NO945001L - Steroide glykosider for behandling av hyperkolestrolemi - Google Patents

Abstract

Visse steroide glykosider er anvendelige som hypokolesterolemimidler og antiaterosklerose-midler.

Description

Bakgrunn for oppfinnelsen

Denne oppfinnelse vedrører steroide glykosider og fremgangsmåter for anvendelse av samme, særlig som hypo-kolesterolemimidler og antiaterosklerosemidler hos pattedyr.

Mange kjente produkter som har hypokolesterolemiaktivitet er tverrbundete syntetiske polymerderivater, f.eks. av polystyren. F.eks. har tverrbundede, vannuløselige, gallesyre-bindende polystyren-baserte harpikser, f.eks. Cholestyramine®-midler, en sandaktig "munn-følelse", og har således dårlig palatabilitet. Dessuten har disse harpiksperler typisk en lav in vivo effektivitet. Den effektive hypokolesterolemidose av disse materialer er således svært stor, typisk 18-24 g formu-lert produkt pr. dag. Andre kjente polymerer som har hypokolesterolemiaktivitet omfatter det naturlige produkt chitosan og chitosanderivater som beskrevet i europeisk søknad pub. nr. 0212145. Den effektive hypokolesterolemidosen av disse materialer er imidlertid også høy.

Andre kjente hyperkolesterolemikontrollerende midler omfatter planteekstrakter slik som "alfalfa saponiner". Disse planteekstrakter er imidlertid av variabel sammensetning, og inneholder signifikante mengder av unyttige kjemiske substanser. P.g.a. variasjonene i sammensetning er det vanskelig å sette en standard dosering eller forutsi de forurensninger som er tilstede. Slike ekstrakter er således ikke vel egnet for anvendelse av mennesker. Rensing av disse ekstrakter ville dessuten være dyrt. Som et alternativ vil visse syntetisk fremstilte, rene "sapogenin-avledede" forbindelser f.eks. substanser sammensatt av spirostan, spirosten eller sterol-avledede forbindelser nedsette kolesterolabsorpsjonen mer effektivt enn alfalfaekstrakter på vektbasis, og kan således administreres i doser av rimelig størrelse. Fordi den kjemiske sammensetning av disse substanser er kjent og fordi de kan syntetiseres med høy grad av renhet, er de egnet for anvendelse av et hvilket som helst varmblodig dyr, innbefattet mennesker.

Dersom de ikke administreres i massive mengder vil rene sapongeniner imidlertid ikke signifikant inhibere absorpsjonen av kolesterol. Det er bare når de er kompoundert med en annen gruppe at sapogeninene har den ønskede effekt. Eksempler på slike sapogeninforbindelser er forbindelser av tigogenin og diosgenin, særlig glykosider derav. P.K. Kintia, lu. K. Vasilenko, G.M. Gorianu, V.A. Bobeiko, I.V. Suetina, N.E. Mashchenko, Kim. Pharm. Zh., 1981, 15(9), 55 beskriver 3-0-(/3-D-galaktopyranosyl)hekogenin og dets anvendelse som hypo-kolesterolemimiddel. U.S. patentene nr. 4.602.003 og 4.602.005 beskriver visse steroide glykosider, særlig 3-0-(/J-D-glukopyranosyl) tigogenin og 3-0- (/3-D-cellobiosyl) tigogenin og deres anvendelse for kontroll av hyperkolesterolemi. 3-0-(/3-D-cellobiosyl) tigogenin har overlegen hypokolesterolemiaktivitet sammenlignet med f.eks. kolestyramin.

Dessuten har det vært publisert visse andre steroide glykosider beskrevet nedenfor, disse publikasjoner gjelder imidlertid ikke hypokolesterolemiaktivitet. "Structural Features of theAntioxidant and fungicidal Activity of Steroid Glycosides", Dimoglo, A. S.; Choban I. N.; Bersuker, I.B.; Kintya, P. K.; Balashova, N.N.; Bioorg. Khim, 11(3), 408-413,1985 beskriver rockogenin/?-D-galaktopyranosid og tigogenin D-laktosid. "Preparation and Properties of Some New Steroid/3-D-Glucopyranosides,/9-D-Glucopyranosiduronic Acids, and Derivaties", Schneider, J.J.; Carb. Research, 17, 199-207, 1971 beskriver tigogenin /3-D-glukopyranuronosid. "Sterol Glycoside with Activity as Prostaglandin Synthetase Inhibitor", Pegel, K.H.; Walker, H.; US patent 4.260.603,

7. april, 1981 beskriver hekogenin /3-D-glukopyranosid. "Hemolytic Properties of Synthetic Glycosides", Segal, R.; Shud, F.; Milo-Goldzweig, i.; J. Pharm. Sei., 67 (11) 1589-1592, 1978 beskriver tigogenin /3-D-maltosid, tigogenin/9-L-fukopyranosid, smilagenin /3-maltosid og tigogenin a-L-rhamno-sid. "Steroid Glycosides from the Roots of Capsicum Annuum II: The Structure of the Capsicosides", Gutsu, E.V.; Kintya, P.K.; Lazurevskii, G.V.; Khim. Prir. Soedin., (2), 242-246, 1987 beskriver tigogenin a-D-arabanopyranosid og tigogenin D-galaktopyranosid. "Molluscicidal Saponins from Cornus Florida L.", Hostettmann, K.; Hostettmann-Kaldas, M. ; Nakanishi, K.; Heiv. Chim. Acta, 61, 1990-1995, 1978 beskriver smilagenin /?-D-galaktopyranosid. "Steroidal Saponins from Several Species of Lilliflorae Plants", Yang, C.; Li, K.; Ding, Y.; Yunnan Zhiwu Yanjiu Zengkan, Suppl. 3, 13-23, 1990 beskriver (25S) - hekogenin cellobiosid. "Determination of the Absolute Configuration of a Secondary Hydroxy Group in a Chiral Secondary Alcohol Using Glycosidation shifts in Carbon-13 NMR Spectroscopy", Seo, S.: Tomita, Y.; Tori; K.; Yoshimura, Y.; J. Am. Chem. Soc., 100(11), 3331-3339, 1978 beskriver smilagenin Ø-glukosid og smilagenin at-glukosid. "Steroid Glycosides from Asparagus Officinalis", Lazurevskii, G. V.; Goryanu, G. M.; Kintya, P.K.; Dokl. Akad. Nauk. SSSR, 231(6), 1479-81, 1976 beskriver sarsasapogenin/3-glukosid.

Selv om hypokolesterolemiforbindelsene beskrevet ovenfor utgjør et signifikant bidrag til teknologien, er det en konti-nuerlig forskning på dette området for å finne frem til forbe-drede hypokolesterolemifarmasøytika.

Sammendrag av oppfinnelsen

Denne oppfinnelse vedrører steroide glykosider, særlig spirostanylglykosider, som er anvendelige som hypokole-sterolemimidler og antiaterosklerosemidler. Forbindelsene ifølge denne oppfinnelse har formelen

hvor enten (A):Q<1>er karbonyl Q<2>er karbonyl, metylen, R<1>0-alkylen(C2-C3;

R^-O-alkylen (C2-C3)

eller

Q<*>og Q<5>begge er metylen;

og hvor

R<1>er

Ø-D-glukopyranosyl, jØ-D-glukopyranuronosyl, 0/3-D-2-acetamido-2-deoksy-glukopyranosyl, /3-D-galaktopyranosyl, Ø-D-fukopyranosyl, p- L- fukopyranosyl, /3-D-xylopyranosyl, Ø-L-xylopyranosyl a-D-arabanopyranosyl, a-L-arabanopyranosyl, a-D-cellobiosyl,

jS-D-cellobiosyl,

/3-D-laktosyl,

Ø-D-maltosyl,

/?-D-gentiobiosyl, 3-0-/?-D-galaktqpyranosyl-a-D-arabanopyranosyl eller Ø-D-maltotriosyl;

eller (B):

Q<1>, Q<*>og Q<5>alle er metylen;

ellerR<1>0-alkylen(C2-<C>3)

og hvor

R<1>er

/3-D-glukopyranosyl, Ø-D-glukopyranuronosyl, /?-D-2-acetamido-2-deoksy-glukopyranosyl, /3-D-fukopyranosyl, ( 3- L- f ukopyranosyl, /3-D-xylopyranosyl, /3-L-xylopyranosyl a-D-arabanopyranosyl, a-L-arabanopyranosyl,/3-D-eellobiosyl,/9-D-laktosyl,/3-D-maltosyl, /3-D-gentiobiosyl, 3-o-/?-D-galaktopyranosyl-a-D-arabanopyranosyl eller /J-D-maltotriosyl;

eller (C):

Q<1>, Q 1* og Q<5>alle er metylen;Q2 er karbonyl;

eller

R<1>0-alkylen(C2-<C>3)

C25er (R) ;

og hvor

R<1>er

/3-D-glukopyranuronosyl,

/3-D-2-acetamido-2-deoksy-glukopyranosyl, /3-D-fukopyranosyl,

/3-L-f ukopyranosyl,

/3-D-xylopyranosyl,

/3-L-xylopyranosyl

a-D-arabanopyranosyl,

a-L-arabanopyranosyl,

/3-D-cellobiosyl,

/3-D-laktosyl,

/3-D-maltosyl,

/3-D-gentiobiosyl,

3-0-/3-D-galaktopyranosyl-a-D-arabanopyranosyl eller /3-D-maltotriosyl;

eller (D):

Q<1>,Q<2>, Q'' ogQ<5>alle er metylen; R<1>0-alkylen(C2-C3)

ellerR<1>0-alkylen(C2-<C>3)

og hvor

R<1>er

/3-D-2-acetamido-2-deoksy-glukopyranosyl, /3-D-f ukopyranosyl,

/3-D-xylopyranosyl,

/3-L-xylopyranosyl

a-L-arabanopyranosyl,

/3-D-cellobiosyl,

/3-D-gentiobiosyl,

3-O-Ø-D-galaktopyranosyl-a-D-arabanopyranosyl eller /3-D-maltotriosyl;

eller (E):Q<1>,Q<2>ogQ<5>alle er metylen;

Q<4>er karbonyl eller

C5er alfa;

C25er (R) ; og hvor

R<1>er

/3-D-galaktopyranosyl, /3-D-cellobiosyl, Ø-D-laktosyl,

/3-D-maltosyl eller /3-D-maltotriosyl;

eller (F)<:>c Q<1>, Q<2>og Q<*>alle er metylen;

Q<5>er karbonyl eller

C5er alfa;

C25er (R) ; og hvor

R<1>er

/3-D-galaktopyranosyl,

/3-D-cellobiosyl,

/3-D-laktosyl,

/3-D-maltosyl eller /3-D-maltotriosyl ;

under den forutsetning at (3/3, 5a, 25R)-3-[ (/3-D-cellobiosyl) oksy] spirostan ikke er inkludert.

En første gruppe av foretrukne forbindelser med formel IA består av disse forbindelser hvori Q<1>er karbonyl,

eller Q<2>er metylen, Q<3>er , Q<*>er metylen, Q<5>er metylen, C5hydrogenet er alfa og C25har R-konfigurasjonen. Særlig foretrukket innenfor denne gruppe er forbindelser hvor Q<1>er karbonyl og R<1>er Ø-D-cellobiosyl, a-D-cellobiosyl, /3-D-glukopyranosyl,/3-D-galaktopyranosyl, /3-D-laktosyl, /3-D-maltosyl eller /3-D-maltotriosyl. Særlig foretrukket innenfor denne gruppe er også en forbindelse hvor Q<1>er og R<1>er /3-D-cellobiosyl. En annen særlig foretrukket forbindelse innenfor denne gruppe er en forbindelse hvor Q-1- er

og

R<1>er Ø-D-cellobiosyl.

En andre gruppe av foretrukne forbindelser med formel IA

er forbindelser hvor Q<1>er metylen, Q<2>er

eller Q<4>er metylen, Q<5>er metylen, C5hydrogenet er alfa og C25er (R). Særlig foretrukket innenfor denne andre gruppe er en forbindelse hvor Q<2>er og -R* er /3-D-cellobiosyl. En tredje gruppe av foretrukne forbindelser med formel IA er forbindelser hvor Q<1>er karbonyl, er karbonyl,

, Q<4>er

er metylen, Q<5>er metylen, C5hydrogenet er alfa og C25er (R). Særlig foretrukket innenfor denne gruppen er en forbindelse

hvor Ql er karbonyl,Q<2>er karbonyl ogR<1>er/3-D-cellobiosyl. En annen særlig foreturkket forbindelse innenfor denne gruppe

er en forbindelse hvor Q<1>er karbonyl, Q<2>, er

og R<1>er /3-D-cellobiosyl. En annen særlig foretrukket forbindelse innenfor denne gruppen er en forbindelse hvor Q<1>er karbonyl, l Q<2>er og r! er /3-D-laktosyl. En annen særlig foretrukket forbindelse innenfor denne gruppe er en forbindelse hvor Q<1>er Q<2>er karbonyl og R-<*->er /3-D-cellobiosyl. En annen særlig foretrukket forbindelse innenfor denne gruppe er en forbindelse hvor Q<1>er

Q<2>er karbonyl ogR<1>er /3-D-cellobiosyl.

En fjerde gruppe av foretrukne forbindelser med formel IA er forbindelser hvor Q<1>er metylen, Q<2>er karbonyl, Q<3>er

Q<4>er metylen,Q<5>er metylen, C5hydrogenet er alfa og

C25er (R). Særlig foretrukket innenfor denne fjerde gruppe er forbindelser hvor R<1>er /3-D-laktosyl eller/3-D-cellobiosyl.

En femte gruppe av foretrukne forbindelser med formel IA er forbindelser hvor Q<1>og Q<2>begge er metylen, Q<3>er

Q<4>ogQ<5>begge er metylen og C25er (R). Særlig

foretrukket innenfor denne femte gruppe er en forbindelse hvor C5hydrogenet er alfa og R<1>er /3-D-gentiobiosyl. En annen særlig foretrukket forbindelse innenfor denne gruppe er en forbindelse hvor C5hydrogenet er beta og R<1>er/3-D-cellobiosyl .

En sjette gruppe av foretrukne forbindelser med formel IA er forbindelser hvor Q<1>,Q<2>og Q5 alle er metylen, Q<3>er

Q<4>er karbonyl, C5hydrogenet er alfa og C25er (R).

Særlig foretrukket innenfor denne gruppe er en forbindelse hvorR<1>er/3-D-cellobiosyl.

En syvende gruppe av foretrukne forbindelser med formel IA er forbindelser hvor Q<1>, Q<2>og Q<4>alle er metylen,Q<3>er

Q<5>er karbonyl, C5h<y>drogenet er alfa og C25er (R).

Særlig foretrukket innenfor denne gruppe er en forbindelse hvorR<1>er /3-D-cellobiosyl.

Ytterligere et annet trekk ifølge denne oppfinnelsen gjelder en fremgangsmåte til å kontrollere hyperkolesterolemi eller aterosklerose hos et pattedyr ved administrering til et pattedyr som lider av hyperkolesterolemi eller aterosklerose en hyperkolesterolemi- eller aterosklerosekontrollerende mengde av et spirostanylglykosid med formel I

hvor enten (A):Q<1>er metylen, karbonyl, Q<2>er karbonyl, metylen

eller Q<3>er R<1>0-alkylen(C2-C3)

ellerR<1>0-alkylen(C2-<C>3)

Q'1 og Q<5>begge er metylen;

og hvor

R<1>er

/3-D-glukopyranosyl, /3-D-glukopyranuronosyl, /3-D-2-acetamido-2-deoksy-glukopyranosyl, /3-D-galaktopyranosyl, /3-D-f ukopyranosyl, ,-. /3-L-f ukopyranosyl,

/3-D-xylopyranosyl,

/3-L-xylopyranosyl

a-D-arabanopyranosyl, a-L-arabanopyranosyl, a-D-cellobiosyl,

/3-D-cellobiosyl,

/3-D-laktosyl,

/3-D-maltosyl,

/3-D-gentiobiosyl,

3-0-/3-D-galaktopyranosyl-a-D-arabanopyranosyl eller /3-maltotriosyl;

eller (B):

Q<1>, Q<2>og Q<5>alle er metylen;

Q<4>er karbonyl eller

C5er alfa;

C25er (R);

og hvor

R<1>er

/3-D-galaktopyranosyl,

/3-D-cellobiosyl,

/3-D-laktosyl,

/3-D-maltosyl eller

/3-D-maltotriosyl;

eller (C):

Q<1>,Q2 og Q<4>alle er metylen; Q<3>er

eller Q<5>er karbonyl eller

C5er alfa; c

C25er (R);

og hvor;

R<1>er

/3-D-galaktopyranosyl,

/3-D-cellobiosyl,

/3-D-laktosyl,

/3-D-maltosyl eller

/3-D-maltotriosyl ;

under den forutsetning at

(3/3, 5a, 25R) -3- [ (a-D-cellobiosyl) oksy ] spirostan, (3/3, 5a, 25R) -3-[ (/3-D-glukopyranosyl) oksy]spirostan, (3/3, 5a, 25R) -3-[ (/3-D-cellobiosyl) oksy] spirostan eller

( 3/3, 5a, 25R) -3- [ (jS-D-galaktopyranosyl) oksy ] spirostan-12-on ikke er inkludert.

