NO302735B1

NO302735B1 - Process for the preparation of pharmaceutical liposome preparations

Info

Publication number: NO302735B1
Application number: NO911281A
Authority: NO
Inventors: Peter Schneider; Peter Van Hoogevest; Hans Georg Capraro; Ute Isele
Original assignee: Ciba Geigy Ag
Priority date: 1990-04-03
Filing date: 1991-04-02
Publication date: 1998-04-20
Also published as: KR910018014A; PT97215B; IE64990B1; ES2056617T3; ZA912425B; IE911076A1; NZ237631A; EP0451103A1; ATE108328T1; AU7404691A; HU911070D0; AU634644B2; NO911281D0; PT97215A; JPH04221316A; DE59102143D1; PH30330A; HUT59009A; HU208485B; FI911501A

Abstract

The invention relates to pharmaceutical compositions in the form of liposome dispersions which can be administered parenterally, especially intravenously, or of dry products which can be used therefor, especially lyophilisates, containing the zinc-phthalocyanine complex and synthetic, essentially pure phospholipids.

Description

Gjenstanden for foreliggende oppfinnelse er fremstillingen av farmasøytiske preparater i form av parenteralt anvendelige liposomdispersjoner. For dette formålet anvendes tørrprepar-ater inneholdende sink-ftalocyaninkomplekset og syntetiske, i det vesentlige rene fosfolipider. The object of the present invention is the production of pharmaceutical preparations in the form of parenterally usable liposome dispersions. For this purpose, dry preparations containing the zinc-phthalocyanine complex and synthetic, essentially pure phospholipids are used.

Så vel sink-f talocyaninkomplekset selv som også dets terapeutiske anvendelse innenfor den fotodynamiske kjemo-terapien ved behandlingen av tumorer, se J.D. Spikes, Photochem. Photobiol..43, 691 (1986), er kjent. Sink-ftalocyaninkomplekset administreres intraperitonealt som vandig suspensjon in vivo til mus eller rotter og det på forsøksdyrene genererte karsinom bestråles med energirikt lys, fortrinnsvis med "buntformet"-synlig lys (LASER). As well as the zinc-phthalocyanine complex itself as well as its therapeutic application within the photodynamic chemotherapy in the treatment of tumours, see J.D. Spikes, Photochem. Photobiol.. 43, 691 (1986), are known. The zinc-phthalocyanine complex is administered intraperitoneally as an aqueous suspension in vivo to mice or rats and the carcinoma generated in the experimental animals is irradiated with high-energy light, preferably with "beam-shaped" visible light (LASER).

For den humanterapeutiske anvendelsen er intraperitoneale tilførselsformer generelt problematiske på grunn av de opptredende smertene ved innstikk i bukhulen og de høye kravene til legens dyktighet. Det tilstrebes derfor en parenteral administreringsform med forbedret aksepterbarhet for pasientene, som eventuelt kan sikre en systemisk fordeling av sink-ftalocyaninkomplekset som skal tilføres. For the human therapeutic application, intraperitoneal forms of delivery are generally problematic due to the resulting pain when inserted into the abdominal cavity and the high demands on the skill of the doctor. A parenteral form of administration with improved acceptability for the patients is therefore sought, which can possibly ensure a systemic distribution of the zinc-phthalocyanine complex to be administered.

Den intravenøse tilførselsformen muliggjør en systemisk fordeling av det virksomme stoffet. De forutsetter imidlertid homogen fordeling av det virksomme stoffet i den vandige inj eksj onsvæsken. The intravenous delivery form enables a systemic distribution of the active substance. However, they require homogeneous distribution of the active substance in the aqueous injection liquid.

For fremstilling av egnede intravenøse tilførselsformer er det følgelig foreslått istedenfor det tungt oppløselige sink-ftalocyaninkomplekset å anvende dets vandige derivater og tilføre disse intravenøst, se J. Rousseau et al. Int. J. Appl. Radiat. Isot. 36. 709 (1985). For the production of suitable intravenous administration forms, it is therefore proposed instead of the poorly soluble zinc-phthalocyanine complex to use its aqueous derivatives and administer these intravenously, see J. Rousseau et al. Int. J. Appl. Radiate. Isot. 36. 709 (1985).

Innføringen av hydrofile grupper som sulfonylgrupper i porfyringitteret av sink-ftalocyaninkomplekset forhøyer vannoppløseligheten av dette komplekset. Riktignok oppnås for farmasøytisk anvendelse ubrukbare derivater med manglende standard, idet disse består av uenhetlige blandinger av mono-til tetrasubstituerte derivater med flere regioisomerer, se F.H Moser et al., The Phthalocyanines, CRC Press, 1983, bind II, side 20. Atskillelsen av de tallrike isomere derivatene ville imidlertid være urealistisk omstendelig. The introduction of hydrophilic groups such as sulfonyl groups into the porphyrin lattice of the zinc-phthalocyanine complex increases the water solubility of this complex. Admittedly, unusable derivatives with a missing standard are obtained for pharmaceutical use, as these consist of non-uniform mixtures of mono- to tetra-substituted derivatives with several regioisomers, see F.H Moser et al., The Phthalocyanines, CRC Press, 1983, vol. II, page 20. The separation of however, the numerous isomeric derivatives would be unrealistically cumbersome.

Alternativt har man foreslått å oppløseliggjøre det kjemisk rene, vannuoppløselige sink-ftalocyaninkomplekset i vandig fase ved tilsats av en bærer. Følgelig kan, med egnede oppløselighetsformidlere i form av fosfolipider, f.eks. dipalmitoylfosfatidylkolin, komplekset innkapsles i unilamellaere liposomer, som i vandig fase er vidtgående homogent dispergerbare, se E. Reddi et al., Br. J. Cancer Alternatively, it has been proposed to solubilize the chemically pure, water-insoluble zinc-phthalocyanine complex in the aqueous phase by adding a carrier. Consequently, with suitable solubility mediators in the form of phospholipids, e.g. dipalmitoylphosphatidylcholine, the complex is encapsulated in unilamellar liposomes, which in the aqueous phase are widely dispersed homogeneously, see E. Reddi et al., Br. J. Cancer

(1987), 56. sidene 597-600. (1987), 56. pages 597-600.

Denne homogene liposomdispersjonen er for intravenøs tilførsel til menneske likevel uegnet, idet dispersjonen fremstilles ved den såkalte injeksjonsmetoden under anvendelse av store mengder av det toksiske pyridinet, se G. Valduga et al., J. Inorg. Biochem..29, 59-65 (1987). Pyridin tilhører de få oppløsningsmidlene hvori sink-ftalocyaninkomplekset overhodet oppløses. Man fortynner denne opp-løsningen med etanol og injiserer den pyridinholdige etanoliske oppløsningen ved forhøyet temperatur i vann eller bufferoppløsning. Ved denne metoden vil, grunnet azeotrop-dannelse, alltid en prosentvis andel av det toksiske oppløsningsmidlet pyridin forbli i den vandige fasen. This homogeneous liposome dispersion is nevertheless unsuitable for intravenous administration to humans, as the dispersion is produced by the so-called injection method using large amounts of the toxic pyridine, see G. Valduga et al., J. Inorg. Biochem.. 29, 59-65 (1987). Pyridine belongs to the few solvents in which the zinc-phthalocyanine complex dissolves at all. This solution is diluted with ethanol and the pyridine-containing ethanolic solution is injected at an elevated temperature in water or buffer solution. With this method, due to azeotrope formation, a percentage of the toxic solvent pyridine will always remain in the aqueous phase.

Også fremstillingen av liposomdispersjoner ifølge andre fremgangsmåter uten anvendelse av organiske oppløsningsmidler er problematisk. Selv når man anvender oppløsningsmiddelfrie tørrpreparater som lyofilisater eller inndampingsrester for dannelsen av de vandige liposomdispersjonene, kan fremstillingen av disse tørrpreparatene som sådanne, på grunn av lipofilien og vannuoppløseligheten for lipidkomponentene, bare foregå fra oppløsninger i utvalgte organiske oppløsningsmidler eller oppløsningsmiddelblandinger. I disse oppløsningsmidlene må så vel sink-f talocyaninkomplekset som også de anvendte fosfolipidene være fullstendig oppløselige. Ved fordampning av oppløsningsmidlet må det dannes et homogent og risledyktig pulver. Det kan ikke finne sted noen avblanding av komponentene. Dette ville ha til følge at tørrpreparatet klebes sammen og at det ikke danner seg liposomer, men derimot dårlig dispergerbare aggregater, f.eks. store miceller, som kan forårsake embolier. The production of liposome dispersions according to other methods without the use of organic solvents is also problematic. Even when using solvent-free dry preparations such as lyophilisates or evaporation residues for the formation of the aqueous liposome dispersions, the preparation of these dry preparations as such, due to the lipophilicity and water insolubility of the lipid components, can only take place from solutions in selected organic solvents or solvent mixtures. In these solvents, both the zinc-phthalocyanine complex and the phospholipids used must be completely soluble. When the solvent evaporates, a homogeneous and free-flowing powder must be formed. No mixing of the components can take place. This would result in the dry preparation sticking together and liposomes not forming, but poorly dispersible aggregates, e.g. large micelles, which can cause emboli.

