-01-29 |
US5885784A (en) | 1999-03-23 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Burcham et al. | Introduction of carbonyl groups into proteins by the lipid peroxidation product, malondialdehyde | |
CN102628864B (zh) | 胶乳增强免疫比浊法测定血清或尿液中心脏型脂肪酸结合蛋白的试剂盒 | |
Hogstrand et al. | Metallothionein as an indicator of heavy-metal exposure in two subtropical fish species | |
Ryan | Quantitative determination of soluble cellular proteins by radial diffusion in agar gels containing antibodies | |
Richieri et al. | Unbound free fatty acid levels in human serum. | |
Wilkinson et al. | Studies on fatty acid-binding proteins. The detection and quantification of the protein from rat liver by using a fluorescent fatty acid analogue | |
Russell | A calibrated fluorescence polarization assay for assessment of fetal lung maturity. | |
Iwata et al. | In vitro evaluation of lipids adsorbed on silicone hydrogel contact lenses using a new gas chromatography/mass spectrometry analytical method | |
JP2837273B2 (ja) | 分析法 | |
PL182446B1 (pl) | Sprawdziany, wzorce lub standardy dla chemii klinicznej | |
ES2698518T3 (es) | Medición de ensayo precisa de analitos hapténicos hidrófobos | |
CN107525936A (zh) | 一种提升胶乳免疫比浊法中肌钙蛋白抗体稳定性的组合物 | |
MXPA97001485A (es) | Trigliceridos substituidos estables para usarse en controles o calibradores de analisis de quimica clinica y proceso para su preparacion | |
US4306020A (en) | Composition for the analysis of the alkaline phosphatase and method therefor | |
Dudeja et al. | Protein-lipid interactions in human small intestinal brush-border membranes | |
JP2008501121A (ja) | ジアゾ試薬のinsitu形成を用いるアッセイシステム | |
Chedid et al. | Use of thin-layer chromatography on silica gel for serum lipid fractionation and measurement in the routine clinical laboratory | |
Lin et al. | Determination of phosphatidylserine in milk-based nutritional products using online derivatization high-performance liquid chromatography | |
Stathopoulos et al. | Identification of two cytosolic diacylglycerol kinase isoforms in rat brain, and in NIH-3T3 and ras-transformed fibroblasts | |
Ulberth | A rapid headspace gas chromatographic method for the determination of the butyric acid content in edible fats | |
Pruvot et al. | Electroimmuno-and immunonephelometric assays of apolipoprotein AI by using a mixture of monoclonal antibodies. | |
Nelson et al. | Improved staining characteristics of serum lipids after halogenation and esterification of thin-layer chromatograms. | |
Nicolay et al. | Evaluation of new apolipoprotein C-II and apolipoprotein C-III automatized immunoturbidimetric kits | |
Khattab et al. | Purification and immunological characterization of pigeon serum butyrylcholinesterase: implications on environmental monitoring and toxicological testing of birds | |
JPH0588789B2 (pl) |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
LAPS | Decisions on the lapse of the protection rights |
Effective date: 20060831 |