NO167305B - PROCEDURE FOR MANUFACTURING GAMMA GLOBULINES FOR INTRAVENOES ADMINISTRATION. - Google Patents
PROCEDURE FOR MANUFACTURING GAMMA GLOBULINES FOR INTRAVENOES ADMINISTRATION. Download PDFInfo
- Publication number
- NO167305B NO167305B NO870235A NO870235A NO167305B NO 167305 B NO167305 B NO 167305B NO 870235 A NO870235 A NO 870235A NO 870235 A NO870235 A NO 870235A NO 167305 B NO167305 B NO 167305B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- carried out
- value
- globulins
- pepsin
- treatment
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 24
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 7
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 26
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 13
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 13
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 13
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 12
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 12
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 claims description 10
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 claims description 10
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 claims description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 9
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 claims description 8
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 claims description 7
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 6
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 6
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 6
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 5
- 108010088842 Fibrinolysin Proteins 0.000 claims description 4
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 4
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 4
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 4
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 claims description 3
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 claims description 3
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims description 3
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 claims description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 2
- 229940001501 fibrinolysin Drugs 0.000 claims description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 18
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 9
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- 230000003171 anti-complementary effect Effects 0.000 description 5
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 4
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 4
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 4
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 4
- 108010071241 Factor XIIa Proteins 0.000 description 3
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 3
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 3
- 108060005987 Kallikrein Proteins 0.000 description 3
- 102000001399 Kallikrein Human genes 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 3
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 2
- 229940012957 plasmin Drugs 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 206010002199 Anaphylactic shock Diseases 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 208000001953 Hypotension Diseases 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 1
- 108090000113 Plasma Kallikrein Proteins 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 230000029936 alkylation Effects 0.000 description 1
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- 208000003455 anaphylaxis Diseases 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000000963 caseinolytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 1
- 239000012471 diafiltration solution Substances 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 208000021822 hypotensive Diseases 0.000 description 1
- 230000001077 hypotensive effect Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 230000003169 placental effect Effects 0.000 description 1
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000001698 pyrogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse angår en fremgangsmåte for fremstilling av *y-globuliner som kan administreres intravenøst. The present invention relates to a method for the production of *γ-globulins which can be administered intravenously.
Det foreligger idag på markedet et visst antall preparater av •y-globuliner oppnådd ved forskjellige prosesser og samtidig oppviser de kvaliteter og de mangler som følger med disse prosesser. There are today on the market a certain number of preparations of •y-globulins obtained by various processes and at the same time they exhibit the qualities and the deficiencies that come with these processes.
Blant manglene som disse prosesser tar sikte på om mulig å redusere, er den meget vesentlige evnen til komplementaktive-ring som kan medføre reaksjoner som går helt til anafylaktisk sjokk. På generell måte skyldes denne antikomplementære evne nærværet av globulinaggregater som er inherente ved forskjellige fremstillingsprosesser og spesielt ved alkoholiske fraksjoneringstrinn. Among the deficiencies that these processes aim to reduce, if possible, is the very significant ability for complement activation, which can cause reactions that go all the way to anaphylactic shock. In general, this anti-complementary ability is due to the presence of globulin aggregates inherent in various manufacturing processes and especially in alcoholic fractionation steps.
Dette er grunnen til at det allerede er utviklet forskjellige fremstillingsprosesser som søker å undertrykke eller i det minste å redusere denne mangel. This is why various manufacturing processes have already been developed that seek to suppress or at least reduce this deficiency.
En første prosess søker å eliminere disse aggregater og består i å gjennomføre en pepsinfermentering av -Yglobu-linpreparatet for å fremtvinge en oppbrytning av de lange kjeder nær bindingen mellom fraksjonene Fab og Fc, se for eksempel FR-PS 2 433 342. A first process seeks to eliminate these aggregates and consists in carrying out a pepsin fermentation of the -Yglobulin preparation to force a break-up of the long chains near the bond between the fractions Fab and Fc, see for example FR-PS 2 433 342.
