NO882583L - Fremgangsmaate for fremstilling av et reseptorpreparat foren radioreseptorproeve i samavar med fremgangsmaaten. - Google Patents
Fremgangsmaate for fremstilling av et reseptorpreparat foren radioreseptorproeve i samavar med fremgangsmaaten.Info
- Publication number
- NO882583L NO882583L NO882583A NO882583A NO882583L NO 882583 L NO882583 L NO 882583L NO 882583 A NO882583 A NO 882583A NO 882583 A NO882583 A NO 882583A NO 882583 L NO882583 L NO 882583L
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- sample
- plasma membrane
- preparation
- radioreceptor
- receptor
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 31
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 20
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 claims description 14
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 10
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 6
- 239000000700 radioactive tracer Substances 0.000 claims description 6
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 5
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 claims description 5
- 102000002723 Atrial Natriuretic Factor Human genes 0.000 claims description 4
- 101800001288 Atrial natriuretic factor Proteins 0.000 claims description 4
- 101800001890 Atrial natriuretic peptide Proteins 0.000 claims description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 3
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 claims description 3
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 claims description 3
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 claims description 3
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 3
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 2
- NSQLIUXCMFBZME-MPVJKSABSA-N carperitide Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=CC=C1 NSQLIUXCMFBZME-MPVJKSABSA-N 0.000 claims description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims description 2
- XMBWDFGMSWQBCA-YPZZEJLDSA-N iodane Chemical compound [125IH] XMBWDFGMSWQBCA-YPZZEJLDSA-N 0.000 claims description 2
- 229940044173 iodine-125 Drugs 0.000 claims description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims 4
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 claims 2
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 claims 2
- DGEZNRSVGBDHLK-UHFFFAOYSA-N [1,10]phenanthroline Chemical compound C1=CN=C2C3=NC=CC=C3C=CC2=C1 DGEZNRSVGBDHLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 claims 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 28
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 11
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 9
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 9
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 238000009739 binding Methods 0.000 description 4
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 3
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 3
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 108010039627 Aprotinin Proteins 0.000 description 2
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004404 adrenal cortex Anatomy 0.000 description 2
- 235000011089 carbon dioxide Nutrition 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000011363 dried mixture Substances 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 208000007976 Ketosis Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N Leupeptin Natural products CC(C)CC(NC(C)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 150000001323 aldoses Chemical class 0.000 description 1
- XSDQTOBWRPYKKA-UHFFFAOYSA-N amiloride Chemical compound NC(=N)NC(=O)C1=NC(Cl)=C(N)N=C1N XSDQTOBWRPYKKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002576 amiloride Drugs 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 229960004405 aprotinin Drugs 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000022 bacteriostatic agent Substances 0.000 description 1
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 239000012928 buffer substance Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000009614 chemical analysis method Methods 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000536 complexating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol bis(2-aminoethyl)tetraacetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCOCCOCCN(CC(O)=O)CC(O)=O DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- -1 glycine etc Chemical class 0.000 description 1
- 239000012456 homogeneous solution Substances 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 description 1
- ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N iniprol Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@H]2CSSC[C@H]3C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=4C=CC=CC=4)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N3)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 150000002584 ketoses Chemical class 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N leupeptin Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(C)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- 108010052968 leupeptin Proteins 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 102000006240 membrane receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020004084 membrane receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 1
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000000163 radioactive labelling Methods 0.000 description 1
- 239000003507 refrigerant Substances 0.000 description 1
- 239000012723 sample buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 229940108519 trasylol Drugs 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007306 turnover Effects 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Steroid Compounds (AREA)
Description
Oppfinnelsen ligger på området for kjemiske analyse-fremgangsmåter og vedrører en fremgangsmåte for fremstilling av et stabilt reseptorpreparat for en stabil (flerkomponent-) radioreseptor-prøve og den ved denne fremgangsmåte oppnådde radioreseptor-prøve, prøvesett derav og anvendelse av prøve-settet henholdsvis prøven.
