Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarza¬ nia nowych pochodnych 7^aeyloamiclocefak)sporyn.Jedna z metod wytwarzania cefalosjporyn stoso¬ wanych w medycynie jako antybiotyki jeist prze¬ ksztalcenie cefalosjporyny C do kwasu 7-aiminoce- falosponainoWego i nastepnie jego aicylowanie ce^ lem wytworzenia pozadanej pochodnej 7-aiminoce- failoisporyny.Sposób ten ma te wade, ze wymaga wyizolo¬ wania i oczyszczania produktu posredniego kwasu 7-aminocefalosiporanowego.Stwierdzono równiez, ze nieMóre mikroorganiz¬ my wytwarzaja cefalosjporyny, majace przy atomie C-7 podstawnik metoks^lowy. Te cefalospoiryny maja równiez grupe aminoadypoilowa, która ko¬ rzystnie jest zaistaipic inna grupa acylowa w celu wytworzenia cefalosjporyn o zwiekszonej skutecz¬ nosci antybiotycznej.Przedmiotem -wynalazku jest sposób wytwarza¬ nia oowych pochodnych 7-acyloa,midocefalospoiryn o ogólinym wzorze 30, w 'którym Ri oznacza a- tom wodoru luib grupe metokisy, A oznacza. niz¬ sza grupe alkanoiloksy o 2—6 atomach wegla lub gruipe karbamoilokisy, Rio oznacza atom wodoru, grupe azydowa, karboksylowa lub hydroksylowa, Ru oznacza fenyl, 2-furyl, 3-furyl, 2-tienyl, 3-tie- inyl, 3-izotiazolil, 4-izotiazolil,. 5-izotiazolil, 1,2,5-tia- diazolil, 4-pirydyl, tefcrazolil, albo chlorofenyl, R4 oznacza atom wodoru, grupe metylowa, etylowa, 10 15 25 30.IILrz.-butylowa, ftaloimidomeityl, su'kcynoimido.me- tyl, fenaeyl, p-bromofenacyl, 2,2,2-trójidhloroetylj 2-metylotioetyl, 2-/p-;metylofenylo/-etyl, 2-/p-mety- lofeinylo/-isirlfonyloetyl, 2-imetyloaminoetyl, 2-chlo- roetyl, 2-bromoeltyl, benzyl, p-nitrabenzyl, p-me- toiksybenzyl, 3,5-dwunitrobenizyl, 2,4,6-trójmetylo- benzyl, 3,5-dwucihloro-4-hydrok!sybenzyl, benizhy- dryl, p-metokisybenzJhydryl, fenyl, acetoksymetyl, ipiwaloilolksymetyl, metoksymetyl, ip-initrotfenyl albo 3,5-dwunitrofenyl, który poleiga na tym, ze* zwia¬ zek o wzorze 31, w którym R2 oznacza grupe trójchloroetofcsylkarbonylowa, Ill.rz-butolkisykarbo- nylpwa, benzoiloimetokisytkarbonylowa, trójmetyloisi- 111owa, p-metoksybenzyloksylowa, 2-nitrofemyloisul- fonylówa, 2,4-dwunitirofenylosulfenylowa, chloroa- cetylowa albo o-nitrofenylotiio, Ri, A i R4 maja wyzej podane znaczenie a X ozmaeza atom tlenu lub siarki, poddaje sie reakcji z równomolowa iloscia srodika acylujaeeigo o wzorze 32, w którym Rio i Ru maja wyzej .podane znaczenie wraz z nadmiarem srodka sililujajcego takiego jalk N-/trój- metylosiliilo/-aicetamlid, N-/trójproipylosililo/-acefta- ' mld, N-/trójibutylO'sililo/-aicetaimid, N-/tirójfenylosili- lo/-aceta'mid albo N-/trójbenzyloisililo/-aioetamid, N, 0-bis/trójfeinylosililo/-ac€itaimid, N,0-bis-/tirójbenzy- losililo/-acelta»mid, N-^trójimetyloisililo/-tTÓjfluoroace- ¦tamid, N-/trójbutylosililo/-trójfluoroacetamid, N- -/trójmetylasililo/-benzattnid, N-/trójmetylosililo/- -dwufenylomocznilk, N-Arójmetylosililo/-etylolkarba- 111147111147 3 4 Jako specjalne czynniki sililujace moga byc wy¬ mienione -trójhydrokarbylosililo amidy taikie jak N-/trójmetylosililo/-acetamid, N-/trójpropylosililo/- -acetamid, N-/trójfoutylosililo/-acataimid, N-/trójfe- 5 nylosililo/-acetamid, N-/£rójbenzylosililo/-aeetaimid.N,OHb'is/itrójimetyloiSi-lilo/-a'cetajmid, N,0-bis/[trójfeny- losililo/-acetaimid, N,0^bis/trójibenzylosiliHo/-aiceta- mid, NHtrójimetyilosilliilo/-ita:ójfluoroaceta'mid, N-/trój- buitylosililo/Htrójfiliuoroacetaimid, N-ZItrójmetylloisililo/ /-benzamid, podstawione krzemem mocmilki takie jaik N-/trój'metylo(sililo/Hdwufenylomoioziiijk, N,N-fois/ /trójmetylosililo/-d(wiufenylom.ocznik, sililo-turetany takie jak NHtrójmetyloisililoureltain, N-Arójmeitylosili- loZ-etylakarbaminian, siililoimidy takie jak N-trój- 15 metylosllilo/-suJkcynimid albo N-ZtrójmeHylosili- lo/-ftailimid, monoisillilo-ltrójfluoroaiceltaimid, sililo -sulfonamidy takie jak N-/trójmatylosililo/-(benzeno sulfonamid, ireagenty dwuaUkilo, -dwuarylo- albo dwuaryloakilo-sililowe takie jak bis/etoksyfcarfoo- nyloamino/-dwuimetylo-silan i temu podobne. iW podstawniku w pozyicji 3 wzorów 1, 2 i 3 —CH2A A oznacza atom wodoru, albo podstaw¬ niki znane w dheimii ceifalosporyn.Jezeli A oznacza grupe hydroksylowa to moze "ona wystepowac w postaci laktanowej utworzo¬ nej przy udziale grupy karboksylowej w pozycji 4, a jesli A oznaioza grujpe aiminowa to moze ona wystepowac w postaci laktamu utworzonego z u- dzialem grupy^ karboksylowej w pozycji 4. Pod¬ stawnik A moze oznaczac atom chlorowca, grupe azydowa, allkoksylowa, aryloksylowa, aryloalkoksy- lowa, heterocyleoksylowa, merkapto, alkilotio, ary- lotio, aryloalkilotio, beterocyklotio, aminowa, alki- loaminowa, alkanoiloarriinowa, hydroksyfenylowa, acylotio, acyloksy, sulfomoiloksy i temu podob¬ ne.Grupy heterocykliczne moga miec 5- lub 6-czlo¬ nowe pierscienie, zawierajace jeden lub wiecej 40 j atomów azotu, tlenu lulb siarki.Grucami acylowymi moga byc nizsze grupy al- kanoilowe o 2—6 atomaclh ? wegla, karfoamoilowe, tidkatbampilowe i ^-alkilo- albo N,N-dwualkiló- wymi ich pochodnymi, 45 Grupy alkilowe wyzej wymienionych podstaw¬ ników zawieraja 1—6 atomów wegla i moga byc ewentualnie podstawione takimi podstawnikami ja/k atom chlorowca, grulpa aminowa, alkoksylo- wa, cyjanowa, karboksylowa, sulfonowa i temu 90 podobne. minian, N-/trójfenylosililo/-sukeynamid, N-/trójme- tyloiililo/-ftalimid, N-tróimetylosililo/-benzenosul- fonamid, N-trójmetyiosililouretian, N-trójmetylosi- liloftalimid, monosUilo-tTÓijfluoroacetaimid albo bis/ /etofksykar,bonyloam!ino/-dwuimetylo,silan w neutral¬ nym rozpuszczalniku w temperaturze 25—70°C w ciagu 3—65 godzin dodaje sie ewentualnie nizszy alkanol albo riizszy alkilotiol o 1—6 atomach we¬ gla w czesci alkilowej, alkohol benzylowy, 2,5 n HC1 lub wodny roztwór kwasnego weglami sodo¬ wego i wydziela sie produkt.Stwierdzono, ze wedlug wynalazku zwiazki ce- falosporynowe moga byc transacylowame wedlug schematu 1, w którym B' i R' oznaczaja grupy acylowe, Ei oznacza atom wodoru; albo podstaw¬ nik tajki jak grupa metoksylowa, R" oznacza atom ¦^odoru lub grupe blokujaca, a A ozraacza atom wodoru lufo podstawnik organiczny nie poddajacy sie; dzialaniu opisanych warunków reakcji albo tworzacy sie podezafe lodszczepiania którejkolwiek z grup blokujacych lub cfchrónnych.Na schemacie 1 przedstawiono reakcje zwiazku o wzorze 1 ze srodtóam acylujacym w obecnosci czynnika sililujacelgo z wytworzeniem zwiazku 7- -dwuacyloamidocefalosporynowejgo o wzorze 2, któ¬ ry nastepnie rozszczepia sie do zwiazku 7-acylo- amidocefalosporynowego o wzorze 3.Etap wytwarzania dwuacylowanego produktu najlepiej przebiega przy scislym kontakcie zwiaz¬ ku cefalosporyinowego ze srodkiem acylujacym w odpowiednim rozpuszczalniku w obecnosci czyn¬ nika salilujacego. Temperatura reakcji nie jest szczególnie krytycznym parametrem, a temperatu¬ ry w zakresie 20—100° sa na ogól wystarczajace, jednak wedlug wynalazku przyjmuje sie za korzy¬ stna temperature 25—70°C. Jako srodowisko reak¬ cji odpowiednie sa rozpuszczalniki nie posiadajace aktywnego atomu wodoru, a wiec clhlorofor-m, ace- tonitryl, chlorek metylenu, dioksan, benzen, chlo- rówcobenzen, czterochlorek wegla, eter dwuetylo- wy i temu podobne. srodkiem acylujacym moze byc halogenek acy- lowy, bezwodnik" kwasowy lulb bezwodnik miesza¬ ny, przy - czym korzystne sa halogenki acylowe, na przyklad chlorek acetylu.¦Zwiazki azotowo-krzemowe sa przydatne jako czynniki sililujace na ogól o ogólnym wzorze (R5)n—5i—(NHRio)m, w którym .R5 oznacza grupe alkilowa, arylowa, albo aryloalkilowa o 1—8 ato¬ mach z których kazda moze byc ewentualnie pod¬ stawiona grupami cyjanowymi lub atomami chlo¬ rowca, m im ma wairtosc 2 albo 3, Rio oznaicza grupe zawierajaca ugrupowartie acylowe kwasu wejglowego, Ikarboksylowego, karbamiinowego, sul¬ fonowego, sulfaminowego, sulfinowego, fostfonowe- go, fosforowego i temu podobne. Przyklady takich czynników sililujacych przedstawiaja wzory 15—27, w których R5 ma wyzej podane znaczenie, Re oz¬ nacza atom wodoru lub oznacza grujpe o znacze¬ niu podanym dla R5, R7, Rg i R9 kazdy oznaicza grupe alkilowa, arylowa lub aryloallkilawa; o 1'—8 atomach wejgla, B grupe alkilenowa o 2—5 ato¬ mach wegla, a D ma takie znaczenie jak B albo monopiersoieniowa grupe arylowa.Podstawniki we wzorach 1, 2 i 3 oznaczone jako B' i R' korzystnie oznaczaja rodniki kwasów kar- boksylowyoh. Przyklady rodników o ogólnym wzo¬ rze RiiRio^CHCO—f w którym jak to okreslono nizej Rjo i Rn stanowia korzystna grupe podstaw¬ ników ze wzgledu na ich ogólnie przydatna ak¬ tywnosc antybiotyczna. Rjq oznacza atom wodoru* chlorowca, "grupe aminowa, guanidynowa, fosfono- wa, hydroksylowa, tetrazolilowa, karboksylowa, sulfonowa, sulfonaminowa a Ru oznacza grupe fenylowa, podstawiona grupe fenylowa, jednopier- scieniowa 5- lub 6^czlonowa grupe heterocykliczna zawierajaca jecjen lub wiecej atomów tlenu, siar¬ ki lub azotu, podstawiona girujpe heterocykliczna, fenylotio, ewentualnie podstawiona grupe heterd- 10 15 20 25 30 35 40 ' 45 50 55 60iii 14? 6i Cyfklotio, albo grupe cyjanowa. Podstawnikami moga byc atom chlorowca, grupa karboksyimety- lowa, gudnidynowa,, guanidynometylówa, kar^oka- miriometylowa, aminometylowa, nitrowa, metoksy- lowa albo metylowa: Korzystnymi przykladami takich podstawników sa grupa fenacetylowa, 3-bromo-fenyloacetylowa, p-aminoetylofanyloacetylowa, 4-karboksy.metylofe- nyloacetylowa, 4-karboiksyamidotmetylofenya,oaoety- lowa, 2-furyloacetylowa, 5-nitrofuryloacetylowa, 3- -furyloacetylowa, 2-tienyloalcetylowa, 5-chlorotie- nyloacetylowa, 5-imetoksytienyloacetylowa, a-igua- nidyno-2-tienyloacetylowa, • S-tienylloacetylowa, . 4- -¦mety 1otienyloacetyIowa, 3-izotiazoMloaoetylowa, 4- -metoksyizotiaizoliloacet^owa, 4-izotiazoliloacetylo¬ wa, 3-metyloizoitiazoIiloacetyloiwa, 5-izotiazoliIoace- tylowa, 3-ichloroizotiazoliloacetylowa, 3-metylc- -l,2,5*dkisadiazoliloaicetylowa, l,2,5-tiadiaizo'lilo-4-a- cetylowa, 3-imetylo-l,2,5-tiadiaizoTilo-4-acetylowa, 3- -chloro-l,2,5-tiadiazolilo-4-aicetylotwa, 3-imetoksy- -l,2,5-tiadiazolilo-4-aiceitylowa, fenylotioacetylowa, 4-pirydyio1tioacetylowia, cyjanoacetylowa, tetrazo- liloacetylowa, a-fluorofenylloatetylowa, D-fenyloigli- • cylowa, 3-hydroksy-D-fenyloglicylowa, 2-tienylo- glicylowa, 3-tienyloglicylawa, fenylomalonylowa, 3-ohlorofenylomalonylowa, 2-tienyiC4malonylowa, 3-tienylamaloinylowa a-foisfono-fenyloacatyliowa, a-sulfaminofenyloacetylowa, a-hydroksyfenyloaice- tylowa, a-tetrazolilofanyloaeeitylowa i ansulfonyio- fenyloacetylowa.Etap odszozepienia pierwotnej grupy acylowej mozna przejprowadzie miedzy innymi przedluzajac okres reakcji, przez dodatek alkoholu takiego jak nizszy alkanol lub tiol, albo przez hydrolize w wodnym roztworze zawierajacym niewielka .ilosc kwasu lub zasady. Tak wiec odszlczepienie moze nastapic przez dodatek nizszego allkanolu lub niz¬ szego tiolu o 1—6 atomach wegla,- aryloalkanolu takiego jak alkohol benzylowy, albo odpowiednie¬ go tiolu z innymi zwiazkami powodujacymi od- szczeipienie nydrolityczne w wodzie.W korzystnej wersji sposobu wedlug wynalaz¬ ku stwierdzono, ze cefalosporyny wytworzone na drodze fermentacji moga byc przeksztalcone w pochodne majace inna gruipe acylowa zamiast gru¬ py aminoadypoilowej bez uprzednielgo - odszczepia- nia tej grupy i nastepnej reakcji powstalego zwiaz¬ ku 7-aminowego. Sposób wedlug wynalazku umoz¬ liwia latwe wytwarzanie zwiazków cefalosporyno- wych i produktów posrednich przydatnych w tym sposobie.Ogólnie przebieg procesu przedstawia schemat 2.We wzorach na tym schemacie Ri oznacza atom wodoru lub grupe metdksylowa. A oznacza atom wodoru lub podstawnik nie ulegajacy dzialaniu warunków reakcji, albo przeksztalcajacy sie w nie¬ go podczas usuwania którejkolwiek z grup blo¬ kujaicych luib ochronnych, R' oznaicza grupe aicy- lowa, R" oznacza atom wodoru albo "podstawnik blokujacy albo ochronny a R2 oznacza podstawnik blokujacy albo ochronny.Zgodnie ze selhematem zwiazek cefalosporyno- wy o wzorze 4, albo jego pochodna o wzorze 5, w której podstawnik aminowy i/lub gruipa kar- 15 25 boksylowa sa blokowane lub chronione, poddaje sie dzialaniu czynnika acylujacego w obecnosci zwiazku sililowego celem wytworzenia posredniego produktu dwuacylowanego o wzorze 6 albo 7. Czlon 5 aminoadypoilowy poddaje sie nastepnie selektyw¬ nemu rozszczepieniu z wytworzeniem nowego acy- lowanego zwiazku cefalosporynowego o wzorze 8, albo jego soli w przypadku gdy R" oznacza atom wodoru. Tak wiec 'Choc sposobem wedlug wynalaz- * ku mozna .realizowac bez blokowania lub ochrony grupy aminowej i karboksylowej wyjsciowego zwiazku cefalospoirynowego, to korzystniejsze jest prowadzenie procesu z uprzednim zablokowaniem lub ochrona obu tych grup to znaczy aminowej jak i karboksylowej, poniewaz zapewnia to maksymal¬ na wydajnosc pozadanego nowego zwiazku cefa- losiporynowejgo.Ilustracje, bardziej szczególowa takiego korzyst¬ nego przebiegu sposobu wedlug wynalazku przed- 20 *~ stawia schemat 3, na którym R oznacza atom wo¬ doru lub grupe metoksylowa, R2 i R3 oznaczaja g'rupy blokujace lub ochronne, A' oznacza grupe acylowa, a R' oznacza grupe acylowa. Zgodnie z tym. schematem wyjsciowy zwiazek cefaio^poryno- wy o wzorze 9 jesit najpierw blokowany na drodze reakcji z odpowiednim reagentem celem ochrony podstawnika 5'-aminowego (wzór 10).Grupa aminowa moze byc zablokowana metoda go znana przez takie grupy jak acylowa lub aryloilo- wa, alkoksykarbonyilowa, alkilosulfonylowa, arylo- sulfonylowa i temu podobne. Szczególnie do ochro¬ ny grupy aminowej moga byc wskazane grupa trójchloroetoksykarbonylowa, Illrz^butoksykarbo- 25 nylowa, benzoilometoksykarbonylowa, trójimetylo- sililowa, p-metoksybenzoiiloksylowa, 2-nitirofenylo- sulfenylowa, 2,4-dwunitrofanylosulfenylowa, chlo- roacetamidowa, orto-nitrofenyilotio i temu podobne, przy czym jako korzystna nalezy wymienic po- ^ chodna trójchloroetoksykarbonylowa, która — do¬ godnie wytwarza sie na drodze reakcji zwiazku ce¬ falosporynowego z chlorkiem trójchloroetoksykar- bonylowym w obecnosci neutralizatora kwasu ta¬ kiego jak zasada lub sól zasadowa, na przyklad 45 fosforan diwualkilowy i temu podobne.