En annen mulighet som har vært benyttet av foreliggende søker består i å behandle et 'Y-globulinpreparat med plasmin for å fremtvinge en fermentering som bevarer en vesentlig prosent-andel (30 - 505É) av -y-globulinet intakt og som gir Fab- og Fc-fragmenter. Dette preparat er aktivt og godt tolerer-bart. Another possibility that has been used by the present applicant consists in treating a 'Y-globulin preparation with plasmin to force a fermentation which preserves a significant percentage (30 - 505É) of the -y-globulin intact and which gives Fab- and Fc fragments. This preparation is active and well tolerated.
Disse forskjellige prosesser som søker å redusere den antikomplementære virkning oppviser imidlertid mangelen med en større eller mindre fremtvunget fermentering av y-globulinene og består i prinsippet av å søke et kompromiss mellom uskadellgheten og aktiviteten til preparatet. Man kan likeledes henvise til forskjellige fremstillingsprosesser som gir kjemisk modifiserte -y-globuliner: alkylering, reduksjon, sulfonering. However, these various processes which seek to reduce the anticomplementary effect exhibit the deficiency of a more or less forced fermentation of the γ-globulins and consist in principle of seeking a compromise between the harmlessness and the activity of the preparation. One can also refer to different manufacturing processes that give chemically modified -γ-globulins: alkylation, reduction, sulphonation.
FR-PS 2 301 266 anbefaler ikke å gjennomføre enzymatisk behandling, spesielt med pepsin, av -y-globuliner, men lstedet å gjennomføre en fraksjonering med polyetylenglykolet. FR-PS 2 301 266 does not recommend carrying out enzymatic treatment, especially with pepsin, of -γ-globulins, but instead carrying out a fractionation with the polyethylene glycol.
Videre er det påpekt en fremgangsmåte for fremstilling av -y-globuliner ved fraksjonering med polyetylenglykol,. P.E.G., som oppviser denne fordel at man reduserer dannelsen av aggregater eller eliminerer dannelsen, mens man beholder globulinene intakt. Furthermore, a method for the production of -γ-globulins by fractionation with polyethylene glycol has been pointed out. P.E.G., which has the advantage of reducing or eliminating the formation of aggregates, while keeping the globulins intact.
Selv om, om enn i forskjellig grad, de forskjellige prosesser som er beskrevet ovenfor, kan gi sjokkfaktorer ved aktivering av kallicrein-bradykininsystemet, synes disse faktorer forbundet med en restmengde av prekalikreinaktivator. Although, albeit to varying degrees, the various processes described above may produce shock factors by activation of the kallikrein-bradykinin system, these factors appear to be associated with a residual amount of prekallikrein activator.
En annen teknikk som tillater å oppnå "y-globuliner med god kvalitet består i å gjennomføre en behandling ved sur pH-verdi i nærvær av små mengder pepsin, se for eksempel J.J. Walsh: "Purification of normal immunoglobulin for intravenous use". DEVELOP. BIOL. STAND. 1974, 27, 31-6. Imidlertid forblir det fremdeles aggregater og dimerer i en relativt vesentlig mengde. Another technique which allows to obtain "y-globulins of good quality consists in carrying out a treatment at acidic pH value in the presence of small amounts of pepsin, see for example J.J. Walsh: "Purification of normal immunoglobulin for intravenous use". DEVELOP. BIOL. STAND. 1974, 27, 31-6. However, aggregates and dimers still remain in a relatively significant amount.
Man har likeledes i EP-PS 0 120 835 foreslått å unngå å benytte pepslnbehandling eller plasminbehandling, uansett om disse enzymer er uoppløselige eller ikke, for derved å foreslå en fermentering med pankreatiske enzymer ledsaget av en behandling med polyetylenglykol med relativt høy konsentrasjon. Imidlertid er dette *y-globulin ikke ekvilibrert i underklasser. It has also been proposed in EP-PS 0 120 835 to avoid using pepsin treatment or plasmin treatment, regardless of whether these enzymes are insoluble or not, thereby proposing a fermentation with pancreatic enzymes accompanied by a treatment with relatively high concentration polyethylene glycol. However, this *γ-globulin is not equilibrated in subclasses.
