Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania nowych pochodnych cefalosporyny Antybiotyki cefalosporynowe zawierajace w pozycji 3 rozmaite heterocykliczne podstaw¬ niki tioffetylowe sa znane• lip. w opisie patentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 3 516 997 opisano tetrazolotiolo- i tiadiazolotiolo- podstawione cefalosporyny zawierajace heterocy¬ kliczna grupe acyloaminowa w pozycji 7* W opisie patentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 3 641 021 opisano tetrazolotiolo- i tiadiazolotiolo-podstawione cefalosporyny zawierajace w pozycji 7 podstawnik migdaloilowy lub fenylogiicyIowy• W opisie patentowym Stanów Zjedno¬ czonych Ameryki nr 4 110 535 opisano pewne zwiazki cefalosporynowe zawierajace w pozycji 3 podstawnik 3-ketopirydazynylotiometylowy. W opisie patentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 4 107 173 opisano zwiazki cefalosporynowe podstawione w pozycji 3* grupa 3-sulfometylo- 1t2,4-triazol-5-ilotiometylowa. W opisie patentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 4 103 008 opisano zwiazki cefalosporynowe podstawione w pozycji 7 grupa dwuketopiperazyn-1-ilokarbo- nyloaminowa, a w pozycji 3- podstawiona lub nie podstawiona grupa 1f3f4-tiadiazolo-2-ilo- tloiaetylowa* V opisie patentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 4 101 656 opisano 7-acety- loamino-podstawione cefalosporyny zawierajace w pozycji 3 podstawnik tetrazolotiometylowyf podstawiony grupa alkilosulfonamidoalkilowa* M opisie patentowym Stanów Zjednoczonych Ame¬ ryki nr 4 100 346 opisano pewne o-aminofenyloacetamido-podstawione cefalosporyny zawieraja¬ ce w pozycji 3 podstawnik tetrazolotiometylowy podstawiony grupa Karboksyetylowa lub karbo- ksypropylowa* W opisie patentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 4 080 498 ujawniono 2-ami- notiazoloacetamidocefalosporyne podstawiona w po.zycji 3 heterocykliczna grupa tiometylowa* W opisie patentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 3 968 226 opisano liczne 3-heterocyklicz- ne-tiometylo-podstawione cefalosporyny* W opisie patentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 4 082 912 ujawniono 7-acyloamidocefalosporyny ze sprzezona heterocykliczna grupa /2-kar- boksyalkUo/-2t3^wuwodoro-S-triazolo/^#3-^-pirydazyn-3^n*6-ylo^metylowa w pozycji 3»2 132 001 W opisie patentowym Wielkiej Brytanii nr 1 525 626 opisano pewne zwiazki cefalospory- howe zawierajace w pozycji 3 podstawnik 1-karboksymetylo-1H-tetrazol-5-ilotiometylowy. M opi¬ sie patentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 3 985 739 opisano 7-fenyloglicylo- lub 7-mig- daloilo-podstawione cefalosporyny, podstawione w pozycji 3 grupa 1,3,4- lub 1,2f3-triazolo- tiometylowa* W opisie patentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 3 985 738 opisano 7-migda- lamidocefalosporyny zawierajace w pozycji 3 podstawnik tetrazolo/1,5^Jv*rydazyn-6-ylotio- metylowy. w opisie patentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 3 966 719 ujawniono zwiazki cefalosporynowe, w których grupa 4-karboksylowa zastapiona jest grupa tetrazol-5-ilowa; 3-heterocyklotioio-podstawione metylocefalosporyny na ogól wytwarza sie przez zasta¬ pienie grupy acetoksylowej 3-acetoksymetylo-3-ceferau, lub chlorowca 3-chlorowcometylo-3-ce- femu, zadanym heterocyklicznym tiolem. V opisie patentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 4 Wi 391 opisano niezawodny sposób podstawiania zastosowany do wytwarzania 3-heterocyklo- tiometylo-podstawionych cefalosporyn* Wynalazek dotyczy sposobu wytwarzania antybiotyków cefalosporynowyeh o szerokim spek¬ trum dzialania, rózniacych sie budowa od znanych cefalosporyn. W szczególnosci, wynalazek obejmuje swym zakresem sposób wytwarzania 7-amino i 7-acyloaminocefalosporyn podstawionych w pozycji 3 pierscienia dwuv:odorotriazyny grupa bis-tetrazolilometylowa«, 7-aminocefalosporyny wytwarzane sposobem wedlug wynalazku sa podstawione w pozycji 3 1-/lH-tetrazol-5-ilometylo/-lH-tetrazol-5-ilotiometylowa o wzorze 13, lub grupa 2-/lH-tetra- zol-5-ilometylo/-2H-tetrazolil-5-ilotiometylowa o wzorze 14, w których to wzorach R^ oznacza atom wodoru lub grupe C^-d--alkilowa i stanowia antybiotyki o szerokim spektrum dzialania, hamujace wzrost drobnoustrojów chorobotwórczych dla czlowieka i zwierzat. Zwiazki te sa uzy¬ teczne przy podawaniu pozajelitowym w odpowiednich dawkach i postaciach farmaceutycznych.Zwiazki wytwarzane sposobem wedlug wynalazku, w których podstawnikiem w pozycji 3 jest gru¬ pa 1-/lH-tetrazol-5-ilometylo/-1H-tetrazol-5-ilotiometylowa, zachowujac u zwierzat skutecz¬ ny poziom we krwi przez dluzszy czas.Sposób wytwarzania zwiazków cefalosporynowych o wzorze 1, w którym R, oznacza ugru¬ powanie o wzorze 2, w którym R, oznacza atom wodoru lub grupe C^-C^-alkilowa, R oznacza atom wodoru lub grupe acylowa pochodzaca od kwasu karboksylowego o wzorze 5, R- oznacza atom wo¬ doru lub grupe zabezpieczajaca grupe karboksylowa, dajaca sie latwo usunac na drodze hydro¬ lizy lub hydrogenolizy, a R2 oznacza atom wodoru lub grupe metoksylowa, wedlug wynalazku po¬ lega na tym, ze poddaje zwiazek o wzorze 3, w którym R, R1 i Rg maja wyzej podane znaczenie, a R10 oznacza grupe C^-C^-acyloksylowa lub atom chlorowca^reakcji z bis-tetrazolometyiotio- lem o wzorze 4t w którym R ma wyzej podane znaczenie, ewentualnie w postaci soli, w srodo¬ wisku rozpuszczalnika organicznego i ewentualnie gdy R^ nie oznacza atomu wodoru, usuwa sie grupe ochraniajaca grupy karboksylowej i ewentualnie gdy R* oznacza atom wodoru otrzymany zwiazek przeprowadza sie w farmaceutycznie dopuszczalna sól.Okreslenie "grupa acylowa pochodzaca od kwasu karboksylowego" odnosi sie do reszty acylowej przylaczonej w pozycji 6 17 lancucha bocznego podstawników acyloaminowych znanych antybiotyków penicylinowych i cefalosporynowych. Przykladami kwasów karboksylowych dostar¬ czajacych takich grup acylowych sa kwasy tiofenooctowe, oksymy kwasu furanoglioksalowego i 2-amino-1,3-tiazologlioksalowego, oraz pochodne ich funkcji oksyiminowej, takie jak nisko- alkilowe pochodne oksymu, np. pochodne metoksyiminowe lub etoksyiminowe.We wzorze ogólnym 1 i 3 R^ oznacza atom wodoru lub grupe zabezpieczajaca grupe kar¬ boksylowa, latwa do usuwania w warunkach hydrolizy lub hydrogenolizy. Grupy takie sa dobrze znane w dziedzinie chemii cefalosporyn i naleza do nich latwo odszczepialne grupy estrowe, takie jak grupa benzylowa, dwufenylometylowa, p-nitrobenzylowa, p-metoksybenzylowa, fenacy- lowa, chlorowcowana fenacylowa, chlorowcoalkilowa, taka Jak jodometylowa, 2,2,2-trójchloro- etylowa i 2,2,2-trójbromoetylowa, rozgalezione estry alkilowe, alkenylowe i alkinylowe, ta¬ kie jak ester III-rzed. butylowy, 3-metylobut-1-en-3-ylowa i izopentenylowa*132 001 3 W przypadku, gdy we wzorze ogólnym 113^ oznacza atom wodoru, zwiazki wytwarzane sposobem wedlug wynalazku mozna przeksztalcac w farmaceutycznie dozwolone sole, takie jak sole metali alkalicznych i sole metali ziem alkalicznych, np. sól sodowa, sól potasowa, sól litowa i sól wapniowa, sole z aminami, np. sole utworzone z farmaceutycznie