På samme måte som ved en radioimmunoprøve beror prin-sippet ved radioreseptorprøven på den biospesifikke gjen-kjennelse av en (for prøven tilsiktet tilsatt) ligand, f.eks. et hormon, et farmakon, en neurotransmitter etc, på det aktuelle mål- eller mottakermolekyl, f.eks. et antistoff ved radioimmunoprøven eller en reseptor ved radioreseptorprøven. Gjennom den radioaktive merking av en slik tilsiktet tilsatt ligand, får man et observerbart molekyl, det såkalte sporstoff, som står i kompetitiv vekselvirkning med ikke merket ligand og dermed det ensartede men ikke observerbare molekyl. Gjennom slike forholdsregler får man et testsystem som mulig-gjør måling av en ukjent konsentrasjon av en slik ligand.
Mens radioimmunoprøven er blitt en rutinefremgangsmåte med mange anvendelser og i dag tilhører de analyse-metoder som anvendes i stor målestokk, benyttes derimot radio-reseptorprøven bare sjelden for dette formål.
Dette skyldes ikke minst at håndteringen av biologisk aktive reseptorer er noe vanskelig, som ved et antistoff. Forutsetningen for en rutinefremgangsmåte er ved siden av den forholdsvis enkle håndtering (fremgangsmåtens enkelhet) og den derved medfølgende økonomiske gunstighet, fremfor alt "stabiliteten" til den kjemiske eller biologiske reaksjonsdeltaker. Med dette mener man særlig stabiliteten til selve analysestoffet og dets stabilitet under analysereaksjonen.
Biologisk aktive reseptorer er imidlertid ustabile i løsning og må derfor være nedfryst (fast) inntil like før den analytiske tilsetning. Dertil kommer det at de er ustabile i en slik grad at også et kort fravær av denne betingelse kan gjøre reseptoren ubrukbar. Det er selvsagt at slike følsomme egenskaper er egnet til å hindre inntreden blant rutinefrem-gangsmåter for en i og for seg brukbar analysemekanisme.
Målet ved oppfinnelsen er følgelig å angi en vei for
å tilføre disse ømfintlige stoffer i en enkel rutinefremgangsmåte, hvor fremgangsmåten lett lar seg utføre, hvorved de tid-ligere anvendte forholdsregler som nedfrysning etc. med alle omstendeligheter, ulemper og risikoer, skulle kunne unngåes.
Dette mål nåes gjennom den i patentkravene angitte fremstillingsfremgangsmåte for en radioreseptor-prøve og en ved denne fremgangsmåte fremstilt radioreseptor-prøve for umiddelbar analyseinnsats.
Det bør oppnåes at alle eller så mange som mulig av reaksjonsdeltakerne kan befinne seg sammen i en felles beholder, og at igangsettingen av bindingsreaksjonen gjennom-føres om mulig med et eneste pipetteringstrinn, idet alle reaksjonsdeltakere, bortsett fra det materiale som skal ana-lyseres, står til disposisjon i stabil form, f.eks. i et prøverør. Ved tradisjonelle analoge fremgangsmåter benyttes vanligvis 3 til 4 pipetteringstrinn, slik at engangsforløpet som er muliggjort gjennom oppfinnelsen utgjør et økonomisk (henholdsvis hurtighet ved gjennomføring av testen, presi-sjon og arbeidskostnader) betydelig fremskritt innen denne type analyseteknikk. Dessuten kan det gjennom oppfinnelsen tilveiebringes et prøvesett som kan lagres uten kvalitetstap ved omgivelses- eller kjøleskaptemperatur (ingen nedfrysing), noe som er av betydning blant annet særlig ved transport da den hittil benyttede tørris for transporten faller bort.
Den nedenunder beskrevne fremgangsmåte for fremstilling av en stabil radioreseptor-prøve beskriver måten å gå frem på for å oppnå en tørket stabil form av denne.