En første gruppe av foretrukne forbindelser med formel I er forbindelser hvor Q<1>, Q<2>, Q<4>og Q<5>er metylen, C25er (R)

og Q<3>er

Særlig foretrukket innenfor denne gruppen er forbindelser hvor C5hydrogenet er alfa og RI er /3-D-<g>luko-

pyranuronosyl,/3-D-maltosyl, /3-D-laktosyl, /3-D-gentiobiosyl eller /3-D-galaktopyranosyl. En annen særlig foretrukket forbindelse innenfor denne gruppe er en forbindelse hvor C5-hydrogenet er beta og R1 er /3-D-cellobiosyl.

En andre gruppe foretrukne forbindelser med formel I er

forbindelser hvor Q<1>er karbonyl,

eller , Q<2>er metylen,Q<3>er Q<4>ogQ<5>begge er metylen, C25er (R) og C5hydrogenet er alfa. Særlig foretrukket innenfor denne andre gruppe er forbindelser hvor Q<1>er karbonyl og R<1>er/3-D-cellobiosyl, Q-D-cellobiosyl, /3-D-glukopyranosyl, /3-D-galaktopyranosyl,/3-D-laktosyl,/3-D-maltosyl eller /3-D-maltotriosyl. En annen særlig foretrukket forbindelse innenfor denne andre gruppe er en forbindelse hvor Q^- er og R<1>er/3-D-cellobiosyl. En annen særlig foretrukket forbindelse innenfor denne andre gruppe er en forbindelse hvor Q<1>er ogR<1>er/3-D-cellobiosyl. En tredje gruppe av foretrukne forbindelser med formel I er forbindelser hvor Q<1>er metylen,Q<2>er karbonyl, eller Q<3>er Q<4>og Q<5>begge er metylen, C25er (R) og C5hydrogenet er alfa. Særlig foretrukket innenfor denne tredje gruppe er forbindelser hvor Q<2>er karbonyl og R<1>er/3-D-cellobiosyl eller/3-D-laktosyl. Andre særlig foretrukne forbindelser innenfor denne tredje gruppe er forbindelser hvor Q<2>er karbonyl,

og R<1>er/3-D-cellobiosyl eller

/3-D-galaktopyranosyl.

En fjerde gruppe av foretrukne forbindelser med formel I

er forbindelser hvor Q<1>er karbonyl,

eller Q<2>er karbonyl, eller , Q<3>er , Q<4>og Q<5>begge er metylen, C5hydrogenet er alfa og C25er (R) . Særlig foretrukket innenfor denne fjerde gruppen er en forbindelse hvor Q<1>er karbonyl,Q<2>er karbonyl og R<1>er/3-D-cellobiosyl. Særlig foretrukket innenfor denne fjerde gruppe er forbindelser hvorQ<1>er karbonyl, Q<2>er og R<1>er/3-D-cellobiosyl eller /3-laktosyl. En annen særlig foretrukket forbindelse innenfor denne gruppen er en forbindelse hvori Q<1>er Q<2>er karbonyl, ogR<1>er/3-D-cellobiosyl. En annen særlig foretrukket forbindelse innenfor denne gruppe er en forbindelse hvor Q<1>er

, Q<2>er karbonyl ogR<1>er

/3-D-cellobiosyl.

En femte gruppe av foretrukne forbindelser med formel I er forbindelser hvor Q<1>, Q<2>og Q<5>alle er metylen, Q<3>er

Q<4>er karbonyl, C5hydrogenet er alfa og C25er (R).

Særlig foretrukket innenfor denne gruppe er en forbindelse hvor R<1>er/3-D-cellobiosyl.

En sjette gruppe av foretrukne forbindelser med formel I er forbindelser hvor Q<1>, Q<2>og Q<4>alle er metylen,Q<3>er

Q<5>er karbonyl, C5hydrogenet er alfa og C25er (R).

Særlig foretrukket innenfor denne gruppe er en forbindelse hvorR<1>er/3-D-cellobiosyl.

Denne oppfinnelse vedrører også farmasøytiske preparater for kontroll av hyperkolesterolemi eller aterosklerose hos pattedyr, og som omfatter en forbindelse med formel IA og en farmasøytisk akseptabel bærer.

Ytterligere et annet trekk ifølge denne oppfinnelse angår et preparat omfattende et hydrat av en forbindelse med formel

IA.

Forbindelsene med formlene IA og I er definert heri som den ene enantiomer som har den absolutte stereokjemi gjengitt i formlene hhv. IA og I.

Andre trekk og fordeler vil være åpenbare ut i fra denne beskrivelse og kravene som beskriver oppfinnelsen.

Detaljert beskrivelse av oppfinnelsen

Formel IA forbindelsene er et undersett av formel I forbindelsene. I de følgende detaljerte beskrivelser av oppfinnelsen (f.eks. hvordan utføre oppfinnelsen, hvordan anvende oppfinnelsen) skal referanse til formel I gruppen av forbindelser i seg selv således omfatte formel Ia forbindelsene .

Følgende beskrivelse av reaksjonsskjerna I, II & III beskriver fremstilling av formel I forbindelsene hvor Q<4>og Q<5>begge er metylen.

Ifølge reaksjonsskjema I kan de ønskede forbindelser med formel I, hvori Q<1>, Q<2>og Q<3>er som definert ovenfor, fremstilles ved deacetylering av den hensiktsmessige alfaper-acetylerte formel III forbindelse eller betaperacetylerte formel IV forbindelse hvor Q^- ogQ<2>er som definert ovenfor og X er enten en binding eller alkylen-O-.

Typisk gjennomføres deacetyleringen ved å kombinere formel III eller IV forbindelsen med en nukleofil base slik som natriummetoksyd eller kaliumcyanid i et løsningsmiddel slik som metanol, tetrahydrofurn, n-propanol eller blandinger derav ved forhøyet temperatur på ca. 40"C til ca. 100"C (typisk med tilbakeløp) og trykk på 3 kPa til ca. 345 kPa (typisk omgivende) i ca. 0,25 timer til ca. 2 timer. For formel I forbindelser, når sukkeret er glukopyranuronosyl, blir den resulterende deacetylerte forbindelse dessuten videre hydroly-sert ved f.eks. eksponering for natriumhydroksyd. Om ønsket kan også disse forbindelser hvor enten Q<*>eller Q<2>er karbonyl, reduseres under dannelse av de tilsvarende alkoholer i en fremgangsmåte alternativ til å utføre reduksjonen før koblingen (beskrevet i reaksjonsskjema IV og den medfølgende tekst). På tilsvarende måte, hvor det er hensiktsmessig, kan disse forbindelser hvor enten Q<1>eller Q<2>er hydroksy, oksy-deres under dannelse av den tilsvarende karbonyl i en fremgangsmåte alternativ til å utføre oksydasjonen før kobling.

Den ønskede formel III forbindelse hvor Q^ og Q<2>er som definert ovenfor, kan fremstilles ved anomerisering av den hensiktsmessige formel IV forbindelse hvor Q<1>og Q<2>er som definert ovenfor. De stereokjemiske termer alfa og beta refererer til konfigurasjonen av bindingskarbonet i sukkeret.

Typisk gjennomføres anomeriseringen ved behandling med en mineralsyre slik som hydrogenbromidsyre i et vannfritt aprotisk løsningsmiddel slik som metylenklorid ved temperaturer på 20"C til ca. 40°C (typisk omgivende) i minst 24 timer, typisk i flere dager. For arabanopyranosylderivater oppnås imidlertid alfaanomeren direkte fra sakkarid-steroidkoblingen beskrevet nedenfor og betaanomeren fra fremgangsmåten ovenfor (dvs. at nomenklaturen reverserer).

Ifølge reaksjonsskjema II kan de ønskede formel IV forbindelser hvorQ<1>og Q<2>er som definert ovenfor, fremstilles ved kobling av det egnede acetylerte sukkerhalogenid (f.eks. bromid) og steroid. Nærmere bestemt, for de formel IV forbindelser, hvor sukkeret er forskjellig fra/3-D-maltosyl,/3-D-gentiobiosyl eller/3-D-2-acetamido-2-deoksy-glukopyranosyl, blir det anvendt en sinkfluorid befordret kobling av den egnede formel V forbindelse (hvor Q<1>og Q<2>er som definert ovenfor og X er enten en binding eller alkylen-O-) og peracetylert sukkerhalogenid, og for de formel IV forbindelser hvor sukkeret er/3-D-maltosyl,/3-D-gentiobiosyl eller /3-D-2-acetamido-2-deoksy-glukopyranosyl, blir det anvendt en kvikk-sølv (II) bromid og kvikksølv(II)cyanid-befordret kobling av den hensiktsmessige formel VI forbindelse (f.eks. trimetylsilyl-eter av formel V forbindelsen hvor Q<1>og Q<2>er som definert ovenfor, og X er enten en binding eller alkylen-O-) og peracetylert sukkerhalogenid.

Generelt foregår den sinkfluoridbefordrede kobling av formel V forbindelsen og det peracetylerte sukkerbromid i et ikke-protisk, vannfritt reaksjonsinert løsningsmiddel (f.eks. acetonitril) ved en temperatur på ca. 20°C til ca. 100°C i ca.0,5til ca. 12 timer. Typisk anvendes ca. 0,5 til ca. 4 ekvivalenter (basert på formel V forbindelsen) sinkfluorid og ca.0,5 til ca. 3 ekvivalenter acetylert sukkerbromid. Fortrinnsvis er koblingen syrekatalysert, og det blir spesielt foretrukket at hydrohalogensyre dannet under reaksjonen blir anvendt som syrekatalysator. De ønskede forbindelser kan fremstilles ved et trykk på 3 til 345 kPa, selv om det typisk anvendes omgivende trykk. I en foretrukket isoleringsteknikk kan glykosidene felles ut fra den rå filtrerte reaksjons-blanding, (f.eks. acetonitrilproduktløsningen) ved tilsetning av ca. 25% til 75% vann og resten alkohol (f.eks. metanol). Utfelling av produktet fra vandig metanol/acetonitril krever mindre bearbeiding enn en ekstraktiv isolering, og gir et produkt med høyere renhet.

Generelt gjennomføres den kvikksølv(II)bromid og kvikk-sølv (II) cyanidbefordrede kobling av formel VI forbindelsen og det acetylerte sukkerbromid i et aprotisk, vannfritt løsnings-middel slik som metylenklorid ved en temperatur på ca. 20°C til ca. 100"C i ca. 0,5 til 6 timer. Typisk anvendes ca. 0,5 til ca. 4 ekvivalenter (basert på formel IV forbindelse) kvikksølv(II)bromid og kvikksølv(II)cyanid og ca. 0,5 til ca. 3 ekvivalenter peracetylert sukkerbromid (f.eks./3-D-maltosyl,/3-D-gentiobiosyl eller /3-D-2-acetamido-2-deoksy-glukopyranosyl). De ønskede forbindelser kan fremstilles ved et trykk på 3 til 345 kPa, selv om det typisk anvendes omgivende trykk. Fortrinnsvis blir de isolert som beskrevet for den sinkfluoridbefordrede kobling av formel V forbindelsen ovenfor.

De ønskede formel VI forbindelser hvor Q<1>og Q<2>er som definert ovenfor og X er enten en binding eller alkylen-O-, kan fremstilles ved silylering av den egnede formel V forbindelse, hvor Q<1>og Q<z>er som definert ovenfor og X er enten en binding eller alkylen-O-.

Generelt blir formel V forbindelsen, en base slik som trietylamin og en aktivert trialkylsilylforbindelse (f.eks. trimetylsilyltrifluormetansulfonat eller trimetylsilylklorid) omsatt i et aprotisk, vannfritt løsningsmiddel slik som metylenklorid ved en temperatur mindre enn ca.10"C til ca. 0,5 timer til ca.2timer.

Ifølge reaksjonsskjema III kan de ønskede formel V forbindelser hvor Q<1>og Q<2>er som definert ovenfor og X er alkylen-O-, fremstilles ved reduksjon av den egnede formel VII forbindelse hvor Q<1>og Q<2>er som definert ovenfor.

Generelt gjennomføres reduksjonen ved omsetning av formel VII forbindelsen med litiumaluminiumhydrid i et vannfritt løsningsmiddel slik som tetrahydrofuran ved temperaturer på mindre enn ca. 10"C i ca. 0,5 timer til ca. 3 timer.

De ønskede formel VII forbindelser hvor Q<1>og Q<2>er som definert ovenfor, kan fremstilles ved kobling av den hensiktsmessige formel VIII forbindelse hvor Q<1>og Q<2>er som definert ovenfor, med etyldiazoacetat i nærvær av rhodiumacetatdimer. Formel VIII forbindelsen og etyldiazoacetatet blir således omsatt i et aprotisk løsningsmiddel slik som metylenklorid i nrævær av rhodiumacetatdimer ved omgivende temperatur i ca.0,5 timer til ca. 3 timer.

Utgangsmaterialene for de ovenfor beskrevne reaksjonsskjema (f.eks. etyldiazoacetat, peracetylerte sukker-halogenider) er lett tilgjengelige, eller kan lett syntetiseres av fagfolk på dette området ved anvendelse av konvensjonelle fremgangsmåter i organisk syntese.

Som et hjelpemiddel til fremstilling av steroidene ovenfor vil følgende avsnitt dessuten beskrive fremstillingen av de forskjellige formel VIII forbindelser. Litteratur-referanser for fremstillingen av formel VIII steroid-forbindelser (hvor Q<1>er metylen og Q<2>og stereokjemien for C5hydrogenet og C25karbonet er som definert nedenfor) er beskrevet i tabell I.

Følgende avsnitt beskriver og/eller gir litteratur-referanser for fremstillingen av de forskjellige steroider anvendt som utgangsmaterialer (dvs. den alternative stereokjemi i C3-stillingen og oksygeneringen og forskjellige épi-merer i Cu og C12) fra formel VIII forbindelsene ovenfor beskrevet i tabell I. Vanligvis er fremstillingen av de forskjellige oksygenerte steroider uavhengig av stereokjemien i C3-, C5- og C25-stillingene. Når den egnede stereokjemi i C3-, C5- og C25-stillingene er oppnådd hvor Q<1>og Q<2>begge er metylen eller hvor Q<1>er metylen og Q<2>er karbonyl, kan de forskjellige oksygenerte forbindelser i Q<1>og Q<2>således fremstilles derfra.

Noen av fremstillingsfremgangsmåtene beskrevet heri vil

kreve beskyttelse av fjern funksjonalitet (f.eks. Q<1>, Q<2>ogQ<3>). Behovet for disse beskyttelsesgrupper vil variere avhengig av karakteren av den fjerne funksjonalitet og betingelsene i fremstillingsfremgangsmåtene. Dette behov kan lett bestem-

mes av fagfolk på dette området. For en generell beskrivelse av beskyttelsesgrupper og deres anvendelse, se T.W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York, 191.

Formel VIII forbindelsene hvor Q<1>er metylen, Q<2>er enten metylen eller karbonyl og C3-hydroksy er beta, kan omdannes til de tilsvarende formel VIII forbindelser hvor C3-hydroksy er alfa ved følgende to fremgangsmåter. Disse fremstillings-fremgangsmåter kan anvendes uavhengig av C25stereokjemien.

Dersom Q<2>er karbonyl, blir karbonylen beskyttet som et ketal (f.eks. etylenketal) ved omsetning av steroidet med etylenglykol og en syrekatalysator ifølge fremgangsmåten til Engel og Rakhit, Can. J. Chem. 40, 2153, 1962. Når C5-hydrogenet er alfa, blir C3-hydroksygruppen oksydert til ketonet ved anvendelse av pyridiniumklorkromat (PCC) i metylenklorid ved omgivende betingelser. Deretter blir C3-ketonet redusert med et sterisk hindret reduksjonsmiddel slik som K-Selectride® reduksjonsmiddel, ved lav temperatur i tetrahydrofuran under dannelse av C3-alfaalkoholen ifølge Gondos og Orr, J. Chem. Soc. Chem. Commun. 21, 1239, 1982. Om ønsket, blir Q<2->be-skyttelsesgruppen fjernet med syre, slik som saltsyre, i et hensiktsmessig løsningsmiddel som f.eks. aceton.

For de forbindelser hvor C5-hydrogenet er beta anvendes de samme fremgangsmåter som ble anvendt når C5hydrogenet er alfa, bortsett fra at C3ketonet blir redusert ved anvendelse av natriumborhydrid i etanol under dannelse av C3-alfaalkoholen.

Reaksjonsskjema IV illustrerer reaksjonsmekanismen for å oppnå formel VIII forbindelsene hvor Q<1>og Q<2>er definert ovenfor med utgangspunkt i formel VIII forbindelsen, hvor Q<1>er metylen og Q<2>er karbonyl.

Generelt kan fremstillingsmetodene for disse forbindelser finnes i L. F. Fieser og M. Fieser, Steroids, Reinhold Pub. Corp i, New York, 1959 og referanser deri, med følgende be-skrivende tekst (som er nøkkelen til reaksjonsskjema IV) gir særlige retningslinjer.