dozwolonymi ami¬ nami, takimi jak prokaina, abietyloamina, etanoloaminy, takie jak jednoetanoloamina i dwu- etanoloamlna i podobne sole z aminami i sole metali, oraz sole amoniowe* Sole te mozna for¬ mulowac w farmaceutycznie uzyteczne dawki i postacie do pozajelitowego podawania antybio¬ tyku.Korzystnymi zwiazkami wytwarzanymi sposobem wedlug wynalazku sa zwiazki o wzorze ogólnym 1, w którym symbol R, oznacza grupe 1-/lH-tetrazol-5-ilometylo/-lH-tetrazol-5-ilowa, w której grupa HN koncowego tetrazolu moze byc podstawiona grupa C^-C^-alkilowa.Dalsza korzystna grupe zwiazków wytwarzanych sposobem wedlug wynalazku stanowia zwiaz¬ ki przedstawione wzorem ogólnym 1, w którym R oznacza atom wodoru lub grupe acylowa o wzorze 5, gdzie Rr oznacza grupe o wzorze 6, albo R oznacza grupe o wzorze 7, albo R oznacza grupe oksyimino-podstawiona o wzorze 8, w którym R^ oznacza grupe o wzorze 9 lub 10, a Ry oznacza grupe Cj-C^-alkilowa, R,. oznacza atom wodoru lub grupe zabezpieczajaca grupe karboksylowa, R2 oznacza atom wodoru lub grupe metoksylowa, R, oznacza grupe bis-tetrazolilometylowa o wzo¬ rze 11 lub 12, w których to wzorach R* oznacza atom wodoru lub grupe C-C5«-alkilowa, a w przy¬ padku gdy R^ oznacza atom wodoru, ich farmaceutycznie dopuszczalne sole.Zwiazki wytwarzane sposobem wedlug wynalazku charakteryzuja sie normalna stereochemia antybiotyków cefalosporynowyeh, to znaczy lancuch boczny w pozycji 7, podstawnik o symbolu R ma konfiguracje/3, a grupa 7-metoksylowa o symbolu R2 ma konfiguracje c£.Bis-tetrazolometylo-podstawione cefalosporyny wytwarzane sposobem wedlug wynalazku przeksztalcac mozna poddajac reakcji kwas 7-aminocefalosporanowy (7-ACA) z odpowiednim bis- tetrazolometylotiolera w celu utworzenia kwasu 7-araino-3-bis-tetrazolometylotiometylo-3-cefe- mo-^-karboksylowego• Alternatywnie, kwas 7-acyloamino-cefalosporanowy mozna poddac reakcji z odpowiednim bis-tetrazolcmetylctiolem w celu otrzymania zadanego zwiazku.Sposobem wedlug wynalazku wytwarza sie równiez rdzen bis-tetrazolometylotiometylo- podsbawionej cefalosporyny, zawierajacej w pozycji 7 grupe aminowa. Ten zwiazek zawierajacy rdzen 7-aminowy jest uzyteczny przy wytwarzaniu 7-acyloaminocefalosporyn.Zwiazki zawierajace rdzen 7-amino-3-/bis-tetrazolometyIowy o wzorach 15 i 16 wytwarza sie przy uzyciu kwasu 7-aminocefalosporanowego (7-ACA). Przy wytwarzaniu zwiazków o tego rodzaju rdzeniu, poddaje sie kwas 7-aminocefalosporanowy, lub jego ester, reakcji z 1-/lH-te- trazol-5-ilometylo/-1H-tetrazolo-5-tiolem lub 2-/lH-tetrazol-5-ilometylo/-2H-tetrazol-5-tio- lenj, w wyniku czego powstaja zwiazki o wspomnianych wzorach. Reakcje te, której rezultatem jest zastapienie grupy acetoksylowej w pozycji 3 7-ACA grupa bis-tetrazolometylotiolowa, mozna przeprowadzic w warunkach niewodnych wtedy, kiedy we wzorach 16 i 15 R^ oznacza atom wo¬ doru lub ester, natomiast w obecnosci wody, gdy R^ oznacza atom wodoru.W warunkach niewodnych otrzymywanie zwiazków z rdzeniem takim jak na wspomnianych wzo¬ rach dokonuje sie w sposób nastepujacy* Kwas 7-aminocefalosporanowy poddaje sie reakcji z bis-tetrazolometylotiolem w temperaturze od okolo 25°C do okolo 80°C, w srodowisku kwasu octowego lodowatego w obecnosci zwiazku trójfluorku boru z eterem* Reakcja zachodzi z dogodna szybkoscia w temperaturze okolo 60-B0°C, a wyzsze wydajnosci uzyskuje sie w przypadku uzycia tiolu w nadmiarze. Po zajsciu reakcji mieszanine rozciencza sie woda i pH doprowadza do pun¬ ktu izoelektrycznego charakterystycznego dla wolnego kwasu o podstawionym rdzeniu. W punkcie izoelektrycznym, przy pH okolo ^,0-5,0 produkt wytraca sie z mieszaniny reakcyjnej.Zastapienia grup w warunkach wodnych dokonuje sie w nastepujacy sposób. Wodny roztwór 7-ACA przy zasadowym pH okolo 7,0-9,0 miesza sie z roztworem bis-tetrazolometylotiolu w po¬ staci soli sodowej lub potasowej i mieszanine reakcyjna miesza sie przy lagodnym ogrzewaniu.4 132 001 Otrzymana mieszanine reakcyjna zakwasza sie kwasem mineralnymf takim jak kwas solny, do osia¬ gniecia punktu izoelektrycznego. 3-podstawiony 7-aminozwiazek w postaci wolnego kwasu wytraca sie z mieszaniny reakcyjnej i zostaje wyodrebniony za pomoca odsaczenia. Podstawiony rdzen mozna oczyscic, jesli jest to potrzebne, przez krystalizacje z odpowiedniego rozpuszczalnika, albo, alternatywnie, poprzez jego sól, taka jak chlorowodorek lub tosylan. 3-podstawione 7-aminozwiazki przedstawione wzorami 15 i 16 sa wartosciowymi zwiazkami posrednimi uzytecznymi przy wytwarzaniu antybiotyków* Jak wyzej zauwazono, grupe 7-aminowa rdzenia mozna zacylowac zadanym kwasem karboksylowym, a korzystnie jego aktywna pochodna. N-acy- lowanie powyzszego 7-aminopodstawionego rdzenia jest reakcja miedzy kwasem karboksylowym a zwiazkiem aminowym i mozna ja przeprowadzic metodami acylowania stosowanymi przy acylowaniu rdzenia 7-aminocefalosporynowego, takiego jak 7-ACA i 7-ADCA.V innym przykladzie realizacji sposobu wedlug wynalazku kwas 7-acyloamino-3-^cetoksy- metylo-3-cefemo-4-karboksylowy o wzorze 17, w którym R oznacza grupe acylowa zdefiniowana wyzej przy omawianiu budowy zwiazku o wzorze 1, poddaje sie reakcji z bis-tetrazolometylotio- lem o wzorze 4, w którym R^ oznacza atom wodoru lub grupe Cj-C^-alkilowa, w wyniku czego two¬ rzy sie zwiazek o wzorze 1. Reakcje mozna prowadzic w temperaturze od okolo 20°C do okolo 75°C w warunkach wodnych, w pH od okolo 7 do okolo 9, korzystnie w obecnosci mieszajacego sie z woda rozpuszczalnika organicznego, takiego jak acetonitryl lub czterowodorofuran.Powyzsza reakcje mozna takze prowadzic w warunkach niewodnych postepujac zgodnie ze sposobem opisanym w opisie patentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 4 144 391• Zwiazki o wzorze 1f w którym R2 oznacza grupe metoksylowa, wytwarza sie przez zastapie¬ nie grupy 3-acetoksylowej kwasu 7-acyloamino-7-metoksycefalosporanowego, albo przez zasta¬ pienie 3'-chlorowcowej grupy estru kwasu 7-acyloamino-7-metoksy-3-chlorowcometylo-3-cefemo- 4-karboksylowego• Kwas 7-acyloamino-7-metoksy-3-acetoksymetylo-3-cefemo-4-karboksylowy mozna poddac re¬ akcji z bis-tetrazolometylotiolem w celu wytworzenia omawianego zwiazku zgodnie ze sposobami opisanymi w powyzszej czesci opisu w przypadku cefalosporyn nienietoksylowanyclu Jeszcze inny alternatywny sposób realizacji wynalazku prowadzacy do wytwarzania 7-me- toksycefalosporyn o wzorze 1 polega na tym, ze poddaje sie ester kwasu 7-acyloamino-7-meto- ksy-3-broiDometylo-3-cefemo-4-karboksylowego reakcji z bis-tetrazolometylotiolem, w wyniku cze¬ go otrzymuje sie omawiany zwiazek. I tak, ester p-nitrobenzylowy kwasu 7-/2-tienyloacetami- do/-7-metoksy-3-bromoetylo-3-cefemo-4-karboksylowego poddaje sie reakcji z 1-/lH-tetrazolo- 5-ilometylo/~1H-tetrazol-5-tiolemf uzytym w molowym nadmiarze, w srodowisku dwumetyloformami- du, w temperaturze pokojowej, w wyniku czego otrzymuje sie ester p-nitrobenzylowy kwasu 7-/2- 1:ienyloacetamido/-7-*metoksy-3-Zl-/lH-tetrazol-5-ilometylo/-1H-tetrazol«5-ilotiometylo7-3-ce- famo-4-karboksylowego. W rezultacie odszczepienia estrowej grupy p-nitrobenzylowej otrzymuje sie zwiazek o wzorze 