NO790083L - Fremgangsmaate ved fremstilling av substituerte 1,4-cyclohexadien-carboxylsyrederivater - Google Patents

Description

Foreliggende oppfinnelse angår nye substituerte 1,4-cyclohexadiencarboxylsyrederivater som utviser nyttige farmako-logiske egenskaper.

Flere tidligere studier har vist at y-aminosmørsyre er en hovedinhiberingsoverføring i sentralnervesystemet som beskrevet av f.eks. S. Kranjevic, Physiological Reviews 54, 418 - 540

(1974), og at forstyrrelse i stimulerings- og inhiberings-samspillet kan lede til syklige tilstander slik som Huntington's sanktveistans (The Lancet, 9. november, 1974, s. 1122 - 1132), Parkinsonisme, schizofreni, epilepsi, depresjon, hyperkinese og maniske depresjonsforstyrrelser, E. Roberts, Biochem, Pharmacol. 23, 2637 - 2649 (1974). Visse forbindelser er kjent for å høyne hjernekonsentrasjoner av y-aminosmørsyre, f.eks. n-dipropylacetat (Simler et al., Biochem. Pharm., 22 1701 (1973) ved konkurrerende inhibering av y-aminosmørsyretransaminase førende til en reversibel effekt som varer i bare 2 timer. Også 4-aminotetrolinsyre (P. M. Beart et al., J. Neurochem. 19 1849 (1972)) kjent for å være en konkurrerende reversibel inhibitor til y-aminosmørsyre-transaminase .

US patentskrift 3 959 356 og 3 960 927 dekker henholds-vis acetyleniske og olefiniske derivater av aminosyrer som er irreversible inhibitorer til y-aminosmørsyretransaminase.

Det naturlige produkt gabaculin eller 5-amino-l,3-cyclohexadien-l-carboxylsyre er kjent for å være en selektiv irreverseibel inhibitor til y-aminosmørsyretransaminase in vitro og in vivo (Kobayashi et al., Tetrahedron letters 1976, 537;

R. Rando og F. W. Bangerter, Biochem. Biophys. Res. Comm. 76, 1276 (1977), og J. Am. Chem. Soc. 98, 6762 (1976), Kobayashi et al., FEBS, Lett. 76, 207 (1977), idet gabaculin virker som et substrat for transaminasen. Gabaculine forhindrer således forbruk av 4-aminosmørsyre, hvilket forbruk er forbundet med sentralnervesystemsykdommer slik som Parkinsons sykdom og epilepsi.

Det er nå funnet at forbindelser ifølge oppfinnelsen t har irreversible inhibitorer til y-aminosmørsyretransaminase og som utviser en bedre effekt enn gabaculine og visse andre kjente irreversible inhibitorer til y-aminosmørsyretransaminase, hvilket gjør forbindelsene særlig nyttige ved behandling av de ovenfor angitte sykdomstilstander.

Forbindelsene ifølge oppfinnelsen representeres-ved følgende generelle formel i:

hvori er hydrogen, alkylcarbonyl hvori alkyldelen har fra 1 til 4 carbonatomer og er rettkjedet eller forgrenet, alkoxycarbonyl hvori alkoxydelen har fra 1 til 4 carbonatomer og er rettkjedet eller forgrenet, eller radikalet hvori R^er hydrogen, en rettkjedet eller forgrenet alkylgruppe med fra 1 til 4 carbonatomer, benzyl eller p-hydroxybenzyl, og R2er hydroxy, en rettkjedet eller forgrenet alkoxygruppe med fra 1 til 8 carbonatomer, hvori hver av R^og R,- er hydrogen eller en rettkjedet eller forgrenet alkylgruppe med fra 1 til 4 carbonatomer eller radikalet

hvori Rg er hydrogen, en rettkjedet eller forgrenet alkylgruppe med fra 1 til 4 carbonatomer, benzyl eller p-hydroxybenzyl. De farmasøytisk akseptable salter av forbindelsene av generell formel

I er også innbefattet innen oppfinnelsens ramme.

Illustrative eksempler på rettkjedede lavere alkylgrupper med fra 1 til 4 carbonatomer er methyl, ethyl, n-propyl og n-butyl, og eksempler på forgrenede lavere alkylgrupper med fra 1 til 4 carbonatomer er isopropyl, isobutyl, og tert-butyl.

Illustrative eksempler på rettkjedede lavere alkoxygrupper med fra 1 til 4 carbonatomer er methoxy, ethoxy, n-propoxy og n-butoxy, og eksempler på forgrenede lavere alkoxygrupper med fra 1 til 4 carbonatomer er isopropoxy, isobutoxy og tert-butoxy.

Illustrative eksempler på rettkjedede eller forgrenede alkoxygrupper med fra 1 til 8 carbonatomer er methoxy, ethoxy, n-propoxy, isopropoxy, n-butoxy, tert-butoxy, neopentoxy, pentoxy, octyloxy, heptyloxy og- hexyloxy.

Illustrative eksempler på farmasøytisk akseptable salter av forbindelsene ifølge oppfinnelsen innbefatter ikke-toksiske syreaddisjonssalter dannet med uorganiske syrer slik som saltsyre, hydrobromsyre, svovelsyre og fosforsyre, og organiske syrer slik som trifluoreddiksyre, methansulfonsyre, salicylsyre, maleinsyre, malonsyre, vinsyre, sitronsyre og ascorbinsyrer, og ikke-toksiske salter dannet med uorganiske og organiske baser, slik som salter av alkalimetaller, f.eks. natrium, kalium og lithium, jordalkali-metaller, f.eks. calcim og magnesium, lette metaller fra gruppe HIA, f.eks. aluminium, organiske aminer slik som primære, sekundære eller tertiære aminer, f.eks. cyclohexylamin, ethylamin, pyridin, methylaminoethanol, ethanolamin og piperidin. Saltene av forbindelsene ifølge oppfinnelsen fremstilles på kjent måte.

Illustrative eksempler på forbindelser ifølge oppfinnelsen er følgende:

3-amino-l,4-cyclohexadien-carboxylsyre,

methyl eller ethyl 3-amino-l,4-cyclohexadiencarboxylat, N-methyl-3-amono-l,4-cyclohexadiencarboxamid,

N-ethyl-3-amino-l,4-cyclohexadiencarboxamid,

N-propyl-3-amino-l,4-cyclohexadiencarboxamid,

N,N-di-n-butyl-3-amino-l,4-cyclohexadiencarboxamid, methyl-3-(tert-butoxycarbonylamino)-1,4-cyclohexadien-carboxylat, 3-amino-l,4-cyclohexadiencarboxamid,

N-(3-amino-l,4-cyclohexadienyl)carbonylalanin, 3-acetamido-1,4-cyclohexadien-carboxylsyre og

3-alanylamino-l,4-cyclohexadien-carboxylsyre.

