NO309459B1 - Ekkokontrastmiddel, samt fremgangsmåte ved fremstilling derav - Google Patents

Description

Oppfinnelsen vedrører en vandig tilberedning for opptagelse og stabilisering av mikrogassbobler til bruk som ekkokontrastmiddel, samt en fremgangsmåte ved frem-stillling av et slikt middel.

Teknikkens stand

Fordi ultralyd av gassbobler som er suspendert i væske reflekteres sterkt, ble det allerede på et tidlig tids-punkt foreslått som kontrastmiddel for ultralyddiagnostikk vandige tilberedninger som inneholder stabiliserende mirkogassbobler. Mikrogassbobler kan stabiliseres i vandige tilberedninger ved å senke overflatespenningen, dvs. ved tilsetning av egnede tensider.

I EP-B-0077752 er det angitt at vandige oppløsninger som inneholder et tensid eller en tensidblanding og i tillegg en viskositetsøkende substans har fordelaktige kontrast-frembringende egenskaper. Blant tensidene som kommer på tale er det angitt bl.a. ikke-ionogene lecitiner og leci-tinfraksjoner samt polyoksyetylenpolyoksypropylen-polymerer. I de seks fremstillingseksempler i EP-B-0077752 er det angitt tilberedninger som inneholder som tensid en polyoksyetylenpolyoksypropylen-polymer og som viskositetsøkende substans glukose eller dekstran eller selve polyoksyetylenpolyoksypropylen-polymeren. En etterprøvning av frem-stillingseksemplene har vist at den kontrastgivende virk-ning ikke er tilfredsstillende. Således er tilberedningene ifølge EP B-0077752 ikke egnet for avbildninger av venstrehjerter.

Det ble nå overraskende funnet at vandige tilberedninger som ved siden av polyoksyetylenpolyoksypropylen-polymerer inneholder negativt ladede fosfolipider, på overraskende måte egner seg for opptagelse og stabilisering av mikrogassbobler .

Beskrivelse av oppfinnelsen

Gjenstand for oppfinnelsen er således vandige tilberedninger for opptagelse og stabilisering av mikrogassbobler til bruk som ekkokontrastmidler, polyoksyetylenpolyoksypropylen-polymerer som inneholder negativt ladede fosfolipider med unntak av vandige løsninger av antistoffer eller av fysostigmin inneholdende polyoksyetylen - polyoksypropylen - polymere og fosfolipider samt med unntak av vandige løs-ninger inneholdende 0,23% (vekt/volum) polyoksyetylen - polyokrypropylen - polymere. Ytterligere gjenstander fremgår av patentkravene.

Som polyoksyetylenpolyoksypropylen-polymerer er de med en middels molekylvekt på 8350 til 14000 foretrukket. Polyok-syetyienpolyoksypropylen-polymerer betegnes som poloksame-rer og kan fås i handelen f.eks. under varmerket "Pluro-nics" (Wyandotte Chemicals Corp.). Tilberedningene ifølge oppfinnelsen inneholder 0,1 til 10 %, fortrinnsvis 1 til 5 % polyoksyetylenpolyoksypropylen-polymerer. De negativt ladede fosfolipider foreligger i en mengde på 0,01 til 5 %, fortrinnsvis 0,5 til 2 %. Prosentangivelsene refererer seg til vekt/volum.

Som negativt ladede fosfolipider kommer fosfatidylglycero-ler, fosfatidylinositoler, fosfatidyletanolaminer og fos-fatidylseriner og deres lysoformer på tale. Med lysoformer av negativt ladede fosfolipider menes de negativt ladede fosfolipider som inneholder bare en acylrest. Foretrukket er lysoformer av negativt ladede fosfolipider hvor acyl-gruppene er bundet til oksygenet av glycerolmolekylets karbohatom 1. Spesielt foretrukkede negativt ladede fosfolipider er dipalmitoylfosfatidylglycerol (DPPG) og distearoylfosfatidylglycerol (DSPG), hvorved distearoylfosfatidylglycerol (DSPG) er helt spesielt foretrukket.