^ Korzystne jest na ogól prowadzenie tej reakcji ze zwiazkami cefalosporynowymi, w których grupa karboksylowa jest podobnie blokowana lub chro¬ niona (wzór 11), poniewaz zapewnia to maksymal- 50 na wydajnosc docelowego produktu. Jako grupy blokujace lub ochronne korzystne sa takie, które moga byc usuniete z wytworzeniem wolnego kwasu bez uszkodzenia ugrupowania /Maktornowe- go, poniewaz zwiazki cefalosiporynowe przewaznie 55 stosuje sie w postaci soli takich jak sole metali alkalicznych lub aminowych. Przydatne w tym ce¬ lu grupy sa znane w stanie techniki.Przykladami odpowiednich pochodnych sa estry alkoholi, fenoli, meirkaptanów i tiofenoli o ogól- 60 nym wzorze /-^GOXR4, w którym R4 oznaicza rod¬ nik alkoholu luib tiolu na przyklad metyl, etyl, Illrz-butyl, podstawiony alkil, talki jak ftalimido- metyl, sukcyinimidometyl, fenacyl, podstawiony fe- nacyl, na przyklad p-bromofenacyl, ^-podistawio- 65 na ^ grupa etylowa jak 2,2,2-trójchloroetytl, 2-mety-Jll 147 lotioetyl, 2-/p-metylofenylo/-etyl, 2-/p-metylofeny- lo/-sulfonyloetyl, 2-metyloamiinoetyl, 2-ehloro-etyl albo 2*bronio-etyl, benzyl, podstawiony benzy^jak p-nitro^bejrzyl, p-metofcsyHbenzyl, 3,5^dwunitro-'ben-. zyl, 2,4i6-tr6jmetyló-benzyl, 3,5-dwutihloro-4-liydro- v ksy-benzyl i temu podobne, benzhydryl ailbo pod¬ stawiony benzlhydryl jak . p-imetoksy-benzhydryl, grupa acyloksy-alkilowa jak acetpkisymetylowa, pi- waloiloksymetytówa, grupa alkoksylowa, jak me- toksymetylowa, albo monócykliczna grupa arylowa na .przyklad fenylowa, lub podstawiona fanylowa jak p-nitrofenylowa, albo 3,5-dwurfitrafenylowa.Te igrupy ochronne lub blokujajce podstawnik ka- rboksylowy wytwarza sie znanymi metodami.Tak ochroniony zwiazek cefalosporynowy pod¬ daje .sie; reakcji ze srodkiem acylujajeym w obec¬ nosci zwiazku nsililowego talkiego jak opisano wy¬ zej celem wytworzenia imidu lub produktu dwu- acyJowanego (wzór 12). Srodkiem acylujacym mo¬ ze byc halogenek (clhlorek lub bromek) kwasowy lttib jego (funkcjonalna pochodna taka jak bezwod¬ nik kwasowy, imerkaptyd, raiiesfcany bezwodnik z innym kwasem karboOosylowym, aktywowany * ester kwasu kartooksyloweiao taki jak ester p-nitrofe- mylciwy i temiu podobne, korzystnym czynnikiem acylujacym w sposobie .wedlug wynalazku sa pochodne kwasów karboksy- lowych. Korzystnie grupy acylowe oznaczajace pod¬ stawnik R' maja wzór ogólny 28, w którym X o- znaeza atom wodoru, chlorowca, grupe aminowa, guaaidynowa, fosfonowa, hydroksylowa, te^razo- lHowa, karboksylowa, sulfonowa, albo sulfonami- nowa, Rj oznacza fenyl, podstawiony fenyl, jedno- pierscieniowa, 5- albo 6-czlonowa reszte heterocy¬ kliczna, zawierajaca jeden lub wiecej atomów tle¬ nu, siarki, albo azotu, podstawiona grupe hetero¬ cykliczna, fenylotio, fenyloksy," ewentualnie pod¬ stawiona grupe tidheterocykliczna, nizsza grupe alkilowa o 1^-6 atomacfh wegla, grupe cyjanowa, ppzy czym -grupy R3 moga byc ewentualnie pod¬ stawione atomem chlorowca, grupa karboksyme- v tylowa, % guanidynowa, guanidynometyiowa, karbo- ksamidometylowa, aminometylowa, nitrowa, meto-, ksylowa, albo metylowa.W przypadku gdy czynnik acylu jacy zawiera grupy takie jak- anilinowe czy^ karboksylowe, * to moga one byc blokowane lub chronione^-podczas aicylówairria a nastepnie uwalniane metodami zna¬ nymi w stanie techniki. Alternatywnie czynnik acylujacy moze zawierac grupe azydowa, która moze byc zredukowana znanymi "metodami do gru¬ py aminowej.,•••*¦ , Specjalnie korzystnymi czynnikami acylujacy- mi sa takie, które zawieraja grupe acetylowa wzglednie podstawiona grupe acetylowa jak fe- nyloacetyl, tienyloacetyl <2- ii 3-), furyloacetyl (2- i 3-),fenoksyaeetyl, fenylotioacetyl, a-azydofenylo- acetyl, i temu podobne, poniewaz wytworzone acy- lowane zwiazki cefalosporynowe imaja zwiekszona aktywnosc aintybiotyczna.Sposób wedlug wynalazku korzystnie przebiega ze zwiazkami 3—CH^A^efalosporynowymi, w tetórych A' óanacza grupe acylowa.Przykladem talkich grup. acylowyah moga byc li 15 35 50 55 65 wspomniane juz nizsze grupy alkanoilowe (C2—C%) a zwlaszcza acetyl i karbanioil, poniewaz zwiazki cefalosporynowe majace te grupy wyfcazdja zwiejk- szona aktywnosc antybiotyczma, przy czym grupa acetylowa moze byc latwo zastapiona celem wy¬ tworzenia innych 3-podstaiwlonyich awiazków cefa- losparynowyeh, metodami znanyimi ze stanu tech¬ niki.Jako czynnik sililujacy korzystnie stosuje sie zwiazki trójorganosililowe albo dwuorganosililowe takie jak opisano wyzej. Szczególnie przydatne sa w tym celu zwiazki trójalkilosililowe, a zwlaszcza trójmetylosililowe, które sa latwo dostepne. Przy¬ klady takich zwiazków trójalkilosililowych przed¬ stawiono wzorami 15—i25, z których przykladowo mozna wymienic N-trójmetylosililoacetaimicJ, N- -trójmetylo-.sililo-trójfluoroacetaimid, N,6-bis /trój- ' metylosililo/-acetami!d, N,0-ibis /trójmefrylosililo/- tTÓjfluoroacetaimid, N-trójinetylosililo-benzeiiOBul- fónamid, N-trójmetylosiltto-mefcylosu^^ N- -trójn^ylosililomocznik,. N,N-ibis /trójmetylosililo/- -mocznik, N-trójmetylosiKlo-N^^ l *N^rójmetyiosililo-N,N'-dwumetyloimc^mik, N- -trójmetylasiflilo-etylouretain, (M-tirójmetylólsililo-me- tylotiretan, NTtrójmetyloslM?lo-(benzylouretan, N- ^ -trójmetylasililo-ftalimid, i drnne zwiazki trójalki- losilllowe takie jak odpowiednie zwiazki trójetylo- we.} Przeksztalcenie imidowego chronionego zwiazku . cefalosporynowego 11 w zwiazek dwuacylowany 12 oprowadzi siie korzystnie przez scisly^ kontakt zwiazku cefalosix)jrynowego z czynnikiem acylu- jacym w odpowiednimi (rozpuszczalniku w obecno¬ sci zwiazku sililowego.Temiperatura prowadzenia tej reakcji xne jest krytyczna, a temperatury —20—100°C sa w zasa¬ dzie wystarczajace^ jednak korzystnie reakcje pro¬ wadzi sie w zakresie temperatur 25—70°C.Jasko medium reakcji odpowiednie sa rozpusz- czalniJki nie zawieraljace aktywnego atoniu wodoru takie jak chloroform, acetonitryl, clhlorek metyle¬ nu, dioksan, benzen, ohlórowcobenzen, czterochlo¬ rek wegla i eter dwuetylowy.Etap rozszczepienia pierwotnej grupy aminoady- poilowej moze byc zrealizowany róznymi drogami, a miainowicie przez przedluzenie czasu reakcji, przez dodatelk alkoholu takiego jak nizszy alkanol lub inizszy tiol a^lbo tworze wodnym z dodatkiem zasady lub kwasu.W pewnych przypadkach rozszczepienia dokonuje sie przez dodatek nizszego alkanolu lub nizszego tiolu 10 1^6 atoimach wegla, aryloalkanolu takiego jak alkohol Sbenzylowy lub odpowiedniego tiolu.Podczas reakcji acylowamia naist^puje pewne roz¬ szczepienie gruipy aiminoadypoilowej, zalezinie od warunków w jatkach prowadzi siie acylowanie. Tak wiec przedluzone ogrzewanie mieszaniny reakcyjY nej moze spowodowac rozszczepienie (gruipy a;mino-* adypoilowej i wytworzenie pozadanego 7-aeyiowa-' nego zwiazku, cefalosporynowego '(wzór 13 i 14).Wedlug korzystnej wersji wyniala pienie dwuacylowameigo zwiazku "albo iirnMu za¬ chodzi równiez przez reakcje imidu z halógeriMein sililu takim jak chlorek trójmetylósililowy. ProcesUl 147 10 10 15 25 ten /przebiega latwo podczas ogrzewania w óiagu 1 godziny chlorku trójmetylosililowego z imidem w odpowiedrtiim niereaktywnym rozpuisraczaliniku takim jak dwuchlorek etylenu w. temperaturze o- kolo 60°C. Monoaeylowany zwiazek cefalosporyno¬ wy wydziela sie nastepnie z mieszaniny reakcyj¬ nej w sposób zinany.Stwierdzono równiez, ze zgodnie z innym ko¬ rzystnym wariantem wynalazku podczais procesu acylowania przebiega spontanicznie rozszczepienie imidu zaleznie od dharakteru czynnika sililujace- go. Tak wiec w przypadiku reakcji estru kwasu 7^-/D-5-trójidhloroetókBy1kairlbonyloaimino-5-Joa.rbo- ksywaleryloamido/-3-kaT|bainKiliilkisymetylo-7-meto- ksy-3-cefem-3-karboksylowego-4 z chlorkiem 2-tie- nyloacetylu w obecnosci N-trójmetylosililo-ben- zenosulfonamidu w temperaturze 65°C w ciagu o- kolo 10 godzin bezposrednio z mieszaniny ireakcyj- nej izoluje sie z dobra wydaljnoscia odpowiedni e- ster kwasu 3-ikarbamoiloksymetylo-7-metoksy-7^- 7/2-teinyloaceiamido/-cefem-3-!kiai^dkisylowego^4.Przy oddzielaniu w odipowiedni sposób grup o- chronnyCh ipodstawnilka aminowego czlonu amino- adypoilowego takich jak grupa trójchloroetoksy- karbonylowa albo Illrz-butokisykairbonylowa na¬ stepuje selektywne rozszczepienie grupy aminoady- poilowej.Usuwanie grup ochronnych funkcji aminowej prawdopodotaie powoduje wewnetrzna cyklizaeje ^ grupy aiminoadyipoilowej dajacej w efekcie od- szczepienie takiej grupy jak ester kwasu a-karbo- ksylowego o wzorze 29.Wydaje sie, ze .mechanizm odszczepienia jest wlasnie taki, jednak roie jest to calkowicie, pew- 35 ne czy wyjasnienie przebiegu irozszczejpieniia w dal¬ szych badaniach potwierdzi sie i czy produkt roz- , szczepia sie w inny sposób. Wyjasnienie to przyj¬ muje sie dla lepszego zrozumienia wynalazku.Odszczepienie grup ochronnych funkcji amino- 40 wej i karboksylowej prowadzi sie znanymi meto¬ dami. Na przyklad grupe trójcbloroetoksykarbo- nylowa usuwa sie w reakcji z cynikiem i kwasem octowym, a grupe Illrz-butokisykaribonylawa i benzhydrylowa usuwa sie w reakciji z kwasem 45 trójfluorooctowym.Nowe zwiazki 7-dwuacyloamidoiwe wytworzone w procesie sposobem- wedlug wynalazku sa nie tylko przydatne jako produkty posrednie w proce¬ sie wytwarzania manoacylowanyidh" cefalosporyn, 50 ale sa tez produktami przydatnymi jako czynne przeciw róznym mikroorganizmom patogennym.Zwiazlki cefalosparynowe wytwarzane sposobem wedluig wynalazku sa cennymi antybiotykami prze¬ ciw róznym gram-dodatnim i gram-ujemnym bak- 55 teriom. Kwas 3-acetoksymetylo^7/ff-/2-tienyloaceta- mido/-cefem-3-kar.bóksyIowy-4, znany pod nazwa cefalotyny jest cennym antybiotykiem, stosowa¬ nym w terapii medycznej. tfHmetoksy-cefalosporyny maja biologiczne spektrum podobne do niepodsta- w wibnych cefailosporyn, a ponadto- posiadaja inne cenne wlasciwosci. Ogólnie sa one aktywne prze¬ ciw licznym mikroorganizmom, odpornym Woibec znanych' cefalosporyn takich jak cefalorydyna i cefalotyna i sa odporne na /?-laktamazyi wytwarza- & ne przez odporne' wobec cefalosporyn klinicznie izolowane patogeny takie jak E. coli i A. cloacea.Równiez sa one na ogól ^bardziej aktywne przeciw szczepom Proteuis takim jak mirabilis i sa aktyw¬ ne przeciw szczepom Proteuis monganii, które sa odporne wobec n'iepodstawiony'cfo cefalosporyn.Zwiazki wytwarzane sjposobem wedlug wynalaz¬ ku sa uzyteczne do usuwania mikroorganizmów z leków i sprzetu medycznego i dentystycznego oraz* jako bakterycydy w zastosowaniach przemyslo¬ wych, ma przyklad w farbkach wodnych oraz w wodzie stosowanej w przemysle papierniczym, za¬ pobiegajac wzrostowi szkodliwych bakterii. 7-metoksy-cefalosporyny 'wytwarzane -sposobem wedlug wynalazku sa na ogól bardziej aktywne niz 7-/D-5y-amiino-5/-(kai1boksywaleryloamildo/-7-me- toksy-cefalosporyny przeciw róznym gram-ujem- nym orgaaizmcm i wykazuja zwdejkszona aktyw¬ nosc przeciw gram-dodatnim organizmom. Na przyklad te 7Tmetoksy-cefalospoiryny sa aktywne przeciw gram-dodatini&n# patogenom takim jak Sta - phylo-coccus aureus przy minimalnym stezeniu in- hibitujacym — MIC (Minimum Inhibitory Con/cen- tratiion) 1,5 mikrograma/ml, 'Stre.ptococcuis pyoge¬ nes MIC ~ 0,7 mikrograma/ml i Diiplococcus poeu- moniae MIC ~ 0,7 mikrograirna/mil, oraz przeciw gram-ujemnym organizmom takim jak Aerobacter aerogenes MIC ~ 3 mikrogramy/ml. Proteus vul- gariis MIC ~ 1,5 mikrograma/ml i Proteus mor- ganii MIC ~ 6 mikrograma/ml.Aktywnosci produktów wytworzonych w wyzej podanych przykladacfh sa nastepujace: — kwas 3-karbamoilaksymetylo-7- loacetaimddo-ceifaim-3-.karboksylowy-4_ . wobec S. pyogenes MIC = 1,56 mikragrama/ml i wobec P; vulgaris M-It = 1,56 mikrograma/ml — kwass 3-kailbamoilokisymetylo-7-metoiksy-7-/I2-tie- nyloacetaimido/-cefem-3- pyogenes MIC = 0,78 mikrograma/iml, oraz wobec P. imorganii MIC = 12,5 mikragrama/ml. — kwas 3-lkartoamoildksymetylo-7-meto!ksy-7-/2-fu- ryloacetaimido/-cefem-3-kair!boksylowy wobec S. a- ureus MIC = 6^25. milkrograma/ml oraz P. vulga- ris MIC = 1,56 mikrograma/ml. — kwas 3-ka«i^amoiloksynietylo-7-imetoksy-7-ttiofe- noksyacetamido-oefem-3-kailbokjsylowy wobec S. * y pyogenes MIC = 0,78 miltorograma/iml oraz D. pneumoniae MIC = 0,78 mikrograma/ml. — kwas 3-acetoklsymetylo-7-metokBy-7-/2-tienyio- acetaimido/-cefem-3-karbofcsylowy-4 wobec S. pyo¬ genes MIC —^,'56 mikrograma/ml oraz P. vulga- ris MIC = .0,78 imilkirograma/ml. — kwas 3ip'irydyaometylo-7-metolksy-7-/2-tienylo- acetamido/-cefem-3-ikarboksylowy-4 wobec Serra- tia MIC = i25 mlkrogramów/rril oraz S. aureus MIC = 156 mjkrogramów/iml.Zwiazki wytwarzane sposobem wedlug wynalaz¬ ku moga byc stosowane w" preparatacn farmaceu¬ tycznych jako