NO763776L - - Google Patents
Info
- Publication number
- NO763776L NO763776L NO763776A NO763776A NO763776L NO 763776 L NO763776 L NO 763776L NO 763776 A NO763776 A NO 763776A NO 763776 A NO763776 A NO 763776A NO 763776 L NO763776 L NO 763776L
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- floatate
- coagulation
- further purification
- aqueous
- factor
- Prior art date
Links
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 claims description 32
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 claims description 32
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 claims description 32
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 27
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 27
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 27
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims description 22
- 230000000603 anti-haemophilic effect Effects 0.000 claims description 21
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 19
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 17
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 claims description 15
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 13
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 13
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 claims description 13
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 claims description 11
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 claims description 11
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 10
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims description 9
- 238000005188 flotation Methods 0.000 claims description 8
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 8
- 230000002950 deficient Effects 0.000 claims description 7
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 7
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 6
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 claims description 6
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 claims description 5
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 claims description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 5
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 claims description 5
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 claims description 4
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 claims description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 4
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 claims description 3
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 claims description 3
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 claims description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 3
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 3
- 231100000732 tissue residue Toxicity 0.000 claims description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 claims description 2
- 230000009918 complex formation Effects 0.000 claims description 2
- 229920000831 ionic polymer Polymers 0.000 claims description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 2
- 238000005187 foaming Methods 0.000 claims 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 23
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 14
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 13
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 12
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 10
- 229960004222 factor ix Drugs 0.000 description 10
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 10
- 239000000047 product Substances 0.000 description 9
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 7
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 6
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 6
- 102100022641 Coagulation factor IX Human genes 0.000 description 6
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 description 6
- 102100027378 Prothrombin Human genes 0.000 description 6
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 6
- IOLCXVTUBQKXJR-UHFFFAOYSA-M potassium bromide Chemical compound [K+].[Br-] IOLCXVTUBQKXJR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 229940039716 prothrombin Drugs 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- 108010076282 Factor IX Proteins 0.000 description 5
- 208000009292 Hemophilia A Diseases 0.000 description 5
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 5
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 5
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 5
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 5
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 5
- 235000011121 sodium hydroxide Nutrition 0.000 description 5
- 201000003542 Factor VIII deficiency Diseases 0.000 description 4
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 4
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 4
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 210000005059 placental tissue Anatomy 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N (2S)-6-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-1-[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]acetyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-sulfanylpropanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]hexanoic acid Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N 0.000 description 3
- 102100026735 Coagulation factor VIII Human genes 0.000 description 3
- 101000911390 Homo sapiens Coagulation factor VIII Proteins 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 102000007327 Protamines Human genes 0.000 description 3
- 108010007568 Protamines Proteins 0.000 description 3
- 108010000499 Thromboplastin Proteins 0.000 description 3
- 102000002262 Thromboplastin Human genes 0.000 description 3
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 3
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 3
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 3
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 3
- 229940012413 factor vii Drugs 0.000 description 3
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 3
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 3
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 2
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 102100023804 Coagulation factor VII Human genes 0.000 description 2
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 2
- 108010023321 Factor VII Proteins 0.000 description 2
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 2
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 2
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 2
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 2
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 2
- 208000031220 Hemophilia Diseases 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N acridine Chemical compound C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 239000011149 active material Substances 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 239000006286 aqueous extract Substances 0.000 description 2
- TZCXTZWJZNENPQ-UHFFFAOYSA-L barium sulfate Chemical compound [Ba+2].[O-]S([O-])(=O)=O TZCXTZWJZNENPQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000002585 base Substances 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N coumarin Chemical compound C1=CC=C2OC(=O)C=CC2=C1 ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 208000009429 hemophilia B Diseases 0.000 description 2
- 230000000027 hemostyptic effect Effects 0.000 description 2
- ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N heparin Chemical compound CC(O)=N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](C(O)=O)O[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H](O[C@@H]3[C@@H](OC(O)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@H]3O)C(O)=O)O[C@@H]2O)CS(O)(=O)=O)[C@H](O)[C@H]1O ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N 0.000 description 2
- 229960001008 heparin sodium Drugs 0.000 description 2
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 2
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 2
- 230000003169 placental effect Effects 0.000 description 2
- 229920000447 polyanionic polymer Polymers 0.000 description 2
- 229940048914 protamine Drugs 0.000 description 2
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- JHJLBTNAGRQEKS-UHFFFAOYSA-M sodium bromide Chemical compound [Na+].[Br-] JHJLBTNAGRQEKS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001026 thromboplastic effect Effects 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 1
- 108010014173 Factor X Proteins 0.000 description 1
- 108010074860 Factor Xa Proteins 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 1
- 229930003448 Vitamin K Natural products 0.000 description 1
- 108010063628 acarboxyprothrombin Proteins 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000012670 alkaline solution Substances 0.000 description 1
- 150000005215 alkyl ethers Chemical class 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000000729 antidote Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 229940019700 blood coagulation factors Drugs 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000012928 buffer substance Substances 0.000 description 1
- 108090001015 cancer procoagulant Proteins 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 230000009852 coagulant defect Effects 0.000 description 1
- 230000000536 complexating effect Effects 0.000 description 1
- 208000019060 congenital factor VII deficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000019059 congenital factor X deficiency Diseases 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 229960000956 coumarin Drugs 0.000 description 1
- 235000001671 coumarin Nutrition 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 1
- 230000005966 endogenous activation Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 229940012426 factor x Drugs 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 150000004820 halides Chemical class 0.000 description 1
- -1 heparin Chemical class 0.000 description 1
- 239000000815 hypotonic solution Substances 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002642 intravenous therapy Methods 0.000 description 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- SHUZOJHMOBOZST-UHFFFAOYSA-N phylloquinone Natural products CC(C)CCCCC(C)CCC(C)CCCC(=CCC1=C(C)C(=O)c2ccccc2C1=O)C SHUZOJHMOBOZST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 229950008679 protamine sulfate Drugs 0.000 description 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000013557 residual solvent Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010414 supernatant solution Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000002821 viper venom Substances 0.000 description 1
- 235000019168 vitamin K Nutrition 0.000 description 1
- 239000011712 vitamin K Substances 0.000 description 1
- 150000003721 vitamin K derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229940046010 vitamin k Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
- C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
- C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12N9/647—Blood coagulation factors not provided for in a preceding group or according to more than one of the proceeding groups
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/48—Reproductive organs
- A61K35/50—Placenta; Placental stem cells; Amniotic fluid; Amnion; Amniotic stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
- C07K14/755—Factors VIII, e.g. factor VIII C (AHF), factor VIII Ag (VWF)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
- Y10S530/85—Reproductive organs or embryos
- Y10S530/851—Placenta; amniotic fluid
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Pregnancy & Childbirth (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Immunology (AREA)
- Virology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
Antihemofilt middel og fremgangsmåte
til dets fremstilling.