Foretrukne forbindelser ifølge oppfinnelsen er de hvori R-^er hydrogen eller alkylcarbonyl. En annen foretrukket utførel-sesform av foreliggende oppfinnelse er forbindelser hvori R£er hydroxy eller en rettkjedet eller forgrenet alkoxygruppe. Den mest foretrukne utførelsesform av oppfinnelsen er forbindelser hvori R^er hydrogen og R2er hydroxy, og salter derav.

Forbindelsene ifølge oppfinnelsen har et utall farma-kologiske anvendelser. Forbindelsene ifølge oppfinnelsen er nyttige som sedativer. Forbindelsene av generell formel I og farma-søytisk akseptable salter derav er nyttige som inhibitorer for y-aminosmørsyretransaminase hvilket fører til en økning i hjerne-konsentrasjon av y-aminosmørsyre hvilket gjør slike forbindelser nyttige ved behandling av forstyrrelser i sentralnervesystemfunk-sjonene bestående av ufrivillige bevegelser slik som Huntington's sanktveitsdans, Parkinsonisme, ekstrapyramidale effekter av lege-midler, f.eks. neuroleptica, anfallsforstyrrelser forbundet med epilepsi, alkoholavvenning og barbituratavvenning, psykose forbundet med schizofreni, depresjon og manisk depresjon og hyperkinese. Forbindelsene ifølge oppfinnelsen er også anvendbare som hypotermiske midler, myorelakserende midler, cholinerge midler, antibakterielle midler, anti-convulsive midler, analgesica, anorexigene midler, anti-fettsykemidler, beroligende midler, sedativer og sentralnervesystemstimulanter.

De sedative egenskaper til forbindelsene ifølge oppfinnelsen kan bestemmes ved måling av spontan motorisk aktivitet i gnagere ved de prosedyrer som er beskrevet av P. Dews. Brit.

J. Pharmacol. 8, 46 (1953) ved administrering av forbindelsen ved enten intravenøs, intraperitonalt eller oralt til mus eller rotter.

Forbindelsene av generell formel I's evne til å inhibe-re y-aminosmørsyretransaminase kan bestemmes ved in vitro eller in vivo målinger av y-aminosmørsyretransaminaseaktivitet. Eksem-pelvis kan y-aminosmørsyrekonsentrasjoner i hjernen hos mus og rotter bestemmes etter behandling med forbindelsen. Den y-amino-smørsyretransaminaseinhiberende effekt av forbindelsene av formel I kan også vises ved den beskyttende effekt av behandling av audio-gene anfall hos mus av DBA-stammen målt ved den generelle metode som er beskrevet av Simler et al., Biochem. Pharmacol. 22, 1701

(1973) som hppig anvendes som et bevis på antiepileptisk aktivitet.

Forbindelsene av generell formel I's evne.til å lindre reserpin ptosis kan vises ved den klassiske test beskrevet av B. Rubin et al., J. Pharmacol. 120, 125 (1957) som hyppig anvendes for å bestemme antidepressiv aktivitet.

Som ovenfor angitt er det funnet at forbindelsene iføl-ge oppfinnelsen gir visse fordeler i forhold til gabaculine som er en kjent inhibitor av y-aminosmørsyretransminaseved at forbindelsene ifølge oppfinnelsen er mere effektive inhibitorer for enzymet. Forbindelser ifølge oppfinnelsen inneholder også kon-jugerte dobbeltbindinger og forventes således å kompleksdanne mindre lett med macromolekyler slik som DNA eller RNA. Forbindelsene ifølge oppfinnelsen er særlig effektive til å nedsette y-aminosmørsyretransaminaseaktivitet og høyne y-aminosmørsyrekonsen-trasjoner i hjernen.

Forbindelsene ifølge oppfinnelsen kan administreres på forskjellige måter til den pasient som behandles for å oppnå den ønskedé•effekt. Forbindelsene kan administreres alene eller i form av et farmasøytisk preparat oralt, parenteralt, f.eks. intravenøst, intraperitonealt, subcutant eller topisk. Mengden av administrert forbindelse vil variere over et vidt område og kan være en hvilken som helst effektiv mengde. Avhengig av den pasient som behandles, den tilstand som skal behandles og admi-nistreringsmåte vil den effektivé mengde av den administrerte forbindelse variere fra 0,1 mg/kg til 150 mg/kg kroppsvekt pr. enhetsdose, og vil fortrinnsvis være 10 mg/kg til 100 mg/kg kroppsvekt pr. enhetsdose. En typisk enhetsdose kan f.eks. være en tablett inneholdende fra 10 til 200 mg av en forbindelse av formel I som kan administreres til pasienten fra 1 til 4 ganger daglig for å oppnå den ønskede effekt.

Som angitt her menes med uttrykket pasient varmblodige dyr slik som pattedyr, f.eks. katter, hunner, rotter, mus, mars-vin, hester, kveg og sauer.

De faste enhetsdoseformer kan være av vanlig type. Således kan den faste form være en kapsel som kan være den van lige gelatintype inneholdende en ny forbindelse ifølge oppfinnelsen og en bærer, f.eks. smøremidler og inerte fyllstoffer slik som lactose, sucrose og maisstivelse. I en annen utførelsesform tabletteres de nye forbindelser med vanlige tablettbaser slik som lactose, sucrose eller maisstivelse i kombinasjon med bindemid-ler slik som acacia, maisstivelse eller gelatin, oppbrytende midler slik som maisstivelse, potetstivelse eller alginsyre, og et smøremiddel slik som stearinsyre eller magnesiumstearat.

For parenteral administrering kan forbindelsene administreres som injiserbare doser av en løsning eller suspensjon av forbindelsen i et fysiologisk akseptabelt fortynningsmiddel med farmasøytisk bærer som kan være en steril væske slik som vann og olje med eller uten tilsetning av et smøremiddel og andre farma-søytisk akseptable hjelpestoffer. Illustrative eksempler på oljer som kan anvendes i disse preparater er petroleumoljer, ani-malsk, vegetabilsk eller syntetiske oljer, f.eks. peanøttolje, soyabønneolje og mineralolje. Generelt foretrekkes vann, fysiologisk saltvann,vandig dekstrose og beslektede sukkerløsninger, ethanol og glycoler slik som propylenglycol eller polyethylengly-col som væskebærere for injiserbare løsninger.