takie lub ewentualnie w polacze¬ niu z innymi •skladnikami aktywnymi.Antybiotyki te moga ibyc stosowac w postaci' odpowiednich soli w kapsulkach luib i^ko tabletki, proszki luib roztwory, zawiesiny albo eliksiry. Mo¬ ga ibyc one podawane douistnie, dozylnie lub do-111147 11 12 miesniowo. Jako nosniki w preparatach farmaceu¬ tycznych moga byc stosowane mannit, sacharoza, glilkoza lub sterylne ciecze takie jak woda, solan¬ ka, glikole i pieje pochodzenia naftowego, zwierze- B cego, roslinnego lub syntetyczne, miedzy innymi na przyklad olej z orzeszków ziemnych, olej mi¬ neralny lulb sezamowy,, (Ponadto do nosników imoga 'byc dodawane inne skladniki takie jak stabilizatory, lepiszcza, anty- 10 utleniacze, sulbstancje ochronne, smarne, srodki suspendiujace, regulujace lepkosc luib srodki zapa¬ chowe itp. Ponadto Bródki farmaceutyczne moga zawierac inne .skladniki czynne takie jak antybio¬ tyki celem rozszerzenia 'spektrum aktywnosci an- 15 tybiotycznej. '* - Wprawdzie na ogól jako srodki lecznicze stosuje sie sole cefaloisporyn to równiez niektóre estry ta¬ kich cefalosporyn sa równiez korzystnie przydatne w lecznictwie ludzi i zwierzat. Specjalnie korzyst- 2o me isa estry, które ulegaja na drodze biologicznej konwersji ido wolnych kwasów i ich soli.LPirzykladami takiclh estrów sa estry niskoalkilo- -niskoallkilowe takie jak metdksymetylowy lub metoksyetylowy itp. aryloalkoksynniskoalkilowe 25 takie jak benzyloksymetylowy, benzyloksyetylowy, fenoksyetylowy itp. acetolksymetylowy, piwaloilo- ksymetylowy, plwaloiloksymetylowy, propionylo- ksymetyilowy, butyryloksymetylowy, izobutyrylo- ksymetylowy, benzoiloksymetylowy itp. Okreslenie 30 nizszy aikil odnosi -sie do grup o lancuchu prostym lub rozgalezionym o 1—5 atomach wegla w gruipie alkilowej. Estry takie moga ifcjyc wytworzone bez¬ posrednio iprzez stosowanie pozadanego estru w sposobie wyzej opisanym i wydzielenie estru poza- 35 danego zwiazku cefadasporynowago. iNa przyklad jesli zastosuje sie ester metoksyme- tylowy 7i^-adypoilo-cefalosjporyny w opisanym wy¬ zej procesie .tranisacylacji wytworzy sie ester me- toksymetylowy nowego zwiazku 7^-acylamidoce- 40 falosporynowego bezposrednio jak .to opisano w ipowyzszych przykladach. Alternatywnie wolny zwiazek cefaiospoirynowy, wytworzony wedlug wy¬ nalazku moze byc latwo zes'tryfikowany w reakcji z odpowiednimi chlorowoo-n^skoalkiilowym zwiaz¬ kiem sposobem znanym ize istanu techniki.Na przyklad ester ,metoksymetylowy i fenoksy- metylowy wytwarza sie laltwo w reakcji estru chlorometylowego atlbo «-iclhloroanizolu z kwasem cefalosporynowyrri w obecnosci substancji wiaza- ^ cej kwas, albo w reakcji soli cefailosporynowej ze zwiazkiem chlorowcowym.Podobnie estry acyloksy-niskoalMlowe wytwarza sie latwo w ireafocji kwasu cefalosporynowego lub jego soli z estrem chlorametylowym lub bromo- 55 metylowym odpowiedniego kwaSU metodami zna¬ nymi. s Pt z y k l a d I. Kwas 3-kar;bamoiloksymetylo-7- -metoksy-T^-fenyloacetamido-icefem-S-kanboIksylo- wy-4; 1 60 A. Kwas T^-ZD-S^tróJohloroetoksyikanbonyloami- no-5'-karboksywaleramido/-3-ka.rt)amoiloksymetylo- -7-met;oksy-ice£fem-i3-,kar(bc4k!sylowy-4. <20,5 g soli monosodowej kwasu 7yl?-D-5-a -karboksywaleramido/-3-karbamoiloksymety 1o - 7- 65 45 -metoksy-3-cefem-ikarboksylowego-4 rozpuszcza sie w mieszaninie 80 ml acetonu i 240 ml wodnego 10% fosforanu dwusodowego. Do roztworu tego dodaje sie 'kroplami 25 g i(T18 . mmola) chlorku trójchloroetoksykaiibonyloweigo w 80 ml acetonu. iW trakcie wkraplanLa wartosc ipH iroztworu utrzy¬ muje sie przy wartosci 9, dodajac kroplami 2,5 n lug sodowy.Po 30 minutach mieszanine ekstrahuje sie octa¬ nem etylu, warstwe organiczna odrzuca, warstwe wodna zakwasza do wartosci feH = 2,5 stezonym kwasem solnym. Wytracony zwiazek ekstrahuje sie octanem etylu, osusza • siairczanem sodowym, usuwa irozpuiszczalnik w prózni i otrzymuje zadany zwiazek w postaci oleju.Widmo w nadfiolecie: (CH^OH) Amax — 2*yz,5 ^m, e = 5450 N(MR (rozjpuisizczalnik DMSiO, de), 8 = 3,43 (O-CH3, is), 4,73 (2—jH2, czesciowo widoczne), 4,81 {C013CH2^0, s), 5,1)2 («—H, s), okolo 4,74 (10—H2, czesciowo widoczne).¦B. Ester dwubenzlhydrylowy kwasu 7^/D-5'-(trój- chiloroetoksylkarbonyloamino-S^karboiksywalermi- do/-3-karibamoiiloksymetylo-7-metoksy-cefem-3- -kar!boksylowego-4.Do roztworu zwiazku wymienionego w punkcie A w 500 ml octanu etylu dodaje sie 17 g dwufe- nylodwuazometanu w 200 ml eteru, miesza przez noc i ekstrahuje roztworem kwasnym weglanu so¬ dowego oraz roztworem chlorku sodowego. Faze organiczna osusza sie, odparowuje i otrzymuje su¬ rowy zwiazek, który oczyszcza sie chromatogra¬ ficznie na zelu krzemionkowym. Jako eluent sto¬ suje sie mieszanine chloroformu i octanu etylu w stosunku 2:1. Zwiazek ten wykazuje pojedyncza plame na chromatografie cienkowarstwowym.Widmo w nadfiolecie przy (CH3OH): Xmax = 2650 pm, s 7000, NMR (rozpuszczalnik —T CDCI3): S = 3,45 (0-^CH3, s) 3,35 '(2—^H2, czesciowo wi¬ doczne), 4,69 {CH^CClj-rO, is), 5,03 (<6^H, s), okolo 4,88 (10—H2, czesciowo widoczne).C. Ester dwubenzhydrylowy kwasu 7^4/D-5'trój- chloroetoksykaribonyloamino-S^kairibofksywalery- lo/fenyloacety)loam!ino]-3-kartoamoiloksymetylo-7' -me)toksy-cefem-3-karbdksylowego-4.Mieszanine 1,2 g (1,18 milimola) estru, dwuibenz- hydrylowego kwasu 7^/-D-5/-trójcihloroetoksyikar- .ibonyloamino-5/-kairboksywaleramido/-3-kairbamoi- loiksyimeltylo-7-meto!ksy-3-cefem-kar|boksylowego-4, 5 ml acetonu nitrylu oraz 3 ml bis-trójimetylosilil<6- -trójfluoroaoetamidu pozostawia sie w temjperatu- rze pokoijowej na przeciag 6 godzin.Nastepnie usuwa sie lotne zwiazki w wysokiej prózni, pozostalosc rozpuszcza sie w 3 ml chlorku metylenu, dodaje 0,23 ml (1,79 milimola) chlorku feriyloacetylu i pozostawia w itemiperaturze pokor jowej na przeciag 65 godzin. Roztwór odparowuje sie, pozostalosc rozpuszcza w 5 ml czterohydrofu- ranu oraz 0,7 ml 2;5 n kwasu solnego. Po 20 mi¬ nutach usuwa sie rozpuszczalnik a pozostalosc rozpuszcza w chlorku metylenu i dodaje roztworu, kwasnego weglanu sodowego. '(Po rozdzieleniu warstw faze organiczna przemywa sie roztworem chlorku sodowego, suszy i odparowuje do sucha.Otrzymany surowy produkt oczyszcza sie cliro-111147 13 14 matografioznie na zelu krzemionkowym stosujac jako eluerit mieszanine chloroformu i octanu ety¬ lu w 'Stosunku 0*5:5. Chromatografia cienkowar¬ stwowa wykazuje, ze zwiazek ten jest homogen- ny.Widmo w nadfiolecie '(CH3OH): Xmax = 2640 jum, e 6650, NMR (rozpuszczalndk -^DCls): 8 = 3,50 (O—CH3, s), 3,31 (2—H2, czesciowo widoczny), ^,67 (CH2CCl3-^0, s), 5,04 czesciowo widoczny), 3,95 D. Ester benzhydrylowy kwasu 3-karbamoilo- kisymetylo-T-metoksy-T-i^-fenyloaiCCtamido-cefem- -3-karbdksylowejgo- 4.Roztwór 104 img estru dwuibenzhydrylowcgo kwasu T-^-fD/iS^trójchloroetoklsylkartoonyloamino-S'- -¦karboksywalerylo/Hfenyloa moiloksymetylo-THmeitoiksy-S-icefem-ikarboksylowe- go-4 w 1 ml mieszaniny 90% kwasu octowego i lOtyo wody miesza sie ze 100 img pylu cynkowego w ciagu 5 godzin.Po przesaczeniu roztwór odparowuje sie w próz¬ ni, pozostalosc rozpuszcza w chlorku metylenu, dodaje wody, rozdziela warstwy i warstwe chlor¬ ku metylenu ekstrahuje isie roztworem kwasnego weglanu sodowego oraz chlorku sodowego. Po o- suszeniu i odparowaniu rozpuszczalnika otrzymuje sie surowy produkt, który oczyszcza sie cihroma- tografia cienkowarstwowa na zelu krzemionkowym stosujac jako eluent mieszanine chloroformu i oc¬ tanu etylu w -stosunku 3:2. Produkt ten okresla sie za pomoca widnia w podczerwieni oraz widma NMR. Widmo w podczerwieni wykazuje absorpcje (CHCI3) przy: 1780, a730 oraz 11680 cm-1.Widmo w nadfiolecie: (CH^OH) Amax = 2640 /im, s 5870, NMiR (rozpuszczalnik CDC1I3): "8 = 3,40 (is, 0—CH3), (3,33 i(2—H2, czesciowo widoczne), 5,01 (is—6—H) ~ 4,88 (ia-^H2, czesciowo widoczne), 3,60 (s, 13—H2).E. Kwas 3-kaiiibamoiloksymetylo-7-metoksy-7/?- -feny1oacetamido-c efem-3-kambofcsyIowy-4. 17 mg estru 'benzhydirylowego .kwasu 3-karlbH- moiloksymetylo-7Hmetoksy-7-^Hfenyloacetamido-3- -icefem-lkarboksylowego-4 rozpuszcza sie w 0,2 ml anizolu i zadaje 0,5 ml kwasu trójfluorooctowego w ciagu 5 minut. Mieszanine zalgeszcza sie szybko w wysokiej prózni, rozciencza octanem etylu i eks¬ trahuje roztworem buforowym fosforanu sodowe¬ go o wartosci pH = 7,5.Roztwór buforowy zakwasza sie do wartosci pH — 2,5 rozcienczonym kwasem solnym i eks¬ trahuje octanu etylu» Po osuszeniu i odparowa¬ niu rozpuszczalnika, otrzymuje sie zwiazek, który poddaje sie krystalizacji z octanem etylu. Tempe¬ ratura topnienia 159—161°C.Widmo w nadfiolecie (roztwór buforowy o pH = 7): imax = 2670 /zim, e 8650.Widmo w podczerwieni wykazuje absorpcje -(CHjGN) przy: 1780, 1735 oraz 1760, NMR (roz¬ puszczalnik CDON + D20): 8 — 3,42 (is, 0—CH3), 3,35 (2—H2, czesciowo widoczny), 5,01 (s, 6^H), 4,83 (d, 10—H2), 3y61 (s, 13—H2).AnaHza elementarna dla C18H19C7N3S: obliczono: C 51,29, - H 4,54^/a znaleziono: C 51,47, H 4,75°/© 10 15 20 30 35 40 50 55 65 2 mg otrzymanego zwiazku rozpuszcza sie w 1 kropli metanolu d zadaje '2 mjg dwuoctanu dwufoen- zyloetylenodwuaniiny W octanie etylu. Utworzona sól dwubenzyloetylenodwuainiinowa powyzszego zwiazku wytraca sie po pewnym czasie w postaci igielkowych krysztalów.^ Temperatura topnienia 140°—143°C.Widmo w nadfiolecie (w metanolu) wykazuje Lax = 263 //m, s 8600. Material wyjsciowy sól monosodowa kwasu 7^/D-5-laminó-5-kaiibolksywa- leramido/-3- fem-karboksylowego-4 wytwarza sie nastepujaco.Wytwarzanie soli monosodowej kwasu 7^-{/JD-5- -amino-5-karbóksywaleramido/-3-katfbaimoiloksy- metylo]-7-metoksy-cefem-3Jkarbok!sylowego-4.Zmodyfikowany proces fermentacji.Etap I. Hodowla na podlozu stalym.Probówke z liofilizatem hodowli szczepu Sitrep- tomyces laictarndurans (N1RHL3802) otwiera sie a- septycznie i zliofilizowany material przenosi sie na 'skosy agarowe z pozywka o okladzie: Pozywka XI ^melasa z buraków l*/« wyciag drozdzowy(Natinal y Breyer^s Yaest)' l*/t agar Di-fco o pH = 7 ^ 2,5*/© woda do ofbjetosci - Skosy inkubuje sie przez 7 dni w temlperatu- rze 28°C.Tak przygotowane hodowle przeelhowywane w chlodzie sa stabilne przez ponad 13 (tygodni.Etap II. Stadium posiewowe: system dwustop¬ niowy a) Pasaz pierwszy olbejimuje szczepienie 'bezpo¬ srednio ze slkosu z etapu I, 4i0 ml pozywki o skla¬ dzie ltyo zawiesiny suszonych drozdzy (Primary Dried Yeast N.F., firmy Yeasit Product Corpora¬ tion) o ipH — 7 w i250 ml kolbach Erlerumeyera z lapaczem. Kolby umieszcza sie na wytrzasarce obrotowej o 200 obr./min. i skoku 5 om w tempe¬ raturze 28°C i wytrzasa od 2 do 3 dni. b) Pasaz drugi — do kolby z zawartoscia pozyw¬ ki o skladzie 2% autolizatu drozdzy (Fleisichmann S-150 Yeast autolysate) o pH = 7, przenosi sie 2,5*/« inokuluim z pierwszego pasazu. Hodowle tego pasazu przeprowadza sie jak w przypadku pasazu pierwszego i czas inkubacji nie przekracza 48 go¬ dzin, przy czym hodowle charakteryzuja sie wzro¬ stem umiarkowanym.Etap III. Pozywka produkcyjna.Pozywka produkcyjna na 1_ litr wody destylo¬ wanej zawiera: 30 g rozpuszczalnych pozostalosci gorzelniczycih, 7,5 g zawiesiny suszonych drozdzy (primary Dried Yeaist &.F.) oraz 0,25#/« obj. odT pieniacza (Mohilpar-S). Pozywke doprowadza sie do wartosci pH ¦= 7 niewielka iloscia stezonego roztworu wodorotlenku sodowego, przenosi do kolb Erlenmeyera i autoklawuje isie przez 15 do 20 mi¬ nut w temperaturze 121°C. , ..Oziebiona pozywlke szczepi sie 2,5^/e inokulum z pasazu drugiego. Czas inkubacji moze wahac sie od 50 do 100 godzin, choc najkorzystniej gdy trwa 72 godziny. Objetosc pozywki w kolbie moze wa¬ hac sie od 30 do 50 ml, a korzystnie gdy wynosi111147 15 IG 40 nil. Ilosc inokulum moze wahac sie od lP/o do 5?/o, praktycznie na ogól stasuje sie 2,5°/o.Etap IV. Oznaczenia Po zakonczeniu fermentacji usuwa sie komórki przez odwirowanie, i przesacz rozciencza fosfora¬ nowym roztworem buforowym o pH = 7. Steze¬ nie kwasu 7/?-/D-5-ammo-5-kairboksywaleramido/-3- -/kaafoarrH)iloksymetyW ksylowego-4 w brzeczce fermentacyjnej okresla sie metoda biologiczna przy zastosowaniu krazków bibulowych. Jako organizm testowy uzywa sie Vi- brio percolans Krazki bibulowe po zanurzeniu w rozcienczo¬ nym przesaczu umieszcza sie na powierzchni aga¬ ru z wsianym drobnoustrojem testowym, na plyt- kaich Petiriego i nastepnie szczepi sie.Równoczesnie ma powierzchni algaru umieszcza sie krazki bibuly nasycone uprzednio roztworem standardowym o znanym stezeniu kwasu 7^-[/D-5- -.amino-5-karbaksywaleramido/-3-kairibaimoiiloksy- metylo]-7^metoksy-cefem-3-kairbokisyloweigo-4. W ten sposób przygotowane plytki Petriego inkubuje sie przez noc w temperaturze 28QC, a nastepnie dokonuje pomiaru srednicy stref zahamowania wzrostu drobnoustrojów testowych. - Stezenie produktu w brzeczce fermentacyjnej o- blicza sie przez interpolacje z krzywej standardo¬ wej przedstawiajacej zaleznosc srednicy' stref za¬ hamowania od znanego stezenia standardowego, ba¬ danego produktu. Tym sposobem obliczono,, ze Streptomyces laictamdurans iNRRL-3802 wytwarza 78,6 pg/ml kwaisu: ^-/D-S-aniino-S-karbotosywale- ramido/-3-ka,Tiba!moilofksymetylo-7-imetaksy-cefem- -3-kariboksylowego-4.