NO316916B1 - Use of a bispecific antibody construct targeting CCR5 and CD3 for the preparation of a pharmaceutical composition for the treatment of chronic arthritis, autoimmune diseases, allergic reactions or for the reduction of chemokine receptor expression - Google Patents
Use of a bispecific antibody construct targeting CCR5 and CD3 for the preparation of a pharmaceutical composition for the treatment of chronic arthritis, autoimmune diseases, allergic reactions or for the reduction of chemokine receptor expression Download PDFInfo
- Publication number
- NO316916B1 NO316916B1 NO20014346A NO20014346A NO316916B1 NO 316916 B1 NO316916 B1 NO 316916B1 NO 20014346 A NO20014346 A NO 20014346A NO 20014346 A NO20014346 A NO 20014346A NO 316916 B1 NO316916 B1 NO 316916B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- antibody
- ccr5
- chemokine receptor
- chemokine
- antigen
- Prior art date
Links
- 108050000299 Chemokine receptor Proteins 0.000 title claims abstract description 39
- 102000009410 Chemokine receptor Human genes 0.000 title claims abstract description 39
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 title claims abstract description 11
- 101710149870 C-C chemokine receptor type 5 Proteins 0.000 title claims abstract 4
- 102100035875 C-C chemokine receptor type 5 Human genes 0.000 title claims abstract 4
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims description 13
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 10
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 title claims description 8
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims description 8
- 230000009467 reduction Effects 0.000 title claims description 5
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 title description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 title 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 59
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 27
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 24
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 claims abstract description 13
- 108700011778 CCR5 Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 claims abstract description 7
- 102000017420 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Human genes 0.000 claims description 21
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 18
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 18
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 18
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 claims description 14
- 239000012636 effector Substances 0.000 claims description 12
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 claims description 8
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 claims description 8
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 8
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 3
- ZVEUWSJUXREOBK-DKWTVANSSA-N 2-aminoacetic acid;(2s)-2-amino-3-hydroxypropanoic acid Chemical compound NCC(O)=O.OC[C@H](N)C(O)=O ZVEUWSJUXREOBK-DKWTVANSSA-N 0.000 claims description 2
- 101000946926 Homo sapiens C-C chemokine receptor type 5 Proteins 0.000 claims description 2
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 102000048160 human CCR5 Human genes 0.000 claims description 2
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 abstract description 44
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 abstract description 44
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 abstract description 3
- 238000002650 immunosuppressive therapy Methods 0.000 abstract description 3
- 208000037893 chronic inflammatory disorder Diseases 0.000 abstract description 2
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 35
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 35
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 35
- FUFLCEKSBBHCMO-UHFFFAOYSA-N 11-dehydrocorticosterone Natural products O=C1CCC2(C)C3C(=O)CC(C)(C(CC4)C(=O)CO)C4C3CCC2=C1 FUFLCEKSBBHCMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- MFYSYFVPBJMHGN-ZPOLXVRWSA-N Cortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MFYSYFVPBJMHGN-ZPOLXVRWSA-N 0.000 description 11
- MFYSYFVPBJMHGN-UHFFFAOYSA-N Cortisone Natural products O=C1CCC2(C)C3C(=O)CC(C)(C(CC4)(O)C(=O)CO)C4C3CCC2=C1 MFYSYFVPBJMHGN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 229960004544 cortisone Drugs 0.000 description 11
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 description 9
- 208000012659 Joint disease Diseases 0.000 description 8
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 8
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 7
- 206010023203 Joint destruction Diseases 0.000 description 6
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 6
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 6
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 6
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 6
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 5
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 102100032367 C-C motif chemokine 5 Human genes 0.000 description 4
- 108010055166 Chemokine CCL5 Proteins 0.000 description 4
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 4
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 210000001503 joint Anatomy 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 3
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 102100032366 C-C motif chemokine 7 Human genes 0.000 description 2
- 101710155834 C-C motif chemokine 7 Proteins 0.000 description 2
- 102100034871 C-C motif chemokine 8 Human genes 0.000 description 2
- 101710155833 C-C motif chemokine 8 Proteins 0.000 description 2
- 102100031650 C-X-C chemokine receptor type 4 Human genes 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000922348 Homo sapiens C-X-C chemokine receptor type 4 Proteins 0.000 description 2
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 2
- 208000025747 Rheumatic disease Diseases 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 230000000202 analgesic effect Effects 0.000 description 2
- 239000003435 antirheumatic agent Substances 0.000 description 2
- 239000008365 aqueous carrier Substances 0.000 description 2
- 239000002981 blocking agent Substances 0.000 description 2
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 2
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- AEUKDPKXTPNBNY-XEYRWQBLSA-N mcp 2 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(C)C)C1=CC=CC=C1 AEUKDPKXTPNBNY-XEYRWQBLSA-N 0.000 description 2
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 2
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 2
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 102100024746 Dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 1
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 1
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 description 1
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 102000012745 Immunoglobulin Subunits Human genes 0.000 description 1
- 108010079585 Immunoglobulin Subunits Proteins 0.000 description 1
- 206010023215 Joint effusion Diseases 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- 208000019693 Lung disease Diseases 0.000 description 1
- 206010029164 Nephrotic syndrome Diseases 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 description 1
- 101150030083 PE38 gene Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010036030 Polyarthritis Diseases 0.000 description 1
- 101000762949 Pseudomonas aeruginosa (strain ATCC 15692 / DSM 22644 / CIP 104116 / JCM 14847 / LMG 12228 / 1C / PRS 101 / PAO1) Exotoxin A Proteins 0.000 description 1
- 108700033844 Pseudomonas aeruginosa toxA Proteins 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 208000001647 Renal Insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000007107 Stomach Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000001741 anti-phlogistic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 1
- 239000012928 buffer substance Substances 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 238000012412 chemical coupling Methods 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006020 chronic inflammation Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000011443 conventional therapy Methods 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000000850 decongestant Substances 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000000779 depleting effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 108020001096 dihydrofolate reductase Proteins 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 150000002333 glycines Chemical class 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 239000002596 immunotoxin Substances 0.000 description 1
- 231100000608 immunotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 230000002637 immunotoxin Effects 0.000 description 1
- 229940051026 immunotoxin Drugs 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 230000000622 irritating effect Effects 0.000 description 1
- 210000000629 knee joint Anatomy 0.000 description 1
- 230000005923 long-lasting effect Effects 0.000 description 1
- 238000012153 long-term therapy Methods 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 208000009928 nephrosis Diseases 0.000 description 1
- 231100001027 nephrosis Toxicity 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 230000003637 steroidlike Effects 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 210000001179 synovial fluid Anatomy 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002435 tendon Anatomy 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005740 tumor formation Effects 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
- A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
- A61K47/642—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent the peptide or protein in the drug conjugate being a cytokine, e.g. IL2, chemokine, growth factors or interferons being the inactive part of the conjugate
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Description
Foreliggende oppfinnelse vedrører anvendelse av antistoff- og kjemokinkonstruksjoner mot kjemokinreseptoruttrykkende celler, spesielt mot monocytter/makrofager, som uttrykker kjemokinreseptoren CCR5 og CCR5+ T-celler. Videre vedrører oppfinnelsen anvendelsen av antistoff- og kjemokinkonstruksjoner for fremstilling av et legemiddel for destruksjon av kjemokinreseptoruttrykkende celler for behandling av autoimmune sykdommer og allergiske sykdommer, spesielt for behandling av kroniske inflammatoriske sykdommer i ledd. Antistoff- og kjemokinkonstruksjoner fra oppfinnelsen mulig-gjør den direkte nedgangen av kjemokinreseptoruttrykkende celler og derved en rettet immunosuppresiv terapi av autoimmune leddsykdommer. The present invention relates to the use of antibody and chemokine constructs against chemokine receptor-expressing cells, especially against monocytes/macrophages, which express the chemokine receptor CCR5 and CCR5+ T cells. Furthermore, the invention relates to the use of antibody and chemokine constructs for the production of a drug for the destruction of chemokine receptor-expressing cells for the treatment of autoimmune diseases and allergic diseases, in particular for the treatment of chronic inflammatory diseases of joints. Antibody and chemokine constructs from the invention enable the direct reduction of chemokine receptor-expressing cells and thereby a targeted immunosuppressive therapy of autoimmune joint diseases.
I Tyskland lider omtrent 1% av populasjonen av reumatoid artritt. I tillegg er det et antall av andre reumatoide sykdommer som også fører til artritt. For tiden blir tre grupper medikamenter - ikke-steroidale antireumatika, kortisonprepareringer og andrelinje-midler- og TNFa-blokkerende midler brukt i behandlingen av infiammatoriske leddsykdommer. Hittil har terapien fokusert på lokalinjeksjon av kortisonprepareringer i kom-binasjon med en systemisk administrering av anti flogi stika eller andrelinje-midler. In Germany, about 1% of the population suffers from rheumatoid arthritis. In addition, there are a number of other rheumatoid diseases that also lead to arthritis. Currently, three groups of drugs - non-steroidal antirheumatic drugs, cortisone preparations and second-line agents and TNFα-blocking agents are used in the treatment of inflammatory joint diseases. Until now, therapy has focused on local injection of cortisone preparations in combination with a systemic administration of antiphlogistics or second-line agents.
