NO157825B - Fremgangsmaate for fremstilling av antibiotiske aklacinomycin a og b med antitumorvirkning. - Google Patents
Fremgangsmaate for fremstilling av antibiotiske aklacinomycin a og b med antitumorvirkning. Download PDFInfo
- Publication number
- NO157825B NO157825B NO831808A NO831808A NO157825B NO 157825 B NO157825 B NO 157825B NO 831808 A NO831808 A NO 831808A NO 831808 A NO831808 A NO 831808A NO 157825 B NO157825 B NO 157825B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- aclacinomycin
- aklacinomycin
- strain
- antibiotic
- antibiotics
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 10
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 title claims description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 title description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 3
- USZYSDMBJDPRIF-SVEJIMAYSA-N aclacinomycin A Chemical compound O([C@H]1[C@@H](O)C[C@@H](O[C@H]1C)O[C@H]1[C@H](C[C@@H](O[C@H]1C)O[C@H]1C[C@]([C@@H](C2=CC=3C(=O)C4=CC=CC(O)=C4C(=O)C=3C(O)=C21)C(=O)OC)(O)CC)N(C)C)[C@H]1CCC(=O)[C@H](C)O1 USZYSDMBJDPRIF-SVEJIMAYSA-N 0.000 claims description 18
- 229960004176 aclarubicin Drugs 0.000 claims description 18
- SMNNBONTPYNICF-UHFFFAOYSA-N Aclacinomycin B Natural products CCC1(O)CC(OC2CC(C(OC3CC(O)C(OC4CCC(=O)CO4)C(C)O3)C(C)O2)N(C)C)c5c(O)c6C(=O)c7ccccc7C(=O)c6cc5C1C(=O)OC SMNNBONTPYNICF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 229930188522 aclacinomycin Natural products 0.000 claims description 17
- RQHZAASWYUEYCJ-JVWHUAOPSA-N siwenmycin Chemical compound O=C1C2=C(O)C=CC=C2C(=O)C2=C1C(O)=C1[C@@H](O[C@@H]3O[C@@H](C)[C@@H](O[C@@H]4O[C@@H](C)[C@H]5O[C@@H]6O[C@H](C)C(=O)C[C@@H]6O[C@H]5C4)[C@H](C3)N(C)C)C[C@@](CC)(O)[C@H](C(=O)OC)C1=C2 RQHZAASWYUEYCJ-JVWHUAOPSA-N 0.000 claims description 17
- PITHJRRCEANNKJ-UHFFFAOYSA-N Aclacinomycin A Natural products C12=C(O)C=3C(=O)C4=CC=CC=C4C(=O)C=3C=C2C(C(=O)OC)C(CC)(O)CC1OC(OC1C)CC(N(C)C)C1OC(OC1C)CC(O)C1OC1CCC(=O)C(C)O1 PITHJRRCEANNKJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- LJZPVWKMAYDYAS-QKKPTTNWSA-N aclacinomycin T Chemical class O([C@H]1C[C@]([C@@H](C2=CC=3C(=O)C4=CC=CC(O)=C4C(=O)C=3C(O)=C21)C(=O)OC)(O)CC)[C@H]1C[C@H](N(C)C)[C@H](O)[C@H](C)O1 LJZPVWKMAYDYAS-QKKPTTNWSA-N 0.000 claims description 13
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 6
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 5
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 4
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical class [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 claims description 3
- 229910052500 inorganic mineral Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000011707 mineral Chemical class 0.000 claims description 3
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 claims description 2
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical class [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 34
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 30
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 22
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 22
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 241000946896 Streptomyces lavendofoliae Species 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N tetrachloromethane Chemical compound ClC(Cl)(Cl)Cl VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 7
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 5
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 5
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 5
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 5
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N (+)-Galactose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N 0.000 description 4
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 4
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 239000002026 chloroform extract Substances 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 4
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 4
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 4
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KUSMIBXCRZTVML-PCCPLWKKSA-N Aclarubicin hydrochloride Chemical compound Cl.O([C@H]1[C@@H](O)C[C@@H](O[C@H]1C)O[C@H]1[C@H](C[C@@H](O[C@H]1C)O[C@H]1C[C@]([C@@H](C2=CC=3C(=O)C4=CC=CC(O)=C4C(=O)C=3C(O)=C21)C(=O)OC)(O)CC)N(C)C)[C@H]1CCC(=O)[C@H](C)O1 KUSMIBXCRZTVML-PCCPLWKKSA-N 0.000 description 3
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 241001467544 Streptomyces galilaeus Species 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-HWQSCIPKSA-N L-arabinopyranose Chemical compound O[C@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-HWQSCIPKSA-N 0.000 description 2
- PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N L-rhamnose Natural products CC(O)C(O)C(O)C(O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 2
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 2
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 2
- PNNNRSAQSRJVSB-BXKVDMCESA-N aldehydo-L-rhamnose Chemical compound C[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-BXKVDMCESA-N 0.000 description 2
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 2