Forbindelsene kan deretter administreres i form av en depotinjeksjon eller implantert preparat som kan formuleres på

en slik måte at det muliggjøres en forsinket frigivelse av den aktive bestanddel. Den aktive bestanddel kan presses til pellets eller små sylindere og implanteres subcutant eller intramuskulært som depotinjeksjoner eller implantanter. Implantanter kan anven-de inerte materialer slik som bionedbrytbare polymerer eller syntetiske siliconer.

Illustrative eksempler på farmasøytiske preparater inneholdende forbindelsene ifølge oppfinnelsen er angitt i det etterfølgende.

En del av hvetestivelsen anvendes for å fremstille en granulert stivelsespasta som sammen med den gjenværende hvetestivelse og lactosen granuleres, siktes og blandes med den aktive bestanddel (a) og magnesiumstearatet. Blandingen presses til tabletter som hver veier 150 mg.

En illustrerende sammensetning for paranteral injeksjon er følgeride, hvori mengdene er på vekt til volumbasis:

Komposisjonen fremstilles ved oppløsning av den aktive bestanddel (a) og tilstrekkelig natriumklorid i vann for injeksjon for å gjøre løsningen isotonisk. Komposisjonen kan utleveres i en enkel ampulle inneholdende 50 mg aktiv bestanddel for flerdbse-ring, eller i 20 ampuller for enkeltdosering.

En illustrerende komposisjon for harde gelatinkapsler er som følger:

Komposisjonen fremstilles ved å føre de tørre pulvere av (a) og (b) gjennom en fin sikt og blande disse godt. Pulveret fylles deretter i harde gelatinkapsler nr. 0 til en nettofylling på 135 mg pr. kapsel.

Fremstillingen av forbindelsene av generell formel I hvori er hydrogen og R2er hydroxy illustreres ved etterføl-gende reaksjonsskjerna:

I det ovenfor angitte reaksjonsskjema betegner R en rettkjedet eller forgrenet alkoxygruppe med fra 1 til 6 carbonatomer, benzyloxy, p-methoxybenzyloxy eller 2,4-dimethoxybenzyloxy, Ar er fenyl eller p-methoxyfenyl, HA betegner en uorganisk syre slik som saltsyre, hydrobromsyre eller trifluoreddiksyre, og t-Bu er tertiært butyl. Illustrerende eksempler på rettkjedede eller forgrenede alkoxygrupper med fra 1 til 6 carbonatomer som R kan betegne er methoxy, ethoxy, n-propoxy, isopropoxy, n-butoxy, tert-butoxy, n-pentoxy og n-hexyloxy. 4-fenylsulfinyl-2-cyclohexencarboxylsyreesteren, forbindelse (1) omsettes med sølvcyanat i nærvær av fast jod i et løsningsmiddel slik som methylenklorid, kloroform, carbontetraklorid, tetrahydrofur.an eller diethylether ved -10 til 25° C i 3 til 24 timer under dannelse av 2-jod-3-isocyano-4-fenylsulfinyl-carboxylsyreestere, forbindelse (2) til hvilken det tilsettes benzylalkohol eller p-methoxybenzylalkohol under omrøring i 6 - 18 timer eventuelt i nærvær av en katalysator, slik som diiso- butyltinndilaurat eller benzyloxylithium eller p-methoxybenzyl-oxylithium under dannelse av benzyl eller p-methoxybenzylcarma-raat, forbindelse (3). Carbamatet behandles med 1 ekvivalent

av en hindret base slik som triethylamin, diazabicyclooctan, diazabicyclononen, eller diazabicycloundecen, i et løsnings-middel slik som aceton, ether, tetrahydrofuran, methylenklorid, kloroform eller dioxan ved ca. 25° C i 1 til 4 timer under dannelse av det dehydrodejoderte derivat, forbindelse (4) som oppvarmes til 6 0 - 14 0° C i ca. 1/2 time til 24 timer i et løsningsmiddel slik som klorerte hydrocarboner, f.eks. carbontetraklorid eller atomatiske hydrocarboner slik som xylen eller toluen under dannelse av 1,4-dienderivatet, forbindelse (5). Dienderivatet behandles med overskudd syre, f.eks. saltsyre, hydrobromsyre eller trifluoreddiksyre, hvor den sistnevnte foretrekkes, i overskudd av anispl eller overskudd av 1,3-dimethoxybenzen under dannelse av syreaddisjonssaltet (6). Når R i syreaddisjonssaltet er forskjellig fra tert-butoxy, benzyloxy, p-methoxybenzyloxy eller 2,4-dimethoxybenzyloxy omsettes syreaddisjonssaltet eller 3-amino-l,5-cyclohexadien-carboxylsyreestersalt forbindelse(6) med 2-tert-butoxycarbonyloxyimino-2-fenylacetonitril eller tert-butylazidoformiat i nærvær av en base, slik som et alkylamin, f.eks. triethylamin, natriumhydroxyd eller kaliumhydroxyd i et løsnings-middel slik som ethere, fe.ks. diethylether, tetrahydrofuran eller dioxan, dimethylformamid, klorerte hydrocarboner slik som methylenklorid eller kloroform ved ca. 25° C i 1 - 24 timer etterfulgt av alkalisk hydrolyse og deretter syrehydrolyse, og når den fri base ønskes, behandles basen etter kjente metoder innen faget. Alkalihydrolyse kan utføres f.eks. ved behandling med natriumhydroxyd eller kaliumhydroxyd i 1 - 3 timer ved ca. 25° C, eller med trimethylsilyljodid i carbontetraklorid eller kloroform^ ved ca. 25 - 50° C i 4 - 40 timer under dannelse av carbamatsyren, forbindelse (8). Syrehydrolyse av carbamatsyren kan oppnås f.eks. ved behandling med saltsyre, hydrobromsyre eller trifluoreddiksyre i en lavere alkohol i 1 - 20 timer ved temperaturer opp til tilbakeløpstempeaturen. Når R i estercarbamatet (5) er ter-tiær butoxy- benzyloxy, p-methoxybenzyloxy eller 2,4-dimethoxy-. benzyloxy kan derivatet behandles med trifluoreddiksyre i nærvær av anisol og deretter overføres direkte til en ionebytterharpiks under dannelse av 3-amino-l,4-cyclohexadiencarboxylsyrederivatet av formel I.