Prepareringen av reseptorholdige plasmamembraner gjennomføres ifølge de metoder som er angitt i faglittera-turen, f.eks. ifølge angivelser i E. Biirgisser et al., Bio-chem. Biophys. Res. Commun., Bd. 133, s. 1201-1209, 1985. Denne omfatter utvinning av egnet vevmateriale eller celler, f.eks. blodceller eller cellekulturer. Deretter følger en celleoppløsning ved hjelp av homogenisering, ultralyd eller en annen egnet fremgangsmåte, med etterfølgende adskillelse av cytoplasmatiske (oppløselige) bestanddeler, samt en sepa-rering av større partikler, f.eks. ved sentrifugering, fil-trering, etc. Det derved utvundne plasmamembranpreparat kan
så anvendes i en radioreseptor-prøve.
Hittil ble dette preparat fremstilt like før bruk i en prøve, eller det ble dypfryst og oppbevart i dypfryst til-stand inntil bruk. Her kommer så det oppfinneriske avvik fra vanlige fremgangsmåter inn.
I stedet for å bli gjort holdbar gjennom dypfrysning, lyofiliseres preparatet, dvs. frysetørkes. Dette trinnet fører imidlertid bare til det mål å bevare reseptorenes biologiske aktivitet (konserveringen av deres bindingsdyktighet) i et stabilt og lite følsomt sluttprodukt, som etter et vil-kårlig tidsforløp kan tas i bruk når membranpreparatet til-føres egnede tilsatsstoffer. En frysetørking fører i og for seg ikke til det heldige utfall, dvs. til et brukbart biologisk aktivt analyseprodukt.
Disse tilsatsstoffer bør oppvise følgende egenskaper: 1. De bør være kjemisk og biokjemisk inerte, dvs. at det ikke er noen reaksjonsdeltaker i prøvesystemet, og at de ikke
virker inn på dette.
2. De bør oppvise en minst mulig til ingen hygroskopisitet. 3. De bør like ens være oppløselige i det for prøven anvendte oppløsningsmiddel, altså i oppløsningsmidlet som
anvendes for oppløsning av det lyofiliserte preparat.
4. Eventuelt bør de videre bevirke at lyofilisatet inntar en heller voluminøs og kompakt masseform, slik at det, ved direkte lyofilisering i prøvebeholderen, også ved større mekanisk innvirkning (rysting under postforsend-else) forblir forbundet fast mot beholderveggen.
Slike stoffer er:
Sukkerforbindelser og derivater derav, fortrinnsvis monosaccharider, slik som mannit , glucose, fructose og dessuten aldoser og ketoser, samt disaccharider som lactose, saccharose, samt svakt reaktive aminosyrer som glycin etc, og/eller dertil albumin, fortrinnsvis bovint serumalbumin. Videre oppløselige polysaccharider og kollagener, f.eks. gelatin. Eksempel 1: En for lyofilisering av plasmamembraner egnet vandig oppløsning består eksempelvis av
Stabilisatorene som tilsettes, må hovedsakelig nød-vendigvis foreligge i flytende fase, dette vedrører tilstanden til preparatet før lyofiliseringen og under inkubasjonen i analysen. Ved stoffer med lavere hygroskopisitet foreligger faren for en for tidlig partiell reaksjon og/eller degene-rering i lyofilisatet. Stabilisatorene er eksempelvis prote-aseinhibitorer, eksempelvis aprotinin ("Trasylol"), leupep-tin etc, samt antioxydanter, eksempelvis dithiothreitol
(DDT) etc, bakteriostatika, eksempelvis natriumazid, "Thime-rosal" og også kompleksdannende forbindelser, eksempelvis EDTA, EGTA. Deres tilsetning avhenger sterkt av det enkelte prøvesystem som fremstilles, og bør evalueres for hvert enkelt prøvesystem og optimaliseres. Kriteriene for dette svarer til vanlig stabilisering av biologisk aktive bestanddeler, slik de i de tradisjonelle fremgangsmåter allerede er blitt benyttet.
Eksempel 2:
Eksempel 3:
En variant avledet fra de ovenfor angitte fremgangs måter er som følger. Forenklingen ved prøven ligger i anvend-elsen av ett om mulig eneste (pipetterings-) trinn, f.eks. omsetningen av lyofilisatet i flytende reaksjonsdriftig form. Dersom et sett består av flere reaksjonsdeltakere, så kan disse reaksjonsdeltakerne tas med gjennom co-lyofilisering. Den tørkede blanding oppløses så sammen med prøven som skal bestemmes og derved settes reaksjonen i gang. Det er fordelaktig at sammensetningen i et prøverør eller skål av mikrotestplater lyofiliseres i riktig mengde og sammensetning.