Fremgangsmåten som, anvendt på -y-globulinpreparater fremstilt ved en fraksjonering og med små mengder PEG eller analoge substanser, forbedrer disse preparater ved spesielt å redusere den antikomplementære virkning, mengden av kallicrein og prekallicreinaktivator samt restmengde PEG. The method which, applied to -γ-globulin preparations prepared by a fractionation and with small amounts of PEG or analogous substances, improves these preparations by particularly reducing the anticomplementary effect, the amount of kallikrein and prekallikrein activator as well as the residual amount of PEG.
Foreliggende oppfinnelse angår således en fremgangsmåte for fremstilling av, på intravenøs måte, administrerbare -y-globuliner fra utgangsserumfraksjoner rike på -y-globuliner, og denne fremgangsmåte karakteriseres ved at den omfatter et trinn med fraksjonering ved hjelp av polyetylenglykol og et trinn med mild enzymatisk behandling i 10 timer til 10 dager alt etter enzymmengde, ved hjelp av et enzym valgt blant pepsiner, fibrinolyciner og papainer, ved en pH-verdi som på i og for seg kjent måte tilpasses enzymet som benyttes, og eventuelt et trinn med ultrafIltrering for å konsentrere proteiner og så en diafiltrering for å eliminere PEG. The present invention thus relates to a method for the production of intravenously administrable -y-globulins from starting serum fractions rich in -y-globulins, and this method is characterized by the fact that it comprises a step of fractionation using polyethylene glycol and a step of mild enzymatic treatment for 10 hours to 10 days, depending on the amount of enzyme, using an enzyme selected from among pepsins, fibrinolycins and papains, at a pH value which is adapted in a manner known per se to the enzyme used, and possibly a step of ultrafiltration to concentrate proteins and then a diafiltration to eliminate PEG.
Enzymet som benyttes velges blant pepsiner, fibrinolyciner (plasmln) og papainer. The enzyme used is chosen from among pepsins, fibrinolycins (plasmln) and papains.
TJtgangsmaterialet er en utgangsserumf raks Jon som er rik på -y-globuliner som "fraksjon II teknikk 6,9" ifølge Cohn, kjent for å gi produkter frie for hepatitt, eller en placentautgangsfraksjon som "fraksjon teknikk 6,9" ifølge Cohn, modifisert av Taylor. Denne fraksjon har en IgG-renhet på over eller lik 90St. Den kan inneholde variable mengder albumin som kan gå opptil 1056. The starting material is a starting serum fraction rich in -γ-globulins such as "fraction II technique 6.9" according to Cohn, known to give products free of hepatitis, or a starting placental fraction such as "fraction technique 6.9" according to Cohn, modified by Taylor. This fraction has an IgG purity of over or equal to 90St. It can contain variable amounts of albumin that can go up to 1056.
Eksempel 1: Example 1:
1 - Preclpiterlng med PEG: 1 - Preparation with PEG:
TJtgangsmaterialet består i en oppløsning av precipitat og en klaring av denne oppløsning, en oppløsning som generelt inneholder 1 - 4# proteiner. Man fortsetter med et utfellingstrinn med tilsetning av polyetylenglykol, PEG, med molekylvekt 4.000, for å oppnå en PEG-konsentrasjon på 5S6. pH-verdien justeres til 5,8 ved tilsetning av 1 N eddiksyre eller 0,1 N HC1 hvorved temperaturen holdes mellom 0 og 4<*>C. Ionestyrken er meget lav, i størrelsesorden 0,02. Man oppnår således et presipltat som inneholder aggregater som man separerer fra oppløsningen ved enkel dekanterlng, ved filtrering eller ved sentrifugering. Presipitatet elimineres . The starting material consists of a solution of precipitate and a clarification of this solution, a solution which generally contains 1 - 4# proteins. One continues with a precipitation step with the addition of polyethylene glycol, PEG, with a molecular weight of 4,000, to achieve a PEG concentration of 5S6. The pH value is adjusted to 5.8 by adding 1 N acetic acid or 0.1 N HC1 whereby the temperature is kept between 0 and 4<*>C. The ionic strength is very low, in the order of 0.02. A precipitate is thus obtained which contains aggregates which are separated from the solution by simple decantation, by filtration or by centrifugation. The precipitate is eliminated.