1, w który© R1 oznacza atom wodoru. Odszczepienie estrowej grupy p-nitro- benzylowej prowadzi sie znanymi metodami rozszczepienia polaczonego z redukcja, takiego jak hydrogenoliza katalityczna z uzyciem 5% katalizatora palladowego na weglu w srodowisku roz¬ puszczalnika obojetnego, takiego jak czterowodorofuran lub acetonitryl, lub rozszczepienie elektrolityczne polaczone z redukcja przy katodzie rteciowej o duzej powierzchni.Przy wytwarzaniu 7-metoksypodstawionyeh cefalosporyn sposobem wedlug wynalazku mozna takze uzyc innych latwych do usuniecia grup estrowych zabezpieczajacych grupe karboksylowa.Np. dobrze znanymi w tej ,dziedzinie techniki grupami zabezpieczajacymi grupe karboksylowa saj estrowa grupa dwufenylonietyIowa i grupa p-metoksybenzylowa, przy czym obie one daja sie usunac przez poddanie estru dzialaniu kwasem trójfluorooctowym w obecnosci anizolu, korzystnie w tem¬ peraturze od okolo 0°C do okolo 10°C. Zastosowac mozna takze inne grupy estrowe, takie jak grupy chlorowcoalkilowe, np. grupa 2,2,2-trójchloroetylowa i grupa 2-jodoetylowa, które usuwa sie przez redukcje cynkiem z uzyciem kwasu.132 001 5 Tetrazole o wzorze ogólnym 4, w którym R^ oznacza grupe Cj-Cz-alkilowa, wytwarza sie za pomoca alkilowania odpowiednich S-zabezpieczonych, izomerycznych tetrazoli bromkiem lub jodkiem Cj-C,~alkilu w obecnosci zasady. W rezultacie alkilowania otrzymuje sie mieszanine izomerów, które mozna oddzielic od siebie metoda HPLC. Fb rozdzieleniu poszczególnych izome¬ rycznych tetrazoli lub produktów ich alkilowania, jak wyzej opisano, grupe S-zabezpieczajaca, taka jak grupa benzylowa, usuwa sie z tiolu za pomoca redukcji elektrolitycznej przy uzyciu katody rteciowej o duzej powierzchni.Alternatywnie, 1 -/i-/C1 -C^-alkiW-lH-tetrazol-5-ilometylc7-1H-tetrazolo-5-tiol wy¬ twarza sie przy uzyciu 5-chloro-1H-tetrazolo-1-octanu etylu. Octan 5-chlorotetrazolu poddaje sie reakcji z C^-C^-alkiloamina, w wyniku czego otrzymuje sie odpowiedni N-Zc.-C^-alkilo/ amid. Nastepnie otrzymany amid poddaje sie reakcji z fosgenem uzytym w nadmiarze, w tempera¬ turze od okolo -5°C do okolo 10°C, w srodowisku rozpuszczalnika obojetnego, takiego jak po¬ chodna chlorowcowa weglowodoru, np. chlorek metylenu lub dwuchloroetan, w wyniku czego otrzy¬ muje sie odpowiedni N-chlorokarbonylo-N-/0|-C,-alkilo/amid. Nastepnie otrzymany N-chlorokar- bonyloamid poddaje sie reakcji z azydkiem czterometyloguanidynowym w srodowisku dioksanu w temperaturze wrzenia pod chlodnica zwrotna, w wyniku czego otrzymuje sie l-Zl-Zc^C^-alkil/- 1H-tetrazol-5-ilome1^lo7-5-chloro-1H-*tetrazol, po czym otrzymany zwiazek poddaje sie reakcji z wodorosiarczkiem sodowym w celu zastapienia grupy 5-chloro grupa tiolowa.Korzystna grupe zwiazków wytwarzanych sposobem wedlug wynalazku przedstawia wzór ogól¬ ny 18, w którym Rg oznacza grupe o wzorze 9 lub 10, a R- grupe. C^^ alkilowa* Szczególnie korzystne sa te zwiazki o wzorze ogólnym 18, w którym R„ oznacza grupe Cj- Cyalkilowa, a R^ oznacza atom wodoru, a zwlaszcza te zwiazki, w których wzorze Rg oznacza grupe 2-furylowa lub 2-amino-1,3-tiazol-4-ilowa lub jej tautomeryczna odmiane 2-iminowa, jak przedstawiono na wspomnianym wzorze strukturalnym* Jest rzecza wiadoma, w tej dziedzinie techniki, ze funkcja izonitrozowa w lancuchu bocznym wystepowac moze albo w konfiguracji syn albo anti, oraz, ze zwiazki o konfiguracji syn sa korzystniejsze, dzieki ich wzmozonej aktyw¬ nosci, od zwiazków anti. Przykladami korzystnych zwiazków sa: kwas syn-7^-/"°C-metok^yimino- o6-/2-amino-1,5 -tiazol- 4-ilo/-acetamido73-/l-/lH-tetrazol-5-ilometylo/-1H-tetrazol-5-ilotio- metylo7-3-cefamo-4-karboksylowy oraz kwas 7-/3-/2-tienyloacetoamido/-3-/l-/lH-tetrazol-5- ilomQtylo/-1H-tetrazol-5-ilotiometylo7-3-cefemo-4-karboksylowy.Bis-tetrazolotiometylo-podstawione cefalosporyny wytwarzane sposobem wedlug wynalazku sa antybiotykami o szerokim spektrum dzialaniaf hamujacymi wzrost zarówno Gram- dodatnich jak i Gram-ujemnych drobnoustrojów patogennych dla czlowieka i zwierzat. Przeciwbakteryjna aktywnosc tych zwiazków wykazano in vitro metoda rozcienczeniowa w agarze. YJ ponizszej ta¬ blicy 1 przedstawiono najmniejsze stezenie hamujace reprezentatywnych zwiazków wytwarzanych sposobem wedlug wynalazku.Tablica 1 Aktywnosc przeciwbakteryjna bis-tetrazoilometylo podstawionych cefalosporyn in vitro 1 Zwiazek badany Najmniejsze stezenie hamujace Uig/ml) I Drobnoustrój 1 Staphylococcus aureus I •*"_ -"- «••»— Staphylococcus epidermidis «»-» Szczep Z XI. 1 V41 X400 S13E EPI1 EPI1 I A 3 2 2 16 8 16 S |T a 0,5 2 32 4 * 4 C 5 1 6 128 16 8 32 I D b I 4 6 128 16 16 \ 64 1 E 7 2 4 123 8 8 32 j F ] 8 4 8 I 128 j 32 I 32 I 64 cd, tablicy 1 na str« 66 132 001 cud. tablicy 1 I 1 Streptococcus Group A Streptococcus pneumoniae Streptococcus Group D i —«• I Haemophilus influenzae I -.«•¦ I —w«- I - m- I Shigella sonnei I Escherichia coli I mn — I -•?- Klebsiella sp.I —"» I Enterobacter aerogenes i -"- l I -H- I -'¦- cloacae I —M— Salmonella sp# I »"• Pseudomonas aeruginosa I —H— I I —"- I I Serratis roarcescens I I -"- I I Proteus morganii I Proteus inconstans 1 Proteus rettgeri I I -H- I I Citrobacter freundii I ' 2 I C203 I PARK X66 I 9960 I 2 Brun 2513 z CLi i 763 N9 N1C EC14 TEM AZS KAE X68 C32 EB17 EB5 265A X514 I 1335 X528 X239 Bs18 I X93 I SE3 I PR15 I PR33 ] PR7 I C24 CF17 1 I Bordetella bronchoseptica 16 3 1 0,5 4 64 |128 I — I — 0P25 Of25 I 8 I B k 4 1 4 4 128 128 128 ;128 1 ! 2 I 128 ,128 128 I 16 64 64 4 4 1 I 128 I 128 I _ I 1 2 I 128 64 I "~ I "" I 1 0,5 4 4 2 8 0,5' !128 0,5 32 16 128 128 0,5 1 128 128 128 128 I 128 64 64 4 8 j 128 8 | 1 5-" I 0,5 j 0,25 M28 128 4 4 I "" I ~ 1 2 I 0,25 I 8 2 128 0,25 !' 4 ' 2 128 ;128 1 2 128 128 128 I 32 128 I 2 2 4 0,5 128 16 I P"T~ I 0,06 I 0,03 128 16 0,125 I 0,125 I ~ I " 0,125 j 0,25 I 0,06 0,125 0,06 16 0,06 | 0,25 0,25 2 64 0,125 | 0,25 | 8 16 8 I 0,25 I 1 0,06 0,125 I 0,125 I 0,125 I 32 I 32 I T I 0,03 i 0,015 128 16 I 0,125 0,125 I "~ I "" 0,125 I 0,25 I 0,06 I 0,125 0,06 4 0,125 0,125 0,25 1 32 0,25 0,5 | 32 32 32 0,125 I 0,5 0,125 j 0,5 0,03 1 0,25 1 16 128 J r s "i 0,03] I 0f03 I 128 128 I 0,06 j 0,06 ~ I I "" I 2 I 0,25 I I 0,125 J 0,125 j 0,125 j 8 I 0,06 I 0,25 | 0,25 I 2 I 64 0,125 I 0,5 16 16 32 0,25 j 2 0,5 1 I 0,03 I 2 64 64 W powyzszej tablicy 1 uzyto nastepujacych oznaczen: 1) A. Kwas 7/JV2-tienyloacetamido/-7(^-metoksy-3-/lVlH-tetrazol-5-ilometylo/-1II-tetrazol-5- -ilotiometylo7-3-cefemo-4-karboksylowy« B. Kwas 7fl -/2-tienyloacetamido-3-/l-/l-inetylo-1H-tetrazol-5-ilonietylo/-1H-tetrazol-5-ilo- tiometylo7-3-cefemo-4-karboksylowy, Ci Kwas 7/3 Vr^-forrayloniigdalamido/-3-Zl*-/lH-tetrazol-5-ilometylo/-lH-tetrazol-5-ilotio- metylo^-3-cefemo-4-karboksylowy,j 132001 7 I i D* Kwas syn-7$ -JjdL -metoksyimino-ct -/2-amino-1, 3-tiazol-4-ilo/acetamidg7-3-/1-/1H-tetra- zol-5-ilometylo/-1H-tetrazol-5~ilotiometylc^-3-cefemo-4-karboksylowy, E. Kwas syn-7/3 -/oC -metoksyimino-cC/2-amino-1, 3-tiazol-4^ilo/acetamido7-3-/l-/l-metylo- 1H-tetrazol-$«ilometylo/-1H-tetrazol-5-ilotIometylq7-3-cefemo-3-karboksylovryrf F* Kwas syn 7/3 -/eC-meteksyimino- zol-5-ilonietylo/-2H-tetrazol-5-ilotiometylc7-3-cefemo-4-karboksylowy# 2) Szczep Hi tnfluenzae wrazliwy 3) Szczep H* influenzae oporny.Dane zamieszczone w tablicy 1 otrzymano metoda rozcienczenlowa w agarze z uzyciem agaru Muellera-Hintona zawierajacego 2% Supplement C (Difco)* Wykonano dwukrotnie seryjne rozcienczenie z najwyzszym stezeniem wynoszacym w tym badaniu 128/ig/ml* Zwiazek D z tablicy 1f korzystny zwiazek wytwarzany sposobem wedlug wynalazku, poda¬ wano myszom zakazonym róznymi patogenami w celu oznaczenia skutecznej dawki zwiazku (EDuq)* Otrzymane wartosci ED5Q zamieszczono w ponizszej tablicy 2 ze wskazaniem drobnoustrojów za« kazajacych. ' Tablica 2 Aktywnosc zwiazku E in vivo w organizmie myszy j Bateria (szczep) Escherichia coli (EC14) Proteus vulgaris (PV26) Serratia marescens (SE3) Staphylococcus aureus (3055) Streptoccccus pyogenrs (0203) , | ED50 (mg/kg x 2) Sic*1 0,16 0,12 1,0 7,6 0,21 I W powyzszej tablicy 2 uzyto nastepujacych oznaczen: 1) Dawki podane podskórnie po 1 i 5 godzinach po zakazeniui Zwiazek D okazal sie równiez skuteczny w leczeniu zapalenia opon mózgowo-rdzeniowych spowodowanego przez odporne na ampicyline bakterie Haemophilus influenzae u noworodków szczu¬ rzych* Stwierdzono, ze zwiazek E obecny jest w plynie mózgowo-rdzeniowym szczurów po podaniu zwiazku podskórnie w dawce 20 mg/kg.Zwiazki wytwarzane sposobem wedlug wynalazku sa skuteczne w leczeniu róznych chorób czlowieka i zwierzat po pozajelitowym podaniu skutecznej dawki od okolo 50 mg/kg do okolo 500 mg/kg* Zwiazki mozna podawac domiesniowo lub dozylnie w odpowiednich postaciach farmace¬ utycznych* Preparaty do podawania domiesniowego mozna przygotowywac jalowo w postaci odpo¬ wiednich soli zwiazków wytwarzanych sposobem wedlug wynalazku, np* w postaci soli sodowej w rozcienczalniku farmaceutycznym takim, jak woda do iniekcji, fizjologiczny roztwór soli lub odpowiednia farmaceutycznie dozwolona zaróbka olejowa, taka jak ester dlugolancuchowego kwasu tluszczowego, np* oleinian etylu* Do podawania dozylnego, przygotowuje sie zwiazek otrzymany sposobem wedlug wynalazku w postaci farmaceutycznie dozwolonej soli w plynie fizjologicznym, takim jak roztwór Rignera, 5% roztwór glukozy lub inny odpowiedni plyn fizjologiczny* Jak to zazwyczaj spotyka sie przy leczeniu antybiotykami, ilosc podawanego antybiotyku zalezy glów¬ nie od stopnia zakazenia, wrazliwosci okreslonego pacjenta i typu drobnoustroju lub drobno¬ ustrojów, wywolujacego zakazenie* Zazwyczaj zwiazki podaje sie 2-4 razy dziennie w trakcie le¬ czenia zakazenia* Wynalazek objasniaja nastepujace przyklady* W przykladach tych uzyto aparatury do cieczowej chromatografii cisnieniowej (HPLC) i, jesli tego nie zaznaczono inaczej, kolumny (zel krzemionkowy) Waters and Associates Kodel 500*8 132 001 Widma jadrowego rezonansu magnetycznego (MMR) otrzymano na spektrometrze Varian Associates Model T-60, a oprócz tego w celu uzyskania widm do 90 MHz uzyto aparatu Jeol Model FX-900, a do 100 MHz - Jeol Model PFT-100* Jako standardu w widmach NMR uzyto trójmetylosilanu (TMS).Skróty uzyte przy przedstawianiu widm NMR sa nastepujace: s * singlet,, q » kwartet, m - mul¬ tiplet, d - dublet, t m tryplet.W przykladach uzyto nastepujacych skrótów odnoszacych sie do okreslonych rozpuszczal¬ ników: THF ¦ czterowodorofuran, DMF- - dwumetyloformamid, DMAC « dwumetyloacetamld, MSA ¦ trójmetylosililoacetamid, BSA - bie-trójmetylosililoacetamid.Przyklad I, Otrzymanie kwasu 7-amino-3-/l-/l-metylo-lH-tetrazol-5-ilometylo/- lH-tetrazol-5-ilotiometylo7-3«cefemo-4-karboksylowego» Roztwór 1,54 g kwasu 7-aminocefalosporanowego i 1,0 g 1-/l-metylo-1H-tetra- zol-5-ilometylo/-1H-tetrazolo-5-tiolu w 7,0 ml kwasu octowego lodowatego ogrzewa sie w lazni olejowej do temperatury okolo 65-70°C* Do otrzymanej goracej mieszaniny reakcyjnej dodaje sie 3,6 ml zwiazku trójfluorku boru z eterem, po czym mieszanine reakcyjna ogrzewa sie w tempe¬ raturze 65-70°C przy mieszaniu w ciagu 1 godziny* Nastepnie mieszanine reakcyjna oziebia sie do temperatury pokojowej i dodaje 10 ml wody* Otrzymana mieszanine reakcyjna miesza sie w cia¬ gu 15 minut liczac od dodania wody, po czym saczy, a nastepnie oziebia w lazni lodowej, pH otrzymanej zimnej mieszaniny doprowadza sie do 4,5 stezonym wodorotlenkiem amonowym i utwo¬ rzony osad odsacza, po czym przemywa wielokrotnie woda, acetonem i w koncu eterem etylowym; Otrzymane cialo stale o barwie bialawej suszy sie pod zmniejszonym cisnieniem w ciagu 1 godzi¬ ny w temperaturze 40°C, w wyniku czego otrzymuje sie 1,5 g (80% wydajnosci) zwiazku tytulowego* Dla otrzymanego zwiazku otrzymano nastepujace dane analityczne. Analiza elementarna.Obliczono dlst C12H14N1003S2: c 35,12; H 3,44; N 34,13; S 15,62* Znaleziono: C 35,62; H 3,53; N 31,63; S 14,52.IR (KBr): absorpcja grupy karbonylowej przy 1800 cm"1 NMR (T-60, NaHCO^/DgO) o: 4,1 (s, 3H, N-metyl), 4,9 (d, 1H, wodór przy C-6), 5,95 (s, 2H, grupa metylenowa laczaca grupy tetrazo- lilowe) ppm* Przyklad II* Otrzymywanie kwasu 7^amino-3/1-/lH-tetrazol-5-ilometylo/-1H-te- trazol-5-ilotiometylc/-3-cefemo-4-karboksylowego* Zawiesine 5,3 g (29 milimoli) 1-/lH-tetrazol-5-ilometylo/-1H-tetrazol-5-tiolu i 6,8 g (25 milimoli) kwasu 7-aminocefalosporanowego zawiesza sie w 38 ml kwasu octowego lodowate¬ go i otrzymana zawiesine ogrzewa sie w temperaturze od okolo 62°C do okolo 65°C w lazni ole¬ jowej. Do otrzymanej goracej zawiesiny dodaje sie 16,6 ml zwiazku trójfluorku boru z eterem (przedestylowanego), w wyniku czego uzyskuje sie niemal calkowite rozpuszczenie* Otrzymana mieszanine ogrzewa sie przy mieszaniu w ciagu 1 godziny w temperaturze od okolo 60°C do okolo 65°C* Mieszanine reakcyjna oziebia sie i miesza w ciagu 1 godziny w temperaturze pokojowej, po czym dodaje 45 ml wody* Nastepnie rozcienczona mieszanine reakcyjna oziebia sie do tempe¬ ratury 0°C, po czym pH doprowadza do 4,0 stezonym wodorotlenkiem amonowym* Wytracony osad przemywa sie woda, acetonem i eterem etylowym, po czym suszy w suszarce prózniowej w ciagu 2 godzin w temperaturze 50°C* Otrzymuje sie 8,0 g tytulowego zwiazku (wydajnosc 88°*) w postaci proszku o barwie jasnobezowej* NMR (T-60, wodoroweglan sodowy (D20) &": 4,3 (m, 2H, C-3 metylenu) i 5#9 (s, 2H, me¬ tylen laczacy pierscienie tetrazolowe) ppm.132 001 9 Przyklad III* Otrzymanie kwasu 7-/3-/c 4-ilo/acetamido7-3-/2-/lH-tetrazol-5-Ilometylo/-2H-tetrazol-5-ilotiometyl27-3-cefemo-4-kar- boksylowego.Do roztworu 202 mg (1,1 milinola) 2-/lH-tetrazol-5-ilometylo/-2H-tetrazol-5-tiolu w 6 ml buforu o pH 7 (roztwór uzyskany z uzyciem 176 mg, 2,1 milimola, wodoroweglanu sodowe¬ go) dodaje sie 460 mg (1 milimol) kwasu -7/3-/^-metoksyimino-^-/2-amino-1,3-tiazol-4-iloA -acetamido/cefalosporanowegow Otrzymany roztwór ogrzewa sie w lazni olejowej w ciagu 22 go¬ dzin w temperaturze od okolo 55°C do okolo 60°C. Po uplywie tego czasu badanie mieszaniny reakcyjnej metoda chromatografii cienkowarstwowej wykazuje, ze reakcja zaszla mniej wiecej w polowie# Do mieszaniny reakcyjnej dodaje sie wtedy dodatkowo 100 mg tiolu i równowazna ilosc wodoroweglanu sodowego, po czym mieszanine reakcyjna ogrzewa sie w