Kort ifølge reaksjonsskjema IV fremgangsmåte 1 blir utgangsmaterialet acetylert og bromert ifølge fremgangsmåten beskrevet i J. Chem. Soc, 1956, 4344. Dette mellomproduktet reduseres deretter med litiumaluminiumhydrid og behandles med sølvoksyd ved en fremgangsmåte lik den beskrevet i Heiv. Act. Chim., 1953, 36, 1241. Det resulterende 0-11, 12-epoksyd blir åpnet med trikloreddiksyre, forsåpet og redusert med sink og eddiksyre ved anvendelse av fremgangsmåten beskrevet i J. Chem. Soc, 1956, 4330 under dannelse av produktet vist for metode 1.

I metode 2 blir utgangsmaterialet selektivt acetylert ved anvendelse av fremgangsmåten beskrevet i J. Chem. Soc. 1956, 430. Ved anvendelse av fremgangsmåten beskrevet i Org. Syn., 1976, 55, 84, blir det resulterende produkt oksydert med kromtrioksyd og pyridin. Ved anvendelse av fremgangsmåten beskrevet i Synthesis, 1973, 790, blir det resulterende produkt forsåpet med kaliumcyanid i vann, metanol og THF under dannelse av produktet vist for metode 2.

I metode 3 blir utgangsmaterialet omdannet til det tilsvarende toluensulfonylhydrazon som i sin tur behandles med natriummetoksyd ved anvendelse av en fremgangsmåte lik den beskrevet i J. Am. Chem. Soc, 1954, 76, 4013. Det resulterende 11-en-produkt blir oksydert med osmiumtetroksyd og N-metylmorfolin-N-oksyd ifølge fremgangsmåten beskrevet i Tetrahedron Letters, 1976, 1973 under dannelse av produktet vist for metode 3.

I metode 4 blir utgangsmaterialet monobromert ved anvendelse av en fremgangsmåte beskrevet i US patent nr. 3.178.418. Hydrolyse av dette mellomprodukt ved anvendelse av fremgangsmåten beskrevet i J. Chem. Soc, 1956, 4330 gir produktet vist for metode 4.

I metodene 5 og 6 blir utgangsmaterialet redusert med litiumaluminiumhydrid ifølge fremgangsmåten beskrevet i J. Am. Chem. Soc, 1954, 76, 4013. De to produkter vist i metodene 5 og 6 blir adskilt kromatografisk.

I metode 7 blir utgangsmaterialet redusert med litiumaluminiumhydrid ifølge fremgangsmåten beskrevet i J. Am. Chem. Soc, 1951, 73, 1777 under dannelse av det viste produkt.

I metode 8 blir utgangsmaterialet redusert med litium og ammoniakk ifølge fremgangsmåten beskrevet i J. Am.Soc,1953, 75, 1282 under dannnelse av det viste produkt.

I metode 9 blir utgangsmaterialet acetylert ifølge fremgangsmåten beskrevet i J. Am. Chem. Soc, 1955, 77, 1632 under dannelse av en blanding av acetater, hvorifra 3,ll-diacetatet kan isoleres. Den ubeskyttede 12-alkohol blir deretter oksydert med kromtrioksyd og pyridin ifølge fremgangsmåten beskrevet i Org. Syn., 1976, 55, 84. Forsåpning av acetatene gir produktet vist for metode 9.

I metode 10 blir utgangsmaterialet diacetylert ved anvendelse av fremgangsmåten beskrevet i J. Chem. Soc, 1956, 4330. Diacetatet blir redusert med kalsium og ammomoniakk ved anvendelse av fremgangsmåten beskrevet i J. Chem. Soc 1956, 4334

under dannelse av produktet vist for metode 10.

I metode 11 blir utgangsmaterialet redusert med litium og ammoniakk ifølge fremgangsmåten beskrevet i J. Am. Chem. Soc, 1953, 75, 1282 under dannelse av det viste produkt.

I metode 12 blir utgangsmaterialet redusert med litiumaluminiumhydrid ifølge fremgangsmåten beskrevet i J. Am. Chem. Soc, 1951, 73, 1777 under dannelse av det viste produkt.

I metode13 blir utgangsmaterialet selektivt beskyttet på3-alkoholen med t-butyldimetylklorsilan og imidazol ved anvendelse av fremgangsmåten beskrevet i J. Am. Chem. Soc, 1972,94, 6190. Ved anvendelse av fremgangsmåten beskrevet i Org. Syn. 1976, 55, 84, blir produktet oksydert med kromtrioksyd og pyridin. 3-alkoholen blir deretter desilylert med hydrogenfluoridsyre i acetonitril ved anvendelse av fremgangsmåten beskrevet i J. Am. Chem. Soc, 1972, 94, 6190 under dannelse av produktet vist for metode 13.

I metode 14 blir utgangsmaterialet selektivt beskyttet på3-alkoholen med t-butyldimetylklorsilan og imidazol ved anvendelse av fremgangsmåten beskrevet i J. Am. Chem. Soc, 1972,94, 6190. Det resulterende mellomprodukt reduseres med litiumaluminiumhydrid ved anvendelse av fremgangsmåten beskrevet i J. Am. Chem. Soc, 1951, 73, 1777. Det resulterende mellomprodukt blir selektivt acetylert på 12-alkoholen, sily lert på ll-alkoholen med trimetylsilyltriflat og 2,6-lutidin ved anvendelse av fremgangsmåten beskrevet i Tetrahedron Letters, 1981, 22, 3455, og deretter deacetylert på 12-alkoholen med litiumaluminiumhydrid og en vandig ammoniumklorid-undertrykking. 12-alkohoen blir oksydert med kromtrioksyd og pyridin i metylenklorid ved anvendelse av fremgangsmåten beskrevet i Org. Syn., 1976, 55, 84, og deretter desilylert med flussyre i acetonitril ved anvendelse av fremgangsmåten beskrevet i J. Am. Chem. Soc, 1972, 94, 6190 under dannelse av produktet vist i metode 14.

Ifølge reaksjonsskjema V kan de ønskede formel IA forbindelser hvor Q<1>, Q<2>, Q<3>, Q<*>, Q<5>, C5og C25er som beskrevet i (E) ovenfor (dvs. oksygenert i Q<*->stillingen) fremstilles ved følgende fremgangsmåter.

Den ønskede formel X forbindelse kan fremstilles ved oksydasjon av tigogenin IX. Generelt gjennomføres oksydasjonen ved omsetning av tigogenin med pyridiniumklorkromat i et reaksjonsinert løsningsmiddel slik som metylenklorid ved CC til omgivende temperatur i ca. 2 timer til ca. 10 timer.

Den ønskede formel XI forbindelse kan fremstilles ved bromering av formel X forbindelsen etterfulgt av en elimine-ringsreaksjon. Typisk gjennomføres bromeringen ved omsetning av formel X forbindelsen med brom i tetrahydrofuran ved en temperatur på ca. -78°C, etterfulgt av oppvarming til omgivende temperatur i ca. 1 time til ca. 3 timer. Eliminerings-reaksjonen gjennomføres ved omsetning av det bromerte produkt fremstilt ovenfor med litiumbromid og litiumkarbonat i et polart aprotisk løsningsmiddel slik som dimetylformamid ved en temperatur på ca. 100°C til ca. 140°C i ca. 1 time til ca. 4 timer.

Den ønskede formel XII forbindelse kan fremstilles ved epoksydering av den hensiktsmessige formel XI forbindelse etterfulgt av reduksjon med litiumaluminiumhydrid. Generelt gjennomføres epoksyderingen ved omsetning av formel XI forbindelsen med hydrogenperoksyd og natriumhydroksyd i et polart, protisk løsningsmiddel slik som metanol ved omgivende temperatur i ca. 2 timer til ca. 6 timer. Reduksjonen gjennomføres lert på 11-alkoholen med trimetylsilyltriflat og 2,6-lutidin ved anvendelse av fremgangsmåten beskrevet i Tetrahedron Letters, 1981, 22, 3455, og deretter deacetylert på 12-alkoholen med litiumaluminiumhydrid og en vandig ammoniumklorid-undertrykking. 12-alkohoen blir oksydert med kromtrioksyd og pyridin i metylenklorid ved anvendelse av fremgangsmåten beskrevet i Org. Syn., 1976, 55, 84, og deretter desilylert med flussyre i acetonitril ved anvendelse av fremgangsmåten beskrevet i J. Am. Chem. Soc, 1972, 94, 6190 under dannelse av produktet vist i metode 14.

Ifølge reaksjonsskjema V kan de ønskede formel IA forbindelser hvor Q<1>, Q<2>, Q<3>, Q", Q<5,><C>5og C25er som beskrevet i (E) ovenfor (dvs. oksygenert i Q<4->stillingen) fremstilles ved følgende fremgangsmåter.

Den ønskede formel X forbindelse kan fremstilles ved oksydasjon av tigogenin IX. Generelt gjennomføres oksydasjonen ved omsetning av tigogenin med pyridiniumklorkromat i et reaksjonsinert løsningsmiddel slik som metylenklorid ved 0"C til omgivende temperatur i ca. 2 timer til ca. 10 timer.

Den ønskede formel XI forbindelse kan fremstilles ved bromering av formel X forbindelsen etterfulgt av en elimine-ringsreaksjon. Typisk gjennomføres bromeringen ved omsetning av formel X forbindelsen med brom i tetrahydrofuran ved en temperatur på ca. -78"C, etterfulgt av oppvarming til omgivende temperatur i ca. 1 time til ca. 3 timer. Eliminerings-reaksjonen gjennomføres ved omsetning av det bromerte produkt fremstilt ovenfor med litiumbromid og litiumkarbonat i et polart aprotisk løsningsmiddel slik som dimetylformamid ved en temperatur på ca. 100°C til ca. 140°C i ca. 1 time til ca. 4 timer.

Den ønskede formel XII forbindelse kan fremstilles ved epoksydering av den hensiktsmessige formel XI forbindelse etterfulgt av reduksjon med litiumaluminiumhydrid. Generelt gjennomføres epoksyderingen ved omsetning av formel XI forbindelsen med hydrogenperoksyd og natriumhydroksyd i et polart, protisk løsningsmiddel slik som metanol ved omgivende temperatur i ca. 2 timer til ca. 6 timer. Reduksjonen gjennomføres ved omsetning av epoksydet fremstilt ovenfor med litiumaluminiumhydrid i et reaksjonsinert løsningsmiddel slik som tetrahydrofuran ved omgivende temperatur i 2 timer til ca. 6 timer.

Den ønskede formel IA forbindelse som beskrevet i (E) ovenfor hvor Q<4>inneholder en hydroksygruppe, kan deretter fremstilles ut i fra den hensiktsmessige formel XII forbindelse ved en sinkfluoridkatalysert kobling etterfulgt av deacetylering med natriummetoksyd som tidligere beskrevet. De forbindelser hvor Q<*>er karbonyl kan fremstilles på tilsvarende måte, med tillegg av oksydasjon med pyridiniumklorkromat (som beskrevet for formel X forbindelser) før deacetyleringen.

Ifølge reaksjonsskjema VI kan de ønskede formel IA forbindelser hvor Q<1>, Q<2>, Q<3>, Q<4>, Q<5>, C5og C25er som beskrevet i (F) ovenfor (dvs. oksygenert i Q<5->stillingen) fremstilles ved følgende fremgangsmåter.

Den ønskede formel (XIV) forbindelse kan oppnås ved beskyttelse (som betegnet med P) av alkoholfunksjonen i diosgenin (XIII) etterfulgt av hydroborering av olefinet. Typisk blir alkoholen beskyttet som en etoksymetyleter ved omsetning av diosgenin med etoksymetylklorid og diisopropyletylamin i et vannfritt løsningsmiddel slik som metylenklorid ved omgivende temperatur i ca. 2 timer til 6 timer. Hydroboreringen gjen-nomføres ved omsetning av forbindelsen fremstilt ovenfor med boran-tetrahydrofurankompleks i et reaksjonsinert løsningsmid-del slik som tetrahydrofuran ved omgivende temperatur i ca.

1 time til ca. 6 timer.

Den ønskede formel XV forbindelse kan fremstilles ved oksydasjon av den hensiktsmessige formel XIV forbindelse etterfulgt av fjerning av den alkoholbeskyttende gruppe. Generelt gjennomføres oksydasjonen ved omsenting av formel XIV forbindelsen med pyridiniumklorkromat i et vannfritt løsnings-middel slik som metylenklorid ved omgivende temperatur i ca.

2timer til ca. 8 timer. Fjerningen av den alkoholbeskyttende gruppe kan gjennomføres ved omsetning av det oksyderte produkt fremstilt ovenfor med konsentrert saltsyre i et blandet løs-ningsmiddel inneholdende metanol og tetrahydrofuran ved en

temperatur på ca. 40"C til ca. 65°C i ca. 5 min. til ca.

1 time.

Den ønskede formel IA forbindelse som beskrevet i (F) ovenfor, hvor Q<5>er karbonyl, kan deretter fremstilles ut i fra den hensiktsmessige formel XV forbindelse ved en sinkfluoridkatalysert koblingsreaksjon etterfulgt av deacetylering ved anvendelse av natriummetoksyd som tidligere beskrevet. De forbindelser hvor Q<5>inneholder en hydroksygruppe, kan fremstilles på tilsvarende måte med tillegg av reduksjon før deacetylering. Typisk gjennomføres reduksjonen ved omsetning med natirumborhydrid i et blandet løsningsmiddel av etanol og diklormetan ved omgivende temperatur i ca. 1 time til ca. 6 timer.

Forbindelsene med formel I som er blitt oppnådd og har asymmetriske karbonatomer, kan skilles i sine diastereomerer på basis av sine fysikalsk-kjemiske forskjeller ved fremgangsmåter kjent per se, f.eks. ved kromatografi og/eller fraksjo-nert krystallisasjon.

Forbindelsene ifølge denne oppfinnelse hvor sukkeret er/3-D-glukopyranuronosyl er sure og danner basesalter. Alle slike basesalter er innenfor rammen av denne oppfinnelse, og de kan fremstilles ved konvensjonelle metoder. F.eks. kan de fremstilles ganske enkelt ved å bringe de sure og basiske enheter i kontakt med hverandre, vanligvis i støkiometrisk forhold, i enten et vandig, ikke-vandig eller delvis vandig medium, som hensiktsmessig. Saltene blir gjenvunnet enten ved filtrering, ved utfelling med et ikke-løsningsmiddel etterfulgt av filtrering, ved fordampning av løsningsmidlet, eller i tilfelle vandige løsninger, ved lyofilisering, som hensiktsmessig.

Dessuten kan mange av forbindelsene ifølge denne oppfinnelsen isoleres som hydrater.

Forbindelsene ifølge denne oppfinnelse er potente inhi-bitorer av kolesterolabsorpsjon og er således alle egnet for terapeutisk anvendelse som hyperkolesterolemikontrollerende midler i pattedyr, særlig mennesker. Siden hyperkolesterolemi er nært beslektet med utviklingen av generaliserte kardio- vaskulære, cerebrale vaskulære eller perifere vaskulære for-styrrelser, kan disse forbindelser i andre rekke forebygge utviklingen av aterosklerose, særlig arteriosklerose.

Den hyperkolesterolemikontrollerende aktivitet av disse forbindelser kan demonstreres ved metoder basert på standard fremgangsmåter. F.eks. kan in vivo aktiviteten av disse forbindelser til å inhibere absorpsjon av kolesterol i tarmene bestemmes ved fremgangsmåten til Melchoir og Harwell (J. Lipid Res., 1985, 26, 306-315).

Aktiviteten kan bestemmes ved den mengde av hypo-kolesterolemimiddel som reduserer kolesterolabsorpsjonen, relativt til kontrollen, i gyldne syriske hannhamstere. Gyldne syriske hannhamstere blir administrert enten en kolesterol-fri diett (kontrolldyrene) eller en diett supplementert med 1% kolesterol og 0,5% kolsyre i 4 dager. Den følgende dag får dyrene faste i 18 timer, og administreres deretter en 1,5 ml oral bolus av vann inneholdende 0,25% metylcellulose, 0,6% Tween 80 og 10% etanol (kontrolldyrene) eller en oral bolus som dessuten inneholder den ønskede konsentrasjonen av den forbindelse som skal testes. Umiddelbart etter bolus-administreringen får dyrene en andre 1,5 ml oral bolus av flytende hamsterdiett inneholdende 1% [<3>H] kolesterol (2,0 juCi/dyr; 210 dpm/nmol) og 0,5% kolsyre, og får faste i ytterligere 24 timer. Ved slutten av denne andre fasteperiode blir dyrene avlivet, leveren utskåret, forsåpet og alikvoter blir avfarget ved tilsetning av hydrogenperoksyd, og bestemt for radioaktivitet. Total radioaktivitet i leveren blir beregnet basert på målt levervekt. Graden av kolesterolabsorpsjon blir uttrykt som en prosentsats av den totale radioaktivtet administrert som oral bolus som er tilstede i leveren 24 timer etter bolusadministrering.