• Etap V. Izolacja 290Ó iml przesaczu brzeczki doprowadza sie do wartosci pH = 7 (rozcienczonym kwasem solnym i przepuszcza przez kolumne wylpelniióna 100 ~g anionowej, silnie zasadowej zywicy jonowymien¬ nej posiadajacej podstawowa budowe styrerio-dwu- winylobenizenowa (Dowex) i 1 x 2 cykl chlorkowy z szybkoscia 10 ml/min. Zbiera sie frakcje po 500 ml wycieku. iZnajdujaca sie w kolumnie-zywice jonowymienna przemywa sie woda d eluuje 3% chlorkiem amonu w 90% metanolu zbierajac frak¬ cje po 100 ml.Fraikcje laczy sie i wairtósc pH doprowadza do 7,2—8,0 rozcienczonym wodorotlenkiem sodowym, przy czym; absorbuje na 100 g anionowej, silnie zasadowej zywicy jonowymiennej, poiaiadaljacej podstawowa budowe podana wyzej (Dowex 1x2 cykl chlorkowy) z szybkoscia 14 ml/miri. Kolumne przemywa sie woda i eluuje 5*/» wodnym roz¬ tworem chlorku sodowego zbierajac fraikcje po 50 ml. Ijfralkicje te zajgeszcza sie nastejpniej rozciencza do objetosci 500 ml, doprowadza pH z wartosci 3,8 do 2 .rozcienczonym kwasem solnym, po "czym absorbuje na 25 ml kationowej, silnie kwasnej zy¬ wicy jonowymiennej typu sulfonowego, posiada¬ jacej podstawowa budowe styreno-dwuwinyloiben- zenowa sci 2,5 ml/minute.. Kolumne przemywa sie 25 ml wody, eluuje 54 ml 2*/o roztworu pirydyny, do cnwili gdy wyciek 10 15 25 35 40 45 50 55 60 z kolumny osiagnie wartosc pH = 7. Eluat dopro¬ wadza sie do pH = 8 rozcienczonym lugiem sodo¬ wym, zageszcza w prózni w celu usuniecia pirydy¬ ny i otrzyimuje sól sodowa kwasu 7yf?-/D-5-amino- -.5-ka!rboksywaleramido/-3-karlbamodlokJsymetylo-7- -metolksy-icefem-3-lkarboksylowego-4.Analiza elementarna dla Ciel^i^SÓgNa: obliczono: C 41,0 H 4,5 N 12,0 S 6,8% znaleziono: C 39,31 H 4,76 N 11,16 S 6,46% Przyklad II. Kwas 3-,karbaimoiloksymetylo-7- ^metoksy-7^/-fenyloacetaimido/-cefem-3-kairboksy- lowy-4.A. Ester dwubenzhydrylowy kwasu 7^-[/D-5'- -trójchloroe^oksykairbonyloamino-5'-kaffboksywale-' ryloZ-ifenyiloacetyloaminol-S-kanbamoilofesymetyló- ¦'. -7-metoksy-cefem-3-kaiiboksylowego-4.-Roztwór 9,3 g (10 milimoli) esitru dwubenznydry- lowego kwasu 7^-/D-5-trójdhloroetoklsykair(bonylo- amino-5-ka,itoksywaleraimido/-3-kai]^bam^^o^loksynxe- tylo-7-metokisy-cefem-3-kairboksylowego-4, 7,8 g (40 milimoli) N-trójmi&tyloisililoitaljimidu oraz 5,3r ml (40 milimoli) chlorku fenyloacetylu w 50 ml aceto- nitrylu ogrzewa sie w temperaturze 40°C w ciagu 20 godzin. Mieszanine oziebia sie do temperatury pokojowej, saczy, przesacz odparowuje do sucha, a pozostalosc uciera z heksanem.Nierozpuszczalna pozostalosc, zawierajaca ester dwubenzhydrylowy kwasu 7/?H[/D-5/^trójchloroeto- lksykarbonyloamdno-5'-,karboiksywalerylo/-fenylo- acetylaa(mino]-3-ka:r!banioiloiksynietylo-7-nietoksy- -eefem-3-karboikisylowego-4 stosuje sie bez oczysz¬ czania w nastepnym etapie.B. Ester benzhydrylowy kwasu 3-karbanioiloksy^ metylo-7-imetoksy-7^fenyloacetamiido-ceifem-3-kar- boksylowego-4. • Surowy produkt otrzymamy w etapie A roz,pusz¬ cza sie w mieszaninie 50 ml octanu etylu, 45 ml kwasu octowego oraz 5 ml wody. Do roztworu tego dodaje sie 20 g sproszkowanego cyniku i mie¬ sza w temperaturze pokojowej w ciagu 4 godzin.Nadmiar cynku odsacza sie a przesacz poddaje rozdzialowi miedzy octan etylu i wode, ... 4_ tWarrstwe organiczna przemywa, sie roztworem kwasnego weglanu sodowego i woda, suszy sie, od¬ parowuje rozpuszczalnik i otrzymuje surowy pro¬ dukt, 'który oczyszcza sie chromatograficznie na I kg zelu krzemionkowego, stosujac jako eluent mieszanine chloroformu, heksanu i metanolu w' stosunku 47:7:6, Otrzymany zwiazek posiada wlasnosci .fizykoche¬ miczne ojpisane w przykladzie I,'eta|p D.C. Kwas. 3-kairbamoil6klsymetylo-7-metoksy-7^- -fenyloacetamidoHoefem-3-kaTlboksylowyT4. Zwiazek ten otrzymuje sie w sposób podany w przykladzie I, etap E i posiada takie same wlasnosci fizyko¬ chemiczne, jak produkt opisany w przykladzie 1.Przyklad III. Kwas 3-lkairibamoilokisymetylo- -7-imetoksy-7^-/2-tienyloacetamido/-cefem-3^fcarbor. ksylowy-4.. - :• ¦ .". . • ,¦. - ., A, Ester dwuibenzhydrylowy kwasu 7^r{D-i6/-trój- chloroetolksykarbonyloaim!ino-5/-karboWsywaldBiryW- -2-tienyloacetamido]-3-karbamoilbksy©^tylOT^me- toksy-cetfem-3-karboksylowego-^.j;: "j -.-¦ ...•-¦:' Mieszanine 6 g (6,3 miliftiola) estriU dwufoenEhy-lr 111147 '% drylowego kwasu ^-[/D-5'-trójchloro loamino-5'-karibokisywaSreramid^ ^ metylo]-7-metokisy-ie€ifewi-3-ika^bdksya(we(go-4, 4^7. g (40 milimoli) N-iffójmetylosililoitrójfluoroaicetamidu, 3,42 ml (25 milimoli) dhloiiku ^^tienyloacetylu oraz 50 ml chloroformu ogrzewa sie w temperaturze 47°C w ciagu 16 godzin. Po usunieciu rozpulszczal- nika ptzez odparowanie, pozostalosc ekstrahuje sie heksanem i oczyszcza chromatoigraficzniie /na 1 kg zelu ^rzeimionkowego, stosujac jako eluen 10°/a oc¬ tanu etylu w ehlorofonmie.Widmo w nadfiolecie (CH^OH): Amax = 265 ^m, e 5810, NMR (rozpuszczailniJk ^CDC13): <5 = 3,53 (s, —OCH3), okolo 3,4 (d, 2—H2), 4,74 CH3CH2--0, s. 5,05 (s, 6—H), okolo 5,0 (Hfc—H2, czesciowo widocz¬ ny), 4,15 (;s, 13^H2).B. Eeter benzhydrylowy kwasu 3-karibamoiloiksy- irietyId- 7-metoksy-7^-/2-tienyloaoetamido/-cefem- -3-karboksylowegb-4. 4,2 g (3,8 milimola) estru dwubenzhydryloweigo kwasu 7/?i[/D-5/-trójchloroet<)lksy1kai1boinyloaiminiO-5/- -karboiksywalerylo/-:2-ttenyl.o^etam^^ mo^oksyra^ylo-7Hmetoksy-cefem-3-karboiksylow.e- go-4 w 30 ml octanu etylu dodaje sie do 30 ml 90% wódnejgo roztworu kwaisu octowego i 12 _g pylu cynkowego.Calosc miesza sie energicznie w ciagu 5 i 1/2 godziny w temperaturze pokojowej, oeteacza sie cynk, nadmiar kwasu octowego uisuwa przez prze¬ mycie woda i izoluje zadany zwiazek w ten spo¬ sób, jak podano w przykladzie I, etap E. Nia chro- matogramie cienkowarstwowym rozwijanym mie¬ szanina 7°/» metanolu w mieszaninie chloroformu i N-heksanu w stosunku 1:1, zwiazek ten daje jed¬ na plame. . ' .Widmo w podczerwieni wykazuje absorpcje (CHCI3) przy: 1740, 1800 cm-1.Widmo w nadfiolecie: Xmax = 263 ^um, e 5800; NMR (rozpuszczalnik —GDCI3): d = -3,45 (s, —OCH3), okolo 3,4 (d, 2—H2), 5,82 (is, 6—H), okolo 4,92 (10^H2, czesciowo widoczny), 3,85 (is, 13—H2).C. Kwas 3-kanbamoiloksymettylo-7-metoksy-7/?- -/2-tienyloaceta.m'ido-cefem-3-ka;ribolkisylowy-4.Zimny roztwór 1,36 g estru . benzhydrylowego kwasu 3-ka!rbaimoilolksyimetylo-7-metoksy-7^-/2-tie- nyiioacetaimido/-cefem-3-kaiibolksyloweigo-4 w 10,88 ml anizolu miesza sie z 5,44 ml kwasu trójfluoro- octowego w temperaturze 0°C w ciagu. 30 mi¬ nut.Zwiazki lotne usuwa sie .'w wysokiej prózrii, a produkt rekrystalizuje z octanem etylu. Tempera¬ tura topnienia 165—1'67°C. Widmo w nadfiolecie (w roztworze buforowym o pH = 7,0): Amax = 263 fum, s 8840. 236 ^m s 14000 [a]D = +199° c = 1, w. meta¬ nolu; NMR (rozpuszczalnik -^CD^CN +' D2iO): 6 = '3,48 (s, —OC1H3), okolo 3yl (2^H2, czesciowo wi¬ doczny), 5,05 (s, 6—HJ, 4,91 (d, 10— 13-^H2).Przyklad IV. Kwas 3-karb^moiloksyimetylo- r7/?-/2-iury1oacetamido/-7-inetoksy- ksylowy-4.A. Ester dwaiibenzlhydrylowy kwasu 7/^-{/D-5'- -trójchloroetofesykarbonyloamino-S^karboksywale- 10 15 20 25 30 35 40 45 6D 55 65 ryilo/-2-furyloaicetyloaniiino]-3-kai1bamoiiloksymety- lo-7-metoksy-cefem-3-karboiksylowego-4. ^ Mieszanine 9,3 g esitru dwubenzhydrylowego kwaisu 7^-/iD-5/-trójdhlaroetoksykanbonyloamiino-5/- -karboitosywaleramido/-34tairbamoiloksymetylo-7- -metolbsy-icefem-i3-kaTboiksylotweigo-4, 7 ml bis- -/trójmetylosililoMrójfluoroaicetamido, 4,7 mi chlorku 2-furyloaicetylu oraz 50 ml dwuchlorome- tanu ogrzewa sie w temperaturze 47°C w ciagu 16 godzin; Rozpuszczalnik usuwa sie przez odparowanie, pozostalosc ekstrahuje benzenem i otrzymany pro- * dukt stosuje sie bez oczyszczenia w nastepnym etapie. .^ ~NMR (rozpuszczalnik* —1CDCI3): S = 3,48 (s, —OCH3), 3,08 (d, 2-hH2), 4,6S (OCHzCCls, s), 5,02 (s, 6—H), okolo 4,88 (d, 10^H2) 3,72 (s, 13—H2); B. Ester benzhydrylowy kwasu 7^-/2-furyloace- tamido/-3- -3-ka;nbo,ksylowelgo-4.Ester dwuberizlhydirylowyj otrzymany w etapie A, poddaje sie reakcji z pylem cynkowym i kwa¬ sem octowym w sposób opisany w przykladzie III, etap B. Po krystalizacji z mieszaniny chloroformu i heksanu, czysty zwiazek posiada nastepujace wla¬ snosci fizykochemiczne: temperatura topnienia 168°-^17;l°C.Widmo w podczerwieni wykazuje absorpcje (CHCI3) przy: 1800 cm'1, 1720 om-1, 1700 cm"1.Widmo w nadfiolecie: ^max = 265 [tm, $ 7200; NMR (rozpuszczalnik ^CDgCN): <3 = L 3,43 (s, -^OCH3), 3,39 (2^-H2, czesciowo widoczny), 5,0 (s, 6^H), 4,75 (d, 10HH2), 3,.Q4 ,(s, 13—H2).C. Kwas 3-karbamoildksymetylo-7-metoksy-^- r/2-furyloacetamido/-cefem-3-lkarlboksylowy-4. 's Zwiazek ten wytwarza sie z produktu etapu B, w sposób opisany w przykladzie III, etap C. Po, re¬ krystalizacji z octanu etylu, zwiazek posiada tem¬ perature topnienia 156°—161°C.Widmo w nadfiolecie (roztwór buforowy opH 7): ^max = 265 jum, e 7200. Widmo w podczerwieni zgodne z budowa zwiazku. NMR (rozpuszczalnik —CD3CN + D^O): d = 3,44 (2r—H2, czesciowo widoczny), 5,02 (s, 6—H), 4,82 (d, 10—H2), 3y&6 (is, 13—H2).Przyklad V. Kwas S-kambamoiloksymetylo-?- -metotksy-7^-/tiofenoksyacetamido/-cefeim-3-karbo- kisylow^-4. ^ A. Ester dwubenzhydrylowy kwasu 7^-{/D-5-trój- chloroetdksyikaadbonyloamino-i5-karbo'ksywalerylo/- -tiofcnoksyacetatmido]-3-karbamoiloksymetylo-7- -metoksy-3-!karboksylowego-4.* W identyczny sposób jak"podano w przykladzie IV, etap A, zastepujac chlorek 2-furyloaioetylu równomolarna iloscia chlorku fenylotioacetylu, 0- trzymuje sie zwiazek podany w tytule.NMR (rozpuszczalnik ^GDCls): d = 3,33 (s, ^OCHs), okolo 3,23 (2—H2, czesciowo widoczny), 4,87 (O^CH2CCl3,), 5,0 (s, 6—H), 4,87 (u, 10—H2), 3,68 (s, 1.3—H2).B. Ester benzhydrylowy kwasu 3-karbaimoiloksy- metylo- 7-metoksy- 7rf-liofenoksyaoetamido-cefem- ¦L3-karbq'ksylowego-4. \ W sposób podany w przykladzie IV punkt B19 111147 20 stosujac ester dwubemzhydrylowy kwasu 7 /5-[D- -S-trójohloroeitoksyikarbonyloamtino-S-kairboIksyiwa- lerylo/-tioifendlksyac€tamido]-3-(kairibamoil6ksymety- lo-7-metoiksy-cefem-3-karboksylowego-4 zamiast e- stru dwuibenzlhydrylowego kwasu 7^-[/D-5'-trój- chloroetolksykaribanyloamino-t5'-karboksywalerylo/- -2-furyloacetamido]-3-lkairbamoil6ksym'etylo-7-me- toksy-cefem-3-ikaribok'syilowego-4 otrzymuje sie po chromatograficznym oczyszczeniu czysty zwiazek, który daje jedna plame «na chromatografie cien¬ kowarstwowym. Widmo w podczerwieni jest zgod¬ ne z budowa tego zwiazku.Widmo w nadfiolecie: ^max = 274 ^m, s 11350; NMR (rozpuszezalnilk ^CDC13): d ¦= 3,34 (s, -^OCH^), 3,24 (2—H2, czesciowo widoczny), 5,0 (s, 6^H), 4,08 (d, 10—H2), 3,68 (s, 13—Hfi).C. Kwas 3-,karbaimoilok!symetylo-7-metoksy-7/?- -tiofenoksyacetamido-cefem- 3-QcarbdksyIowy- 4. iPowyzszy zwiazek otrzymuje sie ze zwiazku o- trzymanego w punkcie B, w siposób (podany w przykladzie III, pun!kt C. Na chrornatogramie cien¬ kowarstwowym zwiazek wykazuje jedna plame.Temperatura topnienia Iil9°-^123°C, Widmo w nadfiolecie (roztwór buforowy o pH .= = 7): 4ax = 247 /«m, e 10400; NMR (rozpuszczal- nik —CD3CN + D20) S = 3,38 (s, —OCH3),, 3,34 (2—H2, czesciowo widoczny), 5,0 (s, 6—H), 4,82 (s, 10—H2), 3,71 (s, 13—H2).Przyklartf VI. Kwas 7^-/D,L-«-azydofeinylo- atcytylc^miflio/-i3-karbamoiloksyimetyIo-7-metoksy- -eefem-3-karbokisylowy-4*.A. Kwais 7/ff-/D-5-IIIrz.ibutoksylkairbGWiyloaimiino-5- -karboksywaleramidb/-3-ika;rtoaimoilokisymetylo-7- metoksy-cefem-3-kair1boiksylo.wy-4. 50 g kwasu i7^-/D-5-amino-5-!kaiiibo(ksywalerami- do/-3-karibaimoiilokisymetylo-7-metoiksy-cefem-3-!kar- boksylowego-4 rozpuszcza jsie w mieszaninie 1500 ml wodnego 5% roztworu fosforanu dwupotaso- wego i 1000 ml acetonu, przy czym doprowadza sie do wartosci pH = 9,5 przy uzyciu 2,5 n roz¬ tworu wodorotlenku sodowego. Do roztworu tego w trakcie mieszania dodaje sie 50 ml azydku IIIrz.-butoksykairbonylu utrzymujac mieszanine w ,pH = 9,5 w ciagu 20 godzin; Nastepriie mieszanine elkstrahuje sie octanem etylu i faze octanu etylu odrzuca, a faze wodna oziebia sie do temperatury 0°C, miesza z 1200 ml octanu etylu, zakwaisza do wartosci pH = 2,5 ste¬ zonym kwasem solnym, oddziela faze octanu ety¬ lu, suszy sie siarczanem sodowym i zageszcza w prózna. Otrzymuje sie pozostalosc, która mozna stosowac dalej bez koniecznosci oczyszczania.Widmo w podczerwieni wylkazuje absorpcje prz: 1790 cm"1 (^-laktam), oraz 1700 cm"4. Widmo w nadfiolecie (roztwór buforowy o pH = 7), ^max = = 263 ^m, e6820: NMR {rozpuszczalnik —£MSO, d«): <5 = 3,30 (s, ¦—OCH3). 3,42 <2^H2, czesciowo widoczny), 5—06'<(s, 6—H), 4,78 (d, 10—H), 1,38 (s, Illrzfbutyl).B. Ester dwulbenzhydrylowy kwasu 7/?/D-6-IIIrz.- -butoiksykarbonyloamino-S-ikarboiksywaleramido/- -3-ikarbamoilolksymetylo-7-imetok!sy-cefem-3-kartoo- ksylowefgo-4.Do roztworu 15 g kwasu 7y?-/D-5-butoksykarbony- loamino-5-karboksywaleramido/-3-.karbamoilóksy- metylo-7-metoiksy^cefem-3Hkarboksyloiwego-4 w 500 ml octanu etylu dodaje sie 5,5 g dwufenylodwu- azometanu w 70 ml estru. Mieszanine ogrzewa sie S do ternperatury 40°C w trakcie mieszania i po u- pfywie 30 minut dodaje sie 5,5 g dwufenylodwu- azometanu w 70 ml eteru.Po uplywie dalszych 3 godzin rozpuszczalnik u- suwa .sie w próani i zastepuje go mieszanina 500 \ !0 ml metanolu i 20 ml wody. Roztwór ten ekstrahu¬ je sie czterokrotnie heksanem i odparowuje w prózni. Pozostalosc rozpuszcza sie w octanie etylu, suszy sie siarczanem sodowym, odparowuje w prózni i otrzymuje zwiazek wymieniony w tytule, 15 iktóry stosuje .sie w nastepnym etapie bez oczysz¬ czania.NMR (rozpuszczalnik —CDCI3), d = 3,60 (s, -^OCHs), 3,4 i(2—H2, czesciowo widoczny), 5,10 (s, 6—H), 4,95 (10r-H, czesciowo widoczny). 20 C. Ester dwulbenzhydrylowy kwaisu 7^-{D-5'- -IIIrz.