NO824086L - Fremgangsmaate for fremstilling av propolis - Google Patents

Description

Foreliggende oppfinnelse vedrører en fremgangsmåte for ekstraksjon av propolis, og det særegne ved fremgangsmåten i henhold til oppfinnelsen er at a) en mengde rå propolis eller ubehandlet bivoks anbringes, i en beholder og overdekkes med et løsnings-middel valgt blant etylalkohol, isopropylalkohol, N-butylalkohol, sec.-butylalkohol, t-butylalkohol, etyleter, benzylalkohol, propylenglykol, dimetylsulfoksyd, etylenglykol, N-propylalkohol, metylalkohol, benzylbenzoat, aceton, polyetylenglykol, iseddik, en vandig oppløsning av en eller flere av disse, eller en blanding av to eller flere av de ovennevnte, idet mengden av løsningsmiddel er fra 1 til 1,5 liter pr. 500 g propolis eller bivoks. b) Den resulterende blanding holdes ved en temperatur på omtrent 0°C i fra 1 til 10 døgn med periodisk

omrøring for å oppnå en propolisholdig oppløsning.

c) Oppløsningen filtreres for å oppnå et propolisholdig filtrat, og

d) løsningsmidlet fjernes fra filtratet for oppnåelse

av et tørt propolispulver.

Disse og andre trekk ved fremgangsmåten i henhold til oppfinnelsen fremgår av patentkravene.

Propolis er en harpiksaktig forbindelse som samles av honningbier fra forskjellige planter og knopper på forskjellige trær. Propolis er også betegnet "honningbi-lim" og anvendes.av biene for å dekke deler av det indre av kuben og tette sprekker og hulrom i kuben.

Propolis har som kjent farmasøytiske, medisinske og kosmetiske anvendelser.

Forekomsten av propolis har selvfølgelig i lang tid

vært erkjent av birøktere, og har vært beskrevet både som en velsignelse og en ulempe. Mens substansen i stor utstrekning har vært ignorert som et nødvendig klebende onde forbundet med bihold, har det vært foretatt enkelte overraskende studier av propolis med spesielt hensyn til kommersielle og terapeutiske anvendelser av materialet. Det meste av forskningen har vært gjennomført i asiatiske og europeiske land, men mulige kommersielle anvendelser for propolis har vært utviklet i USA.

I en forholdsvis kort artikkel av Dr. F.B. Wells, publisert i november 19 76, i American Bee Journal på sidene 512, 513 og 542 skisseres den mulige bruk av propolis og propolisholdige preparater for terapeutiske formål. Som indikert i den nevnte artikkel og fotnotene til artikkelen har hovedandelen av forskning om propolis vært foretatt i Storbritannia, Danmark, Polen, Sovjet-samveldet, Romania, Tsjekkoslovakia, Øst-Tyskland, Jugoslavia og Bulgaria. Disse rapporter er generelt

enige om at rå propolis hovedsakelig består av omtrent 55% harpikser og balsam, 30% voks, 10% eteriske oljer og 5% pollen. Det sees imidlertid at sammensetningen av propolis kan variere og er avhengig av det geografiske området og tidspunktet for innsamlingen. Ikke desto mindre er rapporterte laboratorietester og kliniske tester ganske overensstemmende i deres observasjoner av propolis og propolisholdige blandinger har baktericide virkninger.

Det har vært foreslått at propolis kan tilskrives den forholdsvis lave konsentrasjon av bakterier og sopp i atmosfæren inne i bikubene. Så tidlig som 1965 rapporterte 3 forskere i Romania at alkoholiske ekstrakter av propolis, droner og såkalt royal gele hadde virulicidal aktivitet overfor type A influensavirus in vitro. Russisk patentskrift 267014 påpeker effektiviteten av en alkoholisk ekstrakt av propolis i kombinasjon med glycerol for behandling av conjuctivitis. Russisk patentskrift 232470 lærer en alkoholisk ekstrakt av propolis som del av en tannpasta-blanding med både profylaktiske og antiseptiske egenskaper. Rumensk patentskrift 48101 vedrører en kosmetisk krem inneholdende en alkoholisk ekstrakt av propolis som også inkluderer borsyre.

Britisk patentskrift 1.465.194 lærer en fremgangsmåte omfattende gjentatt frysing og tining av propolis for å oppnå et material egnet for etterfølgende terapeutisk anvendelse.

Fremstilling av alkoholiske ekstrakter inneholdende propolis sammen med bruk av organiske løsningsmidler for fremstilling av ekstraktene er således velkjent. Likevel lærer ikke temperaturen styrte reproduserbare metoder for ekstraksjon av propolis med kjent bestanddel-sammensetning. Der er faktisk ingen lære i teknikkens stand for noen metoder for oppnåelse av en vannoppløselig propolisekstrakt og litteraturen refererer gjentatte ganger til propolis som en hovedsakelig uoppløselig substans.

I samsvar med oppfinnelsen oppnås renset propolis ved gjennomføring av filtreringstrinnet på følgende måte:

Det propolisholdige filtrat avkjøles til en temperatur

på høyst -20°C, det avkjølte filtrat holdes ved denne temperatur i omtrent 24 timer, det avkjølte filtrat omrøres og det i. avkjølte filtrat filtreres mens temperaturen opprettholdes for å oppnå et renset propolisholdig filtrat.

Ved fremgangsmåten i henhold til oppfinnelsen kan oppnås et tørt propolispulver egnet for en lang rekke anvendelser uten å være begrenset til kosmetiske og terapeutiske an vendelser. Ved anvendelse av rå propolis som utgangs-material og under anvendelse av en vandig oppløsning av et organisk løsningsmiddel, kan et vannoppløselig tørt propolispulver oppnås. Det spesielle løsningsmiddel som anvendes ved ekstraksjonsmetoden velges i samsvar med den påtenkte bruk av det tørre propolispulver og om det er ønskelig at pulveret er oppløselig i vann eller oppløselig i organiske løsningsmidler.