Til grunn for foreliggende oppfinnelse ligger den oppgave å fremstille en parenteral, spesielt intravenøs, anvendelig liposomdispersjon, under anvendelse av slike oppløsnings-midler som oppløser sink-ftalocyaninkomplekset og fosfolipid-komponenten fullstendig og hvor deres restmengder fra ikke fjernbare oppløsningsmiddelrester utgjør mindre enn 1 %, som for intravenøse formuleringer er toksisk ubetenkelige. The present invention is based on the task of producing a parenteral, especially intravenous, applicable liposome dispersion, using such solvents which dissolve the zinc-phthalocyanine complex and the phospholipid component completely and where their residual amounts from non-removable solvent residues amount to less than 1%, which for intravenous formulations are toxicologically harmless.

Ved foreliggende oppfinnelse tilveiebringes en fremgangsmåte for fremstilling av farmasøytiske liposompreparater inneholdende The present invention provides a method for the production of pharmaceutical liposome preparations containing

a) sink-ftalocyaninkomplekset, a) the zinc phthalocyanine complex,

b) et syntetisk, mer enn 90 56 rent fosfolipid med formel b) a synthetic, more than 90 56 pure phospholipid of formula

I IN

hvori in which

Ri betyr n-tetradecanoyl, n-heksadecanoyl eller n-oktadecanoyl og R2betyr 9-cis-heksadecenoyl eller 9-cis-oktadecenoyl, Ra, R^og Rcbetyr metyl og n betyr to, eventuelt kombinert med et Ri means n-tetradecanoyl, n-hexadecanoyl or n-octadecanoyl and R2 means 9-cis-hexadecenoyl or 9-cis-octadecenoyl, Ra, R^ and Rc are methyl and n means two, optionally combined with a

c) syntetisk, i det vesentlige rent fosfolipid med formel II c) synthetic, substantially pure phospholipid of formula II

hvori in which

R3og R4har identiske betydninger og betyr 0-cis-heksadecenoyl eller 9-cis-oktadecenoyl, n betyr én og R3 and R4 have identical meanings and mean 0-cis-hexadecenoyl or 9-cis-octadecenoyl, n means one and

Y^<+>^ er natriumionet, kjennetegnet ved at man Y^<+>^ is the sodium ion, characterized by the fact that

d) oppløser dette i et farmasøytisk godtagbart oppløs-ningsmiddel fritt for pyridin, hvis restmengde i et d) dissolves this in a pharmaceutically acceptable solvent free of pyridine, the residual amount of which in a

tørrpreparat er toksikologisk godtagbart fjerner oppløsningsmidlet eller oppløsningsmiddelblandingen og eventuelt tilsetter for parenterale administreringsformer egnede, vannoppløselige hjelpestoffer og dispergerer med dette i vandig fase, og eventuelt bufrer den oppnådde vandige dispersjonen til pE 7,0-7,8 eller isolerer en fraksjon av liposomer med et ønsket område av diameter. dry preparation is toxicologically acceptable remove the solvent or solvent mixture and optionally add water-soluble excipients suitable for parenteral administration forms and disperse with this in an aqueous phase, and optionally buffer the obtained aqueous dispersion to pE 7.0-7.8 or isolate a fraction of liposomes with a desired range of diameter.

De ovenfor og i de følgende angitte begrepene og definisjonene har innenfor rammen av foreliggende oppfinnelse fortrinnsvis følgende betydninger: Begrepet farmasøytisk preparat definerer en stoffblanding som egner seg for parenteral tilførsel, i det foreliggende tilfellet spesielt for intravenøs tilførsel, til mennesker og dyr, fortrinnsvis mennesker, og som kan anvendes for behandling av forskjellige sykdommer, i foreliggende tilfelle tumorer. The terms and definitions given above and in the following preferably have the following meanings within the scope of the present invention: The term pharmaceutical preparation defines a substance mixture suitable for parenteral administration, in the present case especially for intravenous administration, to humans and animals, preferably humans, and which can be used for the treatment of various diseases, in this case tumors.

Den parenteralt anvendelige liposomdispersjonen inneholder liposomer i form av unilamellære, multilamellære, store og små liposomer bestående av en dobbel tsj iktanordning av fosfolipidet (I) og eventuelt (II) med et innerrom og sfærisk utforming (unilamellær) eller bestående av flere konsentriske dobbeltsjiktanordninger av fosfolipidet (I) og eventuelt (II) med et innerrom og sfærisk utforming ("løkskallformet" oppbygning av dobbeltsjiktet eller membranene -multi-lamellær). Størrelsesordenen av liposomene er avhengig av fremstillingsmåten og varierer mellom 1,0 x 10"^ til 1,0 x IO-<5>m. The parenterally applicable liposome dispersion contains liposomes in the form of unilamellar, multilamellar, large and small liposomes consisting of a double layer arrangement of the phospholipid (I) and optionally (II) with an inner space and spherical design (unilamellar) or consisting of several concentric double layer arrangements of the phospholipid (I) and possibly (II) with an inner space and spherical design ("onion shell-shaped" structure of the double layer or membranes - multi-lamellar). The size order of the liposomes depends on the method of preparation and varies between 1.0 x 10"^ to 1.0 x 10-<5>m.

Den terapeutiske anvendelsen av liposomer som bærere for virksomme stoffer av forskjellige type er kjent. Følgelig har liposomer vært foreslått som bærere for proteiner, f.eks. antistoffer eller enzymer, hormoner, vitaminer eller gener eller for analytiske formål som bærere for merkede forbindelser. The therapeutic use of liposomes as carriers for active substances of various types is known. Accordingly, liposomes have been proposed as carriers for proteins, e.g. antibodies or enzymes, hormones, vitamins or genes or for analytical purposes as carriers for labeled compounds.

Farmasøytiske administreringsformer på liposombasis er beskrevet i oversiktsverket til Gregoriadis G. (utgiver) "Liposome Technology", bind II, "Incorporation of Drugs, Proteins and Genetic Material", CRC Press 1984. I oversiktsverket til Knight, C.G. (utgiver), "Liposomes: From Physical Structure to Therapeutic Applications", Elsevier 1981, er i kapittel 16 på side 166 fordelene ved en farmasøytisk administreringsform på liposombasis sammenfattet. Liposome-based pharmaceutical administration forms are described in the review of Gregoriadis G. (publisher) "Liposome Technology", Volume II, "Incorporation of Drugs, Proteins and Genetic Material", CRC Press 1984. In the review of Knight, C.G. (publisher), "Liposomes: From Physical Structure to Therapeutic Applications", Elsevier 1981, in Chapter 16 on page 166 the advantages of a liposome-based pharmaceutical administration form are summarized.

Liposomdispersjonene fremstilt ifølge foreliggende oppfinnelse er frie for faststoffpartikler og større lipidaggre-gater, lagringsstabil også ved romtemperatur i flere dager til uker, reproduserbar med hensyn på mengdeandelen av komponentene, toksisk ubetenkelig med hensyn på de anvendte 1ipidkomponentene og restmengdene av organisk oppløsnings-midler grunnet av in vitro- og in vivo-funn egnet for parenteral, spesielt intravenøs tilførsel til mennesker. The liposome dispersions produced according to the present invention are free of solid particles and larger lipid aggregates, storage stable even at room temperature for several days to weeks, reproducible with respect to the proportion of the components, toxic without concern with respect to the lipid components used and residual amounts of organic solvents due to in vitro and in vivo findings suitable for parenteral, especially intravenous administration to humans.

Det i sammenheng med organiske rester, f.eks. laverealkyl, laverealkylen, laverealkoksy, laverealkanoyl osv. anvendte uttrykket "lavere" betyr at slike organiske rester, dersom de ikke uttrykkelig er definert annerledes, inneholder til og med 7, og fortrinnsvis til og med 4 karbonatomer. In connection with organic residues, e.g. lower alkyl, lower alkylene, lower alkoxy, lower alkanoyl, etc., the term "lower" used means that such organic residues, if not expressly defined differently, contain up to 7, and preferably up to 4, carbon atoms.

Nomenklaturen for fosfolipidene med formlene I og II og nummereringen av C-atomene, foregår på grunnlag av anbefalingene gitt i Eur. J. of Biochem. 79, 11-21 (1977) "Nomenclature of Lipids" fra IUPAC-IUB Commission on Biochemical Nomenclature (CBN) (sn-nomenklatur, stereo-spesifikk nummerering). The nomenclature for the phospholipids with formulas I and II and the numbering of the C atoms is based on the recommendations given in Eur. J. of Biochem. 79, 11-21 (1977) "Nomenclature of Lipids" of the IUPAC-IUB Commission on Biochemical Nomenclature (CBN) (sn-nomenclature, stereo-specific numbering).

