NO904846L

NO904846L - AMFIFILE PEPTIDES AND USE THEREOF.

Info

Publication number: NO904846L
Application number: NO90904846A
Authority: NO
Inventors: Michael Zasloff
Original assignee: Magainin Sciences Inc
Priority date: 1988-05-27
Filing date: 1990-11-07
Publication date: 1990-11-07
Also published as: NO904846D0

Description

Foreliggende oppfinnelse vedrører nye polypeptider. Oppfinnelsen vedrører spesielt nye polypeptider som er biologisk aktive og som kan bli anvendt som antibiotika, antimikrobielle midler, spermicider og antivirale midler og mel-lomprodukter derav. The present invention relates to new polypeptides. The invention relates in particular to new polypeptides which are biologically active and which can be used as antibiotics, antimicrobial agents, spermicides and antiviral agents and intermediates thereof.

Biologisk aktive peptider betegnet "magainins" er beskrevet i Proe. Nati. Acad. Sei., Vol. 84 s. 5449-53 (aug. -87). Biologically active peptides termed "magainins" are described in Proe. Nati. Acad. Sei., Vol. 84 pp. 5449-53 (Aug. -87).

I henhold til ett aspekt ved oppfinnelsen, er det tilveiebragt et syntetisk polypeptid som er amfifilisk og som er positivt ladet (basisk). According to one aspect of the invention, there is provided a synthetic polypeptide which is amphiphilic and which is positively charged (basic).

Det er spesielt tilveiebragt et basisk (positivt ladet) polypeptid som har minst seksten aminosyrer der polypeptidet omfatter minst åtte hydrofobe aminosyrer ogminst 8 hydrofile aminosyrer. De hydrofobe aminosyrene er i grupper på to ved siden av liggende aminosyrer, og hver gruppe av to hydrofobe aminosyrer er i avstand fra en annen gruppe på to hydrofobe aminosyrer med minst én aminosyre forskjellig fra en hydrofob aminosyre (fortrinnsvis minst to aminosyrer) og generelt med ikke mer enn fire aminosyrer, og aminosyrene mellom parene av hydrofobe aminosyrer kan, eller behøver ikke, være hydrofile. In particular, a basic (positively charged) polypeptide is provided which has at least sixteen amino acids where the polypeptide comprises at least eight hydrophobic amino acids and at least 8 hydrophilic amino acids. The hydrophobic amino acids are in groups of two adjacent amino acids, and each group of two hydrophobic amino acids is spaced from another group of two hydrophobic amino acids by at least one amino acid different from a hydrophobic amino acid (preferably at least two amino acids) and generally by no more than four amino acids, and the amino acids between pairs of hydrophobic amino acids may or may not be hydrophilic.

De hydrofile aminosyrene er generelt også i grupper på to ved siden av liggende aminosyrer, der minst én av de to aminosyrene er en basisk hydrofil aminosyre, der slike grupper av to hydrofile aminosyrer er i avstand fra hverandre med minst én aminosyre forskjellig fra en hydrofil aminosyre (fortrinnsvis minst to aminisyrer) og generlt ikke mer enn fire aminosyrer, og aminosyrene mellom parene av hydrofile aminosyrer kan, eller behøver ikke, være hydrofobe. The hydrophilic amino acids are generally also in groups of two adjacent amino acids, where at least one of the two amino acids is a basic hydrophilic amino acid, where such groups of two hydrophilic amino acids are spaced from each other by at least one amino acid different from a hydrophilic amino acid (preferably at least two amino acids) and generally no more than four amino acids, and the amino acids between the pairs of hydrophilic amino acids may or may not be hydrophobic.

I henhold til en spesielt foretrukket utførelsesform omfatter polypeptidet en kjede av minst fire grupper av aminosyrer, der hver gruppe består av fire aminosyrer. To av de fire aminosyrene i hver gruppe er hydrofobe aminosyrer, og to av de fire aminosyrene i hver gruppe er hydrofile, der minst én av de hydrofile aminosyrene i hver gruppe er en basisk hydrofil aminosyre, og den andre er en basisk eller nøytral hydrofil aminosyre. According to a particularly preferred embodiment, the polypeptide comprises a chain of at least four groups of amino acids, each group consisting of four amino acids. Two of the four amino acids in each group are hydrophobic amino acids, and two of the four amino acids in each group are hydrophilic, where at least one of the hydrophilic amino acids in each group is a basic hydrophilic amino acid, and the other is a basic or neutral hydrophilic amino acid .