En praktisk metode for fremstilling av det tørre propolis-pulver går ut på å anbringe en mengde råmaterial hovedsakelig bestående av enten rent rått propolis eller ubehandlet bivoks i en glassbeholder og dekke det med løsningsmiddel. Hvis ren rå propolis anvendes som råmaterial, til settes omtrent 2 liter løsningsmiddel pr. kilo propolis. Hvis ubehandlet bivoks anvendes som råmaterial, anvendes omtrent 3 liter løsningsmiddel pr. kg bivoks.

Foretrukne løsningsmidler for anvendelse ved fremgangsmåten

i henhold til oppfinnelsen er absolutt etanol,(etylalkohol) og vandige løsninger av etanol. Laboratorie-forsøk har imidlertid vist at de følgende organiske løsningsmidler, såvel som vandige oppløsninger av disse løsningsmidler kan anvendes: isopropano, n-butanol, sec-butanol, t-butanol, dietyleter, benzyl-alkohol, propylenglykol, dimetylsulfoksyd, etylenglykol, n-propanol,

metanol, benzyl-benzoat, aceton, polyetylenglykol og iseddik.

Det skal selvfølgelig forstås at det anvendte løsnings-i middel bør ha høy kvalitet og renhet i samsvar med de endelige anvendelser av det tørre propolispulver.

Mens den initiale ekstraksjon foretrukket foregår ved romtemperatur, oppnås brukbare resultater ved temperaturer fra 0 til 37°C. Ekstraksjonsbeholderen inne-

holdende råmaterial og løsningsmiddel rystes flere ganger

daglig i en periode på fra 1 til 10 døgn, foretrukket minst 3 døgn. Ved slutten av denne tid, filtreres ekstrakten gjennom Whatman nr. 1 filterpapir eller ekvivalent derav. Ved dette tidspunkt bemerkes at det en gang ekstraherte råmaterial på nytt kan overdekkes med løsningsmiddel og ekstraheres på nytt som beskrevet i det foregående for å oppnå ytterligere propolisholdige filtrater.

Løsningsmidlet kan så fjernes fra det propolisholdige filtrat, til å gi et tørt propolispulver. Fjernelse av løsningsmidlet kan gjennomføres ved frysetørking eller avdamping. Avhengig av det løsningsmiddel som anvendes ved gjennomføring av ekstraksjonsmetoden, vil det resulterende tørre propolispulver være enten vann-oppløselig eller løselig i organiske løsningsmidler.

Hvis f.eks. etanol anvendes som løsningsmiddel oppnås

et propolispulver som er løselig i organiske løsnings-midler. Hvis imidlertid en 10-25% vandig etanol anvendes som løsningsmiddel oppnås et vannoppløselig tørt propolispulver.

Rensingen av propolisekstrakten før oppnåelse av det endelige tørre propolispulver kan gjennomføres ved hjelp av en foretrukket metode som først går ut på å avkjøle det propolisholdige filtrat til en temperatur på høyst -20°C i omtrent 24 timer. Ved slutten av denne periode blir ekstrakten viskøs og ugjennomsiktig. Mens filtratet holdes ved omtrent -20°C, rystes det og filtreres gjennom Whatman nr. 50 filterpapir eller ekvivalent derav. Under den kolde filtrerihgsprosess, som gjennomføres ved omtrent -20°C, bør det oppnås et meget klart filtrat og det voksaktige material som er tilstede på filter-papiret inneholder avfallsmaterialer. Hvis filtratet ikke er klart må den kolde filtrering gjentas.

Et klart filtrat som resulterer fra den kolde filtreringsprosess kan filtreres ved den reduserte temperatur eller kan bringes til romtemperaturen og filtreres gjennom et 0,2 mikrometer filtreringssystem. Løsningsmidlet fjernes så fra dette endelige filtrat, f.eks. ved frysetørking eller avdamping, til å

gi det rensede tørre propolispulver. I lys av de forholdsvis lave temperaturer som anvendes ved den ovenfor skisserte rensemetode, forstås at denne rensemetode ikke er egnet for vandige oppløsninger av løsningsmidler,

pga. at vannet ville fryse.

Mens den ovennevnte metode hele tiden har vist seg å

gi et ytterst rent tørt propolispulver med stabil sammensetning, kan ytterligere kvalitetskontroll over det endelige pulveriserte produkt oppnås på følgende måte. Etter den kolde filtreringsprosess som er beskrevet i det foregående, men før fjernelse av løsningsmidlet, kan det kolde prosessfiltrat bringes til en ytterst lav temperatur som f.eks. -70°C. Hvis, filtratet fremdeles er klart etter omtrent 24 timer ved denne temperatur, er renheten av det endelige produkt sikret. Eventuell uklarhet i en slik prøve ville indikere at filtratet ikke er egnet for ytterligere behandling.

Detaljerte illustrerende eksempler på forskjellige ekstraksjons- og rensetrinn i samsvar med oppfinnelsen er angitt i det følgende. Som angitt mer detaljert, kan det resulterende tørre propolispulver anvendes som en bestanddel i mange kosmetiske og terapeutiske preparater, i blanding med en kosmetisk eller farmasøytisk tålbar bærer for topisk tilførsel, eller farmasøytiske og medisinske preparater for oral tilførsel omfattende pulveret i blanding med en ikke-giftig bærer for oral tilførsel.