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 229910000365 copper sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 2
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 2
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 2
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 2
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K potassium phosphate Substances [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000012485 toluene extract Substances 0.000 description 2
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 description 2
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 1
- 101150041968 CDC13 gene Proteins 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N Cu2+ Chemical compound [Cu+2] JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N D-Fructose Natural products OC[C@H]1OC(O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 241000270322 Lepidosauria Species 0.000 description 1
- 241000544912 Melanoides Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N Raffinose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N Trichloro(2H)methane Chemical compound [2H]C(Cl)(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N UNPD196149 Natural products OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1C(O)C(O)C(O)C(COC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CKUAXEQHGKSLHN-UHFFFAOYSA-N [C].[N] Chemical compound [C].[N] CKUAXEQHGKSLHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 239000003817 anthracycline antibiotic agent Substances 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 235000010216 calcium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- HYGYSIDIKIGPJA-UHFFFAOYSA-N chloroform;ethyl acetate;methanol Chemical compound OC.ClC(Cl)Cl.CCOC(C)=O HYGYSIDIKIGPJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 229910001431 copper ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000002024 ethyl acetate extract Substances 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 229960002413 ferric citrate Drugs 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 230000009969 flowable effect Effects 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 150000002484 inorganic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229910010272 inorganic material Inorganic materials 0.000 description 1
- NPFOYSMITVOQOS-UHFFFAOYSA-K iron(III) citrate Chemical compound [Fe+3].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NPFOYSMITVOQOS-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 159000000003 magnesium salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 150000002823 nitrates Chemical class 0.000 description 1
- 229910017464 nitrogen compound Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002830 nitrogen compounds Chemical class 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 235000019271 petrolatum Nutrition 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 229920001592 potato starch Polymers 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 description 1
- RMAQACBXLXPBSY-UHFFFAOYSA-N silicic acid Chemical compound O[Si](O)(O)O RMAQACBXLXPBSY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 235000015424 sodium Nutrition 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011008 sodium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
- C12P19/56—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen atom of the saccharide radical directly bound to a condensed ring system having three or more carbocyclic rings, e.g. daunomycin, adriamycin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/465—Streptomyces
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse angår en fremgangsmåte for fremstil-
ling av antibiotisk aklacinomycin A og B med antitumorvirkning,
og den angår videre fremstilling av blandinger derav.
Aklacinomycin har strukturformelen:
i aklacinomycin A er R:
i aklacinomycin B er R:
Den ovenfor angitte fremgangsmåte karakteriseres ved at man dyrker Streptomyces lavendofoliaestammen 12/3-A, deponert ved "Central Bureau voor Schimmelcultures (CBS) den 31. mars 1983 under aksess nr. CBS 261.83, under aerobe ; betingelser,
i et næringsmedium som inneholder karbon- og nitrogenholdige forbindelser samt mineralsalter ved en temperatur av ca. 20-30°C og ved en pH-verdi av ca. 6-8,5, fortrinnsvis 6,9-7,9, i 4 8 timer, hvoretter de dannede aklacinomycinene A og B tas vare på, aklacinomycinene A og B separeres og renses ved i og for seg kjente metoder.
Aklacinomycinene A og B tilhører antracyklinantibiotikagruppen og er aktive mot forskjellige grampositive bakterier og for-hindrer tilvekst av tumor,i dyr. Aklacinomycinene A og B samt forbindelser for deres fremstilling ble beskrevet første gang i JP-søknad 864851. Tilsvarende søknader førte til GB-PS 1.491.266 og US-PS 3.988.315 og 4.071.411.
I det ovenfor angitte patent ble det som aklacinomycinprodu-serende stamme anvendt Streptomyces galilaeus MA 144 M1, som er deponert i den amerikanske samling "American Type Culture Collection" under betegnelsen ATCC nr. 31133, og i det japan-ske institutt "Fermentation Research Institute" under betegnelsen FERM nr. 2455.
