NO145404B - Analogifremgangsmaate til fremstilling av terapeutisk virksomme purinforbindelser og salter derav - Google Patents

Description

Foreliggende oppfinnelse som er en videreutvikling i henhold til norsk utlegningsskrift nr. 144.216, vedrører fremstilling av terapeutisk virksomme, substituerte purinforbindelser med formelen:

hvor R er en hydroksy- eller aruinogruppe. Det er oppdaget at disse forbindelsene har antiviral aktivitet mot for-

skjellige klasser av DNA-virus in vitro. Forbindelsene er spesielt aktive mot influensa, vaccinia og herpes virus,

inkludert simplex, zoster og varicella, hos pattedyr, hvilke forårsaker slike sykdommer som f.eks. herpetisk keratitis hos kaniner og herpetisk encephalitis hos mus. En forbind-

else med formel I hvor R er hydroksy eller et salt derav,

er foretrukket.

Salter som er spesielt hensiktsmessige for terapeu-

tisk anvendelse er salter av farmasøytisk akseptable organiske syrer slik som melkesyre, eddiksyre, eplesyre eller p-toluen-sulfonsyre, samt salter av farmasøytisk akseptable mineral-

syrer, slik som saltsyre eller sulfonsyre. Andre salter kan også fremstilles og deretter omdannes til salter som er direkte egnet for behandlingsformål.

Forbindelsene med formel I fremstilles ifølge oppfinnelsen ved at man

a) omdanner en forbindelse med formelen:

hvor enten både M og G er et halogenatom, en merkapto-, hydroksy-, amino-, alkyltio-, alkoksy-, azid- eller hydra-zinogruppe, forutsatt at både M og G ikke er amino unntagen når M skal omdannes til hydroksy, og forutsatt at M ikke er hydroksy når G er amino unntagen når M skal omdannes til amino, til en forbindelse med formel I ved hydrolyse, aminolyse eller reduksjon, eller

b), omsetter en forbindelse med formelen:

hvor Q er hydrogen, med en forbindelse med formelen:

hvor A er karboksylat, eller

c) forestrer en alkohol med formelen:

hvor R har den ovenfor angitte betydning, ved omsetning med

maursyre, eller

d) en forbindelse med formelen:

hvor RQ er -0X eller -NHX, og X er en lavere trialkylsilyl-gruppe, fortrinnsvis trimetylsilylgruppe, omdannes til en forbindelse med formel I ved hydrolyse eller solvolyse;

og, om ønsket, når produktet fra ovenstående reaksjon er en base, omdanner en forbindelse med formel I til et syre-addisjonssalt derav, eller, om ønsket, når produktet er et salt av en forbindelse med formel I, omdanner dette salt til dets base eller et annet salt derav.

Omdannelse av en forbindelse med formel II ved hjelp av metode a) kan oppnås på flere forskjellige måter. Gruppen M kan f .eks. omdannes til en hydroksygruppe ved hydrolyse, og

G og/eller M. kan omdannes til amino ved aminolyse. Slike metoder er velkjente og beskrives i "Heterocyclic compounds - Fused Pyrimidines", del II Puriner av D.J. Brown (197i), Wiley-Interscience.

Omdannelse kan alternativt bevirkes ved anvendelse av enzymer og adenosin-deaminase omdanner f.eks. på effektiv måte en 2,6-diaminoforbindelse til den nødvendige guaninforbindelse i en vandig suspensjon ved omkring 37°C og en innledende pH-verdi på omkring 7,0.

De forbindelser som inneholder forløpere for hydroksy-og aminogrupper og kan omdannes til forbindelser med formel I, kan betraktes som mellomprodukter i syntesen av slike forbindelser .