For å oppnå 4-fenylsulfinyl-2-cyclohexencarboxylsyre-estere, forbindelse (1), fremstilles de tilsvarende estere av 2-trimethylsilyloxy-3-cyclohexen-carboxylsyre ved omsetning av tri-methylsilyloxybutadien med et egnet acrylat ved den generelle prosedyre som er beskrevet av P. Cazean and E. Frainnet, Bull, Soc. Chim. Fr. 1972, s. 1658, hvoretter etheren splittes, f.eks. ved behandling med 2M saltsyre i methanol il - 10 minutter ved ca. 25° C, eller ved behandling med en fortynnet base slik som 0,5M natriumhydroxyd i vandig methanol (1:1) i 5 - 10 minutter ved ca. 25° C. Den således erholdte hydroxyester behandles deretter med benzensulfenylklorid i nærvær av en base slik som triethylamin i methylenklorid, under dannelse av 4-fenylsulfinyl-derivatet. Andre hindrede aminbaser slik som diazabicyclooctan, diazabicyclononen eller diazabicycloundecen kan anvendes, og andre egnede løsningsmidler innbefattet kloroform, ether, tetrahydrofuran og benzen. Reaksjonstiden varierer fra 5 minutter til 1 time ved en temperatur på 0 - 25° C. Alternativt kan hydroxy-esteren omdannes til det tilsvarende natriumalkoxyd ved behandling med natriumhydrid i ether eller tetrahydrofuran etterfulgt av omsetning med benzensulfenylklorid som her beskrevet.

Forbindelsene av generell formel I hvori R2er en rettkjedet eller forgrenet alkoxygruppe med fra 1 til 8 carbonatomer, fremstilles fra det tilsvarende derivat hvori R2 er hydroxy ved omsetning med en alkohol av formelen R^OH hvori R7er en rettkjedet eller forgrenet alkylgruppe med fra 1 til 8 carbonatomer, slik som methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, tert-butyl, n-pentyl, neopentyl, eller n-hexyl, mettet med HCl-gass ved ca. 25° C i 12 - 36 timer.

Forbindelsene av generell formel I hvori R2er NR^Rj-hvori hver av R^og R,- er hydrogen eller en lavere alkylgruppe med fra 1 til 4 carbonatomer, fremstilles ved behandling av et funksjonelt derivat av den tilsvarende forbindelse hvori R2er hydroxy, f.eks. et syrehalogenid slik som syrekloridet eller et syreanhydrid, og R-^har den i formel I angitte betydning, med et overskudd av et amin av formelen HNR^R^hvori R^ og R,- har de ovenfor angitte betydninger, forutsatt at enhver fri aminogruppe hensiktsmessig beskyttes. Reaksjonen utføres i et løsningsmid-del slik som methylenklorid, kloroform, dimethylformamid eller ethere, slik som tetrahydrofuran og dioxan eller benzen ved ca.

25° C i 1 - 4 timer. Egnede aminer er ammoniakk, eller en forbindelse som er en potensiell kilde for ammoniakk slik som hexa-methylentetramin, primære aminer, f.eks. methylamin, ethylamin eller m-propylamin, og sekundære aminer,, f.eks. dimethylamin, diethylamin eller di-n-butylamin. Etter reaksjonen fjernes de aminbeskyttende grupper ved behandling med syre, f.eks. trifluoreddiksyre eller hydrogenbromd i dioxan.

Forbindelsene av generell formel I hvori R2er

hvori Rg er hydrogen, en rettkjedet eller forgrenet lavere alkylgruppe med fra 1 til 4 carbonatomer, benzyl eller p-hydroxybenzyl, fremstilles ved omsetning av et syreanhydrid av det tilsvarende derivat hvori R2er hydroxy, og R-^har den i formel I angitte betydning, forutsatt at enhver fri aminogruppe er beskyttet med en egnet blokkerende gruppe slik som benzyloxycarbonyl eller tert-butoxycarbonyl, med en forbindelse av formelen hvori Rg har den ovenfor angitte betydning og Rg er en lavere alkylgruppe slik som methyl eller ethyl i et etherløs-ningsmiddel slik som tetrahydrofuran eller dioxan, i nærvær av en base slik som triethylamin ved 0 - 50° C i 1 - 24 timer etterfulgt av syrehydrolyse, f.eks. med trifluoreddiksyre eller hydro-genbromid i dioxan, og basehydrolyse under anvendelse av f.eks. natriumhydroxyd eller natriumborat ved en temperatur på 0 - 25° C i 1/2 time til 6 timer. Forbindelsene av generell formel I hvori er alkylcarbonyl hvori alkyldelen har fra 1 til 4 carbonatomer og er rettkjedet eller forgrenet og hvor R2er hydroxy eller en"alkoxygruppe med fra 1 til 8 carbonatomer, fremstilles ved behandling av det tilsvarende derivat hvori R-^ er hydrogen, med et syrehalogenid av formelen hvori halo er et halogenatom slik som klor eller brom, og Rg er en rettkjedet eller forgrenet alkylgruppe med fra 1 til 4 cårgonatomer, slik som methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl og tert-butyl, eller et egnet syreanhydrid, i vann i nærvær av en base slik som natriumhydroxyd eller natriumborat, eller i diklormethan i nærvær av en aminbase slik som triethylamin ved en temperatur på 0 til 25° C i 1/2 time til 24 timer. Forbindelsene av generell formel I hvori R-^er alkoxycarbonyl hvori alkoxydelen er rettkjedet eller forgrenet og har fra 1 til 4 carbonatomer, fremstilles ved behandling av det tilsvarende derivat hvori R_ er en lavere alkoxygruppe slik som methoxy eller ethoxy, og hvor R^er hydrogen, med et alkylhalogen-formiat av formelen hvori R^q er en rettkjedet eller forgrenet alkylgruppe med fra 1 til 4 carbonatomer slik som methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl eller tert-butyl, og halo er halogen slik som klor eller brom, i vann i nærvær av en base slik som natriumhydroxyd eller natriumborat, eller i diklormethan i nærvær av en aminbase slik som triethylamin, ved en temperatur på 0 - 25° C i 1/2 time til 6 timer, etterfulgt av basehydrolyse under anvendelse av f.eks. natriumhydroxyd eller natriumborat ved en temperatur på 0 til 25° C i 1/2 time til 6 timer. Forbindelsene av generell formel I hvori er hvori R^er hydrogen, en rettkjedet eller forgrenet alkylgruppe med fra 1 til 4 carbonatomer, benzyl eller p-hydroxybenzyl, fremstilles ved behandling av det tilsvarende derivat hvori R2er en lavere alkoxygruppe slik som methoxy eller ethoxy, og R^er hydrogen, med en syre av formelen

