PL100373B1 - Sposob otrzymywania trypsyny z trzustki bydlecej - Google Patents
Sposob otrzymywania trypsyny z trzustki bydlecej Download PDFInfo
- Publication number
- PL100373B1 PL100373B1 PL19404176A PL19404176A PL100373B1 PL 100373 B1 PL100373 B1 PL 100373B1 PL 19404176 A PL19404176 A PL 19404176A PL 19404176 A PL19404176 A PL 19404176A PL 100373 B1 PL100373 B1 PL 100373B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- obtaining
- trypsin
- hydrochloric acid
- triphines
- civils
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 10
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 claims description 8
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 claims description 8
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 claims description 8
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 claims description 7
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 6
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 4
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims description 2
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 2
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000010911 Enzyme Precursors Human genes 0.000 description 1
- 108010062466 Enzyme Precursors Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- YQDHCCVUYCIGSW-LBPRGKRZSA-N ethyl (2s)-2-benzamido-5-(diaminomethylideneamino)pentanoate Chemical compound NC(=N)NCCC[C@@H](C(=O)OCC)NC(=O)C1=CC=CC=C1 YQDHCCVUYCIGSW-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 238000010907 mechanical stirring Methods 0.000 description 1
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 235000021419 vinegar Nutrition 0.000 description 1
- 239000000052 vinegar Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Description
Przedmiotem wynalazku jest sposób otrzymywania czystych preparatów trypsyny z trzustki bydlecej,
z przeznaczeniem do badan podstawowych w biochemii oraz innych naukach biologicznych. Trypsynajestenzy¬
mem proteolitycznym, wytwarzanym przez trzustke.
Dotychczas znane i stosowane metody do preparacji trypsyny polegaja na ekstrakcji bialek trzustki do
0,25 N kwasu siarkowego,a nastepnie na wielokrotnym frakcjonowaniu tych bialek za pomoca siarczanu amonu
i siarczanu magnezu (Mc Donald M.R. and Kunitz M.J., J.Gen.Physiol 1946, 29, 155, Laskowski M. Methods in
Enzymólogy) S.P.N.O. Kaplan, eds) 2 1955, 26, Academic press, New York). W wyniku zastosowania tych metod
uzyskuje sie tiypsyne krystaliczna o aktywnosci 9000-13000 jedn/mg. Za jednostke aktywnosci uwaza sie taka
ilosc enzymu, która powoduje przyrost ekstynkcji przy 235 nm o 0,001 na minute wpH=7,6, temperaturze
°C, uzywajac estru etylowego benzoilo-argininy jako substratu.
Nie opisano dotychczas metody otrzymywania trypsyny z trzustki bydlecej za pomoca kwasu trójchloro-
octowego.
Istota wynalazku polega na zastosowaniu kwasu trójchlorooctowego zarówno do ekstrakcji, jak i oczyszcza¬
nia enzymu, skutkiem czego otrzymuje sie czysta tiypsyne o aktywnosci okolo 16000jedn/mg bez frakcjonowa¬
nia bialek za pomoca soli lub metod chromatograficznych.
Sposobem wedlug wynalazku bialka trzustki bydlecej ekstrahuje sie do kwasu trójchlorooctowego, korzys-
tnie 5%, wypadajacy z ekstraktu osad rozpuszcza sie w kwasie solnym, korzystnie 0,05 N i pozostawia do akty¬
wacji w srodowisku zasadowym, w obecnosci wapnia, a nastepnie dializuje do kwasu solnego, korzystnie 0,001 N
i liofilizuje.
Sposób wedlug wynalazku pozwala w sposób tani, prosty i niepracochlonny otrzymac wysoko oczyszczo¬
ny preparat trypsyny, który jest wolny od soli.
Otrzymywanie trypsyny sposobem wedlug wynalazku zostanie blizej objasnione na przykladzie wykona¬
nia.
Przyklad, lkg swiezej trzustki bydlecej, pobranej nie pózniej niz 2—3 godziny po zabiciu zwierzecia,
pozostawia sie w temperaturze okolo —15°C najlepiej na okres 24 godzin. Nastepnie tkanke rozmraza sie2 100373
czesciowo, w temperaturze pokojowej i rozdrabnia w elektrycznym mlynku do miesa; Rozdrobniona tkanke
zadaje sie dwoma litrami 5% kwasu trójchlorooctowego, oziebionego do temperatury 0-5°C i ekstrahuje w tej
temperaturze przy stalym mechanicznym mieszaniu przez okres 1 godziny. Wyciag oddziela sie przez wirowanie
w temperaturze 0—5°C, saczy przez bibule filtracyjna i pozostawia w temperaturze 0—5°C na okres 24 godzin.
