PL129883B1 - Method of obtaining highly active pancreatine - Google Patents

Description

Przedmiotem wynalazku jest sposób otrzymywania wysokoaktywnej pankreatyny do celów farmaceutycznych, polegajacy na dwustopniowym odwodnieniu i odtluszozeniu rozdrobnionej trzustki wieprzowej rozpuszczalnikami organicznymi lub ich mieszaninami w warunkach ogra¬ niczajacych dezaktywacje enzymów •' Pankreatyna otrzymana tym sposobem stanowi mieszanine bialek tworzacych tkanke trzustki w tym równiez wystepujacych w niej enzymów jak amylaza, lipaza, trypsyna i chymotrypsyiuu Enzymy te w odpowiednio dobranych warunkach srodowiska wodnego spelniaja role biokatalizatorów enzymatycznej hydrolizy skrobi, tluszczu i bialek warunkujacych procesy odzywiania i funkoJonówania zywych organizmów* Przydatnosc i zakres stosowania pankreatyny w produkcji farmaceutycznej zaleza od aktywnosci wystepujacych w niej enzymów oraz stopnia jej oczyszczania z tluszczu, fostolipidów i flory bakteryjnej.Znane sa sposoby otrzymywania pankreatyny z trzustki zwierzecej, które w ogólnym ujeciu polegaja na odwodnieniu etanolem rozdrobnionej trzustki wzglednie poddaniu jej czesciowej autolizie enterokinaza i odwodnieniu acetonem, oddzieleniu rozpuszczalników przez filtracje i suszenie, a nastepnie rozdrobnieniu odwodnionej i wysuszonej tkanki.Te proste w stosowaniu sposoby daja pankreatyne o niskiej, szczególnie lipolitycznej aktywnosci enzymatycznej 1 wysokiej zawartosci tluszczu, co ogranicza zakres stosowania jej do celów farmaceutycznych* Inne znane sposoby otrzymywania pankreatyny polegaja na ekstrakcji wodnej enzymów z rozdrobnionej trzustki, oddzieleniu ekstraktu, wytraoeniu z niego enzymów acetonem, oddzieleniu rozpuszczalnika przez filtracje 1 suszenie lub na wytworzeniu wodnej zawie¬ siny dobrze rozdrobnionej trzustki, odtluszczeniu jej niskowrzacymi mieszaninami chloro¬ wce— i fluorochlorowco-weglowodorów alifatycznych, oddzieleniu fazy wodnej od organicz¬ nej w specjalnych separatorach i wysuszeniu fazy wodnej w wysokosprawnych suszarniach, zapobiegajacych dezaktywacji enzymów•'/ .Z 129 883 Sposoby te pozwalaja uzyskiwac wysokoaktywna pankreatyna, ale wymagaja stosowania wielkiej ilosci rozpuszczalników organicznych, czesto drogich i trudno dostepnych Jak równiez posiadania specjalistycznej i kosztownej aparatury* Stwierdzono, ze mozna prostym sposobem otrzymac pankreatyne o wysokiej aktywnosci enzymatycznej i niskiej zawartosci tluszczu jezeli rozdrobniona w stanie zamrozonym trzustke wieprzowa wymiesza sie w temperaturze 0- 10 C z 1,5 ¦ krotna iloscia wagowa wodno-aoet onowego roztworu chlorku wapnia, a nastepnie z 4-krotna iloscia acetonu, po¬ zostawi przez 8 - 16 odzin zawiesine trzustki w acetonie w temperaturze 0 - U C, oddzieli przez dekantacje i/lub filtracje uwodniony aceton, a osad wstepnie odwodnionej i odtluszczonej tkanki wymieuza sie w temperaturze 20 - 30 C z 5-krotna iloscia miesza¬ niny aoeton-trójchloroetylen sporzadzonej z tych rozpuszczalników najkorzystniej w sto¬ sunku objetosoiowym 2:1, oddzieli przez filtracje mieszanine rozpuszczalników, a tkan¬ ke pozbawiona wody, tluszozu i'fosfolipidów wysuszy sie w temperaturze 30 - 35 C i rozdrobni do postaci drobnego proszku.Mozna równiez wstepnie odwodniona i odtluszczona acetonem tkanke trzustki wieprzo¬ wej w sposób wyzej opisany wysuszyc w temperaturze 30 - 35 C rozdrobnic do postaci drobnego proszku i nastepnie oczyscic z tluszozu i fosfolipidów przez wymieszanie jego w temperaturze 20 - 30 C z 5-krotna iloscia mieszaniny aceton-trójchloroetylen sporza¬ dzonej z tych rozpuszczalników