For å unngå en uønsket forinkubasjon ved fremstil-lingen av lyofilisatet, kan de enkelte bestanddeler innføres i reaksjonsbeholderen etter hverandre. Dette skjer eksempelvis på følgende måte: hver av bestanddelene som er reaktive i prøven dypfryses etter hverandre i prøvebeholderen for å unngå en sammenblanding i flytende fase. På fordelaktig måte innføres det mellom to reaktive bestanddeler et ikke-reak-tivt skillelag på samme måte. Slike skillelag består eksempelvis av den i eksempel 1 beskrevne oppløsning eller buffer-stoff. Denne tilsats skjer direkte i prøvebeholderen som skal inneholde den aliquotutmålte prøve, og som stilles til disposisjon for anvenderen for direkte bruk. Den etterfølg-ende lyofilisering skjer naturligvis også i denne prøvebehold-eren som deretter innpakkes på passende måte.
En slik blanding som er forberedt for co-lyofilisering, består av følgende deler:
Eksempel 4: (Co-lyofilisat, kvalitativ)
- Plasmamembranpreparat
- Sporstoff
- Eventuelt en standard
- Eventuelt stabilisatorer og/eller modulatorer Eventuelt fargestoff for visuell distinksjon av
forskjelligartet preparerte prøver.
- Lyofiliseringsmedium ifølge eksempel 1 eller eksempel 2.
Modulatorene virker inn på bindingsegenskapene til ligandene på reseptoren. Derfor utvelges de passende stoffer særskilt for hver prøve. Således forbedrer eksempelvis stoffet "Amiloride" bindingsaffiniteten til ANF på plasmamem-branreseptoren fra bovint binyrebark (Lit. A. DeLean, Lif. sei. 39, 1109-1116, 1986).
Eksempel 5: (Co-lyofilisat, kvantitativ)
Plasmamembran fra binyrebark som biologisk utgangs-materiale, 10 mg/prøve. - Sporstoff: Jod-125-merket ANF, ANP (atrial natriu-retisk faktor, peptid) 20.000 cpm - Standard ANF (fortynningsrekke, bare i en del av prøvesettene, f.eks. 16 av 96 skåler i en mikrotestplate).
- Fenanthrolin (stabilisator) 1 mM
- Fargestoff for merking av standardrekken: Evans Blue (konsentrasjonen ifølge ønsket styrke).
De enkelte bestanddeler oppløses fortrinnsvis -i- lyofiliseringsmedium (50 mM Tris-buffer, pH 7,6, 0,5% BSA, 2% mannit), og nedfryses som beskrevet ovenfor etter hverandre.
Lyofiliseringen utføres ifølge kjente fremgangsmåter, idet det iakttas: - at de nedfryste bestanddeler ikke kan bli flytende et kort tidsrom; - at lyofiliseringen er fullstendig og at ikke noe restvann blir tilbake; - prøvebeholderen, rørene, mikrotestplatene utelukkes på samme måte fra adgang for fuktighet etter at de tas ut av lyofilisatoren. Fortrinnsvis fylles prøve-beholderen med en tørr inert gass, f.eks. nitrogen eller argon.
En radioreseptor-prøve som er fremstilt ifølge den oppfinneriske fremgangsmåte, er kjennetegnet ved følgende grunnsammensetning::
Det reseptorholdige plasmamembranpreparat foreligger
i lyofilisert form, hvorved de på forhånd tilførte bærer-stoffer (tilsatsstoffer) sørger for at den tørkede blanding går over i en homogen oppløsning etter påfølgende rekonsti-tuering i prøvebuffer øyeblikkelig og uten mekanisk innflyt-else (røring etc). Lyofilisatet fremhever seg gjennom en
forholdsvis voluminøs masse, som for en fagmann lett kan gjen-kjennes som et typisk lyofilisat.