eller et anhydrid

derav, hvori aminogruppen er beskyttet med en egnet blokkerende gruppe slik som benzyloxycarbonyl eller tert-butoxycarbonyl, og hvor R^har den ovenfor angitte betydning, i en ether slik som tetrahydrofuran eller dioxan, eller et klorert hydrocarbon slik som methylenklorid eller kloroform, og i nærvær av et dehydratiseringsmiddel slik som dicyclohexylcarbodiimid når den fri syre anvendes, ved en temperatur på 0 - 35° C i 1 - 12 timer, etterfulgt av basehydrolyse, f.eks. under anvendelse av natriumhydroxyd eller natriumborat, og syrehydrolyse under anvendelse av f.eks. trifluoreddiksyre eller HBr-/dioxan ved en temperatur på 0 - 25°C i 1/2 til 6 timer.

De etterfølgende eksempler illustrerer oppfinnelsen.

Eksempel 1

3- amino- l, 4- cyclohexadieri- carboxylsyre

En løsning av 2 g (10 mmol) methyl-2-trimethylsilyloxy-2-cyclohexen-carboxylat i 10 ml methanol ble behandlet med IN saltsyre i 1 time ved 25° C og deretter konsentrert ved redusert trykk og ekstrahert med ether. Den organiske løsning ble tørket- over magnesiumsulfat og konsentrert. Det resulterende residuum ble løst i 20 ml diklormethan og behandlet med 1,0 g (10 mmol) triethylamin etterfulgt av 1,44 g (10 mmol) fenylsul-fenylklorid. Etter 1 time ved 25° C ble løsningen vasket med vann, tørket og konsentrert under dannelse av methyl-4-fenyl-sulf inyl-2-cyclohexencarboxylat .

Til 2,6 g (10 mmol) methyl-4-fenylsulfinyl-2-cyclo-hexencarboxylat i 20 ml diklormethan ved 0° C ble tilsatt.2 g (13 mmol) sølvcyanat etterfulgt av 2,5 g (10 mmol) jod i små porsjoner. Blandingen ble omrørt ved 0° C il time ved 25° C i 4 timer og deretter filtrert gjennom celite. Løsningen ble konsentrert hvoretter 1,4 g (10 mmol) p-methoxybenzylalkohol ble tilsatt. Blandingen ble omrørt i ca. 16 timer ved 25° C hvoretter 50 ml aceton ble tilsatt etterfulgt av 1,1 g (10 mmol) diazabicyclooctan. Etter 2 timer ved 25° C ble løsningsmidlet fordampet, og residuet ble tatt opp i ether og vann. Den organiske fase ble tørket og fordampet under dannelse av et residuum som ble tatt opp i toluen og oppvarmet til tilbakeløpstempeaturen i 4 5imer, hvoretter løsningsmidlet ble fjernet under redusert trykk og residuet kromatografert på silicagel under dannelse av methyl-3-(p-methoxybenzyloxycarbonylamino)-1,4-cyclohexadiencarboxylat.

En løsning av 64 0 mg (2 mmol) methyl-3-(p-methoxyben-zyloxycarbonylamino)-1,4-cyclohexadiencarboxylat i 5 ml anisol ble behandlet med 5 ml trifluoreddiksyre i 1 time ved 0° C, hvoretter løsningsmidlet ble fjernet i vakuum og det resulterende oljeresiduum ble behandlet med ether under dannelse av et bunnfall som ble oppsamlet under dannelse av methyl-3-amino-l,4-cyclohexadien-carboxylat-trifluoracetat. En løsning av 500 mg (2,3 mmol) av amintrifluoracetatet i 2 ml dimethylformamid ble behandlet med 300 mg (2,3 mmol) tert-butylazidoformiat i ca. 16 timer ved 25° C, hvoretter løsningsmidlet ble fjernet ved redu sert trykk. Residuet ble tatt opp i ether og vasket med vann. Etherløsningen ble tørket og fordampet under dannelse av methyl-3-tert-butoxycarbonylamino-l,4-cyclohexadiencarboxylat, av hvilket 4 00 mg ble tatt opp i 2 ml methanol inneholdende 200 mg natriumhydroxyd og 1,5 ml vann og omrørt ved 25° C i 2 timer og deretter surgjort med IN HC1. Det resulterende bunnfall ble oppsamlet' (200 mg) og oppløst i 4 ml methanol. Løsningen ble behandlet med 2 ml 2N HC1 ved 25° C i 24 timer og ble deretter fortynnet med aceton under dannelse av 3-amino-l,4-cyclohexadien-carboxylsyre .

Eksempel 2

Ethyl- 3- amino- l, 4- cyclohexadiencarboxylat- hydroklorid

2 00 mg 3-amino-l,4-cyclohexadien-carboxylsyre-hydroklorid ble løst i ethanol inneholdende vannfri HC1, og den resulterende løsning ble omrørt over natten ved 0° C. Fordampning av løsningsmidlet ga ethyl-3-amino-l,4-cyclohexadien-carboxylat-hydroklorid.

Eksempel 3

N- propyl- 3- amino- l, 4- cyclohexadiencarboxamid- hydroklorid

En løsning av 240 mg (1 mmol) 3-tert-butoxy-carbonyl-amino-1,4-cyclohexadien-carboxylsyre i 5 ml diklormethan ble behandlet med 202 mg (2 mmol) triethylamin og 94 mg (1 mmol) methylklorformiat. Etter 30 minutter ved 25° C ble løsningen behandlet med 60 mg (1 mmol) n-propylamin i 1 time ved 25° C, hvoretter løsningen ble fortynnet med diklormethan, vasket med vann, tørket og fordampet. Residuet ble omrørt i 18 timer i 7 ml methanol og 3,5 ml 5 %-ig vandig HC1. Fordampning ga N-propyl-3-amino-l,4-cyclohexadiencarboxamid-hydroklorid.