I metode b) er atomet eller gruppen A som avspaltes en reaktiv rest av en organisk eller uorganisk syre og kan derfor være et halogenatom eller en karboksylatgruppe, og Q er hydrogen eller acyl. Den foretrukne metode omfatter kondensering av en purinforbindelse som har den ønskede 2- og 6-substituering med en formylblokkert 2-halogenalkbksy-etanol, f.eks. 2-formyloksyetoksymetylklorid, i et sterkt polart oppløsningsmiddel slik som dimetylformamid (DMF) eller heksametylfosforamid, og i nærvær av en protonakseptor slik som en base, f.eks. trietylamin eller kaliumkarbonat. Reaksjonen utføres fortrinnsvis ved romtemperatur over et lengre tidsrom, dvs. det kan være nødvendig med flere dager for opp-nåelse av rimelige utbytter.

Man kan alternativt foreta en termisk kondensering, dvs. en sammensmeltningsreaksjon, for å oppnå produktet direkte. For denne reaksjon blir en hensiktsmessig substitu-ert purinforbindelse oppvarmet sammen med formyloksyalkoksy-metylkarboksylat i nærvær av en katalytisk mengde av en sterk syre slik som svovelsyre. Temperaturer i overkant av 100°C er i alminnelighet nødvendig, men temperaturen bør fortrinnsvis ikke overstige ca. 200°C for å gjøre dekomponer-ingen så liten som mulig. Temperaturen bør velges slik at blandingen av reaktanter smelter før de utsettes for de-komponering .

Smeltereaksjonen kan også utføres under vesentlig de

samme betingelser som angitt ovenfor, med muligens noe lavere temperaturer, mellom en 9-acylpurinforbindelse og et alkoksy-metylkarboksylat eller -halogenid. Sammensmeltningsreaksjonen kan alternativt utføres under anvendelse av diesteren f.eks. 2-formyloksyetoksymetylacetat.

I metode d) kan amino- og hydroksy-gruppene reversi-belt blokkeres f.eks. med trimetylsilylgrupper. En slik forbindelse vil være produktet av kondenseringen av en trimetyl-silylert purin og en ester eller diester. Slike blokkerende grupper er meget labile og kan fjernes ved solvolyse med alkoholisk eller vandig ammoniakk, eller ved alkoholyse.

Merkurikloridsaltet av en purinforbindelse kan alternativt fremstilles i nærvær av alkali og deretter kon-denseres med en halogeneter i et oppløsningsmiddel av aro-matisk organisk type. Før fremstilling av saltet må imidler-tid alle reaktive substituenter på purinforbindelsen være blokkert og det siste trinnet i denne metode består derfor i fjerning av de blokkerende grupper.

Et farmasøytisk preparat omfatter spesielt en forbindelse med formel I i en effektiv enhetsdose-form. Den benyttede betegnelse "effektiv enhetsdose" betegner en bestemt antiviral mengde som er tilstrekkelig til å virke effektivt mot virale organismer in vivo. Farmasøytisk akseptable bærere er materialer som er nyttige for det for-mål å administrere legemidlet, og kan være faste, flytende eller gassformige materialer hvilke ellers er inerte og medisinsk akseptable bg er forenlige med de aktive bestand-deler .

Disse farmasøytiske preparater kan gis parenteralt,

oralt, anvendes som suppositorium eller pessarium, anbringes topisk som en salve, krem, aerosol, pulver eller gis som øye-eller nese-dråper, osv., avhengig av preparatet anvendes for behandling av indre eller ytre virale infeksjoner.

For indre infeksjoner administreres preparatene oralt eller parenteralt ved doseringsnivåer beregnet som den frie base, på 0,1-250 mg/kg legemesvekt, og anvendes hos mennesker i en enhetsdoseringsform, administrert noen ganger i en mengde på 1-250 mg/enhetsdose.

For oral administrasjon kan fine pulvere eller granulater inneholde fortynnings-, dispergerings- og/eller overflateaktive midler, og kan gis i en drikk, i vann eller i en sirup; i kapsler eller drageer, i tørr tilstand eller i en ikke-vandig oppløsning eller suspensjon, hvori suspen-sjonsmidler kan være inkludert; tabletter som kan omfatte bindemidler og smøremidler; eller i en suspensjon i vann eller en sirup. Der det er ønskelig eller nødvendig kan det anvendes smaksstoffer, preserveringsmidler, suspenderings-midler, fortykningsmidler eller emulgeringsmidler. Det foretrekkes tabletter og granulater, og disse kan være be-lagte .