Sink-ftalocyaninkomplekset a) tilsvarer det i publikasjonen til G. Valduga et al. Photochem. and Photobiology, bind 48, nr. 1 (1988), side 1-5, på side 1 omtalte forbindelsen, som lenge har vært kjent. The zinc-phthalocyanine complex a) corresponds to that in the publication of G. Valduga et al. Photochem. and Photobiology, vol. 48, no. 1 (1988), pages 1-5, on page 1 discussed the compound, which has long been known.

Renheten av de syntetiske fosfolipidene med formlene I og II utgjør mer enn 90 %, men fortrinnsvis mer enn 95 vekt-56. The purity of the synthetic phospholipids of formulas I and II amounts to more than 90%, but preferably more than 95% by weight.

Denne renhetsgraden kan påvises ved kjente analytiske metoder, f.eks. kromatografisk, som f.eks. EPLC, gass-kromatografisk eller papirkromatografisk. This degree of purity can be demonstrated by known analytical methods, e.g. chromatographic, such as EPLC, gas chromatographic or paper chromatographic.

Et helt spesielt foretrukket fosfolipid med formel I er syntetisk l-n-heksadekanoyl-2-( 9-cis-oktadecenoyl)-3-sn-fosfatidylkolin med en renhet på mer enn 90 %, men fortrinnsvis mer enn 95 %. A particularly preferred phospholipid of formula I is synthetic 1-n-hexadecanoyl-2-(9-cis-octadecenoyl)-3-sn-phosphatidylcholine with a purity of more than 90%, but preferably more than 95%.

I den farmasøytisk godtagbare bærervæsken d) er komponentene In the pharmaceutically acceptable carrier liquid d) are the components

a) og b) eller a), b) og c) tilstede som liposomer, fortrinnsvis multilamellære liposomer på en slik måte at de i a) and b) or a), b) and c) present as liposomes, preferably multilamellar liposomes in such a way that they in

løpet av flere dager til uker ikke tilbakedanner faststoffer eller faste aggregater som miceller, og at den klare eller eventuelt svakt opaliserende væsken med de nevnte komponentene kan tilføres, eventuelt etter filtrering, parenteralt, fortrinnsvis intravenøst. in the course of several days to weeks does not form solids or solid aggregates such as micelles, and that the clear or possibly slightly opalescent liquid with the aforementioned components can be supplied, possibly after filtration, parenterally, preferably intravenously.

I baerervæsken d) kan f. eks. farmasøytisk godtagbare, ikke toksiske vannoppløselige hjelpestoffer være tilstede, som er nødvendige for fremstilling av isotoniske forbindelser, f.eks. isotoniske tilsatser som koksalt eller ikke-ioniske tilsatser (gitterdannere) som sorbitt, mannit, glukose eller laktose. Spesielt er disse tilsatsene, f.eks. koksalt eller mannit, tilstede i tørrpreparater i de foreskrevne mengdene, som er påkrevet for fremstilling av isotoniske betingelser for de parenteralt anvendelige oppløsningene. In the carrier fluid d) e.g. pharmaceutically acceptable, non-toxic water-soluble excipients are present, which are necessary for the preparation of isotonic compounds, e.g. isotonic additives such as table salt or non-ionic additives (lattice formers) such as sorbitol, mannitol, glucose or lactose. In particular, these additives, e.g. common salt or mannitol, present in dry preparations in the prescribed quantities, which are required to produce isotonic conditions for the parenterally usable solutions.

Egnede vannoppløselige hjelpestoffer i oppløsningen og i tørrpreparatet er dessuten for flytende farmasøytiske preparater anvendbare fuktemidler eller tensider i egentlig forstand, spesielt ikke-ioniske tensider av typen fettsyre-polyhydroksyalkoholester som sorbitanmonolaurat, -oleat, -stearat eller -palmitat, sorbitantristearat eller -trioleat, polyoksyetylen-addukter av fettsyre-polyhydroksyalkoholestere som polyoksyetylen-sorbitanmonolaurat, -oleat, -stearat, -palmitat, -tristearat eller -trioleat, polyetylenglykol-fettsyreestere som polyoksyetylstearat, polyetylenglykol-400-stearat, polyetylenglykol-2000-stearat, spesielt etylenoksyd-propylenoksyd-blokkpolymerer av typen "Pluronic" (Wyandotte Chem. Corp.) eller "Synperonic" <ICI). Suitable water-soluble excipients in the solution and in the dry preparation are, moreover, for liquid pharmaceutical preparations usable wetting agents or surfactants in the true sense, especially non-ionic surfactants of the fatty acid-polyhydroxy alcohol ester type such as sorbitan monolaurate, -oleate, -stearate or -palmitate, sorbitan tristearate or -trioleate, polyoxyethylene adducts of fatty acid polyhydroxy alcohol esters such as polyoxyethylene sorbitan monolaurate, oleate, stearate, palmitate, tristearate or trioleate, polyethylene glycol fatty acid esters such as polyoxyethyl stearate, polyethylene glycol 400 stearate, polyethylene glycol 2000 stearate, especially ethylene oxide-propylene oxide block polymers of the type "Pluronic" (Wyandotte Chem. Corp.) or "Synperonic" <ICI).

Liposomdispersjonen kan fremstilles fra et tørrpreparat som også utgjør gjenstand for foreliggende oppfinnelse. The liposome dispersion can be prepared from a dry preparation which is also the subject of the present invention.

Et tørrpreparat er den etter en hvilken som helst termisk tørkefremgangsmåte, som fordampning ved romtemperatur eller forhøyet temperatur eller fortrinnsvis frysetørking, oppnådde resten, som inneholder mindre enn 1 % (vekt) fortrinnsvis mindre enn 0,5 1o organiske oppløsningsmiddelrester som piperidin, tert-butanol eller dimetylsulfoksyd. A dry preparation is the residue obtained after any thermal drying process, such as evaporation at room temperature or elevated temperature or preferably freeze-drying, which contains less than 1% (weight) preferably less than 0.5 10 organic solvent residues such as piperidine, tert-butanol or dimethyl sulfoxide.

I tørrpreparatet er sink-ftalocyaninkomplekset tilstede i en mengde på 0,1 til 5,0 vekt-#, fortrinnsvis 0,1-1,0 vekt-£, på basis av den samlede mengden av fosfolipider med formel I og eventuelt II - komponenter b) og eventuelt c). I tørrpreparat utgjør blandforholdet mellom fosfolipidene med formel I-lecitinkomponenter - til fosfolipider med formel II-serinkomponenter - 50 til 50, uttrykt ved vekt, fortrinnsvis 70 til 30, uttrykt ved vekt. In the dry preparation, the zinc-phthalocyanine complex is present in an amount of 0.1 to 5.0 wt-#, preferably 0.1-1.0 wt-£, based on the total amount of phospholipids of formula I and optionally II - components b) and possibly c). In the dry preparation, the mixing ratio between the phospholipids with formula I lecithin components to phospholipids with formula II serine components is 50 to 50, expressed by weight, preferably 70 to 30, expressed by weight.

Tørrpreparatet fremstilt ifølge foreliggende oppfinnelse utmerker seg ved god avfyllbarhet, nøyaktig reproduserbarhet ved innveiing av doseringsenhetsformer og lagringsstabilitet. The dry preparation produced according to the present invention is distinguished by good fillability, accurate reproducibility when weighing dosage unit forms and storage stability.

De enkelte trinnene av fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen gjennomføres på i og for seg kjent måte, slik at man rekonstituerer det ifølge oppfinnelsen oppnådde tørrpre-paratet før tilførsel som liposomdispersjon i den planlagte væskemengden, spesielt i kimfritt vann (pyrogenfritt) for injeksjon. The individual steps of the method according to the invention are carried out in a manner known per se, so that the dry preparation obtained according to the invention is reconstituted before administration as a liposome dispersion in the planned amount of liquid, especially in germ-free water (pyrogen-free) for injection.

Man dispergerer, eksempelvis ved risting (f.eks. virvel-rister) eller røring, den vandige fasen som man på forhånd har tilsatt tørrpreparatet. Dannelsen av liposomer, som kan være store, små, unilamellære eller multilamellære, finner sted spontant, dvs. uten ytterligere energitilførsel utenfra og med stor hastighet. Det kan dispergeres 0,1 til 50 vekt-£ One disperses, for example by shaking (e.g. vortex shaker) or stirring, the aqueous phase which has been added to the dry preparation in advance. The formation of liposomes, which can be large, small, unilamellar or multilamellar, takes place spontaneously, i.e. without additional input of energy from the outside and at high speed. It can be dispersed from 0.1 to 50 wt.-lb

(på basis av den samlede vekten av den vandige dispersjonen), fortrinnsvis 2 til 20 vekt-£, av tørrpreparatet i vandig fase. (on the basis of the total weight of the aqueous dispersion), preferably 2 to 20 wt.-£, of the dry preparation in the aqueous phase.