Oppfinnelsen vedrører et bredt virksomt antihemofilt middel som overveiende har faktor VIII-, men også faktor IX-, faktor VII- og faktor X-aktivitet,
en fremgangsmåte til dets fremstilling samt tilberedninger, spesielt Håmostyptika og koaguleringsaktive diagnostika, som inneholder det antihemofile middel som et vesentlig virksomt ) stoff.
Blodkoagulering er en kompleks, i faser forløpende prosess, som utløses ved forskjellige fysiologiske samt patolo-giske årsaker og hvis forløp avhenger av ca. 30 befordrende og hemmende faktorer. Ved nedsettelse eller formering av noen av disse blodkoaguleringsfaktorer kan det opptre forstyrrelser i blodkoaguleringen som delvis manifesterer seg som sykdommer. Således ville f.eks. hemofilene A og B ved nedsettelse av faktorene VIII resp. IX betinge blodkoagulering og erkarakterisert vedblødninger, spesielt i ledd og muskulatur.
Det har i de siste år vist seg at prognosen av de av hemofili syke vesentlig kan forbedres ved substituerende terapi med preparater inneholdende faktor VIII resp. IX.
Som utgangsmaterial for fremstilling av faktor VIII- og faktor IX-substituerende legemidler var det hittil
bare kjent blodplasma eller blodplasmafraksjoner. Det var også allerede i lengere tid kjent at det vandige ekstrakt av placenter er et sterkt koaguleringsaktivt material, hvis aktivitet er å' karakterisere som tromboplastisk material. Slike preparater er fysiologisk forenlige. De kan ikke anvendes terapeutisk.
Også ekstrahering av placenter med lipidoppløs-ningsmetdder fører til koaguleringsaktivt tromboplastin. Det på denne måte fremstilte koaguleringsaktive material har imidlertid ikke de for antihemofili A og B-substitusjonsterapi krevede egenskaper.
Det er nå overraskende funnet at ved vandig ekstrahering av placenter utvunnet tromboplastisk material lar seg bringe i'en for substitusjonsterape egnet form. Det således dannede antihemofile middel kan isoleres og eventuelt videre-renses.
Oppfinnelsens gjenstand er følgelig et antihemofilt middel,karakterisert veddets egenskap i mangelplasmer å substituere koaguleringsfaktorene VIII, IX, VII og X. Den er blant annet karakteriserbar ved aktivitetsforholdet av faktorene VIII, -IX, -VII, -X.
Det er oppnåelig etter en fremgangsmåte som erkarakterisert vedat knuste, blodfrie vaskede placenter ekstraheres med et vandig hypotont medium ved en pH-verdi i svakt surt, nøytralt eller alkalisk område, ekstraktet adskilles fra vevresiduer, ekstraktets spesifikke tetthet økes ved tilsetning av en inert vannoppløselig forbindelse til opp-tak av koaguleringsaktive komponenter med overnevnte koaguler-ingsaktiviteter, det derved dannede flotat utvinnes og videre-renses hvis ønsket.
Por vidererensning kan det gjentas fIotasjon.
Som inerte vannoppløselige forbnmdelser innen oppfinnelsens ramme kommer det på tale alle fysiologisk tålbare stoffer som ikke inngår noen kjemisk binding med ekstraktets bestanddeler. Spesielt egnet er fysiologisk tålbare salter eller vannoppløselige kullhydrater.
Vidererensningen kan også foretas ved ekstrahering av et med et vandig medium fortynnet flotat ved lav ledningsevne og svak sur pH-verdi med et med vann ikke blandbart oppløsnings-middel for lipider, fortrinnsvis hydrokarbon eller alkyleter med et kokepunkt mellom 40 og 8o°C i nærvær av et koaguleringsinert beskyttelseskolloid og en til kompleksdanning med polypeptider resp. proteiner egnet polar polyionisk forbindelse, fortrinnsvis et polyanion som en polysakkarid-polysvovelsyre-forbindelse, f.eks. heparin eller et polykation, f.eks. protamin. Derved anriker det antihemofile middel seg i en vandig fase og kan utvinnes av denne. Det kan videre foretas ved ultrasentri-fugering av det igjen oppløste flotat i nærvær av et koaguleringsinert protein.
Det kan også foretas ved behandling av flotatet med vandig alkalilut og adskillelse av de dialysable stoffer.