Stammen har følgende karakteristika: svakt utviklet luftmycel på et fast agar-vekstsubstrat, til farvet grått. Danner spiralformede sporebærere, sporene har glatt overflate, er ovalt formede med størrelse 0,4 - 0,8 ym. Koloniene er forgrenede og substratmycelet gulbrunt. Oppløselig pigment savnes eller er lysebrunt. På visse agarvekstsubstrater dannes gulgrønt oppløselig pigment.
Streptomyces galilaeus dyrkes aerobt, vekstoptimum er ved 24-30°C, ved 50°C skjer ingen tilvekst. Den hydrolyserer gelatin, peptoniserer melk og hydrolyserer svak stivelse. Melanoidpigment dannes på organiske substrater. Den vokser
på Pridheims og Gottliebs medium som inneholder D-glukose, D-xylose, L-arabinose, L-ramnose, D-galaktose eller inositol, men vokser ikke på et medium som inneholder D-mannitol.
Når stammen dyrkes i en næringsoppløsnihg som inneholder soyamel/ glukose, stivelse samt forskjellige salter, alt under aerobe betingelser, oppnås etter 36 timer 46 mg/l aklacinomycin A og 23 mg/l aklacinomycin B.
Disse antibiotika finnes både i mycelet og i dyrkningsopp-løsningen. De ekstraheres fra mycelet med aceton og fra dyrkningsoppløsningen med etylacetat. Ekstraktene forenes og aklacinomycinene A og B separeres ved h lp av kolonne-kromatografi. De oppnådde aklacinomyeiner A og B inneholder som forurensninger antibiotika fra E-pyrromycingruppen, og disse kan fjernes ved behandling med kobberioner.
En mangel ved den ovenfor nevnte kjente fremgangsmåte er mikroorganismens svake produksjonsevne. Ved siden av akla-cinomycinet dannes visse antibiotika fra E-pyrromycingruppen, noe som kompliserer den kjemiske rensning.
Hovedformålet med foreliggende oppfinnelse har derfor vært
å finne nye, aklacinomycin A- og B-produserte kulturer som
oppviser en større aklacinomycin A-produserende aktivitet sammenlignet med de tidligere kjente, og som hovedkomponen-ter syntetiserer disse antibiotika.
Som et resultat av disse forsøk er det fra en jordprøve fra
Central-Asia oppnådd en ny stamme 12/3-A, som tilhører arten Streptomyces lavendofoliae, og som hovedkomponent danner aklacinomycin A.
Denne Streptomyces lavendofoliae-stamme er deponert i antibiotika-instituttets stammekolleksjon under betegnelsen
VNIIA nr. 1670 den 20.1.1982. Dette institutt's (VNIIA) mikroorganisme-stammekolleksjon er registrert i den internasjonale føderasjon av stammekolleksjoner i 1972, nr. 337.
Stammen 12/3-A av Streptomyces lavendofoliae er også deponert i deponeringsinstituttet Centraalbureau voor Schimmelcultures (CBS) den 31.3.193 under nr. CBS 261.83.
Streptomyces lavendofoliae-stammen 12/3-A oppviser følgende morfologiske, fysiologiske og antafonistiske karakteristika:
MORFOLISTISKE KARAKTERISTIKA:
Strepromyces lavendofoliae-stammen 12/3-A danner et rikelig lilla-rosa ()K3) luftmycel. Sporbærerne er spiralformede,
sporene har glatt overflate i størrelsesorden 0,7-1,4 ym. Substarmycelet er beige-rosa, til og med til skittenlilla (K1+M2). Det i vekstsubstratet utsondrede pigment er mørke-brunt til brunrosa-fiolett (K1+T2+H2). Farvene vurderes i henhold til Bondarzevs farveskale, USSR videnskapsakademiets
publikasjon fra året 1954.
D
5
0
5
FYSIOLOGISKE KARAKTERISTIKA :
Aerobe, optimaltilveksttemperatur 24-30°C. Ved en temperatur av 50°C ingen tilvekst. Oppløser gelatin i middels grad, peptoniserer melk som mørkner, hydrolyserer i middels grad stivelse. Danner melanoider (Tresner's vekstsubstrat med jerncitrat, tyrosin-agar).
Streptomyces lavendofoliae-stammene 12/3-A utnytter godt følgende karbonkilder: D-glukose, D-xylose, L-arabinose, D-fruktose, D-galaktose, inositol. Den utnytter dårlig eller ikke i det hele tatt følgende forbindelser: L-ramnose, sakkarose, raffinose og D-mannitol. Streptomyces lavendofoliae-stammen 12/3-A kan oppbevares under et vaselinolje-skikt ved en temperatur av +5°C i løpet av 6 måneder.
