NL9500281A - Telkamer voor biologisch onderzoek alsmede werkwijze voor de vervaardiging van een dergelijke telkamer. - Google Patents

Description

Korte aanduiding: Telkamer voor biologisch onderzoek alsmede werkwijze voor de vervaardiging van een dergelijke telkamer.

De uitvinding heeft betrekking heeft betrekking op een telkamer voor het opnemen van een monster van microscopisch deeltjesvormig biologisch materiaal in een vloeibaar medium voor kwantitatief microscopisch onderzoek van dit materiaal.

Bij onderzoek van lichaamsvochten is het vaak gewenst om monsters van dergelijk biologisch materiaal gedurende een bepaalde tijd onder een microscoop te bestuderen. Zo zal men bij onderzoek van sperma willen vaststellen hoeveel sperma cellen in het monster aanwezig zijn en ook de beweeglijkheid van de zaadcellen willen vaststellen.

Om deze bepaling uit te voeren moet een monster van een bepaalde dikte en een bepaalde hoeveelheid in een telkamer aan een microscopisch onderzoek onderworpen worden, waarbij voor het tellen gebruik gemaakt wordt van een vergelijkingsrooster ingebouwd in het objectief van de microscoop. Een dergelijk rooster kan verdeeld zijn in honderd vierkanten en het aantal zaadcellen in elk van een representatief aantal vierkantjes kan vastgesteld worden door een menselijke waarnemer om het totaal aantal zaadcellen in het rooster te tellen. Het aantal zaadcellen in een vierkant kan bijvoorbeeld ongeveer honderd tot tweehonderd bedragen.

Bekend is om voor deze bepalingen gebruik te maken van een telkamer gevormd door twee met elkaar verbonden doorzichtige platen waarbij een verbindingslaag tussen de beide platen gevormd is door kunststof.

De vervaardiging van een dergelijke telkamer is echter ingewikkeld daar men hierbij gebruik maakt van een fotoresist-methode om de gewenste begrenzing van de kamer door een kunststofwand tot stand te brengen.

Doel van de uitvinding is nu een telkamer te verschaffen waarbij dit nadeel niet optreedt en geen gebruik gemaakt behoeft te worden van de fotoresist-methode.

Dit doel wordt volgens de uitvinding bereikt doordat een telkamer voor het opnemen van een monster van microscopisch deeltjesvormig biologisch materiaal in een vloeibaar medium voor kwantitatief microscopisch onderzoek van dit materiaal, omvattende twee dor een verbindingslaag met elkaar verbonden en op een gefixeerde afstand van elkaar gehouden doorzichtinge platen en tenminste een tussen de platen gelegen en door de verbindingslaag begrensde telkamer voorzien van een kamertoevoer en een kamerafvoer gekenmerkt is doordat in de verbindingslaag tenminste los van elkaar liggende materiaaldeeltjes van een de diepte van telkamer bepalende grootte zijn opgenomen, welke materiaaldeeltjes in hoofdzaak in aanraking zijn met beide platen.

Door toepassing van materiaaldeeltjes, met een de diepte van de telkamer bepalende grootte, kan men de telkamer gemakkelijk vervaardigen terwijl bovendien door gebruik te maken van materiaaldeeltjes van aangepaste grootte telkamers vervaardigd kunnen worden met diepten aangepast aan het monster biologisch materiaal.

Onderzoek van een spermamonster vraagt namelijk een diepte van de telkamer van 12-20 μ, terwijl voor bloedcellen een diepte van een telkamer van 8-12 μ gewenst wordt.

Door toepassing van materiaaldeeltjes met een grootte tussen 10 en 40 μ kan men gemakkelijk door juiste keuze van materiaaldeeltjes van een gewenste grootte een telkamer met een gewenste diepte vormen.

Voor het verkrijgen van een gelijkmatige diepte van de telkamer over zijn gehele oppervlak liggen de de diepte van de telkamer bepalende materiaaldeeltjes op regelmatige afstand. Bovendien zijn deze deeltjes in hoofdzaak volledig omhuld door een uit een vloeiende massa gevormde vaste verbindingslaagmassa.