For parenteral administrasjon eller for administrasjon i form av dråper, slik som for øyeinfeksjoner, kan forbindelsene presenteres i vandig oppløsning i en konsentrasjon på 0,1-10%, fortrinnsvis 0,1-7%, og helst 0,2% vekt/ volum. Oppløsningen kan inneholde antioksydasjonsmidler, bufferstoffer, osv.

For infeksjoner på øyet eller andre ytre vev, f.eks. munn og hud, blir preparatene fortrinnsvis påført på den infiserte del av legemet hos pasienten i form av en topisk salve eller krem. Forbindelsene kan foreligge i en salve, f.eks. med en vannoppløselig salvebasis, eller i en krem, f.eks. med en olje i vann-krem-basis, i en konsentrasjon på 0,1-10%, fortrinnsvis 0,1-7% og helst 1% vekt/vol.

Av forbindelsene med formel I foretrekkes 9-(2-formyloksyetoksymetyl)guanin fordi denne forbindelse har meget høy antiviral aktivitet mot Herpes.

Ved behandling av virale infeksjoner hos pattedyr administreres en effektiv antiviral mengde av en forbindelse med formel I eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav. Administreringen foretas fortrinnsvis ved topisk påføring eller ad oral eller parenteral vei.

Oppfinnelsen skal i det følgende illustreres under henvisning til nedenstående eksempler.

Eksempel 1

En oppløsning av 9-(2-hydroksyetoksymetyl)guanin (4,73 g) i 97% maursyre (24 ml) ble omrørt ved romtemperatur natten over. Den ravfargede oppløsning ble fortynnet med omkring 200 ml tørket eter og avkjølt. Det resulterende hvite bunnfall ble filtrert, tørket og omkrystallisert fra tørr dimetylformamid og dette ga 9- (2-foriuyloksyetoksymetyl) - guanin (3,6 g, smp. 225-275°C).

Eksempel 2

En oppløsning av 2-amino-9-(2-hydroksyetoksymetyl)-adenin (0,5 g) i 97% maursyre (2,5 ml) ble omrørt i et is-bad i 3 timer, og deretter ved romtemperatur natten over. Tørr eter (80 ml) ble tilsatt og blandingen avkjølt. Det faste stoff ble fjernet ved filtrering og oppløst i varm acetonitril (125 ml); resterende faste stoffer ble fjernet ved filtrering. Filtratet ble anbragt på en kolonne innehold-ende silisiumdioksydgel (14 g) i acetonitril. Kolonnen ble eluert med tørr aceton. Elueringsmidlet ble fordampet og det resterende faste stoff omkrystallisert fra acetonitril hvilket ga 2-amino-9-(2-formyloksyetoksymetyl)adenin (93 mg), smp. 238-240°C.

Eksempel 3

9-[ ( 2- formyloksyetoksy) metyl] 2, 6- diaminopurin

En oppløsning av 9-[(2-formyloksyetoksy)metyl]-2-azidoadenin (610 mg) i tørr dimetylformamid (125 ml) inne-holdende 5% palladium (120 mg) på trekull, ble hydrogenert ved et innledende trykk på 3,5 kg/cm 2 i 24 timer ved romtemperatur. Tynnsjiktskromatografi (silisiumdioksydgel i aceton) viste bare en flekk tilsvarende autentisk 9-[(2-. formyloksyetoksy)metyl]- 2,6-diaminopurin og intet utgangs-materiale.

Oppløsningen ble filtrert gjennom en pute av "Celite", puten ble vasket med etylacetat og de kombinerte vaskeoppløs-ninger og filtrat inndampet i vakuum ved en badtemperatur på 60°C. Det resulterende gule faste stoff ble renset ved kolonnekromatografi (silisiumdioksydgel), idet det ønskede produkt ble eluert med aceton.