-buto1l^yka.rfbonyloaimino-5/-karlboksywalery- lo/-D-L-«-azydofenyloacetyloatmLno]-3-lkairfbamoilo- ksymetylo-7-metoksy-ceifem-3Hkaiiiboksylowego-4.Mieszanine 10,3 g estru dwubenhydrylowego 25 kwasu 7^-/D-5'-IIIrz.-ibutolksylkaTlbanylaaimiiio-5'- -tkarboksywaleramido/-3-karbamoiloikisymetylo-7- -imetokisy-cefem-3-karboksylowego-4, 100 ml chlo¬ roformu, 16,2 g bis/-trójmetylosililo/-trójfluoroace- tamldu oraz chlorku. D,L-«-azydofenyloacetylu 0- 30 grzewa sie' w temperaturze 45°C w ciagu 16 go¬ dzin.Mieszanine rozciencza sie 300 ml chloroformu, przemywa z r2*/§ wodnym roztworem kwasnego weglanu " sodowego oraz nasyconym roztworem 35 chlorku sodowego, isuszy sie siarczanem sodowym, odparowuje sie i otrzymuje oleista pozostalosc, która oczyszcza sie przez wytracenie z roztworu chloroformowego przy uzyciu heksanu. Otrzymany jasnozólty zwiazeik uzywa sie w nastepnym etapie 40 bez oczyszczania.Widmo w podczerwieni wykazuje absorpcje przy: 1790 (^-laktam), 1735, 2100 (^N3); NlMR (rozpusz czailnik —GDCI3):. <5 = 3,70 (s, OCH3), 3,2 (2—H2, czesciowo widoczny). 45 D. Kwas 7^-/DvL-a-azydofenyloacetamido/-3-kar- bamoiloksymetylo-7-meto.ksy-icefem-3-k.airib6ksylo- lowy-4. _ Roztwór 13 g estru dwubenzhydrylowego kwasu 7^-[/D-5'-IlIrz.-butoksylkaribonyloamiino-5'-karlbo|k- 50 sywalerylo/-D,a-€t-azydofenyiloacetyloamino]-3-kar- bamoiloksymetylo-7 nmetoiksy^cefem^34carboksylo- wego-4 w 13 ml anizoiu wylewa sie do 65 ml kwasu trójfluorooctoweigo, oziebionego do tempe¬ ratury 0°C. Po uplywie 5 minut roztwór ten wy- 55 lewa sie do 1800 ml, oziebionego do temperatury 0°C eteru, w trakcie mieszania, Utworzyony osad oddziela sie i poddaje roz¬ dzialowi miedzy 10*/o wodny roztwór fosforanu dwusodowego i octan etylu. Faze octanu etylu od-. 00 rzuca sie, zas faze wodna podwarstwiia octanem etyki iw trakcie mieszania doprowadza w niskiej temperaturze do wartosci pH = 2 przy uzyciu 60% wodnego roztworu kwasu fosforowego.Warstwe octanu etylu oddziela «i^, jprzemywa 05 nasyconym wodnym roztworem chlorku sodowego,111 147 21 22 suszy sie siarczanem sodowym, usuwa rozpusz¬ czalniki w prózni i otrzymuje sie zwiazek wy¬ mieniony w tytule.Widmo w nadfiolecie, (w roztworze buforowym o pH = 7): 2max = 264 ~pm, 231 /im? e 7'53 oraz 13567.Widmo w podczerwieni wykazuje absorpcje przy: 1760 i(/?-lalktam), 1705, 2lU5 cm"1 MNT3), NMR (roz¬ puszczalnik —CD3ON): S = 3,36 (s, —OCH3), 3,50 (s, —OCH3), 3,40 (2—H2, czesciowo widoczny), 5,06 (s, 6—H), 4,86 (s, 10^H), 5V15 .(s, 13^H).Przyklad VII. Kwas 7e/-D,L-a-aminofenylo- acetyloamido/-3-!karibaimoiiloksymetylo-7-metoksy- -cefem-3-ka;rboksylowy-4.Zawieisine 1 g kwasu 7i^-/!D,L-«-azydofenyloace- taimido/-3-ikairlbamoUdksyimetylo-7-meto!kisy-cefem- -3-karboksylowego-4 w 10 ml kwasu octowego i 90 ml wody w temperaturze 0°C miesza sie z 5„ g pylu cynkowego w ciagu 10 minut, po czym saczy sie.Przesacz wysyca sie siarkowodorem, saczy sie, przesacz liofilizuje otrzymujac biala pozostalosc, która przemywa isie eterem, suszy sie w prózni i otrzymuje zwiazek wymieniony w tytule w po¬ staci bialego proszku.Widmo w nadfiolecie (roztwór buforowy o pH = = 7): Amax = 264 pm, E 6525. Widmo w podczer¬ wieni wskazuje albsorpfcje przy: 1770 (^-laktam), oraz 2650 i 1550 cm-1 '(HNa*); NMR (rozpuszczal¬ nik —D20 + HC1O3—): 6 = 3,78 (s, OCH3), 3,84 (s, OCH3), 3,90 <2—H2, czesciowo widoczny).Przykl ad VIII. Kwas aeetdksymetylo-7^-/2- -tienyloacetamido/Acefem-3-ikarboksylowy-4.A. Kwais 7^-/iD-5-trójclhloroeitolk!syka!i1banyloami- no-5-kaiiboiksyiwaleramido/-3-aiceitylometylo-cefeim- -3-karibdksylowy-4.Do roztworu 2,5 g (0,53 mola) 'kwasu 7^-/D-5- -amino-5-karboksywaleramido-/-S-acetdkisymetylo- -cefem-)3-,karbolkisylowego-4 w 13 ml acetonu i 40 ml wodnego 10*/o roztworu fosforanu dwupotaso- wago dodaje sie kroplami 3,35 g (0,159 mola) chlor¬ ku trójchloroetylolkaribonylu. W czasie dodawania wartosci pH roztworu utrzymuje sie w granicach 8,5—9,0 przez stopniowe dodawanie 17°/« wodnego roztworu wodorotlenku 'sodowego.Po 30 'minutach mieszanine przemywa sie octa¬ nem etylu, warstwe wodna zakwasza do pH = 2,5 stezonym kwasem solnym, powstaly osad ekstra¬ huje sie octanem etylu, roztwór suszy sie siarcza¬ nem sodowym, saczy i po usunieciu rozpuszczal¬ nika otrzymuje sie 2,7 g zwiazku 'wymienionego w tytule.B. Ester dwubenzhydryilowy Ikwasu 7-/D-5^trój- chloroetolksykaiibonyloamino-S-karbdkisywaileraimi- do/-3-acetofesymetylo--cefem-3-karlboiksylowego-4.Do roztworu kwasu 7^-/ID-5-trójchloroeJ;okisyikar- bonyloamino-5-kartooiks3rwalera1miido/-3-acetyIoaimi- do-cefe!m-3-karibolksylowego-4 w 30 ml octanu ety¬ lu dodaije sie 2 g dwuifenylodwUazometamu w 25 ml eteru, miesza przez noc, usuwa sie rozpusz- czalniik i otrzymuje 4 g surowego zwiazlku.Zwiazek oczyszcza sie cnromatogiraificznie na ze¬ lu krzemionkowym stosujac chloroform jaiko e- 10 15 luent i otrzymuje 2,3 g czystego zwiazku wymie¬ nionego w tytule.NMR (rozpuszczalnik —dPCa3): 8 = 2,0 (s, metyl), 4,9 (kwartet, 10-hH2), 3,2 (kwartet, N2^H2), 4,95 (d, 5 6^H), 5,92 (7^H), 7,0 (2s, protony benzhydrylowe).C. Ester dwuibenzhydrylowy kwasu 7-/?{/D-5-trój- chloroetoksykanbonyloamino-S-ikarookisywalerylo/- -2-tuenyloacetyiloa!mino]-3-ace(toik!symeitylo-tcefem-3- '-lkarboksylowego-4.'Mieszanine 2 g (0,02 mola) zwiazlku otrzymanego w punlkcie B, 1,65 g (0;09 mola) N-trójmetylosililo- -trójfluoroacetamidu, 1,31 g (0,0815 imola) chlorku 2-tienyloacetylu oraz 6 ml chlorku metylenu ogrze¬ wa sie w temperaturze 40°C—45°C na lazni ole¬ jowej w atmosferze azotu w ciagu 20 godzin..Mieszanine reakcyjna wylewa sie do 100 ml hek¬ sanu, saczy sie przez ziemie okrzemkowa, usuwa sie rozpuszczalnik w prózini i otrzymuje sie zwia¬ zek wymieniony w tytule. 20 D. Ester benzhydrylowy kwasu 3-aceito(ksymety- lo-7-/2-tienyloaoetamido/-cefem-3-kar(boksylowego- -4.Zwiazek otrzymany w ipunikcie C rozpuszcza sie 25 w 10 ml octanu etylu, dodaje sie do 10 nil 90Vo wodnego roztworu 'kwasu octowego i 1,0 Ig cynku miesza isie 2 godziny w temperaturze pokojowej i saczy. Przesacz przemywa sie dwiema porcjami wody, zimnym roztworem kwasnelgo weglanu so- 30 dowego, oraz 15 ml nasyconego roztworu chlorku sodowego. .Roztwór w <3©i^&ie etylu suszy sie siarczanem sodowym, saczy fie^usuwa 'rozpuszczalnik i otrzy¬ muje 1,9 g surcWfgo zwAa^fku, który poddaije sie 35 chromatografii^li4 ielu krzemionkowym eluujac mieszanine cftiisliy^mu i octanu etylu, w stosun¬ ku 50:1.Otrzymuje sig<'4,3£0 g zwiazku, który po rekry¬ stalizacji z octanu etylu posiada tem|peraiturexto.p- 40 mienia 141,50^143°C.Widmo w nadfiolecie. (CH3OH: Amax = 263 \xm; s 7580. Analiza elementarna dla C^gl^e^^e^ "obliczono: C 61,91; H 4,66; N 4,9«Vo znaleziono: C 62,14; H 4,84; N 4,91*/t E. Kwas 3-/aicetoksymetylo/-7-/2-tienyloaeetanii- do/-icefem-3-kado!ksylowy-4.Oziebiony roztwór 100 mg zwiazku otrzymanego w punkcie D w 1 ml anizolu i 0,5 ml kwasu 5a trójifluorooctowego miesza sie w temperaturze 0°C w ciagu 35 minut. Nastepnie oddaje sie 50 ml czterochlorku wejgla i calosc odparowuje sie do sucha.Pozostalosc uciera sie z heksanem, dekantuje 55 rozpuszczalnik i pozostalosc rozpuszcza sie w 10 ml octanu etylu. Roztwór ten zageszcza do obje¬ tosci 1 ml, dodaje eteru, wytracony osad oddziela sie i refcrystalizuje z mieszaniny eteru oraz octa¬ nu etylu uzyskujac 0,025 g zwiazku wymienione- 60 go w tytule o temperaturze topnienia |163°C.Przyklad IX. Kwas 7-/trójfiiuoroaceityilo/ami- no-3-ikarbamoiloiksymetylo-7^metolksyHcefem-3-ikar- boksylowy-4.A. Eter dwuibenzhydrylowy kwasu 7-CN-trójfluo- 65 roacetylo-ClS^/itrójcihloróetoksyikarboinyloaimino-S'- 45m ul 23 24 -fearboksy/iwaleramidol-iS-ikarbaimoiiloiksymetylo-?- -metofcsy-ce£em-3-karbdksylowego-4.Mieszanine estru dwubenzhydrylowego kwasu 7- -/D-S^trójchloroetdksyikairbonyloaimino-S^kartooksy- -waleramido/-5-ka^bamyloiksymetylo-7-mietoksy-1ce- fem-3-karibokisylowego-4/ (2 g; 2,1 mmola), chlor¬ ku trójfluoroacetylu (4,0 g, 30,0- mimoli), chlorku metylenu (10 ml), N-trójnietylosililo amidu kwa¬ su trójfluoirooctowego (5 ml; 32 mmola) umieszcza sie w ampulce, zatapia i pozostawia w tempera¬ turze pokojowej przez 21 godzin. Po tym czasie lotne produkty usuwa sie pod zmniejszonym cis¬ nieniem otrzymujac 6,5 g surowego materialu.W ten sposób uzyskany produkt—ester dwubenz- hydrylowy kwasu T-EN-tirójiluoroacotylo-ieS^/tirój- chloiroe^oIksy-karbanyloairnino-^-kairboiksy/walera- midoJ-S-kanbamyloiksymetylo-T-metolksy-cefem-S- -kariboksylowego-4 stosuje sie bezposrednio w na¬ stepnym etapie.B. Ester benzhydrylowy kwasu 7-/trójfluoiroaiCe- tyloaminb/-3-kanbamyloiksy!metylo-7-nieitoksy-ice- fem-3-karboksylowego-4.Roztwór imddu uzyskanego wedlug produktu A, (6,5 g) w [bezwodnym aoetonitirylu' (40 ml) miesza sie przez i godzine z aktywowanym pylem cyn¬ kowym "(10 g) i kwasem octowym (2,0 ml). Otrzy¬ mana mieszanine saczy .sie, a cynkowy osad prze¬ mywa chlorkiem metylenu. Przesacz zateza sie do sucha ,po czym podaje sie na kolumne chromato¬ graficzna z zelem kraemionflegNl^m (60 g) i wy¬ mywa mieszanina chloroform\P^;1Sekisan — meta¬ nol (50:50:2) uzyskujac zwia;i^'wy«iien»iotty w ty¬ tule IR: 1800, 1750 (CH2GI2). '*}'¦"-'¦ NMR potwierdza strukture, zwiazku.C. Kwas 7-/trójfluoroacety1ftfaii^ loksymetylo-7-:metok:sy-ceifem^3-!!^^ Ochlodzony roztwór (0—4°€f) dioksanu (0,04 ml), chlorku metylenu (0,27 ml) j kwaisu trójfluorooc- towego (0,27 ml dodaje sie do ochlodzonego roz¬ tworu (0—4°C) anizolu (Ojlfl ml), chlorku metyle¬ nu (0,52 "bil) i produktu z punktu B (100 mg).Reakcje.przeprowadza sie w temperaturze 0—4°C przez 40 minut. Po tym czasie reakcje przerywa sie dajac 1 ml dioksanu i 10 ml czterochlorku wegla, a nastepnie zateza do suchej pozostalosci.Pozostalosc rozciera sie z heksanem uzyskujac zwia¬ zek, wymieniony w tytule. IR 1800, 1740 (CHaCN).NMR; potwierdza strukture zwiazku.- Przyklad X. Kwas benzhydrylo-S-kairlbamy- lo'ksymetylo-7-im'etolksy-7-trójito fem-3-karlboksylowy-4.; Mieszanina estru dwubenzhydrylowego kwaisu Ifi- -B-5'-trójciMoroetoksykartoonylc^ sywaleramido/-3-karfoamyIctay^ -cefem-3-'karlboksyloiWego-4 (5. g), ;bezwodnika kwa¬ su trójfluorooctowego (1,4 ml) trójmetyloisililo ami¬ du kwasu octowego (i2,25 g) i chlorku metylenu (20 ml) ogrzewa sie w temperaturze 40°C przez 3, godziny.Mieszanine wlewa sie do heksanu, a osad roz¬ puszcza w acetonitrylu. Do tego roztworu dodaje sie kwasu octowego (4 ml) i pylu cynkowego (25 g), a nastepnie mieszanine wytrzasa sie przez 3 godziny. Po przesaczeniu usuwa sie rozpuszczailnik, 15 20 a pozostalosc podaje na kolumne chromatograficz¬ na z zelem krzemionkowym (100 g) stosujac do wymywania mieszainine benzenu i octanu etylu.Zwiazek wymieniony w tytule daje spodziewane 5 widmoj NMR.Przyklad XI. Kwas 3-karbaimyloksymetylo-7- -metok;sy-7/?-/2-tienylc^cetamido/jceifam-3-kai1bok- sylowy-4.A. Ester dwu/metoksyimetylowy/kwaisu 3-karba- 10 myloksymetylo/-7-imetoksy-7^-/iD-5-trójchloroetok- syikairbonyloanfuno-5/-/-karibokBy^aleraim;ido/-iceifiem* -3-kariboksylowego-4.Do ochlodzonej zawiesiny soli dwu/icykloheksy- loaminy/ i kwasu 3-ka:rlbylmylo'ksymetylo-7-metok- sy-7/2-tienyloaceta'mido/-cefem-3-karbo!kisylowego- -4 (9,85 g) w chlorku metylenu (osuiszomyim na si- tacie monekulairnym, 170 ml) dodaje sie w 0°C kroplami przez '60 minut przy ciaglym mieszaniu, roztwór chlorometylometylowiego eteru (lj60 g) w 50 ml chlorku metylenu. Po dodaniu mieszanine .miesza sie jprzez 2 godziny w 0°C.Nastepnie mieszanine saczy sie przez zloze celitu i zloze przemywa chlorkiem metylenu (3X30 ml).Przesacze odparowuje sie do suchej pozostalosci pod umniejszonym cisnieniem w temperaturze 5— 10°C, a pozostalosc wytrzasa z 200 ml chlorku metylenu i 100 mi, wody z lodem.Oddziela sie warstwe organiczna, przemywa 200 30 ml wody z lodem, zimnym 0,l°/o NaHC03 (200 ml) woda (200 ml) i 50 ml wodnym roztworem NaCl oraz suszy sie nad siarczanerrt. magnezu. Po odsa¬ czeniu suszacego czynnika, rpzusizczalnik usuwa sie pod zmniejszonym cisnieniem uzyskujac 6—25 35 g produktu w postaci szkliwa, ', B. Ester dwu/metoteymetylowy/ kwastr 3-kariba- myloksymetylo-7-metoksy-7?y-i|P-5'-trójchloroetoik- sykanbonyloaimino-5'-ka[rlboiksywalery1o/-tienylbace- tyloamino]-icefem-3-lkarib^ksylbwego-4. 40 Do roztworu 10 g estru dwu/metoksymetylowego/ kwasu 3-kar(bamylofcsymetylo-7-metok!sy»-7^-/D-5- -trójchloroetoksykailbonyloamino^ leramido/-cefem-3-karlboikisylowrelgo-4 w 80 ml su¬ szonego na sitach''dhlorku metylenu, dodaje sie 45 «-pinenu (13,5 ml), N-tróimetylosililo uretainu ety¬ lowego (12,1 mli chlorku 2-tienyloacetylu (7,0 ml).Roztwór lagodnie ogrzewa sie pod chlodnica zwrotna w temperaturze 50°C na lazni olejowej w atmosferze suchego azotu przez 17 'godzin. 50 Nastepnie roztwór ochladza sie do temperatury pokojowej i dodaje 500 ml wodnego roztworu za¬ wierajacego 10% chlorku sodowego i 2,5*/o kwas¬ nego weglanu sodu, nastepnie dodaje sie metanolu (30 ml) i miesza energicznie przez 15 minut w 55 temperaturze otoczenia. Nastepnik! oddziela sie wanstwy, wodna warstwe ponownie, przemywa sie chlorkiem metylenu (20 ml), i polaczone warstwy Chlorku metylenu przemywa sie nasyconym wod¬ nym roztworem chlorku sadowego (30 ml), roz- 60 twór chilorku sodowego ponownie przemywa sie chlorkiem metylenu (30 ml) i polaczone roztwory chlorku metylenu' suszy nad siarczanem magne¬ zu, filtruje, a osad przemywa chlorkiem metylenu o objetosci 2-*& razy- wieleszej od objetosci placka 65 filtracyjnego,111147 25 26 Polaczone roztwory chlorku metylenu i chlorek metylenu z przemywania zateza sie pod zmniej¬ szonym cisnieniem do 50 iml, dhlodzi sie wkrapla- jac do energicznie mieszanego haksanu z lodem (500 ml) i po 15 minutach osiadania dekantuje sie warstwe iheksanówa znad gumowatego ciala .sta¬ lego i filtruje przez zloze eelitu. Gumowata sub¬ stancje i zloze celitowe przemywa sie okolo 50 ml heksanu, nastepnie zloze celitowe jprzemywa sie 50 ml chlorku metylenu i tego chlorku metylenu uzywa sie do rozpuszczenia gumowatej substan- icji. Roztwór chlorku metylenu ponownie wytraca isie heksanem.Powstaly produkt—ester dwiu/metoksymetylowy/ kwasu 3Hkar!baimyloksymetylo-7-metoksy-7/?