Man buffrer fortrinnsvis surt eller basisk reagerende vandige dispersjoner til pH 7,0 - 7,8, fortrinnsvis pE 7,2-7,4. Eventuelt dispergerer man i en allerede til denne pE-verdien buffret, vandig bufferoppløsning. Preferably acidic or alkaline reacting aqueous dispersions are buffered to pH 7.0 - 7.8, preferably pE 7.2-7.4. Optionally, disperse in an aqueous buffer solution already buffered to this pE value.

Man dispergerer ved temperaturer under 36°C, fortrinnsvis ved romtemperatur. Eventuelt gjennomfører man fremgangsmåten under avkjøling og/eller inertgassatmosfære, f.eks. nitrogen-eller argonatmosfære. Liposomene som oppnås er bestandig i vandig fase i lang tid (inntil flere uker eller måneder). Størrelsen av de dannede liposomene er blant annet avhengig av mengden av det virksomme stoffet og 1ipidkomponentene, deres blandeforhold og konsentrasjonen av komponentene i den vandige dispersjonen og av fremstillingsmetoden. Følgelig kan man eksempelvis ved forhøyelse eller reduksjon av konsentrasjonen av 1ipidkomponentene fremstille vandige faser med en høy andel av små eller store liposomer. Disperse at temperatures below 36°C, preferably at room temperature. Optionally, the method is carried out under cooling and/or an inert gas atmosphere, e.g. nitrogen or argon atmosphere. The resulting liposomes are permanently in the aqueous phase for a long time (up to several weeks or months). The size of the formed liposomes depends, among other things, on the amount of the active substance and lipid components, their mixing ratio and the concentration of the components in the aqueous dispersion and on the method of manufacture. Consequently, for example, by increasing or decreasing the concentration of the lipid components, aqueous phases with a high proportion of small or large liposomes can be produced.

Ved etterbehandling av 1iposomdispersjonen, f.eks. ved lydbehandling med ultralyd eller ekstrudering gjennom rettporet filter (f.eks. "Nucleopore"), kan man oppnå en spesielt enhetlig størrelsesfordeling av liposomene. When finishing the 1iposome dispersion, e.g. by sonication with ultrasound or extrusion through a straight-pore filter (e.g. "Nucleopore"), a particularly uniform size distribution of the liposomes can be achieved.

Atskillelsen og isoleringen av en fraksjon av store liposomer fra en fraksjon med små liposomer, foregår, dersom den over hodet er nødvendig, ved vanlige atskillelsesfremgangsmåter, f.eks. gelfiltrering, f.eks. med "Sepharose 4B" eller "Sephacryl" (Pharmacia SE) som bærer, eller ved sedimentering av liposomene i ultrasentrifugen, f.eks. med et tyngdefelt på 160 000 x g. For eksempel avsettes etter flere timers, f.eks. ca. tre timers, sentrifugering i dette tyngdefeltet større liposomer, mens mindre liposomer forblir dispergert og kan avdekanteres. Etter flere gangers sentrifugering oppnår man en fullstendig atskillelse av de store fra de små liposomene. The separation and isolation of a fraction of large liposomes from a fraction of small liposomes takes place, if overhead is necessary, by usual separation methods, e.g. gel filtration, e.g. with "Sepharose 4B" or "Sephacryl" (Pharmacia SE) as carrier, or by sedimentation of the liposomes in the ultracentrifuge, e.g. with a gravitational field of 160,000 x g. For example, after several hours, e.g. about. three hours, centrifugation in this gravity field larger liposomes, while smaller liposomes remain dispersed and can be decanted. After several times of centrifugation, a complete separation of the large from the small liposomes is achieved.

Spesielt ved gelf iltrering kan man atskille alle i den vandige fasen foreliggende liposomene med en diameter større enn 6,0 x 10~<®>m, samt ikke innkapslede komponenter og overskytende, dispergerte lipider som foreligger i høy-molekylære aggregater, og dermed fremstille en vandig dispersjon med en fraksjon av liposomer med relativt enhetlig størrelse. Especially by gel filtration, all liposomes present in the aqueous phase with a diameter greater than 6.0 x 10~<®>m can be separated, as well as non-encapsulated components and excess, dispersed lipids present in high-molecular aggregates, and thus produce an aqueous dispersion with a fraction of liposomes of relatively uniform size.

Den foregåtte dannelsen av liposomer og deres innhold i vandig fase kan påvises på i og for seg kjent måte ved hjelp av forskjellige fysikalske målemetoder, f.eks. med fryse- nedbrutte (freeze fracture) prober og tynnsnitt i elektron-mikroskop eller ved røntgendiffraksjon, ved dynamisk lys-spredning, ved massebestemmelse av filtratet i den analytiske ultrasentrifugen eller fremfor alt spektroskopisk, f.eks. kjerneresonansspektrum (-^H, ^-^ C og 31p). The formation of liposomes that took place and their content in the aqueous phase can be detected in a manner known per se by means of various physical measurement methods, e.g. with freeze fracture probes and thin sections in an electron microscope or by X-ray diffraction, by dynamic light scattering, by mass determination of the filtrate in the analytical ultracentrifuge or above all spectroscopically, e.g. nuclear resonance spectrum (-^H, ^-^ C and 31p).

Et farmasøytisk godtagbart organisk oppløsningsmiddel, hvis restmengder er toksikologisk ubetenkelige i et tørrpreparat, egner seg for fremstilling av en klar oppløsning av sink-ftalocyaninkomplekset og eventuelt fosfolipidkomponentene (I) og (II). Dersom fosfolipidene ikke er oppløselige i det organiske oppløsningsmidlet hvori sink-ftalocyaninkomplekset er oppløselig, oppløses disse i et andre oppløsningsmiddel, f.eks. i tert-butanol, og denne oppløsningen forenes med oppløsningen av sink-ftalocyaninkomplekset. A pharmaceutically acceptable organic solvent, whose residual amounts are toxicologically harmless in a dry preparation, is suitable for preparing a clear solution of the zinc-phthalocyanine complex and possibly the phospholipid components (I) and (II). If the phospholipids are not soluble in the organic solvent in which the zinc-phthalocyanine complex is soluble, these are dissolved in a second solvent, e.g. in tert-butanol, and this solution is combined with the solution of the zinc-phthalocyanine complex.

Foretrukne organiske oppløsningsmidler som oppfyller de toksikologiske kravene til den i tørrpreparatet tilstedeværende restmengden, og hvori sink-ftalocyaninkomplekset er oppløselig, er dimetylsulfoksyd, N-metyl-2-pyrrolidon og piperidin samt blandinger derav. Preferred organic solvents which meet the toxicological requirements for the residual amount present in the dry preparation, and in which the zinc-phthalocyanine complex is soluble, are dimethylsulfoxide, N-methyl-2-pyrrolidone and piperidine and mixtures thereof.

I dimetylsulfoksyd og N-metyl-2-pyrrolidon (NMP) er bare sink-ftalocyaninkomplekset, men ikke fosfolipidene (I) og (II) oppløselige. I piperidin er såvel sink-ftalocyaninkomplekset som også fosfolipidene (I) og (II) oppløselige. Alle oppløsningsmidler er toksikologisk ubetenkelige ved i tørrpreparat tilstedeværende restmengde på mindre enn 1 fortrinnsvis mindre enn 0,5 %. In dimethylsulfoxide and N-methyl-2-pyrrolidone (NMP) only the zinc-phthalocyanine complex, but not the phospholipids (I) and (II), are soluble. Both the zinc-phthalocyanine complex and the phospholipids (I) and (II) are soluble in piperidine. All solvents are toxicologically harmless if the residual amount present in the dry preparation is less than 1, preferably less than 0.5%.

Ved anvendelse av dimetylsulfoksyd eller NMP oppløser man sink-ftalocyaninkomplekset i de påkrevde minstemengdene av dette oppløsningsmidlet og forener denne oppløsningen med en andre oppløsning av fosfolipidene, som er blandbar med den første oppløsningen av sink-ftalocyaninkomplekset. Til dette andre oppløsningsmidlet stilles, ved siden av blandbarheten med dimetylsulfoksydoppløsningen, de samme toksikologiske kravene som til de i tørrpreparat tilstedeværende restmengder. Et slikt egnet oppløsningsmiddel hvori fosfolipidene (I) og (II) oppløser seg fullstendig, er f.eks. tert-butanol. When using dimethyl sulfoxide or NMP, the zinc-phthalocyanine complex is dissolved in the required minimum amounts of this solvent and this solution is combined with a second solution of the phospholipids, which is miscible with the first solution of the zinc-phthalocyanine complex. In addition to miscibility with the dimethylsulfoxide solution, this second solvent is subject to the same toxicological requirements as for the residual amounts present in the dry preparation. Such a suitable solvent in which the phospholipids (I) and (II) dissolve completely is e.g. tert-butanol.