Med supernatanter som oppnås gjennomføres så en ny precipite-ring uten ny tilsetning av PEG, ved samme temperatur, men ved å øke ionestyrken til 0,05 ved tilsetning av 0,05 - 0, 2% NaCl, fortrinnsvis 0, 1%, og ved å bringe pH-verdien til 7-8,5 og fortrinnsvis 8,0. De utfelte "Y-globuliner blir så separert fra den flytende fase ved dekanterlng eller sentrifugering av det dannede presipltat. With supernatants that are obtained, a new precipitation is then carried out without new addition of PEG, at the same temperature, but by increasing the ionic strength to 0.05 by adding 0.05 - 0.2% NaCl, preferably 0.1%, and by bringing the pH to 7-8.5 and preferably 8.0. The precipitated Y-globulins are then separated from the liquid phase by decanting or centrifuging the formed precipitate.
Presipitatet inneholder -y-globulinene frie for aggregater med høy molekylvekt men de kan fremdeles inneholde en mengde nær 10% av dimeriserte proteiner. Den elektroforetiske renhet for dette produkt er over eller lik 90%. Det kan inneholde albumin. Den antikomplementære aktivitet er meget lav. Mengden kallicrein og prekallicreinaktivator er redusert men kan fremdeles foreligge i variable mengder avhengig av mengden benyttet utgangsmateriale. The precipitate contains the -y-globulins free of high molecular weight aggregates, but they may still contain an amount close to 10% of dimerized proteins. The electrophoretic purity of this product is greater than or equal to 90%. It may contain albumin. The anticomplementary activity is very low. The amount of kallikrein and prekallikrein activator is reduced but may still be present in variable amounts depending on the amount of starting material used.
2 - Mild enzymatisk behandling: 2 - Mild enzymatic treatment:
-y-globul inprecipitatet tas opp i apyrogent vann i en konsentrasjon av 20 g/l -y-globuliner. Man tilsetter 50 g/l sakkarose og 0,002 g/l pepsin hvorved temperaturen bringes til å holdes på 37°C, pH-verdien reguleres til 4,1 og det hele Inkuberes i 24 timer. The -y-globulin precipitate is taken up in pyrogenic water at a concentration of 20 g/l -y-globulins. 50 g/l sucrose and 0.002 g/l pepsin are added whereby the temperature is maintained at 37°C, the pH value is regulated to 4.1 and the whole is incubated for 24 hours.
Man foretrekker å benytte pepsin I oppløsning, i oppløselig-gjort form på klassiske bærere. Inkuberingen gjennomføres I løpet av 10 - 96 timer ved denne temperatur, alt etter mengde benyttet enzym. Etter behandlingen bringes pH-verdien til nøytralverdi. One prefers to use pepsin in solution, in solubilized form on classic carriers. The incubation is carried out within 10 - 96 hours at this temperature, depending on the amount of enzyme used. After the treatment, the pH value is brought to a neutral value.
3 - SluttbehandlIng: 3 - Final treatment:
Man gjennomfører en ultrafiltrering for å bringe konsentrasjonen i oppløsningen av -Y-globuliner til 70 g/l. Ultrafiltration is carried out to bring the concentration of -Y globulins in the solution to 70 g/l.