Ikke-steroidale antireumatika har en mild analgetisk og anti-inflammatorisk effekt, men de har mange bivirkninger når de brukes ofte (f.eks. magesår, nefroser). I høye doser har kortisonprepareringer en sterk dekongestant og analgetisk effekt, som imidlertid fører til en rask tilbakegang etter avslutning av terapien. Dessuten kan ikke kortisonprepareringer stoppe destruksjonsprosessen av leddsykdommen. En langtidsterapi med kortison gir vanligvis alvorlige bivirkninger (infeksjoner, Cushing's fenomen, osteoporose, perga-mentlignende hud, metabolske og hormonelle forstyrrelser). Den lokale injeksjonen av kortison har også den essensielle ulempen at aktiviteten av tilstrammende hvite blodcel-ler bare blir redusert men ikke ødelegges, hvilket fører til en rask tilbakegang når terapien avsluttes. Som nevnt ovenfor skjer det samme ved systemisk applikasjon. Sjelden er en inflammasjon som skyldes den irriterende effekt av kortisonkrystaller forverret etter injeksjon av kortison. Varigheten av effekten av en kortisoninjeksjon varierer enormt, og varierer fra primær ineffektivitet til en varighet av effekten på flere uker. Non-steroidal anti-rheumatic drugs have a mild analgesic and anti-inflammatory effect, but they have many side effects when used frequently (e.g. gastric ulcers, nephrosis). In high doses, cortisone preparations have a strong decongestant and analgesic effect, which, however, leads to a rapid decline after the end of therapy. Moreover, cortisone preparations cannot stop the destruction process of the joint disease. A long-term therapy with cortisone usually produces serious side effects (infections, Cushing's phenomenon, osteoporosis, parchment-like skin, metabolic and hormonal disturbances). The local injection of cortisone also has the essential disadvantage that the activity of tightening white blood cells is only reduced but not destroyed, which leads to a rapid decline when the therapy ends. As mentioned above, the same happens with systemic application. Rarely is an inflammation due to the irritating effect of cortisone crystals worsened after injection of cortisone. The duration of effect of a cortisone injection varies enormously, ranging from primary ineffectiveness to a duration of effect of several weeks.
I reumatologi blir andrelinje-midlene brukt for å oppnå en langtidssuppresjon av inflammasjonen og en reduksjon i kortisonprepareringer. På grunn av den betraktelige toksisiteten (allergier, infeksjoner, maligne sykdommer, nyreinsuffisiens, blodtrykkskri-ser, lungesykdommer) er det nødvendig for medisinske spesialister å være nær pasien-tene. Etter start av behandling kan det være slik at ingen terapeutisk effekt er synlig i de første tre måneder. For tiden er det 4 eller 5 slike andrelinje-midler til disposisjon som blir brukt individuelt først, eller blir kombinert hvis terapien ikke er effektiv. For det meste er det nesten ingen ting kjent om virkningsmåten av andrelinje-midler. Det er ennå ikke fullstendig klart hvorvidt applikasjonen av andrelinje-midler kan forminske destruksjonen av leddet. I de senere år har en ny gruppe substanser blitt introdusert i behandlingen av reumatoid artritt som er basert på blokkeringen av cellesignalsubstan-ser (TNFa) ved hjelp av monoklonale antistoffer eller oppløselige reseptorkonstruksjo-ner. In rheumatology, the second-line agents are used to achieve a long-term suppression of the inflammation and a reduction in cortisone preparations. Due to the considerable toxicity (allergies, infections, malignant diseases, kidney insufficiency, blood pressure crises, lung diseases) it is necessary for medical specialists to be close to the patients. After starting treatment, it may be that no therapeutic effect is visible in the first three months. Currently, there are 4 or 5 such second-line agents available that are used individually first, or are combined if the therapy is not effective. For the most part, almost nothing is known about the mode of action of second-line agents. It is not yet completely clear whether the application of second-line agents can reduce the destruction of the joint. In recent years, a new group of substances has been introduced in the treatment of rheumatoid arthritis which is based on the blocking of cell signaling substances (TNFa) by means of monoclonal antibodies or soluble receptor constructions.
I tillegg er det pasienter som ikke responderer på de terapier som for tiden er tilgjenge-lige. I andre tilfeller har konvensjonell terapi blitt stoppet på grunn av intolererbare bivirkninger. In addition, there are patients who do not respond to the therapies that are currently available. In other cases, conventional therapy has been stopped because of intolerable side effects.
Derfor er det et behov for et nytt terapeutisk konsept for behandling av kroniske inflammatoriske leddsykdommer, eller reumatiske sykdommer generelt, og andre autoimmune sykdommer. Therefore, there is a need for a new therapeutic concept for the treatment of chronic inflammatory joint diseases, or rheumatic diseases in general, and other autoimmune diseases.
Derfor er det tekniske problemet som ligger til grunn for foreliggende oppfinnelse, å tilveiebringe nye terapeutiske midler for behandling av inflammatoriske leddsykdommer og andre autoimmune sykdommer så vel som allergiske sykdommer, som overvin-ner ulempene innen den kjente teknikken. Therefore, the technical problem underlying the present invention is to provide new therapeutic agents for the treatment of inflammatory joint diseases and other autoimmune diseases as well as allergic diseases, which overcome the disadvantages of the known technique.
Trekkene definert i de selvstendige kravene, tjener til å løse dette problemet. The features defined in the independent requirements serve to solve this problem.
Fordelaktige utførelsesformer har blitt definert i de respektive uselvstendige krav. Advantageous embodiments have been defined in the respective independent claims.
Dette tekniske problemet har blitt løst ved å tilveiebringe antistoff- eller kjemokinkonstruksjoner som er i stand til å binde til en kjemokinreseptor på overflaten av en målcelle, hvori bindingen av konstruksjonen til kjemokinreseptor en resulterer i destruksjonen av målcellene. Antistoff- og kjemokinkonstruksjonene anvendt i oppfinnelsen forårsaker at målceller som uttrykker kjemokinreseptorer, spesielt leukocytter, blir selek-tivt ødelagt. Konstruksjonene inkluderer bispesifikke antistoffer, antistoffkonstruksjoner, kjemokinkonstruksjoner, murine, kimære eller humaniserte antistoffer, og binder både til en kjemokinreseptoruttrykkende målcelle og til et antigen på overflaten av effektorceller, spesielt et CD3-antigen, eller inneholder et toksin. Effektorcellene er foretrukket å være leukocytter, spesielt monocytter/makrofager eller T-celler eller dendritiske celler. This technical problem has been solved by providing antibody or chemokine constructs capable of binding to a chemokine receptor on the surface of a target cell, wherein the binding of the construct to the chemokine receptor results in the destruction of the target cells. The antibody and chemokine constructs used in the invention cause target cells expressing chemokine receptors, especially leukocytes, to be selectively destroyed. The constructs include bispecific antibodies, antibody constructs, chemokine constructs, murine, chimeric or humanized antibodies, and bind both to a chemokine receptor-expressing target cell and to an antigen on the surface of effector cells, particularly a CD3 antigen, or contain a toxin. The effector cells are preferably leukocytes, especially monocytes/macrophages or T cells or dendritic cells.
I et studie med mer enn 40 pasienter som lider av forskjellige leddsykdommer, ble det funnet at det er en svært sterk konsentrasjon av monocytter/makrofager som uttrykker kjemokinreseptoren CCR5 og T-lymfocytter i det betente ledd. I leddet uttrykker mer enn 90% av monocyttene og T-lymfocyttene kjemokinreseptoren CCR5, mens i blodet gjør bare 10% eller 20% dette. På grunn av dette ekspresjonsmønsteret er kjemokinreseptoren CCR5, eller kjemokinreseptorer generelt, et svært egnet mål for celleutar-mingsterapi. Derfor ville nesten alle monocytter og T-lymfocyttene i et ledd påvirkes av en CCR5-utarming, mens i blodstrømmen ville bare et lite antall av disse celler bli ut-armet. Når det gjelder kronisk artritt, er monocytter og T-lymfocytter de dominerende celletypene hvor monocyttene hovedsakelig er ansvarlig for ledd-destruksjonen. In a study of more than 40 patients suffering from various joint diseases, it was found that there is a very strong concentration of monocytes/macrophages expressing the chemokine receptor CCR5 and T-lymphocytes in the inflamed joint. In the joint, more than 90% of the monocytes and T-lymphocytes express the chemokine receptor CCR5, while in the blood only 10% or 20% do this. Because of this expression pattern, the chemokine receptor CCR5, or chemokine receptors in general, is a very suitable target for cell depletion therapy. Therefore, almost all monocytes and T-lymphocytes in a joint would be affected by a CCR5 depletion, while in the bloodstream only a small number of these cells would be depleted. When it comes to chronic arthritis, monocytes and T-lymphocytes are the dominant cell types where the monocytes are mainly responsible for the joint destruction.