Tilberedningene ifølge oppfinnelsen utmerker seg overfor teknikkens stand ved at man med små mekaniske utlegg kan frembringe ekkokontrastmidler som inneholder mikrogassbobler, som på grunn av sin store stabilitet frembringer en i lang tid vedvarende kontrast og som utmerker egner seg til avbildning av venstrehjerte. Spesielt skal det fremheves at tilberedningene ifølge oppfinnelsen egner seg utmerket til avbildning av indre oveflatestrukturer, idet mikrogassboblene øyensynlig sitter godt fast på overflaten og således, også etter spylingen av mikrogassboblene som befinner seg i lumen av kar, frembringer en opplysningsrik kontrast. Således er det f.eks. mulig å fremstille tyde-ligere hjertets dynamikk også etter utvaskningen av kon-trastmiddelet.

Fremstillingen av tilberedelsene ifølge oppfinnelsen er uproblematisk og kan skje ved at de enkelte komponenter sammen eller etter hverandre tilsettes til vann og om nødvendig oppløses under oppvarmning og omrøring. Om ønsket, kan de også steriliseres, f.eks. ved varmesterili-sering.

Som spesielt godt egnet for justeringen av isotonien av tilberedelsene ifølge oppfinnelsen, har glycerin, manitt og ammoniumsalter av aminosyrer, fortrinnsvis glycin, vist seg å være.

Frembringelsen av mikrogassbobler skjer hensiktsmessig kort før administrering til pasientene som skal undersø-kes, og foretas på i og for seg kjent måte. Hvis f.eks. tilberedelsen ifølge oppfinnelsen stilles til rådighet i en gjennomstikningsflaske, så kan oppløsningen sammen med den ønskede mengde luft trekkes opp i en vanlig sprøyte og injiseres igjen med høyest mulig trykk via en trang kanyle inn i gjennomstikningsflasken. Om nødvendig gjentas opp-trekningen og utsprøytingen flere ganger. Alternativt kan tilberedelsene ifølge oppfinnelsen også trykkes frem og tilbake mellom to sprøyter via et forbindelsesstykke med trangt tverrsnitt eller et blandingskammer som er koblet mellom de to sprøytene. Sistnevnte fremgangsmåte fører til spesielt informative ultralydbilder, hvorved resultatet samtidig forbedres ytterligere.

Som gass ved fremstilling av mirkogassboblene kommer alle fysiologisk forenlige gasser på tale. Tilberedelsene i-følge oppfinnelsen oppskummes med 0,01 til 0,1, fortrinn-vis 0,04 til 0,06 ml gass pr. 1 ml. De administreres fortrinnsvis intravenøst etter fremstilling av mikrogassboblene. Alt etter anvendelsesformål, administreres 1 til 20 ml, fortrinnsvis 2 til 8 ml, og spesielt foretrukket 5 ml av tilberedelsene ifølge oppfinnelsen.

Det skal fremheves spesielt at tilberedelsene ifølge oppfinnelsen kan doseres lavere på grunn av sin i forhold til teknikkens stand økede effektivitet.