ANTAGONISTISKE KARAKTERISTIKA:
Streptomyces lavendofoliae 12/3-A dyrkes i et væske-næringssubstrat i en rysteinnretning. Etter tre døgn er det dannet en mengde av ca. 56-60 mg/l aklacinomycin A som oppviser følgende antimikrobiske virksomhet, cytostatisk virksomhet og tumorhindrende virksomhet hos prøvedyr
(tabellene 2-4).
Resultatene av sammenligningen av de forskjellige karakteristika hos stammen 12/3 ifølge oppfinnelsen og de tilsvarende karakteristika hos den kjente aklacinomycin A- og B-produsent, Streptomyces galilaeus MA 144M1, bekrefter forskjellen mellom de morfologiske og fysiologiske egenskaper
hos de respektive kulturer.
På den annen side tilsvarer de forskjellige karakteristika hos stammen ifølge oppfinnelsen de tilsvarende karakteristika hos Streptomyces lavendofoliae i henhold til Bergey's definisjon (tabell 5).
For den taksonomiske bestemmelse av kulturen 12/3-A ble
det anvendt følgende litteratur: H.A. Krasiljnikov "Strålingssopper", "Nauka", 1970, side 172, 328; Bergey's Manual of Determinative Bacteriology, Utgivere: R.E. Buchanan, N.E. Gibbons et al., sidene 808-810.
Som næringssubstrat kan anvendes et hvilket som helst substrat som utnyttes av en til arten Str. lavendofoliae tilhørende, aklacinomycin-produserende stamme.
Som karbonkilde i næringssubstratet ble det med fordel anvendt fruktose, glukose, arabinose, xylose, galaktose, stivelse m.fl.
Som hydrogenkilde kan man anvende kjøttekstrakt, pepton, maisekstrakt, gjærekstrakt, kaseinhydrolysat, maismel, soyamel, bomullsmel m.fl., og også nitrogenforbindelser inneholdende organiske og uorganiske forbindelser, slik som ammoniumsalter (nitrater, sulfater, fosfater m.v.),
urea og andre.
Vekstsubstratet kan tilsettes mineralsalter, slik som kalsiumkarbonat, natrium- og kaliumfosfater, natrium- og
kaliumklorid, magnesiumsalter, kobber m.v.
For fremstilling av større mengder aklacinomycin A og B utføres dyrkingen som en luftet dypdyrking i to trinn. Podingen av fermentorn skjer med vegetativt mycel. Substratet som anvendes for dyrking av vegetativt mycel kan være det samme som anvendes ved biosyntesen av aklacinomycin A og B, men kan også være forskjellig.
En kontroll av forskjellige substratalternativer viser at vekstsubstratet B-2 og B-3 var de mest fordelaktige:
Vekstsubstratet ble sterilisert ved en temperatur av 124-126°C i løpet av 30-40 minutter, hvoretter substratets pH-verdi var nøytral.
Str. lavendofoliae, stamme 12/3-A, gir ved dyrking under luftede betingelser med 1 liter luft/liter vekstsubstrat/min. ved en temperatur av 20-30°C og en pH verdi av ca. 6-8,5, fortrinnsvis 6,9-7,9, etter 48-96 timer, aklacinomycin A i en mengde av opp til 60 mg/l og aklacinomycin B i en mengde av 4-10 mg/l.
Fig. 1 viser UV-spektret av aklacinomycin A hydroklorid i 90% metanol, Fig. 2 viser UV-spektret av aklacinomycin B hydroklorid i 90% metanol, Fig. 3 viser IR-spektret av aklacinomycin A hydroklorid fra en KÉr-tablett, Fig. 4
viser IR-spektret av aklacinomycin B hydroklorid fra en KBr-tablett, Fig. 5 viser PMR-spektret av aklacinomycin A hydroklorid (CDC13"TMS; T=303°C) og fig. 6 viser PMR-spektret av aklacinomycin B hydroklorid (CDCl^TMS;
T= 303°C).
Aklacinomycinene A og B finnes i mycelet og i vekstsubstratet. Etter fermentering filtreres vekstsubstratet ved en pH-verdi av 4,5-6,0. De forskjellige antibiotika ekstraheres fra vekstsubstratet med etylacetat (per 10 volumdeler vekstsubstrat anvende 1 volumdel etylacetat).