Endelig kan vidererensningen gjennomføres ved oppløsning av flotatet i en vandig saitbppløsning som nærmere omtalt nedenfor og kromatografering av denne koaguleringsaktive saltoppløsning i nærvær av et koaguleringsinert lipofilt protein gjennom en molekylarsikt, hvoretter de faktor-VIII, -IXj-VII og -X-holdige fraksjoner av eluatet utvinnes.
Rensningen av det antihemofile placentære stoff
kan dessuten også foregå ved forholdsregler, slik de allerede er omtalt til fjerning av kjente, koaguleringspåvirkende faktorer. Således lar det seg eventuelt dessuten fjerne tilstedeværende protrombin, som formår å nedsetfee faktor-VIII-aktiviteten av produktet ifølge oppfinnelsen, ved absorpsjon på aluminiumhydroksyd eller bariumsulfat, ved utfelling med akri-dinbaser eller kromatografi på ioneutvekslerharpikser.
Det ifølge fremgangsmåten oppnådde antihemofile middel er f.eks. å anvende som diagnostikum i alle de koagu-leringsprøver, hvor det skal være tilstede en faktor-VIII,
-IX, -VII og -X-aktivitet.
Foreliggende fremgangsmåte går ut fra knuste, blod-fri vaskede placenter. Menneskeplacenter foretrekkes. Det kan såvel knuses friske utvundne som også allerede til lagring innfrosne placenter og for fjerning av blod- og plasmabestand-deler vaskes flere ganger med en isotonisk saltoppløsning.
Det vaskede placentahomogenat utvinnes ved filtrering og sentri-
t
fugering og deretter eventuelt tørkes. Som spesielt skånende tørkning foretrekkes lyofiliseringen. Det blodfritt vaskede og tørkede placentavev ekstraheres fortrinnsvis i en 4 - 10%- ig, spesielt 5 - 7%-ig suspensjon, med et vandig medium med en pH-verdi mellom 4,5 og 14, idet det vandige medium skal være hypotont. Fortrinnsvis anvendes hertil vann eller hypotone salt-eller pufferoppløsninger, hvis konsentrasjon og elektrolytt-s' ammens et ni ng fører til en osmotisk konsentrasjon på under 330mM/ liter.
Spesielt egnet er nøytralsalt-oppløsninger, hvis pH-verdi etter suspensjon av placentavevet i oppløsningen med baser som natronlut eller kalilut innstilles på den ønskede pH-verdi. Det er ikke avgjørende, ved hvilken pH-verdi mellom 4,5 og 14 ekstraheringen av placentavevnaden med den hypotone opplø.sning foretas.
I en spesiell utførelsesform ekstraheres knuste, blodfrie vaskede placenter med en pH-verdi over 4,5 med et vandig medium av en osmolaritet mindre enn omtrent 330 mM/ liter, ekstraktet adskilles fra vevresiduet og underkastes en fIotasjon. Derved blandes det vandige ekstrakt for å øke tettheten av oppløsningen med en inert vannoppløselig forbindelse, f.eks. et nøytralsalt eller et kullhydrat, fortrinnsvis et alkali- eller jordalkali-halogenid, som KBr, NaBr, CCI2eller sakkarose, idet det med den tilsatte mengde av de egnede stoffer innstilles en tetthet av oppløsningen på minst 1,
oppad begrenset ved oppløseligheten av saltene, fortrinnsvis en tetthet fra 1,06 til 1,20 g/cm^. Oppløsningen sentrifugeres deretter ved en aksellerasjon på over lik 25.000 x g, fortrinnsvis 50.000 x g i minst 60 minutter, fortrinnsvis 120 minutter. Etfeer sentrifugeringen utvinnes det på den klare understående saltoppløsning floterte noe uklare sjikt. Plota-sjonen av det uklare sjikt i sentrifugen gjentas hensiktsmessig under de samme eller under sammenlignbare betingelser, f.eks. ved 50.000 - 150.000 x g og det overstående flotat utvinnes endelig.
Egnede fIotasjonssystemer er forøvrig vanlige for fagfolk for adskillelse av lipoproteiner fra blodplasma. Ved anvendelsen av 20$-ig vandig kaliumbromidoppløsning og en om-dreiningshastighet av ultrasentrifugen tilsvarende 50.000 x g floterer den antihemofilt virksomme fraksjon etter ca. 2 timer til overflaten av oppløsningen meget fri for resterende protein-bestanddeler som sedimenteres resp. forblir oppløst. Det på denne måte dannede flotat dispergeres i vann eller fortynnet saltoppløsning, eksempelvis 0,5 til 1,2%-ig kokesaltoppløsning, fortrinnsvis 0,9%-ig koksaltoppløsning og i en derpå uttatt prøve bestemmes faktor VIII og -IX-aktivitet.
Deretter foretas fortynningen således at den for-tynnede oppløsning av flotatet inneholder 10-200, fortrinnsvis 20 enheter av faktor VIII.
Det ved fIotasjon fremstilte råpreparat av det antihemofile middel kan hvis ønsket underkastes en eller flere av følgende renseoperasjoner. Hvis produktet skal anvendes til intravenøs terapi er det minst nødvendig en av disse renseope-ras joner .