Eksempel 4

N-( 3- amino- l, 4- cyclohexadienyl) carbonylalanin- hydroklorid

En løsning av 240 mg (1 mmol) 3-tert-butoxycarbonyl-amino-1,4-cyclohexadien-carboxylsyre og 5 ml diklormethan ble behandlet med 202 mg (2 mmol) triethylamin og 94 mg (1 mmol) methylklorformiat. Etter 30 minutter ved 25° C ble løsningen behandlet med 103 mg (1 mmol) alaninmethylester og holdt ved 25° C i 1 time hvoretter løsningen ble vasket med vann, tørket og konsentrert. Residuet ble behandlet med 3 ml methanol og 120 mg natriumhydroxyd i 2 ml vann i 3 timer ved 25° C og deretter surgjort og ekstrahert med diklormethan. Den organiske fase ble tør-ket og konsentrert. Residuet ble behandlet med 7 ml methanol inneholdende 5 % HC1 i 18 timer ved 25° C. Fordampning ga N-(3-amino-1,4-cyclohexadienyl)carbonylalanin-hydroklorid.

Eksempel 5

3- acetamido- l, 4- cyclohexadien- carboxylsyre

En løsning av 190 mg (1 mmol) methyl-3-amino-l,4-cyclohexadiencarboxylat-hydroklorid i 5 ml diklormethan ble behandlet med 78 mg (1 mmol) acetylklorid og 202 mg (2 mmol) triethylamin i 1 time ved 25° C, hvoretter løsningen ble vasket med vann, tørket og konsentrert. Residuet ble behandlet ved 25° C med 3 ml methanol og 100 ml natriumhydroxyd i 200 ml vann i 3 timer, og deretter overført til fast materiale og ekstrahert med diklormethan. Den organiske fase ble tørket og fordampet under dannelse av 3-acetamido-1,4-cyclohexadien-carboxylsyre.

Eksempel 6

3- alanylamino- l, 4- cyclohexadien- carboxylsyre- hydroklorid

En løsning av 188 mg (1 mmol) tert-butoxycarbonylalanin i 5 ml diklormethan ble behandlet med 101 ml (1 mmol) triethylamin og 94 mg (1 mmol) methylklorformiat og deretter tilsatt til en løsning av 190 mg (1 mmol) methyl-3-amino-l,4-cyclohexadiencarboxylat-hydroklorid og 101 mg (1 mmol) triethylamin i 5 ml diklormethan. Etter 1 time ved 25° C ble løsningen vasket med vann, tørket og fordampet. Residuet ble behandlet i 3 timer ved 25° C med 3 ml methanol, 100 mg natriumhydroxyd og 2 ml vann, og deretter surgjort og ekstrahert med diklormethan. Den organiske fase ble tørket og konsentrert. Residuet ble behandlet med 7 ml methanol inneholdende 3,5 ml 5 %-ig HC1 i 18 timer ved 25° C og deretter konsentrert under dannelse av 3-alanylamino-l,4-cyclohexadien-carboxylsyre-hydroklroid.

Eksempel 7-

N- propyl- 3- acetamido- l, 4- cyclohexadiencarboxamid

En løsning av 180 mg (1 mmol) 3-acetamido-l,4-cyclohexadien-carboxylsyre i 5 ml diklormethan ble behandlet med 202 mg (2 mmol) triethylamin og 94 mg (1 mmol) methylklorformiat. Etter 30 minutter ved 25° C ble løsningen behandlet med 60 mg (1 mmol) n-propylamin i 1. time ved 25° C, hvoretter løsningen ble fortynnet med diklormethan, vasket med vann, tørket og fordampet under dannelse av N-propyl-3-acetamido-l,4-cyclohexadien-carboxamid.

Eksempel 8

N- propyl- 3-( 2- aminopropionamido)- 1, 4- cyclohexadien- carboxamid-trifluoracetat

En løsning av 310 mg (1 mmol) 3-(2-tert-butoxy-carbonyl-aminopropionylamido)-1,4-cyclohexadien-carboxylsyre i 5 ml diklormethan ble behandlet med 2 02 mg (2 mmol) triethylamin og 94 mg (1 mmol) methylklorformiat. Etter 30 minutter ved 25° C ble løsningen behandlet medj 60 mg (1 mmol) n-propylamin i 1 time ved 25° C, hvoretter løsningen ble fortynnet med diklormethan og vasket med vann. Den organiske fase ble tørket og konsentrert under dannelse av et residuum som ble behandlet med 2 ml trifluoreddiksyre i 1 time ved 25° C og deretter fortynnet med vannfri ether. Det utfelte trifluoracetatsalt ble filtrert fra under dannelse av N-propyl-3-(2-aminopropionamid)-1,4-cyclohexadiencarboxamid-trifluoracetat.

Eksempel 9

N-( 2- propionsyre)- 3- acetamido- l, 4- cyclohexadien- carboxamid

En løsning av 180 mg (1 mmol) 3-acetamido-l,4-cyclohexadien-carboxylsyre i 5 ml diklormethan ble behandlet med 202 mg (2 mmol) trietyylamin og 94 mg (1 mmol) methylklorformiat. Etter 35 minutter ved 25° C ble løsningen behandlet med 103 mg

(1 mmol) alaninmethylester og holdt ved 25° C i 1 time, hvoretter løsningen ble vasket med vann, tørket og konsentrert. Det resulterende residuum ble behandlet med 3 ml methanol og 120 mg natriumhydroxyd i 2 ml vann i 3 timer ved 25° C, og ble deretter surgjort og ekstrahert med diklormethan. Den organiske fase ble tørket og konsentrert under dannelse av N-(2-propionsyre)-3-acetamido-1,4-cyclohexadiencarboxamid.