Det antibiotikaholdige organiske skikt separeres fra mycelet. Etter fjerning av oppløsningsmidlene forenes vannrestene og nøytraliseres til pH 6,9. Etter dette ekstraheres de forskjellige antibiotika med toluen og. med den doble volummengde 0,01N HCl-oppløsning. De forskjellige antibiotika ekstraheres fra vannoppløsningen med kloroform,
som deretter tørkes med vannfri Na2S0^. Kloroformekstraktet konsentreres i en rotasjonsfordamper til 0,1 av det opp-
rinnelige volum og det tilsettes 10-12 volumdeler tørr heksan. De utfelte antibiotika separeres og tørkes. Rensing og separering av disse skjer kromatografisk med vannholdig <S>i02 i et oppløsningsmiddelsystem som utgjøres av karbontetraklorid og isopropanol.
I tabellene 6 og 7 gjengis sammenligningsresultater for aklamycinene A og B, oppnådd med UV-, IR-, PMR- og masse-spektroskopi, og som bekrefter likheten mellom de forskjellige antibiotika som oppnås ved hjelp av stammen ifølge foreliggende oppfinnelse og de som oppnås med de allerede kjente stammer.
De angitte antibiotika aklacinomycin A og B, som produseres av stammen 12/3-A av Str. lavendofoliae, er altså identiske med de antibiotika som oppnås ved å dyrke Str. galilaeus MA 144M1. Evnen til å produsere aklacinomycin A og B var tidligere ikke kjent hos Str. lavendofoliae. Fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen skal illustreres ved de følgende ikke-begrensende eksempler.
Eksempel 1
Streptomyces lavendofoliae stammen 12/3-A dyrkes på en
fast havre-agar-vekstkultur ved en temperatur av 28°C i 12 døgr., inntil. det var utviklet et rikt luftmycel.
Kulturen ble overført til en 7 50 ml erlenmeyerkolbe i et B-2 vekstsubstrat, hvilket ikke inneholdt kobbersulfat eller skumdempingsmiddel. Kolben ble omrørt ved rysting med en hastighet på 250 opm. ved en temperatur på 28°C i et tidsrom på 2 døgn. Den i erlenmeyerkolben dyrkede kultur ble overført i en mengde av 5% i en 10 liters podefermenter i et B-2 vekstsubstrat som ikke inneholdt kobbersulfat. Fermenteren ble rørt med en omdreinings-hastighet av 200 opm og ble luftet med 10 liter/min. ved en temperatur på 28°C i døgnet.
Tre liter av den kultur som ble dyrket i denne fermenter ble overført til en 100 liters fermenter i 60 liter B-2-vekstsubstrat. Fermenteren ble omrørt med en hastighet på 200 opm og luftet med 60 l/min. ved en temperatur pål 270C i tre døgn.
Innholdet av aklacinomycin A og B i vekstsubstratet bestemmes ved følgende metode. 1. Bestemmelse av innholdet av aklacinomycin A og B i mycelet.
Etter fermentering separeres mycelet fra 5 ml vekstsubstrat ved sentrifugering ved 2000 opm i løpet av 10 minutter. Fra det således oppnådde mycelet ekstraheres de angjeldende antibiotika i løpet av 2 timer med 4 ml aceton, hvorved blandingen omrøres med 15-20 minutters intervaller. Acetonet dampes av fra en 1 ml ekstrakt i vakuum ved en temperatur under 40°C og resten ekstraheres med 1,0 ml kloroform. Den konsentrerte kloroformekstrakt anvendes for kromatografisk separering av antibiotikakomplekset. For dette formål anvendes det en skive som er belagt med et adsorbentskikt, og hvis venstre side og nedre kant er latt frie på en strekning av 2 cm. På skiven påføres med et kapillarrør hele kloroformekstraktet som et bånd med en bredde på 1-1,5 cm. På samme skive påføres en standardoppløsning av aklacinomycin A og B. Skiven plaseres i et kromatograferingskammer som inneholder en kloroform-etylacetat-metanol-blanding i et forhold på 7:2:1. Da væskefronten hadde nådd skivens kant ble skiven tatt ut og tørket i luft i 20 minutter.
De gule soner som tilsvarer mobiliteten av aklacinomycinene A og B, elueres separat med 4 ml metanol (pH =6) og måles spektrofotometrisk ved en bølgelengde på 430 nm. Aklacino-mycinmengdene i mg/l kulturvæske ble beregnet på basis.'-av aklacinomycinenes ekstinksjonsverdier (E„ 11c%ra;.. for aklacinomycin A og B er 161 og 159, "J. Antibiotics',' 1979 32, nr. 8, s. 781-800) i henhold til følgende formel: aklacinomycin A C mg/ml = 199 D aklacinomycin B C mg/ml = 201 D 2. Bestemmelse av innholdet av aklacinomycin A og B i vekstsubstratet.