1. Rensefremgangsmåte ved ekstrahering.
Det ved flotasjon over en konsentrert saltoppløs-ning dannede produkt, hvis aktivitet på faktor VIII utgjør 10 - 200, fortrinnsvis 20 enheter, blandet med et koaguleringsinert protein, eksempelvis albumin, fortrinnsvis humanalbumin, i en konsentrasjon på 1 - 10%, fortrinnsvis 5%, deretter blandes med et polyanion som er i stand til kompleksdannelse med basiske polypeptider, proteiner eller fosforlipider, spesielt en polysakkarid-polysvovelforbindelser som heparin, fortrinnsvis dets natri-umsalt i en mengde på 0,005 - 0,5-mg/ml, ved heparin, tilsvarende 1-50 enheter pr. ml av den tilstedeværende oppløs-ning. Deretter innstilles ved fortynning eller salttilsetning - vanligvis er sistnevnte nødvendig - til en ledningsevne på under 14 mS/cm og med syre, fortrinnsvis en mineralsyre som saltsyre innreguleres på en pH-verdi på 3,5 - 6. En volumdel av den dannede suspensjon blir med minst 1 del av et med vann ikke blandbart oppløsningsmiddel for lipider med et kokepunkt fra 40 til 80°C, fortrinnsvis med en alifatisk eter eller et hydrokarbon, hvis kokepunkt ligger i overnevnte kokeområde eller en blanding av dette, idet blandingsforholdet kan være vilkårlig, fortrinnsvis imidlertid med en blanding av 8 volumdeler petroleter og 2 volumdeler dietyleter, rystet eller blandet 2-8 timer ved 10 - 40°C, fortrinnsvis ved værelsestemperatur minst en gang, hvortil det med fordel anvendes et mekanisk ryste- eller blandeapparat. Etter kort tids henstand kan den organiske fase adskilles eller kasseres. Den vandige fase befris, fortrinnsvis i vakuum for resterende oppløsningsmidler. Deretter foregår bestemmelsen av faktor VIII og -IX-aktivitet på kjent måte. Produktet kan anvendes parenteralt.
Istedenfor en polysakkarid-polysvovelsyre-forbindelse kan det i foreliggende fremgangsmåte også anvendes en polykationisk forbindelse som protamin, fortrinnsvis som dets klorid eller sulfat, i en konsentrasjon på 1 - 10 mg/ml, for å komme til et produkt med sammenlignbar faktor Vlll-aktivitet,
Por den parenterale applikasjonsform tilstrebes
10 - 500 enheter faktor VIII, fortrinnsvis 20 enheter faktor VIII, i forbruksoppløsningen som enkeltdose. På forhånd er det nødvendig med en sterilisering for å fjerne kontaminerende mikro-organismer. Preparatet kan deretter bringes i den for den parenterale applikasjon egnede tilberedningsform, blandes med stabi liserende beskyttelseskolloider, f.eks. protein og eventuelt deretter tørkes lyofilt. Det i en fysiologisk tålbar oppløs-ning foreliggende fremgangsmåteprodukt eller det igjen opp-løste tørrpreparat kan anvendes for substitusjonsterapi, f.eks. av hemofili A.
Egnede oppløsningsmidler er eksempelvis destillert vann, fysiologisk NaCl-oppløsning, hvis ønsket med tilsetning av et pufferstoff, som 0,02 molar Na-citrat med en pH-verdi på 7,0.
Til preparatene kan det før frysetørkningen for stabiliseringen settes beskyttelseskolloider som albumin og/ eller kullhydrater som fruktose. Med hensyn til en terapeutisk anvendelse av sluttproduktet hos mennesker anvendes hensiktsmessig humanalbumin.
Videre muligheter for en vidererensning er eksempelvis følgende, enskjønt det også skal bemerkes at den nedenfor, under punkt 2 omtalte fremgangsmåte er mindre godt egnet for fremstilling av farmasøytisk appliserbare preparater.
2. Rensefremgangsmåte ved alkalibehandling.
Den til 10 - 200 faktor Vlll-enheter innstilte oppløsning innstilles med alkalilut til en-pH-verdi mellom 10 og l4, fortrinnsvis 12. Hertil tjener eksempelvis 2 - 7 N, fortrinnsvis 5 N NaOH. Blandingen hensettes deretter i 15 minutter til 48 timer ved denne pH-verdi. Deretter nøytraliseres, dvs. innstilles til en pH-verdi i nærheten av nøytralpunktet, fortrinnsvis mellom pH 6 og pH 8. Hertil kan det anvendes uor-ganiske syrer, eksempelvis 2 - 10 N, fortrinnsvis 5 N HC1.
Por adskillelse av lavmolekylære bestanddeler underkastes den nøytraliserte oppløsning en dialyse mot en fysiologisk tålbar saltoppløsning, f.eks. isotonisk koksaltoppløsning. Før, under eller etter dialysen kan det eventuelt tilsettes koagulerings-inerte tilsetninger for stabilisering av aktiviteten av det antihemofile middel. Spesielt fordelaktig viser det seg hertil inert proteinmaterial som eksempelvis albumin.
3» Rensefremgangsmåte ved kromatografi.
En rensning av den til 10 - 200 faktorer VIII-enheter innstillede vandige oppløsning lar seg videre foreta med en fraksjonering på en molekylsikt, eksempelvis ved gelfil-trering i en søyle. Som molekylarsikt i denne forbindelse anvendes fortrinnsvis en spesielt opparbeidet agarose, eksempelvis de som er oppnåelige under betegnelsen "Sepharose" fra Firma Pharmacia, Uppsala, Sverige eller "Biogel A" fra Firma Biorad Laboratories, Richmond/California. Fraksjoneringsområdet av dette material bør for de globulære molekyler ligge ved mole-4 6
kylvekter mellom 10 og 10 . Før gjennomføring av molekylsikt-kromatografi underkastes det'antihemofile middel, fortrinnsvis en dialyse mot en fortynnet, fortrinnsvis sterkt isotonisk saltoppløsning og deretter utlignes hensiktsmessig såvel kvalitativt som også kvantitativt med hensyn til ytterligere tilsetninger til oppløsningen den elusjonsoppløsning mest mulig som finner anvendelse for eluering av det ønskede produkt ved molekylarsikt-kromatografi. Elueringsoppløsningen inneholder nøytralsalter, som eksempelvis natriumklorid i en konsentrasjon fra 0, 7% til 5,8%, fortrinnsvis 4,5 til 5% og en stabiliserende tilsetning av et inert protein, eksempelvis albumin i en konsentrasjon på 1 - 10%, fortrinnsvis 3%. Kroma-tografien foretas på kjent måte.