-,[D-5'- -trójchloroetoksyikartbo-nyloamino-S^kairboksywale- rylo/-tienyloaicetyiloaimino]-cefem-3-lkar]boksylowe- go-4 rozpuszcza sie w 230 ml octanu etylu i sto¬ suje w inasitepnym etapie.G. Ester dwu/metoksymetyIowy/ kwasu 3-karby.- myloksymetylo-7Hmetoksy-7^-/2Htienyloacetaniido/- -cefem-3-ka.nboksylowego-4.Roztwór w octanie etylu umieszcza sie w 500 ml trójszyjnej kolbie zaopatrzonej w termometr, me¬ chaniczne mieszadlo i doprowadzenie azotu. Do roztworu dodaje sie pyl cynkowy (50,6 g), miesza sie i dodaje 11,5 ml lodowatego kwaisu octowego.Po zmieszaniu tych wszystkich skladników reak¬ cje przeprowadza sie w temperaturze 25°C, w at¬ mosferze azotu przez 1 godzine. Nastepnie odsa¬ cza sie cynk i przemywa octanem etylu i(2'X 75 ml).Przesacz przemywa sie 2X150 .ml wody i raz zimnym 2.5% kwasnym weglanem sodu (150 ml) a nastepnie 100 mil nasyconego roztworu^ ohlonku so¬ dowego. Roztwór -octanu etylu suszy sie nad siar¬ czanem sodowym, saczy sie i zateza do uzyskania produktu o konsystencji gumy.Chlodzona (0—4°Q kolumne z plaszczem (2,5 cm wewnetrznej srednicy) najpelnia sie zawiesina 64 g zelu krzemionkowego (60—200 mesh) w chlorku metylenu i(200 ml). Zel krzemionkowy osadza sie, a nadmiar chlorjku imetylenu odparowuje sie tak, aby jego poziom osiagnal poziom zloza. Na te ko¬ lumne podaje sie 6,4 g pozostalosci w minimalnej ilosci" ehlorku metylenu j(5—10 ml), kolbe i sciany kolumny przemywa sie chlorkiem imetylenu (1.0 ml), a nastepnie kolumne wymywa sie 2 litralmi 40l°/o roztworu octanu etylu w benzenie, pobiera¬ jac 60 ml frakcje.Frakcje zateza sie do suchej pozostalosci. Frak¬ cje 10—18 zawierajace wlasoiwy produkt odparo¬ wuje jsie do uzyiskainia 2,9 g estru.- dwu/metoksy- metylowego/ kwasu 3-lkairbamylolksymetylo-7-me- to!ksy-7^-/2-tienyloacetamido/-cefem-3-kariboksylo- weigo-4.^ Otrzymany produkt (2,64 g) rozpuszcza sie w chlorku- metylenu (150 ml) i saczy sie. Do tego roztworu dodaje sie etanolu (20 ml) i zateza w temperaturze pokojowej na wyparce obrotowej do objetosci okolo 20 ml. Do tej objetosci dodaje sie 20 ml etanolu i zateza do okolo 30 ml. Roztwór za¬ szczepia sie i pozostawia do wykrystalizowania u- : zyskujac 2,1 g czystego estru. Temperatura .topr nienia 151^153°C. 10 15 D. Kwas 3-kairbamyloksymetylo-7-metoksy-7^-/2- -tienyloacetamido/-cefe:m-3^kairbdksylowy-4.Zawiesine metoksymetyloweigo estru i(920 mg) w 9,2 ml metanolu (zawierajacym ,10*/g istezonelgo HC1) miesza sie w temperaturze pokojowej przez 50 minut. Calkowity przebieg reakcji stwierdza sie na drodze analizy chromatograficznej stosujac oc¬ tan etylu/benzen w stosunku 6:4.Nastepnie ostroznie dodaje sie roztworu 1,65 g NaHC03 w 40 ml wody i klarowny roztwór za¬ teza do objetosci 30—35 ml w temperaturze poko-' jowej pod zmniejszonym cisnieniem. Wodny roz¬ twór ekstrahuje sie octanem etylu do usuniecia obojetnych zanieczyszczen i odrzuca organiczna warstwe'. ' Wodna warstwe ochladza sie do temperatury 0—5°C, dodaje octanu etylu (40 ml) i doprowadza pH do wartosci 1,8 za pomoca zimnego, Ifl*/* HC1 przy ciaglym .mieszaniu. Warstwy oddziela sie, a warstwe octanu etylu przemywa 3X3 ml wody z lodem. Warstwe wodna i wode z przemywania la¬ czy sie i ponownie ekstrahuje 2X20 ml octanu e- tylu. Drugi ekstrakt octanu etylu dwukrotnie prze¬ mywa sie zimna woda i dodaje ja do pierwszego ekstraktu. Odparowywuje sie rozpuszczalnik do suchej pozostalosci, plucze 10 ml mieszaniny ben- zen-imetanol (8:2) i suszy do stalej masy. Rekry- stalizuje sie surowy produkt, z 'mieszaniny meta¬ nol/octan etylu uzyskujac kwas 3-karbamyIo;ksy- metylo-7-:metoksy-7^-/2-tienyl6acetamido/-cefem-3- -karbokisylowy-4.Przyklad XII. Kwas 3-karbamylo(ksymetylo- - 7-metoksy -7/?-72-tienyloacetamido/cefem- 3-karbo- ksylowy-4.A. Kwas 3-karbamyloksymetylo-7-metoksy-7^- -[D-5-/2nnitrofenyloisulfenyiloamiino/^5-karboksywa- leramido]Hcefem-3-karboksylowy-4. ^ednosodowa sól kwasu 3-kairbamylolksymetylo- -7-,metoksy-7^-/D-5'-a!mino-5'-karlbolksywalera.mi- do/-cefem-3-kariboksylowago-4 (0,37 g) rozpuszcza sie w 15 ml wody. Nastepnie dodaje sie dioksan (30 ml) i doprowadza pH do wartosci 8,5—9,0 za pomoca wodorotlenku sodu. Dodaje sie chlorku 2- -initrofenylosulfenylowego (0,55 g) i przez 20- minut przeprowadza reakcje z wodnym roztworem wodo¬ rotlenku sodowego utrzymujac pH w granicach 8,5—9,0. Po mieszaniu reagentów dodatkowo przez 30 minut, dodaje sie 45 ml wody, mieszanine saczy sie a przesacz ekstrahuje 25 ml octanu etylu.Wodna warstwe ochladza sie do 0—5°C, zakwa¬ sza stezonym kwasem solnym i produkt ekstrahuje octanem etylu. Warstwe octanu etylu przemywa sie woda, suszy nad siarczanem sodowym, saczy sie a zateza otrzymujac zwiazek wymieniony w tytule w ilosci 0,60 g.B. Sól bis-dwucykloheiksyloaiminy i kwasu 3-kar- bamyloksymetylo-7^-[D-5-/2^-nitrofenylosulfenylo- a'mino/-5-karboksywaileramido]-cefem-3-karbóksy- 60 lowego-4.Kwas 3-karbamyloksymetylo-7-metoksy-7/?-[D-5- -/2-nitroienylosulfanyloamino/-5-karboksywalera- mido]-ce£em-3-karboksylowy-4 (0,55 g) rozpuszcza s'ie w 25 ml octanu etylu, saczy sie i przesacz pod- 65 daje dzialaniu przez 15 minut soli dwucyklohefesy- B0 25 30 35 40 45 50 55111147 27 28 loaminy i kwasu octowego (0,675 g) rozpuszczonej w 100 ml octanu etylu. Osady laczy sie na lejku, przemywa 10 ml octanu etylu, nastepnie 2X10 ml estru izopropylowego i suszy sie pod zmniejszo¬ nym cisnieniem uzyskujac 0,38 g zwiazku wymie¬ nionego w tytule.C. Ester dwu-metolksyrnetylowy kwasu 3-ikarba- 1myldkisymetylo-7^-.[D-5-/2-nitrofenyl.oisuifienyloami- noZ-S-kanbokisywaleramidol-cefem-S-karboksylowe- go-4.Do roztworu 0,25 g soli bis-dwucykloheksyloaini- ny w 5 ml chlorku metylenu w atmosferze azotu dodaje sie 0,045 ml eteru chloro'metylometylowego w 1,5 ml chlorku metylenu ii przez 15 minut tem¬ perature doprowadza sie do 5°C. Po 4 godzinach przebiegu reakcji w temperaturze 0—5°C reagenty saczy sie i przesacz przemywa 2 ,ml wody zawiera¬ jacej 25 mg kwaisnego weglanu sodu.Warstwe chlorku metylenu suszy isie nad siar¬ czanem sodowym, saczy sie i zateza do uzyskania 0,155 g surowego produktu. Surowy dwuester roz¬ puszcza sie- w 0,5 iml mieszaniny octanu etylu z benzenem (1:1) i podaje na chromatoigrafii na 0,75 g zelu krzemionkowego stosujac te sama miesza¬ nine rozpuszczalników i uzyskujac 0,114 g zwiaz¬ ku wymienionego w tytule.IX. Ester dwu-metdKsymetylowy kwasu 3-kairba- myloksymetytlo-7^-[D-5-/2-nitrofenylosulfenyloami- no/-5-karboiksywalerylo-/2-tienyloaceitylo/am'iino]- -cefem-3-karboksylowego-4» . Do. roztworu estru dwu-metoksymetylowego kwasu 3-kanbamylolksymetylo-7^-[D-5-/2-nitrofeny- losulfenyloaimino/-5-!kanbolksywaleramido]-icef.em-3- -kar;boksyloweigo-4 (0,345 (wolnego ad alkoholu) dodaije sie 0,477 ml pienu, 0,430 ml N-trójmetylosilylo-uretanu •etylenowego i 0,248 nil chlorku tienyloacetylowego i mieszanine miesza w (temperaturze pokojowej przez 23 go¬ dziny.Mieszanine reakcyjna dodaije sie do 50 ml heksa¬ nu w celu wytracenia osadu. Heksan dekamtuje sie, a osad przemywa 10 ml heksanu, a nastepnie rozpuszcza w ,10 iml • suchego chlorku metylenu i ponownie wytraca przez dodanie do 50 ml heksa- . nu w celu uzyskania surowego produktu (0,252 g).Surowy produkt poddaje sie chromatografii na kolumnie z 2,5 g zelu krzemionkowego stosujac mieszanine octanu etylu z benzenem (1:1) i uzy¬ skujac 0,106 ig wymienianego w tytule zwiazku.E. Kwas 3-karbamyloksymetylo-7-metoksy-7^-/2- -1ienyloacetaimido/-ioefiem-3-karbolksylowy-4.Do roztworu 10 img dwuimetoksyimetylowego e- stru otrzymanego wedlug punktu D w 0^15 meta¬ nolu dodaje sie t0,05 ml kwasu octowego i 10 mg tiacetamidu otrzymujac ipo 5 minutach metoksy- metylowy ester. Gdy czas reakcji przeciagnie sie do 30 minut uzyskuje sie zwiazek wymieniony w tytule na skutek przegrupowania estru metoksy- metylowego.Innymi czynnikami prócz tioacetamidu, które moga odszczepic grupe nitrofenylosulfenylowa sa: tiomocznik, kwas siarkawy, tiouretain, tiosiarczan sodowy, tiofenol, kwas itaoglikolQw& siarkowodór 10 13 20 23 30 35 40 45 50 55 80 65 i tiocyjanian amonu i moga one byc stosowane za¬ miast tioacetamidu.P r z y k l a d XIII. Kwas 3-karbamyloksymetylo- -7-mefto1ksy^7^-/2-tienyloacietamLdo/-cefem-3-karbo- ksylowy-4.Jesli chlorek 2,4-dwundtrofenylosulfenylowy za¬ stosuje sie zamiast chlorku 2-nitrafenylosulfeny- lowego jak w przykladzie XII A, a pozostale stop¬ nie przeprowadzi sie tak jak w przykladnie XII B, C, D, E, uzyska sie taki sam produkt. W takim przypadku procesy te beda przebiegaly nastepuja¬ co: Do1 roztworu 4,41 g jedmosodowej soli 'kwasu 3- -kairbamyloksyn1etylo-7-,meitoksy-7^-/D-5/-aimirio- -5/-ikarboksywaleramido/-cefem-i3-kairibo'ksylowelgo- -4 w 106 nil wody i 244 ml dioklsanu dodaje sie 8,4 ig chlorku 2,4-dwuinitroifenylasulfenylowego przy pH doprowadzonym do a,5^9,Q przez dodatek wo¬ dorotlenku sodowego. Po jednej godzinie miesza¬ nine reakcyjna iroizciencza sie 350 ml wody, saczy sie, a przesacz ekstrahuje 2'XH75 ml octanu ety¬ lu.Warstwe wodna ochladza sie do 0—5°C, dodaje 175 ml octanu etylu i doprowadza pH do wartosci 2,2 za pomoca stezonego HC1. Warstwe octanu ety¬ lu przemywa sie woda, su^zy nad siarczanem so¬ dowym, .saczy sie i zateza pod zmniejszonym cis¬ nieniem .do otrzymania 8,5,2 g produktu.Na 8,5 g zwiazku N-/2,4-dwunitrofenylosulfenylo- wego w 195 ml octanu etylu dziala sie 6,8 g octa¬ nu dwucykloneksyloaminy w 700 ml octanu ety¬ lu. Po 45 minutach zjbiera sie wytworzona sól i przemywa 100 ml octanu etylu, a nastepnie 3X20 mi eteru izopropylowego. Po wysuszeniu pod zmniejszonym cisnieniem produkt wazy 8,7 g.Na zawiesine 8,0 g soli lN-/i2,4-dwunitrotfenylosul- fenylo/-dwucykloheksyloaminy w 128 ml chlorku metylenu dziala sie w temperaturze 0°C 1,5 ml e- teru chloroimetylometylowego w 51 ml chlorku metylenu przez 25 minut. Po 2 godzinach miesza¬ nine reakcyjna saczy sie, a przesacz przemywa 200 ml wody z lcdem, 200 ml zimnego, nasyconego roz¬ tworu kwasnego weglanu sodu, 2X200 ml wody z lodem, 200 ml zimnego nasyconego roztworu chlorku sodu, nastepnie suszy sie nad siairczanem sodowym, saczy sie i zateza uzyskujac 5,14^ g su¬ rowego estru.Produkt rozpuszcza sie,w 25 ml octanu etylu i saczy sie przez zloze 52 ig silikaizelu,.nastepnie za¬ teza pod zmniejszonym cisnieniem uzyskujac 4,72 g oczyszczonego estru.Na roztwór 0,50 g estru N-/2,4-dwunitro sulfenylo/dwumetoksy-metylowego w 4 ml chlorku metylenu dziala isie 0,652 ml w-piinenu, 0,586 ml N- -trójmetylosilylouretanu etylowego i 0,338 ml chloirku tienyloacetylowego i ogrzewa w stanie wrzenia pod chlodnica zwrotna przez 17 .godzin, a nastepnie mieszanine reakcyjna wylewa sie do 50 ml chlodzonego lodem heksanu, otrzymujac osad, który ponownie straca^sie z chlodzonelgo lodem heksanu uzyskujac 0,686 g dwuacylowainego pro¬ duktu. 20,1 mg dwuaeylowainego prdduktu w 0,47 ml kwasu octowego dodaje sie do 23,2 mg tiomocz-111147 29 30 nika i utrzymuje przez 95 minut otrzymujac kwas 3Jkanbamyloksymetylo-7-imietdksy-7^-/l2-tienyloaice- tamido/-ce£em-3-karboksylowy-4, co stwierdzono za pomoca cienkowarstwowej chromatografii w porównaniu z autentyczna ipróbka tego samego produktu.Przyklad XIV. Kwas 3-karbamyloksymetylo- -7-mei;oksy-7/9-/2-tienyloacetaimido/-icefeim-3^kairlbo- ksylowy-4.A. Kster dwu-lbenzyldksymetylowy kwasu 3-kar- bamylo!ksymetylo-7-imetoksy-7^-/D-5-trójchloroeto- ksykarbonyloamino-5-kar;bo,ksywaleram,ido/-cefeim- -3-kairboksylowego-4.Do zawiesiny 985 mg bis-dwueyikloheksyloaimino- wej soli kwasu 3-karbamyloksymetylo-7-.meto!ksy- -7/ff-/D-5-tróijdhlQroetdksyka,rlbonyloaimino-5-ka:rbo- ksywaleramido/-cefem-3-karbo!ksylowego-4 w 17 ml chlorku metylenu w temperaturze 0—1°C dodaje sie 0,294 ml eteru chlorpmetylowobenzylowego w 5 iml 'chlorku metylenu w ciagu 52 minut. Po 4 godzinadh mieszanine reakcyjna saczy sie, a na przesacz dziala 21X5 ml zimnego, nasyconego roz¬ tworu kwasnego weglanu sodu, 2X10 ml .wody z lodem, a nastepnie suszy sie nad siarczanem so¬ dowym i saczy sie. t ¦ - - Przesacz zateza sie do suchej pozostalosci, z któ¬ rej tworzy sie zawiesine w 15 ml eteru izopropy¬ lowego i zwiazek wymieniony w tytule zbiera sie na lejku {726 mg).B. Ester dwu-benzyloksymetylowy kwasu 3-kar- bamyloksymetylo-7-meitolksy-7^-(!]!)