Om samenklontering van de genoemde materiaaldeeltjes te voorkomen bestaan deze doelmatig uit deeltjes van een niet-magnetisch materiaal, in het bijzonder aluminiumoxyde, doch andere materialen kunnen eveneens toegepast worden evenals kunststofdeeltjes.

Om verdamping van vloeistof uit het monster met microscopisch deeltjesvormig biologisch materiaal dat zich in de telkamer bevindt te voorkomen, strekt de vaste verbindings-massa zich uit rondom en tot het vrije einde van de kamer-afvoer.

Hierdoor wordt verdamping tot een minimum beperkt, waardoor stroming in het monster in de telkamer achterwege blijft.

Doelmatig bestaan de onderplaat en bovenplaat beide uit een voor ultraviolet en/of zichtbaar licht doorlaatbaar materiaal, bij voorkeur uit glas waarbij de bovenplaat zo dun mogelijk gekozen wordt om onderzoek met een microscoop te vergemakkelijken.

De uitvinding heeft eveneens betrekking op een werkwijze voor het vervaardigen van een telkamer voor het opnemen van een monster van een microscopisch deeltjesvor mig biologisch materiaal in een vloeibaar medium voor kwantitatief microscopisch onderzoek van dit materiaal, omvattende twee door een verbindingslaag met elkaar verbonden en op een gefixeerde afstand van elkaar gehouden doorzichtige platen en tenminste een tussen de platen gelegen en door de verbindingslaag begrensde telkamer voorzien van een kamertoevoer en een kamerafvoer die gekenmerkt is doordat men een vloeiend mengsel van elkaar afstotende materiaaldeeltjes en een vloeibare verbindingsmassa op een der platen aanbrengt, op dit vloeiend mengsel de andere plaat aanbrengt en druk uitoefent tot de beide platen in hoofdzaak in aanraking zijn met de grootste materiaaldeeltjes uit het vloeiend mengsel, welke grootste materiaaldeeltjes de diepte van de telkamer bepalen.

Het zal duidelijk zijn dat men door gebruik te maken van het hierboven genoemde vloeiend mengsel van elkaar afstotende materiaaldeeltjes en een vloeibare verbindingsmassa gemakkelijk op een der platen kan aanbrengen en na aanbrengen de andere plaat op dit vloeiend mengsel gedrukt kan worden zolang tot de beide platen in aanraking zijn met de grootste deeltjes uit het vloeiend mengsel.

De elkaar afstotende materiaaldeeltjes zijn bij voorkeur elektrostatisch geladen en bestaan uit een niet-magne- tisch materiaal.

Door gebruik te maken van elektrostatisch geladen deeltjes zullen deze deeltjes zich afhankelijk van de grootte steeds op een zelfde onderlinge afstand bevinden.

Met behulp van een telkamer volgens de uitvinding kan men biologische bepalingen uitvoeren aan monsters van sperma, van bloed, en van kwaadaardig weefsel zoals kanker.

De uitvinding zal nu worden toegelicht aan de hand van een uitvoeringsvoorbeeld waarin: fig. 1 een bovenaanzicht toont van een telkamer volgens de uitvinding; fig. 2 een bovenaanzicht toont van de onderplaat van de telkamer na bedrukken en opbrengen van een vloeiend mengsel uit lijm en materiaaldeeltjes; fig. 3 een doorsnede volgens de lijn III-III in fig.

1; en fig. 4 een doorsnede volgens de lijn IV-IV in fig. 1 toont; fig. 5 een aanzicht volgens fig. 1 waarbij een gedeelte van de bovenplaat is weggebroken.

Voor het vormen van een telkamer 1 brengt men op een vlakke glazen onderplaat 2 door bedrukking een patroon aan omvattende de aan beide einden van de plaat gelegen stroken 12 en 13, langs beide randen van de plaat een strook 14 respectievelijk 14' en een de omtrek van een kamer afbake-nings strook 15. De hoogte van de stroken 12, 13, 14, 14'en 15 is ongeveer 4 tot 6 μ.