EKSEMPEL I

Omtrent 500 g rå propolis anbringes i en glassbeholder

og overdekkes med omtrent 1 liter absolutt etanol.

Denne blanding fikk stå i 10 døgn ved romtemperatur,

med periodevis omrøring flere ganger hver dag.

Ved slutten av 10 døgn ble blandingen filtrert gjennom Whatman nr. 1 filterpapir. Det resulterende propolis-holdige filtrat ble så inndampet ved omtrent 70°C

inntil det ble oppnådd et tørt propolispulver. For-dampningstemperatur så lav som omtrent 55°C kan også anvendes men det kreves da lenger tid for oppnåelse av det endelige tørre produkt. Det bør imidlertid med hensyn til eventuell økning av tørketemperaturen bemerkes at propolis vil bli ødelagt ved omtrent 80°c.

Det tørre material som er tilbake etter avdampingen

er det tørre propolispulver og er løselig i organiske løsningsmidler.

Lignende resultater ble oppnådd under anvendelse av iseddik som løsningsmiddel.

EKSEMPEL II

Fremgangsmåten i Eksempel 1 ble gjentatt, men løsnings-midlet ble da fjernet fra det propolisholdige filtrat ved frysetørking etter delvis reduksjon av alkohol-innholdet ved avdamping. Slutt-produktet oppnådd ved denne metode var ikke et pulver men en "gummiaktig" propolisrest.

EKSEMPEL III

Fremgangsmåten i Eksempel II ble gjentatt under anvendelse av en 15% vandig etanoloppløsning som løsnings-middel. Dette resulterte i et tørt propolispulver som var vannoppløselig. Kjemisk analyse av det vannoppløselige tørre propolispulver ga følgende resultater pr. 100 g tørt propolispulver:

Videre viste undersøkelser ved anvendelse av det resulterende vannoppløselige propolis til glatt muskelvev at dette propolis ikke hadde anti-histaminegenskaper helt forskjellig fra de fleste medisiner som anvendes for behandling av virussymptomer. Nærværet av kreatinin, bilirubin og alkalisk fosfatase i det tørre propolis-pulver er ganske bemerkelsesverdig og kan gi basis for andre anvendelser av pulveret, da disse bestanddeler normalt finnes i animalsk vev.

EKSEMPEL IV

Fremgangsmåten i eksempel III ble gjentatt under anvendelse av 10, 20 og 25% vandige etanoloppløsninger som løsnings-midler. Resultatene i hvert tilfelle var hovedsakelig identiske med resultatene i eksempel III.

EKSEMPEL V

Fremgangsmåten i eksempel III ble gjentatt under anvendelse av en 30% vandig etanoloppløsning som løsningsmiddel.

Det propoliske filtrat som ble oppnådd ved denne metode var ansett uegnet pga. for sterk uklarhet. Det antas der-for at vannoppløselig tørt propolispulver bare kan oppnås under anvendelse av vandige løsningsmiddeloppløsninger

med ikke mer enn omtrent 25% konsentrasjon.

EKSEMPEL VI

Omtrent 5 00 g ren rå propolis ble anbragt i en glassbeholder og overdekket med omtrent 1 liter absolutt etanol. Blandingen fikk stå ved romtemperatur i omtrent 10 døgn med omrysting flere ganger hver dag. Ved slutten av de 10 døgn ble ekstrakten filtrert gjennom Whatman nr. 1 filterpapir.

For ytterligere rensing av det propolisholdige filtrat

ble dette avkjølt til en temperatur på omtrent -2 0°C

i omtrent 24 timer. Ved slutten av denne periode viste det seg at ekstrakten var blitt viskøs og ugjennomsiktig. Det avkjølte filtrat ble så rystet og filtrert mens temperaturen ble holdt ved omtrent -2 0°C, gjennom Whatman nr. 50 filterpapir. Dette resulterte i et meget klart renset propolisholdig filtrat. Løsningsmidlet ble fjernet fra det rensede filtrat ved avdamping ved omtrent 70°C i omtrent 48 timer eller til tørr tilstand. Det resulterende material var tørt propolispulver oppløselig i organisk løsningsmiddel.

Ekvivalente resultater ble oppnådd ved gjentagelse av

den ovennevnte metode med følgende løsningsmidler:

Isopropyl-alkohol

sec.-butylalkohol

tert.-butylalkohol

etyleter

benzylalkohol

propylenglykol

dimetylsulfoksyd

etylenglykol

n-propylalkohol

xu

metylalkohol

benzylbenzoat

aceton

polyetylenglykol, og

en blanding av like deler etylalkohol og metylalkohol.

EKSEMPEL VII

Under anvendelse av omtrent 100 g ubehandlet bivoks som råmaterial, og omtrent 300 ml etanol."- som løsningsmiddel, ble metoden i eksempel VI gjentatt og ga lignende resultater. Det ble selvfølgelig oppnådd en mindre mengde renset tørt propolispulver.

EKSEMPEL VIII

Fremgangsmåten i eksempel VI ble gjentatt men løsnings-midlet ble fjernet fra det rensede filtrat ved frysetørking. Kjemisk analyse av det oppnådde sluttprodukt ved denne metode ga resultater hovedsakelig identiske med dem som er angitt for eksempel II.

EKSEMPEL IX

Følgende metoder ble anvendt for å bestemme den baktericide aktivitet av det rensede propolispulver oppnådd i samsvar med metoden angitt i eksempel VII.