Hydrofobe aminosyrer kan bli valgt fra klassen bestående av Ala, Cys, Phe, Gly, Ile, Leu, Met, Val, Trp og Tyr. De nøytrale hydrofile aminosyrene kan bli valgt fra klassen bestående av Ser, Asn, Gin og Thr. Basiske hydrofile aminosyrer kan bli valgt fra klassen bestående av Lys, Arg og His. Hydrophobic amino acids may be selected from the class consisting of Ala, Cys, Phe, Gly, Ile, Leu, Met, Val, Trp and Tyr. The neutral hydrophilic amino acids may be selected from the class consisting of Ser, Asn, Gin and Thr. Basic hydrophilic amino acids may be selected from the class consisting of Lys, Arg and His.

Hver av gruppene på fire aminosyrer kan ha sekvensen ABCD, BCAB, CDAB eller DABC, der A og B hver er hydrofobe aminosyrer og kan være like eller forskjellige, én av C eller D er en basisk hydrofil aminosyre, og den andre av C eller D er en basisk eller nøytral hydrofil aminosyre, og kan være lik eller forskjellig. I en foretrukket utførelsesform kan polypeptidkjeden omfatte 5 eller 6 grupper av denne sekvensen. I hver gruppe kan hver av A, B, C og D være lik i noen eller alle gruppene, eller kan være forskjellige i noen eller alle gruppene. Each of the groups of four amino acids can have the sequence ABCD, BCAB, CDAB or DABC, where A and B are each hydrophobic amino acids and can be the same or different, one of C or D is a basic hydrophilic amino acid, and the other of C or D is a basic or neutral hydrophilic amino acid, and may be the same or different. In a preferred embodiment, the polypeptide chain may comprise 5 or 6 groups of this sequence. In each group, each of A, B, C, and D may be the same in some or all of the groups, or may be different in some or all of the groups.

Polypeptidkjeden har fortrinnsvis minst 20 aminosyrer, og ikke mer enn 50 aminosyrer. Det er derimot å bemerke at polypeptidet ikke bare behøver å bestå av gruppene beskrevet ovenfor. Polypeptidet kan ha aminosyrer som enten rekker fra én av endene eller begge endene av de angitte gruppene som danner polypeptidkjeden, og/eller det kan være aminosyrer mellom én eller flere av de minst fire gruppene og enda høre inn under rammen av oppfinnelsen. The polypeptide chain preferably has at least 20 amino acids, and no more than 50 amino acids. However, it should be noted that the polypeptide need not only consist of the groups described above. The polypeptide may have amino acids that either extend from one of the ends or both ends of the specified groups that form the polypeptide chain, and/or there may be amino acids between one or more of the at least four groups and still fall within the scope of the invention.

Gruppene av aminosyrer kan være repeterende grupper av aminosyrer, eller aminosyrene i de forskjellige gruppene kan variere, forutsatt at det i hver gruppe av de minst fire gruppene av aminosyrene er to hydrofobe og to hydrofile aminosyrer som angitt ovenfor. The groups of amino acids may be repeating groups of amino acids, or the amino acids in the different groups may vary, provided that in each group of the at least four groups of amino acids there are two hydrophobic and two hydrophilic amino acids as indicated above.

I en foretrukket utførelsesform omfatter det biologisk aktive polypeptidet en kjede, omfattende minst fire grupper av aminosyrer, som hver inneholder fire aminosyrer. To av de fire aminosyrene i hver gruppe er hydrofobe, minst én aminosyre er basisk hydrofil, og den gjenværende er basisk eller nøytral hydrofil, idet polypeptidkjeden fortrinnsvis har minst 20 aminosyrer, men ikke mer enn 50 aminosyrer. In a preferred embodiment, the biologically active polypeptide comprises a chain comprising at least four groups of amino acids, each of which contains four amino acids. Two of the four amino acids in each group are hydrophobic, at least one amino acid is basic hydrophilic, and the remaining is basic or neutral hydrophilic, the polypeptide chain preferably having at least 20 amino acids, but not more than 50 amino acids.