Anti-ateroskleroseeffektene av forbindelsene kan bestemmes ved den mengde middel som reduserer lipidavsetningen i kaninaorta. New Zealand hvite hann-kaniner blir foret med en diett inneholdende 0,4% kolesterol og 5% jordnøttolje i 1 uke (måltid gitt én gang om dagen). Etter 1 uke får kaninene daglig en dose med den ønskede konsentrasjon av den forbindel se som skal testes. Etter 8,5 uker blir medikamentbehandlingen avsluttet, og dyrene blir holdt på den kolesterolholdige diett i ytterligere 2 uker og deretter koblet om til en kolesterol-fri diett i 5 uker. Dyrene blir avlivet og aorta fjernet fra toraxbuen til grenen av tarmbenet. De store livpulsårene blir renset for adventitia, åpnet langsetter og deretter farget med Sudan IV som beskrevet av Holman et al. (Lab. Invet. 1958, 7, 42-47). Den prosent av overflatearealet som er farget blir kvantifisert ved densitometri ved anvendelse av et Optimas Image Analyzing System (Image Processing Systems). Redusert lipidavsetning blir angitt ved en reduksjon i den prosent overflateareal som er farget i den medikamentbehandlede gruppe, sammenlignet med kontrollkaninene.

Administrering av forbindelsene ifølge denne oppfinnelse kan være via en hvilken som helst fremgangsmåte som avgir forbindelsene til tarmrommene. Disse fremgangsmåter omfatter orale veier, intraduodenale veier osv..

Den administrerte mengde av steroid glykosid vil natur-ligvis være avhengig av det individ som blir behandlet, av graden av plagen, av administrasjonsmåten og den foreskivende leges bedømmelse. En effektiv dosering er imidlertid i området fra 0,71 til 200 mg/kg/dag, fortrinnsvis 2 til 50 m9/fcq/dag, mest fortrinnsvis 2 til 7 mg/kg/dag. For et men-neske på gjennomsnittlig 70 kg ville dette være 0,05 til 14 g/dag, fortrinnsvis 0,14 til 3,5 g/dag, mest fortrinnsvis 0,14 til 0,5 g/dag.

For oral administrering, som blir foretrukket, kan et farmasøytisk preparat ta form av løsninger, suspensjoner,

tabletter, piller, kapsler, pulvere, formuleringer med forlen-get avgivelse o.l..

Avhengig av den tilsiktede administrasjonsmåte kan de farmasøytiske preparater være i form av faste, halv-faste eller flytende doseringsformer, slik som f.eks. tabletter, piller, kapsler, pulvere, væsker, suspensjoner e.l., -fortrinnsvis i enhetsdoseringsform, egnet for enkeladministrasjon av nøyaktige doseringer. De farmasøytiske preparater vil inkludere en konvensjonell farmasøytisk bærer eller eksipient og en forbindelse ifølge denne oppfinnelse som aktiv bestanddel. Dessuten kan det inkludere andre medisinske eller farma-søytiske midler, bærere, adjuvanser osv..

Farmasøytiske preparater ifølge denne oppfinnelse kan inneholde 0,1% til 95% av forbindelsen, fortrinnsvis 1% til 70%. I ethvert tilfelle vil preparatet eller formuleringen som skal administreres, inneholde et kvantum av en forbindelse ifølge denne oppfinnelse i en mengde som effektivt vil lindre symptomene hos det individ som behandles, dvs. hyperkolesterolemi eller aterosklerose.

For faste farmasøytiske preparater vil konvensjonelle ikke-toksiske faste bærere inkludere f.eks. farmasøytiske kvaliteter av mannitol, laktose, stivelse, magnesiumstearat, natriumsakkarin, talkum, cellulose, glukose, sukrose, magne-siumkarbonat o.l..

Flytende farmasøytisk administrerbare preparater kan fremstilles ved å løse eller dispergere, eller på annen måte fremstille en forbindelse ifølge denne oppfinnelse, og blande den eventuelt med et farmasøytiske adjuvans i en bærer, slik som f.eks. vann, saltløsning, vandig dekstrose, glyserol, etanol o.l., for derved å danne en løsning eller suspensjon.

Fremgangsmåter for fremstilling av forskjellige farmasøy-tiske preparater med en viss mengde aktiv bestanddel er kjente, eller vil være åpenbare, for fagfolk på dette området. Se f.eks. Remington's Pharmaceutical Sciences., Mack Publishing Company, Easter, Pa., 15. utgave (1975).

Eksempel 1

( 30 . 5a . 120 . 25R) - 3- (/ 3- D- galaktocyl) oksy} - 12- hvdroksyspirostan

REDUKSJON AV KETONER

Til en romtemperaturløsning av ( 30, 5a, 25R) -3-(/3-D-galaktocyl) oksy]-spirostan-12-on (1,33 g, 2,24 mmol; oppnådd via deacetylering av ( 30, 5a, 25R) -3-[ (tetraacetyl-/3-D-galaktosyl) - oksy]spirostan-12-on (preparat B2) ifølge fremgangsmåten beskrevet i eksempel 3), etanol (13 0 ml) og kloroform (260 ml) ble tilsatt en løsning av natriumborhydrid (0,51 g, 13,4 mmol) og etanol (50 ml). Etter omrøring i 4 timer ble tilsatt metanol (2 00 ml) og omrøringen ble gjenopptatt i 2 timer. Reaksjonsblandingen ble konsentrert i vakuum under dannelse av 3,38 g råprodukt. Omkrystallisering fra en blanding av metanol (80 ml) og vann (8 ml), etterfulgt av vasking med kald metanol (20 ml) og tørking ga 1,33 g (kvantitativt utbytte) av tittelforbindelsene. MS:595 (M+H).

Smp.: > 200°C. Høy oppløsning FAB (m/e): beregnet for C33H5509: 595,3846, funnet : 595,3861.

Tittelforbindelsen ble fremstilt ut i fra det hensiktsmessige utgangsmaterialet på tilsvarende måte ved anvendelse av fremgangsmåten i eksempel 1.

Eksempel 2

( 30 , 5a . 120 . 2 5R)- 3-( fl- D- cellobiocvl) oksvl- 12- hydroksyspirostan

Eksempel 3

f 30 . 5a, 120 . 25R)- 3-( fl- D- cellobiocyl) oksy1spirostan- ll- on

DEACETYLERING

En blanding av ( 30, 5a, 25R) -3-[ (heptaacetyl-/?-D-cellobiosyl)oksy]spirostan-ll-on (6,57 g, 6,26 mmol), natriummetoksyd (68 mg, 1,25 mmol), metanol (35 ml) og tetrahydrofuran (75 ml) ble oppvarmet til tilbakeløp i 1 time, etterfulgt av omrøring ved romtemperatur i 12 timer. Et hvitt bunnfall dannet seg i løpet av 30 min.. Den endelige suspensjon ble konsentrert i vakuum under dannelse av 6,0 g råprodukt. Dette materialet ble renset ved flashkromatografi (elueringsmiddel: kloroform etterfulgt av 8:2 kloroform:metanol) under dannelse av 2,71 g (57% utbytte) av tittelforbindelsen.

<X>H NMR (DMSO-d6) <S: 5,22 (d, dJ=5Hz, 1H) ; 5,00 (m, 3H) ;

4,64 (s, 1H); 4,58 (t, J=5Hz, 1H); 4,54 (t, J=6Hz, 1H) ;

4,34 (q, J=8 Hz, 1H); 4,27 (d, J=8Hz, 1H); 4,23 (d, J=8HZ, 1H) ; 3,68-2,94 (m, 15 H) ; 2,34 (itl, 2H) ; 2,08-0,81 (m, 23H); 0,92 (s, 3H); 0,86 (d, J=7 Hz, 3H); 0,72 (d, J= 6 Hz, 3H) ; 0,59 (s, 3H) . DEPT13C NMR (DMSO-d6)6: 210,4

(s), 108,8 (s), 103,6 (d), 100,6 (d), 81,1 (d), 80,6 (d), 77,2 (d), 76,9 (d), 76,5 (d), 75,5 (d), 75,1 (d), 73,7 (d), 73,6 (d), 70,5 (d), 66,4 (t), 63,5 (d), 61,5 (t), 60,9 (t), 50,5 (d), 57,1 (t), 54,7 (d), 44,3 (s), 44,1 (d), 41,7 (d), 36,8 (d), 35,6 (t), 35,2 (s), 34,0 (t), 32,6 (t), 31,3 (S), 30,2 (d), 29,2 (t), 28,9 (t), 28,2 (t), 17,5 (q), 17,3 (q), 14,8 (q) , 12,3 (q). IR (KBr): 3407 (s) , 1700 (m) cm"<1>. Høy oppløsning FAB MS (m/e) : beregnet for C39H620nNa 777.4037, funnet 777.4108. Analyse: beregnet for C39H6201A»2H20, C 59,22, H 8,41; funnet

C 59,48, H 8,48. Smp.: >300°C.

En monohydrat krystallinsk form av tittelproduktet ovenfor ble fremstilt som følger: En blanding av 20 g av råproduktet fremstilt ifølge fremgangsmåten ovenfor, 600 ml n-propanol, og 400 ml vann ble omrørt og oppvarmet til tilbakeløp. Til den resulterende løsning ble tilsatt 2,0 g kiselgur. Fremdeles under tilbake-løp ble de uløselige bestanddeler fjernet ved filtrering. Filtratet ble destillert atmosfærisk til et samlet volum på 600 ml og avkjølt til omgivende temperatur. Den resulterende suspensjon ble granulert i 1 time, og produktet oppsamlet ved filtrering. Den ikke tørkede omkrystalliserte kake fra omkry-stalliseringen ovenfor ble slemmet opp i 500 ml metanol. Denne suspensjon ble oppvarmet til tilbakeløp i 16 timer, avkjølt til omgivende temperatur, granulert i 48 timer, og isolert ved filtrering. Vakuumtørking ga 16,1 g (81% gjenvin-ning) av krystallmonohydratet av tittelforbindelsen i eksmepel 3 .

Eksemplene 4- 47

Følgende forbindelser ble fremstilt fra de egnede utgangsmaterialer på tilsvarende måte ved anvendelse av frem-gangsmåtene ovenfor.

Eksempel 48

( 3B . 5a . llfl. 25PJ- 3- r ( fl- D- cellobiosvH oksvl- 11- hvdroksv-spirostan- 12- on

DEACETYLERING

Basert på fremgangsmåten beskrevet i Synthesis, 1973, 790, ble (/3,5a,ll/3,25R)-3-[ (heptaacetyl-/9-D-cellobiosyl) oksy ] - spirostan-ll-ol-12-on (240 mg, 0,225 mmol) løst i metanol (20 ml) og tetrahydrofuran (10 ml). Til denne løsning ble tilsatt en løsning av kaliumcyanid (146 ml, 2,25 mmol) i vann (0,1 ml) og metanol (5 ml). Den resulterende blanding ble oppvarmet til 80'C i fire timer. Etter avkjøling ble blandingen konsentrert til tørrhet og renset ved flashkromatografi (9:1 kloroform:metanolelueringsmiddel) under dnanelse av tittelforbindelsen. Smp. 245-247°C. MS (m/e): 771 (P+l), 793 (P+Na) . Analyse: beregnet for C39H62015»3H20, C 56,70, H 8,31.

funnet, C 56,97, H 7,80.

Preparat Al

( 36 , 5a . 2 5R) - 3- f ( heptaacetyl- a- D- cellobiosvl) oksy1spirostan- 11-on

ANOMERISERING

Hydrogenbromidsyre (30% i eddiksyre, 1,2 ml) ble tilsatt til en romtemperaturløsning av ( 3( 3, 5a, 25R)-3-[(heptaacetyl-/3-D-cellobiosyl)-oksy]spirostan-ll-on (2,0 g) i metylenklorid

(35 ml) og den resulternede blanding ble omrørt ved romtemperatur i94timer. Reaksjonen ble undertrykket ved langsom tilsetning av mettet vandig natriumhydrogenkarbonat (20 ml). Det organiske sjikt ble fraskilt, tørket over magnesiumsulfat og tørket i vakuum under dannelse av 1,637 g av et svart fast stoff. Rensing ved gjentatt flashkromatografi (1:1 heksan:etylacetat) ga 651 mg (33% utbytte) av tittelforbindelsen.

<X>H NMR (CDC13) 5:5,41 (t, J=10Hz, 1H); 509 (kompleks, 3H); 4,91 (t, J=8 Hz, 1H); 4,69 (dd, J=4 & 10 Hz, 1H) ;

4,49 (kompleks, 3H); 4,36 (dd, J=4 & 13 Hz, 1H); 3,99 (m, 3H); 3,67 (m, 2H); 3,40 (m, 3H); 2,45 (m, 1H); 2,22 (s, 2H); 2,11 (s, 3H); 2,07 (s, 3H); 2,03 (s, 6H); 2,00 (s, 3H); 1,99 (s, 3H); 1,97 (s, 3H); 2,00 - 0,80 (m, 22H) ;

1,02 (s, 3H); 0,92 (d, J=7 Hz, 3H); 0,77 (d, J=7 Hz, 3H) ;

0,69 (S, 3H) . DEPT13C NMR (CDCl3) 5:210,0 (s) , 170,5

(s) , 170,3 (S) , 170,2 (S) , 169,6 (s) , 169,3 (s) , 169,1 (s), 109,2 (s) , 100,9 (d) , 94,3 (d) , 80,6 (d) , 78,0 (d) , 77.0 (d), 73,1 (d), 71,9 (d), 71,8 (d), 71,2 (d), 69,6 (d), 68,1, (d), 67,8 (d), 66,9 (d), 64,4 (d), 62,0 (t), 61,5 (t) , 60,7 (d), 57,6 (t), 55,7 (d), 45,0 (d), 44,3 (s), 41,8 (d), 36,9 (d), 35,5 (t), 35,4 (t), 35,1 (s), 32,7 (t), 31,3 (t), 31,2 (t), 30,2 (d), 28,7 (t), 28,0 (t), 27,4 (t), 20,9 (q), 20,7 (q), 20,6 (q), 20,5 (q), 17.1 (q), 17,0 (q), 14,2 (q), 12,1 (q). IR (Kbr): 1751 (s) , 1706 (m) cm"<1>. MS (m/e): 1049 (M+H) , 1071 (M + Na). Analyse: beregnet for C53H76021»H20, C 59,65 H 7,37; funnet C 59,66 H 7,00. Sm.p.: 248-249°C.

Preparat Bl

( 36 . 5a . 2 5R)- 3- f( heptaacetyl- g- D- cellobiosyl) oksvlspirostan- 11-on

SINKFLUORIDBEFORDRET KOBLING AV FRITT SPIROSTAN

En suspensjon av ( 30, 5a,25R)-3-hydroksyspirostan-ll-on (3,0 g, 6,97 mmol) og vannfritt sinkfluorid (2,88 g,

27,9 mmol) i tørr acetonitril (175 ml) ble tørket ved å fjerne.

75 ml acetonitril ved destillasjon. Suspensjonen fikk avkjøle seg, heptaacetyl-/3-D-cellobiosylbromid (9,75 g, 13,9 mmol) ble tilsatt, og den resulterende suspensjon ble oppvarmet til 65'C

i 3 timer. Etter avkjøling til romtemperatur ble tilsatt metylenklorid (150 ml), suspensjonen ble omrørt i 10 min. og filtrert. Filtratet ble konsentrert i vakuum under dannelse av 10 g råprodukt. Dette materialet ble løst i 8:2 kloroform:metanol, preadsorbert på silikagel og renset ved flashkromatografi (elueringsmiddel: 1:1 etylacetat:heksan etterfulgt av ren etylacetat) under dannelse av 6,81 g (93% utbytte) av tittelmaterialet.

<X>H NMR (CDC13) 6: 5:11 (kompleks, 2 H); 5,04 (t, J=9 Hz, 1H); 4,90 (t, J=9 Hz, 1H); 4,83 (t, J=8 Hz, 1H); 4,49 (kompleks, 4H); 4,34 (dd, J=4,5 & 12,5 Hz, 1H); 4,04 (t, J=13Hz, 1H), 4,03 (t, J=ll Hz, 1H); 3,72 (t, J=9,5 Hz,

1H); 3,65 (m, 1H); 3,56 (m,lH); 3,45 (m, 1H); 2,47 (m,

1H); 2,22 (s, 2H); 2,08 (s, 3H); 2,06 (s, 3H); 2,00 (s, 6H); 1,99 (s, 6H); 1,96 (s, 3H); 2,00 - 1,00 (m, 22H);

0,98 (s, 3H); 0,92 (d, J=7 Hz, 3H); 0,77 (d, J=7 Hz, 3H) ;

0,68 (s, 3H) . DEPT<13>C NMR (CDC13) S: 209,9 (s) , 170,5

(s), 170,3 (s), 170,2 (s), 169,9 (s), 169,8 (s), 169,5

(s), 169,3 (s) , 169,0 (s), 109,2 (s), 100,8 (d), 99,4

(d), 90,0 (s), 80,6 (d), 79,4 (d), 76,6 (d), 75,3 (s), 72,9 (d), 72,6 (d), 72,5 (d), 71,9 (d), 71,8 (d), 71,6 (d), 67,8 (s), 66,9 (t), 64,4 (d), 62,1 (t), 61,5 (t),

60,8 (s), 60,7 (d), 57,6 (t), 55,7 (d), 44,8 (d), 44,3

(s), 41,8 (d), 36,9 (d), 35,6 (t), 35,2 (s), 34,1 (t),

32,7 (t), 31,3 (t), 31,2 (t), 30,2 (d), 29,0 (t), 28,7

(t), 28,0 (t), 20,9 (q), 20,7 (q), 20,6 (q), 20,5 (q),

20,5 (q), 17,1 (q), 17,0 (q), 14,2 (q), 12,0 (q). IR (KBr) : 1756 (s) , 1706 (m) cm"<1>. MS (m/e) : 1049 (M+H) . Analyse: beregnet for C53H76021»H20, C 59,65, H 7,37; funnet

C 59,86, H 7,25. Sm.p.: 210-212°C.