Overraskende vil det nå kunne sees at leukocytter som uttrykker kjemokinreseptorer, spesielt CCR5, kan ødelegges ved målrettede metoder av nylig utviklet antistoff- og kj emokinkonstruksjoner. Surprisingly, it will now be possible to see that leukocytes expressing chemokine receptors, especially CCR5, can be destroyed by targeted methods of newly developed antibody and chemokine constructs.
Mens nåværende behandlingsstrategier i det vesentlige representerer en symptomatisk terapi og kan influere forløpet på en leddsykdom og ledd-destruksjon kun i en begrenset grad og andrelinje-midler, for eksempel blir effektive bare etter flere måneder og, i tillegg, som de andre medikamentene som blir brukt, har en betraktelig toksisitet når det anvendes over lengere tidsperioder, trigger konstruksjonene fra oppfinnelsen en nesten fullstendig utarming av monocytter/makrofager som uttrykker kjemokine reseptorer, spesielt CCR5+, og lymfocytter i leddet innen kun få timer. Disse celletypene er ansvarlige for kronisk inflammasjon og ledd-destruksjon. På grunn av utarming kan en lang-tidseffekt oppnås. Siden monocyttene blir eliminert svært effektivt, gjør anvendelsen av antistoffet fra foreliggende oppfinnelse det mulig for ledd-destruksjonen å bli påvirket på en positiv måte. Den ikke-selektive inhiberingen av immunsystemet ved å etablere andrelinje-midler og TNFcc-blokkerende midler, er forventet å øke disponering for infeksjoner og tumordannelse. I motsetning, på grunn av distribueringen av kjemokinreseptoruttrykkende celler, spesielt av CCR5-uttrykkende leukocytter, kan leukocyttene som er involvert i inflammasjonsprosessen bli eliminiert i høy grad uten å influere im-munforsvaret i noen særlig grad sett samlet. Alt i alt gjør antistoffet en terapi mulig som har små bivirkninger, og som samtidig forbedrer forløpet av leddsykdommen og hindrer ledd-destruksjon. While current treatment strategies essentially represent a symptomatic therapy and can influence the course of a joint disease and joint destruction only to a limited extent and second-line agents, for example, become effective only after several months and, in addition, like the other drugs that are used, has considerable toxicity when used over longer periods of time, the constructions from the invention trigger an almost complete depletion of monocytes/macrophages expressing chemokine receptors, especially CCR5+, and lymphocytes in the joint within only a few hours. These cell types are responsible for chronic inflammation and joint destruction. Due to depletion, a long-term effect can be achieved. Since the monocytes are eliminated very efficiently, the use of the antibody of the present invention enables the joint destruction to be affected in a positive way. The non-selective inhibition of the immune system by establishing second-line agents and TNFcc-blocking agents is expected to increase predisposition to infections and tumor formation. In contrast, due to the distribution of chemokine receptor-expressing cells, especially of CCR5-expressing leukocytes, the leukocytes involved in the inflammatory process can be eliminated to a high degree without influencing the immune system to any particular extent overall. All in all, the antibody makes a therapy possible that has little side effects, and which at the same time improves the course of the joint disease and prevents joint destruction.
I en foretrukket utførelsesform er konstruksjonen et bispesifikt antistoff med en spesifisitet rettet mot en kjemokinreseptor, fortrinnsvis mot en human kjemokinreseptor og mest foretrukket mot den humane kjemokinreseptoren CCR5, og med den andre spesifisiteten mot et antigen på overflaten av en effektorcelle, fortrinnsvis mot CD3 på overflaten av en T-celle. Oppfinnelsen omfatter også antistoffkonstruksjoner som har en iden-tisk eller lignende epitopspesifisitet. In a preferred embodiment, the construct is a bispecific antibody with one specificity directed against a chemokine receptor, preferably against a human chemokine receptor and most preferably against the human chemokine receptor CCR5, and with the other specificity against an antigen on the surface of an effector cell, preferably against CD3 on the surface of a T cell. The invention also encompasses antibody constructs that have an identical or similar epitope specificity.
I en spesielt foretrukket utførelsesform av oppfinnelsen er det bispesifikke antistoffet et enkeltkjedet antistoff. In a particularly preferred embodiment of the invention, the bispecific antibody is a single-chain antibody.
I en annen utførelsesform av oppfinnelsen er antistoffkonstruksjonen et bispesifikt antistoff, én spesifisitet som er rettet mot en kjemokinreseptor, fortrinnsvis mot en human kjemokinreseptor og mest foretrukket mot den humane kjemokine reseptoren 5 (CCR5), og den andre spesifisiteten er rettet mot et toksin. I en foretrukket utførelsesform er, også i dette tilfellet, det bispesifikke antistoffet et enkeltkjedet antistoff. In another embodiment of the invention, the antibody construct is a bispecific antibody, one specificity which is directed against a chemokine receptor, preferably against a human chemokine receptor and most preferably against the human chemokine receptor 5 (CCR5), and the other specificity is directed against a toxin. In a preferred embodiment, also in this case, the bispecific antibody is a single-chain antibody.
I en annen foretrukket utførelsesform av oppfinnelsen anvendes en kjemokinkonstruksjon i form av et kjemokintoksin som er et resultat av fusjonen av et modifisert eller umodifisert kjemokin med et modifisert eller umodifisert toksin. Kjemokinene som binder til CCR5, slik som konstruksjonene med MIP 10, MIP la, MCP-2, MCP-3 og RANTES er spesielt foretrukket. In another preferred embodiment of the invention, a chemokine construct is used in the form of a chemokine toxin which is the result of the fusion of a modified or unmodified chemokine with a modified or unmodified toxin. The chemokines that bind to CCR5, such as the constructs with MIP 10, MIP la, MCP-2, MCP-3 and RANTES are particularly preferred.
Når det gjelder kjemokinkonstruksjonen, kan kjemokinet bindes kovalent til et toksin. Imidlertid kan også bindingen mellom kjemokinet og toksinet finne sted på forskjellige måter. Via et multimeriseringsdomene kan kjemokinet også bindes til et antistoff som har, atskilt fra et kompatibelt multimeriseringsdomene, en spesifisitet mot et antigen på overflaten av en effektorcelle, fortrinnsvis mot CD3 på overflaten av en T-celle og/eller mot et toksin. Det er også mulig å binde kjemokinet via et multimeriseringsdomene til et toksin med et kompatibelt multimeriseringsdomene. I tillegg kan kjemokinet kovalent bindes til et antistoff som har en spesifisitet mot et antigen på overflaten av en effektorcelle, fortrinnsvis mot CD3 på overflaten av en T-celle og/eller mot et toksin. Dessuten kan kjemokinet via et multimeriseringsdomene, bindes til et toksin via et kompatibelt multimerisereingsdomene bundet til toksinet. Binding til multimeriseirngsdomenet kan utføres in vitro eller in vivo. In the case of the chemokine construct, the chemokine can be covalently linked to a toxin. However, the binding between the chemokine and the toxin can also take place in different ways. Via a multimerization domain, the chemokine can also be bound to an antibody that has, separated from a compatible multimerization domain, a specificity against an antigen on the surface of an effector cell, preferably against CD3 on the surface of a T cell and/or against a toxin. It is also possible to bind the chemokine via a multimerization domain to a toxin with a compatible multimerization domain. In addition, the chemokine can be covalently bound to an antibody which has a specificity against an antigen on the surface of an effector cell, preferably against CD3 on the surface of a T cell and/or against a toxin. In addition, the chemokine via a multimerization domain can be bound to a toxin via a compatible multimerization domain bound to the toxin. Binding to the multimerization domain can be performed in vitro or in vivo.
I en annen utførelsesform av oppfinnelsen er antistoffkonstruksjonen et antistoff mot en kjemokinreseptor, fortrinnsvis mot CCR5, som er kovalent bundet til et toksin. I dette tilfellet er disse såkalte immunotoksiner. In another embodiment of the invention, the antibody construct is an antibody against a chemokine receptor, preferably against CCR5, which is covalently bound to a toxin. In this case, these are so-called immunotoxins.
Egnede toksiner inkluderer spesielt forkortet Pseudomonas- toks\ n, forkortet difteritok-sin og lignende toksiner. Suitable toxins include, in particular, abbreviated Pseudomonas toxin, abbreviated diphtheria toxin and similar toxins.
Oppfinnelsen omfatter også anvendelsen av antistoffkonstruksjoner som omfatter et antistoff mot en kjemokinreseptor, fortrinnsvis mot CCR5, som via et multimeirserings-domene i homodimerer/heterodimerer, kan bindes in vitro og/eller in vivo til et andre antistoff rettet mot et antigen på en effektorcelle, fortrinnsvis mot CD3 og/eller mot et toksin. The invention also encompasses the use of antibody constructs comprising an antibody against a chemokine receptor, preferably against CCR5, which via a multimerization domain in homodimers/heterodimers, can be bound in vitro and/or in vivo to a second antibody directed against an antigen on an effector cell, preferably against CD3 and/or against a toxin.