I en utførelsesform har hver av de minst fire gruppene av aminosyrene som er i peptidkjeden sekvensen A-B-C-D, B-C-D-A, C-D-A-B eller D-A-B-C der A og B er hydrofobe, én av C eller D er basisk hydrofil og den andre av C eller D er basisk eller nøytral hydrofil. Den resulterende polypeptidkjeden kan derfor ha én av følgende sekvenser: In one embodiment, each of the at least four groups of amino acids that are in the peptide chain has the sequence A-B-C-D, B-C-D-A, C-D-A-B or D-A-B-C where A and B are hydrophobic, one of C or D is basic hydrophilic and the other of C or D is basic or neutral hydrophilic. The resulting polypeptide chain can therefore have one of the following sequences:

hvori Xj_ er D; C-D- eller B-C-D-, Y1er -A eller -A-B eller wherein Xj_ is D; C-D- or B-C-D-, Y1er -A or -A-B or

-A-B-C-A-B-C

Det er å bemerke at peptidkjeden kan omfatte aminosyrene mellom de ovenfor angitte gruppene på fire aminosyrer forutsatt at avstanden mellom slike grupper og ladningen på aminosyrene ikke forandrer karaktertrekkene til peptidkjeden som tilveiebringer amfifilisitet og en positiv ladning, og som ikke påvirker på en negativ måte foldekaraktertrekkene til kjeden til det som er betraktelig forskjellig fra én i hvilken ovenfor angitte gruppe på fire aminosyrer ikke er i avstand fra hverandre. It is to be noted that the peptide chain may comprise the amino acids between the above-mentioned groups of four amino acids provided that the distance between such groups and the charge on the amino acids do not change the characteristics of the peptide chain which provide amphiphilicity and a positive charge, and which do not adversely affect the folding characteristics of chain of that which is significantly different from one in which the above group of four amino acids are not spaced apart.

Som representative eksempler på peptider i henhold til foreliggende oppfinnelse kan følgende nevnes: The following can be mentioned as representative examples of peptides according to the present invention:

Peptidet kan ha aminosyrer som rekker fra hvilken som helst ende av kjeden. For eksempel kan kjedene ha en Ser-Lys-sekvens før "Ala"-enden, og/eller en Ala-Phe-sekvens etter "lys"-enden. Andre aminosyresekvenser kan også bli knyttet til "Ala"- og/eller "Lys"-enden. The peptide may have amino acids extending from any end of the chain. For example, the chains may have a Ser-Lys sequence before the "Ala" end, and/or an Ala-Phe sequence after the "Lys" end. Other amino acid sequences can also be attached to the "Ala" and/or "Lys" end.

I en hvilken som helst polypeptidkjede ifølge foreliggende oppfinnelse med minst fire grupper av aminosyrene til sekvensen som beskrevet ovenfor, kan kjeden for eksempel ha en C-D-sekvens foran den første A-B-C-D-gruppen. Andre aminosyresekvenser kan også bli knyttet til "A" og/eller "D"-enden til én av disse polypeptidkj edene. Det kan også være amino syrer i kjeden som gjør at én eller flere av gruppene av de ovenfor angitte aminosyrene blir 1 avstand fra hverandre. In any polypeptide chain according to the present invention with at least four groups of the amino acids of the sequence as described above, the chain may for example have a C-D sequence in front of the first A-B-C-D group. Other amino acid sequences may also be attached to the "A" and/or "D" end of one of these polypeptide chains. There may also be amino acids in the chain that cause one or more of the groups of the above-mentioned amino acids to be 1 distance apart.

Polypeptldene ifølge foreliggende oppfinnelse er generelt vannoppløselige til en konsentrasjon på minst 20 mg/ml ved nøytral pH i vann. Polypeptidet er ikke-hemolytisk, dvs. det vil ikke ødelegge røde blodceller ved effektive antimikrobielle konsentrasjoner. Strukturen til polypeptidet ifølge foreliggende oppfinnelse tilveiebringer fleksibilitet til polypeptidmolekylet. Når polypeptidet blir plasser i vann, opptar det ikke en amfifilisk struktur. Når polypeptidet møter en oljeholdig overflate eller membran, folder polypeptidkjeden seg om seg selv til en stavlignende struktur. The polypeptides according to the present invention are generally water-soluble to a concentration of at least 20 mg/ml at neutral pH in water. The polypeptide is non-haemolytic, i.e. it will not destroy red blood cells at effective antimicrobial concentrations. The structure of the polypeptide according to the present invention provides flexibility to the polypeptide molecule. When the polypeptide is placed in water, it does not adopt an amphiphilic structure. When the polypeptide encounters an oily surface or membrane, the polypeptide chain folds on itself into a rod-like structure.