Eksempler

1. 3,0 g polyoksyetylenpolyoksypropylen-polymer med en middels molekylvekt på 8400 ("Pluronic F68") , 1,0 g dipalmitoylfosfatidylglycerol (DPPG) og 3,6 g glycerin tilsettes til 80 ml vann. Man oppvarmer til ca. 80°C og rører til en fullstendig oppløsning har funnet sted. Etter av-kjøling fylles destillert vann opp til 100 ml. 2. Man går frem slik som i eksempel 1, med den forskjell, at det i stedet for DPPG anvendes 1,0 g soyafos-fatidylglycerol (fa. Lucas Meyer, Hamburg). 3. I 80 ml vann tilsettes 1,1 g glycin. Med fortynnet ammoniakk innstilles en pH på 6 til 7. Til oppløsningen tilsettes 3,0 g polyoksyetylenpolyoksypropylen-polymer med en middels molekylvekt på 8400 ("Pluronic F68") og 1,0 g DPPG. Man oppvarmer til ca. 80°C og rører til en fullstendig oppløsning har funnet sted. Etter avkjøling fylles destillert vann opp til 100 ml. 4. Man går frem slik som i eksempel 3, med den forskjell at det i stedet for DPPG anvendes 1,0 g soyafosfatidylgly-cerol (fa. Lucas Meyer). 5. Til 80 ml vann tilsettes 4,0 g polyoksyetylenpolyoksypropylen-polymer (Poloksamer 188, "Pluronic F68"), 1,0 g distearoylfosfatidylglycerol og 5,4 g manitt. Man oppvarmer til ca. 80°C og rører til fullstendig oppløsning er oppnådd. Etter avkjøling fylles destillert vann opp til 100 ml.

Sammenligningsforsøk

Forsøkene ble gjennomført på våkne hann-beagel-hunder (18,2-30,5 kg kroppsvekt). Hundene ble applisert 5 ml i.v. av de i det følgende beskrevne kontrastmiddeltilberednin-ger: A: En pr. 1000 ml med 35 g blandet infusjonsoppløsning som inneholder polypeptider, for plasmasubstitusjon

("Haemaccel" fra fa. Behringwerke)

B: "Echovist" (Ekkokontrastmiddel fra fa. Schering)

C: En vandig oppløsning inneholdende 4 vekt% poloksamer 188 ("Pluronic" F68) og 4 vekt% glukose (eksempel 1

i EP 0 077 752)

D: En vandig oppløsning inneholdende 2 vekt% poloksamer

og 4 vekt% glukose (eksempel 2 i EP 0 077 752)

E: En vandig oppløsning inneholdende 1 vekt% poloksamer

og 4 vekt% glukose (eksempel 3 i EP 0 077 752)

F: Tilberedning ifølge oppfinnelsen etter eksempel 5.

Oppløsningene A, C, D, E og F trekkes opp luftfritt i en første sprøyte. Denne sprøyte tilkobles deretter med den frie ende av et blandingskammer som inneholder 0,18 ml luft og som er fast forbundet med en andre sprøyte. Umid-delbart før applikasjonen pumpes oppløsningene fem ganger fra den første sprøyte via blandingskammeret inn i den andre sprøyte og tilbake igjen.

Det i handelen vanlige kontrastmiddel B tilberedes etter anvisningene på pakningsbilaget.

De ekkokardiografiske ultralydopptak ble gjennomført med et ultralydapparat Sonoscope 4 med mekanisk hode ved 3,5 MHz. Videoprintene av det erholdte ultralydbilde ble med hensyn til kontrastintensiteten bedømt densitometrisk. Det anvendte densitometer (Gretag D182) bestemmer forand-ringene i lyshet (brightness) i 100 trinn i et område på 0,00 til 2,50 tetthetsenheter (density units). Kalibrerin-gen skjer ved hjelp av det kalibreringskort etter DIN 16536 (calibration reference) som ble stilt til rådighet av produsenten, idet det for det lyseste hvitt gjelder verdien av 1,64 og for det mørkeste sort gjelder verdien 0,00. Middelet fra fire enkelte bestemmelser på en flate på 1 cm x 1 cm gir verdien for hvert dyr for den appliser-te tilberedning.

De oppnådde resultater fremgår av den etterfølgende ta-bell.

Fra resultatene fremgår at ekkokontrastmiddelet ifølge oppfinnelsen, i motsetning til ekkokontrastmidlene ifølge teknikkens stand, er 1ungetilgjengelig og egner seg således utmerket til venstrehjertediagnostikk. Anvendbarheten av ultralyd i hjertediagnostikken økes betraktelig ved hjelp av ekkokontrastmidlene ifølge oppfinnelsen.