ciagu okolo 12 godzin w temperaturze 55-60°C. Mieszanine reakcyjna oziebia sie do temperatury pokojowej i przemywa 2 razy po 50 ml octanu etylu* Faze wodna suszy sie i otrzymany przesacz oziebia na lazni lodo¬ wej do temperatury okolo 0°C, pH fazy wodnej doprowadza sie do 3,2 przy energicznym mieszaniu i produkt wytraca sie w postaci osadu o barwie zólto-pomaranczowej, który odsacza sie, prze¬ mywa woda i suszy w temperaturze pokojowej pod zmniejszonym cisnieniem* Otrzymuje sie 153 mg mieszaniny odmian syn i anti tytulowego zwiazku. Izomery rozdziela sie na zelu krzemionkowym metoda odwróconych faz przy uzyciu ukladu acetonitryl: kwas-octowy: woda 15/s, 2?s;83% (obj./ obj./obj.). Izomer syn NMR (360 MHz, DMSO-dg): o*3,65/m, 2H, C-2 metylenu/, 3,85 (s 3H, me- tylooksymu), 4,27 (m, 2H, C-3 metylenu), 5,13 (d, 1H, C-6H), 5,82 (q - 1H, C-7H), 6,42 (s, 2H, metylen laczacy pierscienie tetrazolowe), 6,78 (s, 1H, H tiazolu), 7,29 (szeroki s, 2H, tiazolcamino) i 9,61 (d, 1H. H,7-amidowy) ppm. Izomer anti NMR (360 MHz, DMSO-d^): § 3,60 (m, 2H, C-2 metylenu), 3,95 (s, 3H, metylooksymu), 4,27 (m, 2\\9 C-3' metylenu), 4,97 (d, 1H, C-6H), 5,76 (q, 1H, C-7H)^ 6,33 (s, 2H, metylen laczacy pierscienie tetrazolowe), 7,14 (sze¬ roki s, 2H, H tiazoloaminowy), 7,46 (s, 1H, H tiazolu) i 9,43 (d, 1H, H 7-amidu) ppnu Przyklad IV. Otrzymywanie kwasu 7-/2-tienyloacetamido/-3-/l-/lH-tetrazol-5- ilometylo/-iH-tetrazol-5-ilotioiiietylc27-3-cefemo-4-kGrbokcylcwegOi Roztwór 808 g (2 milimoli) soli sodowej kwasu 7-/2-tienyloacetamido/-3-acetoksyme- tylo-3-cefemo-4-karboksylowego (soli sodowej cefalotryny), 368 mg (2 milimoli) 1-/lH-tetra- zol-5-ilometylo/-1H-tetrazolo-5-tiolu i 168 mg (2 milimoli) wodoroweglanu sodowego w 16 ml wody ogrzewa sie w lazni olejowej w ciagu 7 godzin w temperaturze od okolo 55°C do okolo 60°Ci Mieszanine reakcyjna zateza sie pod zmniejszonym cisnieniem do objetosci okolo 8 ml9 po czym poddaje preparatywnej HPLC przy uzyciu zelu krzemionkowego z odwróconymi fazamii Roz¬ dzial uzyskuje sie stosujac wpierw uklad acetonitryl: kwas octowy 15#:2# (obj./obj#) w wo¬ dzie. Zbiera sie szereg frakcji po 20 ml kazda i po zebraniu okolo 90 frakcji, eluent zmienia sie na 20^ roztwór acetonitryiu w wodzie. Frakcje 133-153 zawierajace zwiazek tytulowy laczy sie i odparowuje. Otrzymuje sie 350 mg produktu krystalicznego, którym jest ester p-nitro- benzylowyi Frakcje 181-193 zawieraja sól sodowa cefalotryny, bedaca zwiazkiem wyjsciowym.Dla produktu krystalicznego otrzymano nastepujace dane analityczne.NMR"(100 MHz, DMS0-d6): 8 3,63 (m, 2H, C-2 metylenu), 3,73 (s, 2H, metylen tiofeny- loacetylu), 4,32 (m, 2H, C-3'metylenu), 5,04 (d, 1H, C-6H), 5,63 (q, 1Hr C-7H), 5,97 (s, 2H, metylen tetrazolu), 6,8-7,4 (m, 5H, H tiofenu) i 9,08 (d, 1H, H 7-amidu) ppm.Analiza elementarna* Obliczono C 39,22 ; H 3,10} N 26,91 Znaleziono: C 38,86; H 3,33; N ^5,11.IR (KBr): absorpcja grupy karbonylowej ^-laktamu przy 1775 cm . Masa czasteczkowa oznaczona na podstawie widma masowego wynosi 521 i Przyklad V. Otrzymywanie kwasu 7-/2-tienyloscetamido/-7-metoksy-3-/l-/lH-te- trazol-5-ilometylo/^1H-tetrazol-5~ilotiometyIo7-3-ceferao-4-karboksylowegb.Roztwór 3,1 g (5,3 mllimola) estru p-nitrcbenzylowego kv/asu 7-/2-tienyloacetamido/-7- metoksy-3-bromometylo-3-cefemo-4-karboksylowego i 1,33 g (7,5 milimola) 1-/lH-tetrazol-5-ilo-10 132 001 metylo/-1H-tetrazol-5-tiolu w 20 ml DMF miesza sie w temperaturze pokojowej w ciagu okolo 16 godzin* Otrzymana mieszanine reakcyjna wlewa sie do 150 ml mieszaniny takich samych obje¬ tosci 1N kwasu solnego 1 octanu etylu* Warstwe organiczna oddziela sie, przemywa 2 razy 1N kwasem solnym, 1 raz wodnym roztworem chlorku sodowego 1 suszy siarczanem sodowym, po czym saczy 1 odparowuje do sucha* Otrzymuje sie 3 g produktu surowego w postaci piany o barwie jas- nobrazowej* Produkt ten poddaje sie chromatografii na 75 g zelu krzemionkowego przy uzyciu do elucjl 1 litra chlorku metylenu, a nastepnie 2 litrów chlorku metylenu zawierajacego 2% alkoholu metylenowego* W trakcie elucji kolumne utrzymuje sie pod cisnieniem azotu* Frakcje zawierajace produkt laczy sie i odparowuje do sucha* Oleista pozostalosc rozpuszcza sie w octa¬ nie etylu i otrzymany roztwór saczy* Przesacz zateza sie pod zmniejszonym cisnieniem do sucha, w wyniku czego otrzymuje sie 0,84 g tytulowego zwiazku w postaci estru* Zwiazek ten poddaje sie deestryfikacjl metoda redukcji elektrolitycznej w nastepujacy sposób* Roztwór 700 mg (1 milimola) estru p-nitrobenzylowego w 30 ml 1N kwasu siarkowego w EMF umieszcza sie w elektrolizerze wyposazonym w katode rteciowa o duzej powierzchni oraz ano- de z drutu platynowego* Elektrody rozdziela spiek szklany* Redukcje prowadzi sie przy potencja¬ le - 64V w ciagu 3 godzin* Roztwór redukcyjny usuwa sie z elektrolizera 1 wlewa do 100 ml mie¬ szaniny takich samych objetosci octanu etylu i 1N kwasu solnego* Warstwe organiczna oddziela sie 1 przemywa 2 razy 1N kwasem solnym* Nastepnie produkt reakcji poddaje sie ekstrakcji z war¬ stwy organicznej 50 ml wodnego roztworu wodorotlenku sodowego o pH 7,5 i ekstrakt wodny prze¬ mywa octanem etylu* Na faze wodna naklada sie warstwe swiezego octanu etylu i zakwasza do pH 2,2 kwasem solnym* Warstwe organiczna oddziela sie, przemywa 2 razy 1N kwasem solnym i wodnym roztworem chlorku sodowego, suszy siarczanem sodowym 1 odparowuje do sucha, w wyniku czego otrzymuje sie 290 mg tytulowego zwiazku w postaci wolnego kwasu w postaci piany o barwie zól¬ tej* Zwiazek ten oczyszcza sie w sposób nastepujacy* 270 mg zwiazku rozpuszcza sie w 0,05 M roztworze octanu amonowego za pomoca dodania dwu kropli stezonego wodorotlenku amonowego do zawiesiny zwiazku* Otrzymany roztwór saczy sie i wstrzykuje do kolumny do preparatywnej HPLC na zelu krzemionkowym z odwróconymi fazami* Kolumne eluuje sie wpierw mieszanina acetonitryl* kwas octowy:woda 12#:2#, a nastepnie mieszanina acetonitryltkwas octowy:woda 15*2#* Zbiera sie szereg frakcji po 20 ml kazda, laczy sie frakcje 72-69 i liofilizuje, w wyniku czego otrzy¬ muje sie 75 mg tytulowego zwiazku w postaci suchego proszkuj dla którego otrzymano nastepuja¬ ce dane analityczne* IR (KBr) absorpcja grupy karbonylowej/7-laktamu przy 1775 cm'1* Masa czasteczkowa oznaczona na podstawie widma masowego wynosi 551* NMR (100 MHz, DMS0*d6)i $ 3,34 (m, 3H, 7-metoksy), 3,51 (m, 2H, C-2 metylenu), 3,80 (s, 2H, metylen tiofenoacetylu), 4,29 (m, 2H, C-3'-metylenu), 5,06 (s, 1H, C-6H), 5,97 (s, 2H, metylen tetrazolu), 6,9-7,4 (m, 3H, H pierscienia tiofenowego) i 9,42 (s, 1H, H 7-amidu) ppm* Przyklad VI* Otrzymywanie kwasu 7-/0-formylomigdalamido/-3-*(l-/lh*-tetrazol- -5-ilometylo/-1H-tetrazolo-5-tiolo7-3-cefemo-4-karboksylowego, Do roztworu 1,01 m (5,5 milimola) 1-/lH-tetrazol-5-ilometylo/-1H-tetrazolo-5-tiolu w 15 ml buforu o pH 7,0 zawierajacego 0,88 g wodoroweglanu sodowego, dodaje sie 2,28 g (5 mi- limoll) soli sodowej kwasu 7-/0-formylmigdalamido/-3-acetoksymetylo-3-cefeao-4-karbok8ylo- wego i otrzymany roztwór ogrzewa sie, przy mieszaniu, w temperaturze od okolo 60°C do okolo 65°C w ciagu 16 godzin* Mieszanine reakcyjna