Peptidene kan bli fremstilt ved kjente teknikker og blir tilveiebragt i vesentlig ren form. Peptidene kan f.eks. bli syntetisert manuelt eller på en automatisk syntesemaskin (J.A.C.S. Vol 85, s. 2149-54 (1963). Det er også mulig å fremstille slike peptider ved genetiske ingeniørteknikker. The peptides can be produced by known techniques and are provided in substantially pure form. The peptides can e.g. be synthesized manually or on an automatic synthesis machine (J.A.C.S. Vol 85, pp. 2149-54 (1963). It is also possible to prepare such peptides by genetic engineering techniques.

Polypeptldene ifølge foreliggende oppfinnelse er biologisk aktive eller bioaktive. Sammensetningene kan virke som antimikrobielle midler, antivirale midler, antibiotika, antitumormidler, spermicider, samt ha andre bioaktive funksj oner. The polypeptides according to the present invention are biologically active or bioactive. The compositions can act as antimicrobial agents, antiviral agents, antibiotics, antitumor agents, spermicides, as well as have other bioactive functions.

Betegnelsen "antimikrobiell" som anvendt heri, betyr at polypeptdiene ifølge foreliggende oppfinnelse hemmer, forhindrer eller ødelegger veksten eller proliferasjonen av mikrober så som bakterier, sopp, virus el.l. The term "antimicrobial" as used herein means that the polypeptides according to the present invention inhibit, prevent or destroy the growth or proliferation of microbes such as bacteria, fungi, viruses etc.

Betegnelsen "antibiotisk" som anvendt heri, betyr at polypeptldene som blir anvendt i foreliggende oppfinnelse produserer effekter som er forskjellig fra normale biologiske funksjoner til cellen, vevet eller organismen inkludert død eller destruksjon eller forhindring av veksten eller proliferasjonen av det biologiske systemet når kontaktet med polypeptldene. The term "antibiotic" as used herein means that the polypeptides used in the present invention produce effects that are different from normal biological functions of the cell, tissue or organism including death or destruction or inhibition of the growth or proliferation of the biological system when contacted with the polypeptides .

Betegnelsen "spermicidal" som anvendt heri, betyr at polypeptldene anvendt i foreliggende oppfinnelse inhiberer, forhindrer eller ødelegger bevegelsen av spermier. The term "spermicidal" as used herein means that the polypeptides used in the present invention inhibit, prevent or destroy the movement of sperm.

Betegnelsen "antiviral" som anvendt heri, betyr at polypeptldene anvendt i foreliggende oppfinnelse inhiberer, forhindrer eller ødelegger veksten eller proliferasjonen av viruser. The term "antiviral" as used herein means that the polypeptides used in the present invention inhibit, prevent or destroy the growth or proliferation of viruses.

Betegnelsen antitumor som anvendt heri, betyr at polypeptidet inhiberer veksten av, eller ødelegger, tumorer. The term antitumor as used herein means that the polypeptide inhibits the growth of, or destroys, tumors.

Polypeptldene ifølge foreliggende oppfinnelse har en bredspektret potent antibiotisk aktivitet overfor mange mikroorganismer inkludert gram-posite og gram-negative bakterier, sopp,. protozoer o.l. Polypeptldene ifølge foreliggende oppfinnelse tillateren metode for behandling eller kontrollering av mikrobiell infeksjon forårsaket av organismer som er følsomme overfor polypeptldene. Slik behandling kan omfatte administrering til en vertsorganisme eller vev, mottagelig for eller påvirket med, en mirkobiell infeksjon, en antimikrobiell mengde av minst én av polypeptldene . The polypeptides according to the present invention have a broad-spectrum potent antibiotic activity against many microorganisms including gram-positive and gram-negative bacteria, fungi,. protozoa etc. The polypeptides of the present invention allow a method for treating or controlling microbial infection caused by organisms sensitive to the polypeptides. Such treatment may comprise administering to a host organism or tissue susceptible to, or affected by, a microbial infection, an antimicrobial amount of at least one of the polypeptides.

På grunn av de antibiotiske egenskapene til polypeptldene, kan de også bli anvendt som konserveringsmidler eller steriliseringsmidler for materialer mottagelig for mikrobiell kontaminasjon. Because of the antibiotic properties of the polypeptides, they can also be used as preservatives or sterilizing agents for materials susceptible to microbial contamination.