Det lyofiliserte membranpreparat kan foreligge både
som eneste reaksjonsdeltaker eller som co-lyofilisat med andre reaksjonsdeltakere. Således kan det lyofiliserte membranpreparat i et prøvesett foreligge enten i en enkel beholder eller også allerede oppdelt i aliquoter i prøvebeholderne.
Fremgangsmåten egner seg ikke bare for en prøvegjennom-føring i rør, men egner seg på fremragende måte for bruk i mikrotestplater, noe som muliggjør en høy automatiserings-grad.
Et kommersielt prøvesett består eksempelvis av én eller flere mikrotestplater med 96 prøver hver, som er lukket mot inntrengning av fuktighet f.eks. ved hjelp av dertil egnede klebefolier. Takket være utformingen av mikrotestplater (flattliggende) kan et slikt sett sendes uten problemer med brevpost. Derved bortfaller den hittil anvendte og dyre for-sendelsesmåte med kjølemiddel (tørris).
Claims (16)
1. Fremgangsmåte for fremstilling av et reseptorpreparat av biologisk aktivt reseptormateriale,karakterisert vedat et plasmamembranpreparat lyofiliseres under tilsetning av sukkere og/eller aminosyrer og/eller proteiner.
2. Fremgangsmåte ifølge krav 1,karakterisert vedat det til den lyofiliser-ende vandige blanding av plasmamembranpreparat tilsettes 0,1-10% (vekt/volum) mannit, 0,1 - 1,0% (vekt/volum) bovint eller humant serumalbumin.
3. Fremgangsmåte ifølge krav 1,karakterisert vedat det til den lyofiliser-ende vandige blanding av plasmamembranpreparat tilsettes 0,1 - 10% (vekt/volum) glycin, 0,1 - 1,0% (vekt/volum) bovint eller humant serumalbumin.
4. Fremgangsmåte ifølge krav 1,karakterisert vedat ytterligere reaksjonsdeltaker for oppnåelse av en innsatsferdig prøve co-lyofiliseres.
5. Fremgangsmåte ifølge krav 4,karakterisert vedat den ytterligere reaksjonsdeltaker er et sporstoff og/eller et sammenlignings-standardstoff for et prøvesystem.
6. Fremgangsmåte ifølge kravene 4 eller 5,karakterisert vedat stabilisatorer og/eller modulatorer dessuten co-lyofiliseres.
7. Fremgangsmåte ifølge et av kravene ovenfor,karakterisert vedat preparatet lyofiliseres i en for forbrukeren egnet prøvebeholder.
8. Fremgangsmåte ifølge krav 7,karakterisert vedat prøvebeholderen er et prøverør eller en prøveskål i en mikrotestplate.
9. Reseptorpreparat,
karakterisert vedat det er fremstilt ved fremgangsmåten ifølge krav 1 og inneholder plasmamembran sammen med sukkerforbindelser og/eller aminosyrer og/eller proteiner.
10. Radioreseptor-prøve,
karakterisert vedat den er fremstilt ifølge krav 1 og krav 4 og inneholder co-lyofilisatet av plasmamembran sammen med sukkerforbindelser og/eller aminosyrer og/ eller proteiner, og av et sporstoff og av et sammenlignings-standardstoff.
11. Radioreseptor-prøve ifølge krav 10,karakterisert vedat det dessuten inneholder stabilisatorer og/eller modulatorer.
12. Radioreseptor-prøve ifølge kravene 10 og 11,karakterisert vedet lyofilisat som inneholder: plasmamembran fra biologisk utgangsmasse, 2 - 50 mg pr. prøve; sporstoff: Jod-125-merket ANF, ANP (atrial natri-uretisk faktor, peptid) 20.000 cpm; standard ANF (fortynningsrekke, bare i en del av prøvesettene, f.eks. 16 av 9 6 skåler i en mikrotestplate); fenanthrolin (stabilisator) 1 mM; fargestoff for merking av standardrekken: Evans Blue (konsentrasjon ifølge ønsket styrke).