Valg av de enkelte derved oppnådde fraksjoner foregår etter deres innhold av faktor VIII, VII og -IX-aktivitet, idet fraksjonene med anriket faktor Vlll-aktivitet samles og forenes og innstilles eventuelt med en fysiologisk tålbar salt-oppløsning på de ønskede enheter av faktor VIII eller hvis. dette er nødvendig, konsentreres med ét ultrafilter til det ønskede antall enheter av faktor VIII.
Den overnevnte rensefremgangsmåte er dessuten egnet til å anvendes som en ekstra vidererensning av det etter de angitte trinn oppnådde produkter og spesielt istedenfor dialyse i fremgangsmåten til alkalibehandling.
4. Rensefremgangsmåter ved sentrifugering.
Det ved flotasjon over konsentrerte saltoppløs-ninger dannede råprodukt fortynnes med destillert vann til 10 - 200 enheter faktor VIII, fortrinnsvis 100 enheter og blandes med kokesalt inntilr-e.n konsentrasjon på 0,075~1,0-M, fortrinnsvis 0,15 M. Deretter tilsettes til denne oppløsning et koagulasjonsinert, lipofilt protein, f.eks. albumin, fortrinnsvis humanalbumin, inntil en konsentrasjon på 1 - 10%, fortrinnsvis 2,5 - 5%'Blandingen inkuberes i 1 - 10 timer, fortrinnsvis 2-5 timer, ved 37°C. Deretter sentrifugeres blandingen med
50.000 x g i 30 - 120 minutter, fortrinnsvis omtrent 60 minutter og den overstående oppløsning med det antihemofile middel ut-
vinnes.
Etter tilsetning av vanlige beskyttelseskolloider og tilsvarende stabilisator kan det tilnærmet klare sentrifugat sterilfiltreres. Utbytte av faktor VIII og -IX-aktivitet undersøkes under den eventuelle opparbeidelsesfremgangsmåte og/eller i tilknytning til dette. Dens bestemmelse foregår eksempelvis etter følgende metode: 1 del, f.eks. 0,1 ml partielt tromboplastin (f.eks.
fremstillet ifølge tysk søknad P 23 16 430.9-52 (Ma l60), blandes med en del faktor Vlll-mangelplasma og en del fortynnet normalplasma. Denne blanding holdes 6 minutter ved 37°C. Etter tilsetning av en del av en til 37°C foroppvarmet 0,025 molar kalsiumkloridoppløsning bestemmes den tid som går fra tilsetning av kalsiumkloridoppløsning til opptreden av en fast koagulerings-kjerne. Tilkkvantitativ angivelse avleses den koagulasjonstid som fremkommer fra den faktor Vlll-holdige oppløsning under hensyntagen til en med normalplasma-fortynningsrekke oppnådd j usteringskurve. 1 enhet faktor VIII tilsvarer faktor Vlll-aktiviteten av 1 ml normalplasma.
Bestemmelsen av faktor IX-aktiviteten kan etter overnevnte metode foregå til faktor Vlll-best-emmelse, idet istedenfor faktor Vlll-mangelplasma anvendes en faktor IX-mangelplasma.
Faktorene VII og X bestemmes analogt ved hjelp
av kongenital faktor VII- og X-mangelplasma.
Oppfinnelsens gjenstand er også et antihemofilt middel med faktor VIII, -IX, -VII og -X-aktivitet, oppnådd etter en av de overnevnte fremgangsmåter.
Endelig er oppfinnelsens gjenstand et til intrave-nøs substitusjonsterapi av hemofili A og B egnet legemiddel, bestående av eller inneholdende et antihemofilt middel oppnåelig ifølge en av de overnevnte fremgangsmåter og som eventuelt inneholder farmasøytisk vanlige bærestoffer som tilsetninger. Preparatet lagres av holdbarhetsgrunner, hensiktsmessig i tørr, lyofil form. Før den intravenøse applikasjon er tørrproduktet å rekonstituere på en for slike preparater kjent måte. Preparatet substituerer: 1. Faktor VIII- og -IX-mangeltilstander prøvet etter den parti-elle tromboplastintid-metode (PTT) på de tilsvarende kongeni tale mangelplasmer, Aktiviteten lar seg angi i enheter referert til standard-human-plasma (l E/ml). Faktor IX-aktiviteten ble målt ved flere charger med 0,5 - 1 E pr.
E 'faktor VIII.
2. Faktor VIII av hemmelegemehemofilier, slik den kan opptre ved polytransfunderte hemofili A-pasienter; 3. kongenitale faktor X-mangel, bestemt i PTT og Russel-Viper-Venom-tid.