Fremstillingen av tørrpreparatet, fortrinnsvis lyofilisatet, kan foregå ved modifikasjon av kjente fremgangsmåter, ved at man først oppløser den på forhånd anbrakte mengden av fosfolipider, f.eks. l-heksadekanoyl-2-(9-cis-oktadecenoyl)-3-sn-fosfatidylkolin, eventuelt under lett oppvarming, i den for oppløsningsprosessen nødvendige mengden tert-butanol og forener denne klare oppløsningen med en andre oppløsning inneholdende en definert mengde av sink-ftalocyaninkomplekset i en for oppløsningsprosessen nødvendig mengde dimetylsulfoksyd eller NMP. Alternativt kan man oppløse fosfolipidene (I) og (II) ved 0°C til romtemperatur, fortrinnsvis ved 0°C, og sink-ftalocyaninkomplekset ved romtemperatur til 40°C, fortrinnsvis ved romtemperatur, i den nødvendige minstemengden piperidin eller i piperidin inneholdende inntil 10 1o, fortrinnsvis 2-3 % vann og fra denne klare oppløsningen fjerne oppløsningsmidlet for fremstilling av tørrpreparatet. Den klare oppløsningen i de nevnte organiske oppløsnings-midlene kan man deretter blande med bærervæsken d) inneholdende vannoppløselige hjelpestoffer, spesielt ikke-ioniske tilsatser som laktose. Tørrpreparatet kan man fremstille ved fjernelse av oppløsningsmiddelblandingen ved lav temperatur under ca. 0°C (lyofilisering) eller ved normal eller forhøyet temperatur (filmdannelse). Den for fremstilling av tørr-preparatet anvendte oppløsningsmiddelblanding kan også dialyseres for å oppnå rensing, og den dialyserte vandige oppløsningen, som ikke inneholder organisk oppløsningsmiddel, kan konsentreres ved ultrafiltrering. Deretter fremstiller man tørrpreparatet ved fjernelse av vann, fortrinnsvis ved lyofilisering. Utmålte mengder av oppløsningen som skal lyofiliseres kan fylles i egnede beholdere for en doseringsenhet som ampuller, f.eks. medisinflasker. De fylte be-holderne kan deretter innfryses ved -40°C til -50°C, spesielt ved -45° C, og deretter ved et trykk på 0,2 - 0,6 mbar lyofiliseres ved langsom oppvarming inntil en sluttemperatur på 25-35°C. The preparation of the dry preparation, preferably the lyophilisate, can take place by modifying known methods, by first dissolving the amount of phospholipids placed in advance, e.g. l-hexadecanoyl-2-(9-cis-octadecenoyl)-3-sn-phosphatidylcholine, possibly under slight heating, in the amount of tert-butanol required for the dissolution process and combine this clear solution with a second solution containing a defined amount of zinc- the phthalocyanine complex in a quantity of dimethylsulfoxide or NMP necessary for the dissolution process. Alternatively, one can dissolve the phospholipids (I) and (II) at 0°C to room temperature, preferably at 0°C, and the zinc-phthalocyanine complex at room temperature to 40°C, preferably at room temperature, in the required minimum amount of piperidine or in piperidine containing up to 10 1o, preferably 2-3% water and from this clear solution remove the solvent to prepare the dry preparation. The clear solution in the aforementioned organic solvents can then be mixed with the carrier liquid d) containing water-soluble excipients, especially non-ionic additives such as lactose. The dry preparation can be prepared by removing the solvent mixture at a low temperature below approx. 0°C (lyophilization) or at normal or elevated temperature (film formation). The solvent mixture used for the preparation of the dry preparation can also be dialysed to achieve purification, and the dialysed aqueous solution, which does not contain organic solvent, can be concentrated by ultrafiltration. The dry preparation is then prepared by removing water, preferably by lyophilization. Measured amounts of the solution to be lyophilized can be filled in suitable containers for a dosage unit such as ampoules, e.g. medicine bottles. The filled containers can then be frozen at -40°C to -50°C, especially at -45°C, and then at a pressure of 0.2 - 0.6 mbar lyophilized by slow heating until a final temperature of 25- 35°C.

Oppløsningsmidlet eller oppløsningsmiddelblandingen med komponentene a), b) og c) kan også overføres direkte uten termisk avkjøling i en større beholder til et tørrpreparat (filmdannelsesmetoden). Riktignok er frysetørking fra små beholdere med en doseringsenhet foretrukket, fordi denne fremgangsmåten unngår en fylleprosess for tørrpreparatet og dermed muliggjør en nøyaktig tilføring av doseringsenheter av væsker. The solvent or solvent mixture with components a), b) and c) can also be transferred directly without thermal cooling in a larger container to a dry preparation (the film formation method). Admittedly, freeze-drying from small containers with a dosage unit is preferred, because this method avoids a filling process for the dry preparation and thus enables an accurate supply of dosage units of liquids.

Overraskende lykkes det med den nevnte fremgangsmåten reproduserbart å fremstille tørrpreparater, spesielt lyofilisater, og derav rekonstituerbare liposomdispersjoner som er stabile og egnede for injeksjoner. Surprisingly, the aforementioned method succeeds in reproducibly producing dry preparations, especially lyophilisates, and from them reconstitutable liposome dispersions which are stable and suitable for injections.

Tørrpreparatene som oppnås ved fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen kan anvendes for fremstilling av intravenøst administrerbare liposomdispersjoner. Disse kan anvendes for terapeutisk behandling av det menneskelige eller animalske legemet, spesielt ved kjemoterapi for behandling av tumorer. Liposomdispersjonen administreres parenteralt, spesielt intravenøst, og karsinomet bestråles med energirikt lys, fortrinnsvis med buntet, synlig lys (LÅSER). The dry preparations obtained by the method according to the invention can be used for the preparation of intravenously administrable liposome dispersions. These can be used for therapeutic treatment of the human or animal body, especially in chemotherapy for the treatment of tumors. The liposome dispersion is administered parenterally, especially intravenously, and the carcinoma is irradiated with high-energy light, preferably with bundled, visible light (LOCKS).

Oppfinnelsen vedrører spesielt fremstillingen av farma-søytiske preparater i form av intravenøst administrerbare liposomdispersjoner inneholdende The invention relates in particular to the production of pharmaceutical preparations in the form of intravenously administrable liposome dispersions containing

a) sink-ftalocyaninkomplekset, a) the zinc phthalocyanine complex,

b) syntetisk, idet vesentlige rent l-n-heksadekanoyl-2-(9-cis-oktadecenoyl)-3-sn-fosfatidylkolin (I), b) synthetic, being essentially pure 1-n-hexadecanoyl-2-(9-cis-octadecenoyl)-3-sn-phosphatidylcholine (I),

eventuelt kombinert med possibly combined with

syntetisk, idet vesentlige rent natrium-1,2-di-(9-cis-oktadecenoyl)-3-sn-fosfatidyl-S-serin (II), og synthetic, being essentially pure sodium 1,2-di-(9-cis-octadecenoyl)-3-sn-phosphatidyl-S-serine (II), and

d) en farmasøytisk anvendbar bærervæske fri for pyridin og eventuelt, for intravenøse administreringsformer, egnede vannoppløselige hjelpestoffer. d) a pharmaceutically usable carrier liquid free of pyridine and optionally, for intravenous administration forms, suitable water-soluble excipients.

Oppfinnelsen vedrører videre fremstillingen av farmasøytiske preparater i form av intravenøst administrerbare liposomdispersjoner inneholdende The invention further relates to the production of pharmaceutical preparations in the form of intravenously administrable liposome dispersions containing

a) sink-ftalocyaninkomplekset, a) the zinc phthalocyanine complex,

b) ca. 70 vekt-56 (på basis av komponent c)) syntetisk, idet vesentlige rent l-n-heksadekanoyl-2-(9-cis-oktadecenoyl)-3-sn-fosfatidylkolin (I), kombinert b) approx. 70 wt-56 (on the basis of component c)) synthetic, being essentially pure 1-n-hexadecanoyl-2-(9-cis-octadecenoyl)-3-sn-phosphatidylcholine (I), combined

med with

c) ca. 30 vekt-56 (på basis av komponent b)) syntetisk, idet vesentlige rent natrium-1,2-di-(9-cis-oktadecenoyl)-3-sn-fosfatidyl-S-serin (II) og d) en farmasøytisk godtagbar bærervaeske og eventuelt, for intravenøse administreringsformer, egnede c) approx. 30 wt-56 (on the basis of component b)) synthetic, essentially pure sodium-1,2-di-(9-cis-octadecenoyl)-3-sn-phosphatidyl-S-serine (II) and d) a pharmaceutical acceptable carrier liquid and possibly, for intravenous forms of administration, suitable

vannoppløselige hjelpestoffer. water-soluble excipients.