På tilsvarende måte ble fremstilt følgende forbindelser, preparatene B2-B41, ut i fra de hensiktsmessige utgangsmaterialer ved anvendelse av den generelle fremgangsmåte ovenfor.

Preparat B2

( 30. 5a, 25R)- 3-[ ( tetraacetvl- Ø- D- qalaktosyl) oksy] spirostan- 12-on

Preparat B3

( 30 . 5a . 25R)- 3-\( heptaacetyl- Ø- D- cellobiosyl) oksy] spirostan

Preparat B4

( 30 . 50 . 25R)- 3- r( heptaacetyl- Ø- D- cellobiosyl) oksvlspirostan

Preparat B5

( 30 , 5a . 25R)- 3-\( triacetyl- Ø- D- qlukuronosvl) oksy1spirostan-metylester

Preparat B6

( 30 . 5a . 2 5R) - 3- [ ( tetracetyl- Ø- D- qlukopvranosyl) oksy") spirostan-12- on

Preparat B7

( 30 . 5a . 25R)- 3-[( tetracetyl- Ø- D- qalaktopyranosyl) oksy]-spirostan- ll- on

Preparat B8

( 30, 5a. 25R) - 3- f ( heptaacetvl-/ 3- D- cellobiosyl) oksy"| spirostan

Preparat B9

( 30, 5a. 25R)- 3- r( heptaacetyl- Ø- D- cellobiosyl) oksy1etoksy)-spirostan

Preparat B10

( 30. 5a. 25R)- 3-( f( tetracetyl- Ø- D- qalaktopyranosyl) oksvletoksy)-spirostan

Preparat Bil

( 30. 5a. 25R)- 3-[( heptaacetvl- Ø- D- laktosyl) oksy] spirostan

Preparat B12

( 3fl. 5a. 25R)- 3- r( heptaacetvl- g- D- laktosyl) oksy1spirostan- 12- on

Preparat B13

( 30 . 5a. 25R)- 3- r( triacetyl- a- L- arabanopyranosyl) oksvlspirostan

Preparat B14

( 30 . 5a. 25R)- 3-[( triacetvl- a- D- arabanopvranosyl) oksvlspirostan

Preparat B15

( 30 , 5a. 25R) - 3- r ( triacetvl-/ 3- L- xylopvranosyl) oksvl spirostan

Preparat B16

( 30 . 5a, 25R)- 3- r ftriacetyl- g- L- fukopyranosyl) oksvlspirostan

Preparat B17

f 30 . 5a. 25R)- 3- r( triacetvl- fl- D- xvlopyranosyl) oksylspirostan

Preparat B18

( 30 . 5a . 25R) - 3- r ( triacetyl- fi- D- fukopyranosyl) oksvl spirostan

Preparat B19

( 30 . 5a . 25R)- 3- f( tetraacetyl- if- D- qalaktopyranosvl) oksylspirostan

Preparat B20

( 30 . 5a . 25R)- 3- f( heksaacetvl- 3- 0- fl- D- galaktopvranosvl- a- D-arabanopyranosyl) oksvlspirostan

Preparat B21

( 30 . 5a . 25S)- 3-[ ftetraacetvl- if- D- qalaktopyranosyl) oksy]-spirostan

Preparat B22

( 30 , 5a . 120 . 25R)- 3- f( heptaacetyl- g- D- cellobiosvl) oksvl- 12-hydroksyspirostan- ll- on

Preparat B23

( 3/ 3. 5a. lla. 25R) - 3- T ( heptaacetvl- fi- D- cellobiosvl) oksvl- 11-hydroksyspirostan

Preparat B24

( 36 . 5a. llfl . 25PJ - 3- r ( heptaacetvl-/ 3- D- cellobiosvl) oksvl - 11-hydroksvspirostan

Preparat B25

( 36 . 5a. 25R) - 3- r ( tetraacetyl- <3- D- qlukopvranosvl) oksvl- 11- on

Preparat B26

( 36 . 5a . 11/ 3. 25R) - 3- r ( heptaacetvl- fl- D- cellobiosvl) oksvl - 11.12-di( hydroksv) spirostan

Preparat B27

( 36 . 5a . Ila . 126 . 25R )- 3- f( heptaacetvl- fl- D- cellobiosvl)- 11. 12-di( hydroksy) spirostan

Preparat B28

( 36 . 5a . 12a . 25R)- 3- f( heptaacetvl- fl- D- cellobiosyl) oksy]- 12-hvdroksvspirostan

Preparat B29

( 36 , 5a . 25R)- 3- f( heptaacetyl- fl- D- laktosyl) oksy1spirostan- ll- on

Preparat B30

( 36 . 5a . 25R ) - 3- r ( heptaacetyl- fl- D- cellobiosyl) oksy 1 spirostan- 12-on

Preparat B31

( 36 . 5a . Ila . 2 5R) - 3- f ( heptaacetyl-/ 3- D- cellobiosyl) oksy] 11. 12-dihydroksyspirostan

Preparat B32

( 36 , 5a . Ila . 2 5R) - 3 - f ( heptaacetvl-/ 3- D- cellobiosyl) oksvl- 11-h ydroksyspirostan- 12- on

Preparat B3 3

( 30 , 5a. 25R) - 3- r ( heptaacetvl-/ 3- D- cellobiosyl) oksvl spirostan-11. 12- dion

Preparat B34

( 30 . 5a . 11/ 3 . 12a. 25R) - 3- r ( heptaacetvl- fl- D- cellobiosvl) oksy)-11. 12- di ( hydroksy) spirostan

Preparat B35

( 36 . 5a . 12a . 2 5R)- 3- f( fl- D- cellobiosvl) oksvl- 12- hvdroksv-spirostan- ll- on

Preparat B36

( 36 . 5a . 126 . 25R )- 3- r fheptaacetvl- fl- D- laktosvl) oksvl- 12-hvdroksyspirostan- ll- on

Preparat B37

f 36 . 5a . 25R )- 3- f( dodekaacetvl- g- D- maltotriosvlVoksylspirostan-11- on

Preparat B38

( 30 . 5a. 25R) - 3- f fheptaacetyl-/ 3- D- maltosyl) oksy] spirostan- ll- on

Preparat B39

( la. 30 . 5a . 25R )- 3- f( heptaacetyl- g- D- cellobiosvl) oksy1- 1-hydroksvspirostan

Preparat B40

( 3i3. 5a. 25R) - 3- f ( heptaacetyl- fi- D- cellobiosvl) oksylspirostan- 6-on

Preparat B41

( 30 . 5a . 110 , 2 5R)- 3- f( heptaacetvl- fl- D- cellobiosyl) oksy] 11-hydroksyspirostan- 12- on

Preparat Cl

( 30 . 5a . 25R)- 3- r ( heptaacetvl- lf- D- laktosyl) oksvlspirostan

KVIKKSØLV( II) BROMID/ KVIKKSØLV( II) CYANIDBEFORDRET KOBLING AV SILYLERT SPIROSTAN

Pulverisert 4Å molekylsikter (1 g) ble tilsatt til en løsning av trimetylsilyltigogenin (1,17 g, 2,4 mmol) og aceto-bromlaktose (3,36 g, 4,8 mmol) i CH2C12(15 ml) og CH3CN (5 ml) ved romtemperatur. Etter omrøring i 15 min. ble tilsatt Hg(CN)2(2,4 g, 9,6 mmol) og HgBr2(3,4 g, 9,6 mmol), og blandingen omrørt ved romtemperatur i 3 timer. Blandingen ble fortynnet med etylacetat (50 ml) og filtrert. Filtratet ble vasket med IN (HC1 (3 x 30 ml) og saltløsning (1 x 30 ml), tørket (Na2SOJ filtrert og konsentrert i vakuum. Produktet ble renset ved flashkromatografi (10-20% EtOAc/CH2Cl2) under dannelse av 400 mg produkt som et fargeløst fast stoff. MS 489 (M+H)<+>.

<*>H NMR (250 MHZ, CDC13) S 5,35 (d, 1H, J = 1,0 Hz); 5,2 (dd, 1H, J=4,5, 4,5 Hz); 5,15 (dd, 1H, J=6,0, 5,0 Hz);

4,95 (dd, 1H, J=4,5, 1,0 Hz); 4,85 (dd, 1H, J=5,0, 4,5 Hz); 4,55 (d, 1H, J=6,0 Hz); 4,4 (m, 3H); 4,1 (m, 3H);

3,85 (t, 1H, J=3,0Hz); 3,8 (t, 1H, J=4,5Hz); 3,5 (m, 3H); 3,35 (t, 1H, J=5,0 Hz); 2,15 (s, 3H), 2,12 (s, 3H);

2,07 (s, 12H); 2,0 (s, 3H); 2,0 - 0,5 (m, 27H); 0,98 (d, 3H; J=4,0Hz); 0,82 (s, 3H); 0,8 (d, 3H, J=4,0Hz); 0,73 (s, 3H).

På tilsvarende måte ble fremstilt følgende forbindelser, preparatene C2-C4, ut i fra de egnede utgangsmaterialer ved anvendelse av den generelle fremgangsmåte ovenfor.

Preparat C2

( 30 . 5a. 2 5R) - 3- f ( heptaacetyl- <3- D- maltosyl) oksy 1 - spirostan

Preparat C3

( 30 , 5a . 25R) - 3- F ( triaacetyl- fl- D- 2- acetamido- 2- deoksyqluko-pyranosvl) oksvl- spirostan

Preparat C4

( 36 , 5a . 2 5R)-3-f( heptaacetyl- g- D- gentiobiosvl) oksy]- spirostan

Preparat Dl

( 36 . 5a . 25R)- 3- trimetylsilvloksvspirostan

SILYLERING AV SPIROSTANER

Trimetylsilyltrifluormetansulfonat (4 ml, 22,1 mmol) ble tilsatt dråpevis til en løsning av tigogenin (6 g, 14,4 mmol) og trietylamin (6 ml, 45 mmol) i CHZC12(50 ml) ved 0"C. Etter 1 time ble blandingen fortynnet med eter (100 ml) og vasket med mettet NaHC03-løsning (2 x 50 ml) og saltløsning (1 x

50 ml), tørket (Na2SOJ filtrert og konsentrert i vakuum.

Etter tilsetning av metanol dannet det seg et bunnfall som ble frafiltrert og vasket med metanol og tørket under dannelse av 6,2 g produkt som et fargeløst fast stoff.

S.mp. 197-198°C. MS 489 (M + H)<+>.<*>H NMR (250 MHZ, CDC13) S 4,35 (q, 1H, J=3,0 Hz); 3,5 (m, 2H); 3,4 (t, 1H, J=5,5Hz); 2,0-0,5 (m, 27H); 1,0 (d, 3H, J=4,0 Hz); 0,85 (s, 3H); 0,8 (d, 3H, J=4,0Hz); 0,75 (s, 3H); 0,1 (s, 9H).

Preparat El

( 36 . 5a. 25R)- 3-( 2- hydroksyetoksy)- spirostan

LAH- REDUKSJONER

Litiumaluminiumhydrid (0,285 g, 7,5 mmol) ble tilsatt til en løsning av tigogenin-O-eddiksyreetylester (2,5 g,

4,98 mmol) i THF (50 ml) ved 0°C. Etter 1 time ble reaksjonen undertrykket ved sekvensiell tilsetning av H20 (0,285 ml), 15% NaOH (0,285 ml) og H20 (0,85 ml). Blandingen ble fortynnet med eter (25 ml) og tørket med MgSO,,, filtrert og konsentrert i vakuum under dannelse av 2,1 g produkt som et fargeløst fast Stoff. S.mp. 207-208°C. MS 461 (M+H)<+>.

<X>H NMR (250 MHz, CDC13) S 4,4 (q, 1H, J=3,0 Hz); 3,7 (m, 2H); 3,6 (m, 2H); 3,5 (m,lH); 3,4 (t, 1H, J=5,5Hz); 3,3 (m, 1H); 2,0-0,5 (m, 28H), 1,0 (d, 3H, J=4,0 Hz); 0,85

(s, 3H); 0,8 (d, 3H, J=4,0 Hz); 0,75 (s, 3H).

Preparat Fl

( 13B . 5a . 25PJ - spirostan- 3- yl) O- eddiksyreetylester rRhfOAcKl-, KATALYSERTE KOBLINGER

Etyldiazoacetat (5,5 ml, 0,048 mol) lost i 30 ml CH2C12ble tilsatt dråpevis i løpet av 1 time til en løsning av tigogenin (10 g, 0,024 mol) og rhodiumacetatdimer (250 mg) i CH2C12(250 ml) ved romtemperatur. Det utviklet seg gass gjennom hele tilsetningen, og når tilsetningen var fullstendig, ble blandingen omrørt i ytterligere 1 time. Blandingen ble fortynnet med heksaner (100 ml) og filtrert gjennom en plugg av silikagel. Filtratet ble konsentrert i vakuum og etter tilsetning av metanol til resten, dannet det seg et bunnfall som ble frafiltrert og vasket med metanol og tørket under dannelse av 6,0 g produkt som et fargeløst fast stoff. S.mp. 119-120°C. MS 503 (M+H)<+>.

<*>H NMR (250 MHz, CDC13) S 4,35 (q, 1H, J=3,0 Hz); 4,2 (m, 2H); 4,1 (s, 2H); 3,4 (m, 3H); 2,0 - 0,5 (m, 30H); 0,95 (d, 3H, J=4,0 Hz); 0,8 (s, 3H) ; 0,75 (d, 3H, J=4,0Hz);

0,72 (s, 3H).

Preparat Gl

(( 3g. 5a. lllf. 12a, 25R)- spirostan- 3. 11. 12- triol

( 3fl. 5a. Ila. 12a. 25R)- 11. 23- dibrom- 3- acetoksyspirostan- 12- on: Tittelforbindelsen ble syntetisert fra (3fl,5a,25R)-3-acetoksyspirostan-12-on ifølge fremgangsmåten beskrevet i J. Chem♦ Soc.. 1956, 4344.

( 3fl. 5a. Ila. 12fl. 2 5R)- 11. 2 3- dibromspirostan- 3. 12- diol: (3fl,5a,lia,25R)-11,23-dibrom-3-acetoksyspirostan-12-on (20,00 g, azeotropisk tørket med toluen) ble løst i THF

(600 ml) og avkjølt til -78°C. Litiumaluminiumhydrid (96,0 ml av 1,0 M THF-løsning) ble langsomt tilsatt, og den resulterende blanding omrørt ved -7 8'C i 2 timer og 0"C i 0,5 timer. Ved anvendelse av en kanyle ble blandingen forsiktig overført til omrørt 3 M vandig ammoniumklorid (200 ml).

Den organiske fase ble fraskilt, slått sammen med THF-vaskinger av de faste rester, og konsentrert under dannelse av tittelforbindelsen.

(( 3/ 3. 5a . 11/ 3 . 12/ 3. 25R) - 23- brom- ll. 12- epoksvspirostan- 3- ol: Føl-gende fremgangsmåte er en variasjon av den som er beskrevet i Heiv. Act. Chim..1953, 36, 1241.

((3/3, 5a, lia, 12/3, 25R)-11, 23-dibromspirostan-3 ,12-diol (18,08 g) ble løst i pyridin (500 ml) ved romtemperatur og behandlet med sølvoksyd (70,0 g). Den resulterende blanding ble omrørt i mørket i 71 timer. Blandingen ble filtrert og det faste stoff vasket med eter og deretter kloroform. Disse vaskingene ble slått sammen med filtratet og konsentrert. Det resulterende faste stoff ble renset ved flashkromatografi (1:1 heksan:etylacetat) under dannelse av 12,2 g av en l:l-blanding av tittelforbindelsen og (3/3, 5a, 25R)-23-bromspirostan-3-ol-12-on. Videre kromatografi (7:3 heksan:etylacetat) ga den rene tittelforbindelsen.

( 3/ 3, 5a. 11/ 3. 12a. 25R) - 23- brom- 12- ( trikloracetoksy) spirostan-3. 11- diol: Ved anvendelse av fremgangsmåten beskrevet i J. Chem. Soc. 1956, 4330, ble (3/3, 5a, 11/3,12/3,25R)-23-brom-ll, 12-epoksyspirostan-3-ol behandlet med trikloreddiksyre i toluen ved romtemperatur i 3 dager under dannelse av tittelforbindelsen.

( 3/ 3 . 5a. 11/ 3. 12a. 25R) - 23- brom- spirostan- 3 . 11. 12. triol: Ved anvendelse av fremgangsmåten beskrevet i J. Chem. Soc, 1956, 4330, ble (3/3, 5a, 11/3,12a,25R)-23-brom-12-(trikloracetoksy) - spirostan-3,11-diol forsåpet med natriumhydroksyd i vann og etanol under dannelse av tittelforbindelsen.

( 3/ 3. 5a, 11/ 3. 12a. 25R) - spirostan- 3 , 11. 12- triol: Ved anvendelse av fremgangsmåten beskrevet i J. Chem. Soc, 1956, 4330, ble (3/3, 5a, 11/3,12a, 25R) -23-brom-12- (trikloracetoksy) -spirostan-3,11-diol redusert med sink og eddiksyre under dannelse av tittelforbindelsen.