Farmasøytiske sammensetninger som omfatter polypeptldene ifølge foreliggende oppfinnelse kan i tillegg bli kombinert eller plassert i en ikke-toksisk farmasøytisk bærer eller beholder så som et fyllstoff, ikke-toksisk buffer eller fysiologisk saltvannsoppløsning. Slike farmasøytiske sammensetninger kan bli anvendt topisk eller systemisk, og kan være i en hvilken som helst egnet form så som en flytende, fast, semifast, injiserbar oppløsning, tabletter, salve, lotion, pasta, kapsel el.l. Polypeptidsammensetningene kan også bli anvendt i kombinasjon med adjuvants, proteaseinhibitorer eller kompatible medikamenter der hvor en slik kombinasjon er ønskelig eller fordelaktig for kontrollering av infeksjon forårsaket av skadelige mikroorganismer, inkludert protozoa-virus o.l. Pharmaceutical compositions comprising the polypeptides of the present invention may additionally be combined or placed in a non-toxic pharmaceutical carrier or container such as a filler, non-toxic buffer or physiological saline solution. Such pharmaceutical compositions may be used topically or systemically, and may be in any suitable form such as a liquid, solid, semi-solid, injectable solution, tablets, ointment, lotion, paste, capsule, etc. The polypeptide compositions can also be used in combination with adjuvants, protease inhibitors or compatible drugs where such a combination is desirable or beneficial for controlling infection caused by harmful microorganisms, including protozoa viruses and the like.

Det bioaktive peptidet(er) iføgle foreliggende oppfinnelse, kan bli administrert til en vert, spesielt et dyr, i en effektiv antibiotisk og/eller antitumor og/eller antiviral og/eller antimikrobiell og/eller en antispermlcidal mengde. The bioactive peptide(s) according to the present invention can be administered to a host, especially an animal, in an effective antibiotic and/or antitumor and/or antiviral and/or antimicrobial and/or an antispermlicidal amount.

I henhold til et annet aspekt av foreliggende oppfinnelse er det tilveiebragt et peptid (polypeptid) med fra åtte til femten aminosyrer bestående av minst fire hydrofobe aminosyrer og fire hydrofile aminosyrer. De hydrofobe aminosyrene er i grupper på to ved siden av liggende aminosyrer, hvori hver gruppe av de to hydrofobe aminosyrene er i avstand fra hverandre med minst én aminosyre forskjellig fra en hydrofob aminosyre (fortrinnsvis minst to aminosyrer) og generelt ikke mer enn fire aminosyrer, og aminosyren(er) mellom parene av hydrofobe aminosyrer kan, eller behøver ikke, være hydrofile. Hydrofile aminosyrer er generelt også i grupper på to ved siden av liggende aminosyrer der minst én av de to aminosyrene er en basisk hydrofil aminosyre og den andre av de to er basisk eller nøytral. Gruppene på to hydrofile aminosyrer er i avstand fra hverandre med minst én aminosyre forskjellig fra en hydrofil aminosyre (fortrinnsvis minst to aminosyrer) og generelt ikke mer enn 4 aminosyrer, og aminosyrene mellom parene av hydrofile aminosyrer kan eller behøver ikke å være hybrof obe. According to another aspect of the present invention, a peptide (polypeptide) with from eight to fifteen amino acids consisting of at least four hydrophobic amino acids and four hydrophilic amino acids is provided. The hydrophobic amino acids are in groups of two adjacent amino acids, wherein each group of the two hydrophobic amino acids is spaced apart by at least one amino acid different from a hydrophobic amino acid (preferably at least two amino acids) and generally not more than four amino acids, and the amino acid(s) between the pairs of hydrophobic amino acids may or may not be hydrophilic. Hydrophilic amino acids are generally also in groups of two adjacent amino acids where at least one of the two amino acids is a basic hydrophilic amino acid and the other of the two is basic or neutral. The groups of two hydrophilic amino acids are spaced apart by at least one amino acid different from a hydrophilic amino acid (preferably at least two amino acids) and generally no more than 4 amino acids, and the amino acids between pairs of hydrophilic amino acids may or may not be hydrophobic.

Peptidet som har fra 8 til 15 qminosyrer er amfifillsk og er positivt ladet (basisk). The peptide having from 8 to 15 amino acids is amphiphilic and is positively charged (basic).