oziebia sie do temperatury pokojowej i zateza do objetosci 6,5 ni za pomoca odparowania pod zmniejszonym cisnieniem* Otrzymany koncentrat poddaje sie chromatografii metoda HPLC na zelu krzemionkowym z odwróconymi fazami, stosujac do elucji mieszanine acetonitryl: kwas octowy: woda 12$:2#* Zbiera sie szereg frakcji po 20 ml kazda i bada w swietle UV na obecnosc chromofora cefemowego* Laczy sie frakcje 94-107 i liofilizuje* Otrzymuje sie 120 ml zwiazku tytulowego*132 001 11 NMR (90 MHz, DMSO-dg): sygnaly przy 5 3,84 (mf C-2 metylenu), 4,54 (m, c-3# metyle¬ nu), 5,26 (d, C-6R) 5,32 (s, H metynu migdalemidowego lancucha bocznego), 5,94 (q, C-7H), 6,24 (s, metylen tetrazolu^ 7,4-7,8 (m, H fenylu) i 9,04 (d, H-7-amidu) ppm.Ponizsze sposoby otrzymywania objasniaja sposób wytwarzania bis-tetrazolometylotioli, stosowanych w sposobie wedlug wynalazku wytwarzania cefalosporyn* Przyklad VII* Otrzymywanie 1-cyjanometylo-1H-tetrazol-5-ilotiolu* A* Azydooctan etylu* Do roztworu 490 g (4 moli) chlorooctanu etylu w 1500 ml acetonitrylu dodaje sie 260 g (4 mole) azydku sodowego i otrzymana mieszanine ogrzewa sie w temperaturze wrzenia pod chlod¬ nica zwrotna w ciagu 20 godzin* Po ogrzewaniu, mieszanine reakcyjna wlewa sie do 1 litra wo¬ dy przy mieszaniu w ciagu 1/2 godziny* Faze organiczna oddziela sie od fazy wodnej i odparo¬ wuje pod zmniejszonym cisnieniem do sucha* Pozostalosc w postaci oleju o barwie zóltej roz¬ puszcza sie w 1200 ml eteru etylowego i otrzymany roztwór suszy sie siarczanem magnezowymi Po odparowaniu eteru pod zmniejszonym cisnieniem otrzymuje sie 391 g (76# wydajnosci) azydocetanu etylu* B* 5-chloro-1H-tetrazol-1-ilooctan etylu* Mieszanine 130 g (1 mola) azydooctanu etylu otrzymanego sposobem wyzej opisanym w cze¬ sci A, oraz 96 g (1,56 mola) chlorku cyjanu ogrzewa sie w temperaturze 125°C w ciagu 20 go¬ dzin* Pd oziebieniu mieszaniny reakcyjnej, otrzymana mieszanine rozpuszcza sie w octanie ety¬ lu i otrzymany roztwór saczy, a nastepnie odparowuje pod zmniejszonym cisnieniem, w wyniku czego otrzymuje sie krystaliczna mase o barwie zóltej* Krysztaly o barwie zóltej rekrystalJ- zuje sie z mieszaniny alkoholu etylowego i sody, w wyniku czego otrzymuje sie 149 g (wydaj¬ nosc 78%) 5~chloro-1H-tetrazol-1-ilooctanu etylu w postaci krysztalów o barwie bladozóltej, o temperaturze topnienia okolo 57-60°C* C* 6-tiolo-1H-tetrazol-1-ilooctan etylu* Roztwór 209 g estru chlorotetrazolowego, otrzymanego w sposób jak wyzej opisano w czes¬ ci B i 250 g wodorosiarczku sodowego w 5 litrach alkoholu etylowego ogrzewa sie w tempera¬ turze wrzenia pod chlodnica zwrotna w ciagu 24 godzin, po czym otrzymana mieszanine reakcyjna zakwasza sie stezonym kwasem solnym, a nastepnie zmniejsza sie objetosc tak otrzymanej za¬ kwaszonej mieszaniny do 1/4 objetosci pierwotnej za pomoca odparowania pod zmniejszonym cis¬ nieniem. Otrzymany koncentrat poddaje sie ekstrakcji octanem etylu i otrzymany ekstrakt osu¬ sza sie i odparowuje do sucha pod zmniejszonym cisnieniem* Etazostalosc poddaje sie krystali¬ zacji z mieszaniny toluenschlorek metylenu:heksan, w wyniku czego otrzymuje sie 129 g zada¬ nego zwiazku* D* Sól amonowa 5-tiolo-lH-tetrazol-1-iloacetamidu.Roztwór 20 g (0,106 mola) estru tetrazolotiolowego otrzymanego w sposób jak wyzej opi¬ sano w czesci C, w 320 ml stezonego wodorotlenku amonowego i 200 ml alkoholu etylowego, za¬ wierajacego 500 ml chlorku amonowego, ogrzewa sie w temperaturze wrzenia pod chlodnica zwrot¬ na w ciagu okolo 12 godzin* Po ogrzewaniu, mieszanine reakcyjna odparowuje sie pod zmniejszo¬ nym cisnieniem i krystaliczna pozostalosc o barwie zóltej poddaje sie rekrystalizacji z gora¬ cego alkoholu etylowego, w wyniku czego otrzymuje sie 13,7 g produktu pierwszego rzutu (wy¬ dajnosc 7396) w postaci krysztalów o barwie bialej, o temperaturze topnienia od okolo 197°C do okolo 199°C (po wysuszeniu pod zmniejszonym cisnieniem). Uzyskuje sie tez 1,4 g produktu w drugim rzucie, o temperaturze topnienia okolo 191-193°Ci E* 1-cyjanometylo-1H-tetrazolo-5-tiol.Zawiesine 5,28 g soli amonowej tetrazoloamidu otrzymanej w sposób jak wyzej opisano w czesci D, w 90 ml chlorku metylenu zawierajacego 14,4 ml pirydyny, oziebia sie do tempera¬ tury okolo 0°C* Do zawiesiny tej dodaje sie kroplami, przy mieszaniu, roztwór 4,6 g (30 mi- limoli) tlenochlorku fosforowego w 40 ml chlorku metylenu* Po dodaniu calej ilosci, miesza-12 132 001 nine reakcyjna ogrzewa sie w temperaturze wrzenia pod chlodnica zwrotna w ciagu 30 minut, po czyn oziebia do temperatury pokojowej przy mieszaniu* Po ogrzaniu barwa mieszaniny zmienia sie na pomaranczowa* Mieszanina zawiera pewna ilosc osadu* Mieszanine reakcyjna odparowuje sie do sucha pod zmniejszonym cisnieniem 1 pozostalosc rozpuszcza w mieszaninie octan etylu: woda 1:1 (obj/obj)* pH roztworu doprowadza sie do 2 za pomoca 20% kwasu solnego* Nastepnie za* kwaszony roztwór poddaje sie ekstrakcji 2 razy po 75 ml octanu etylu* Laczy sie ekstrakty i przemywa kwasem solnym 5% 1 wodnym roztworem chlorku sodowego* po czym osusza siarczanem sodo¬ wym 1 odparowuje pod zmniejszonym cisnieniem* Jako pozostalosc otrzymuje sie olej o barwie brazowej* który krystalizuje w trakcie odstawanla* Wydzielone krysztaly suszy sie pod zmniej¬ szonym cisnieniem w temperaturze pokojowej i po wysuszeniu otrzymuje sie 2,6 g (wydajnosc 6196) zwiazku o barwie jasnobrazowej, o temperaturze topnienia okolo 113-114°C* Proces powyzszy powtarza sie z uzyciem 10,6 g soli amonowej tetrazoloamldu 1 otrzymuje sie 3,7 g nitrylu w postaci krysztalów o barwie bialawej, o temperaturze topnienia okolo 116- 118°C* Dla produktu krystalicznego otrzymano nastepujace dane analityczne* Analiza elementarna* Obliczono dla CjHjNjSi c 25,53} H 2,14} N 49,62 Znaleziono: C 25,62} H 2,401 N 49,91 Badanie widma masowego produktu krystalicznego wykazalo mase czasteczkowa 141, zgodnie z przewidywana dla produktu* Przyklad VIII* Otrzymywanie 1-/lH-tetrazol-5-ilometylo/-1H-tetrazolo-5-tiolu* Roztwór 6,0 g (42,5 millmola) 1-cyjanometylo-1H-tetrazolo-5-tiolu i 10,0 g (6,5 mili- mola) azydku czterometyloguanidyniowego w 90 ml dioksanu ogrzewa sie w temperaturze wrzenia .pod chlodnica zwrotna w ciagu 3 godzin* Po oziebieniu, mieszanine reakcyjna odparowuje sie do sucha pod zmniejszonym cisnieniem 1 otrzymana pozostalosc rozpuszcza sie w mieszaninie octan etyluiwoda 1:1* Warstwa octanu etylu oddziela sie i pH warstwy wodnej doprowadza do 1,6 20tf kwasem solnym* Zakwaszona warstwe wodna poddaje sie nastepnie ekstrakcji 3 razy po 75 ml octa¬ nu etylu, po czym ekstrakty laczy sie, przemywa 5% kwasem solnym 1 wodnym roztworem chlorku sodowego, po czym osusza siarczanem sodowym 1 odparowuje pod zmniejszonym cisnieniem do sucha* Jako pozostalosc otrzymuje sie olej o barwie czerwonej* Pozostalosc ta krystalizuje po za¬ szczepieniu* Krysztaly przemywa sie octanem etylu oraz eterem etylowym 1 suszy* W wyniku te¬ go otrzymuje sie 3,7 g bis-tetrazolometylotiolu o temperaturze topnienia od okolo 173°C do okolo 175°C* Przesacz po pierwszym rzucie odparowuje sie do konsystencji oleju i po zaszcze¬ pieniu otrzymuje sie 0,3 g produktu