Triturering av de innndampede eluater med aceton ga 119 mg (22%) 9-[(2-formyloksyetoksy)metyl]-2,6-diaminopurin hvis U.V.- og N.M.R.-spektra var i overensstemmelse med den bestemte struktur, smp. 238-240°C.

Eksempel 4

9-( 2- formyloksyetoksymetyl) guanin

Hydrogenkloridgass ble boblet inn i en avkjølt (0°C) suspensjon av etylenglykolmonoformiat (3,6 g, Annalen der chemie, 641, 1 (1961)) og paraformaldehyd (1,2 g) i tørr diklormetan (100 ml) inntil blandingen var mettet. Den olje-aktige suspensjon ble tørket over molekylarsikter etanol og vannfritt kalsiumklorid, filtrert og oppløsningsmidlet ble fjernet ved inndampning under redusert trykk (badtemperatur

<3 0°C). Det resulterende urene 2-formyloksyetoksymetylklorid (2,5 g) ble tilsatt til en oppløsning av tris-(trimetylsilyl)-guanin (4,8 g) i tørr toluen (50 ml) og blandingen oppvarmet ved tilbakeløp under nitrogen i 24 timer. Oppløsningsmidlet ble fjernet under redusert trykk hvilket ga 9-(2-formyloksyetoksymetyl)bis-N 2 ,0 6-)-trimetylsilyl)guanin som en olje som ble benyttet uten rensing. Et overskudd metanol ble tilsatt til oljen og blandingen omrørt i 1 time. Metanolen ble fjernet ved inndampning og resten omkrystallisert fra dimetylformamid og acetonitril og dette ga 9-(2-formyloksyetoksymetyl)guanin, smp. 225-227°C.

Eksempel 5

9-( 2- formyloksyetoksymetyl) guanin

Til en blanding av eddiksyre-maursyreanhydrid (1,0 ml) og p_-toluensulfonsyre (0,1 g) ble det under omrøring til-

satt dioksolan (1,0 g), og siden reaksjonen er eksoterm,

ble forsiktighet utvist. Oppløsningen fikk avkjøles i flere minutter. Tørr toluen (10 ml) og guanin (1,0 g) ble tilsatt og reaksjonsblandingen oppvarmet ved 50°C i 24 timer. Toluenet ble avdekantert og resten grundig vasket med tørr toluen (25 ml) og omkrystallisert to ganger fra tørr dimetylformamid hvilket ga 9-(2-formyloksyetoksymetyl)guanin,

smp. 225-227°C.

Claims (1)

1. Analogifremgangsmåte som er en videreutvikling i henhold til norsk patentskrift nr. 144 126, til fremstilling av terapeutisk virksomme, substituerte purinforbindelser med formelen:

   hvor R er en hydroksy- eller amino-gruppe, eller et farma-søytisk akseptabelt salt derav, karakterisert ved at man a) omdanner en forbindelse med formelen:

   hvor enten både M og G er et halogenatom, en merkapto-, hydroksy-, amino-, alkyltio-, alkoksy-, azid- eller hydra-zinogruppe, forutsatt at både M og G ikke er amino unntagen når M skal omdannes til hydroksy, og forutsatt at M ikke er hydroksy når G er amino unntagen når M skal omdannes til amino, til en forbindelse med formel I ved hydrolyse, aminolyse eller reduksjon, eller b) omsetter en forbindelse med formelen:

   hvor Q er hydrogen, med en forbindelse med formelen:

   hvor A er karboksylat, eller c) forestrer en alkohol med formelen:

   hvor R har den ovenfor angitte betydning, ved omsetning med maursyre, eller d) en forbindelse med formelen:

   hvor Rq er -0X eller -NHX, og X er en lavere trialkylsilyl-gruppe, fortrinnsvis trimetylsilylgruppe, omdannes til en forbindelse med formel I ved hydrolyse eller solvolyse;

   og, om ønsket, når produktet fra ovenstående reaksjon er en base, omdanner en forbindelse med formel I til et syreaddi-sjonssalt derav, eller, om ønsket, når produktet er et salt av en forbindelse med formel I, omdanner dette salt til dets base eller et annet salt derav.