Eksempel 10

N-( 2- propionsyre)- 3-( 2- aminopropionamido)- 1, 4- cyclohexadiencarboxamid- trif luoracetat

En løsning av 310 mg (1 mmol) 3-(2-tert-butoxycarbonyl-aminopropionylamido ) -1 , 4-cyclohexadien-carboxylsyre i 5 ml di klormethan ble behandlet med 202 mg (2 mmol) triethylamin og 94 mg (1 mmol) methylklorformiat. Etter 30 minutter ved 25° C ble løsningen behandlet med 103 mg (1 mmol) alaninmethylester og holdt ved 25° C i 1 time hvoretter løsningen ble vasket med vann, tørket og konsentrert. Det resulterende residuum ble behandlet med 3 ml methanol og 12 0 mg natriumhydroxyd i 2 ml vann i- 3 timer ved 25° C og ble deretter surgjort og ekstrahert med diklormethan.. Den organiske fase ble tørket og konsentrert under dannelse av et residuum som ble behandlet med 2 ml trifluoreddiksyre i 1 time ved 25° C og ble deretter fortynnetmed vannfri ether. Det utfelte trifluoracetatsalt ble filtrert fra under dannelse av N-(2-propionsyre)-3-(2-aminopropionamido)-1,4-cyclohexadiencarboxamid-trifluoracetat.

De individuelle optiske isomerer av generell formel I innbefattes innen oppfinnelsens ramme. Disse kan fremstilles fra racematet under anvendelse av (+) eller (-) binafthylfosforsyre som beskrevet av R.Viterbo et al., Tetrahedron Letters 48, 4617 - 4620 (1971) og i US patentskrift 3 848 030. Andre oppløsningsmid-ler slik som (+) kamfer-10-sulfonsyre kan også anvendes.

Claims (7)

1. Forbindelse av formelen

hvori R-^er hydrogen, alkylcarbonyl hvori alkyldelen har fra 1 til 4 carbonatomer og er rettkjedet eller forgrenet, alkoxycarbonyl hvori alkoxydelen har fra 1 til 4 carbonatomer og er rettkjedet eller forgrenet, gruppen

hvori R^er hydrogen, en rettkjedet elle forgrenet alkylgruppe med fra 1 til 4 carbonatomer, benzyl eller p-hydroxybenzyl, og hvor R_ er hydroxy, en rettkjedet eller forgrenet alkoxygruppe med fra 1 til 8 carbonatomer, -NR^R^hvori hver av R^og R^er hydrogen eller en rettkjedet eller forgrenet alkylgruppe med fra 1 til 4 carbonatomer, eller gruppen

hvor Rg er hydrogen, en rettkjedet eller forgrenet alkylgruppe med fra 1 til 4 carbonatomer, benzyl eller p-hydroxybenzyl, og farma-søytisk akseptable salter og individuelle optiske isomerer derav.

2. Forbindelse ifølge krav 1,karakterisertved at R^er hydrogen eller alkylcarbonyl.

3. Forbindelse ifølge krav 1,karakterisertved at R2er hydroxy eller en rettkjedet eller forgrenet alkoxygruppe .

4. Forbindelse ifølge krav 1,karakterisertved at denne er 3-amino-l,4-cyclohexadiencarboxylsyre og farmasøy-tisk akseptable salter derav.

5. Forbindelse ifølge krav 4,karakterisertved at denne er 3-amino-l,4-cyclohexadien-carboxylsyre-tri-fluoracetat.

6. Fremgangsmåte for fremstilling av en forbindelse ifølge krav 1,karakterisert vedat (a) når er hydrogen og R2er hydroxy, at en carbamat- ester av formelen

hvor R er en rettkjedet eller forgrenet alkoxygruppe med fra 1 til 6 carbonatomer, benzyloxy, p-methoxybenzyloxy eller 2,4-dimethoxybenzyloxy og Ar er fenyl eller p-methoxyfenyl, behandles med overskudd av syre i overskudd av anisol eller 1,3-dimethoxybenzen, og når R er forskjellige fra trimethylsilyloxy, tert-butoxy ,'benzyloxy, p-methoxybenzyloxy eller 2,4-dimethoxybenzyloxy, at det således dannede 3-amino-l,4-cyclohexadien-carboxyl-syreesterderivat omsettes med tert-butoxy-carbonylimino-2-fenyl-acetonitril eller tert-butylazidoformiat i nærvær av en base i et egnet løsningsmiddel ved 25° C i 1 - 24 timer etterfulgt av alkalihydrolyse og deretter syrehydrolyse, og behandling med base når den fri base ønskes, eller når R er trimethylsilyloxy, tert-butoxy, benzyloxy, p-methoxybenzyloxy eller 2,4-dimethoxybenzyloxy, at 3-benzyloxycarbonylamino-l,5-cyclohexadiencarboxylsyre-esteren behandles med trifluoreddiksyre i anisol, hvoretter pro-duktet overføres til en ionebytterharpiks, (b) når R2er en rettkjedet eller forgrenet alkoxygruppe med fra 1 til 8 carbonatomer, at det- tilsvarende derivat hvori R2er hydroxy, omsettes med en alkohol av formel-R^OH hvori R^er en rettkjedet eller forgrenet alkylgruppe med fra 1 til 8 carbonatomer, mettet med HCl-gass ved 25° C i 12 - 3 6 timer, (c.) når R2er -NR4R5#at et syrehalogenid eller anhydrid av det tilsvarende derivat hvori R2er hydroxy og R-^har den i krav 1 angitte betydning, forutsatt at en hver fri aminogruppe hensiktsmessig er beskyttet, behandles med et overskudd av et amin av formelen HNR^R^hvor R4og R^ har de i krav 1 angitte betydninger, i et egnet løsningsmiddel ved 25° C i 1 til 4 timer, (d) når R2er

at et syreanhydrid av det til- svarende derivat hvori R2er hydroxy og R1har den i Krav x angitte betydning, forutsatt at enhver fri aminogruppe er hensikts-, messig beskyttet, omsettes med en forbindelse av strukturen

hvori Rrhar den i krav 1 angitte betydning, og hvor Rg er lavere alkyl, i et egnet løsningsmiddel ved 0-50 o C i 1 - 24 timer, etterfulgt av syre og basehydrolyse, (e) når Rx er alkylcarbonyl hvori alkyldelen er rettkjedet eller forgrenet og har fra 1 til 4 carbonatomer og R2er hydroxy, at det tilsvarende derivat hvori R-^ er hydrogen, behandles med et syrehalogenid av formelen

hvori halo er et halogenatom og Rg er en rettkjedet eller forgrenet alkylgruppe med fra 1 til 4 carbonatomer, eller et egnet syreanhydrid, i vann eller i diklormethan i nærvær av en base ved 0 - 25° C i 1/2 til 24 timer, (f) når R^ er alkoxycarbonyl hvori alkoxydelen er rettkjedet eller forgrenet og har fra 1 til 4 carbonatomer, at det tilsvarende derivat hvori R-^ er hydrogen og R2er en lavere alkoxygruppe, behandles med et alkylhaloformiat av formelen