krystalicznego drugiego rzutu. V ten sam sposób otrzymuje sie 0,3 g produktu trzeciego rzutu* Ogólna wydajnosc produktu wynosi 4,3 g (wydajnosc 55tf)* Widmo NMR otrzymanego zwiazku (w DMSO-dg) wykazuje singlet przy 5,9 ppm & dla protonów grupy metylenowej laczacej pierscienie tetrazolowe* Przyklad IX. Otrzymywanie 1-/l-metylo-1H-tetrazol-5-ilometylo/-1H-tetrazolo- 5-tiolu.A* 5-chloro-N-metylo-1H-tetrazolo-1-acetamid* Roztwór 19,5 g (0,102 mola) 5-chloro-1H-tetrazolo-1-octanu etylu w 50 ml alkoholu ety¬ lowego oziebia sie w lazni z suchym lodem i alkoholem propylowym, po czym do otrzymanego roz¬ tworu wpuszcza sie w ciagu 5 minut gazowa metyloamine* Otrzymana mieszanine reakcyjna zesta¬ la sie* Po przemyciu alkoholem etylowym i eterem etylowym, oraz wysuszeniu na lazni parowej, otrzymuje sie 13,2 g (wydajnosc 74#) N-metyloamidozwiazku w postaci krysztalów o barwie bia¬ lej, o temperaturze topnienia od okolo 146°C do okolo 148°C* Dla produktu krystalicznego otrzymano nastepujace dane analityczne* Analiza elementarna* Obliczono dla C^Hg^OCl: C 27,36} H 3,44; N 39,69} Cl 20,19; Znaleziono: C 27,59; H 3,35} N 39,65} Cl 20,49.132 001 13 NMR (EMS0-d6): S 2,7 (df J»5Hz, 3H, metyl amidu), 5,28 (s, 2H, CH2), 8,53 (s, posze¬ rzony, 1H, N-H) ppnu Masa czasteczkowa na podstawie widma masowego » 175,5# B* 1-/c<, -inetylo-1H-tetrazol-5-ilometylo/-5-chloro-lH-tetrazol* Do zawiesiny 1,75 g (10 milimoli) 5-chloro-N-metylo-1H~tetrazolo-1-acetamidu, otrzy¬ manego w sposób jak wyzej opisano w czesci A, w 50 ml chlorku metylenu, zawierajacej-0,8 g pirydyny utrzymywanej w temp. ok. 0°C, dodaje sie przy mieszaniu w nadmiarze fosgenu. Po zakonczeniu dodawania, mieszanine reakcyjna miesza sie w ciagu 10 minut bez dalszego ozie¬ bienia* Otrzymany tak przezroczysty roztwór odparowuje sie do sucha w temperaturze okolo 30 C, pod zmniejszonym cisnieniem* Otrzymana pozostalosc zawierajaca produkt reakcji zawiesza sie w 50 ml dioksanu i do zawiesiny tej dodaje sie 2,4 g (15,2 milimola) azydku czterometylogu- anidyniowego# Otrzymana mieszanine ogrzewa sie w ciagu 2 godzin w temperaturze wrzenia pod chlodnica zwrotna i po calonocnym mieszaniu w temperaturze pokojowej, otrzymana mieszanine reakcyjna zateza sie prawie do sucha pod zmniejszonym cisnieniem* Otrzymany koncentrat roz¬ puszcza sie w 30 ml wody, w wyniku czego tworzy sie roztwór o barwie bladozóltej* Z roztworu tego wykrystalizowuje produkt w postaci barwnych igiel i po odsaczeniu otrzymuje sie 0,4 g krystalicznego produktu o temperaturze topnienia od okolo 138°C do okolo 140°C* Z przesaczu wyodrebnia sie 0,5 g produktu drugiego rzutu o temperaturze topnienia od okolo 136°C do okolo 139°C.Dla produktu krystalicznego otrzymano nastepujace dane analityczne* Analiza elementarna* Obliczono dla C^NgCl: C 23,95; H 2,51; N 55,86; Cl 17,45 Znaleziono: C 24,17; H 2,75; N 55,81; CL 17,85 NMR (DMS0-d6): 0^4,27 (s, 3H, N-CH3), 6,33 (s, 2H, CH2) ppm* C* 1-/l-metylo-lH-tetrazol-5-ilometylo/-1H-tetrazolo-5«-tiol« Do zawiesiny 0,5 g (2,5 milimola) 5-chloro-bis-tetrazolu, otrzymanego w sposób jak wyzej opisano w czesci B, w 40 ml alkoholu etylowego dodaje sie 0,6 g wodorosiarczku sodo¬ wego. Otrzymana mieszanine ogrzewa sie w temperaturze wrzenia pod chlodnica zwrotna w ciagu 16 godzin, po czym oziebia do temperatury pokojowej i saczy* Otrzymany przesacz zateza sie prawie do sucha pod zmniejszonym cisnieniem, po czym dodaje sie 30 ml 596 kwasu solnego* Za¬ kwaszony koncentrat poddaje sie ekstrakcji 3 razy po 30 ml octanu etylu, ekstrakty laczy sie i przemywa 5# kwasem solnym i wodnym roztworem chlorku sodowego, po czym suszy siarczanem sodowym* Osuszony ekstrakt zateza sie do niewielkiej objetosci, W "tych warunkach wytraca sie krystaliczny produkt, który rekrystalizuje sie z mieszaniny octan etylutheksan w wyniku cze¬ go otrzymuje sie 0,3 g zwiazku w postaci prawie bezbarwnych krysztalów o temperaturze topnie¬ nia od okolo 190°C do okolo 192°C* Dla produktu krystalicznego otrzymano nastepujace dane analityczne* Analiza elementarna* Obliczono dla C^H^S: C 24,24; H 3,05; N 56,53 Znaleziono: C 24,21; H 3,28; N 56,43* NMR (DMS0-d6):u"4,22 (s, 3H, CH3), 5,95 (s, 2H, CH2), 10,57 (szeroki s, 1H, SH)* Masa czasteczkowa oznaczona na podstawie widma masowego wynosi 198* Przyklad X* Otrzymywanie 2-/1H-tetrazol-5-ilometylo/-2H-tetrazolo-5-tiolu* A, 5-benzylotio-1H-tetrazol# Roztwór 30 g (0,33 mola) tiosemikarbazydu i 51 g (0,40 mola) chlorku benzylu w 500 ml alkoholu etylowego ogrzewa sie w temperaturze wrzenia pod chlodnica zwrotna w ciagu okolo 3 1/2 godziny* Po ogrzewaniu, mieszanine reakcyjna odparowuje sie do sucha pod zmniejszonym cisnieniem i otrzymana pozostalosó rozpuszcza sie w wodzie* Otrzymany roztwór przemywa sie octanem etylu i dodaje do roztworu 25 g (0,36 mola) azotynu sodowego w 50 ml wody. Otrzymany roztwór miesza sie w ciagu 15 minutipo czym dodaje sie octan etylu* Warstwe organiczna od¬ dziela sie i przemywa woda oraz wodnym roztworem chlorku sodowego, po czym osusza siarczanem sodowym* Otrzymany osuszony roztwór octanu etylu odparowuje sie pod zmniejszonym cisnieniem,14 132 001 po czym pozostalosc, stanowiaca produkt reakcji, przemywa sie chlorkiem metylenu 1 poddaje krystalizacji z octanu etylu* W wyniku tego otrzymuje sie 21 g zwiazku o temperaturze topnie¬ nia od okolo 134°C do okolo 136°C* Dla tego zwiazku otrzymano nastepujace dane analityczne* Analiza elementarna.Obliczono dla (fetfe^Si: C 49,98; H 4,19; N 29,14 Znaleziono: C 49,81; H 4,17; N 28,95.B. 1- i 2-cyjanometylo-5-benzylotio-1H-tetrazol* Roztwór 2f7 g wodorotlenku potasowego w 5 ml alkoholu metylowego dodaje sie przy mieszaniu do roztworu 7,9 g (0,041 mola) 5-benzylotio-1H--fcetrazolu w 25 ml alkoholu metylowego, a nastepnie, po dalszym mieszaniu w ciagtf 15 minut w temperaturze poko¬ jowej, dodaje sie 3,4 # (0,045 mola) chloroacetonitrylu. Mieszanine reakcyjna ogrzewa sie w temperaturze wrzenia pod chlodnica zwrotna w ciagu 12 godzin i odsacza sie utworzone cialo stale o barwie bialej* Otrzymany przesacz zateza sie pod zmniejszonym cisnieniem, w wyniku czego otrzymuje sie oleista pozostalosc, która rozpuszcza sie w mieszaninie eteru etylowego i wody. Warstwe eterowa oddziela sie i przemywa wodnym roztworem wodoroweglanu sodowego, a nastepnie woda i wodnym roztworem chlorku sodowego. Po osuszeniu 1 odparowaniu do sucha pod zmniejszonym cisnieniem otrzymuje sie 3,4 g mieszaniny 1- i 2-cyjanometylo-5-benzylotio-1H- tetrazolu w postaci oleju o barwie czerwonawej* Badanie widma NMR wykazalo, ze olej ten sta¬ nowi mieszanine 50%: 50% obu tych izomerowi C» 5^benzylotio-2~/lH-tetrazol-5-ilometylo-/-2H-tetrazol* Do 70 ml suchego czterowodórofuranu oziebionego w lazni z lodem i etanolem dodaje sie w malych porcjach 4,04 g (0,03 mola) bezwodnego chlorku glinowego* Po zakonczeniu dodawa¬ nia, dodaje sie przy mieszaniu 5,85 g (0,09 mola) subtelnie rozdrobnionego azydku sodowego.Mieszanine miesza sie przez 5 minut, po czym dodaje sie roztwór 3,93 g (0,017 mola) izome¬ rycznej mieszaniny 1- i 2-cyjanometylo-5-benzylotiotetrazoli w 20 ml suchego czterowodoro- furanu i otrzymana mieszanine