Fra 5 ml vekstsubstrat separeres mycelet ved sentrifugering. Man ekstraherer med etylacetat ved pH 6 ved å anvende forholdet 5 ml vekstsubstrat og 5 ml etylacetat. 2 ml etyl-acetatekstrakt dampes inn i vakuum og resten ekstraheres med 2 ml kloroform. Opparbeidingen skjer som i punkt 1.
Mengdene aklacinomycin A og B beregnes på basis av de forskjellige antibiotikas ekstinksjonsverdier i henhold til følgende formel: aklacinomycin A C mg/ml = 124,2 D aklacinomycin B C mg/ml = 125,8 D
Etter tre døgns fermentering i vekstsubstratet B-2 gir kulturen 12/3-A aklacinomycin A i en mengde av ca. 56 mg/l og aklacinomycin B i en mengde av ca. 4-8 mg/l.
For separering av aklacinomycin A og B fra vekstsubstratet filtreres 60 liter på et sugefilter med en pH verdi på 4,5-5,0. De forskjellige antibiotika i vekstsubstratet ekstraheres med etylacetat i forholdet 10:1. Det organiske skikt separeres og dampes inn i vakuum i en rotasjonsfordamper ved en temperatur på høyest 40°C, inntil resten utgjøres av en vannoppløsning. Det fuktige mycel i en mengde av 5 kg ekstraheres to ganger med 10 1 aceton. Mycelet separeres ved filtrering og behandles. Aceton-ekstraktene forenes.og dampes inn. Vannrestene fra etylacetat- og aceton-inndampingen forenes og det således oppnådde konsentrat i en mengde av 5 liter nøytraliseres til en pH-verdi på 6,8 med en 10%-ig NaOH-oppløsning og de forskjellige antibiotika ekstraheres med 3 x 10 liter toluen. Toluenekstraktene forenes og vannskiktet kastes. Toluenekstraktene i en mengde av 30 liter dampes inn i vakuum ved en temperatur av høyest 40°C inntil resten er 3 liter. De forskjellige antibiotika ekstraheres fra dette konsentrat med en 0,5-gangers volummengde av 0,01N HC1. Den i ekstraheringstrinnet dannede emulsjon finoppdeles ved sentrifugering. De antibiotiske stoffer som befinner seg i vannoppløsning ekstraheres med en 0,5-ganger volummengde kloroform. Ekstraheringstiden er 20-30 minutter under kontinuerlig omrøring av blandingen.
Den oppnådde emulsjon spaltes ved sentrifugering. Kloroformskiktet i en mengde av 1,5 liter tas vare på og tørkes 4 ganger over vannfri Na^O^ (10 g Na2S0^/100 ml ekstrakt). Na2S0^ avfiltreres og kloroformen destilleres i vakuum i en rotasjonsfordamper til et 0,1-volum. Resten tilføres 10-12 volumdeler tørr heksan, hvorved det dannes en utfelling, som i løpet av 30 minutter får utfelle. De utfelte antibiotika filtreres på et glassfilter nr. 4 og tørkes. Filtratet dampes inn til tørr tilstand i en rotasjonsfordamper ved en temperatur av høyst 40°C. Resten slemmes opp i heksan og heksanet fjernes ved filtrering.
De to fellinger forenes og renses kromatografisk. Utbyttet er 2,5 g råprodukt.
Kromatografisk separering av aklacinomycinene.
En kolonne med dimensjoner 8 cm x 95 cm ble fylt med 5,5 1 suspensjon, som bestod av 1,8 kg vannholdig kiselsyre (250-400 ym) og 5,5 liter kloroform hvori var oppløst
5,8 liter trietylamin og eddiksyre. Etter påfylling ble kolonnen skyllet med 3 liter kloroform. Det ovenfor angitte råprodukt i en mengde av 10 g ble tilført, oppløst i 100 ml kloroform. Etter absorbsjon av de forskjellige antibiotika
ble kolonnen eluert. For separering av de forskjellige antibiotika ble kolonnen eluert. For separering av de forskjellige antibiotika ble det utført en trinnvis gradient-eluering. For dette formål ble det til kolonnen tilført: 1) 4 1 karbontetraklorid; 2) 8 1 oppløsningsmiddelsystem som bestod av karbontetraklorid : isopropanol i forholdet 25:1; 3) 8,5 1 oppløsningsmiddelsystem, som bestod av karbontetraklorid:; isopropanol i forholdet 20:1; 4) 20,5 1 oppløsningsmiddelsystem som bestod av karbontetraklorid: isopropanol i forholdet 10:1.