En 10 vekt% tørr propolispulver-oppløsning i absolutt etanol ble fremstilt. Denne 10% oppløsning ble så

anvendt for å fremstille en rekke ytterligere opp-løsninger, fortynnet med destillert vann, til å gi sluttkonsentrasjoner av tørt propolispulver på fra mindre enn 10 milligram til 100 milligram propolispulver pr.

milliliter oppløsning. Disse oppløsninger ble så

på nytt fortynnet med et mikrobiologisk dyrkingsmedium som f.eks. supplementert pepton-buljong II oppnådd fra Brecton Dickinson Corporation of Rutherford,

New Jersey, USA. De endelige oppløsninger med pepton-buljong II varierte fra mindre enn 1 til 10 milligram propolis pr. milliliter pepton-buljong II oppløsning. Etter omtrent 24 til 48 timers inkubasjon ved omtrent

37°C med hver av organismene anført i det etterfølgende, ble så kulturene på nytt overført på blodagarplater før en annen inkubasjon ved omtrent 37°C i omtrent 24 timer.

o

De 3 organismer ble anvendt i mengder på 15 millioner pr. milliliter og var:

Med organismene testet individuelt i kontrollerte under-søkelser ble propolis funnet å ha de følgende virkninger. Renset propolispulver i den endelige konsentrasjon på 2 milligram pr. milliliter, er dødelig for Staphylococcus aureus. Renset propolispulver i endelig konsentrasjon på 6 milligram pr. milliliter er dødelig for Escherichia coli. Renset propolispulver i endelig konsentrasjon på 5 milligram pr. milliliter er dødelig for Pseudomonas aeruginosa.

Lignende forsøk ble gjennomført under anvendelse av vann-oppløselig propolispulver oppnådd i samsvar med metoden i eksempel IV. Den baktericide aktivitet av dette propolis var ekvivalent med det som er angitt i det foregående.

EKSEMPEL X

Følgende metoder ble gjennomført for å bestemme de anti-oksyderende egenskaper av vannoppløselig tørt propolispulver oppnådd i samsvar med metoden i eksempel IV. 25 0 mikrogram av det vannoppløselige tørre propolispulver ble oppløst i 1 ml destillert vann. Til dette ble tilsatt 0,02 ml 0,1N kalium-permanganat. Avfarging foregikk i løpet av omtrent 2,1 sekund og

ga en positiv indikasjon på de antioksyderende egenskaper av det vannoppløselige tørre propolispulver.

Disse resultater anses viktige pga. at de anti-oksyderende egenskaper av propolispulveret samsvarer med den baktericide virkningsgrad.

Tørt propolispulver oppnådd i samsvar med fremgangsmåten

i henhold til oppfinnelsen, kan anses som et lagrings-material tilgjengelig for umiddelbar bruk. Det antas at stabiliteten av propolispulver, ved lagring i farget glassbeholder ved romtemperatur, er minst 10 år. Propolis-pulveret er oppløselig i alle løsningsmidler nevnt i metodene gitt i de ovennevnte eksempler inkluderende selvfølgelig også vann. Videre er også organiske pro-polisoppløsninger oppløselige i glycerol og mange kjemiske overflateaktive midler anvendt innenfor deh farmasøytiske, kosmetiske og næringsmiddel-industrien. Lignende er organiske oppløsninger av propolispulver lett blandbare med laksér-olje. Innblanding av organiske oppløsninger av propolispulver og forskjellige vegetabilske oljer kan oppnås først ved kombinering av den organiske oppløsning med laksér-olje eller med kjemiske overflateaktive midler. Mineralolje, etter kombinasjon med vegetabilsk olje, gir lignende betingelser for tilsetning av organiske propolis-oppløsninger. Lignende resultater kan oppnås ved kombinasjon av organiske propolisoppløsninger med kjemiske overflateaktive midler og deretter med mineralolje.

Bruk av tørt propolispulver i organiske eller vandige løsninger, kremer, hudvann, stikkpiller, eller i andre farmasøytiske eller kosmetiske baser medfører betraktelig antibakteriell, antifungal og anti-viral aktivitet. Den iakttatte anti-virale aktivitet av det tørre propolispulver, er særlig tydelig og er blitt iakttatt å være effektive mot Herpes simplex type 1, Herpes simplex type 2, Zoster virus, Epstein Barr virus og vanlig forkjølelsesvirus. Smittsom

hepatitt og hvalpesyke er ikke blitt undersøkt, men teoretiske betraktninger antyder sterkt effektiviteten av det ekstraherte tørre propolispulver.

I relativt store konsentrasjoner har propolis ekstrahert ved fremgangsmåten i henhold til oppfinnelsen smertestillende egenskaper. Store konsentrasjoner øker også metabolismen i animalsk vev og kan påføres lokalt for å

øke blodsirkulasjonen. Økningen i vevs-metabolismen under behandlingen indikerer at det stimulerte vev kan reagere mot inflammatoriske prosesser og at propolis har regenerative egenskaper. Øket blodsirkulasjon i lokalt vev er en viktig faktor ved bekjempelse av celluliter, kramper og andre lidelser. Som antydet i det etterfølgende, har oral tilførsel av 5 til 10% propolispulver i absolutt etanol vist seg å være effektive for bakterielle,

fungale og virale sykdommer.

Av spesiell betydning er effektiviteten av slike opp-løsninger ved behandling av Herpes simplex typer 1 og 2. Herpes simplex (type 1) spres ved kontakt med slimhinner som resulterer i forkjølelsessår. Herpes simplex

(type 2) infeksjoner spres ved seksuell kontakt og anses

å være den mest vanlige kjønnssykdom i USA. Det er generelt at Herpes simplex (type 2) er forbundet med cervical cancer. Begge av Herpes virus kan bevirke encephalitis

som har en høy dødelighet. Propolispulver fremstilt 1 samsvar med fremgangsmåten i henhold til opp-

finnelsen og påført i form av kremer eller salver hel-breder hurtig forkjølelsessår. Herpes simplex (type 2) infeksjoner av kjønnsorganene kan helbredes ved hjelp av en spesielt påført dusj. I begge tilfeller anbefales etterfølgende oral behandling for å forhindre fornyet opptreden av sykdommene.