Følgelig erstatter hemostyptikum fra placenter alle faktorer av den endogene aktiveringsvei mer eller mindre sterkt, mest virksom faktor VIII; dessuten blir imidlertid også
4. kongenitale faktor VII-mangeltilstander normalisert,
målt i PTT og enfasekoaguleringstid ifølge Quick;
5. kumarin-induserte koaguleringsdefekter, som fører til dan-nelse av fysiologisk ikke aktiverbart protrombin (protrombin indusert av vitamin K fravær = PIVKA), substitueres partielt. Korrekturen foregår høyst sannsynlig i størrelsesorden av det ennu aktiverbare protrombin: 15 - 20% av aktiviteten av
normalplasmaet ved godt innstilte pasienter,
6. Protrombin (høyrenset, faktor VII og -X fritt) aktiveres sterkt.
Etter tilsetning av dekalsifisert humanplasma er det aktive prinsipp stabilt flere timer; en hemming opptrer først etter tilsetning av heparin, som virker som antidot. Sammenfattende kan det sies: Hemostyptikum fra placenter substituerer av faktorene av det endogene koaguleringssystem spesielt virksomt faktor VIII og IX, partielt imidlertid også faktor VII og X
av det eksogene system. Ifølge sammensetninger og egenskaper er hemostyptikumet fra placenter et kompleks, som inneholder en liten protein- men høy fosfolipiddel, som ved komplesering med albumin får egenskapene av en ekte oppløsning.
Hemostyptikum fra human-placenter inneholder de for dannelsen av faktor X-aktivatoren nødvendige fosforlipider i en spesiell virksom form. For bred terapeutisk virkning bi-drar i tillegg et stoff som er lignende, men ikke identisk med den aktiverte faktor X. Det katalyserer direkte omdannelsen av protrombin til trombin i omgåelse av faktorene VIII og IX
og påvirkes ikke av hemmelegemer i virkningen. Med hemostyptikumet fra human-placenta står det til disposisjon et preparat
som stiller terapien av hemofile påeen ny basis. Dette gjelder såvel for den brede anvendelse som også råstoffet. Hemostyptikumet adskiller seg etter fremstillingsfremgangsmåter, sammen-setning og virkningsmåte fra de andre kjente preparater. Et indikasjonstyngdepunkt ligger sannsynligvis i behandling av hemmelegemet-hemofilier, som tidligere under tiden bare kunne behandles med dyrisk antihemofilt globulin og vurderingsfaktorer eller med aktiverte faktorer.
Oppfinnelsen skal forklares nærmere ved hjelp av et eksempel.
Eksempel.
Blodfritt vasket lyofilisert placentavev gjennom-blandes kraftig i en 5%~ig suspensjon i 0,05 molar Na-citrat-oppløsning i 20 minutter ved værelsestemperatur. Homogenatet slynges i en sentrifuge 30 minutter ved 30.000 x g, sedimentet kasseres og det dannede overstående bringes med fast kaliumbromid
til en 20%- ig metning. I en ultrasentrifuge slynges ekstraktet ved 50.000 x g 2 timer, idet det oppstår et godt adskillbart flotat. Denne overstående sone tømmes.. Da det hertil er for-utsetningen en fysiologisk forenlighet av preparatene anvendes til intravenøs substitusjonsterapi hensiktsmessig bare preparater som underkastes en av de tidligere angitte rensefremgangsmåter. Etter en ny flotasjon ved 150.000 x g er preparatet bruksferdig som faktor Vlll-preparat. Det undersøkes aktiviteten av faktorene VIII, IX, X og VII.
Faktor Vlll-aktiviteten utgjør 200 E/ml.
Vidererensning:
a) Det ved 150.000 x g floterte preparat fortynnes med en vandig 10%- ig humanalbuminoppløsningjsom inneholder 10 enheter/ml
av heparin-natrium, til like deler. Derved må det påses at det samlede saltinnhold av blandingen tilsvarer en elektrisk ledningsevne på ca. 8 mS/cm. pHvverdien innstilles med 1 N HC1 til 4,5.
Blandingen haés i et ekstraheringsapparat ifølge Kutscher og Steudel og ekstraheres over 2 timer kontinuerlig med 2 deler av en petroleter (fraksjon 60 - 80°C)/dietyleter-blanding = 80/20 (volum/volum).
Etter operasjonen fjernes den organiske oppløsnings-middeldel under skånende betingelser i vakuum ved 20°C med en rotasjonsfordamper og den gjenblivende vandige fase innstilles med 1 N NaOH på pH 7,5 - 8,0. Etter 2 timers omrøring ved værelsestemperatur og sterilfiltrering er preparatet bruksferdig til substitusjonsterapi av faktor Vlll-mangler.
Faktor Vlll-aktiviteten av en prøve innstilles på ca. 30 enheter/ml.
Istedenfor med heparin-natrium kan faktor VIII-preparatet i første fremgangsmåtetrinn også blandes med
protaminsulfat (5 mg/ml),
b) Det ved 150.000 x g floterte preparat fortynnes med 0,15 molar •NaCl-oppløsning, som er 5%-ig på humanalbumin, til en
aktivitet på ca. 100 enheter faktor VIII. Etter inkubasjon på 5 timer ved 37°C sentrifugeres denne blanding \ time ved 50.000 x g og etter'en tilsetning av 1% fruktose sterilfiltreres. det omtrent klare sentrifugat.
Dette preparat viser seg i dyreforsøk, f.eks. på kaniner toksikologisk tålbart. De har hos sunne dyr en virkning som er sammenlignbar med det antihemofile globulin-konsentrat av plasma.
Tabellarisk oppstilling av virkningen av hemostyptikum fra human-placenta på plasmakoaguleringstider av normalplasma, faktor mangelplasmaer og hemmlegemeplasmaer bestemt i PTT+^.