I tillegg omfatter oppfinnelsen også anvendelse av antistoffkonstruksjoner hvori et antistoff mot en kjemokinreseptor, fortrinnsvis mot CCR5, kan bindes in vitro eller in vivo via et multimeriseringsdomene til et toksin med et kompatibelt multimeriseringsdomene. In addition, the invention also includes the use of antibody constructs in which an antibody against a chemokine receptor, preferably against CCR5, can be bound in vitro or in vivo via a multimerization domain to a toxin with a compatible multimerization domain.
Generelt er antistoffkonstruksjonene, kjemokinkonstruksjonene og murine, kimære eller humaniserte antistoffer, substanser som er i stand til å ødelegge kjemokinreseptoruttrykkende celler, spesielt leukocytter, med denne selektive destruksjon som blir brukt for behandling av inflammatoriske sykdommer (autoimmune sykdommer, allergiske sykdommer og lignende). In general, the antibody constructs, chemokine constructs and murine, chimeric or humanized antibodies are substances capable of destroying chemokine receptor-expressing cells, especially leukocytes, with this selective destruction being used for the treatment of inflammatory diseases (autoimmune diseases, allergic diseases and the like).
I forbindelse med oppfinnelsen inkluderer også betegnelsen antistoff eller antistoffkonstruksjoner antistoff-fragmenter som har spesifisiteten(e) for antistoffet eller antistoffkonstruksjonen, såkalte aktive fragmenter. In connection with the invention, the term antibody or antibody constructs also includes antibody fragments that have the specificity(s) for the antibody or antibody construct, so-called active fragments.
Bispesifikke antistoffer kan konstrueres ved å anvende fremgangsmåter beskrevet ne-denfor eller ved kjente metoder; kjemisk koplede antistoffer eller antistoff-rfagmenter, konstruksjonen ved hjelp av hybrid-hybridomateknikken, konstruksjonen som bispesifikk enkeltkjedede antistoffer, diastoffer og konstruksjonen ved hjelp av å kople to antistoffer via multimeriseringsdomener, er bare noen få eksempler på dette. Bispecific antibodies can be constructed using methods described below or by known methods; chemically linked antibodies or antibody fragments, the construction by means of the hybrid-hybridoma technique, the construction as bispecific single-chain antibodies, diabodies and the construction by means of linking two antibodies via multimerization domains, are just a few examples of this.
De bispesifikke antistoffene er foretrukket å være enkeltkjedede antistoffer. Forskjellige deler av disse antistoffene kan bindes ved hjelp av konvensjonelle fremgangsmåter eller konstruert som tilgrensende protein ved hjelp av rekombinante DNA-teknikker, f.eks. på en slik måte at et nukleinsyremolekyl som koder for en kimær eller humanisert anti-stoffkjede blir uttrykt for å konstruere et tilgrensende protein (jfr. for eksempel Mack et al., (1995) Proe. Nati. Acad. Sei. USA, vol. 92, s. 7021-7025). The bispecific antibodies are preferably single-chain antibodies. Different parts of these antibodies can be bound using conventional methods or constructed as adjacent protein using recombinant DNA techniques, e.g. in such a way that a nucleic acid molecule encoding a chimeric or humanized anti-substance chain is expressed to construct an adjacent protein (see, for example, Mack et al., (1995) Proe. Nati. Acad. Sei. USA, vol. 92, pp. 7021-7025).
I en spesielt foretrukket utførelsesform anvendes det et enkeltkjedet antistoff med de følgende Fv-fragmentene: sc-Fv-fragment til et monoklonalt antistoff mot kjemokinreseptoren, fortrinnsvis mot CCR5 og et cs-Fv-fragment fra et monoklonalt antistoff mot CD3.1 dette tilfellet kan både Fv-fragmentet rettet mot kjemokinreseptoren og Fv-fragmentet rettet mot CD3, være lokalisert i N-terminal posisjon. Fv-fragmentet mot CCR5 er foretrukket å være i N-terminal posisjon. Rekkefølgen av VL og VH-antistoffdomenene kan være variable i begge konstruksjonene; rekkefølgen av Fv-fragmentet mot CCR5 er fortrinnsvis VL-VH og det ene av Fv-fragmentet mot CD3 er VH-VL. Linkeme mellom de variable domenene såvel som mellom de to Fv-fragmentene består av peptidlinkere, fortrinnsvis av en hydrofil, fleksibel glysin- og serininneholdende linker av 0-25 aminosyrer. En ytterligere histidinkjede på 6 x His i C- eller N-terminal posisjon kan bli brukt for å forenkle rensningen og deteksjonen. In a particularly preferred embodiment, a single-chain antibody with the following Fv fragments is used: sc-Fv fragment of a monoclonal antibody against the chemokine receptor, preferably against CCR5 and a cs-Fv fragment from a monoclonal antibody against CD3. In this case, both the Fv fragment directed against the chemokine receptor and the Fv fragment directed against CD3, be located in the N-terminal position. The Fv fragment against CCR5 is preferred to be in the N-terminal position. The order of the VL and VH antibody domains can be variable in both constructs; the order of the Fv fragment against CCR5 is preferably VL-VH and the one of the Fv fragment against CD3 is VH-VL. The links between the variable domains as well as between the two Fv fragments consist of peptide linkers, preferably of a hydrophilic, flexible glycine- and serine-containing linker of 0-25 amino acids. An additional histidine chain of 6 x His in the C- or N-terminal position can be used to simplify the purification and detection.
Sammenlignet med konvensjonelle bispesifikke antistoffer, har bispesifikke enkeltkjedede antistoffer den fordel at de består av kun én proteinkjede, og derfor er deres sammensetning nøyaktig definert. De har en lavmolekylvekt på normalt <60 kD, og kan lett bli produsert i stor skale i egnede cellelinjer, f.eks. i CHO-celler, ved å bruke rekombinante teknikker. Den mest essensielle fordelen er imidlertid at de ikke har noen konstan-te antistoffdomener, og derved kun aktiverer T-lymfocytter til å lysere når disse er bundet til deres målceller, dvs. til de kjemikinreseptoruttrykkende cellene. Derfor er ofte enkeltkjedeantistoffer overlegne konvensjonelle bispesifikke antistoffer, siden deres kliniske anvendelse medfører færre eller mindre alvorlige bivirkninger. Compared to conventional bispecific antibodies, bispecific single-chain antibodies have the advantage that they consist of only one protein chain, and therefore their composition is precisely defined. They have a low molecular weight of normally <60 kD, and can easily be produced on a large scale in suitable cell lines, e.g. in CHO cells, using recombinant techniques. The most essential advantage, however, is that they have no constant antibody domains, and thereby only activate T-lymphocytes to lyse when these are bound to their target cells, i.e. to the chemokine receptor-expressing cells. Therefore, single-chain antibodies are often superior to conventional bispecific antibodies, since their clinical use involves fewer or less severe side effects.
En celle av eukaryotisk eller prokaryotisk opprinnelse kan produsere en antistoffkonstruksjon som beskrevet, spesielt et bispesifikt antistoff fra oppfinnelsen eller en in vrtrø-teknikk for proteinproduksjonen. A cell of eukaryotic or prokaryotic origin can produce an antibody construct as described, in particular a bispecific antibody from the invention or an in vitro technique for protein production.
Kjemokintoksinene som resulterer fra binding av et kjemokin til et toksin, kan bli konstruert ved kjemisk kopling ved å produsere et fusjonsprotein fra et kjemokin og et modifisert eller umodifisert prokaryotisk eller eukaryotisk toksin og ved å binde et kjemokin og et toksin via ytterligere multimeriseringsdomener. The chemokine toxins resulting from binding of a chemokine to a toxin can be constructed by chemical coupling by producing a fusion protein from a chemokine and a modified or unmodified prokaryotic or eukaryotic toxin and by binding a chemokine and a toxin via additional multimerization domains.
I en spesielt foretrukket utførelsesform anvendes det et rekombinant produsert fusjonsprotein fra et kjemokin som binder til den humane kjemokine reseptoren CCR5 (MIP lp, MIP la, RANTES, MCP-2, MCP-3) og en forkortet versjon av Pseudomonas ekso-toksin A (f.eks. PE38, PE40). I dette tilfellet er kjemokinet bundet til Pseudomonas-toksinet ved hjelp av en kort peptidlinker. Linkeren består fortrinnsvis av en fleksibel og hydrofil aminosyresekvens, spesielt av glyciner og senner, og har en lengde på 0 til 20 aminosyrer. In a particularly preferred embodiment, a recombinantly produced fusion protein from a chemokine that binds to the human chemokine receptor CCR5 (MIP 1p, MIP la, RANTES, MCP-2, MCP-3) and a shortened version of Pseudomonas exotoxin A ( eg PE38, PE40). In this case, the chemokine is linked to the Pseudomonas toxin by means of a short peptide linker. The linker preferably consists of a flexible and hydrophilic amino acid sequence, especially of glycines and tendons, and has a length of 0 to 20 amino acids.