In vitro studier av Herpes simplex (typer 1' og 2) har vist at omtrent 10 mikrogram av propolispulveret pr. milliliter av dyrkingsmedium dreper viruset uten å påvirke celledeling. Oral tilførsel i doser på omtrent 2 til 3 gram pr. dag vil forhindre ytterligere utbrudd.

Det bemerkes også at det tørre propolispulver oppnådd

i samsvar med fremgangsmåten i henhold til oppfinnelsen er iakttatt å være ytterst effektivt mot flertallet av vanlig forkjølelsesvirus ved behandling umiddelbart etter tilsynekomsten av de første symptomer på for-kjølelsen (ikke senere enn 2 til 3 timer etter begynnelsen av denne tilstand). Når propolis tas mer enn omtrent 3 timer etter at symptomene vises synes intensiteten av symptomene å bli nedsatt.

De følgende eksempler illustrerer oppfinnelsen med sammensetninger for topisk og oral tilførsel av det tørre propolispulver.

EKSEMPEL XI

Petrolatum Propolis salve

En 0,5 til 5 % propolis-etanoloppløsning kan innlemmes

i hvit eller gul petrolatum i konsentrasjoner på opptil 60 volum% propolisoppløsning. For å nedsette viskositeten

av denne og andre salver kan mineralolje, ullfett, dyrefett og fiskefett anvendes.

EKSEMPEL XII

Spermacet- krem

Følgende bestanddeler blandes for oppnåelse av kremen med alle bestanddeler i blandingen angitt som vekt%:

EKSEMPEL XIII

Anti- Herpes krem I

Følgende sammensetning, med bestanddeler angitt som

vekt% har vist seg effektiv ved behandling av Herpes-virus:

Dermabase er en hypo-allergenisk krem som er blandbar med de fleste medikamenter. pH er nær pH i human hud. Dermabase er en bærer for topisk påføring anvendt i farmasøytiske, kosmetiske og veterinære preparater og fremstilles av Professions Pharmaceutical Corporation, 2 795 Bates Road, Montreal, Quebec H3S 1B6, Canada.

EKSEMPEL XIV

Anti- Herpes krem II

Følgende sammensetning med bestanddeler angitt i vekt% har vist seg effektiv ved behandling av Herpes-virus:

Unibase er en dermatologisk base for alle formål og

har pH omtrent som for huden. Unibase fremstilles av Parke-Davis & Company, Limited, Box 633, Station "A". Scarborough, Ontario.MIK 5C5, Canada.

EKSEMPEL XV

Stikkpiller

Propolispulveret fremstilt i samsvar med fremgangsmåten i henhold til oppfinnelsen kan tilføres i stikkpiller fremstilt i samsvar med følgende sammensetning hvori alle bestanddeler er gitt i vekt%:

EKSEMPEL XVI

Stikkpiller

En ytterligere sammensetning for stikkpiller inkluderende pulverisert propolis kan fremstilles på følgende, også her med alle bestanddeler angitt i vekt%;

EKSEMPEL XVII

Orale preparater

Et flytende preparat (sirup)for oral tilførsel^v propolispulver kan fremstilles i samsvar med følgende sammensetning:

Aromamidler og/eller konserveringsmidler kan inkluderes etter ønske.

De følgende eksempler vedrører propolis-holdige oppløsninger som har vist seg effektive for behandling av vanlig forkjølelse.

EKSEMPEL XVIII

10 ml (omtrent 1 spiseskje) med 10% propolis-etanol-oppløsning blandes i et glass(omtrent 200 milliliter)

vann eller saft. Alternativt1 kan propolis-etanol-oppløsningen blandes med kaffe eller te og dette gir samme utseende som melketilsetning.

Denne blanding kan inntas omtrent 3 ganger daglig men hvis den først tilføres umiddelbart etter at de første symptomer merkes kan symptomene forsvinne i løpet av noen få timer.

EKSEMPEL XIX

Nasal- salve for forkjølelse eller høysnue

Denne salve bør påføres i neseborene noen ganger daglig etter behov. Andre lignende baser kan erstatte Petrolatum.

EKSEMPEL XX

Honning- propolis- sammensetning

EKSEMPEL XXI

Gelatin- kapsler

Dette er bare et eksempel på mange mulige midler til å innlemme propolis i kapsler. Propylenglykol USP forsterker aktiviteten av alkoholiske propolis-oppløsninger opptil 6,5 ganger i forhold til dødelig virkning overfor tallrike mikroorganismer.

Det er også fastslått at propolis fremstilt i samsvar med fremgangsmåten i henhold til oppfinnelsen er anvendelig for behandling av åndedretts-infeksjoner og inflammatoriske prosesser i lungene, inklusive bronkial-astma, sinusitt og høysnue. En behandlingsmåte er inhalasjonsterapi hvor medisinen oppløses i varmt vann og dampende inhaleres i samsvar med vanlige metoder. Det følgende eksempel angir en sammensetning og en metode for inhala-sjon av propolis.

EKSEMPEL XXII

Omtrent 10 milliliter (omtrent 1 spiseskje) 10% alkoholisk oppløsning av propolis tilsettes omtrent 1 liter varmt vann og blandes godt. Dampene inhaleres.

EKSEMPEL XXIII

En ytterligere sammensetning for inhalasjonsterapi kan fremstilles på følgende måte:

Dette blandes i 100 ml 90% etanol. Ved foretrukket anvendelse tilsettes en teskje av blandingen til 500 liter varmt vann for å frembringe inhalasjonsoppløsningen.