najkorzystniej w stosunku objetosoiowym 1:1, oddzielic przez filtracje mieszanine rozpuszczalników, a tkanke wysuszyc w temperaturze 30 - 35°C.Rozpuszczalniki poddaje sie regeneracji i zawraoa do prooesu* Sposób otrzymywania wysokoaktywnej pankreatyny wyjasniaja bardziej szozególowo po¬ nizsze przyklady* Przyklad I# 50 kg zamrozonej trzustki wieprzowej rozdrabnia sie trójstop¬ niowo do postaoi pasty i dozuje ja porcjami do mieszaniny sporzadzonej z 7** kg acetonu i 1 kg 10$ roztworu chlorku wapnia ochlodzonej do temperatury 0 - 10°C# Nastepnie w ciagu 1-2 godzin wkrapla sie 200 kg acetonu, chlodzi sie do temperatury 0 - k°C i pozostawia przez 8 - 1Ó godzin, po czym oddziela sie uwodniony aoeton od osadu przez dekantaoje i/lub filtraoje* Wilgotny osad tkanki rozdrabnia sie, miesza w temperaturze 20 - 30°C przez 2 godziny z 5-krotna ilosoia wagowa mieszaniny aoeton- trójchloroetylen sporzadzo¬ nej z tych rozpuszczalników w stosunku objetosciowym 2 : 1* Mieszanine rozpuszczalników odwirowuje sie, regeneruje i zawraoa do procesu a wilgotny osad suszy w temperaturze 30 - 35°C w suszarni owiewowej lub fluidyzaoyjneJ.: Wysuszona tkanke rozdrabnia sie w mlynie kulowym, przesiewa przez sito i uzyskuje 11 kg pankreatyny w postaoi drobnego sypkiego proszku o ciezarze nasypowym okolo 0,500 g/om , w której aktywnosc enzymów ozna¬ czana w jednostkach miedzynarodowych metoda opisana w Farmacji Polskiej nr k z 1976 r« strj 297-300 wynosi srednio: lipazy 700 Jm/g, trypsyny 60 jm/gf ehymotrypsyny k jm/g, amylazy 3,5 i 10^ Jm/g, a zawartosc tluszozu nie przekracza 3£« Przyklad II• 50 kg zamrozonej trzustki wieprzowej rozdrabnia sie i miesza z wodno-aoe tonowym roztworem chlorku wapnia* Mieszanine odwadnia sie acetonem, a nastep¬ nie oddziela uwodniony aoeton jak w przykladzie I« Wilgotny osad tkanki suszy sie w suszarni owiewowej lub fluidyzaoyjnej w temperaturze 30-35°C, a po wysuszeniu rozdrab¬ nia sie w mlynie kulowym do postaci drobnego proszku* Proszek przesiewa przez sito i mie¬ sza przez 2 godziny w temperaturze 20 - 30°C z 5-krotna iloscia wagowa mieszaniny aoeton- -trójchloroetylen sporzadzonej z tych rozpuszczalników w stosunku objetosciowym 1:1.Mieszanine rozpuszczalników oddziela sie przez filtracje lub wirowanie, a wilgotny osad pozbawiony tluszczu i fosfolipidów suszy jak wyzej* Uzyskuje sie pankreatyne w pos¬ taci drobnego, sypkiego proszku o ciezarze nasypowym okolo 0,550 g/cm , w której aktyw¬ nosc enzymów oznaczana Jak w przykladzie I wynosi srednio: lipazy 550jm/g, trypsyny 50 jm/g| ehymotrypsyny 3 jm/g, amylazy 2,5 x 105 Jm/g, a zawartosc tluszczu nie przekracza 3%.129 883 3 Zastrzezenia patentowe 1» Sposób otrzymywania wysokoaktywnej pankreatyny do celów farmaceutycznych, polega¬ jacy na dwustopniowym odwodnieniu i odtluszczeniu rozdrobnionej trzustki wieprzowej roz¬ puszczalnikami organicznymi lub ich mieszaninami w warunkach ograniczajacych dezaktywacje enzymów f znamienny t y m, ±e rozdrobniona w stanie zamrozonym trzustke "wieprzo¬ wa dozuje sie porcjami w czasie mieszania najkorzystniej do 1,5-krotnej ilosci wagowej wodno-aoetonowego roztworu chlorku wapnia ochlodzonego do temperatury ponizej 10 C, wkrapla 4-krotna w stosunku do wsadu trzustki ilosc acetonu, chlodzi w czasie miesza¬ nia do temperatury 0 - k C i pozostawia na okres 8 - 16 godzin, po ozym oddziela uwod¬ niony aceton od tkanki przez dekantacje i/lub filtracje, a wilgotna tkanke miesza sie w temperaturze 20 - 30°C z 5-krotna iloscia wagowa mieszaniny aceton-trójchloroetylen sporzadzonej z tych rozpuszczalników najkorzystniej w stosunku