Preparat G2

( 30. 5a. 12a. 25R) spirostan- 3, 12- diol- ll- on

( 3/ 3. 5a. 11) 3, 12a. 25R) - 3 . 12- di ( acetoksy) spirostan- ll- ol: Ved anvendelse av fremgangsmåten beskrevet i J. Chem. Soc, 1956, 4330, ble (3/3, 5a, 110,12a, 25R) -spirostan-3 ,11,12-triol (preparat Gl) selektivt acetylert med eddiksyreanhydrid og pyridin under dannelse av tittelforbindelsen.

( 3/ 3. 5a. 12a. 25R) - 3. 12- di ( acetoksy) spirostan- ll- on: Ved anvendelse av fremgangsmåten beskrevet i Org. Syn., 1976, 55, 84, ble (3/3, 5a, 11/S, 12a, 25R) -3 ,12-di (acetoksy) -spirostan-ll-ol oksydert med kromtrioksyd og pyridin i metylenklorid under dannelse av tittelforbindelsen.

( 3/ 3. 5a. 12a. 25R) - spirostan- 3 . 12- diol- ll- on: Ved anvendelse av fremgangsmåten beskrevet i Syn., 1973, 790, ble (3/3,5a, 12/3, 25R)-3,12-di (acetoksy) spirostan-ll-on forsåpet med kaliumcyanid i vann, metanol og THF under dannelse av tittelforbindelsen.

Preparat G3

( 30. 5a. 110. 25R) spirostan- 3. 11- diol

( 30. 5a. 110. 25R) spirostan- 3. 11- diol: (30,5a,25R)spirostan-3-ol-11-on (Aldrich Chemical Companyl, Milwaukee, WI eller Steraloids Inc., Wilton, N.H., eller se preparat G13) ble omdannet til tittelforbindelsen via reduksjon med litiumaluminiumhydrid i THF ved romtemperatur ifølge fremgangsmåten beskrevet i J. Am. Chem. Soc, 1951, 73, 1777.

Preparat G4

( 30. 5a. Ila. 25R) spirostan- 3. 11- diol

f 30. 5a. Ila. 25R) spirostan- 3 . 11- diol: (30, 5a,.25R) spirostan-3-ol-11-on (Aldrich Chemical Companyl, Milwaukee, WI eller Steraloids Inc, Wilton, N.H., eller se preparat G13) ble

omdannet til tittelforbindelsen via reduksjon med litium og ammoniakk ifølge fremgangsmåten beskrevet i J. Am. Chem. Soc, 1953, 75, 1282.

Preparat G5

( 38 . 5a . 11B . 12 B . 25R ) spirostan- 3 , 11. 12- triol

( 3B . 5a . 11B . 12B . 25R ) spirostan- 3. 11. 12- triol: (30,5a,120,25R)-3,12-di(acetoksy)spirostan-ll-on (kjøpt fra Steraloids, Inc., eller se preparat G13) ble omdannet til tittelforbindelsen via reduksjon med litiumaluminiumhydrid i THF ved romtemperatur ifølge fremgangsmåten beskrevet i J. Am. Chem. Soc, 1951, 73, 1777.

Preparat G6

( 30. 5a. Ila. 120. 25R) spirostan- 3. 11. 12- triol

( 30. 5a. 120. 25R) spirostan- 3. 12- diol- ll- on; (30,5a,120,25R)-3 ,12-di (acetoksy) spirostan-ll-on (kjøpt fra Steraloids, Inc, eller se preparat G13) ble forsåpet med kaliumkarbonat i vann, metanol og THF under dannelse av tittelforbindelsen.

( 3B . 5a . Ila . 120. 25R) spirostan- 3. 11. 12- triol: (30,5a,120,25R)-spirostan-3,12-diol-ll-on ble omdannet til tittelforbindelsen via reduksjon med litium og ammoniakk ifølge fremgangsmåten beskrevet i J. Am. Chem. Soc, 1953, 75, 1282.

Preparat G7

( 30. 5a. 12a. 25R) spirostan- 3. 12- diol

( 30. 5a. 12a. 25R) spirostan- 3. 12- diol; Ved anvendelse av fremgangsmåten beskrevet i J. Am. Chem. Soc, 1954, 76, 4013, ble (30,5a,25R)-spirostan-3-ol-12-on redusert med litiumaluminiumhydrid i eter under dannelse av en blanding av C-12-alkoholer, hvorifra tittelforbindelsen ble isolert.

Preparat G8

( 3/ 9. 5a. 25R) - spirostan- 3- ol- ll. 12- dion

( 30 . 5a . 120. 25R )- 3-( t- butvldimetvlsilvloksv) spirostan- 12- ol- ll-on: Ved anvendelse av fremgangsmåten beskrevet i J. Am. Chem. Soc, 1972, 94, 6190, ble (3/9, 5a, 120, 25R)-spirostan-3 ,12-diol-ll-on (se preparat G6) silylert med t-butyldimetylklorsilan og imidazol i DMF under dannelse av tittelforbindelsen.

( 30. 5a. 25R)- 3-( t- butvldimetylsilvloksv) spirostan- 11. 12- dion: Ved anvendelse av fremgangsmåten beskrevet i Org. Syn., 1976, 55, 84, ble (30,5a,120,25R)-3-(t-butyldimetylsilyloksy)-spirostan-12-ol-ll-on oksydert med kromtrioksyd og pyridin i metylenklorid under dannelse av tittelforbindelsen.

( 30, 5a. 25R)- spirostan- 3- ol- ll. 12- dion: Ved anvendelse av fremgangsmåten beskrevet i J. Am. Chem. Soc, 1972, 94, 6190, ble (30,5a,25R)-3-(t-butyldimetylsilyloksy)spirostan-11,12-dion desilylert med hydrogenfluoridsyre i acetonitril under dannelse av tittelforbindelsen.

Preparat G9

( 30. 5a. 110. 25R) spirostan- 3. ll- diol- 12- on

( 30. 5a. 110. 120. 25R)- 3-( t- butyldimetylsilyloksy) spirostan-11. 12- diol: (30,5a,120,25R-3-(t-butyldimetylsilyloksy)-spirostan-12-ol-ll-on (se fremgangsmåte G8) ble omdannet til tittelforbindelsen via reduksjon med litiumaluminiumhydrid i THF ved romtemperatur ifølge fremgangsmåten beskrevet i J. Am. Chem. Soc, 1951, 73, 1777.

( 30. 5a. 110. 120. 25R)- 3-( t- butvldimetvlsilvloksv)- 12- acetoksyspirostan- ll- ol: (30,5a,110,120,25R-3-(t-butyldimetylsilyloksy) spirostan-11 , 12-diol ble selektivt acetylert med eddiksyreanhydrid, pyridin og dimetylaminopyridin i metylenklorid under dannelse av tittelforbindelsen.

( 36 . 5a. 110. 120. 25R) - 3-( t- butvldimetvlsilvloksv)- 11-( trimetyl-silyloksy)- 12- acetoksyspirostan: (30,5a,110,120,25R)-3-(t-butyldimetylsilyloksy)-12-acetoksyspirostan-ll-ol ble silylert med trimetylsilyltriflat og 2,6-lutidin i metylenklorid ifølge fremgangsmåten beskrevet i Tetrahedron Letters, 1981, 22, 3455.

( 36 . 5a. 116 . 126 . 25R)- 3-( t- butvldimetvlsilvloksv)- 11-( trimetyl-silvloksy) spirostan- 12- ol: (30,5a,110,120,25R)-3-(t-butyldimetylsilyloksy) -11-(trimetylsilyloksy)-12-acetoksyspirostan ble deacetylert ved behandling med litiumaluminiumhydrid i THF etterfulgt av forsiktig tilsetning av vandig ammoniumklorid. Den resulterende tittelforbindelse ble utsatt for 11 til 12 silylgruppemigrering på silikagel, og måtte således anvendes urenset.

( 30, 5a. 110. 25R)- 3-( t- butyldimetvlsilyloksy)- 11-( trimetylsilyl-oksy) spirostan- 12- on r (30,5a,110,120,25R)-3-(t-butyldimetylsilyloksy) -11-(trimetylsilyloksy)spirostan-12-ol ble oksydert med kromtrioksyd og pyridin i metylenklorid ifølge fremgangsmåten beskrevet i Org. Syn., 1976, 55, 84 under dannelse av tittelforbindelsen.

( 30. 5a. 110. 2 5R)- spirostan- 3. ll- diol- 12- on: Tittelforbindelsen syntetisert fra (30,5a,110,25R)-3-(t-butyldimetylsilyloksy)-11-(trimetylsilyloksy)spirostan-12-on ble desilylert med hydrogenfluoridsyre i acetonitril ifølge fremgangsmåten beskrevet i J. Am. Chem. Soc, 1972, 94, 6190. Tittelforbindelsen må håndteres omhyggelig fordi den vil rearrangere til (30,5a,120,25R)-spirostan-3,12-diol-ll-on dersom den utsettes for base.

Preparat G10

( 30. 5a. Ila. 2 5R) spirostan- 3. ll- diol- 12- on

( 30. 5a. Ila. 120. 25R) 3. 11- di( acetoksy) spirostan- 12- ol:

(30,5a,lia,120,25R)-spirostan-3,11,12-triol (se preparat G6)

ble acetylert ifølge fremgangsmåten beskrevet i J. Am. Chem. Soc, 1955, 77, 1632 under dannelse av en blanding av acetater hvorifra tittelforbindelsen kunne isoleres.

( 30 , 5a . Ila . 25R) 3. 11- di( acetoksy) spirostan- 12- on: (3/3, 5a, lia, 120, 25R) 3 ,11-di (acetoksy) spirostan-12-ol ble oksydert med kromtrioksyd og pyridin i metylenklorid ifølge fremgangsmåten beskrevet i Org. Syn., 1976, 55, 84 under dannelse av tittelforbindelsen.

( 30. 5a. Ila. 25R) spirostan- 3. ll- diol- 12- on; (30,5a,lia,25R)-3,ll-di(acetoksy)spirostan-12-on ble forsåpet med natriummetoksyd i metanol og THF under dannelse av tittelforbindelsen.

Preparat Gil

( 30, 5a, lia. 12a. 25R) spirostan- 3. 11. 12- triol

( 36 , 5a . 25R ) spirostan- 3- ol- 12- tosylhydrazon: (30,5a,25R)-spirostan-3-ol-12-on (8,00 g) ble løst i iseddiksyre (200 ml) og oppvarmet til 50°C. Paratoluensulfonylhydrazid (6,928 g) ble tilsatt, og løsningen omrørt ved 50°C i 30 min.. Etter ytterligere 2 timers omrøring ved romtemperatur ble tilsatt vann (200 ml). Det resulterende faste stoff ble oppsamlet, vasket med vann (100 ml), tørket, gnidd ut med tilbakeløpende aceton (300 ml), filtrert varmt og tørket under dannelse av 3,903 g av tittelforbindelsen.

( 30, 5a. 25R) spirostan- ll- en- 3- ol: En blanding av (30,5a,25R)-spirostan-3-ol-12-tosylhydrazon (9,100 g) og natriummetoksyd (8,379 g) i DMF (200 ml) ble oppvarmet til 150°C i 35 min., deretter avkjølt til romtemperatur. Blandingen ble deretter helt over i isvann (12 00 ml) og den resulterende suspensjon filtrert. Det oppsamlede faste stoff ble vasket med vann (100 ml), lufttørket, og løst i metylenklorid (700 ml). Denne løsning ble vasket med vann (2 x 200 ml), tørket med MgSO^, og konsentrert under dannelse av et hvitt fast stoff. Etter

flashkromatografi ble det isolert 2,384 g av tittelforbindelsen (smp. 179-181°C, lit. 188-192°C - J. Am. Chem. Soc., 1954, 76 4013) .

( 3/ 3. 5a . Ila. 12a, 25R) spirostan- 3 . 11. 12- triol: (3/3, 5a, 25R)-spirostan-ll-en-3-ol ble oksydert til tittelforbindelsen med osmiumtetroksyd og N-metylmorfolin-N-oksyd i vann, t-butanol og aceton ifølge fremgangsmåten beskrevet i Tetrahedron Letters.1976, 1973.

Preparat G12

( 3/ 3. 5a. 12/ 3, 25R) spirostan- 3 . 12- diol- ll- on ( 3/ 3. 5a, 11/ 3. 25R) - ll- bromspirostan- 3- ol- 12- on: En glassforet reaktor ble ifylt med 190 1 metanol og deretter innblåst under overflaten med saltsyregass inntil 7,7 kg (5,0 ekv.) var ifylt. Etter fullføring av denne innblåsning ble reaktoren ifylt med 18,8 kg (42,2 mol) av (3/3, 5a, 25R) spirostan-3-ol-12-on, 190 1 metanol og 38 1 metylenklorid. Denne blanding ble

avkjølt til 10°C, og en løsning av 8,4 kg brom (52,7 mol, 1,25 ekv.) i 38 1 metylenklorid ble tilsatt i løpet av 2 timer mens det ble opprettholdt en beholdertemperatur på ca. 10°C. Etter at tilsetningen var fullstendig, fikk reaksjonen varme seg opp til romtemperatur og ble omrørti 2 timer. TLC på dette punkt anga fullstendig omsetning.

Reaksjonen ble fortynnet med 190 1 vann og omrørt i

10min.. Etter separasjon av sjiktene ble det vandige sjikt ekstrahert to ganger med 114 1 metylenklorid. De tre samlede organiske ekstrakter ble vasket to ganger med 114 1 vann, én gang med 114 1 mettet saltløsning, deretter tørket ved anvendelse av 7,0 kg magnesiumsulfat. Tørkemidlet ble fjernet ved filtrering på en 30 tommers Lapp etterfulgt av to 11 1 mety-lenkloridvaskinger. De sammenslåtte filtrater og vaskingene ble destillert atmosfærisk til et samlet volum på 26 1. Det ble ifylt to ganger 38 1 metanol, etterfulgt av fortsatt destillasjon. Når det var oppnådd et sluttvolum på <38 1, ble blandingen avkjølt til romtemperatur. Den resulterende suspensjon ble granulert i 2 timer, filtrert på en30tommers

Lapp, og filterkaken vasket to ganger med 11 1 metanol. Vakuumtørking av filterkaken ved 45-50°C ga 12,6 kg (58,6% utbytte) av tittelforbindelsen.

( 30 , 5a. 120 . 25R) spirostan- 3 . 12- diol- ll- on: En glassforet reaktor ble ifylt med 12,4 kg av (30,5a,110,25R)-11-bromspirostan-3-ol-12-on (24,34 mol), 125 1 av t-butanol, 125 1 vann og 7,5 kg (189 mol, 7,75 ekv.) av natriumhydroksyd-pelleter. Reaksjonen ble oppvarmet til tilbakeløp i 1,5 timer, holdt ved tilbakeløp i4,5 timer (beholdertemperaturen var 83°C), deretter avkjølt til romtemperatur. TLC på dette punkt anga fullstendig omsetning.

Reaksjonen ble destillert for å fjerne t-butanolen. Dette ble oppnådd både ved vakuum- og atmosfærisk destillasjon. Under konsentreringen ble det tilsatt to 123 1 porsjo-ner vann. Når t-butanolen var fjernet, ble den vandige suspensjon avkjølt til romtemperatur og granulert i to timer. Suspensjonen ble filtrert på en 3 0 tommers Lapp, vasket to ganger med 11 1 vann, og filterkaken ble lufttørket ved 60"C. Dette ga 11,1 kg av tittelforbindelsen.

Preparat G13

( 30. 5a. 25R) spirostan- 3- ol- ll- on

( 30. 5a, 120. 25R)- 3. 12- diacetoksvspirostan- ll- on: En glassforet reaktor ble ifylt med 98 1 pyridin, 98 1 eddiksyreanhydrid og 11,0 kg av (30,5a,120,25R)spirostan-3,12-diol-ll-on (preparat G12). Denne blandingen ble oppvarmet med tilbakeløp i 2 timer (beholdertemperatur 128°C) og fikk avkjøle seg til romtemperatur. Reaksjonen ble vakuumdestillert til et samlet volum på 57 1 (beholdertemperatur ca. 45°C under destillasjon). Suspensjonen ble fortynnet med 95 1 eddiksyre og ytterligere vakuumdestillert til et samlet volum på 57 1 (beholdertemperatur ved slutten ca. 80°C). Blandingen ble fortynnet med 330 1 vann og avkjølt til romtemperatur. Etter 5 timer granulering ble tittelforbindelsen isolert ved filtrering på en 30 tommers Lapp etterfulgt av to vaskinger med 11 1 vann.

Filterkaken ble tørket ved 60"C under vakuum med et utbytte på 12,2 kg (93,3%).

( 3/ 3, 5Q. 25R) spirostan- 3- ol- 11- on: En rustfri stålreaktor ble avkjølt til -80°C ved å lede flytende nitrogen gjennom inner-kveilene. Ammoniakk ble tilsatt til reaktoren inntil 54,5 kg (80 1, 3.200 mol, 170 ekv.) var ifylt.