hvori halo er et halogenatom og R1Q er en rettkjedet eller forgrenet alkylgruppe med fra 1 til 4 carbonatomer, i vann eller i diklormethan i nærvær av en base ved 0 - 25° C i 1/2 til 6 timer, (g) når R^er

hvori R., har den i krav 1 angitte betydning, at det tilsvarende derivat hvor er hydrogen og R2er en rettkjedet eller forgre net alkoxygruppe med fra 1 til 8 carbonatomer, behandles med en syre av formelen

eller et anhydrid derav, hvori aminogruppen er hensiktsmessig beskyttet og R^har den ovenfor angitte betydning i et egnet løs-ningsmiddel og i nærvær av et dehydratiseringsmiddel når den fri syre anvendes, ved 0 - 35° C i 1 - 12 timer etterfulgt av syre og basehydrolyse, og (h) når et farmasøytisk akseptabelt salt ønskes, at den således erholdte forbindelse omsettes med en egnet farmasøytisk akseptabel syre eller base.

7. Fremgangsmåte for fremstilling av en forbindelse ifølge krav 1,karakterisert vedat (a) når er hydrogen og R2er hydroxy, at en 4-fenylsul-finyl-2-cyclohexencarboxylsyreester av formelen

hvori R er en rettkjedet eller forgrenet alkoxygruppe med fra 1 til 6 carbonatomer, benzyloxy, p-methoxybenzyloxy eller 2,4-dimethoxybenzyloxy, omsettes med sølvcyanat i nærvær av fast jod i et egnet løsningsmiddel ved -20 - 25° C i 3 - 24 timer, at den således dannede 2-jod-3-isocyano-4-fenylsulfinylcyclohexancar-boxylsyreester behandles med benzylalkohol eller p-methoxybenzylalkohol, eventuelt i nærvær av en egnet katalysator, under dannelse av det tilsvarende 3-benzyl eller 3-p-methoxybenzylcarbamat som behandles med 1 ekvivalent av en hindret base i et egnet løsnings-middel i 1 - 4 timer ved 25° C, hvoretter det således dannede dehydrodejoderte derivat oppvarmes til 60 - 140° C i 1/2 til 24 timer i et egnet løsningsmiddel under dannelse av 1,4-dienderi-vat som behandles med overskudd syre i overskudd av anisol eller overskudd av 1,3-dimethoxybenzen, og når R er forskjellig fra trimethylsilyloxy, tert-butoxy, benzyloxy, p-methoxybenzyloxy eller 2,4-dimethoxybenzyloxy, at det således dannede 3-amino-l,4-cyclohexadiencarboxylsyreesterderivat omsettes med tert-butoxy-carbonylimino-2-fenylacetonitril eller tert-butylazidoformiat i nærvær av en base i et egnet løsningsmiddel ved 25° C i 1 - 24 timer, etterfulgt av alkali og syrehydrolyse, og behandling med base når den fri base ønskes, eller når R er trimethylsilyloxy, tert-butoxy, benzyloxy, p-methoxybenzyloxy eller 2,4-dimethoxybenzyloxy, at carbamatesteren behandles med trifluoreddiskyre etterfulgt av en sur ionebytterharpiks, (b) når R., er en rettkjedet eller forgrenet alkoxygruppe med fra 1 til 8 carbonatomer, at det tilsvarende derivat hvori R2er hydroxy, omsettes med en alkohol av formelen R^OH hvor R^ er en rettkjedet eller forgrenet alkylgruppe med fra 1 til 8 carbonatomer, mettet med HCl-ga-s ved 25° C i 12 - 36 timer, (c) når R2er -NR^R^, at et syrehalogenid eller anhydrid av det tilsvarende derivat hvori R2er hydroxy og R-^ har den i krav 1 angitte betydning, forutsatt at enhver fri aminogruppe er egnet beskyttet, behandles med et overskudd av et amin av formelen HNR^R^, hvori R^og R^har de i krav 1 angitte betydninger, i et egnet løsningsmiddel ved 25° C i 1 - 4 timer, (d) når R2er

at et syreanhydrid av det til svarende derivat hvori R2er hyroxy og R-^har den i krav 1 angitte betydning forutsatt at enhver fri aminogruppe er hensiktsmessig beskyttet, omsettes med en forbindelse av strukturen

hvori Rg har den i krav 1 angitte betydning, og Rg er lavere alkyl, i et egnet løsningsmiddel ved 0 - 50° C i 1 - 24 timer, etterfulgt av syre og basehydrolyse, (e) når R-^ er alkylcarbonyl og hvori alkyldelen er rett kjedet eller fogrenet og har fra 1 til 4 carbonatomer og R2er hydroxy, at det tilsvarende derivat hvori er hydrogen, behandles med et syrehalogenid av formelen

hvori halo er et halogenatom og Rg er en rettkjedet eller forgrenet alkylgruppe med fra 1 til 4 carbonatomer, eller et egnet syreanhydrid, i vann i nærvær av en base ved 0 - 25° C i 1/2 til 24 timer, (f) når er alkoxycarbonyl hvori alkoxydelen er rettkjedet eller forgrenet og har fra 1 til 4 carbonatomer, at det tilsvarende derivat hvori R^er hydrogen og R2er en lavere alkoxygruppe, behandles med et alkylhaloformiat av formelen

hvori- halo er et halogenatom og R-^q er en rettkjedet eller forgrenet alkylgruppe med fra 1 til 4 carbonatomer, i vann eller i diklormethan i nærvær av en base ved 0 - 25° C i 1/2 time til 6 timer, (g) når R-^ er

hvori R^har den i krav 1 angitte betydning, at det tilsvarende derivat hvori R^er hydrogen og R2 er en rettkjedet eller forgrenet alkoxygruppe med fra 1 til 8 carbonatomer, behandles med en syre av formelen

eller et anhydrid derav hvori aminogruppen er egnet beskyttet og R^har den ovenfor angitte betydning, i et egnet løsningsmiddel i nærvær av et dehydratiseringsmiddel når den fri syre anvendes, ved 0 - 35° C i 1 - 12 timer, etterfulgt av syre og basehydrolyse, og (h) når et farmasøytisk akseptabelt salt ønskes, at den således erholdte forbindelse omsettes med en egnet farmasøytisk akseptabel syre eller base.