De følgende eksemplene illustrerer oppfinnelsen. The following examples illustrate the invention.

Eksempel 1 Example 1

I en rundkolbe oppløses 2 ml piperidin, 1 mg sink-f talocyanin, 70 mg minst 95 56 rent l-n-heksadekanoyl-2-(9-cis-oktadecenoyl )-3-sn-fosfatidylkolin og 30 mg minst 95 56 rent 1,2-di-(9-cis-oktadecenoyl )-3-sn-fosfatidylserin. Man sterilfUtrerer denne oppløsningen over "ACRODISC"-membranfilter (2,2 x IO"<7>m) og fyller den klare oppløsningen i flasker. Dissolve 2 ml of piperidine, 1 mg of zinc phthalocyanine, 70 mg of at least 95 56 pure 1-n-hexadecanoyl-2-(9-cis-octadecenoyl )-3-sn-phosphatidylcholine and 30 mg of at least 95 56 pure 1,2 in a round flask. -di-(9-cis-octadecenoyl)-3-sn-phosphatidylserine. This solution is sterilized over an "ACRODISC" membrane filter (2.2 x 10"<7>m) and the clear solution is filled into bottles.

Etter at oppløsningen er innfrosset ved -40°C tørkes flaskene, inntil det er nådd en temperatur på 25° C, i vakuum og lukkes under argonatmosfære. After the solution is frozen at -40°C, the bottles are dried, until a temperature of 25°C is reached, in a vacuum and sealed under an argon atmosphere.

Før bruk tilsettes det til dette tørrpreparatet (lyofilisatet) ved romtemperatur med en steril sprøyte, 1,5 ml steril, kalsium- og magnesiumfri, fosfatbuffret (pH 7,2-7,4) koksaltoppløsning (Dulbecco) og flaskene ristes på en standardisert laboratorierister ("Vortex", trinn 7) i ett minutt. De dannede liposomdispersjonene kan lagres ved 4°C og egner seg for intravenøs tilførsel. Before use, 1.5 ml sterile, calcium- and magnesium-free, phosphate-buffered (pH 7.2-7.4) sodium chloride solution (Dulbecco) is added to this dry preparation (lyophilisate) at room temperature with a sterile syringe and the bottles are shaken on a standardized laboratory shaker ("Vortex", step 7) for one minute. The formed liposome dispersions can be stored at 4°C and are suitable for intravenous administration.

Eksempel 2 Example 2

I en rundkolbe oppløses i 2 ml piperidin avhengig av blanding 0,1 til 1 mg sink-f talocyanin og 15 til 400 mg av en vektblanding på sju til tre av 95 til 100 K> rent 1-n-heksadekanoyl-2-(9-cis-oktadecenoyl)-3-sn-fosfatidylkolin og 95 til 100 £ rent 1,2-di-(9-cis-oktadecenoyl)-3-sn-fosfatidylserin. Man sterilfUtrerer denne oppløsningen over "ACRODISC-membranf ilter (2,2 x 10~<7>) og fyller den klare oppløsningen i flasker. In a round-bottom flask, depending on the mixture, dissolve in 2 ml of piperidine 0.1 to 1 mg of zinc phthalocyanine and 15 to 400 mg of a mixture of seven to three by weight of 95 to 100 K> pure 1-n-hexadecanoyl-2-(9 -cis-octadecenoyl)-3-sn-phosphatidylcholine and 95 to 100 pounds of pure 1,2-di-(9-cis-octadecenoyl)-3-sn-phosphatidylserine. This solution is sterilized over "ACRODISC membrane filters (2.2 x 10~<7>) and the clear solution is filled into bottles.

Flaskene bringes til rotasjon ved 150 opm og oppløsnings-midlet blåses av i en strøm av renset, ved 1 bar filtrert nitrogen. The bottles are rotated at 150 rpm and the solvent is blown off in a stream of purified, at 1 bar, filtered nitrogen.

Deretter evakueres flaskene i vakuum ved 6,0 x 10~<2>bar. Flaskene lukkes under argon-beskyttelsesatmosfære. Før bruk tilsettes til denne fremstilte filmen ved romtemperatur med en sprøyte, 1,5 ml steril, kalsium- og magnesiumfri, fosfatbuffret (pH 7,2-7,4) koksaltoppløsning (Dulbecco) The bottles are then evacuated in a vacuum at 6.0 x 10~<2>bar. The bottles are sealed under an argon protective atmosphere. Before use, add to this prepared film at room temperature with a syringe 1.5 ml of sterile, calcium- and magnesium-free, phosphate-buffered (pH 7.2-7.4) sodium chloride solution (Dulbecco)

og flaskene ristes med en standardisert laboratorierister (trinn 7) i 10 minutter. Den dannede liposomdispersjonen kan lagres ved 4°C og egner seg for intravenøs tilførsel. and the bottles are shaken with a standardized laboratory shaker (step 7) for 10 minutes. The resulting liposome dispersion can be stored at 4°C and is suitable for intravenous administration.

Eksempel 3 Example 3

Analogt eksempel 1 kan man tørke de i eksempel 2 nevnte oppløsningene etter innfrysning i vakuum og fremstille lyofilisatet. Analogous to example 1, the solutions mentioned in example 2 can be dried after freezing in a vacuum and the lyophilisate prepared.

Eksempel 4 Example 4

Analogt eksempel 2 og 3 kan man også fremstille oppløsninger, nærmere bestemt med 5:5 til 9:1 vektblandinger av 1-n-heksadekanoyl-2-(9-cis-oktadecenoyl)-3-sn-fosfatidylkolin og 1,2-di-(9-cis-oktadecenoyl)-fosfatidylserin. Analogous to examples 2 and 3, solutions can also be prepared, specifically with 5:5 to 9:1 weight mixtures of 1-n-hexadecanoyl-2-(9-cis-octadecenoyl)-3-sn-phosphatidylcholine and 1,2-di -(9-cis-octadecenoyl)-phosphatidylserine.

Eksempel 5 Example 5

I en rundkolbe oppløses i 0,5 ml tert-butanol, 125 ml 95 % rent l-n-heksadekanoyl-2-(9-cis-oktadecenoyl )-3-sn-fosfatidylkolin (Avanti, Polar Lipids). Separat oppløses i en andre rundkolbe 0,05 mg sink-ftalocyanin i 0,5 ml sterilt dimetylsulfokyd. In a round flask, dissolve 125 ml of 95% pure 1-n-hexadecanoyl-2-(9-cis-octadecenoyl)-3-sn-phosphatidylcholine (Avanti, Polar Lipids) in 0.5 ml of tert-butanol. Separately, in a second round flask, dissolve 0.05 mg of zinc phthalocyanine in 0.5 ml of sterile dimethyl sulphokyd.

De to oppløsningene forenes og sterilfiltreres gjennom membranfilter "ACRODISC" (2,2 x IO-<7>m). Etter fylling av den klare oppløsningen i en flaske, innfryses denne ved -80°C. Flaskene tørkes i vakuum inntil en temperatur på 25°C er oppnådd og lukkes under argonatmosfære. The two solutions are combined and sterile filtered through membrane filter "ACRODISC" (2.2 x 10-<7>m). After filling the clear solution into a bottle, it is frozen at -80°C. The bottles are dried in vacuum until a temperature of 25°C is reached and sealed under an argon atmosphere.

De ytterligere fremgangsmåtetrinnene foretas analogt eksempel 1. The further process steps are carried out analogously to example 1.

Eksempel 6 Example 6

I en rundkolbe oppløses i 0,5 ml tert-butanol, 12,5 til 25 mg 95 % rent l-n-heksadekanoyl-2-(9-cis-oktadecenoyl)-3-sn-fosfatidylkolin (Avanti, Polar Lipids). Separat oppløses i en andre rundkolbe 0,05 mg sink-ftalocyanin i 0,5 ml sterilt dimetylsulfokyd. In a round flask, dissolve in 0.5 ml of tert-butanol, 12.5 to 25 mg of 95% pure 1-n-hexadecanoyl-2-(9-cis-octadecenoyl)-3-sn-phosphatidylcholine (Avanti, Polar Lipids). Separately, in a second round flask, dissolve 0.05 mg of zinc phthalocyanine in 0.5 ml of sterile dimethyl sulphokyd.