Andre løsningsmidler for propolis for inhalasjonsterapi inkluderer benzylalkohol og polyetylen glykol.

Ved studier av astma i forsøksdyr er det bestemt at polyetylenglykol kan anvendes som et løsningsmiddel for propolis ved formulering av injiserbare preparater (intramuskulære).

Som indikert ovenfor i eksempel XXI, kan propolis i gelatin-kapsler med passende ikke-ioniske overflateaktive midler som f.eks. polyoksy-etylen 20 sorbitan monostearat, anvendes ved behandling av gastrointestinale infeksjoner, mavesår og andre inflammatoriske lidelser i maven. Behandling kan foretas med oral påføring av propolis i forbindelse med ikke-ioniske overflateaktive midler og

propylenglykol i form av gelatin-kapsler. En ytter-

ligere behandlingsform omfatter bruken av retensjon-preparater inkluderende propolis.

Gelatin-kapslene bør sammensettes for å maksimalisere absorpsjon av propolis i gastrointestinal-kanalen.

Dette kan oppnås ved å blande propolis etanoloppløsningen med sorbitol eller fortynnet propylenglykoloppløsning inntil et melkeaktig utseende av de kombinerte sub-

stanser resulterer. Dette vil unngå eller minimalisere belegg på de gastriske slimhinner.

Daglig inntak av propolis bør være fra 3 til 6 gram. Retensjonspreparatene bør gis i mengder på omtrent

200 milliliter 3 ganger i uken eller i samsvar med legens anvisninger. pH i retensjonsoppløsningen bør være mellom 5,0 og 6,0. Konsentrasjonen av propolis kan variere fra omtrent 5 til omtrent 10%.

Det er også fastslått at propolis kan blandes med konsentrert propylenglykol USP og innlemmes i gelatin-kapslene som ved inntagning kan dekke maveveggene.

Kapslene i kontakt med mavesaften vil danne en melke-

aktig suspensjon som adsorberes over overflaten av mavecellene og danner en tynn film. Belegget er vist å undertrykke appetitten i 2 til 3 timer og en slik behandling anbefales for kontroll av vekten i over-

vektige pasienter.

Vaginitis, cervicitis og cervicale erosjoner kan behandles med 1 til 5% propolis-etanoloppløsning i kombinasjon med glycerol, propylenglykol og med eller uten ikke-ioniske overflateaktive midler i form av dusjer, suppositorier eller salver.

Propolispulver kan anvendes i otolaryngologi og renale infeksjoner i form av oppløsninger, tabletter eller kapsler.

Propolispulver kan innlemmes i salver for behandling

av brannskader.

For cystisk fibrosis bør den daglige orale tilførsel

av 1 gram propolispulver tilføres i form av kapsler eller: oppløsninger.

Pasienter med leukocytt-disfunksjonsforstyrrelser utsettes ofte for gjentagende bakterieinfeksjoner som ikke kan styres ved vanlige terapimetoder. Propolis-pulveroppløsninger, ved at de er sterke baktericide midler, kan anvendes oralt ved behandling av disse forstyrrelser. Den orale tilførsel av propolispulver-oppløsninger i daglig dose på 2 til 3 gram regnet på

en vannfri basis for en periode på 10 døgn anbefales.

De kan også anvendes i forbindelse med vanlig anti-biotisk terapi.

De re-generative og foryngende egenskaper av propolis-pulver kan anvendes innenfor området av den medisinske videnskap som plastisk kirurgi og dental-kirurgi. Propolis-pulver i form av salver, kremer, behandlingsvann, oppløsninger, shampoo, rensekremer, barberingsvann og hodebunnskremer i kontakt med de skadelige eller syke skader på dyre- eller menneske-kroppen viser betraktelige helbredende og foryngende egenskaper. Disse regenerative egenskaper av propolispulver kan iakttas ved dental-kirurgi, plastisk kirurgi av animalske organer og også

in vitro vevs-dyrkingsstudier.

Når propolispulver-oppløsninger tilsettes til en fibro-blast-cellekultur, øker antallet av mitotiske celler. Disse studier viser en økning i enzymene som sørger for den økte metabolisme i cellen. Den økede enzymaktivitet opptrer med følgende enzymer:

Adenosin-trifosfatase

Sur fosfatase

Glukose-6-fosfatase

Suksinat-dehydrogenase

Dette kan forklare hvorfor propolispulver-oppløsninger viser regenerative egenskaper som økningen i aktivitet ved sammensetning av et kollagen.

Propolispulver kan anvendes stadig i forbindelse med andre anti-bakterielie midler anvendt innenfor tann-lege videnskapen . Propolispulver innlemmet i passende baser vil styre overflate- og dype infeksjoner i slimhinner og ben, og vil desinfisere tannhulrom eller rotkanaler.

Propolis-pulveroppløsninger anvendt alene eller i kombinasjon med benzokain er et utmerket smertestillende middel. Et illustrerende eksempel følger.

EKSEMPEL XXIV

Propolis- benzokain- oppløsning

Propolispulver i propylenglykol til 150 milliliter.

Den endelige konsentrasjon av propolis i den ovennevnte sammensetning kan variere fra 1,0 til 10,0 vekt%.

Propolispulver kan anvendes i form av væsker eller pastaer til å fjerne post-uttrekningssmerte (alveolar analgesi). Et eksempel på en pasta følger.

EKSEMPEL XXV

Propolis- benzokain- pasta

Propolis i den ovennevnte sammensetning virker som anti-mikrobielle,analgetiske, anestetiske og regenerative midler. Det påskynder regenerering av vevene og reduserer inflammatorisk infiltrasjoner.