I tillegg blir det tekniske problemet fra oppfinnelsen løst ved å tilveiebringe en farma-søytisk sammensetning som omfatter minst én antistoff- eller kjemokinkonstruksjon fra oppfinnelsen, som omfatter spesielt minst ett bispesifikt antistoff i et kvantum som er tilstrekkelig til å ødelegge kjemokinreseptoruttrykkende celler, og eventuelt en farma-søytisk akseptabel bærer. In addition, the technical problem from the invention is solved by providing a pharmaceutical composition comprising at least one antibody or chemokine construct from the invention, which in particular comprises at least one bispecific antibody in a quantity sufficient to destroy chemokine receptor-expressing cells, and optionally a pharmaceutically acceptable carrier.
Farmasøytiske sammensetninger som omfatter det bispesifikke antistoffet er egnet for parenteral administrering, dvs. subkutant, intramuskulært, intravenøst, intra-artikulært, intraperitonealt, hvori sammensetningene for parenteral administrering vanligvis inkluderer en oppløsning av antistoffet eller en cocktail derav, oppløst i en akseptabel bærer, fortrinnsvis en vandig bærer. Egnede vandige bærere er for eksempel vann, NaCl-oppløsning og glysin. I tillegg kan sammensetningene inneholde konvensjonelle farma-søytisk akseptable adj uvanter, som for eksempel er brukt for å justere pH-verdien, slik som en buffersubstans eller lignende. Pharmaceutical compositions comprising the bispecific antibody are suitable for parenteral administration, i.e. subcutaneously, intramuscularly, intravenously, intra-articularly, intraperitoneally, wherein the compositions for parenteral administration usually include a solution of the antibody or a cocktail thereof, dissolved in an acceptable carrier, preferably an aqueous carrier. Suitable aqueous carriers are, for example, water, NaCl solution and glycine. In addition, the compositions may contain conventional pharmaceutically acceptable adjuvants, which are for example used to adjust the pH value, such as a buffer substance or the like.
Konsentrasjonen av det bispesifikke antistoffet i sammensetningen kan variere betraktelig, dvs. fra mindre enn omtrent 1+"<7> % vekt/volum til 1% vekt/volum. Konsentrasjonen er foretrukket å være mellom IO"<4> % vekt/volum og 10"<1> % vekt-/volum. Når det gjelder intra-artikulær applikasjon, bør dosen av det bispesifikke antistoffet være 1 mg til The concentration of the bispecific antibody in the composition can vary considerably, ie from less than about 1+"<7>% w/v to 1% w/v. The concentration is preferred to be between 10"<4>% w/v and 10"<1>% w/v. For intra-articular application, the dose of the bispecific antibody should be 1 mg to
0,0001 mg, og spesielt omtrent 0,02 mg, av det bispesifikke enkeltkjedede antistoffet. 0.0001 mg, and especially about 0.02 mg, of the bispecific single chain antibody.
Derfor vil, for en intra-artikulær applikasjon i et kneledd, en egnet sammensetning for eksempel omfatte omtrent 20 ug av det bispesifikke antistoffet eller kjemokintoksinet fra oppfinnelsen, oppløst i omtrent 2-5 ml sterilt NaCl-oppløsning, f.eks. bufret med fosfat eller Tris. En intravenøs injeksjon ville også være en egnet form for applikasjon. Therefore, for an intra-articular application in a knee joint, a suitable composition would for example comprise about 20 µg of the bispecific antibody or chemokine toxin of the invention, dissolved in about 2-5 ml of sterile NaCl solution, e.g. buffered with phosphate or Tris. An intravenous injection would also be a suitable form of application.
Et ytterligere formål for oppfinnelsen er å tilveiebringe nye muligheter for applikasjon av antistoffet som beskrevet. A further purpose of the invention is to provide new possibilities for application of the antibody as described.
Dette formål oppnås ved å bruke minst ett av antistoffene eller én av kjemokintoksinene fra oppfinnelsen, for å utarme kjemokinreseptoruttrykkende celler. I en foretrukket utførelsesform blir antistoffet eller kjemokintoksinet fra oppfinnelsen, brukt for prepareringen av en farmasøytisk sammensetning for å behandle kronisk artritt og andre autoimmune sykdommer eller allergiske sykdommer. This purpose is achieved by using at least one of the antibodies or one of the chemokine toxins from the invention, to deplete chemokine receptor-expressing cells. In a preferred embodiment, the antibody or chemokine toxin of the invention is used for the preparation of a pharmaceutical composition to treat chronic arthritis and other autoimmune diseases or allergic diseases.
Den selektive kjemokinreseptorutarmingen, spesielt CCR5-utarmingen, har to vesentlige fordeler sammenlignet med tidligere immunosuppressive terapier (f.eks. kortison, metotreksat, cytokinblokkering): For det første retter ikke tidligere terapier seg mot utarming av de infiltrerende leukocyttene, men fører bare til en suppresjon av aktiviteten. Dette fører til en rask tilbakevending etter terminering av terapien, og krever permanent immunosuppresjon. I kontrast til dette er det, når det gjelder utarming av de ansvarlige leukocyttene i leddet, håp om at en langtidsvarende tilbakegang allerede kan være oppnådd allerede etter én eller få behandlinger. Den andre fordelen av en kjemo-kinreseptorutarming blir, på grunn av distribueringen av celler som uttrykker kjemokinreseptorer, spesielt CCR5, bare celler som er involvert i inflammasjonsprosessen utar-met. De andre cellene forblir imidlertid intakte i stor grad. The selective chemokine receptor depletion, especially the CCR5 depletion, has two significant advantages compared to previous immunosuppressive therapies (e.g. cortisone, methotrexate, cytokine blockade): First, previous therapies do not target depletion of the infiltrating leukocytes, but only lead to a suppression of the activity. This leads to a rapid return after termination of therapy, and requires permanent immunosuppression. In contrast to this, when it comes to depletion of the responsible leukocytes in the joint, there is hope that a long-lasting decline can already be achieved already after one or a few treatments. The other advantage of a chemokine receptor depletion is that, due to the distribution of cells expressing chemokine receptors, especially CCR5, only cells involved in the inflammatory process are depleted. However, the other cells remain largely intact.
Metoden for virkning av det bispesifikke antistoffet, er én spesifisitet rettet mot en kjemokinreseptor, og den andre spesifisiteten mot et antigen på overflaten av T-celler som presterer celler, er illustrert i figur 1 (øverst) og figur 2, ved hjelp av en foretrukket utfø-relsesform av oppfinnelsen. Som vist i figur 1 (øverst) binder et bispesifikt antistoff med dets to armer til to forskjellige antigener. I en foretrukket utførelsesform, er disse kjemokinreseptoren CCR5 og overflatemolekylet CD3 på T-lymfocytter. Som vist i figur 2, fører det bispesifikke antistoffet til en kryssbinding av T-lymfocytter og CCR5-uttrykkende celler. På grunn av kryssbindingen, blir T-lymfocyttene aktivert for å lysere, og CCR5+cellene bundet dertil blir ødelagt. Som en konsekvens finner en lysis av CCR5+celler kun sted ved tilstedeværelsen av T-lymfocytter. Disse er til stede i store mengder med alle former av kronisk artritt. På denne måten er det spesielt mulig å mål-bevisst eliminere cellene som er ansvarlige for inflammasjonen ved å injisere det bispesifikke antistoffet inn i det betente leddet. The mode of action of the bispecific antibody, one specificity directed to a chemokine receptor, and the other specificity to an antigen on the surface of T cells performing cells, is illustrated in Figure 1 (top) and Figure 2, using a preferred embodiment of the invention. As shown in Figure 1 (top), a bispecific antibody binds with its two arms to two different antigens. In a preferred embodiment, these are the chemokine receptor CCR5 and the surface molecule CD3 on T lymphocytes. As shown in Figure 2, the bispecific antibody leads to a cross-linking of T lymphocytes and CCR5-expressing cells. Because of the cross-linking, the T-lymphocytes are activated to lyse, and the CCR5+ cells bound thereto are destroyed. As a consequence, a lysis of CCR5+ cells only takes place in the presence of T lymphocytes. These are present in large quantities with all forms of chronic arthritis. In this way, it is particularly possible to purposefully eliminate the cells responsible for the inflammation by injecting the bispecific antibody into the inflamed joint.
Ytterligere utførelsesformer av oppfinnelsen og deres virkemåte er illustrert i de vedlag-te figurer 1 til 9. Further embodiments of the invention and their mode of operation are illustrated in the attached figures 1 to 9.
På grunn av muligheten for å med hensikt utarme kjemokinreseptoruttrykkende celler, er konseptet ikke bare egnet for kronisk artritt, men også for reumatiske sykdommer og andre autoimmune sykdommer som ble funnet å ha en lignende sterk konsentrasjon av celler som uttrykker kjemokinreseptorer, spesielt CCR5. Due to the possibility of deliberately depleting chemokine receptor-expressing cells, the concept is not only suitable for chronic arthritis, but also for rheumatic diseases and other autoimmune diseases that were found to have a similarly strong concentration of cells expressing chemokine receptors, especially CCR5.