Wypadajacy w tym czasie osad oddziela sie przez wirowanie, zawiesza w okolo 100 ml 0,05 N HC1 i rozpuszcza
przez dialize do stu objetosci tego kwasu wtemperaturze 0—5°C. Otrzymany roztwór bialka doprowadza sie przy
pomocy 0,1 NNaOH najpierw do pH=5-6, wypadajacy osad oddziela sie przez wirowanie i odrzuca, a plyn
doprowadza do pH=8 i dodaje sie chlorek wapnia do koncowego stezenia 0,1 N. Roztwór pozostawia sie na
okres 24 godzin w temperaturze 0—5°C. W tym czasie nieaktywny proenzym przechodzi w enzym. Roztwór
enzymu dializuje sie do rozcienczonego kwasu solnego 0,001 N i liofilizuje. Z 1 kg trzustki uzyskuje sie 1—1,4 g
liofilizowanej trypsyny. Preparat nalezy przechowywac w temperaturze 0-5°C.
Claims (1)
1. Zastrzezenie patentowe Sposób otrzymywania trypsyny z trzustki bydlecej, znamienny t y m, ze bialka trzustki bydlecej ekstrahuje sie do kwasu trójchlorooctowego, korzystnie 5%, a nastepnie wypadajacy z ekstraktu osad bialkowy oddziela sie przez wirowanie i rozpuszcza przez dialize do rozcienczonego kwasu solnego, korzystnie 0,05 N, po czym pH roztworu doprowadza sie do zasadowego, najkorzystniej do pH=8, dodaje chlorek wapnia, najkorzys¬ tniej do stezenia 0,1 N, a po 24 godzinach aktywna trypsyne dializuje sie do kwasu solnego, korzystnie 0,001 N i liofilizuje. Prac. Poligraf. UP PRL naklad 120+18 Cena 45 zl
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL19404176A PL100373B1 (pl) | 1976-11-28 | 1976-11-28 | Sposob otrzymywania trypsyny z trzustki bydlecej |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL19404176A PL100373B1 (pl) | 1976-11-28 | 1976-11-28 | Sposob otrzymywania trypsyny z trzustki bydlecej |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL100373B1 true PL100373B1 (pl) | 1978-09-30 |
Family
ID=19979592
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL19404176A PL100373B1 (pl) | 1976-11-28 | 1976-11-28 | Sposob otrzymywania trypsyny z trzustki bydlecej |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL100373B1 (pl) |
-
1976
- 1976-11-28 PL PL19404176A patent/PL100373B1/pl unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Waxman | [49] Calcium-activated proteases in mammalian tissues | |
| Batista | Recovery of proteins from fish waste products by alkaline extraction | |
| Katz et al. | Adenosinetriphosphatase activity of cardiac myosin: Comparison of the enzymatic activities and activation by actin of dog cardiac, rabbit cardiac, rabbit white skeletal and rabbit red skeletal muscle myosins | |
| Larsen et al. | The Basic Proteins of Cobra Venom: I. Isolation and Characterization of Cobramines A and B | |
| US4470969A (en) | Process for producing a concentrate of coagulation factors VII and VIIa | |
| NO177787B (no) | Fremgangsmåte for rensing av annexiner | |
| HASHIMOTO et al. | Purification and properties of factors in yeast mitochondria stabilizing the F 1 F 0-ATPase-inhibitor complex | |
| US12325868B2 (en) | Purified fish proteases with high specific activities and its process of production | |
| PL100373B1 (pl) | Sposob otrzymywania trypsyny z trzustki bydlecej | |
| Rucker | [36] Isolation of soluble elastin from copper-deficient chick aorta | |
| Honda et al. | Characterization of protein components of human urinary crystal surface binding substance | |
| Goldspink et al. | Studies on proteolytic activity in commercial myoglobin preparations | |
| CZ269798A3 (cs) | Způsob čištění proteaz, podobných thrombinu, z hadího jedu | |
| US5288856A (en) | Method of isolating acid-stable, biologically active proteins | |
| Slotta et al. | Comparative studies on native and acid-treated plasminogens | |
| US4610815A (en) | Process for producing and obtaining anaphylatoxin- and cocytotaxin-containing leucotaxine preparations and of anaphylatoxin and cocytotaxin proteins in molecularly homogeneous, biologically active form | |
| US2893920A (en) | Pro-elastase and preparation thereof | |
| Tandon et al. | Inhibitors of in vitro mineralization from rabbit aorta and their role in biomineralization | |
| White et al. | A novel method for the isolation of calsequestrin from porcine skeletal muscle sarcoplasmic reticulum | |
| Pichová et al. | Molecular characteristics of pepsinogen and pepsin from duck glandular stomach | |
| ASTRUP et al. | Purification of Renin by Means of Protein-Precipitating Agents | |
| Tsvetkov et al. | A method for preparation of dry thrombin for topical application | |
| SU578836A3 (ru) | Способ получени орготеина | |
| RU1287593C (ru) | Способ получени щелочной фосфатазы | |
| EP0273780B1 (fr) | Procédé d'isolation de protides biologiquement actifs, stables en milieu acide |