E KSEMPEL XXVI

Propolis i et munn- rensevann

I denne sammensetning kan soirbiton USP eller ikke-

ioniske overflateaktive midler anvendes. Propolispulver har mange slags anvendelser av dermatologiske forstyrrelser. Propolispulver for dette formål kan innlemmes i salver, kremer, behandlingsvann, oppløsninger, shampoer, rensekremer, dusjer og orale preparater. Propolis-pulver kan også innlemmes i vanlig anvendte farmasøytiske og kosmetiske produkter direkte eller med passende overflateaktive midler.

Ringorm kan behandles ved lokal påføring av 10% propolis-alkoholoppløsning eller 5-10% propolispulver i en salve fremstilt av petrolatum eller med en annen base 2 til 3 ganger daglig i 4 uker eller inntil symptomene ikke lenger kan sees.

Psoriasis, seborrheisk dermatitis, eksem og neuroderma-titis kan med hell behandles med fra 0,5 til 25% propolispulver i form av behandlingsvann, oppløsninger ellér salver fremstilt med baser som tidligere beskrevet.

Propolispulver i konsentrasjoner fra 0,5 til 10,0 %

kan formuleres med ullfett eller alkoholer derav, og i kombinasjon med petrolatum og mineralolje for behandling av liktorner, vorter og fortykket hud.

Propolis-konsentrasjoner på fra 0,25 til 1,0% kombinert med ikke-ioniske overflateaktive midler og innlemmet i shampoer, rensekremer eller kremer er effektive for behandling av flass. Tilsvarende, kan propolisoppløsninger i konsentrasjoner varierende fra 0,25 til 2,0% innlemmes i hypo-allergeniske baser for behandling av forbrenninger som skyldes brennesler og maneter.

Acne vulgaris kan behandles med opptil 3% propolis-oppløsninger kombinert med opptil 3% salicylsyre, ikke-ioniske overflateaktive midler som f.eks. poly-oksyetylen 2 0 sorbitan monolaurat og med 40% etylalkohol eller en annen passende alkohol. Andre forbindelser kan også anvendes som f.eks. metyl salicylat, glycerol eller propylenglykol.

En meget effektiv behandling for hematom og andre skader består i omtrent 2 til 5% propolis-etanoloppløsning til-dannet til en salve med petrolatum. Salven spres på bandasjen som så fastsettes ved tape-virkning over det skadede område. De enestående egenskaper av propolis har vært anvendt for å skape et nytt område for kosmetiske preparater. Propolis-pulveret og oppløsninger har preserverende og anti-oksyderende egenskaper og naturlige skinn-fornyende egenskaper som er absolutt nødvendige for mange kosmetiske preparater. Konsentrasjonen av propolis i pulverisert form kan variere fra mindre enn 1% til mer enn 2%. Som konserveringsmiddel eller et anti-bakterielt og anti-fungalt middel kan propolis-oppløsninger anvendes i konsentrasjoner varierende fra 1,0 til 2,0% på en vannfri basis. I anti-rynkepreparater kan prosentandelen av propolispulver økes. De for-

nyende og andre egenskaper av propolis ved forsøk med et antall kosmetiske sammensetninger har oppfylt forventningene.

Propolispulveret kan anvendes i fuktighetskremer,

dag og nattkremer, næringskremer, barrierekremer, neglekremer, rensekremer, behandlingsvann, koldkremer, vaskepreparater, alle typer av vann og oppløsninger, shampoer, kondisjoneringsmidler, rensekremer, barbervann, fingernegl-poleringsmidler, seper, lebestifter, barne-kremer, barnebehandlingsvann, anti-bleie-utslettsprodukter, massasjekremer, massasje-vann, hudmasseringsprodukter, aerosoler for kosmetiske eller medisinske formål, keratolytiske produkter og anti cellulitt-produkter.

Fuktighetskremer anvendes i løpet av; dager under make-up eller som en grunnlagskrem som gir huden et mykt utseende og bibeholder dens fuktighet og forhindrer rynke-dannelse. En brukbar sammensetning for en slik fuktighetskrem følger:

EKSEMPEL XXVII

Propylenglykol kan erstattes med glycerol, sorbitol-oppløsning USP eller lanolin. Avocadoolje kan erstattes med annen vegetabilsk olje eller et animalsk eller fiske-fettstoff.

EKSEMPEL XXVIII

Koldkrerner

Disse inneholder store mengder fettstoffer eller olje-be st anddele r.

Et eksempel følger:

EKSEMPEL XXIX

Nattkrem

Den større mengde av propolis er en viktig faktor ved fornyelsen av huden under natten når den mitotiske aktivitet av huden økes. Fuktighetsmidler kan tilsettes for å hjelpe til med å bibeholde hudfuktigheten.

EKSEMPEL XXX

Neglekrem

Denne mykner neglebåndene og forhindrer at neglene blir sprø. Den faktisk forsterker og fortykker neglene og tillater dem å vokse lenger. En sammensetning følger:

EKSEMPEL XXXI

Ansikts- masker

Ansiktsmasker er ment som hudrensende og tettende midler. Nærværet av propolis hjelper til med foryngelsen av huden. Følgende er et eksempel på en ansiktsmaske:

Kaolin eller bentonitt kan også anvendes i kombinasjon med og som en erstatning for den ovenfor anvendteFuller jord.

Propolispulver kan også anvendes i linimenter i forbindelse med terpentinolje, kapsikum, ekstrakter eller arnika, linolje, kamfer og isopropylalkohol, etc.