Mens det allerede har vært rapportert om forskjellige muligheter for å bruke bispesifikke antistoffer i behandlingen av tumorer (f.eks. Kroesen, BJ. et al. (1993) Cancer Immunol. Immunother. 37:400-7; Nitta. T. et al. (1990) Lancet 335:368-71; Bolhuis, R. L. et al. (1992) Int. J. Cancer Suppl., 7:78-81; Canevari, S. et al. (1995) J. Nati. Cancer Inst. 87:1463-9; De gast, G. et al. (1995) J. Hematother. 4:433-437; Kroesen, B.J. et al. (1994) Br. J. Cancer, 70:652-61; Tibben, J.G. et al. (1993) J. Nati. Cancer Inst. 85:1003.4), har søknaden for bispesifikke antistoffer for immunosuppresjon hittil ikke blitt beskrevet. While various possibilities for using bispecific antibodies in the treatment of tumors have already been reported (eg, Kroesen, BJ. et al. (1993) Cancer Immunol. Immunother. 37:400-7; Nitta. T. et al. (1990) Lancet 335:368-71; Bolhuis, R. L. et al. (1992) Int. J. Cancer Suppl., 7:78-81; Canevari, S. et al. (1995) J. Nat. Cancer Inst. . 87:1463-9; De gast, G. et al. (1995) J. Hematother. 4:433-437; Kroesen, B.J. et al. (1994) Br. J. Cancer, 70:652-61; Tibben , J.G. et al (1993) J. Nat. Cancer Inst. 85:1003.4), the application of bispecific antibodies for immunosuppression has not been described heretofore.
Beskrivelse av figurene: Description of the figures:
Figur 1 viser antistoff- og kjemokinkonstruksjoner fra oppfinnelsen som forårsaker kryssbinding av målceller, i dette tilfellet CCR5-uttrykkende celler og effektorceller, i Figure 1 shows antibody and chemokine constructs of the invention that cause cross-linking of target cells, in this case CCR5-expressing cells and effector cells, in
dette tilfellet T-celler med CD3 på overflaten, øverst: Bispesifikt antistoff med spesifisiteter både mot CCR5 og CD3, i midten: Kjemokinkonstruksjon som består av et kjemokin og et antistoff mot CD3, under: Kjemokinkonstruksjon hvori et kjemokin med mul-timeriseirngsdomene kan bindes til et antistoff rettet mot CD3 via et kompatibelt multimeriseringsdomene. in this case T cells with CD3 on the surface, top: Bispecific antibody with specificities both against CCR5 and CD3, middle: Chemokine construct consisting of a chemokine and an antibody against CD3, below: Chemokine construct in which a chemokine with a multimerization domain can bind to an antibody directed against CD3 via a compatible multimerization domain.
Som vist skjematisk i figur 2, fører kryssbindingen til aktivering av T-lymfocytter til lysis og til destruksjonen av CCR5-positive celler kryssbundet dertil. As shown schematically in Figure 2, the cross-linking leads to the activation of T-lymphocytes to lysis and to the destruction of CCR5-positive cells cross-linked thereto.
Figur 3 viser antistoff- og kjemokinkonstruksjoner fra oppfinnelsen som fører til en binding mellom målceller, i dette tilfellet CCR5-uttrykkende celler og et toksin, øverst: Bispesifikt antistoff som har spesifisiteter mot både CCR5 og et toksin, under: Kjemokinkonstruksjon som består av et kjemokin og et antistoff mot et toksin. Figure 3 shows antibody and chemokine constructs from the invention that lead to a binding between target cells, in this case CCR5-expressing cells and a toxin, top: Bispecific antibody that has specificities against both CCR5 and a toxin, below: Chemokine construct consisting of a chemokine and an antibody against a toxin.
Kryssbindingen av en målcelle og et toksin som illustrert i figur 4, fører til celledød av den CCR5-positiv målcellen. The cross-linking of a target cell and a toxin as illustrated in Figure 4 leads to cell death of the CCR5-positive target cell.
Figur 5 viser på samme måte som figur 3 antistoff- og kjemokinkonstruksjoner som fører til en binding mellom en målcelle og et toksin, hvori imidlertid toksinet ikke bindes via spesifisiteten til et antistoff rettet mot toksinet, men er enten kovalent bundet til et antistoff rettet mot kjemokinreseptoren, fortrinnsvis mot CCR5 (figur 5, øverst), eller til et kjemokin (figur 5, midten), eller kan, via et multimeriseringsdomene, bli bundet til et antistoff med et kompatibelt multimeriseringsdomene rettet mot en kjemokinreseptor (figur 5, nederst). Figure 5 shows, in the same way as Figure 3, antibody and chemokine constructs that lead to a binding between a target cell and a toxin, in which, however, the toxin is not bound via the specificity of an antibody directed against the toxin, but is either covalently bound to an antibody directed against the chemokine receptor , preferably against CCR5 (Figure 5, top), or to a chemokine (Figure 5, middle), or can, via a multimerization domain, be bound to an antibody with a compatible multimerization domain directed against a chemokine receptor (Figure 5, bottom).
Som det har blitt vist i figur 6, fører kryssbindingen av en målcelle og et toksin også til celledød for målcellen. Figur 7 viser resultatet av en FACS-analyse (utført som beskrevet i Mack et al. (1998) J. Exp. Med. 187, s. 1215-1224), som forklarer utarmingen av CCR5-positive T-celler og monocytter fra den betente synovial-leddvæsken hos en pasient med kronisk polyartritt eller fra dyrkede perifere blodleukocytter (PBMC). Figur 8 viser cytotoksisiteten av kjemokintoksinet Ra-PE38, eller mer presist, destruksjonen av CCR5-uttrykkende CHO-celler ved kjemokintoksinet Ra-PE38 (10 ng/ml) etter en 24 timers inkubering (høyre, under). CHO-cellene som uttrykker kjemokinreseptoren CXCR4 i stedet for CCR5, blir ikke ødelagt av Ra-PE38 (øverst) siden RANTES ikke binder til CXCR4. Inkubering med medium dreper ikke CHO-celler. Ra-PE38 - et fusjonsprotein av RANTES og et forkortet Pseudomonas- éksotoksin med en molekylvekt på38kD'. As has been shown in Figure 6, the cross-linking of a target cell and a toxin also leads to cell death of the target cell. Figure 7 shows the result of a FACS analysis (performed as described in Mack et al. (1998) J. Exp. Med. 187, pp. 1215-1224), which explains the depletion of CCR5-positive T cells and monocytes from the the inflamed synovial joint fluid of a patient with chronic polyarthritis or from cultured peripheral blood leukocytes (PBMC). Figure 8 shows the cytotoxicity of the chemokine toxin Ra-PE38, or more precisely, the destruction of CCR5-expressing CHO cells by the chemokine toxin Ra-PE38 (10 ng/ml) after a 24 hour incubation (right, below). The CHO cells expressing the chemokine receptor CXCR4 instead of CCR5 are not destroyed by Ra-PE38 (top) since RANTES does not bind to CXCR4. Incubation with medium does not kill CHO cells. Ra-PE38 - a fusion protein of RANTES and a shortened Pseudomonas exotoxin with a molecular weight of 38 kD'.
Figur 8 forklarer tilnærmingen som er beskrevet i figur 5, midten. Figure 8 explains the approach described in Figure 5, middle.
Figur 9 viser en 48 timers inkubering av synovialvæske med CD3-CCR5-bispesifikke antistoffer. Derfor skal figur 9 sees i sammenheng med figur 7, øverst. Det er en kon-sentrasjonsavhengig utarming av T-lymfocyttene og monocyttene. Med en antistoffkon-sentrasjon på 125 ng/ml, ble monocyttene og T-lymfocyttene redusert med 96% og 97,5%, respektivt. Figure 9 shows a 48 hour incubation of synovial fluid with CD3-CCR5 bispecific antibodies. Therefore, figure 9 should be seen in connection with figure 7, at the top. There is a concentration-dependent depletion of the T-lymphocytes and monocytes. At an antibody concentration of 125 ng/ml, monocytes and T lymphocytes were reduced by 96% and 97.5%, respectively.
Foreliggende oppfinnelse omfatter anvendelse av en bispesifikk antistoffkonstruksjon som er i stand til å binde til en human kjemokinreseptor CCR5 som et første antigen og et CD3-antigen på overflaten av en effektorcelle som et andre antigen, og aktive fragmenter av nevnte bispesifikke antistoffkonstruksjoner for fremstillingen av en farma-søytisk sammensetning for behandling av kronisk artritt, autoimmune sykdommer eller allergiske sykdommer. The present invention comprises the use of a bispecific antibody construct capable of binding to a human chemokine receptor CCR5 as a first antigen and a CD3 antigen on the surface of an effector cell as a second antigen, and active fragments of said bispecific antibody constructs for the production of a pharmaceutical composition for the treatment of chronic arthritis, autoimmune diseases or allergic diseases.