Op de stroken zijn 12 respectievelijk 13 kan informatie 16 vermeld worden met betrekking tot de inhoud van de kamer.

Deze stroken 12, 13, 14 en 15 worden aangebracht door middel van een rakel met inkt.

Na afbakening van de telkamer 1 door een strook 15 laat men de inkt aan de lucht drogen of met behulp van ultraviolet licht harden.

Op de onderplaat 2 wordt daarna een vloeiend mengsel 10 gebracht van een polyesterlijm 9 gemengd met tevoren elektrostatisch geladen en derhalve elkaar afstotende materiaaldeeltjes 8 van aluminiumoxyde. De grootste deeltjes zijn 18 μ.

De materiaaldeeltjes 8 met de grootste afmeting bepalen de diepte van de telkamer 1.

Door uitzeven kan men een geschikte grootte van de materiaaldeeltjes tevoren kiezen en hierdoor ook de diepte van de telkamer regelen.

Bij tellen van zaadcellen uit sperma werkt men doelmatig met een diepte van de telkamer verkregen met behulp van materiaaldeeltjes waarvan de grootste 18 μ zijn.

Na het aanbrengen van stroken van dit vloeiende mengsel 10 wordt hierop een bovenplaat 3 gedrukt tot deze met haar onderzijde aanligt tegen de in het mengsel aanwezige materiaaldeeltjes 8 met de grootste afmeting. Gelijktijdig wordt het vloeiend mengsel 10 verspreid onder vorming van een verbindingslaag 7 die zich in elk geval uitstrekt rondom en tot het vrije einde 11 van de kamertoevoer 6.

Daarna laat men deze verbindingslaag 7 vast worden onder vorming van een vaste verbindingsmassa.

Doelmatig is de onderplaat 2 een normaal voorwerpglaasje van 7,5 x 2,5 cm en de bovenplaat een normaal dekglaasje van 3,2 x 2,5 cm.

Door ervoor te zorgen te zorgen dat de vaste verbindingslaag 7 zich rondom en tot het vrije einde 11 van de kamerafvoer uitstrekt wordt verdamping van een in de telkamer gebracht monster tot een minimum beperkt waardoor geen stroming optreedt in het aan een microscopisch onderzoek te onderwerpen monster.

Zoals men in fig. 1 ziet zijn op de onderplaat twee telkamers 1 gevormd. De vaste verbindingsmassa 17 die de twee telkamers scheidt is voldoende dicht opdat geen materiaal van een monster uit de ene telkamer in de andere telkamer kan overgaan.

Door gebruik te maken van aluminiumoxydemateriaaldeel-tjes 8 met de grootste afmetingen van 8 respectievelijk 10, 18, 28, respectievelijk 38 μ kan men telkamers vormen met een diepte van 12, 20, 30 respectievelijk 40 μ. Het zal duidelijk zijn dat vanzelfsprekend naast de genoemde mate- riaaldeeltjes 8 met de gewenste maximale grootte ook nog materiaaldeeltjes 8 aanwezig kunnen zijn met een kleinere grootte. Deze zullen echter niet bijdragen aan de afstand tussen onderplaat 2 en bovenplaat 3.

Door de opgebrachte elektrostatische lading op de 40 aluminiumoxydedeeltjes 8 die gemengd worden met de polyes-terlijm 9 zullen in de gerede telkamer 1 de grootste materiaaldeelt jes zich allen op onderling gelijke afstanden (1, zie fig. 5)bevinden ten gevolge van de afstotende werking van deze deeltjes.

Hoewel in het bovenstaande aluminiumoxydedeeltjes 8 genoemd zijn kunnen ook kunststofdeeltjes, mits deze niet aangetast worden door de lijm, gebruikt worden. Andere geschikte materialen zijn bijvoorbeeld magnesiumoxydedeel-tjes.

Vanzelfsprekend zijn naast de grootste aluminiumoxyde deeltjes 8 ook een aantal kleinere aluminiumoxydedeeltjes 8' aanwezig daar men uit aluminiumoxydedeeltjes een massa uitzeeft met de afmeting van de grootste deeltjes als bovengrens.