Aklacinomycin B oppnås fra kolonnen med systemet CCl^: isopropanol i forholdet 20:1 og aklacinomycin A med systemet CC14:isopropanol i forholdet 10:1. Eluatene 5-7 1 som inneholder aklacinomycin A og B, ble ekstrahert separat med 0,2 volummengder 0,01 N HCl-oppløsning.
De angitte antibiotika ekstraheres fra vannfri fase med
0,2 volummengder kloroform. Aklacinomycinenes A og B kloroformekstrakt tørkes separat med vannfri Na2S0^
(2 01OO ml oppløsning), natriumsulfat filtreres og filtratet dampes av i vakuum ved 40°C til en 0,1! tilfeldig volummengde. En 10 ganger så stor volummengde tørr heksan tilsettes og blandingen får stå i ca. 30 minutter.
Fellingen filtreres med glassfilter nr. 4 og det oppnådde emnet tørkes i luft. Således oppnås fra 2,5 g råprodukt 0,7 g aklacinomycin A og 0,1 g aklacinomycin B.
Eksempel 2
Streptomyces lavendofoliae stamme 12/3-A dyrkes i 12 døgn
på havreagar. Kulturen overføres til en beholder, som som vekstsubstrat inneholder B-2 uten kobbersulfat.
Karet rystes med en hastighet av 250 opm ved en temperatur
av 28°C i løpet av to døgn. Kulturen overføres til en erlenmeyerkolbe. Denne overførte del tilsvarer karakteristisk
5-10% av vekstsubstratets volum. Som.vekstsubstrat anvendes B-3 som består av følgende stoffer: soyamel - 1,5%, potetstivelse - 3%, kalsiumkarbonat - 1,4%, natriumklorid - 0,3%, kobbersulfat 0,007%. Dyrkningsbetingelsene er de samme som i eksempel 1 og dyrkingstiden 72 timer. Herved er vekstsubstratets aktivitet 60 mg/l aklacinomycin A og 10 mg/l aklacinomycin B.
Den kjemiske separering av aklacinomycinene A og B skjer
på samme måte som i Eksempel 1.
Som et eksempel oppviser fremgangsmåten for fremstilling
av aklacinomycin A og B følgende fordeler i forhold til de kjente forbindelser: 1. Et høyere utbytte av aklacinomycin A. Prototypstammen gir f og stammen ifølge oppfinnelsen opp til
60 y<g>/rol.
2. Sinerubin A og B dannes ikke, hvorfor ytterligere rensing blir overflødig. I de kjente fremgangsmåter må de kjente biprodukter fjernes som metallionkomplekser. 3. Det dannes en mindre mengde aklacinomycin B. Prototypstammen gir 23 ug/ml og stammen ifølge oppfinnelsen 4-8 ug/ml.
Claims (1)
1.
Fremgangsmåte for fremstilling av antibiotisk aklacinomycin A og B med antitumorvirkning, eller blandinger derav, idet dette aklacinomycin har formelen:
hvor R i aklacinomycin A er:
og hvor R i aklacinomycin B er:
karakterisert ved at man dyrker Streptomyces lavendofoliaestammen 12/3-A, deponert ved "Central Bureau voor Schimmelcultures (CBS) den 31. mars 1983 under aksess nr. CBS 261.83, under aerobe betingelser, i et næringsmedium som inneholder karbon- og nitrogenholdige forbindelser samt mineralsalter ved en temperatur av 20-30°C og ved en pH-verdi av 6-8,5, fortrinnsvis 6,9-7,9 i 48 timer, hvoretter de dannede aklacinomycinene A og B tas vare på, aklacinomycinene A og B separeres og renses ved i og for seg kjente metoder.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU823459347A SU1069433A1 (ru) | 1982-06-29 | 1982-06-29 | Штамм @ @ 12/3а-продуцент аклациномицинов @ и @ |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO831808L NO831808L (no) | 1983-12-30 |
| NO157825B true NO157825B (no) | 1988-02-15 |
| NO157825C NO157825C (no) | 1988-05-25 |
Family
ID=21018792
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO831808A NO157825C (no) | 1982-06-29 | 1983-05-20 | Fremgangsmaate for fremstilling av antibiotiske aklacinomycin a og b med antitumorvirkning. |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| AT (1) | AT379828B (no) |