-f5-trójchloroeto- ksykairbonyloia.mino-5-,kaiibo!ksywalerylo/2-tienylo- acetylo-amino]-cefem-3-,ka:rlbo»ksylowego-4.Do roztworu 0,20 g estru dwu-benzyloksymetylo- wego w 1,6 ml chlorku metylenu dodaije sie 0,222 ml a-pinenu, 0,20 ml N-trójmetylosilylouretanu e- tylowego i 0,115 ml chloriku 2-itienyloacetylowego i ogrzewa w stanie wrzenia ipod chlodnica zwrot¬ na przez 23 godziny.Mieszanine .reakcyjna ekstrahuje sie 2 ml chlo¬ dzonego lodem iroztworu, zawierajacego '2,5% kwa¬ snego weglanu sodu i T0*/o chlorku sodowego, na¬ stepnie roztwór chlorku metylenu przemywa sie 2 nil nasyconego chlorku sodowego, suszy sie nad siarczanem magnezu, saczy sie i przesacz dodaje do 50 ml zimnego heksanu w celu wytracenia wy¬ mienionego w tytule produktu (0,1'61 g).C. Ester Ibenzyloksymetylowy kwasu 3-karlbamy- loksymetylo-l7-met'Oksy-7^-/2-itienyloacetamido/-ce- fem-3-lkarbdksyloweigo-4.Do roztworu imidu otrzymanego wedlug punktu B (0,150 g) w 4,1 ml dioksanu zawierajacego 0,20 ml kwasu octowego dodaje sie w ciagu 2,5 godzi¬ ny 0,86 g aktywowanego cynku. Mieszanine reak¬ cyjna saczy sie, a ipozostalosc przemywa ,na lejku 20 ml chloroformu.Polaczone (przesacze przemywa sie 2|X20 ml wo¬ dy, 10 ml zimnego, nasyconego roztworu kwasne¬ go weglanu sodu, 10 ml nasyconego idhlorku sodo¬ wego, nastepnie suszy sie nad siarczanem magne¬ zu, saczy sie, a nastepnie zateza uzyskujac 0,143 g pozostalosci zawierajacej benzyloiksymetylowy e- ster. 15 30 D. Kwas 3-kairbamylaksymetylo-7-metoksy-7/?-/2- -tienyloaeetamido/-cefem-3-karboksylowy-4. 25,4 mg benzyloksymetylowego estru rozpuszcza sie w 0,25 ml roztworu skladajacego sie z 9 ml 5 metanolu i 1 ml stezonego kwasu isolnego. Po jed¬ nej godzinie reakcja jest zakonczona i oddziela sie produkt przez zatezenie pod zmniejszonym cisnie¬ niem. Wydajnosc 44%.Przykl ai d. XV. Ester metoksymetylowy kwasu 10 3-karbamyloksymetylo-7-metoksy-7^-/2-(tienyloace- tamido/-cefem-3-karbo!ksylowego-4.A. Kwas 7-/D-5-chloroacetamidoadiipamido/-7- -metoksy-3-karbaimyloiksymetylo-cefem-i3-kalrbo- ksylowy-4.W mieszalniku Waringa z plaszczem enlodzaeym rozpuszcza sie jednosodowa sól kwasu 7'j?-/D-5-a- mino-5-kar]bolksywaleramido/-3-karbamylo!ksymety- lo-7-metoksy-cefem-3-lkarboksylowego-4 (14,2 g o zawartosci czystego zwiazku 63,6%) w 2i00 ml chlo- 20 dzonego lodem wodnego roztworu zawierajacego 4,9 ml/85% H3PO4 (dojprowadza sie pH do warto¬ sci 7,0 50% NaOH). Elektrode pH-metiru zanurza sie do roztworu i iprzy maksymalnym mieszaniu doprowadza sie pH do wartosci 11,0. 25 Dodaje sie 4,0 ml swiezo przedestylowanego chlorku chloroaeetylowego i utrzymuje sie pH 10,5—11,0 przez dodatek NaOH. Nastepnie w ten sam sposób dodaje sie kolejna iponoje chlorku kwa¬ sowego (4,0 ml a nastepnie 2,0 ml) i po 10 mi¬ nutach maksymalnego mieszania istwieirdza sie za¬ konczenie konwersji do zwiazku wymienianego w tytule, za pomoca 'chromatografii cienkowarstwo¬ wej.Mieszanine reakcyjna miesza sie z równa obje¬ toscia octanu etylu i w temperaturze 0°C zakwa¬ sza stezonym kwasem solnym do pH 1,7. Oddzie- . la sie poszczególne warstwy, a ekstrakcje po¬ wtarza czterema dodatkowymi objetoisciami octanu etylu zawierajacymi po 1 ml kwasu octowego.Polaczone ekstrakty suszy nad Na2SC4, zateza pod zmniejszonym cisnieniem i 300 nil 'benzenu wytra¬ ca oleista ipozostalosc. Suirowy, wymieniony w ty¬ tule zwiazek (5,35 g 51%, okolo 60% czystego) u- zyskuje sie przez odwirowanie.B. Ester bis-metolksymetylowy kwasu 3-karba- myloiksymetylo-7-imetoiksy-7-/D-5-ichloToacejtamido- adipamido/-eefem-3-kariboksylowego-4.Do 100 ml suszonego na sicie molekularnym 50 chloriku metylenu dodaje sie 1,35 ml sym-kolidyny i 2,68 g (5,13 mmola) substancji uzyskanej wedlug punktu A. ^asnozólta zawiesine ochladza sie. do 5°C w atmosferze azotu i intensywnie . mieszajac i utrzymujac temperature w. zakresie 5—10°C do- 55 daje sie dwie porcje 0,335 ml CICH2OCH3. 1 Mieszanine miesza sie 45 minut i dodaje dodat¬ kowo 10% kolidyny i CICH2OCH3. Po 1,75 godziny calkowitego czasu 'reakcji mieszanine saczy sie.Przesacz przemywa sie trzema porcjami po 50 ml 60 wody z lodem, 50 ml nasyconego roztworu chlor¬ ku sodowego i suszy nad Na^SO^ Przesaczone ekstrakty zateza sie [pod zmniejszo¬ nym cisnieniem otrzymujac 1,80 g surowego dwu- estru, który oczyszcza sie chromatograficznie na 65 3Q g gruboziarnistego zelu krzemionkowego. Wy- 40 45111147 31 32 15 25 mycie 400—500 ml CH^C12 daje produkty ubocz¬ ne, a wymycie 500 ml octanu etylu daje 1,22 g dwuestru wytriiarjiionego w tytule w postaci amor¬ ficznego ciaia -stalego o barwie bialej.C. Ester metdksymetylowy kwasu 3-karibamylo- 5 ksymetylo-7-imetoksy-7/?-[D-5Tchloiroacetamidpady- poilo/2-tiienyloac-etylo/amino]-cefem-3-:karbo'ksylo- wego-4.Do 100 mg produktu uzyskanego wedlug punktu B w uszczelnionym Hyjpovialu dodaje sie 0,350 10 ml wolneigo od etanolu CHC13, 0,068 ml N-trójme- tylosilylouretanu etylowego (0,395 mmola) i chlor¬ ku 2rtienyloafcetylowego i(0,034. ml, 0,274 mmola).Homogeniczna mieszanine odstawia sie na 24 go dziny w temperaturze pokojowej.Mieszanine reakcyjna wytraca sie w 3 objeto- sciacih suchego "heksanu i odwirowany osad roz¬ puszcza sie w CH2iCl2, , nastepnie roztwór zateza sie pod zmniejszonym olsnieniem do otrzymania piany o jasnozóltej barwie; wydajnosc 80 mg.Cienkowarstwowa chromatografia i Widmo NMiR swiadcza, ze jest to zasadniczo czysta, wymieniony- w tytule zwiazelk.. D. Ester metoksymetylowy kwasu 3-karibamylo ksymetylo-7-metdksy-7^-/2-tienyloaoetamido/-ce- fem-3-kairboksylowego-4.Surowy imid wytworzony wedlug punktu C (20 mg) w 0,250 ml absolutnego alkoholu poddaje sie dzialaniu 5 mg tiomocznika na iprzeciag 24 godzin w temperaturze pokojowej. Za pomoca cienkowar¬ stwowej chromatografii stwierdza sie obecnosc me- toksymetylowego estru i fakt, ze poczatkowy imid calkowicie przereaigowal.Na surowy imid (25 mg) i pyl cynikowy (H00 mg) 35 dziala sie mieszanina 6,5 ml octanu etylu i 0,025 ¦ml lodowatego kwasu octowego. Po 4 godzinach w temperaturze pokojowej cienkowarstwowa chro- • matografia wskazuje na obecnosc wymienionego w tytulezwiazku. 40 Pr z y:klad XVI. Kwas iS-karbamyloksymetylo- -7-metoklsy-7^-/2-tienyloa!ceta!mido/-celfem-3-kaiib6- ksylowy-4. 0,1 g soli bis-dwucykloheksyloaminowej kwasu 3-karibamyloiksymetylo-7^-|[D-5-/2,4-dwunit:rofeny- 45 lo!Sul,fenyloamino/-5-kaiibolksywaleramido]-cefem-3- -karJboksylowego-4 umieszcza sie w 3 ml CH2C12 i przez 2 godz. miesza sie w temperaturze 25°C z ,26,5 jul chlorku trójmetylosilylu. Odsacza sie chlorowodorek dwucyklohekisyloamiiny (42 mg) a 50 do przesaczu dodaje sie 100 pi N-itrójmetylosilylo- uretanu etylowego i 43,5 fn (0,35 mmola) chlorku 2-tienyloacetyiu. Roztwór ogrzewa sie w stanie wrzenia pod chlodnica zwrotna przez 19 godzin.'Nastepnie dodaje sie 6 ml heksanu i po sklaro- 55 waniu dekantuja. Te czynnosc powtarza sie jeszcze dwujjLrotnie w celu usuniecia nadmiaru chlorku 2- x -tienyloaeetylu. Do 85 mg substancji nierozpusz- - czalnej w heksanie dodaje sie 50 mg tioacetamidu w 1 ml .metanolu i miesza przez 2,5 godziny. Na- 60 stepnie dodaje sie octanu etylu (5 ml) i przemywa roztworem kwasnego * weglanu isodu (jpH 8,3).Warstwe wodna przemywa sie octanem etylu i zakwasza do pH 2,8 za pomoca l?10/© H3PO4. Pro¬ dukt (28 mg) zawierajacy zwiazek wymieniony w -65 tytule ekstrahuje sie z zakwaszonej warstwy wod¬ nej octanem etylu.P ir z y k lad XVII. Ester metoksymetylowy kwa¬ su 3-kailbamylolksymetylo-7-imeto acetamido/-icefem-3-karboksylowelgo-4.Do mieszaniny 6,75 ml-ia-pinenu i 12 ml dwu- chloroetanu- dodaje .siie 5,55 mg N-trójmetylosilylo- benzeno sulfonamidu, 3,5 ml chlorku 2-tienyloace- tylowego i 500 mg estru metoksymetylowego k*wa- su 7j5-/D-5-t;rójchloroetoitosy-karibonyloaimiino-5-kar- boiksywaleraimido/-3-karbaimyloksymetylo^7-meto- ksy-cefem-3-karboksylowego-4. Otirzyimana mie¬ szanine ireakcyjna ogrzewa sie pirzez 10 godzin pod chlodnica zwrotna w temperaturze 65°C. 3,4 ml uzyskanego roztworu chlodzi sie w suchym lodzie, a .nastepnie ogrzewa do wrzenia pod chlodnica zwrotna.Otrzymany roztwór, zawierajacy stale kryszta¬ ly rozciencza sie dwuchloroetanem do ilOO ml. Wy¬ nik analizy otrzymanego roztworu wskazuje obec¬ nosc 41,8 mg zwiazku wymienionelgo w tytule.Przyklad XVIII. Kwas 3-ikarbamyloklsymety- lo-7-metoksy-7^-/2-tienyloaceitamido/-cefem-3-kair- bdksylowy-4.Do zawiesiny 200 mg kwasu 7jff-/D-!5'-1IIIrz.-lbuto- ksykarbony 1oamin o-i5'-kanbo(ksywalerajmddo/- 3-kara bamyloik!symetyl'0-7-metoksy-icefe!mH3-kar(bo;ksylo- 'wego-4 w wolnym od etanolu chloroformie (2 ml) dodaje sie 432 mg N-itrójmetylosilyloamidu kwasu trójfliuoroootowego i 0,56 mg trójetyloaminy.Do tej mieszaniny dodaje sie 182 fn chlorku tienyioacety- lowego. Nastepnie roztwór ogrzewa sie na lazni olejowej w temperaturze 45°C przez 9 i 1/2 go¬ dziny. Nastepnie mieszanine chlodzi sie, przez do¬ datek n-heiksanu. Roztwóir odwirowuje sie i usuwa heksan znad gumowatego ciala stalego. Te procer dure powtarza sie, a frakcje heksanu odrzuca. Gu¬ mowate cialo stale rozpuszcza sie w 10 mil kwasu mrówkowego przez 30 minut.Nastepnie usuwa sie kwas mrówkowy pod zmniejszonym cisnieniem. Substancje stala wpro¬ wadza sie do mieszaniny octanu etylu (3 ml) i wody (3 ml), a pH doprowadza do wartosci 2,5.Warstwe octanu etylu zateza sie do suchej pozo¬ stalosci. Zairówno analiza chromatograificzna cien¬ kowarstwowa jak i ciekla chromatograifia wyka¬ zuja obecnosc kwasu 3-ka,rbaimyloksymetylo-7-ime- toksy-7/?-/2-tienyloaicetamido/-icelfem-3-kair(bc^ksylo- lowego-4.Surowy produkt oczyszcza sie na drodze prepa- ratywnej chromatografii cienkowarstwowej stosu¬ jac plytki zelu krzemionkowego i rozpuszczalnik zlozony z benzenu 50; metanolu 10; kwasu octowe¬ go 6.P r z y k l a d XIX. Kwas 3-karbamyloksymetylo- -7-m€tG^sy-7,/?-/2-tien-yloacetamido/^cefem-3-'karbo- ksylowy-4.Do zawiesiny 200 mg /kwasu 7^-/D-5-amino-5- -kairibaksywaleraimido/-i3-ka.r;bamyloksymetylo-7- -metolksy-ceifem-3-lkarlbdksylowego-4 w 2 ml wol¬ nego od etanolu chloroformu dodaje sie 430 mg .N-trójmetylosilyloaimidu kwasu benzenosulfono- wego i 0,6 mg trójmetyloaminy. Do tej mieszani-111147 33 34 25 ny dodaje sie 182 /^l chlorku tienyloacetylowe- go.Uzyskana mieszanine reakcyjna ogrzewa sie na lazni olejowej przez 10 godzin w temperaturze '45°C, a nastepnie chlodzi dodajac do n-heksa¬ nu.Roztwór odwirowuje sie . i usuwa heksan znad gumowatego ciala stalego. Te procedure powtarza sie jeszcze dwa razy, a heksan usuwa. Gumowata substancje dodaje sie do mieszaniny 3 ml octanu 10 etylu i 3 ml wody, a pH doprowadza do 2,5.Zatezenie warstwy octanu etylu do suchej pozo¬ stalosci daje surowy kwas 3-kair(baimyloksymetylo- -Y-metdksy-T^-^-tienyloaicetamido^-ioeifem-S-ikairbo- ksylowy-4, który analizuje s_ie chromatograficznie 15 na plytkach i przy pomocy chromatografii cieczo¬ wej.Surowy produkt oczyszcza sie .na drodze prepa- ratywnej chromatografii cienkowarstwowej sto¬ sujac plytki zelu krzemionkowego, a jako rozpusz- 20 czalnik mieszanine benzenu 50; metanolu 10; kwa¬ su octowego 6.Przyklad XX. Sól dwubenzyloetylenodwua- minowa kwasu 3-metylo-7-metoksy-7/?-/2-tienylo a ceta.mido/-cefem- 3-'karboksyIoweg o- 4.A. Kwas 7^-/D-5-aimino-5-ikarbo(ksywaleramido/- -3-metylo-7-imetoksy-icefem-3-kaiiboksylowy-4./Na zawieszony w wodzie (80 ml) katalizator 10% pallad na weglu drzewnym dziala sie wodorem.Po odsaczeniu, katalizator ponownie zawiesza sie 30 w wodzie (50 ml) i do tej mieszaniny (2,67 g) do¬ daje isie sól sodowa kwasu 7^-/D-5-amiino-5-kar- boksywaleramido/-3-kaigbamyloksy-3jmetylo-7-me- toksy-cefem-3-karbdksylowego-4 (1,0 g) w wodzie (10 ml). Uzyskana mieszamine. wstrzasa sie 22 go- 35 dziny w temperaturze pokojowej. Katalizator od¬ sacza ,sie i przemywa woda (50 ml).Polaczona wode z przemywania i z filtracji za- teza sie do suchej pozostalosci uzyskujac z 52,8°/o wydajnoscia kwas 7/?-/D-i5-amino-5-karbo!ksywale- ramido/-7-imetoksy-3-m.etylo-cefem-3-karbo/ksylo- wy-4. (528 mg).UV, X max 265 urn E ^Ucm wynosi 100. 45 B. Sól dwubenzyloetylenodwuaminy kwasu 1^- -/D-5-IIIrz.-buto!ksykarbonyloamino-5-karbolksy- waleramido/-7-!metoksy-3-metylo-cefem-3-Jkarbo- ksylowiQgo-4.Roztwór dwusodowej soli kwasu 7^/D-5-amino- 50 -5-kanboksywaleramido/-7-metoksy-3-imetylo-€e- fem-3-kairboksylowego-4 (U,5 g) rozpuszcza sie w wodzie (150 ml) [acetonie i(50 ml). pH doprowa¬ dza sie do 9—9,1 za pomoca wodorotlenku sodo¬ wego i" dodaje 10 ml azydomrówczainu HIrz.-buty- 55 lowego. Mieszanine reakcyjna miesza sie w tem¬ peraturze pokojowej przez 16 godzin utrzymujac pH w granicach 9—9,1 za pomoca dodatku wodo¬ rotlenku sodowago.Nastepnie mieszanine reakcyjna ekstrahuje sie - 60 octanem etylu (100 ml) i odrzuca organiczna war¬ stwe. Produkt wytraca sie przez obnizenie pH do 2,5 dodajac rozcienczony kwas solny. Osad odwiro- wywuje sie i przeksztalca w jego dwubenzyloety- lenodwuamine sól, która krystalizuje sie z octanu 65 40^ etylu. W ten sposób uzyskuje sie 4,3 g soli dwu- benzyloetylenodwuaminowej kwasu 7^-/D-5-IIIrz^ butoksykarbonyloamino- 5-karlboksywaleramido/- 7 - -metdksy-3-imetylo-ice(fem-3-ka!rboiksyloweigo-4.Temperatura topnienia 177—il79°C (rozklad).UV: X max 263 /urn, 238 firn E^m = 98,2; 81,1 Elementarna analiza C3BH40N5O9S: obliczono: C 59,42 H 6,74 !N 9,63 znaleziono; C 60,02 H 6,80 N 9,79.C. Sól dwubeozyloetylenodwuaminy kwasu * 3- -metylo- 7-metoksy-7;^-/2-tienyloacetamidoAcefem- -3-karbokisylowiego-4.Do kwasu 7^-/D-5-IHIrz.