På samme tid som ammoniakkfyllingen ble begynt, ble en glassforet reaktor ifylt med 10,0 kg av (3/3, 5a, 125, 25R) -3 ,12-diacetoksyspirostan-ll-on (18,84 mol) og 151 1 av THF. Denne løsningen ble atmosfærisk destillert inntil det var oppnådd et samlet volum på 98 1.

Ved slutten av ammoniakkifyllingen ble det tilsatt 2,8 kg kalsiumspon (69,0 g atomer, 3,7 ekv.) i løpet av 3 0 min. mens reaktortemperaturen ble holdt på -50°C. Ved slutten av denne tilsetning ble THF-løsningen av (3/3,5a,12/3,25R)-3,12-di-acetoksyspirostan-ll-on tilsatt i løpet av 20 min. (reaktor-temperatur ved slutten av tilsetningen var -35°C) etterfulgt av en skylling med 3,8 1 THF. Reaksjonsblandingen ble omrørt i 30 min. ved -35"C til -40"C. Mens reaksjonen var ved -35"C til -40°C, ble det tilsatt 3,33 1 brombenzen (4,98 kg, 31,7mol, 1,68 ekv.) etterfulgt av 3,33 1 vann.

Etter denne tilsetning ble destillasjonen av ammoniakk fra reaktoren startet. Denne destillasjon ble ledet til en vannskrubber. Da all ammoniakken var fjernet, ble reaksjonen (nu ved 24°C) overført til en glassforet reaktor etterfulgt av en skylling med 15 1 THF. Den samlede løsning og skyllingen ble vakuumdestillert til en tykk olje. Til denne ble tilsatt 132 1 metanol og 3,3 kg (59 mol) kaliumhydroksydpelleter. Denne blandingen ble oppvarmet med tilbakeløp i 1 time, av-kjølt, deretter ble ifylt 10 1 eddiksyre og 167 1 vann. Denne suspensjon ble ytterligere avkjølt til romtemperatur og granulert i 1 time. Tittelforbindelsen ble isolert ved filtrering på en 30 tommers Lapp etterfulgt av en vasking med 19 1 av 3:1 vann:metanolblanding. Vakuumtørking ved 55'C ga 7,05 kg (86,9%) .

Preparat G: Fysiske data

Tilfredsstillende MS- og IR-data ble oppnådd på alle av (30,5a,25R)spirostan-3-ol-forbindelsene beskrevet i fremstilling G (se tabell1). De forskjellige diol- og triol-produkter kunne adskilles fra hverandre ved proton NMR (se tabell 2.)

1 - IR-data antyder at denne forbindelse lett tautomeriserer enolketonformer i CHC13. 2 - Alle prøver kjørt i CDC13bortsett fra ll/3-ol-12-on som ble kjørt i DMSO-d6. Topper for H16, H3f H26eq og H26axer også observert ved >2ppm. I CDC13observeres disse ved 4,37 (ddd, J = 9,9 & 7 Hz, 1H), 3,56 (heptet, J = 4 Hz, 1H), 3,45 (ddd, J = 10,6 & 2 Hz, 1H), 3,35 (t, J = 11 Hz, 1H) .

Preparat Hl

( 5a. 25R)- spirostan- 3- on

Pyridiniumklorkromat (PCC) ble tilsatt til en blanding av tigogenin (50,00 g, 120,0 mmol), celite (160 g), i CH2C12

(1000 ml) ved 0°C. Reaksjonen fikk komme til omgivende temperatur og ble omrørt i 5 timer. Reaksjonen ble fortynnet med 4000 ml Et20 og filtrert gjennom en silikagelplugg. Pluggen ble vasket med ytterligere 6000 ml Et20. Filtratet ble konsentrert i vakuum under dannelse av 45,00 g av tittelforbindelsen (90,4%).

<J>HNMR (250 MHz, CDCl3) d 4,38 (q, J = 7Hz, 1H); 3,40 (m, 2H) ; 2,20-2,45 (m, 3H) ; 0,70-2,14 (m, 36H) ; 1,02 (s, 3H) ;

0,96 (d, J = 7 Hz, 3H); 0,76 (s, 3H); 0,76 (d, J= 7Hz, 3H). MS: 415 (M + H)<+>; S.mp. 209-211°C.

Preparat H2

( 2a. 5a. 25R)- 2- bromspirostan- 3- on

En blanding av (5a,25R)-spirostan-3-on (1,00 g,

2,41 mmol) og tetrahydrofuran (10 ml) ble avkjølt til -78°C under nitrogenatmosfære. Brom ble tilsatt (0,39 g, 2,41 mmol) og reaksjonsblandingen gradvis oppvarmet til romtemperatur. Etter 3 timer ble reaksjonen undertrykket ved tilsetning av

mettet natriumhydrogensulfittløsning. Blandingen ble fortynnet med etylacetat, vasket med mettet natriumhydrogensulfitt-løsning (lx), mettet natriumhydrogenkarbonat (lx), saltløsning (lx), tørket (natriumsulfat), filtrert, og konsentrert i vakuum. Etter tilsetning av eter dannet det seg et bunnfall som ble frafiltrert og vasket med heksaner, og ga 1,20 g (85%) av tittelforbindelsen.

<1>HNMR (250 MHZ, CDC13) d 4,75 (q, J = 7Hz, 1H); 4,40 (q,

J = 7Hz, 1H) ; 3,40 (m,2H); 2,64 (q, J=6, 1H); 2,40 (m, 2H); 0,70 - 2,55 (m, 34H); 1,10 (s, 3H); 0,96 (d, J = 7Hz, 3H); 0,80 (s, 3H); 0,80 (d, J = 7, 3H). MS 493 (M +

H)<+>.

Preparat H3

( 5a. 25R)- spirost- l- en- 3- on

En blanding av litiumbromid (0,700 g, 8,06 mmol), litiumkarbonat (1,20 g, 16,24 mmol) og vannfri N,N-dimetylformamid (30 ml) ble oppvarmet under nitrogenatmosfære til 95°C. Til denne blandingen ble tilsatt (2a,5a,25R)-2-bromspirostan-3-on (4,00 g, 8,11 mmol). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 130°C i 3 timer. Etter avkjøling til romtemperatur ble reaksjonsblandingen fortynnet med etylacetat, vasket med vann (3x), saltløsning (lx), tørket (natriumsulfat), filtrert og konsentrert i vakuum, og ga 3,31 g, (98%) av tittelforbindelsen.

^NMR (250 MHz, CDC13) d 7,10 (d, J = 10Hz, 1H) , 5,85 (d, J = 10Hz, 1H); 4,40 (q(J = 7Hz, 1H); 3,40 (m, 2H); 2,30 (m, 2H); 0,70-2,05 (m, 33H); 1,02 (s, 3H); 0,96 (d, J =

7Hz, 3H); 0,80 (s, 3H); 0,78 (d, J=7Hz, 3H). MS 413 (M

+ H)<+>.

Preparat H4

( la . 2a . 5a , 25R )- 1. 2- epoksy- spirostan- 3- on

En blanding av (5a,25R)-spirost-l-en-3-on (2,87 g,

6,96 mmol), tetrahydrofuran (30 ml), metanol (50 ml) og 15% natriumhydroksyd (1 ml) ble omrørt under nitrogenatmosfære. Blandingen ble avkjølt til 0°C og 3 0% hydrogenperoksyd (5 ml) ble tilsatt. Reaksjonsblandingen ble gradvis oppvarmet til romtemperatur og omrørt i 4 timer. Reaksjonen ble fortynnet med etylacetat, avkjølt til 0°C, og deretter undertrykket med mettet natriumhydrogensulfittløsning. Blandingen ble vasket med mettet natriumhydrogensulfitt (2x) , saltløsning (lx), (tørket natriumsulfat), filtrert og konsentrert i vakuum under dannelse av 2,64 g (88%) av tittelforbindelsen.

<1>HNMR (250 MHz, CDC13) d 4,40 (q, J = 7Hz, 1H) ; 3,40 (m, 3H), 3,24 (d, J = 6Hz, 1H); 2,25 (dd, J = 18,4 Hz, 1H);

0,70-2,28 (m, 34H); 0,98 (d, J = 7Hz, 3H); 0,92 (s, 3H);

0,80 (s, 3H); 0,78 (d, J = 7Hz, 3H). MS 429 (M + H)<+>.

Preparat H5

( la,. 36 f 5a. 25R)- 1. 3- di( hvdroksy) spirostan

Litiumaluminiumhydrid (0,43 g, 15,38 mmol) ble tilsatt til en løsning av (la,2a,5a,25R)-1,2-epoksy-spirostan-3-on i THF (2 0 ml) ved 0°C. Reaksjonen ble gradvis oppvarmet til romtemperatur, og etter 3 timer ble tilsatt ytterligere litiumaluminiumhydrid (0,10 g, 3,58 mmol). Etter 1 time ble reaksjonen avkjølt til 0°C og undertrykket ved sekvensill tilsetning av H20 (0,75 ml), 15% NaOH (0,75 ml), og H20 (1,50 ml) . Blandingen ble tørket med MgSO,,, filtrert, og konsentrert i vakuum. Produktet ble renset med flashkromatografi (50% EtOAc/50% heksan til 95% EtOAc/5%MeOH) og ga 0,460 g, (34%) av tittelforbindelsen.

<:>HNMR (250 MHZ, CDC13) d 4,48 (q, J = 7Hz, 1H) ; 4,04 (m, 1H); 3,80 (m, 1H); 3,40 (m, 2H); 0,75-2,05 (m, 37H); 0,96 (d, J = 6Hz, 4H); 0,84 (s, 3H); 0,78 (d, J=6Hz, 3H); 0,76 (s, 3H). MS 433 (M+H)<+>.

Preparat II

( 30, 5a. 25R)- 3- f( heptaacetvl- Ø- D- cellobiosyl) oksy] spirostan- 1-on

Pyridiniumklorkromat (0,12 3 g, 0,57 mmol) ble tilsatt til en blanding av (la,30,5a,25R)-3-[(heptaacetyl-Ø-D-cellobiosyl) oksy]-l-hydroksyspirostan (0,2 g, 0,19 mmol, se preparat B39), celite (0,2 g), i CH2C12(5 ml) ved 0°C. Reaksjonen fikk komme til omgivende temperatur og ble omrørt i 2 timer. Reaksjonen ble fortynnet med 15 ml Et20 og filtrert gjennom en silikagelplugg. Pluggen ble vasket med ytterligere 500 ml Et20. Filtratet ble konsentrert i vakuum og ga 0,18 g av tittelforbindelsen (90%).

<1>HNMR (250 MHZ, CDC13) d 5,15 (m, 3H) ; 4,90 (m, 2H) ; 4,50 (m, 2H); 4,35 (m, 2H); 4,05 (m,2H); 3,65 (m, 3H); 3,40 (m, 2H); 2,35 (t, J = 12,5 Hz, 1H); 2,60 (q, J = 6 Hz, 1H); 1,95-2,20 (m, 21H); 0,70-1,90 (m, 37H); 1,15 (s, 3H); 0,95 (d, J = 7 Hz, 3H); 0,80 (d, J = 6 Hz, 3H); 0,76 (s, 3H). MS: 1049 (M + H)<+>.

Preparat Jl

( 30, 25R)- 3- etoksymetoksy- 5- spirosten

En blanding av diosgenin (2,5 g, 6,0 mmol), klormetyl-etyleter (1,14 g, 12,0 mmol), diisopropyletylamin (3,90 g, 30,0 mmol) og 1,2-dikloretan (75 ml) ble omrørt under nitrogenatmosfære ved omgivende temperatur i 4 timer. Metanol (<1 ml) ble tilsatt for å undertrykke reaksjonen. Blandingen ble fortynnet med etylacetat og vasket med vann (2x), salt-løsning (lx), tørket over natriumsulfat, filtrert og konsentrert i vakuum, og ga 2,17 g (76,5%) av tittelforbindelsen som et fargeløst fast stoff.

<X>H NMR (250 M Hz, CDC13) d 5,35 (d, 2H, 3=1, 0 Hz); 4,75 (s, 2H); 4,4 (m, 1H); 3,6 (q, 2H, J=7,0Hz); 3,4 (m, 2H) ;

3,35 (t, 1H, J=ll HZ); 2,4-0,7 (m, 38H); 1,2 (s, 3H);

0,95 (d, 3H, J=7Hz); 0,8 (d, 3H, 3=1Hz); 0,75 (s, 3H). MS: 777 (M+Na)<+>; smp. 125-127°C.

Fremstilling 32

( 3) 3, 5a. 6a. 25R) - 3- etoksymetoksv- 6- hydroksyspirostan

Boran-tetrahydrofurankompleks (0,68 ml, 0,68 mmol) ble tilsatt til en løsning av ( 30, 25R) -3-etoksymetoksy-5-spirosten (0,10 g, 0,21 mmol) i tetrahydrofuran (8 ml). Blandingen ble omrørt under nitrogenatmosfære ved omgivende temperatur i 3,5 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til 0°C, og metanol (1,5 ml), 15% natriumhydroksydløsning (1,5 ml) og 3 0% hydrogenperoksyd (1,5 ml) ble tilsatt. Reaksjonsblandingen ble deretter gradvis oppvarmet til omgivende temperatur og omrørt over natten. Reaksjonen ble undertrykket ved 0' C ved tilsetning av mettet natriumhydrogensulfittløsning. Blandingen ble fortynnet med etylacetat og vasket med ammoniumkloridløsning (lx), saltløsning (lx), tørket (natriumsulfat), filtrert og konsentrert i vakuum under dannelse av 0,11 g av en blanding av 6a-alkoholen og 6/3-alkoholen. De to produktene ble adskilt ved flashkromatografi på silikagel (6:4 heksan:etylacetat). Hovedproduktet (Rf=0,40) ble identifisert til å være tittelforbindelsen.

<*>H NMR (250 MHz; CDC13) d 4,7 (s, 2H) ; 4,4 (m, 1H) ; 3,6 (q, 2H, J=11,0Hz); 3,45 (m, 3H); 3,35 (t, 1H, J=11,0Hz); 2,3-0,6 (m, 41H); 1,8 (d, 3H, 3=1, 0 Hz); 0,82 (s, 3H), 0,78 (d, 3H, J=7,0 Hz); 0,75 (s, 3H). MS: 491 (M+H)<+>; smp. 171°C.

Preparat J3

( 30 , 5a . 25R )- 3- etoksvmetoksv- spirostan- 6- on

Pyridiniumklorkromat (1,98 g, 9,20 mmol) ble tilsatt til en blanding av ( 30,5a,6a,25R)-3-etoksymetoksy-6-hydroksyspiro stan (0,90 g, 1,8 mmol) og celite (8,0 g) i vannfri diklormetan ved 0°C. Reaksjonsblandingen ble gradvis oppvarmet til omgivende temperatur i løpet av 1 time og ble omrørt i ytterligere 5 timer. Reaksjonsblandingen ble deretter filtrert gjennom en plugg av siligagel ved anvendelse av eter som elueringsmiddel. De samlede eterfraksjoner ble konsentrert i vakuum under dannelse av 0,80 g (91%) av tittelforbindelsen som et fargeløst fast stoff.

<X>HNMR (250 MHz; CDC13) d 4,75 (m, 2H) ; 4,4 (m, 1H) ; 3,6 (q, 2H; J=7,0 Hz); 3,45 (m, 2H); 3,35 (t, 1H; J=11,0Hz) ;

2,4-0,6 (m, 40H); 0,9 (d, 3H, J=7,0 Hz); 0,8 (d, 3H, J=7,0 Hz); 0,78 (s, 6H). MS: 489,0 (MH)<+>; smp. 191-193°C.

Preparat J4

( 3/ 3, 5a. 25R) - spirostan- 6- on

Konsentrert saltsyre (2 dråper) ble tilsatt til en løs-ning av ( 3( 3, 5a, 25R) -3-etoksymetoksy-spirostan-6-on (0,70 g, 1,43 mmol) i metanol (10 ml) og tetrahydrofuran (10 ml). Blandingen ble omrørt under nitrogenatmosfære og oppvarmet til 62°C. Etter 15 min. ble reaksjonen avkjølt til 0°C og nøytra-lisert med 15% natriumhydroksydløsning. Blandingen ble konsentrert i vakuum og deretter fortynnet med etylacetat. Det organiske sjikt ble vasket med vann (2x), saltløsning (lx), tørket (natriumsulfat), konsentrert i vakuum og renset ved flashkromatografi (1:1 heksan:etylacetat) under dannelse av 0,55 g (89,4%) av tittelforbindelsen som et fargeløst fast stoff.

<*>H NMR (250 MHz; CDC13) d 4,4 (m, 1H) ; 3,45 (m, 2H) ; 3,35 (t, 1H, J=11,0 (Hz); 2,35-0,6 (m, 38H); 0,95 (d, 3H, J=7,0Hz); 0,75 (d, 3H, J=7,0); 0,71 (s, 6H), MS: 431 (M+H) + ; smp. 210-212''C.