13. Radioreseptor-prøvesett under anvendelse av radiore-septor-prøven ifølge krav 10,
karakterisert ved: et stort antall av prøve-beholdere som inneholder et co-lyofilisat av plasmamembran sammen med sukkerforbindelser og/eller aminosyrer og/eller proteiner, og av et sporstoff og av et sammenligningsstandard-stoff, og som dessuten inneholder stabilisatorer og/eller modulatorer.
14. Sett ifølge krav 13,
karakterisert vedat prøvebeholderne er prøve-rør .
15. Sett ifølge krav 13,
karakterisert vedat prøvebeholderne er skåler i en mikrotestplate.
16. Anvendelse av settet ifølge krav 13 for kvantitativ eller kvalitativ påvisning av biologisk aktive stoffer.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CH4079/86A CH676508A5 (no) | 1986-10-13 | 1986-10-13 | |
| PCT/CH1987/000122 WO1988002861A1 (en) | 1986-10-13 | 1987-09-24 | Process for manufacturing a receptor preparation for a radio-receptor assay and kit-oriented radio-receptor assay in accordance with the process |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO882583L true NO882583L (no) | 1988-06-10 |
| NO882583D0 NO882583D0 (no) | 1988-06-10 |
Family
ID=25694594
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO882583A NO882583D0 (no) | 1986-10-13 | 1988-06-10 | Fremgangsmaate for fremstilling av et reseptorpreparat for en radioreseptor-proeve og sett-rettet radioreseptorproeve i samsvar med fremgangsmaaten. |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| NO (1) | NO882583D0 (no) |
-
1988
- 1988-06-10 NO NO882583A patent/NO882583D0/no unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NO882583D0 (no) | 1988-06-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5583200A (en) | Stabilized composition of troponin for immunoassays and process for stabilizing troponin for immunoassays | |
| Böger et al. | Nitric oxide may mediate the hemodynamic effects of recombinant growth hormone in patients with acquired growth hormone deficiency. A double-blind, placebo-controlled study. | |
| US4606855A (en) | Monoclonal antibody to digoxin | |
| US3551555A (en) | Coated immunochemical reagent particles and process of preparation | |
| US3655838A (en) | Method of pelletizing analytical or immunological reagents | |
| US3932943A (en) | Method of preparation of lyophilized biological products | |
| US4056484A (en) | Stable blood plasma, process for preparing it and its use as comparative plasma in coagulation tests | |
| Perkins et al. | Plasma measurements of corticotrophin-releasing hormone-binding protein in normal and abnormal human pregnancy | |
| US4477576A (en) | Antigen assay method and kit | |
| US4162003A (en) | Ready-for-use rapid test package for serological tests | |
| Gekko | Enthalpy and entropy of transfer of amino acids and diglycine from water to aqueous polyol solutions | |
| JP2575296B2 (ja) | イムノアッセイ用合成スタンダード | |
| Helmerhorst et al. | Self-association of insulin: Its pH dependence and effect of plasma | |
| US4239746A (en) | Complement fixation test employing reactants in a disposable package | |
| US4447527A (en) | Single test formulations for enzyme immunoassays and method for preparation | |
| US3689633A (en) | Preparation of test sample for immunological assay of pregnancy of mares | |
| US5434052A (en) | Complementation assay for drug screening | |
| NO882583L (no) | Fremgangsmaate for fremstilling av et reseptorpreparat foren radioreseptorproeve i samavar med fremgangsmaaten. | |
| US4992366A (en) | Process for producing a receptor preparation for a radioreceptor assay and kit-correct radioreceptor assay according to the process | |
| US6387711B1 (en) | Liquid intact parathyroid hormone (PTH) standards | |
| Makower et al. | Carp insulin: amino acid sequence, biological activity and structural properties | |
| CN112230004A (zh) | 一种b型钠尿肽的液态校准品及制备方法、试剂盒 | |
| Pierce | Countercurrent distribution studies on anterior pituitary growth hormone | |
| WO2017125885A1 (en) | Bio-analytical method for insulin analogues | |
| KR20020011429A (ko) | 안정화 변성 리포단백질 및 그 제조방법 |