Peptidet med 8 til 15 aminosyrer beskrevet ovenfor kan, eller behøver ikke, være bioaktivt, og i det tilfellet hvor et slikt peptid er bioaktivt, har det anvendelse som et mellomprodukt for tilveiebringing av de ovennevnte peptidene som har minst 16 aminosyrer og som er bioaktive. For eksempel kan to peptider, én med åtte aminosyrer og den andre med tolv aminosyrer, bli koblet til hverandre for å danne et peptid som har 20 aminosyrer av typen beskrevet ovenfor og som er bioaktiv. Peptidene kan bli koblet ved standard peptldkjemi-teknikker. Slike peptider kan derfor for eksempel bli kondensert i oppløsning ved teknikken beskrevet av Johnson et al., "Peptldes", s. 239-42 (Walter de Gruzter & Co., 1986). The peptide of 8 to 15 amino acids described above may or may not be bioactive, and in the case where such a peptide is bioactive, it has application as an intermediate for providing the above-mentioned peptides having at least 16 amino acids and which are bioactive. For example, two peptides, one with eight amino acids and the other with twelve amino acids, can be joined together to form a peptide having 20 amino acids of the type described above and which is bioactive. The peptides can be linked by standard peptide chemistry techniques. Such peptides can therefore, for example, be condensed in solution by the technique described by Johnson et al., "Peptldes", pp. 239-42 (Walter de Gruzter & Co., 1986).

Som representative eksempler på slike peptider, kan peptider representert ved følgende struktur nevnes, der A, B, C og D er som tidligere definert; As representative examples of such peptides, peptides represented by the following structure can be mentioned, where A, B, C and D are as previously defined;

hvori W-l er D-, C-D-, B-C-D- where W-l is D-, C-D-, B-C-D-

W2er A-. D-A-, C-D-A-W2 is A-. D-A-, C-D-A-

W3er B-, A-B-, D-A-B-W3er B-, A-B-, D-A-B-

W4er C-, B-C-, A-B-CW4 is C-, B-C-, A-B-C

Z1er -A, -A-B, -A-B-CZ1 is -A, -A-B, -A-B-C

Z2er -B, -B-C, -B-C-DZ2 is -B, -B-C, -B-C-D

Z3er -C, -C-D, -C-D-AZ3 is -C, -C-D, -C-D-A

Z4er -D, -D-A, -D-A-BZ4 is -D, -D-A, -D-A-B

n er 2 eller 3, a er 0 eller 1 og b er 0 eller 1.n is 2 or 3, a is 0 or 1 and b is 0 or 1.

Følgende eksmepler skal illustrere de forskjellige an-vendelsene av de biologisk aktive polypeptidsammensetningene ifølge foreliggende oppfinnelse. Rammen av foreliggende oppfinnelse skal derimot ikke bli begrenset derav. The following examples shall illustrate the various uses of the biologically active polypeptide compositions according to the present invention. However, the scope of the present invention shall not be limited thereby.

EKSEMPELEXAMPLE

Peptid ble syntetisert på en 430A Applied Biosystems Synethsizer. Den generelle metoden anvendte t-Boc-kjemien til Merrifield, ovenfor. Peptide was synthesized on a 430A Applied Biosystems Synethsizer. The general method used the t-Boc chemistry of Merrifield, above.

Fremgangsmåte: t-Boc-lys (Cl-Z) - Pam-harpiks, substitu-sjon: 0,57 mmol/g. Method: t-Boc-lys (Cl-Z) - Pam resin, substitution: 0.57 mmol/g.

Kjedeoppstilling: 0,5 mol skala. Fordampede symmetriske anhydrider, koblet i DMF som oppløsningsmiddel. Koblingsef-fektiviteten overskrider.97$ basert på ninhydrinregistrering. Koblinstemperaturene var 10-15°C. Chain arrangement: 0.5 mol scale. Evaporated symmetrical anhydrides, coupled in DMF as solvent. Coupling efficiency exceeds .97$ based on ninhydrin registration. Coblin temperatures were 10-15°C.

Spaltnin<g>: Vannfri HF anvendt for deblokkering og fjerning fra harpiksen. Spaltnin<g>: Anhydrous HF used for deblocking and removal from the resin.

Renhet: Større enn 95%, basert på revers fase p HLC-separasjon, over C8 300A° , 10 cm x 2,1 mm kolonne, utviklet på en 0-60$ buffer B-gradient i 45 min. (A = 0,1$ TFA; B=100$ CH3CH/0,09$ TFA). Visualisert ved 220 nm. Denne metoden blir også anvendt for peptidrensning. Purity: Greater than 95%, based on reverse phase p HLC separation, over C8 300A° , 10 cm x 2.1 mm column, developed on a 0-60$ buffer B gradient for 45 min. (A = 0.1$ TFA; B=100$ CH3CH/0.09$ TFA). Visualized at 220 nm. This method is also used for peptide purification.