Dette ultrafiltreringstrinn følges av en diafiltrering med henblikk på å fjerne PEG. Denne diafiltrering gjennomføres ved hjelp av en NaCl-oppløsning på 4,5 g/l. Volumet av diafiltreringsoppløsningen som benyttes er en funksjon av PEG mengden som skal fjernes. Generelt muliggjør et volum tilsvarende 8 ganger oppløsningen av IgG å fjerne mer enn 90# PEG, til å begynne med inneholdt i oppløsningen, og å bringe denne til en mengde på 1,5 til 0,10 g/l. This ultrafiltration step is followed by a diafiltration in order to remove PEG. This diafiltration is carried out using a NaCl solution of 4.5 g/l. The volume of the diafiltration solution used is a function of the amount of PEG to be removed. In general, a volume corresponding to 8 times the solution of IgG enables to remove more than 90# PEG, initially contained in the solution, and to bring it to an amount of 1.5 to 0.10 g/l.
Man gjennomfører så en Justering av oppløsningen som oppnås til 50 g/l protein, 50 g/l sakkarose, 4,5 g/l natriumklorid, ved pH 7,0. The solution is then adjusted to 50 g/l protein, 50 g/l sucrose, 4.5 g/l sodium chloride, at pH 7.0.
Det hele fordeles så til slutt på flasker med 0,5 - 2,5 eller 5 g "Y-globuliner hvoretter man gjennomfører en lyofilise-ring. The whole is then finally distributed into bottles with 0.5 - 2.5 or 5 g "Y-globulins, after which a lyophilization is carried out.
Eksempel 2: Example 2:
TJtgangsmaterialet består av et i oppløsning bragt presipltat og en klaring av denne oppløsning som inneholder 1,2 - 125É proteiner og fortrinnsvis 6 - 1096 proteiner. The starting material consists of a dissolved precipitate and a clarification of this solution which contains 1.2 - 125% proteins and preferably 6 - 1096 proteins.
Mild enzymatisk behandling: Mild enzymatic treatment:
Man fortsetter til en mild behandling av humanfibrinolysin. Konsentrasjonen av humanfibrolysin er 0,5 - 4 caseinolytlske enheter pr. gram proteiner. Inkuberingstemperaturen er 0-37" C og fortrinnsvis 4"C. pH-verdien er 6,0 - 8,0 og fortrinnsvis 7,4. One continues with a mild treatment of human fibrinolysin. The concentration of human fibrolysin is 0.5 - 4 caseinolytic units per grams of protein. The incubation temperature is 0-37°C and preferably 4°C. The pH value is 6.0 - 8.0 and preferably 7.4.
Inkuberingstiden er avhengig av temperaturen og den benyttede mengde enzym og er 2 dager til 10 dager. The incubation time depends on the temperature and the amount of enzyme used and is 2 to 10 days.
2 - Utfelling av PEG: 2 - Precipitation of PEG:
Man fortsetter med et utfellingstrinn med proteinoppløsning som generelt inneholder 1-456 proteiner ved tilsetning av PEG med molekylvekt 4.000 for å oppnå en PEG konsentrasjon på 556. pH-verdien justeres til 5,8 ved hjelp av en eddiksyre eller 0,1 N HC1 og temperaturen holdes mellom 0 og 4°C. Ionestyrken er meget lav, i størrelsesorden 0,02. One continues with a precipitation step with protein solution which generally contains 1-456 proteins by adding PEG with a molecular weight of 4,000 to achieve a PEG concentration of 556. The pH value is adjusted to 5.8 using acetic acid or 0.1 N HC1 and the temperature is kept between 0 and 4°C. The ionic strength is very low, in the order of 0.02.
Man oppnår således et presipltat som inneholder aggregater som man så separerer fra oppløsningen ved enkel dekanterlng, filtrering eller sentrifugering. Presipitatet elimineres. A precipitate containing aggregates is thus obtained which is then separated from the solution by simple decantation, filtration or centrifugation. The precipitate is eliminated.