Dessuten ble det funnet at mikroboblene av ekkokontrastmiddelet ifølge oppfinnelsen øyensynlig har en betraktelig affinitet til de indre overflater av kar og hulrom i kroppen. Dette resulterer i at omriss av kar og hulrom vises mye bedre og er dermed mere informative, enn det var mulig med kontrastmidlene ifølge teknikkens stand. Spesielt fordelaktig er det her at denne sterkt forbedrede fremstilling av overflaten av kar og hulrom også blir stående, når lumenet i kar og hulrom allerde er fritt for ekkokontrastmiddel. Denne overraskende kontrastering av overflater kan utnyttes f.eks. ved observasjon av endocar-diet.

På fig. 1 og 2 er det vist resultatet av et forsøk ved legning av denne nye kontrastering av overflatestrukturer. Fig. 1 viser det ekkokardiografiske bilde av endocardet av en våken beagle-hund i det såkalte firekammerblikk umid-delbart før fremkomsten av den første kontrast etter ad-ministrasjon av 1 ml ekkokontrastmiddel ifølge eksempel 1. Fig. 2 viser endocardet av dyret etter at ekkokontrastmiddelet igjen er vasket ut av hjertet.

Ved sammenligning av de to figurer fremgår at det med ekkokontrastmiddelet ifølge oppfinnelsen muliggjøres en uventet tegning av endocardet, som betyr en høy infor-masjonsgevist til diagnostiske formål.

Claims (9)

1. Vandig sammensetning for opptak og stabilisering av mikrogassbobler til anvendelse som ekkokontrastmiddel, karakterisert ved at det omfatter polyoksyetylen-polyoksypropylen-polymere og negativt ladede fosfolipider med unntak av vandige løsninger av antistoffer eller av fysostigmin inneholdende polyoksyetylen-polyoksypropylen-polymere og fosfolipider samt med unntak av vandige løsninger inneholdende 0,23% (vekt/volum) polyoksyetylen-polyoksypropylen-polymere.

2. Sammensetning ifølge krav 1, karakterisert ved at polyoksyetylen-polyoksypropylen-polymeren har en gjennomsnittlig molekylvekt på mellom 8350 og 14000.

3. Sammensetning ifølge krav 1, karakterisert ved at polyoksyetylen-polyoksypropylen-polymeren foreligger i en mengde på 1 til 5 % (vekt/volum).

4. Sammensetning iføgle krav 1, karakterisert ved at fosfatidyl-glyce-rol, fosfatidylinositol, fosfatidyletanolamin og/eller fosfatidylserin foreligger som negativt ladede fosfolipider.

5. Sammensetning ifølge krav 4, karakterisert ved at distearoyl-fosfa-tidylglycerol foreligger som negativt ladet fosfolipid.

6. Sammensetning ifølge krav 1, karakterisert ved at negativt ladet fosfolipid er tilstede i en mengde på 0,01 til 5 % (vekt/volum).

7. Sammensetning ifølge krav 1, karakterisert ved at den omfatter 3 % (vekt/volum) polyoksyetylen-polyoksypropylen-polymer med en gjennomsnittlig molekylvekt fra 8400 og 1 % (vekt/volum) distearolyfosfsatidylglycerol.

8. Sammensetning ifølge krav 1, karakterisert ved at det eller de negativt ladede fosfolipider er tilstede som lysoform.

9. Fremgangsmåte ved fremstilling av en vandig sammensetning for opptak og stabilisering av mikrobobler til anvendelse som ekkokontrastmiddel, karakterisert ved at polyoksyetylen-polyoksypropylen-polymer oppløses i vann i en mengde som er forskjellig fra 0,23 % (vekt/volum) sammen med et neegativt ladet fosfolipid samt øvrig hjelpestoffer for oppnåelse av isotoni.