Foreliggende oppfinnelse omfatter også anvendelsen av minst én bispesifikk antistoffkonstruksjon som definert i et hvilket som helst av kravene 1 til 8 for fremstillingen av en farmasøytisk sammensetning for "depletion" av kjemokinreseptoruttrykkende celler. The present invention also encompasses the use of at least one bispecific antibody construct as defined in any one of claims 1 to 8 for the preparation of a pharmaceutical composition for the "depletion" of chemokine receptor expressing cells.
EKSEMPLER EXAMPLES
Eksempel 1: Konsentrasjon av et bispesifikt antistoff Example 1: Concentration of a bispecific antibody
For konstruksjonen av bispesifikke antistoffer kan for eksempel den enkeltkjedede teknikken bli brukt (Mack et al. (1995) Proe. Nati. Acad. Sei. USA, 92:7021-7025; Mack et al. (1997) J. Immunol. 158:3965-3970). I dette tilfellet, som vist kjematisk i figurene 1 (øverst) og 3 (øverst), blir de variable domenene av de lette (VL) og de tunge (VH) immunoglobulinkjedene av to forskjellige antistoffer smeltet sammen i en spesiell rek-kefølge, eventuelt en histidinkjede på 6 x His blir i tillegg tilfestet. Fusjonen er effektu-ert på basis av et DNA, slik at en proteinkjede med fire forskjellige variable domener blir dannet etter ekspresjon (jfr. figurene 1 (øverst) og 3 (øverst)). Den tilfestede histi-dinkjeden muliggjør en enkel og effektiv rensing via immobiliserte Ni-ioner i ett trinn. Figur 1 (øverst) viser en foretrukket utførelsesform av den bispesifikke antistoffbind-ingen til CD3-antigenet på overflaten av effektorcellen og det humane CCR5 på overflaten av leukocytter som målceller. For the construction of bispecific antibodies, for example, the single-chain technique can be used (Mack et al. (1995) Proe. Nati. Acad. Sei. USA, 92:7021-7025; Mack et al. (1997) J. Immunol. 158: 3965-3970). In this case, as shown schematically in Figures 1 (top) and 3 (top), the variable domains of the light (VL) and heavy (VH) immunoglobulin chains of two different antibodies are fused together in a particular order, optionally a histidine chain of 6 x His is additionally attached. The fusion is effected on the basis of a DNA, so that a protein chain with four different variable domains is formed after expression (cf. figures 1 (top) and 3 (top)). The attached histidine chain enables a simple and effective purification via immobilized Ni ions in one step. Figure 1 (top) shows a preferred embodiment of the bispecific antibody binding to the CD3 antigen on the surface of the effector cell and the human CCR5 on the surface of leukocytes as target cells.
Ved hjelp av RT-PCR blir de variable antistoffdomenene fra hybridomacellene som danner det ønskede antistoffet, amplifisert. PCR-fragmentene som ble ervervet på denne måten blir klonet inn i en vektor og sekvensert. Deretter blir et enkeltkjedet antistoff med en spesifisitet dannet ved hjelp av fusjons-PCR ved å sette inn en linker av (Gly4Seri)3 mellom de to variable antistoffdomenene. I en ytterligere fusjons-PCR, blir antistoff-fragmentet mot CCR5 smeltet til det allerede publiserte antistoff-fragmentet mot CD3, med en linker bestående av Gly4Seri satt inn (jfr. Mack et al. supra). Den føl-gende rekkefølgen av domenene er valgt: VL(1)-VH(1)-VH(2)-VL(2), hvor (1) er spesifisiteten mot CCR5 og (2) spesifisiteten mot CD3. By means of RT-PCR, the variable antibody domains from the hybridoma cells that form the desired antibody are amplified. The PCR fragments thus acquired are cloned into a vector and sequenced. Then, a single-chain antibody with a specificity is generated by fusion PCR by inserting a linker of (Gly4Seri)3 between the two antibody variable domains. In a further fusion PCR, the antibody fragment against CCR5 is fused to the already published antibody fragment against CD3, with a linker consisting of Gly4Seri inserted (cf. Mack et al. supra). The following order of the domains has been chosen: VL(1)-VH(1)-VH(2)-VL(2), where (1) is the specificity against CCR5 and (2) the specificity against CD3.
Eksempel 2: Ekspresjon og rensing av det bispesifikke antistoffet fra eksempel 1 Example 2: Expression and purification of the bispecific antibody from Example 1
For å uttrykke det bispesifikke antistoffet blir den korresponderende DNA-sekvensen subklonet i en eukaryotisk ekspresjonsvektor (f.eks. PEF-DHFR, Mack et al. (1995) PNAS, supra) og transfektert i DHFR-manglende CHO-celler ved hjelp av elektropo-rering. Det bispesifikke antistoffet blir renset fra supernatanten fra stabile transfekterte CHO-celler ved hjelp av affinitetskromatografi ved Ni-NTA, med eluering ved å senke pH-verdien. Deretter blir pH justert, og proteinet blir justert til en egnet konsentrasjon. To express the bispecific antibody, the corresponding DNA sequence is subcloned into a eukaryotic expression vector (eg, PEF-DHFR, Mack et al. (1995) PNAS, supra) and transfected into DHFR-deficient CHO cells by electropo -rering. The bispecific antibody is purified from the supernatant of stably transfected CHO cells by affinity chromatography on Ni-NTA, with elution by lowering the pH. The pH is then adjusted, and the protein is adjusted to a suitable concentration.
Eksempel 3: In v/ fro- tester ved blodleukocvtter og leukocytter ved betente ledd Example 3: In v/ frost tests for blood leukocytes and leukocytes in inflamed joints
For in v/fro-testene blir ledd-effusjonsvæske som inkluderer cellene, inkubert med de bispesifikke antistoffene i én eller flere dager. Etter 24 timer har CCR5-positive lymfocytter og monocytter allerede nesten forsvunnet. Når mediumet blir kontrollert etter lengere inkubering, har monocyttene differensiert til makrofager som er synlige på bun-nen av dyrkingsflasken. Etter en egnet inkubering med det bispesifikke antistoffet, er ingen makrofager synlige. For the in v/fro tests, joint effusion fluid that includes the cells is incubated with the bispecific antibodies for one or more days. After 24 hours, CCR5-positive lymphocytes and monocytes have already almost disappeared. When the medium is checked after longer incubation, the monocytes have differentiated into macrophages which are visible at the bottom of the culture flask. After a suitable incubation with the bispecific antibody, no macrophages are visible.
Et korresponderende resultat kan oppnås når dyrkede PBMC blir inkubert med det bispesifikke antistoffet. I dette tilfellet er det en fullstendig utarming av CCR5-positive monocytter og en nesten fullstendig utarming av CCR5-positive T-lymfocytter. Utarmingen av CCR5-positive T-celler og monocytter er vist i figur 7. A corresponding result can be obtained when cultured PBMCs are incubated with the bispecific antibody. In this case, there is a complete depletion of CCR5-positive monocytes and an almost complete depletion of CCR5-positive T lymphocytes. The depletion of CCR5-positive T cells and monocytes is shown in Figure 7.
Resultatene viste, i overensstemmelse med eksempel 1, at konstruksjonen fra oppfinnelsen er i stand til fullstendig å ødelegge CCRS-positive monocytter. Dette anvendes både til monocytter fra leddaspiratet og blodmonocyttene som uttrykker CCR5 når dette dif-ferensieres i makrofager. Utarming av monocytter/makrofager finner sted innenfor få antall timer (< 25 timer). Spesielt er utarmingen av monocytter/makrofager i leddet av stor fordel i terapi, siden det er disse cellene som hovedsakelig er ansvarlige for ledd-destruksjonen. Dessuten, når det gjelder aktiveringen av T-lymfocytter, kreves også en interaksjon med makrofager, slik at T-lymfocyttenes funksjon på samme tid blir under-trykket. The results showed, in accordance with Example 1, that the construct of the invention is capable of completely destroying CCRS-positive monocytes. This is used both for monocytes from the joint aspirate and the blood monocytes that express CCR5 when this is differentiated into macrophages. Depletion of monocytes/macrophages takes place within a few hours (< 25 hours). In particular, the depletion of monocytes/macrophages in the joint is of great benefit in therapy, since it is these cells that are mainly responsible for the joint destruction. Moreover, when it comes to the activation of T-lymphocytes, an interaction with macrophages is also required, so that the function of T-lymphocytes is at the same time suppressed.
I tillegg til utarmingen av moncytter/makrofager, kunne en betraktelig reduksjon i antal-let CCR5-positive T-lymfocytter observeres. In addition to the depletion of monocytes/macrophages, a considerable reduction in the number of CCR5-positive T-lymphocytes could be observed.