Preparat Kl

( 30. 5a. 6a. 25R) - 3- r ( heptaacetvl- Ø- D- cellobiosyl) oksy 1 - 6-hydroksvspirostan

Natriumborhydrid (0,11 g, 2,86 mmol) ble tilsatt til en løsning av (3/3, 5a, 25R) -3-[ (heptaacetyl-Ø-D-cellobiosyl) oksy] - spirostan-6-on (1,5 g, 1,43 mmol, se preparat B41) i etanol (20 ml) og diklormetan (5 ml), og blandingen ble omrørt under nitrogenatmosfære ved romtemperatur i 4 timer. Reaksjonsblandingen ble deretter avkjølt til 0°C og nøytralisert med IN saltsyre. Blandingen ble delvis konsentrert i vakuum og deretter fortynnet med etylacetat, vasket med IN saltsyre (lx), saltløsning (lx), tørket (natriumsulfat), filtrert og konsentrert i vakuum under dannelse av 1,00 g (66%) av tittelforbindelsen som et fargeløst fast stoff.

<*>H NMR (250 MHz; CDC13) d 5,2-4,4 (m, 14H) , 4,3 (m,.lH);

3,75-3,35 (m, 3H); 3,3 (t, 1H, J=11,0Hz); 2,15-0,5 (m, 59H); 0,95 (s, 3H); 0,90 (d, 3H, J=7, 0 Hz); 0,75 (s, 3H);

0,70 (d, 3H, J=7,0 Hz). MS: 1051 (M+H)<+>.

Det skal forstås at oppfinnelsen ikke er begrenset til de særlige utførelser som er vist og beskrevet heri, men at forskjellige forandringer og modifikasjoner kan gjøres uten å avvike fra ånden og rammen av dette nye konsept som definert ved de følgende krav.

Claims (63)

1. Spirostanylglykosid, karakterisert ved formel IA

hvor enten (A): Q<1> er karbonyl Q<2> er karbonyl, metylen,

Q <3> er

R ^-al k <y>l en (C2 - <C>3 )

eller R<1>0 -alkylen(C2 - <C>3 ;

Q <*> og Q <5> begge er metylen; og hvor R <1> er / 3-D-glukopyranosyl, Æ-D-glukopyranuronosyl,/ 3-D-2-acetamido-2-deoksy-glukopyranosyl,/ 3-D-galaktopyranosyl, /3-D-f ukopyranosyl,/ 3-L-fukopyranosyl, /3-D-xylopyranosyl, /3-L-xylopyranosyl a-D-arabanopyranosyl, a-L-arabanopyranosyl, a-D-cellobiosyl, /3-D-cellobiosyl, /3-D-laktosyl,/ 3-D-maltosyl, /3-D-gentiobiosyl, 3-0-/ 3-D-galaktopyranosyl-a-D-arabanopyranosyl eller Æ-D-maltotriosyl; eller (B): Q1 ,Q<A> ogQ<5> alle er metylen;

R ^-al k <y>l en (C2 -C3 )

eller R<1>0 -alkylen(C2 - <C>3 )

og hvor R <1> er Ø-D-glukopyranosyl, /3-D-glukopyranuronosyl,/ 3-D-2-acetamido-2-deoksy-glukopyranosyl, /3-D-f ukopyranosyl, 0-L-fukopyranosyl, / 3-D-xylopyranosyl, /3-L-xylopyranosyl a-D-arabanopyranosyl, a-L-arabanopyranosyl, /3-D-cellobiosyl, /3-D-laktosyl, /3-D-maltosyl, /3-D-gentiobiosyl, 3-0-/3-D-galaktopyranosyl-a-D-arabanopyranosyl eller Æ-D-maltotriosyl; eller (C): Q1 ,Q<4> og Q <5> alle er metylen; Q2 er karbonyl; Q <3> er

R<1>0 -alkylen(C2 -C3 )

eller R<1>0 -alkylen(C2 -C3 )

C25 er (R) ; og hvor R <1> er /3-D-glukopyranuronosyl,/ 3-D-2-acetamido-2-deoksy-glukopyranosyl, Æ-D-fukopyranosyl, /9-L-fukopyranosyl, /3-D-xylopyranosyl, /3-L-xylopyranosyl a-D-arabanopyranosyl, a-L-arabanopyranosyl, Æ-D-cellobiosyl, /3-D-laktosyl, /3-D-maltosyl, /3-D-gentiobiosyl, 3-0-/ 3-D-galaktopyranosyl-a-D-arabanopyranosyl eller /3-D-maltotriosyl ; eller (D): Q <1> , Q <2> / Q u og Q <5> alle er metylen; ogQ<3>

R<1>0 -alkylen(C2 - <C>3 )

eller R<1> 0-alkylen(C2 - <C>3 )

og hvor R <1> er /3-D-2-acetamido-2-deoksy-glukopyranosyl, Æ-D-xylopyranosyl, / 3-L-xylopyranosyl a-L-arabanopyranosyl, Æ-D-cellobiosyl, 3-0-/3-D-galaktopyranosyl-a-D-arabanopyranosyl eller /3-D-maltotriosyl ; eller (E): Q<1> ,Q<2> ogQ<5> alle er metylen; Q<4> er karbonyl eller

Q<3> C5 er alfa; C25 er (R) ; og hvor R <1> er Ø-D-galaktopyranosyl, /3-D-cellobiosyl,/ 9-D-laktosyl, /3-D-maltosyl eller/ 3-D-maltotriosyl; eller (F): Q <1> , Q <2> og Q 4 alle er metylen; Q<5> er karbonyl eller C5 er alfa; C25 er (R) ; og hvor R <1> er /3-D-galaktopyranosyl, /3-D-cellobiosyl, / 3-D-laktosyl, /3-D-maltosyl eller /3-D-maltotriosyl; under den forutsetning at (3/3, 5a, 25R)-3-[ (/3-D-cellobiosyl) oksy] spirostan ikke er inkludert.

2. Forbindelse ifølge krav 1, karakterisert ved at Q <1> er karbonyl,

Q<2> ,Q<4> ogQ<5> alle er metylen, Q <3> er

Cg-hydrogenet er alfa og C25 er (R).

3. Forbindelse ifølge krav 2, karakterisert ved at Q <1> er karbonyl ogR<1> er /3-D-cellobiosyl.

4. Forbindelse ifølge krav 2, karakterisert ved at Q <1> er karbonyl og R <1> er /3-D-galaktopyranosyl.

5. Forbindelse ifølge krav 2, karakterisert ved at Q <1> er karbonyl ogR<1> er a-D-cellobiosyl.

6. Forbindelse ifølge krav 2, karakterisert ved at Q <1> er karbonyl og R <1> er Æ-D-glukopyranosyl.

7. Forbindelse ifølge krav 2, karakterisert ved at Q <1> er karbonyl og R <1> er /3-D-laktosyl.

8. Forbindelse ifølge krav 2, karakterisert ved at Q <1> er karbonyl og R <1> er/ 3-D-maltosyl.

9. Forbindelse ifølge krav 2, karakterisert ved at Q <1> er karbonyl og R <1> er/ 3-D-maltotriosyl.

10. Forbindelse ifølge krav 2, karakterisert ved at 0.1 er

og R <1> er /3-D-cellobiosyl.

11. Forbindelse ifølge krav 2, karakterisert ved at Q <1> er

og R <1> er/ 3-D-cellobiosyl.

12. Forbindelse ifølge krav 1, karakterisert ved at Cjl/Q4°gQ5 alle er metylen, q <2> er

, C5 -hydrogenet er alfa og C25 er (R) .

13. Forbindelse ifølge krav 12, karakterisert ved atQ<2> er

og r! er /3-D- <c> ellobiosyl.

14. Forbindelse ifølge krav 1, karakterisert ved at Q <1> er karbonyl,

q2 er karbonyl,

Q <3> er

Q <4> ogQ<5> alle er metylen, C25 er (R), og C5 -hydrogenet er alfa.

15. Forbindelse ifølge krav 14, karakterisert ved at Q <1> er karbonyl, Q <2> er karbonyl og R <1> er/ 3-D-cellobiosyl.

16. Forbindelse ifølge krav 14, karakterisert ved at Q1 er karbonyl, Q <2> er

og R <1> er/ 3-D-cellobiosyl.

17. Forbindelse ifølge krav 14, karakterisert ved at Q <1> er karbonyl, Q <2> er

ogR<1> er/ 3-D-laktosyl.

18. Forbindelse ifølge krav 14, karakterisert ved at Q <1> er

Q <2> er karbonyl og R <1> er /9-D-cellobiosyl.

19. Forbindelse ifølge krav 14, karakterisert ved at Q <1> er

, Q <2> er karbonyl og R <1> er /3-D-cellobiosyl.

20. Forbindelse ifølge krav 1, karakterisert ved at Q <1> , Q <4> ogQ<5> alle er metylen, Q <2> er karbonyl, Q <3> er

c5 -hydrogenet er alfa og C25 er (R).

21. Forbindelse ifølge krav 20, karakterisert ved at R <1> er/ Ø-D-laktosyl.

22. Forbindelse ifølge krav 20, karakterisert ved at R <1> er/ 3-D-cellobiosyl.

23. Forbindelse ifølge krav 1, karakterisert ved at Q <1> og Q <2> ,Q<4> og Q <5> alle er metylen, Q <3> er

og C25 er (R) .

24. Forbindelse ifølge krav 23, karakterisert ved at C5 -hydrogenet er beta og R <1> er /3-D-cellobiosyl.

25. Forbindelse ifølge krav 1, karakterisert ved at Q <1,> Q <2> og Q <5> alle er metylen, Q <3> er

Q <4> er karbonyl, C5 -hydrogenet er alfa og C25 er (R).

26. Forbindelse ifølge krav 25, karakterisert ved at R <1> er/ 3-D-cellobiosyl.

27. Forbindelse ifølge krav 1, karakterisert ved at Q <1> , Q <2> og Q <4> alle er metylen,Q<3> er

Q 5 er karbonyl, C5 -hydrogenet er alfa og C25 er (R).

28. Forbindelse ifølge krav 27, karakterisert ved at R <1> er Æ-D-cellobiosyl.

29. Fremgangsmåte for kontroll av hyperkolesterolemi eller aterosklerose hos et pattedyr, karakterisert ved å administrere til et pattedyr som lider av hyperkolesterolemi eller aterosklerose en hyperkolesterolemi- eller aterosklerosekontrollerende mengde av et spirostanylglykosid med formel

hvor enten (A): Q<1> er metylen, karbonyl

Q<2> er karbonyl, metylen,

Q <3> er

R<1>0 -alkylen(C2 - <C>3 ) eller <R1> 0-alkylen(C2 -C3 )

Q<4> ogQ<5> begge er metylen; og hvor R <1> er /3-D-glukopyranosyl, /3-D-glukopyranuronosyl, /3-D-2-acetamido-2-deoksy-glukopyranosyl, /3-D-galaktopyranosyl, /3-D-fukopyranosyl,

0- L-fukopyranosyl, /3-D-xylopyranosyl, /3-L-xylopyranosyl a-D-arabanopyranosyl, a-L-arabanopyranosyl, a-D-cellobiosyl,/ 3-D-cellobiosyl,/ 3-D-laktosyl, /3-D-maltosyl, /3-D-gentiobiosyl, 3-0-/3-D-galaktopyranosyl-a-D-arabanopyranosyl eller /3-D-maltotriosyl ; eller (B): Q <1> , Q <z> og Q <5> alle er metylen; Q <3> er

Q<4> er karbonyl eller C5 er alfa; C25 er (R); og hvor R <1> er /3-D-galaktopyranosyl,/ 3-D-cellobiosyl,/ 3-D-laktosyl, /3-D-maltosyl eller /3-D-maltotriosyl; eller (C): Q<1> ,Q<2> ogQ<4> alle er metylen; Q <3> er

Q<5> er karbonyl eller

C5 er alfa; C25 er (R); og hvor; R <1> er / 3-D-galaktopyranosyl, /3-D-cellobiosyl, /3-D-laktosyl, / 3-D-maltosyl eller / 3-D-maltotriosyl; under den forutsetning at (3/3, 5a, 2 5R) -3- [ (a-D-cellobiosyl) oksy] spirostan, (3/3, 5a, 25R) -3- [ (/3-D-glukopyranosyl) oksy]spirostan, (3/3, 5a, 25R) -3-[ (/3-D-cellobiosyl) oksy]spirostan eller (3/3, 5a, 25R) -3- [ (/3-D-galaktopyranosyl) oksy] spirostan-12-on ikke er inkludert.

30. Fremgangsmåte ifølge krav 29, hvori Q1, Q <2> , Q <*> og Q <5> alle er metylen, C25 er (R) ogQ<3> er

31. Fremgangsmåte ifølge krav 30, hvori C5 -hydrogenet er beta og R <1> er /3-D-cellobiosyl.

32. Fremgangsmåte ifølge krav 30, hvori C5 -hydrogenet er alfa ogR<1> er /3-D-glukopyranuronosyl.

33. Fremgangsmåte ifølge krav 30, hvori C5 -hydrogenet er alfa og R <1> er /3-D-maltosyl.

34. Fremgangsmåte ifølge krav 30, hvori C5 -hydrogenet er alfa og R <1> er /3-D-laktosyl.

35. Fremgangsmåte ifølge krav 30, hvori C5 -hydrogenet er alfa og R <1> er /3-D-gentiobiosyl.

36. Fremgangsmåte ifølge krav 30, hvori C5 -hydrogenet er alfa og R <1> er/ 3-D-galaktopyranosyl.

37. Fremgangsmåte ifølge krav 29, hvori Q <1> er karbonyl,

Q<2> ,Q<4> og Q <5> alle er metylen, Q <3> er

C25 er (R) og C5 -hydrogenet er alfa.

38. Fremgangsmåte ifølge krav 37, hvori Q <1> er karbonyl ogR<1> er/ 3-D-cellobiosyl.

39. Fremgangsmåte ifølge krav 37, hvori Q <1> er karbonyl ogR<1> er/ 3-D-galaktopyranosyl.

40. Fremgangsmåte ifølge krav 37, hvori Q <1> er karbonyl ogR<1> er Qf-D-cellobiosyl.

41. Fremgangsmåte ifølge krav 37, hvori Q <1> er karbonyl ogR<1> er/ 3-D-glukopyranosyl.

42. Fremgangsmåte ifølge krav 37, hvori Q <1> er karbonyl ogR<1> er/ 3-D-maltosyl.

43. Fremgangsmåte ifølge krav 37, hvori Q <1> er karbonyl ogR<1> er/ 3-D-maltotriosyl.

44. Fremgangsmåte ifølge krav 37, hvori Q <1> er karbonyl ogR<1> er/ 3-D-laktosyl.

45. Fremgangsmåte ifølge krav 37, hvori Q <1> er

ogR<1> er/ 3-D-cellobiosyl.

46. Fremgangsmåte ifølge krav 37, hvori Q <1> er

ogR<1> er /3-D-cellobiosyl.

47. Fremgangsmåte ifølge krav 29, hvori Q <1> , Q <*> og Q <5> er metylen,Q<2> er karbonyl,

eller

Q <3> er

c25 er (R) °9 C5 -hydrogenet er alfa.

48. Fremgangsmåte ifølge krav 47, hvori Q <2> er karbonyl og R <1> er/ 3-D-cellobiosyl.

49. Fremgangsmåte ifølge krav 47, hvori Q <2> er karbonyl ogR<1> er/ 3-D-laktosyl.

50. Fremgangsmåte ifølge krav 47, hvori Q <2> er

ogR<1> er /3-D-cellobiosyl.

51. Fremgangsmåte ifølge krav 47, hvori Q2 er ogR<1> er/ 3-D-galaktopyranosyl.

52.F remgangsmåte ifølge krav 29, hvori Q <1> er karbonyl,

Q<2> er karbonyl,

eller

Q<3> er

Q<4> ogQ<5> begge er metylen, <C>25 er (R), og C5 -hydrogenet er alfa.

53. Fremgangsmåte ifølge krav 52, hvori Q <1> er karbonyl,Q<2> er karbonyl og R <1> er /3-D-cellobiosyl.

54. Fremgangsmåte ifølge krav 52, hvori Q <1> er karbonyl, Q <2> er

ogR<1> er /3-D-cellobiosyl.

55. Fremgangsmåte ifølge krav 52, hvori Q <1> er karbonyl,Q<2> er

ogR<1> er/ 3-D-laktosyl.

56. Fremgangsmåte ifølge krav 52, hvori Q <1> er

°-2 er karbonyl og R <1> er /3-D-cellobiosyl.

57. Fremgangsmåte ifølge krav 52, hvori Q <1> er

Q <2> er karbonyl og R <1> er/ 3-D-cellobiosyl.

58. Fremgangsmåte ifølge krav 29, hvori Q <1> , Q <z> og Q <5> alle er metylen, Q <3> er

ti ,Q<4> er karbonyl, C5 -hydrogenet er alfa og C25 er (R).

59 . Fremgangsmåte ifølge krav 58, hvori R <1> er /3-D-cellobiosyl.

60. Fremgangsmåte ifølge krav 29, hvori Q <1> , Q <2> og Q <A> alle er metylen, Q3 er

Q<5> er karbonyl, C5 -hydrogenet er alfa og C25 er (R ).

61. Fremgangsmåte ifølge krav 60, h vori R <1> er Æ-D-cellobiosyl.

62. Farmasøytisk preparat for kontroll av hyperkolesterolemi eller aterosklerose hos pattedyr, karakterisert ved en forbindelse ifølge krav 1 og en farmasøytisk akseptabel bærer.

63. Preparat, karakterisert ved et hydrat av en forbindelse ifølge krav 1.