ogrzewa sie w temperaturze wrzenia pod chlodnica zwrotna w cia¬ gu 24 godzin. Nastepnie mieszanine reakcyjna oziebia sie w mieszaninie lodu i etanolu i za¬ kwasza za pomoca wkroplenia 30 ml 20% kwasu solnego• Zakwaszona mieszanine zateza sie pod zmniejszonym cisnieniem do objetosci okolo 30 ml i otrzymany koncentrat poddaje ekstrakcji 3 razy po 30 ml octanu etylu. Ekstrakt laczy sie,przemywa wodnym roztworem chlorku sodowego i suszy bezwodnym siarczanem sodowym* Otrzymany osuszony ekstrakt odparowuje sie pod zmniej¬ szonym cisnieniem do sucha, w wyniku czego otrzymuje sie 4,5 g (wydajnosc 97%) mieszaniny izomerycznych 5-benzylotio-1- i 2-/lH-tetrazol-5-ilometylo/-1H- i 2H tetrazoli w postaci ole- _ ju o barwie brunatnej* Po odstawieniu na kilka dni, w oleju tworza sie krysztaly. Otrzymana mieszanine rozciera sie z chlorkiem metylenu i saczy, w wyniku czego otrzymuje sie 0,85 g krysztalów o barwie kremowej, o temperaturze topnienia od okolo 115°C do okolo 117°C* Z prze¬ saczu uzyskuje sie 0,2 g krysztalków drugiego rzutu* Proces powtarza sie w sposób jak wyzej opisano, poddajac reakcji 7,1 g izomerycznej mieszaniny 1- i 2-cyjanometylo -5-benzylotiotetrazoli z azydkiem glinowym (wytworzonym spo¬ sobem wyzej opisanym z 7,3 g chlorku glinowego i 10,7 g azydku sodowego). Mieszanine reakcyj¬ na ogrzewa sie w temperaturze wrzenia pod chlodnica zwrotna w ciagu 24 godzin, po czym za¬ kwasza 20% kwasem solnym, odparowuje do objetosci okolo 60 ml i poddaje ekstrakcji octanem etylu* Otrzymany ekstrakt przemywa sie wodnym roztworem chlorku sodowego i odparowuje do su¬ cha. Pozostalosc krystalizuje w czasie odstawania. Krysztaly o barwie kremowej zawiesza sie w chlorku metylu i saczy, w wyniku czego otrzymuje sie 3,5 g materialu krystalicznego* Prze¬ sacz odparowuje sie do sucha, w wyniku czego otrzymuje sie 4,9 g oleju o barwie pomaranczowej*132 001 15 Widmo NMR produktu krystalicznego (w DMSO-dr) wykazalo glównie obecnosc jednego izome¬ ru, a mianowicie 2-izomeruf podczas gdy widmo NMR oleju wykazalo obecnosc glównie 1-izomeru* D* 2-/lH-tetrazol-5-ilometylo/-2H-tetrazol-5-tiol* 175 mg 5-berizylotio-2-/lH-tetrazol-5-ilometylo/-2H-tetrazolu, wytworzonego w sposób jak wyzej opisano w czesci C, rozpuszcza sie w 40 ml destylowanego EMF, po czym poddaje redukcji z uzyciem rteciowej katody o duzej powierzchni (14 cm Hg) i anody z drutu platynowegoi Ele¬ ktrody oddziela od , siebie spiek szklany* Elektrolit stanowi nadchloran czteroetyloamonio- wy w postaci 0,1M roztworu w roztworze substratu reakcji w DMF* Elektrolize prowadzi sie pod napieciem od -2,7 woltów do -2,85 woltów przez 500 sekund, oraz 2,8 woltów w ciagu okolo 630 sekund* Otrzymana mieszanine redukcyjna po redukcji jednoelektronowej odparowuje sie do sucha i otrzymana pozostalosc rozpuszcza sie w octanie etylu* Otrzymany roztwór przemywa sie 3 ra¬ zy mieszanina nasyconego roztworu chlorku sodowego i 0,1N kwasu solnego 9:1 (obj*/obj#), po czym osusza bezwodnym siarczanem magnezowymi Otrzymany osuszony roztwór zateza sie pod zmniej¬ szonym cisnieniem, w wyniku czego wytraca sie z koncentratu 111 mg zwiazku tytulowego, który odsacza sie i suszy* Zastrzezenia patentowe 1* Sposób wytwarzania nowych pochodnych cefalosporyn o wzorze ogólnym 1, w którym R oznacza atom wodoru lub grupe o wzorze 5» w którym R<- oznacza grupe o wzorze 6, lub R oznacza grupe o wzorze 7, lub R oznacza grupe oksyiminopodstawiona o wzorze 8, w którym Rg oznacza grupe o wzorze 9 lub 10, a R, oznacza grupe C^-C^ alkilowa, R. oznacza atom wodoru lub grupe zabezpieczajaca grupe karboksylowa taka Jak grupa benzylowa, dwufenylometylowa, p-nitrobenzy- lowa, p-metoksybenzylowa, fenacylowa ewentualnie podstawiona atomem chlorowca, chlorowcoal- kilowa, rozgaleziona alkilowa, alkenylowa lub alkinylowa, Rp oznacza atom wodoru lub grupe me- toksylowa, R, oznacza grupe bis-tetrazolometylowa o wzorze 2, w którym R^ oznacza atom wodoru lub grupe C^-C, alkilowa, a w przypadku, gdy R^ oznacza atom wodoru, równiez ich farmaceutycz¬ nie dopuszczalnych soli, znamienny tym, ze zwiazek o wzorze 3f w którym R, R,. i R2 maja wyzej podane znaczenie, a R*q oznacza grupe-C<.-Ca acyloksylowa lub atom chlorowca, poddaje sie reakcji z bis-tetrazolometylotiolem o wzorze 4, w którym R^ ma wyzej podane zna¬ czenie, ewentualnie w postaci soli, w srodowisku obojetnego rozpuszczalnika organicznego i ewentualnie, w przypadku, gdy R^ nie oznacza atomu wodoru, usuwa sie grupe ochraniajaca grupy karboksylowej i ewentualnie, w przypadku gdy R* oznacza atom wodoru, otrzymany zwiazek prze¬ prowadza sie w farmaceutycznie dopuszczalna sól. 2# Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze Jako bis-tetrazolometylotiol stosuje sie zwiazek o wzorze 4a, w którym R^ oznacza atom wodoru lub grupe Cj-Cx-alkilowa* 3# Sposób wedlug zastrz, 1, znamienny tym, ze jako bis-tetrazolometylotiol stosuje sie zwiazek o wzorze 4b, w którym R^ oznacza atom wodoru lub grupe C^-C,-alkilowa* 4# Sposób wedlug zastrz* 1, znamienny tym, ze jako zwiazek wyjsciowy stosuje sie zwiazek o wzorze 3, w którym R1Q oznacza grupe acetoksylowa, a R, R^ i R2 kazdy, oznacza atom wodoru* 5» Sposób wedlug zastrz* 4, znamienny tym, ze reakcje prowadzi sie w sro¬ dowisku kwasu octowego lodowatego* 6* Sposób wedlug zastrz. 4 albo 5f znamienny tym, ze temperatura reakcji utrzymuje sie w granicach od okolo 25°C do okolo 80°C» 7» Sposób wedlug zastrz* 6, znamienny tym, ze do srodowiska reakcji do¬ daje sie zwiazek trójfluorku boru z eterem*16 132 001 8. Sposób wedlug zastrz. k9 znamienny tym, ze reakcje prowadzi sie w srodowisku wodnyou 9« Sposób wedlug zastrz* 8. znamienny ty d, ze reakcje prowadzi sie w pH od okolo 7,0 do okolo 9.0. 10* Sposób wedlug zastrz* 1, znamienny tym, ze jako zwiazek wyjsciowy stosuje sie zwiazek o wzorze 3, w którym R^0 oznacza grupe acetoksylowa, R oznacza grupe acylowa. zdefiniowana powyzej w definicji wzoru 1, a R^ i R2 maja znaczenie zdefiniowane powyzej w definicji wzoru 1* 11. Sposób wedlug zastrz. 10. znamienny tym. ze reakcje prowadzi sie w temperaturze od okolo 20°C do okolo 75°C. 12. Sposób wedlug zastrz. 10 albo 11 f znamienny tym. ze reakcje prowadzi sie w pH od okolo 7.0 do okolo 9.0. 13* Sposób wedlug zastrz. 1. znamienny tym. ze w reakcji stosuje sie molowy nadmiar bis-tetrazolometylotiolu o wzorze 4. w którym R, ma wyzej podane znaczenie.H R R-N Vi COOR, Wzór l N—N CHj-J^ h R; R-N •rh I R, CH,R, COOR, J—N^V-C«-2-io Wzór 3 H-S-^N N_N Wzór 4 N—N N li i I i1-Y Wztria R.132 001 N ^ N — 1 R H-i-N^N" V,n2 -^ Wzór Ub 0 R5-CH2-C Wzór 5 0 Wzór 6 0 R.-C-C- N 'K0R1 Wzór 8 N—N II " CH2- Wzór11 N I R4 fi rvcH-c- OCOH Wzór 7 H.N [A* Wzór 9 N=N 3- x0 Wzór 10 N-N \-N-CH2-i_N j l| M I R4 2 N N—N Wzór 12 N—N • 1 CHj-S-k W2DT14 ru |l 1 -CH2"VN I R4 CH, II " Wzór 13132 001 *2 N-—N u m_£ /^ IX —IN "t"-]T | I! i| ^J-m^Lcht sV* n_n COOR, Wzór 15 ca i "¦ *N M lyifrS f-«j f- 1 N—N I ll N COOR, i R, Wzór 16 H R-N r N O i1 CH2-0-C-CH3 COOH Wzór 17 O f\rC-C-NHT—f N \ S N N—N OR, COOH CH2-S<^N N_N Wzór 18 \ II I -CH2AN.N i Pracownia Poligraficzni UP PRL, Ntkltd 100 egi Ceni 130 zl PL PL PL PL PL PL PL PL PL PL