Med supernatanter som man derved oppnår gjennomføres deretter en ny presipitering uten ytterligere tilsetning av PEG, ved samme temperatur, men ved å øke ionestyrken til 0,05 ved tilsetning av 0,05 til 0,256 NaCl og man bringer pH-verdien til 7 til 8,5, fortrinnsvis 8,0. With supernatants that are thereby obtained, a new precipitation is then carried out without further addition of PEG, at the same temperature, but by increasing the ionic strength to 0.05 by adding 0.05 to 0.256 NaCl and bringing the pH value to 7 to 8, 5, preferably 8.0.
Derved felles *y-globulinene ut og man separerer disse fra væskefasen ved dekanterlng eller sentrifugering. Thereby, the *y-globulins fall out and these are separated from the liquid phase by decantation or centrifugation.
3 - Sluttbehandl ing: 3 - Final treatment:
Man gjennomfører en ultrafIltrering for å bringé konsentrasjonen av -Y-globuliner i oppløsningen til 70 g/l. Dette ultrafiltreringstrinn følges av et diafiltreringstrinn for å fjerne PEG. Denne diafiltrering gjennomføres ved hjelp av en natriumkloridoppløsning på 4,5 g/l. Oppløsningsvolumet ved diaf il trer ingen er en funksjon av mengden PEG som skal fjernes. Generelt tillater et volum som tilsvarer 8 ganger oppløsningen av IgG å fjerne mer enn 9056 PEG som til å begynne med inneholdes i oppløsningen og å bringe denne til en verdi på 1,5 til 0,10 g/l. Ultrafiltration is carried out to bring the concentration of -Y-globulins in the solution to 70 g/l. This ultrafiltration step is followed by a diafiltration step to remove PEG. This diafiltration is carried out using a sodium chloride solution of 4.5 g/l. The volume of solution in the case of diafiltration is not a function of the amount of PEG to be removed. In general, a volume corresponding to 8 times the solution of IgG allows to remove more than 9056 PEG initially contained in the solution and to bring it to a value of 1.5 to 0.10 g/l.
Man gjennomfører deretter en Justering av oppløsningen til 50 g/l proteiner, 50 g/l sakkarose, 4,5 g/l natriumklorid ved en pH på 7,0. The solution is then adjusted to 50 g/l proteins, 50 g/l sucrose, 4.5 g/l sodium chloride at a pH of 7.0.
Man fyller så stoffet i flasker på 0,5 til 2,5 eller 5 g -y-globuliner og gjennomfører så en lyofillsering. The substance is then filled into bottles of 0.5 to 2.5 or 5 g of -γ-globulins and then lyophilized.
Analysen av -y-globulinene som oppnås ifølge oppfinnelsen viser følgende fordeler: En reduksjon av den antikomplementære evne i de forskjellige benyttede bestemmelsesteknikker. The analysis of the -γ-globulins obtained according to the invention shows the following advantages: A reduction of the anticomplementary ability in the various determination techniques used.
Underklassene er ekvilibrert. The subclasses are equilibrated.
Fravær av hypotensive faktorer vist ved belastningsprøver på hunder og rotter. Absence of hypotensive factors shown by stress tests on dogs and rats.
En reduksjon av mengden dimeriserte proteiner på mer enn 5056 i forhold til den opprinnelige mengde og oppnåelse av en mengde monomerer som er meget høy (over 9056). A reduction of the amount of dimerized proteins of more than 5056 in relation to the original amount and obtaining an amount of monomers that is very high (over 9056).
En mengde på fragmenter under 7 S lik 0 eller i det minste meget lav. A quantity of fragments below 7 S equal to 0 or at least very low.
En mengde kallicrein eller prekallicrein lik 0 (under grensen for prøvens følsomhet). An amount of kallikrein or prekallikrein equal to 0 (below the limit of sensitivity of the sample).