Analogt eksempel 5 forenes begge oppløsningene, sterilfiltreres over "ACRODISC" og fylles i flasker. Flaskene bringes til rotasjon ved 150 opm og oppløsningsmidlet blåses av i en strøm av renset, ved 1 bar filtrert nitrogen. Deretter evakueres flaskene i vakuum ved 6,0 x 10"^ mbar. Flaskene lukkes under argon-beskyttelsesgassatmosfære. Analogous to example 5, both solutions are combined, sterile filtered over "ACRODISC" and filled into bottles. The bottles are rotated at 150 rpm and the solvent is blown off in a stream of purified, at 1 bar, filtered nitrogen. The bottles are then evacuated under vacuum at 6.0 x 10"^ mbar. The bottles are sealed under an argon protective gas atmosphere.

De ytterligere fremgangsmåtetrinnene foregår analogt eksempel 2. The further process steps take place analogously to example 2.

Eksempel 7 Example 7

I en rundkolbe oppløses 1 ml sterilt piperidin, 0,5 mg sink-f talocyanin og 250 mg 95 % rent l-n-heksadekanoyl-2-( 9-cis-oktadecenoyl )-3-sn-fosfatidylkolin. Man sterilfUtrerer denne oppløsningen over "ACRODISC "-membranf ilter (2,2 x 10~<7>m) og fyller den klare oppløsningen i flasker. In a round flask, dissolve 1 ml of sterile piperidine, 0.5 mg of zinc phthalocyanine and 250 mg of 95% pure 1-n-hexadecanoyl-2-(9-cis-octadecenoyl)-3-sn-phosphatidylcholine. This solution is sterilized over "ACRODISC" membrane filters (2.2 x 10~<7>m) and the clear solution is filled into bottles.

Analogt eksempel 5 kan man fremstille et lyofilisat eller valgfritt analogt eksempel 6 en filmrest som deretter overføres til en intravenøs administrerbar liposomdispersjon analogt eksempel 1 eller 2. Analogous to example 5, a lyophilisate can be prepared or, optionally analogous to example 6, a film residue which is then transferred to an intravenously administrable liposome dispersion analogous to example 1 or 2.

Eksempel 8 Example 8

Analogt eksempel 7 kan det fremstilles et lyofilisat eller en filmrest ved oppløsning av 3 mg sink-f talocyanin i 1 ml sterilt piperidin. Fra dette tørrpreparatet fremstilles det deretter, analogt eksempel 1 eller 2, en intravenøs administrerbar liposomdispersjon. Analogously to example 7, a lyophilizate or a film residue can be prepared by dissolving 3 mg of zinc phthalocyanine in 1 ml of sterile piperidine. From this dry preparation, an intravenously administrable liposome dispersion is then prepared, analogously to example 1 or 2.

Eksempel 9 Example 9

I en målekolbe oppløses ved romtemperatur i 400 ml piperidin-puriss avhengig av blanding, 200-400 mg sink-ftalocyanin og fylles til 500 ml. I en andre kolbe oppløses avhengig av blanding, 120-240 mg av en vektblanding 7:3 av 95-100 # rent 1-n-heksadekanoyl-2-(9-cis-oktadecenoyl)-3-sn-fosfatidylkolin og 95-100 % rent 1,2-di-(9-cis-oktadecenoyl)-3-sn-f osf at idyl-S-serin i 6 ml piperidin-puriss, og blandes med 6-12 ml av den ovenfor angitte sink-ftalocyaninoppløsningen. Oppløsningen sterilfiltreres over "ACRODISC"-membranfilter (2,2 x IO-<7>) og den klare oppløsningen fylles i flasker. In a measuring flask, dissolve 200-400 mg of zinc phthalocyanine at room temperature in 400 ml of piperidine puree, depending on the mixture, and fill to 500 ml. In a second flask, depending on the mixture, dissolve 120-240 mg of a 7:3 weight mixture of 95-100 # pure 1-n-hexadecanoyl-2-(9-cis-octadecenoyl)-3-sn-phosphatidylcholine and 95-100 % of pure 1,2-di-(9-cis-octadecenoyl)-3-sn-phosphatyl-S-serine in 6 ml of piperidine puree, and mixed with 6-12 ml of the zinc phthalocyanine solution indicated above. The solution is sterile filtered over "ACRODISC" membrane filter (2.2 x IO-<7>) and the clear solution is filled into bottles.

De ytterligere fremgangsmåtetrinnene foregår analogt eksempel 1. The further process steps take place analogously to example 1.

Eksempel 10 Example 10

I en målekolbe oppløses ved romtemperatur i 400 ml piperidin-puriss avhengig av blanding, 200-400 mg sink-ftalocyanin og fylles til 500 ml. I en andre kolbe oppløses avhengig av blanding, 120-240 mg av en vektblanding 7:3 av 95-100 % rent 1-n-heksadekanoyl-2-(9-cis-oktadecenoyl)-3-sn-fosfatidylkolin og 95-100 1o rent 1,2-di-(9-cis-oktadecenoyl)-3-sn-fosfatidyl-S-serin i 6 ml av en piperidin/vann-blanding (2-10 %) ved 0-4"C og ved denne temperaturen tilsettes det dråpevis 6-12 ml av den ovenfor nevnte sink-ftalocyanin-oppløsningen. Oppløsningen sterilfiltreres over "ACRODISC"-membranfilter (2,2 x 10~<7>) og den klare oppløsningen fylles i flasker. In a measuring flask, dissolve 200-400 mg of zinc phthalocyanine at room temperature in 400 ml of piperidine puree, depending on the mixture, and fill to 500 ml. In a second flask, depending on the mixture, dissolve 120-240 mg of a 7:3 weight mixture of 95-100% pure 1-n-hexadecanoyl-2-(9-cis-octadecenoyl)-3-sn-phosphatidylcholine and 95-100 1o pure 1,2-di-(9-cis-octadecenoyl)-3-sn-phosphatidyl-S-serine in 6 ml of a piperidine/water mixture (2-10%) at 0-4"C and at this temperature, 6-12 ml of the above-mentioned zinc phthalocyanine solution are added dropwise.

Eksempel 11 Example 11

En ifølge eksempel 9 eller eksempel 10 fremstilte oppløsning av sink-ftalocyanin og lipidblanding fylles etter steril-filtrering ikke i flasker, men lyofiliseres isteden i en porsjonsfremgangsmåte. Like store mengder av dette lyofilisatet overføres analogt eksempel 1 til en liposomdispersjon. A solution of zinc phthalocyanine and lipid mixture prepared according to example 9 or example 10 is not filled after sterile filtration into bottles, but is instead lyophilized in a batch method. Similar amounts of this lyophilisate are transferred analogously to example 1 into a liposome dispersion.

Eksempel 12 Example 12

1 en rundkolbe oppløses i 205 ml nydestillert piperidin, 100 mg sink-ftalocyanin, 7 000 mg 95 % rent 1-n-heksa-dekanoyl-2-(9-cis-oktadekanoyl)-3-sn-fosfatidyl-kolin (P0PC ) og 3 000 mg 95 % rent natrium-1,2-di(9-cis-oktadekanoyl)-3-sn-fosfatidyl-S-serin (00PS). 1 a round bottom flask is dissolved in 205 ml freshly distilled piperidine, 100 mg zinc phthalocyanine, 7,000 mg 95% pure 1-n-hexa-decanoyl-2-(9-cis-octadecanoyl)-3-sn-phosphatidyl-choline (P0PC ) and 3,000 mg of 95% pure sodium 1,2-di(9-cis-octadecanoyl)-3-sn-phosphatidyl-S-serine (00PS).

Denne oppløsningen tilsettes under omrøring 2 000 ml 9,75 % vekt/volum vandig laktoseoppløsning. Etter at pH-verdien ved hjelp av tilsats av fortynnet HC1 er innstilt på 7,0, konsentreres den dannede dispersjonen ved hjelp av et "Millipore Minitan" tangensielt dialyseapparat inntil en konsentrasjon på 0,5 mg Zn-ftalocyanin/ml og dialyseres mot 2 000 ml 9,75 # laktose. 2,000 ml of 9.75% weight/volume aqueous lactose solution is added to this solution while stirring. After the pH has been adjusted to 7.0 by the addition of dilute HCl, the resulting dispersion is concentrated using a "Millipore Minitan" tangential dialyzer to a concentration of 0.5 mg Zn-phthalocyanine/ml and dialyzed against 2 000 ml 9.75 # lactose.

Den dannede laktoseholdige dispersjonen blir så steril-filtrert ved hjelp av "ACRODISC "-membranf ilter (2,2 x IO"<7>) og fylt 1 flasker (2 ml pr. flaske Inneholdende 1 mg Zn-ftalocyanin). Etter at dispersjonen er nedfrosset ved -40°C, tørkes flaskene inntil det er oppnådd en temperatur på 25°C i vakuum og lukkes under argonatmosfære. The resulting lactose-containing dispersion is then sterile-filtered using "ACRODISC" membrane filters (2.2 x 10"<7>) and filled into 1 bottles (2 ml per bottle containing 1 mg of Zn-phthalocyanine). After the dispersion is frozen at -40°C, the bottles are dried until a temperature of 25°C is reached in vacuum and sealed under an argon atmosphere.