Claims (9)
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE19910891 | 1999-03-11 | ||
PCT/EP2000/002154 WO2000053633A2 (en) | 1999-03-11 | 2000-03-10 | Antibody and chemokine constructs that are directed to ccr5, and their use for treating autoimmune diseases |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
NO20014346D0 NO20014346D0 (en) | 2001-09-06 |
NO20014346L NO20014346L (en) | 2001-09-27 |
NO316916B1 true NO316916B1 (en) | 2004-06-21 |
Family
ID=7900625
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
NO20014346A NO316916B1 (en) | 1999-03-11 | 2001-09-06 | Use of a bispecific antibody construct targeting CCR5 and CD3 for the preparation of a pharmaceutical composition for the treatment of chronic arthritis, autoimmune diseases, allergic reactions or for the reduction of chemokine receptor expression |
Country Status (15)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP1161456B1 (en) |
JP (1) | JP2002540771A (en) |
CN (1) | CN1345336A (en) |
AT (1) | ATE286074T1 (en) |
AU (1) | AU4104700A (en) |
CA (1) | CA2366713A1 (en) |
CZ (1) | CZ20013270A3 (en) |
DE (1) | DE50009113D1 (en) |
ES (1) | ES2233359T3 (en) |
HU (1) | HUP0200484A2 (en) |
IL (1) | IL145335A0 (en) |
NO (1) | NO316916B1 (en) |
SK (1) | SK12782001A3 (en) |
TR (1) | TR200102779T2 (en) |
WO (1) | WO2000053633A2 (en) |
Families Citing this family (15)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6528625B1 (en) | 1996-10-28 | 2003-03-04 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Anti-CCR5 antibodies and kits comprising same |
WO2002020615A2 (en) * | 2000-09-08 | 2002-03-14 | Micromet Ag | Antibody and/or chemokine constructs which bind to a chemokine receptor and their use in immunological disorders |
WO2003054017A2 (en) * | 2001-12-21 | 2003-07-03 | Micromet Ag | Mono-and dual chemokine/cytokine constructs |
TW200720289A (en) | 2005-04-01 | 2007-06-01 | Hoffmann La Roche | Antibodies against CCR5 and uses thereof |
AU2007286451A1 (en) | 2006-08-17 | 2008-02-21 | F. Hoffmann-La Roche Ag | A conjugate of an antibody against CCR5 and an antifusogenic peptide |
TW200817438A (en) | 2006-08-17 | 2008-04-16 | Hoffmann La Roche | A conjugate of an antibody against CCR5 and an antifusogenic peptide |
JP4960459B2 (en) | 2006-09-29 | 2012-06-27 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲー | Antibodies against CCR5 and uses thereof |
US20090143288A1 (en) | 2007-03-13 | 2009-06-04 | Roche Palo Alto Llc | Peptide-complement conjugates |
TW202323302A (en) | 2010-11-30 | 2023-06-16 | 日商中外製藥股份有限公司 | Cytotoxicity-inducing therapeutic agent |
WO2013024022A1 (en) | 2011-08-12 | 2013-02-21 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Methods and pharmaceutical compositions for treatment of pulmonary hypertension |
JP6629187B2 (en) | 2014-04-07 | 2020-01-15 | 中外製薬株式会社 | Immune activating antigen binding molecule |
JP6894702B2 (en) | 2014-05-13 | 2021-06-30 | 中外製薬株式会社 | T cell redirection antigen-binding molecule for cells with immunosuppressive function |
US11660340B2 (en) | 2015-11-18 | 2023-05-30 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Combination therapy using T cell redirection antigen binding molecule against cell having immunosuppressing function |
JP6925278B2 (en) | 2015-11-18 | 2021-08-25 | 中外製薬株式会社 | Method of enhancing humoral immune response |
US11629196B2 (en) | 2020-04-27 | 2023-04-18 | Incelldx, Inc. | Method of treating SARS-CoV-2-associated hypercytokinemia by administering a human monoclonal antibody (PRO-140) that inhibits CCR5/CCL5 binding interactions |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6428788B1 (en) * | 1995-03-15 | 2002-08-06 | Penn State University | Compositions and methods for specifically targeting tumors |
US6528625B1 (en) * | 1996-10-28 | 2003-03-04 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Anti-CCR5 antibodies and kits comprising same |
ZA985542B (en) * | 1997-07-03 | 1999-04-07 | Smithkline Beecham Corp | Substituted benzanilides as CCR5 receptor ligands antiinflammatory agents and antiviral agents |
ATE347378T1 (en) * | 1998-07-22 | 2006-12-15 | Osprey Pharmaceuticals Ltd | CONJUGATES FOR THE TREATMENT OF INFLAMMATORY DISEASES AND ASSOCIATED TISSUE DAMAGE |
-
2000
- 2000-03-10 TR TR2001/02779T patent/TR200102779T2/en unknown
- 2000-03-10 AU AU41047/00A patent/AU4104700A/en not_active Abandoned
- 2000-03-10 EP EP00920490A patent/EP1161456B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-03-10 JP JP2000604068A patent/JP2002540771A/en active Pending
- 2000-03-10 AT AT00920490T patent/ATE286074T1/en not_active IP Right Cessation
- 2000-03-10 ES ES00920490T patent/ES2233359T3/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-03-10 WO PCT/EP2000/002154 patent/WO2000053633A2/en active IP Right Grant
- 2000-03-10 HU HU0200484A patent/HUP0200484A2/en unknown
- 2000-03-10 CZ CZ20013270A patent/CZ20013270A3/en unknown
- 2000-03-10 DE DE50009113T patent/DE50009113D1/en not_active Expired - Fee Related
- 2000-03-10 IL IL14533500A patent/IL145335A0/en unknown
- 2000-03-10 SK SK1278-2001A patent/SK12782001A3/en not_active Application Discontinuation
- 2000-03-10 CN CN00804846A patent/CN1345336A/en active Pending
- 2000-03-10 CA CA002366713A patent/CA2366713A1/en not_active Abandoned
-
2001
- 2001-09-06 NO NO20014346A patent/NO316916B1/en unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
SK12782001A3 (en) | 2002-03-05 |
CA2366713A1 (en) | 2000-09-14 |
ATE286074T1 (en) | 2005-01-15 |
WO2000053633A2 (en) | 2000-09-14 |
ES2233359T3 (en) | 2005-06-16 |
EP1161456A2 (en) | 2001-12-12 |
IL145335A0 (en) | 2002-06-30 |
CZ20013270A3 (en) | 2002-02-13 |
JP2002540771A (en) | 2002-12-03 |
NO20014346L (en) | 2001-09-27 |
TR200102779T2 (en) | 2002-03-21 |
AU4104700A (en) | 2000-09-28 |
DE50009113D1 (en) | 2005-02-03 |
NO20014346D0 (en) | 2001-09-06 |
WO2000053633A3 (en) | 2000-11-16 |
EP1161456B1 (en) | 2004-12-29 |
HUP0200484A2 (en) | 2002-06-29 |
CN1345336A (en) | 2002-04-17 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20210206858A1 (en) | Anti-b7-h6 antibody, fusion proteins, and methods of using the same | |
US11174306B2 (en) | Chimeric antigen receptor effector cell switches with humanized targeting moieties and/or optimized chimeric antigen receptor interacting domains and uses thereof | |
US10758556B2 (en) | Anthracycline-based antibody drug conjugates having high in vivo tolerability | |
CN107849148B (en) | Trispecific binding proteins and methods of use | |
JP3066983B2 (en) | Anti-CD30 antibody that prevents proteolytic cleavage and release of membrane-bound CD30 antigen | |
US20180118808A1 (en) | SWITCHABLE NON-scFv CHIMERIC RECEPTORS, SWITCHES, AND USES THEREOF | |
NO316916B1 (en) | Use of a bispecific antibody construct targeting CCR5 and CD3 for the preparation of a pharmaceutical composition for the treatment of chronic arthritis, autoimmune diseases, allergic reactions or for the reduction of chemokine receptor expression | |
EP3057994A1 (en) | Peptidic chimeric antigen receptor t cell switches and uses thereof | |
KR20120100914A (en) | Treatment of autoimmune and inflammatory diseases with epratuzumab | |
AU680685B2 (en) | Retargeting antibodies | |
AU665763B2 (en) | Interleukin receptor targeted molecules for treatment of inflammatory arthritis | |
JPH0641423B2 (en) | Cytotoxic drug composition and cytotoxic drug kit | |
EP2600882B1 (en) | ANTIBODIES AGAINST 6-SULFO-LacNAc-POSITIVE HUMAN DENDRITIC CELLS, AND THEIR USE | |
KR20220103916A (en) | Immune resistant elastin-like recombinant peptides and methods of use | |
Baeuerle | Development of T‐Cell‐Engaging Bispecific Antibody Blinatumomab (Blincyto®) for Treatment of B‐Cell Malignancies | |
WO2023061502A1 (en) | Bispecific binding molecule | |
EP4382537A1 (en) | Anti cd154 antibody and use thereof | |
JP2024527947A (en) | Anti-CD154 antibody and its uses | |
Gupta et al. | Immunomodulation by interleukin-2 receptor targeted therapy | |
JP2007530438A (en) | Anti-CR1 antibodies and compositions with reduced immunogenicity and therapeutic methods based thereon |