De hoeveelheid materiaaldeeltjes 8 welke aan de lijm toegevoegd wordt bedraagt doelmatig minder dan 10% en bij voorkeur ten hoogste 3%.

Hoeveelheden van meer dan 3% geven geen enkele verbetering.

In plaats van een polyesterlijm 9 kan men ook een silico-nenlijm gebruiken.

De kamertoevoer 5 ontstaat door een op de begrenzingsstrook 15 aansluitende uitsparing 4 in eindstrook 12 respectievelijk 13.

Claims (11)

1. Telkamer (1) voor het opnemen van een monster van microscopisch deeltjesvormig biologisch materiaal in een vloeibaar medium voor kwantitatief microscopisch onderzoek van dit materiaal, omvattende twee door een verbindingslaag (7) met elkaar verbonden en op een gefixeerde afstand van elkaar gehouden doorzichtige platen (2, 3)en tenminste een tussen de platen gelegen en door de verbindingslaag (7) begrensde telkamer (1) voorzien van een kamertoevoer (5) en een kamerafvoer (6), met het kenmerk, dat in de verbindingslaag (7) tenminste los van elkaar liggende materiaaldeeltjes (8) van een de diepte van telkamer bepalende grootte zijn opgenomen, welke materiaaldeeltjes in hoofdzaak in aanraking zijn met beide platen (2, 3).

2. Telkamer volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat de, de diepte van de telkamer bepalende materiaaldeeltjes (8) op regelmatige afstand van elkaar liggen.

3. Telkamer volgens conclusie 1 of 2, met het kenmerk, dat de genoemde materiaaldeeltjes (8) uit een niet-magne-tisch materiaal bestaan.

4. Telkamer volgens een of meer der voorgaande conclu sies, met het kenmerk, dat de genoemde materiaaldeeltjes (8) volledig omhuld zijn door een uit een vloeiende massa gevormde vaste verbindingslaag (7).

5. Telkamer volgens een of meer der conclusies 1-4, met het kenmerk, dat de vaste verbindingslaag zich uitstrekt rondom en tot het vrije einde (11) van de kamerafvoer (6).

6. Telkamer volgens een of meer der voorgaande conclusies, met het kenmerk, dat de bovenplaat (3) zo dun mogelijk gekozen wordt.

7. Werkwijze voor het vervaardigen van een telkamer voor het opnemen van een monster van microscopisch deeltjesvormig biologisch materiaal in een vloeibaar medium voor kwantitatief microscopisch onderzoek van dit materiaal, omvattende twee door een verbindingslaag (7) met elkaar verbonden en op een gefixeerde afstand van elkaar gehouden doorzichtige platen (2, 3) en tenminste een tussen de platen gelegen en door de verbindingslaag (7) begrensde telkamer (1) voorzien van een kamertoevoer (5) en een kamerafvoer (6), met het kenmerk, dat men een vloeiend mengsel (10) van elkaar afstotende, materiaaldeeltjes en een vloeibaar verbindingsmateriaal op een der platen (2) aanbrengt, op deze vloeiende massa (10) de andere plaat (3) aanbrengt en druk uitoefent tot de beide platen in hoofdzaak in aanraking zijn met de grootste materiaaldeeltjes (8) uit de vloeiende massa, welke grootste materiaaldeel-tjes de diepste van de telkamer bepalen.

8. Werkwijze volgens conclusie 7, met het kenmerk, dat de elkaar afstotende materiaaldeeltjes (8) elektrostatisch geladen worden voor het mengen met het verbindingsmassama-teriaal.

9. Werkwijze volgens conclusie 8, met het kenmerk, dat de materiaaldeeltjes (8) deeltjes van een niet-magnetisch materiaal zijn.

10. Werkwijze volgens een of meer der conclusies 7-9, met het kenmerk, dat men de vloeiende massa zich laat uitstrek ken rondom en tot het vrije einde (11) van de kamerafvoer (6) .

11. Werkwijze volgens een of meer der conclusies 7-10, met het kenmerk, dat de bovenplaat (3) zo dun mogelijk gekozen wordt.