-butolksykairbonyloami- no-5-karboksywaileramido/-3-m.etylo-7-metoksy-ice- fem-3-karfdksyloweigo-4 dodaje sie 200 ml rozcien¬ czonego woda kwasu solnego (0,1 N) i 100 ml oc¬ tanu etylu w celu ekstrakcji wolnego kwasu. Do roztworu wolnego kwasu (1,33 g 2,74 mimola) w chlorku metylenu (10 ml) dodaje sie bis-trójme- tylosilyloamid kwaku trójfluarooctoweigo (2,2 ml) i monotrójmetylosilyloamid kwasu trójfluorooctowe¬ go (0,5 ml).Nastepnie do mieszaniny reakcyjnej dodaje sie chlorku 2-tienyloacetylowego (1,1 ml) i miesza w atmosferze azotu przez 18 godzin w tem-peratuirze 43°C. Rozpuszczalnik uisuwa sie pod zmniejszonym cisnieniem, a pozostalosc rozdziela pomiedzy octan etylu i wodny bufor fosforanowy (pH 7,5). War¬ stwe wodna zakwasza . sie (rozcienczonym kwasem solnym, a wytracony produkt ekstrahuje octanem etylu.Dodatek dwubenzyloetylenodwuaiminy powodu¬ je krystalizacje 250 mg pozadanego produktu w postaci soli w proporcji 2 równowazniki produk¬ tu na jeden mol dwubenzyloetylenodwuaiminy. Re¬ krystalizacja soli z etanolu daje zasadniczo juz. czysty produikt. Temperatura tqpnienia 153—155°C (rozklad) z poprzedzajacym' ciemnieniem.Analiza elementarna dla C46H52S4N6O10: obliczono: C 56,54 H 5,36 N 8,60 S 13,12 znaleziono: C 55,75 H 5,16 N 8,37 S 12,16 Przyklad XXI. Kwas 7-/fenyloacetylo-2-tie- nyloaeetylo/amino-3-acetoksymetylo-cefem-3-kair- boksylowy-4.Zawiesine cefalotynu sodowego (3,36 g) w wol¬ nym od alkoholu, bezwodnym chloroformie,(20 ml) sililuje sie przez dodatek trójmetylochlorosilainu (2,2 ml). Po mieszaniu przez 30 minut, dodaje sie N-trójmetylosilyloamid kwaisu trójfluorooctowego (5,0 ml) i chlorek fenyloacetylowy (4,0 ml), a na¬ stepnie mieszanine ogrzewa sie do 45°C przez dwa dni pod chlodnica polaczona z suszaca rurka. Od-" parowuje sie lotne skladniki i otrzymuje substan¬ cje, która rozpuszcza sie w 100 ml /octanu etylu i przemywa trzy razy woda. ' Warstwe octanu etylu suszy sie nad siarczanem magnezu, saczy sie i odparowuje pod zmniejszo¬ nym cisnieniem do suchej pozostalosci. Pozostalosc te uciera sie z chloroformem, odsacza substancje nierozpuszczalne i z przesaczu wytraca produkt za pomoca heksanu. Te procedure powtarza sie jesz¬ cze dwukrotnie. Kwas 7-/fenyIoaoetylo-2-tienylo- acetylo/amiino-3.-acetdksymetylo-cefem-3-kan1boksy: lowy-4 (540 mg) w formie wolnej od rozpuszczal-111147 35 36 ników otrzymuje sie przez wymrozenie z roztworu benzenowego.IR: (CHC13) 1730 om"1; 1720 om-1 NiMR: (CDCI3) .— zgodny ze struktura: 0 CH2(CO)^(4,03 ppm) 2-t'ienylo^CH2^GO)—1(4,3 p)pm) Chromatografia cienkowarstwowa: jedna duza pla¬ ma, Rf = 0,69 (EtOAc: 62, C5H5N: 2il, HOAC: 6, H20: 11) na zelu'krzemionkowym.P rzyklad XXII. Kwak 7-/dwu-2-tienyloacety- lo/amiino-3-aicetoksyimetylo-cefem-3-kairiboksylo- wy-4.Zawiesine eefalotynu sodowego (1,18 mg) w wol¬ nym od alkoholu, bezwodnym chloroformie (10 ml) sililuje sie przez' dodatek trójmetylochlorosilanu (1,1 ml). Po 30 minutach mieszania, do mieszaniny dodaje sie N-tirójmetylosilyloamid kwasu trójfluo- rooctowego (2,5 •ml.) i chlorek 2-tienyloaicetylu (2,0 ml) i/Ogrzewa do 45°C.Mieszanine utrzymuje sie w tej temperaturze przez, dwa dni, a nastepnie^ odparowuje pod zmniejszonym cisnieniem do suchej pozostalosci, która rozpuszcza ,sie_w octanie etylu (50 iml) i trzy¬ krotnie przemywa woda. Warstwe octanu etylu su¬ szy sie nad siarczanem magnezu, saczy sie i prze¬ sacz odparowuje\ pod zmniejszonym cinnieniem do suchej pozostalosci.Pozostalosc rozpuszcza sie w chloroformie r trzy¬ krotnie wytraca w heksanie za kazdym razem odrzucajac klarowna ciecz znad osadu. Kwas 7-/dwu-2-tienyloacetylo/-amino-3-acetofksymetylo- -Ciefem-3-kar!bo,ksylowy-4 w postaci wolnej od roz¬ puszczalników uzyskuje sie przez wymrozenie z roztworiPbenzenowego.NMR: (Rozpuszczalnik — CDCI3) — zgodny ze struktura: ó = 4,25 (2-tianylo^CH2—(CO)— 4H) Chrómatograifia cienkowarstwowa: jedna duza pia¬ nia, Rf = 0,67 (EtOAC: 62, C5H5N: 21, FOAC: 6, H20: 11) na zelu krzemionkowym.Przyklad XXIII. Kwas 7^/2-tienyloa',etylo/a- mino-3-acetoksymeftylo-cefem-3-kaiiibo|ksylowy-4. iKwas 7/-fanyloaoetylo-2-tienyloacetylo/amino-3 - -acetoksymetylo-cefem-3-ikaribo)ksylowy-4 (250 mg) rozpuszcza sie w czterohydrofuranie (10 m1) i wo¬ dzie (10 ml). Dqr' owadza sie pH roztworu do 9 i pozostawia mies^nine na 1 godzine. Nastepnie, roztwór ekstrahuje sie octanem etylu, 'kstrakt przemywa roztworem kwasnego fosforanu dwuso- doweigo..Po osuszeniu odparowuje* sie rozfpuszc7*linik i otrzymuje mieszanine materialu wyjsciowego i 'kwasu 7-/2-tienyloacetylo/amino-3-acetoksyTietylo- -cefem-3-karbdksylowego-4. Wzajemny stosunek tych dwóch substancji wynosi 7 :3. Produkt od¬ dziela sie chromatograficznie od suibstrak i otrzy¬ muje ,sie 62 mg zasadniczo czystego kwasu 7-/2-tie- nyloacetylo/a)mino-3-acetdksymetylo-c"e)fem-3-ikair- boksylowego-4.P rzyklad XXIV. Do roztworu 19,6 g uretanu etylowego i 27,8 g trójetyloaminy w 300 ml ben¬ zenu ochlodzonego do 15°C wikrapla sie 12,1 ml dwumetylo-dwuchlorosilanu utrzymujac tempera¬ ture mieszaniny ponizej 13°C.Powstaja .mieszanine pozostawia *sie na 15 minut 10 15 20 25 30 35 45 50 55 60 stale .mieszajac, saczy sie, a placek filtracyjny przemywa sie niewielka iloscia benzenu. Przesacz i przemycia zaiteza sie do okolo 30 ml pod zmniej¬ szonym cisnieniem, saczy sie i placek filtracyjny przemywa sie niewielka iloscia benzenu. Przesacz i przemycia pozostawia sie na noc pod zmniejszo- mym cisnieniem, po czym wykrystalizowuje bis/eto- ilksykairbonyloamLno/-dwumetylo-1silan o wzorze (CH3)2=Si=i(NHCOOC2H5)2, który oddziela sie i suszy pod zmniejszonym cisnieniem.Mieszanina 100 mg estru dwu/metoksymetylowe- go/ kwasu 3-'karbanioilolksyimetylo-7-metoks^-7^- -/D- 5-tirójchloroetoksykarbony1oamino-5'- karibaksy- waleram'ido-cefem-3-ka^bokisyliowego, 135 fil a-ipi- nenu, 164 mg opisanego wyzej -flwumetylo-isilanu, 70 ^1 chlorku trójacetylowego f 2,4 ml dwuchloro- etan-u ogrzewa sie w temiperaturze 65°C w ciagu 1 godziny. Chromatografia powstalego produktu wykazala, ze wytworzyl opisany wyzej iimi-d elstru dwu/metoiksymetylowego/ kwasu 3-karbamoiloksy- metylo-7-meto!ksy-7^-i[/D-5f-trójtfhloroetdksykarbo- |nyloamino-i5'-,kainboksywalerylo/-tienyloacetyloami- no]-cefem-3-ikarboksylowego-4.Przyklad XXV. Do 1 g estru dwu/metoksy- -metyloweigo/ kwasu 7^-/D-5-trójchloroetoksykar- bomy1 oamino -5 -kariboksywa 1ery1 oamido/-3-.kanba- moiilokisymetylo-7-,metdksy-cefem-3Jkarboksylowe- go-4, rozpuszczonego w 24 ml dwiuchloroeitanu za¬ wierajacego 1,35 ml a-pi^enu dodaje sie 1,7 g N- -trójmetyloisililo-dwufenylofosfonamidu, który wy¬ twarza sie z chlorku dwufemylofosforowego i szo- sciometylo-dwusilazanu.Do mieszaniny tej dodaje sie chlorku tienyloace- tylu i temperature podnosi do (J5°C i utrzymuje w tej temperaturze w ciagu 112 godzin. ; Po schlodzeniu do temperatury pokojowej mie¬ szanine te dodaje sie do roztworu 50 ml zawiera¬ jacego 2Vo NaCl, 2,5*/« NaKC03 i 3 ml metanolu.Mieszanine miesza &i$ energicznie w temperaturze pokojowej w ciagu 15 miinut Po rozdzieleniu ' warstw, warstwe organiczna dodaje sie do 250 ml chlodzonego lodem heksanu, rozpuszcza sie ponow¬ nie w chlorku metylenu i powtarza sie wytraca¬ nie heksanem. Wyttwodzony tak ester dwu/met0- ksymetylowy/ kwasu 7^-(/D-5-trójdhloroetokisykar- bQnyloaminio-5-!karlboklsywaleryloZ-tiienyloacetyloa'- mino-3-ka!rbamoiloksymetylo]-7-imetoiksyHcefem-l3- -karboksylowego-4 nadaje sie do dalszego przero¬ bu. •.*'.¦¦' Przyklad XXVI. Do 1 g iimildu estru meto- ksymetylowego (wytworzonego wedlug przyklaidu XXV), rozpuszczonego w 10 ml dwuchlonoetanu, zawierajacego 2 ml a-pinenu dodaje sie 0,3 ml chlorku trójmetylosililowego.Roztwór ogrzewa sie w temperaturze 65°C w ciagu 1,5 godziny w atmosferze azotu. Rozpuszczal¬ nik odpedza isie pod zmniejszonym cisnieniem, a pozostalosc rozpuszcza sie w 5 ml octanu etylo¬ wego. Do roztworu tego dodaje sie 5 ml benzenu i calosc chlodzi sie do 0°C na przeciag kilku go¬ dzin. . .Ester metioksymetylowy kwasu 3-!karbamoiloksy- metylo-7-imetoksy-7^/2-tienyloaceta:mido/-ceifem-3- -karboksylowego-4 oddziela sie przez saczenie,111 147 37 38 przemywa sie 5 ml zimnej mieszaniny benzenu i octanu etylowego (1:1) i suszy ,sie pod zmniejszo¬ nym cisnieniem.Przyklad XXVII. 2 g estru dwu/metolksyme- tylowego/ .kwasu 7-1/?-/-trójchloroetoksyka!ribonylo-' a mino - 5-karlbok sywaleramino/- 3-kartoaimoi 1ok sy - -metylo-7-metok sy - cefem-3-karbok sylowago- 4 roz¬ puszcza sie w 48 ml dwuchloroetanu, zawierajace¬ go 2 ml a-pinenu po czym zadaje sie 1,9 g. N- ^trójmetylosililo-amidu kwasu metanoisulfonowe- go i 1,4 ml chlorku tieinyloacetylowego.Klarowny roztwór odgrzewa sie w temperaturze 65°C-av ciagu 12 godzin w atmosferze azotu. Po schlodzeniu roztworu do temperatury pokojowej wkrapla sie go do 500 ml ochlodzonego heksanu.Heksan dekantuje sie znad gumowatego osadu i odrzuca sie. Gumowaty osad rozpuszcza sie w 20 ml chlorku metylenu i ponownie straca sie przy uzyciu 500 ml zimnego heksanu. Po zdekamtowa- niu gumowaty osad rozpuszcza sie w mieszaninie 75 ml octanu etylowego i 25 ml metanolu.Roztwór chlodzi sie do 0°C, dodaje sie 2 ml ste¬ zonego kwasu solnego i utrzymuje sie temperature mieszainimy 0°C w ciagu 1,5 godziny. Roztwór wle¬ wa sie do 52 ml wody, zaiwlerajacej 5,2gNaHCC3.Warstwe roztworu kwasnego weglanu ekstrahuje, sie 2 razy 20 ml octanu etylowego i warstwe octa¬ nu etylowego odrzuca sie.Roztwór kwasnego weglanu zakwasza sie do pH = 1,8 i ekstrahuje sie 3 razy 25 ml octanu etylowego. Po zatezaniu warstwy organicznej wy- krystalizowuje kwas 3-'kairbamoilolksyimetylo-7- -metoksy-7,/?-/2-tienyloaicetamldo/-iceifem-3-karbo- ksylowy-4./Zastrzezenia patentowe 1. Sposób wytwarzania nowych pochodnych 7-a- cyloamidocefalosporyn o ogólnym wzorze 30, w którym Rj Oznacza atom wodoru lub grupe meto- ksy, A oznacza nizsza grupe alkainoiloksy o 2—6 'atomach wegla lub grupe kartoaimoilokisy, R10 o- znacza atom wodoiru, grupe azydowa, karboksylo¬ wa lub hydroksylowa, R^ oznacza fenyl, 2-furylv 3-furyl, 2-tienyl, 3-tienyl, 3-iizotiazolil, 4-izotiazolil, 5-izotiazolil, 1,2,5-tiadiazolil, 4-pirydyl, tetrazolil, albo chlorofenyl, R4 oznacza atom wodoru, grupe metylowa, etylowa, Ill.rz.-ibutylowa, ftaloimidome- tyl, sukcynoimidometyl, fenacyl, p-bromofenacyl, 5 2,2,2-trójcihloToetyl, 2-metylotioetyl, 2-/p-metylofe- nylo/-etyl, 2-^p-metylofenylo/-sulfonyloetyl, 2-me- tyloaminoetyl, 2-chloroetyl, 2-ihromoetyl, benzyl, p- -nitrobenzyl, p-metoks^benzyl, 3,5-dwuiniitrotoenzyl, 2,4,6-trójmetylobenzyl, 3,5-dwuchloro-4-hydroksy- 10 benzyl, benzhydryl, p-imetoksybenzhydryl, fenyl, acetoksymetyl, piwaloiloksymetyl, metoksymetyl, p-nitrofenyl albo 3,5^dwunitrofenyil, znamienny tym, ze zwiazek o wzorze 31, w którym R2 ozna¬ cza ,grupe trójehloroetoksyikaribonylawa, III.irz.-bu- 15 toksykanbonylowa, benzoiloimetdksylkaiibotnyrowa, trójmetylosililowa, p-metoksybenzyloksylowa, 2-ni- trofeinylasulfenyilowa, ^^dwuiniitrofenylosulfenylo- wa, chloroacetylowa albo o-nitrofenylotio, Ri, A i R4 maja wyzej podane znaczenie a X oznacza atom 20 tlenu lub siarki, poddaje sie reakcji z równomo- lowa iloscia srodka acylujacago o wzorze 32, w którym Rjo i Rn maja wyzej podane znaczenie wraz z nadmiarem srodka sililujacego takiego jak N-/trójmetylosililo/-aceta,mid, N-Ztrójpropylosililo/- 25 -acetamid, N-/trójbutylosililo/-aeetaimid, N-/trójfe- nylosililo/-acetamid albo N-/trójbenzylosililo/-ace- tamid, N,0-bis/trójifenylosililo/-acetamid, N,0-bis~ -/trójtoenzylosiliW-acetamid, N-/trójmetylosililo/- -trójfluoroaeetariid, N-/trójibutylosililo/-trójtf:luoro- 30 acetamid, N-/trójimetylosiliilo/-toewzamid, N-/t\rójme- tyloisililo/-dwufeinylomoczn,ik, N-/itrój'metylosililo/- -etylokarbaminian, N-/itr ójifenylosi 1iio/- suk cynimid, N-/t.rójmetylosililo/-ftalimid, N-/trójmetylosililo/- -'benzenosulfonamid, N-trójmetylosililouretan, N- 35 -trójmetylosililoftallmid, moinosililo-trójfluoroace- tamid, albo bis/etoksykarbonylioamino/-d,wuimetylo- silam w neutralnym rozpuszczalniku w temperatu¬ rze 25—70°C w ciagu 3^65 godzin dodaje sie e- wentualnie nizszy alkamol albo nizszy alkilotiol o 40 'i—6 atoimach wegla w czesci alkilowej, alkohol benzylowy, 2,5n HOL luib wodny roztwór kwasne¬ go weglanu sodowego i wydziela sie produkt. 2. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze jako neutralny rozpuszczalnik stosuje sie acetoni- 45 tryl, chloroform, albo chlorek metylenu.111 147 hRi B'-N Ns^-CHzA COOR" Wzór 1 R1 B1 Ri N- t CH2A COOR" Wzór 2 H Ri R'- N 0' -NY^ch2a COOR" Schemat 1 Wzór 3 COOH 0H R ch(ch2cn- NHi Wzór 4(f r KJ^-CH2A COOH COOR" 0H'R CH(CH2)3CN NJHR2 Wzór 5 fO-ChUA COOR" COOR" CRl R CH (CH2)3CN NHR; Cf ^ Wzór $ lO-CH2A COOR" I -— Ci COOH On D, i II K{ Ki _ H(CH2)3CN4-r-s^ NH2 o^N^CH2A 'Vzór7 | COOH H Ri R'-N- 0 Wzór 8 Nv^-CH2A COOR" Schemat 2111147 NH; O H Ri CH (CH2)3C-N COOH R2 NH i f Wzór 9 -N^-CHzOA' COOH O CH CH2)3C-N I H Ri S COOH ? ¦N^LCH20A' O Wzór 10 COOH R2 NH O u i u H CH(CH2)3C-N Ri S.C00R3 O Wzór 11 iL^CHzOA' COOR3 F?2 NH O CH(CH2)3C-N R' Ri COOR: ^S 0^ Wzór i2 ¦N.^-CHzOA' COOR3 H R, R' N ~|--r Wzór O CH20A' COOR3 H R, R1 N - ¦A O Wzór 44 Schemat 3 XJ-CH20A' COOHiii 147 O R7 R5C-N-Si-R8 R ^^ n K6 R7 »*«45 R5OSO2NH-S1 —R8 n Wzór / fVC=N-Si-R8 Si n R/IXR9 / 7 R8 R5 SO2-N-Si - R 8 Wzór17 I D R6 9 _ Wzór W R5S0NH-Si-R8 Wzór 19 R9 O /R7 C — N-Sf-R8 B R9 o Wzór 21 R7 R8/Sl R9 o Re-Si-N C N Si Rg Re Rfe *yzdr 23 Ra-Si-N-C- R9 X Rg Wzór 24111 147 R7 R / O Si (N - COR: i Rg Wzór 25 JJ 2 0 II R5P- N- Si Rt R7 — Rb R9 Wzór 26 (r5o; O R7 ii / P - N -Si — Rs R6 ^ Wzór 27 O R3-CH-C I X Wzór 28 ROOC\J^- O Wzór 29 O U Rl u H r Rir-CH-C-N ~U R,o 0^ Wzór 30 O ^s -llJ-CHzA COOR4 H R' R2-NHCHACH2)3C-N^Y°Vua i J_rU^£H2A coxr4 o- Y ffzorJ/ COOR4 o R11- CH-C-Cl 1 Rio Wzór 32 PL PL PL PL PL PL PL PL PL