En restmengde PEG som er sterkt redusert med en faktor mer enn 10 i forhold til opprinnelsesmengden. A residual amount of PEG that is greatly reduced by a factor of more than 10 compared to the original amount.
Claims (8)
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR8508094A FR2582515B1 (en) | 1985-05-30 | 1985-05-30 | PROCESS FOR THE PREPARATION OF GAMMA-GOBULINS ADMINISTRABLE BY THE INTRAVENOUS ROUTE AND GAMMA-GLOBULINS OBTAINED |
| PCT/FR1986/000184 WO1986006963A1 (en) | 1985-05-30 | 1986-05-30 | Process for preparing gamma-globulins supplied by intravenous administration and gamma-globulins obtained |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO870235L NO870235L (en) | 1987-01-20 |
| NO167305B true NO167305B (en) | 1991-07-15 |
| NO167305C NO167305C (en) | 1991-10-23 |
Family
ID=26224527
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO870235A NO167305C (en) | 1985-05-30 | 1987-01-20 | PROCEDURE FOR MANUFACTURING GAMMA GLOBULINES FOR INTRAVENOES ADMINISTRATION. |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| NO (1) | NO167305C (en) |
-
1987
- 1987-01-20 NO NO870235A patent/NO167305C/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NO870235L (en) | 1987-01-20 |
| NO167305C (en) | 1991-10-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Marchalonis et al. | Phylogenetic origins of antibody structure: III. Antibodies in the primary immune response of the sea lamprey, Petromyzon marinus | |
| Tanaka et al. | Poly (l‐proline)‐binding proteins from chick embryos are a profilin and a profilactin | |
| White et al. | The isolation and characterization of plasminogen activators (urokinase) from human urine | |
| EP0703925B1 (en) | Production of antibody fragments | |
| Okumura et al. | Platelet glycocalicin. II. Purification and characterization. | |
| KAWASAKI et al. | Mannan-binding protein and conglutinin in bovine serumz | |
| US4874708A (en) | Process for the preparation of intra-venously administered gamma-globulins and the gamma-globulins obtained | |
| JPH03505665A (en) | Monoclonal antibody against the light chain region of human factor 102, and its preparation and utilization methods | |
| US4670544A (en) | Process for the manufacture of the cold insoluble globulin and pharmaceutical preparation containing it | |
| Reid et al. | The structure and mechanism of activation of the first component of complement | |
| EP0148843B1 (en) | A concentrate of the antihemophilic factor viii and a process for producing it | |
| US4534906A (en) | Removal of impurities from human leukocyte interferon preparations | |
| Arlaud et al. | Purification of proenzymic and activated human C1s free of Clr: Effects of calcium and ionic strength on activated Cls | |
| AU725134B2 (en) | Method of producing an IgM preparation for intravenous application | |
| FERTE et al. | Structural, immunological and kinetic comparisons of NADP‐dependent malate dehydrogenases from spinach (C3) and corn (C4) chloroplasts | |
| FECYCZ et al. | Mechanisms of activation and secretion of a cell‐associated precursor of an exocellular protease of Pseudomonas aeruginosa 34362A | |
| NO167305B (en) | PROCEDURE FOR MANUFACTURING GAMMA GLOBULINES FOR INTRAVENOES ADMINISTRATION. | |
| EP0474645B1 (en) | Protein complex | |
| Reid | [12] C1q | |
| Srivastava et al. | Interrelationships among human aldo-keto reductase: immunochemical, kinetic and structural properties | |
| RU1829938C (en) | Method of purification of gamma-globulin used for intravenous administration | |
| US5688919A (en) | Process for the purification of factor XIII, monoclonal antibodies against factor XIIIA, the preparation and use thereof | |
| Henney et al. | Studies on low molecular weight peptides derived from human γG-globulin. Identification of rheumatoid factor-reactive peptides in proteolytic digests | |
| Dolby | The action of pepsin on protein fractions from horse antisera to diphtheria toxin | |
| RU2045535C1 (en) | Process for preparing human proinsulin |