Claims (10)
1. Fremgangsmåte til fremstilling av et antihemofilt middel, karakterisert vee d at knuste, blodfrie vaskede placenter ekstraheres med et vandig hypotont medium i svakt surt til alkalisk område, ekstraktet adskilles fra vevresiduer, den spesifikke tetthet av ekstraktet økes ved tilsetning av en inert vannoppløselig forbindelse til oppskumming og flotatet utvinnes.
2. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at flotatet underkastes en ytterligere rensning.
3- Fremgangsmåte ifølge krav 2, karakterisert ved at vidererensningen gjennomføres ved gjentagelse av flotasjon.
4. ' Fremgangsmåte ifølge krav 2, karakterisert ved at en vidererensning foretas ved ekstrahering av det med et vandig medium fortynnet flotat ved lav ledningsevne og svak sur pH-verdi med et med vann ikke blandbart oppløsnings-midler for lipider i nærvær av en koaguleringsinert beskyttelseskolloid og en til kompleksdannelse med polypeptider resp. proteiner egnet polar polyionisk forbindelse, hvoretter det antihemofile middel anriker seg med faktor VIII-, IX-, VII- og X-aktivitet i den vandige fase og denne utvinnes.
5' Fremgangsmåte ifølge krav 2, karakterisert ved at vidererensningen foretas ved behandling av flotatet med vandig alkalilut og adskillelse av de dialysable stoffer.
6. Fremgangsmåte ifølge krav 2, karakterisert ved at vidererensningen av saltoppløsningen som inneholder faktorene VIII, IX, VII og X foretas ved dispergering av flotatet i en vandig saltoppløsning og kromatografering under tilsetning av et koaguleringsinert protein gjennom en molekylar sikt og de faktor Vlll-holdige fraksjoner utvinnes.
7. Fremgangsmåte ifølge krav 2, karakterisert ved at vidererensningen foretas ved dispergering av flotatet i en vandig saltoppløsning, tilsetning av et koaguleringsinert protein til denne oppløsning og dens sentrifugering og sentrifugeoverstående som inneholder faktor VIII utvinnes.
8. Antihemofilt middel fremstillet ifølge en av fremgangsmåten ifølge krav 1 til 7.
9. Legemiddel egnet til intravenøs substitusjonsterapi av hemofiler bestående av eller inneholdende et ant i-,-, hemofilt middel ifølge krav 2 til 7 og eventuelt farmasøytisk vanlige bærestoffer.
10. Antihemofilt middel, karakterisert ved dets egenskap til, i mangelplasmaer å substituere koaguleringsfaktorene VIII, IX, VII og X.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE2550011A DE2550011C2 (de) | 1975-11-07 | 1975-11-07 | Verfahren zur Herstellung eines antihämophilen Mittels |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
NO763776L true NO763776L (no) | 1977-05-10 |
Family
ID=5961172
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
NO763776A NO763776L (no) | 1975-11-07 | 1976-11-05 |
Country Status (20)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4067964A (no) |
JP (1) | JPS6029362B2 (no) |
AT (1) | AT358737B (no) |
AU (1) | AU500621B2 (no) |
BE (1) | BE848111A (no) |
CA (1) | CA1077393A (no) |
CH (1) | CH630805A5 (no) |
DE (1) | DE2550011C2 (no) |
DK (1) | DK502176A (no) |
ES (1) | ES452923A1 (no) |
FI (1) | FI763165A (no) |
FR (1) | FR2330408A1 (no) |
GB (1) | GB1563009A (no) |
IL (1) | IL50847A (no) |
IT (1) | IT1063617B (no) |
LU (1) | LU76145A1 (no) |
NL (1) | NL7612139A (no) |
NO (1) | NO763776L (no) |
SE (1) | SE7612396L (no) |
ZA (1) | ZA766647B (no) |
Families Citing this family (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0044343B1 (en) * | 1980-01-28 | 1984-08-22 | Baxter Travenol Laboratories, Inc. | Prothrombin-containing therapeutic compositions and methods of producing enzymatically active blood clotting factors from prothrombin-containing blood fractions |
US4459288A (en) * | 1981-05-11 | 1984-07-10 | Baxter Travenol Laboratories, Inc. | Therapeutic blood clotting factor compositions and their use |
DE3625090A1 (de) * | 1986-07-24 | 1988-01-28 | Behringwerke Ag | Mittel zur therapie faktor viii-resistenter haemophilie a und verfahren zu seiner herstellung |
CA1339946C (en) * | 1987-03-31 | 1998-07-07 | Michael J. Griffith | Ultrapurification process for polypeptides |
JP2931319B2 (ja) * | 1989-03-29 | 1999-08-09 | 吉富製薬株式会社 | 血液凝固第▲viii▼因子の製造法 |
JP3180824B2 (ja) * | 1991-08-30 | 2001-06-25 | シスメックス株式会社 | 血液凝固試薬 |
AU2002229510A1 (en) * | 2001-02-05 | 2002-08-19 | Novo Nordisk Health Care Ag | Combined use of factor vii polypeptides and factor viii polypeptides |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3862002A (en) * | 1962-05-08 | 1975-01-21 | Sanfar Lab Inc | Production of physiologically active placental substances |
BE713764A (no) * | 1967-05-01 | 1968-09-16 | Baxter Travenol Lab | |
BE787961A (fr) * | 1971-08-24 | 1973-02-26 | Behringwerke Ag | Procede d'isolement d'une matiere thromboplastique et medicament contenant ladite matiere |