Som tidligere angitt kan propolispulver og propolis-oppløsninger anvendes som konserveringsmidler, anti-oksydasjonsmidler, stabiliseringsmidler, og foryngelses-midler innen en lang rekke kosmetiske produkter. Deres innlemmelse krever bare små modifikasjoner av de opp-rinnelige sammensetninger. Propolis kan direkte innlemmes eller via bruk av et løsningsmiddel eller overflateaktivt middel. De overflateaktive midler kan være ikke-ioniske, anioniske eller kationiske. Propolis-pulveret og oppløsninger kan også anvendes innenfor næringsmiddelindustrien som konserveringsmidler, anti-oksydasjonsmidler og stabiliserings-

midler for næringsmiddelprodukter, med vekt på kon-servering av animalske og fiske-fett. Innenfor destilla-sjonsindustrien kan de innlemmes i alkohol for bruk ved oral behandling av pasienter og innenfor tobakksindustrien er det antatt at de kan anvendes som et aromagivende middel eller som en medikamentbestanddel i anti-

astma sigaretter.

Det bemerkes også at de følgende løsningsmidler, pga. deres kjemiske ekvivalenter til de tidligere beskrevne løsningsmidler, også kan anvendes ved fremgangsmåten i henhold til oppfinnelsen:

Amyl-alkohol

Isoamyl-alkohol

Fenetyl~-alkohol

Etylenglykol-etyl-eter

Isoamyl—benzoat

Isoamyl-butyrat

Isoamyl—formiat

Isoamyl-isovaleriat

Isoamyl-salicylat

Formamid

På lignende måte antas det at andre ekvivalente organiske forbindelser som er løsningsmidler for harpikser og balsamer kan anvendes ved fremgangsmåten i henhold til oppfinnelsen.

Oppsummert kan det sees at den foreliggende oppfinnelse tilveiebringer et middel for fremstilling av tørre propolispulvere egnet for en lang rekke anvendelser,

og det bemerkes at fremgangsmåten og resulterende vann-oppløselig propolispulver anses ganske betydningsfullt av den grunn at vannoppløselige former av propolis ikke tidligere var kjent.

Claims (10)

1. Fremgangsmåte for ekstraksjon av propolis, karakte^ risert ved at a) en mengde rå propolis eller ubehandlet bivoks anbringes i en beholder og overdekkes med et løsningsmiddel valgt blant etylalkohol, isopropylalkohol, n-butylalkohol, sec.-butylalkohol, t-butylalkohol, etyleter, benzylalkohol, propylenglykol, dimetylsulfoksyd, etylenglykol, n-propylalkohol, metylalkohol, benzyl-benzoat, aceton, polyetylenglykol, iseddik, en vandig oppløsning av en eller flere av de ovenstående eller en blanding av to eller flere av de samme, idet mengden av løsningsmiddel er fra 1 til 1,5 liter pr. 500 g propolis eller bivoks, b) den resulterende blanding holdes ved en temperatur i området 0°C i fra 1 til 10 døgn med periodevis om-røring for å oppnå en propolisholdig oppløsning, c) oppløsningen filtreres for å oppnå et propolisholdig filtrat, og d) løsningsmidlet fjernes fra filtratet for oppnåelse av et tørt propolispulver. A

2. Fremgangsmåte som angitt i krav 1, karakterisert ved at løsningsmidlet inneholder ikke over 25% vandig oppløsning og at løsningsmidlet fjernes ved frysetørking.

3. Fremgangsmåte som angitt i krav 1, karakterisert ved at løsningsmidlet fjernes ved avdamping ved 55 til 70°C inntil tørr tilstand.

4. Fremgangsmåte som angitt i krav 3, karakterisert ved at avdampingen foregår ved omtrent 70°C.

5. Fremgangsmåte som angitt i krav 1 til 4, karakt e:ri sert ved at det ytterligere trinn at mellom trinn (c) og før trinn (d) avkjøles det propolisholdige filtrat til en temperatur på høyst -20°C, det avkjølte filtrat opprettholdes ved denne temperatur i omtrent 24 timer, det avkjølte filtrat omrøres, filtreres mens den nevnte temperatur opprettholdes til å gi et renset propolisholdig filtrat, og løsningsmidlet fjernes fra det rensede filtrat for oppnåelse av et renset tørt propolispulver.

6. Fremgangsmåte som angitt i krav 5, karakterisert ved at renheten av det propolisholdige filtrat, før fjernelse av løsnings-midlet, sikres ved avkjøling til en temperatur på høyst -70°C og at denne temperatur holdes i en periode på omtrent 2 4 timer hvoretter klarheten av det rensede propolisholdige filtrat iakttas idet vesentlig klarhet etter den nevnte periode indikerer renhet av sluttproduktet.

7. Fremgangsmåte som angitt i krav 1 til 6, karakterisert ved at utgangsmaterialet hovedsakelig består av rå propolis og at løsningsmidlet anvendt i trinn (a) er en 10-25% vandig oppløsning av etylalkohol, isopropylalkohol, sec.-butylalkohol, tert.-butylalkohol, etyleter, propylenglykol, dimetylsulfoksyd, etylenglykol, n-propylalkohol, metylalkohol, aceton, polyetylenglykol, iseddik, eller en blanding derav, idet mengden av løsningsmidlet er omtrent 1 liter pr. 500 g rå propolis og at produktet er et vannoppløselig tørt propolispulver.

8. Fremgangsmåte som angitt i krav 7, karakterisert ved at løsningsmidlet er en 10-25%, spesielt 15% vandig løsning av etylalkohol .

9. Vannoppløselig tørt propolispulver fremstilt i samsvar med fremgangsmåten som angitt i krav 7 eller 8.

10. Kosmetisk preparat for topisk tilførsel, karakterisert ved at det omfatter et propolispulver fremstilt ved fremgangsmåten som angitt i krav 1 til 9 i blanding med en kosmetisk tålbar bærer for topisk tilførsel.