| CH (1) | CH657375A5 (no) |
| DK (1) | DK293483A (no) |
| FI (1) | FI72534C (no) |
| IT (1) | IT1194291B (no) |
| NO (1) | NO157825C (no) |
| SE (1) | SE455705B (no) |
| SU (1) | SU1069433A1 (no) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR970000591B1 (ko) * | 1993-09-03 | 1997-01-14 | 동국제약 주식회사 | 신균주 스트렙토마이세스 라벤도폴리아 DKRS 및 이를 이용한 아클라시노마이신 A, B, Y 및 아글리콘(Aglycone)의 제조방법 |
-
1982
- 1982-06-29 SU SU823459347A patent/SU1069433A1/ru active
-
1983
- 1983-04-15 SE SE8302126A patent/SE455705B/sv not_active IP Right Cessation
- 1983-04-22 FI FI831383A patent/FI72534C/fi not_active IP Right Cessation
- 1983-05-20 NO NO831808A patent/NO157825C/no unknown
- 1983-06-01 AT AT0199983A patent/AT379828B/de not_active IP Right Cessation
- 1983-06-24 DK DK293483A patent/DK293483A/da not_active Application Discontinuation
- 1983-06-28 CH CH3537/83A patent/CH657375A5/de not_active IP Right Cessation
- 1983-06-29 IT IT21847/83A patent/IT1194291B/it active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| IT1194291B (it) | 1988-09-14 |
| NO157825C (no) | 1988-05-25 |
| NO831808L (no) | 1983-12-30 |
| AT379828B (de) | 1986-03-10 |
| FI831383L (fi) | 1983-12-30 |
| IT8321847A0 (it) | 1983-06-29 |
| FI72534B (fi) | 1987-02-27 |
| FI72534C (fi) | 1987-06-08 |
| SE455705B (sv) | 1988-08-01 |
| IT8321847A1 (it) | 1984-12-29 |
| SU1069433A1 (ru) | 1984-11-23 |
| DK293483D0 (da) | 1983-06-24 |
| SE8302126D0 (sv) | 1983-04-15 |
| SE8302126L (sv) | 1983-12-30 |
| DK293483A (da) | 1983-12-30 |
| ATA199983A (de) | 1985-07-15 |
| FI831383A0 (fi) | 1983-04-22 |
| CH657375A5 (en) | 1986-08-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4518589A (en) | BBM-2478 Antibiotic complex | |
| CA1339348C (en) | Novel glycopeptide antibiotics | |
| EP0185456B1 (en) | Cl-1577d and cl-1577e antibiotic/antitumor compounds, their production and use | |
| US4127714A (en) | Anthracycline glycosides | |
| EP0326173B1 (en) | Novel antitumor antibiotic substance and a method for production thereof | |
| EP0871638B1 (en) | Novel aminooligosaccharide derivative and process for preparing the same | |
| KR920001448B1 (ko) | Bbm-2478 항생제 착화합물 | |
| US4373028A (en) | Culture of Nocardia ATCC 31309 | |
| US4172940A (en) | Purification of C-076 compounds by single column chromatography | |
| NO157825B (no) | Fremgangsmaate for fremstilling av antibiotiske aklacinomycin a og b med antitumorvirkning. | |
| EP0702691B1 (en) | New thiodepsipeptide isolated from a marine actinomycete | |
| US4572895A (en) | Process for preparing an antibiotic complex by culturing actinomyces strain ATCC 39417 | |
| US4461831A (en) | Antitumor agents albacarcins V and M | |
| US4615975A (en) | Purified culture of Actinomadura verrucaspora subspecies veractimyces | |
| EP0592835A2 (en) | BU-4803T Antibiotics | |
| US5484712A (en) | Method for producing aclacinomycins A, B, Y using Strepomyces lavendofoliae DKRS | |
| US4206129A (en) | Antibiotic SM-173B | |
| US4598146A (en) | Compound, arugomycin | |
| JP2002212187A (ja) | イソキノサイクリン系抗生物質 | |
| US4192915A (en) | Anthracycline glycosides from streptomyces | |
| JPS595275B2 (ja) | 新規な抗生物質生産菌 | |
| JPH04633B2 (no) | ||
| JPH0643435B2 (ja) | Ｒｋ―４８３ａ、その製造法並びに抗腫瘍剤及び抗菌剤 | |
| EP0472005A1 (en) | Antiviral antibiotic BU-4224V | |
| Higashide et al. | Antibiotic C-14482 A 1 and method for producing same |