De dannede tørrpreparatene er lagringsdyktige i flere år ved 4°C. The dry preparations formed can be stored for several years at 4°C.

Før tilførselen injiseres i et tørrpreparat (lyofilisat) i en flaske ved romtemperatur, 2,0 ml vann med en steril sprøyte. Etter en maksimal oppløsningstid på ett minutt dannes en liposomdispersjon som egner seg for intravenøs tilførsel. Before administration, inject into a dry preparation (lyophilisate) in a bottle at room temperature, 2.0 ml of water with a sterile syringe. After a maximum dissolution time of one minute, a liposome dispersion suitable for intravenous administration is formed.

Eksempel 13 Example 13

Analogt eksempel 12 kan man gjennomføre fremgangsmåten med 10 000 mg P0PC. Analogous to example 12, the method can be carried out with 10,000 mg of P0PC.

Eksempel 14 Example 14

Analogt eksempel 13 kan man gjennomføre fremgangsmåten med 300 mg P0PC eller 210 mg P0PC og 90 mg 00PS. Analogous to example 13, the method can be carried out with 300 mg of P0PC or 210 mg of P0PC and 90 mg of 00PS.

Eksempel 15 Example 15

I en kolbe oppløses 35 g POPC og 15 g OOPS i 500 ml tert-butanol under omrøring ved 40° C. I en ytterligere kolbe oppløses 0,5 g sink-ftalocyanin i 125 ml NMP (ultralydbad). In a flask, 35 g of POPC and 15 g of OOPS are dissolved in 500 ml of tert-butanol while stirring at 40° C. In a further flask, 0.5 g of zinc phthalocyanine is dissolved in 125 ml of NMP (ultrasonic bath).

Begge oppløsningene blandes, hvorved fargestoffoppløsningen helles inn i tert-butanoloppløsningen. Blandingen oppvarmes til 40"C for å oppnå en klar oppløsning. Denne oppløsningen blandes ved hjelp av en dynamisk blander med 10 liter laktosemedium, som er avkjølt til 4°C og pr. liter inneholder 94,9 g laktose for injeksjon og 24 g NaCl. Both solutions are mixed, whereby the dye solution is poured into the tert-butanol solution. The mixture is heated to 40°C to obtain a clear solution. This solution is mixed using a dynamic mixer with 10 liters of lactose medium, which is cooled to 4°C and per liter contains 94.9 g of lactose for injection and 24 g of NaCl .

Den organiske fasen pumpes med en hastighet på 107 ml/min, laktoseoppløsningen med 1 714 ml/min inn i den dynamiske blanderen som drives med 3 bar trykk. The organic phase is pumped at a rate of 107 ml/min, the lactose solution at 1,714 ml/min into the dynamic mixer operated at 3 bar pressure.

Den dannede blå, lett opaliserende dispersjonen (10 625 ml) konsentreres ved hjelp av et millipore tangensielt dialyseapparat til 1 liter, og dialyseres deretter mot 10 liter laktosemedium. The resulting blue, slightly opalescent dispersion (10,625 ml) is concentrated using a millipore tangential dialyzer to 1 liter, and then dialyzed against 10 liters of lactose medium.

Den videre fremgangsmåten er beskrevet i eksempel 12. The further procedure is described in example 12.

Eksempel 16 Example 16

Analogt eksempel 15 oppløses 3,5 g POPC og 1,5 g OOPS i 100 ml t-butanol og blandes med 25 ml NMP og 100 mg sink-ftalocyanin. Den organiske fasen blandes så med 2 1 laktosemedium (25 g laktose og 0,064 g NaCl pr. liter). Dialysemediet har den samme sammensetningen. Analogous to example 15, 3.5 g of POPC and 1.5 g of OOPS are dissolved in 100 ml of t-butanol and mixed with 25 ml of NMP and 100 mg of zinc phthalocyanine. The organic phase is then mixed with 2 1 lactose medium (25 g lactose and 0.064 g NaCl per litre). The dialysis medium has the same composition.

Eksempel 17 Example 17

Analogt eksempel 16 blandes den organiske fasen med 2 1 laktosemedium inneholdende 50 g laktose og 0,127 g NaCl pr. liter. Analogous to example 16, the organic phase is mixed with 2 1 of lactose medium containing 50 g of lactose and 0.127 g of NaCl per litres.

Eksempel 18 Example 18

Analogt eksempel 15 oppløses 10,5 g POPC og 4,5 g OOPS i 200 ml t-butanol og blandes med 50 ml NMP med 200 mg sink-ftalocyanin. Den organiske fasen blandes med 4 1 laktosemedium inneholdende 37,5 g laktose og 0,095 g NaCl pr. liter. Dialysemediet har den samme sammensetningen. Analogously to example 15, 10.5 g of POPC and 4.5 g of OOPS are dissolved in 200 ml of t-butanol and mixed with 50 ml of NMP with 200 mg of zinc phthalocyanine. The organic phase is mixed with 4 1 lactose medium containing 37.5 g lactose and 0.095 g NaCl per litres. The dialysis medium has the same composition.

Eksempel 19 Example 19

Analogt eksempel 18 blandes den organiske fasen med 4 1 laktoseoppløsning inneholdende 75 g laktose og 0,1905 g NaCl pr. liter. Dialysemediet har den samme sammensetningen. Analogous to example 18, the organic phase is mixed with 4 1 of lactose solution containing 75 g of lactose and 0.1905 g of NaCl per litres. The dialysis medium has the same composition.

Eksempel 20 Example 20

Analogt eksempel 15 oppløses 3,5 g POPC og 1,5 g OOPS i 200 ml t-butanol og blandes med 50 ml NMP med 200 mg sink-ftalocyanin. Den organiske fasen blandes med 4 1 laktosemedium inneholdende 25 g laktose og 0,064 g NaCl pr. liter. Dialysemediet har samme sammensetning. Analogous to example 15, 3.5 g of POPC and 1.5 g of OOPS are dissolved in 200 ml of t-butanol and mixed with 50 ml of NMP with 200 mg of zinc phthalocyanine. The organic phase is mixed with 4 1 of lactose medium containing 25 g of lactose and 0.064 g of NaCl per litres. The dialysis medium has the same composition.

Claims

1. Process for the production of pharmaceutical liposome preparations containing a) the zinc-phthalocyanine complex, b) a synthetic, more than 90% pure phospholipid of formula IN

in which Ri means n-tetradecanoyl, n-hexadecanoyl or n-octadecanoyl and R2 means 9-cis-hexadecenoyl or 9-cis-octadecenoyl, Ra, Rt and Rc are methyl and n means two, possibly combined with a c) synthetic, essentially pure phospholipid with formula II

in which R3 and R4 have identical meanings and mean 0-cis-hexadecenoyl or 9-cis-octadecenoyl, n means one and Y^<+>^ is the sodium ion, characterized by d) dissolving this in a pharmaceutically acceptable solvent free of pyridine, if residual amount in a dry preparation is toxicologically acceptable, remove the solvent or solvent mixture and optionally add water-soluble excipients suitable for parenteral administration forms and disperse with this in an aqueous phase, and optionally buffer the obtained aqueous dispersion to pH 7.0-7.8 or isolates a fraction of liposomes with a desired range of diameter.

2. Process for the production of pharmaceutical preparations according to claim 1 in the form of a dry preparation, containing a) the zinc-phthalocyanine complex, b) synthetic, essentially pure 1-n-hexadecanoyl-2-(9-cis-octadecenoyl)-3-sn-phosphatidylcholine ( I), optionally combined with synthetic, substantially pure sodium-1,2-di-(9-cis-octadecenoyl)-3-sn-phosphatidyl-S-serine (II), and d) a pharmaceutically acceptable carrier liquid free of pyridine and possibly water-soluble excipients suitable for intravenous administration, characterized by carrying out the features specified in claim 1.

3. Process for the production of pharmaceutical preparations according to claim 1 in the form of a dry preparation, containing a) the zinc-phthalocyanine complex, b) approx. 70% by weight (relative to component c)) synthetic, essentially pure 1-n-hexadecanoyl-2-(9-cis-octadecenoyl)-3-sn-phosphatidylcholine (I), combined with c) approx. 30 wt-# (relative to component b)) synthetic, essentially pure sodium-1,2-di-(9-cis-octadecenoyl)-3-sn-phosphatidyl-S-serine (II), and d ) a pharmaceutically acceptable carrier liquid and possibly water-soluble excipients suitable for intravenous administration forms, characterized by carrying out the moves specified in claim 1.

4. Process according to claim 3, characterized by dissolving a) the zinc-phthalocyanine complex, b) the phospholipid of formula I and optionally c) the phospholipid of formula II in piperidine.