DE2262520C3 (de) * | 1972-12-20 | 1987-02-12 | Miles Laboratories, Inc., Elkhart, Ind. | Verfahren zur Herstellung eines lyophilisierten, lagerfähigen Konzentrats aus menschlichem Plasma |
-
1975
- 1975-11-07 DE DE2550011A patent/DE2550011C2/de not_active Expired
-
1976
- 1976-11-02 ES ES452923A patent/ES452923A1/es not_active Expired
- 1976-11-02 NL NL7612139A patent/NL7612139A/xx not_active Application Discontinuation
- 1976-11-04 CH CH1392076A patent/CH630805A5/de not_active IP Right Cessation
- 1976-11-04 FI FI763165A patent/FI763165A/fi not_active Application Discontinuation
- 1976-11-04 IL IL50847A patent/IL50847A/xx unknown
- 1976-11-04 AT AT819476A patent/AT358737B/de not_active IP Right Cessation
- 1976-11-05 NO NO763776A patent/NO763776L/no unknown
- 1976-11-05 CA CA265,060A patent/CA1077393A/en not_active Expired
- 1976-11-05 LU LU76145A patent/LU76145A1/xx unknown
- 1976-11-05 IT IT29084/76A patent/IT1063617B/it active
- 1976-11-05 US US05/739,278 patent/US4067964A/en not_active Expired - Lifetime
- 1976-11-05 AU AU19341/76A patent/AU500621B2/en not_active Expired
- 1976-11-05 ZA ZA766647A patent/ZA766647B/xx unknown
- 1976-11-05 DK DK502176A patent/DK502176A/da unknown
- 1976-11-05 SE SE7612396A patent/SE7612396L/xx unknown
- 1976-11-06 JP JP51132782A patent/JPS6029362B2/ja not_active Expired
- 1976-11-08 FR FR7633603A patent/FR2330408A1/fr active Granted
- 1976-11-08 BE BE172170A patent/BE848111A/xx not_active IP Right Cessation
- 1976-11-08 GB GB46384/76A patent/GB1563009A/en not_active Expired
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
SE7612396L (sv) | 1977-05-08 |
AU1934176A (en) | 1978-05-11 |
AT358737B (de) | 1980-09-25 |
DK502176A (da) | 1977-05-08 |
CH630805A5 (de) | 1982-07-15 |
GB1563009A (en) | 1980-03-19 |
AU500621B2 (en) | 1979-05-24 |
IL50847A (en) | 1980-01-31 |
IT1063617B (it) | 1985-02-11 |
ZA766647B (en) | 1977-10-26 |
CA1077393A (en) | 1980-05-13 |
IL50847A0 (en) | 1977-01-31 |
DE2550011C2 (de) | 1982-11-25 |
BE848111A (fr) | 1977-05-09 |
US4067964A (en) | 1978-01-10 |
ES452923A1 (es) | 1977-11-16 |
FI763165A (no) | 1977-05-08 |
NL7612139A (nl) | 1977-05-10 |
ATA819476A (de) | 1980-02-15 |
JPS5257310A (en) | 1977-05-11 |
FR2330408B1 (no) | 1980-03-14 |
FR2330408A1 (fr) | 1977-06-03 |
LU76145A1 (no) | 1977-06-03 |
DE2550011A1 (de) | 1977-05-12 |
JPS6029362B2 (ja) | 1985-07-10 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Hovig | Aggregation of rabbit blood platelets produced in vitro by saline “extract” of tendons | |
Margolis | Initiation of blood coagulation by glass and related surfaces | |
US3682881A (en) | Fractionation of plasma using glycine and polyethylene glycol | |
US3842061A (en) | Method for isolation of antithrombin from animal tissue materials by adsorption on sulfated carbohydrate gel | |
O'brien | The similarity of the action of phosphatidyl-ethanolamine and platelets in blood coagulation | |
DK155568B (da) | Fremgangsmaade til stabilisering af koagulationsfaktorerne ii, viii, xiii og antithrombin iii samt plasminogen, og saaledes at disse er fibrinogen-fri og fri for risiko for en hepatitis-overfoering | |
NO142381B (no) | Fremgangsmaate for fremstilling av den antihemofile faktor | |
JPS644621B2 (no) | ||
US4870166A (en) | Process for preparing high-purity dematan sulphate, and pharmaceutical compositions which contain it | |
JPH0348888B2 (no) | ||
NO763776L (no) | ||
US4115551A (en) | Compounds of the plasminogen type and method for obtaining such compounds from placental pulps | |
CA1293941C (en) | Method for preparing antihemophilic factor (ahf) by cold precipitation and for improving solubility of recovered ahf product | |
Casillas et al. | Chromatographic behaviour of clotting factors | |
EP0052874A1 (en) | Method for synthesizing procoagulant factor VIII activity | |
Fujimoto | Studies on the antitrypsin of serum | |
FI87044B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av ett medel med vilket man kan behandla hemofili a, som aer resistent mot faktor viii. | |
Seegers et al. | Activation of purified prothrombin with platelets combined with various crude biochemical preparations | |
Glazko et al. | The mechanism of the action of saliva in blood coagulation | |
US3993585A (en) | Elevated human lipids control | |
Hurt et al. | Human Antihemophilic Factor (AHF) Purification A Comparison of Two Procedures | |
Mammen et al. | Platelet cofactors as plasma components of the intrinsic blood clotting mechanisms | |
JPS6396132A (ja) | 抗血液凝固物質及びその製法 | |
Horowitz et al. | Release of nonsedimentable platelet factor 3 during coagulation | |
Wadsworth et al. | Further studies of the chemical reactions underlying the coagulation of the blood. The activity of lecithin |