Omtrent 10^ bakterier fra en mid log-kultur, ble inokulert i 8 ml 0,7$ agarose i trypticase soyakraft og belagt over en plate med 1,5$ agarose i tryptikase soyakraft. 10 yl av hvert peptid i en konsentrasjon på 5 mg/ml ble applisert på topplaget og platene inkubert ved 37°C i 8 timer. Inhibi-sjonssonen av veksten ble målt. About 10^ bacteria from a mid log culture were inoculated into 8 ml of 0.7% agarose in trypticase soy broth and plated over a plate of 1.5% agarose in trypticase soy broth. 10 µl of each peptide at a concentration of 5 mg/ml was applied to the top layer and the plates incubated at 37°C for 8 hours. The zone of inhibition of growth was measured.

Omtrent 10^ organsimer ble plassert 1 omtrent 200 yl destillert vann. Peptid ble tilsatt fra en oppløsning av 5 mg/ml i vann. Konsentrasjonen ved fullstendig fysisk ødeleg-gelse som oppstod i løpet av 10 minutter ved romtemperatur bestemt ved retningsmikroskopisk undersøkelse, er angitt. Avhengig av anvendelse, vil en sammensetning i henhold til oppfinnelsen inneholde en effektiv antimikrobiell mengde og/eller en effektiv antispermicidal mengde og/eller en effektiv antiviral mengde og/eller en effektiv antitumormengde og/eller en effektiv antibiotisk mengde av én eller flere av ovennevnte peptider som har slik aktivitet. About 10 3 organisms were placed in about 200 µl of distilled water. Peptide was added from a solution of 5 mg/ml in water. The concentration at complete physical destruction which occurred within 10 minutes at room temperature determined by directional microscopic examination is indicated. Depending on the application, a composition according to the invention will contain an effective antimicrobial amount and/or an effective antispermicidal amount and/or an effective antiviral amount and/or an effective antitumor amount and/or an effective antibiotic amount of one or more of the above-mentioned peptides which has such activity.

Petidene, når de blir anvendt i topiske sammensetninger, er vanligvis tilstede i en mengde på minst 0,1 vekt-$. I de fleste tilfellene er det nødvendig å anvende peptidet i en mengde som er større enn 1,0 vekt-%. The peptides, when used in topical compositions, are usually present in an amount of at least 0.1% by weight. In most cases, it is necessary to use the peptide in an amount greater than 1.0% by weight.

Ved anvendelse av slike sammensetninger systemisk (intramus-kulært, intravenøst, intraperitonealt), er det aktive peptidet tilstede i en mengde for oppnåelse av et serumnivå av peptidet på minst omtrent 5 jjg/ml. Generelt behøver serumnivået til peptidet ikke å overskride 500 jjg/ml. Slike serumnivåer kan bli oppnådd ved inkorporering av peptidet i en sammensetning som skal bli administrert systemisk i en dose på omtrent 10 mg/kg. Generelt behøver peptidet(er) ikke å bli administrert i en dose som overskrider 100 mg/kg. When using such compositions systemically (intramuscular, intravenous, intraperitoneal), the active peptide is present in an amount to achieve a serum level of the peptide of at least about 5 µg/ml. In general, the serum level of the peptide need not exceed 500 µg/ml. Such serum levels can be achieved by incorporating the peptide into a composition to be administered systemically at a dose of about 10 mg/kg. In general, the peptide(s) need not be administered in a dose exceeding 100 mg/kg.

Det er å bemerke at rammen av foreliggende oppfinnelse ikke skal bli begrenset til de spesifikke eksemplene beskrevet ovenfor. Forskjellige utførelsesformer av polypeptidsammen-setninger andre enn dem som spesifikt er angitt, kan bli anvendt. Oppfinnelsen kan bli utført forskjellig fra det som er beskrevet, og enda være innenfor rammen av vedlagtre krav. It is to be noted that the scope of the present invention shall not be limited to the specific examples described above. Various embodiments of polypeptide compositions other than those specifically indicated may be used. The invention can be carried out differently from what is described, and still be within the scope of the appended claims.