objetosciowym 2:1, osad oddziela przez filtracje, suszy w temperaturze 30 - 35 C i rozdrabnia do postaci drobnego proszku, a rozpuszczalniki regeneruje i zawraca do procesu* 2* Sposób otrzymywania wysokoaktywnej pankreatyny do celów farmaceutycznych, polega- jaoy na dwustopniowym odwodnieniu i odtluszczeniu rozdrobnionej trzustki wieprzowej rozpuszcza Ini kami organicznymi lub ich mieszaninami w warunkach ograniczajacych dezaktywa¬ cje enzymów, znamienny tym, ze rozdrobniona w stanie zamrozonym trzustke wie¬ przowa dozuje sie porcjami w czasie mieszania do 1,5-krotnej ilosci wagowej wodno-aceto- nowego roztworu chlorku wapnia ochlodzonego do temperatury ponizej 10°.C, wkrapla U-krotna w stosunku do wsadu trzustki ilosc acetonu, chlodzi w czasie mieszania do temperatury 0-k C 1 pozostawia na okres 8 - 16 godzin, po ozym oddziela sie uwodniony aceton od tkanki przez dekantacje i/lub filtracje, a wilgotna tkanke suszy sie w temperaturze 30-35 C, rozdrabnia do postaci drobnego proszku, miesza przez 2 godziny w temperaturze 20 - 30 C s 5-krotna iloscia wagowa mieszaniny aceton-trójchloroetylen sporzadzonej z tych rozpu¬ szczalników najkorzystniej w stosunku objetosciowym 1 t 1, osad oddziela przez filtracje i suszy w temperaturze 30 - 35 C, a rozpuszczalniki regeneruje i zawraca do procesu. PL

Claims (1)

1. Zastrzezenia patentowe 1» Sposób otrzymywania wysokoaktywnej pankreatyny do celów farmaceutycznych, polega¬ jacy na dwustopniowym odwodnieniu i odtluszczeniu rozdrobnionej trzustki wieprzowej roz¬ puszczalnikami organicznymi lub ich mieszaninami w warunkach ograniczajacych dezaktywacje enzymów f znamienny t y m, ±e rozdrobniona w stanie zamrozonym trzustke "wieprzo¬ wa dozuje sie porcjami w czasie mieszania najkorzystniej do 1,5-krotnej ilosci wagowej wodno-aoetonowego roztworu chlorku wapnia ochlodzonego do temperatury ponizej 10 C, wkrapla 4-krotna w stosunku do wsadu trzustki ilosc acetonu, chlodzi w czasie miesza¬ nia do temperatury 0 - k C i pozostawia na okres 8 - 16 godzin, po ozym oddziela uwod¬ niony aceton od tkanki przez dekantacje i/lub filtracje, a wilgotna tkanke miesza sie w temperaturze 20 - 30°C z 5-krotna iloscia wagowa mieszaniny aceton-trójchloroetylen sporzadzonej z tych rozpuszczalników najkorzystniej w stosunku objetosciowym 2:1, osad oddziela przez filtracje, suszy w temperaturze 30 - 35 C i rozdrabnia do postaci drobnego proszku, a rozpuszczalniki regeneruje i zawraca do procesu* 2* Sposób otrzymywania wysokoaktywnej pankreatyny do celów farmaceutycznych, polega- jaoy na dwustopniowym odwodnieniu i odtluszczeniu rozdrobnionej trzustki wieprzowej rozpuszcza Ini kami organicznymi lub ich mieszaninami w warunkach ograniczajacych dezaktywa¬ cje enzymów, znamienny tym, ze rozdrobniona w stanie zamrozonym trzustke wie¬ przowa dozuje sie porcjami w czasie mieszania do 1,5-krotnej ilosci wagowej wodno-aceto- nowego roztworu chlorku wapnia ochlodzonego do temperatury ponizej 10°.C, wkrapla U-krotna w stosunku do wsadu trzustki ilosc acetonu, chlodzi w czasie mieszania do temperatury 0-k C 1 pozostawia na okres 8 - 16 godzin, po ozym oddziela sie uwodniony aceton od tkanki przez dekantacje i/lub filtracje, a wilgotna tkanke suszy sie w temperaturze 30-35 C, rozdrabnia do postaci drobnego proszku, miesza przez 2 godziny w temperaturze 20 - 30 C s 5-krotna iloscia wagowa mieszaniny aceton-trójchloroetylen sporzadzonej z tych rozpu¬ szczalników najkorzystniej w stosunku objetosciowym 1 t 1, osad oddziela przez filtracje i suszy w temperaturze 30 - 35 C, a rozpuszczalniki regeneruje i zawraca do procesu. PL