Claims

1. Peptide, characterized in that it comprises said peptide containing at least eight amino acids, said peptide containing at least two groups of amino acids A-B, where each A-B groupc is separated by at least one amino acid different from a hydrophobic amino acid and at least two groups of amino acids C-B where C-D are separated by at least one amino acid different from a hydrophilic amino acid, wherein each of A and B is a hydrophobic amino acid where each of A and B may be the same or different amino acids and one of C and D is a basic hydrophilic amino acid and the other of C and D is a basic or neutral hydrophilic amino acid.

2. Peptide according to claim 1, characterized in that the peptide has from 8 to 15 amino acids.

3. Peptide according to claim 2, characterized in that the peptide comprises one of the following sequences:

where W} is D-, C-D-, B-C-D- W2 is A-. D-A-, C-D-A-W3 is B-, A-B-, D-A-B-W4 is C-, B-C-, A-B-C Z1 is -A, -A-B, -A-B-C Z2 is -B, -B-C, -B-C-D Z3 is -C, - C-D, -C-D-A Z4 is -D, -D-A, -D-A-B n is 2 or 3, a is 0 or 1 and b is 0 or 1.

4. Peptide according to claim 1, characterized in that the peptide contains at least 16 amino acids and there are at least four groups of the amino acids A-B and at least 3 groups of the amino acids C-D.

5. Peptide according to claim 4, characterized in that the peptide contains at least four groups of the amino acids C-D.

6. Peptide according to claim 5, characterized in that the peptide comprises at least four groups of the peptide sequence-A-B-C-D-, -B-C-D-A-, -C-D-A-B, -D-A-B-C-.

7. Peptide according to claim 6, characterized in that the peptide comprises one of the following sequences:

wherein Xx is D; C-D- or B-C-D-, Y1 is -A or -A-B or -A-B-C X2 is A-, D-A- or C-D-A-Y2 is -B, -B-C is B-C-D X3 is B-, A-B-, D-A-B-Y3 is -C, -C-D, -C-D-A X4 is C-, B-C-, A-B-C Y4 is -D. -D-A, -D-A-B a is 0 or 1; b is 0 or 1 and n is at least 4.

8. Polypeptide according to claim 5, characterized in that said hydrophobic amino acids are selected from the class consisting of Ala, Phe, Gly, Ile, Leu, Met, VAL and Trp, said neutral hydrophilic amino acids are selected from the class consisting of Ser and Thr, and said basic hydrophilic amino acids are selected from the class consisting of Lys, Arg and His.

9. Polypeptide according to claim 8, characterized in that at least one of said at least four groups of said amino acids has the sequence A-B-C-D, where A and B are hydrophobic amino acids, one of C is a neutral or basic hydrophilic amino acid, the other Cor D is a basic hydrophilic amino acid.

10. Polypeptide according to claim 5, characterized in that said polypeptide comprises the following sequence: -(Ala-Phe-Ser-Lys)4 -

11. Polypeptide according to claim 6, characterized in that said polypeptide comprises a chain of at least 20 amino acids and no more than 50 amino acids.

12. Polypeptide according to claim 6, characterized in that said polypeptide comprises five groups of said sequence.

13. Polypeptide according to claim 6, characterized in that said polypeptide comprises six groups of said sequence.

14 . Polypeptide according to claim 1, characterized in that said polypeptide comprises repeating groups of said four amino acids.

15 . Method, characterized in that it comprises administering to an animal an effective antimicrobial amount of the peptide according to claim 5.

16. Method, characterized in that it comprises administering to an animal an effective antiviral amount of the peptide according to claim 5.

17. Method, characterized in that it comprises administration in an effective antitumor amount of the peptide according to claim 5.

18. Method, characterized in that it comprises administering to an animal an effective antibiotic amount of the peptide according to claim 5.

19. Method, characterized in that it comprises administering to an animal an effective antispermicidal amount of the peptide according to claim 5.

20. Composition, characterized in that it comprises a pharmaceutical carrier containing an effective antimicrobial amount of the peptide according to claim 5.

21. Composition, characterized in that it comprises a pharmaceutical carrier containing an effective antiviral amount of the peptide according to claim 5.

22. Composition, characterized in that it comprises a pharmaceutical carrier containing an effective antibiotic amount of the peptide according to claim 5.

23. Composition, characterized in that it comprises a pharmaceutical carrier, containing an effective antitumor amount of the peptide according to claim 5.

24 . Composition, characterized in that it comprises a pharmaceutical carrier containing an effective antispermicidal amount of the peptide according to claim 5.