NL8102323A - Fosforzuurderivaten, werkwijze ter bereiding daarvan, alsmede werkwijze voor het fosforyleren van organische hydroxylverbindingen en fosfortriesterintermediairen voor gebruik in de synthese van desoxy- en ribo-nucleinezuren (dna en rna). - Google Patents

Fosforzuurderivaten, werkwijze ter bereiding daarvan, alsmede werkwijze voor het fosforyleren van organische hydroxylverbindingen en fosfortriesterintermediairen voor gebruik in de synthese van desoxy- en ribo-nucleinezuren (dna en rna). Download PDF

Info

Publication number
NL8102323A
NL8102323A NL8102323A NL8102323A NL8102323A NL 8102323 A NL8102323 A NL 8102323A NL 8102323 A NL8102323 A NL 8102323A NL 8102323 A NL8102323 A NL 8102323A NL 8102323 A NL8102323 A NL 8102323A
Authority
NL
Netherlands
Prior art keywords
compound
formula
phosphoric acid
protected
acid derivatives
Prior art date
Application number
NL8102323A
Other languages
English (en)
Original Assignee
Unilever Nv
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Unilever Nv filed Critical Unilever Nv
Priority to NL8102323A priority Critical patent/NL8102323A/nl
Priority to CA000402631A priority patent/CA1202253A/en
Priority to US06/376,510 priority patent/US4503233A/en
Priority to DE8282200564T priority patent/DE3263508D1/de
Priority to AT82200564T priority patent/ATE13300T1/de
Priority to EP82200564A priority patent/EP0064796B1/en
Priority to JP57079833A priority patent/JPS57203094A/ja
Publication of NL8102323A publication Critical patent/NL8102323A/nl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/6515—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07F9/6518—Five-membered rings
    • C07F9/65188—Five-membered rings condensed with carbocyclic rings or carbocyclic ring systems

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Description

ft
Rijksuniversiteit, te Leiden.
Fosforzuurderivaten, werkwijze ter bereiding daarvan, alsmede werkwijze voor het fosforyleren van organische hydroxylverbindingen en fosfortriesterintermediairen voor gebruik in de synthese van desoxy-en ribo-nucleinezuren (DNA, en RNA).
De onderhavige uitvinding heeft betrekking op fosforzuurderi-vaten, die geschikt zijn om als fosforyleringsmiddel te worden gebruikt. Tevens heeft de uitvinding betrekking op een werkwijze voor het fosforyleren van organische hydroxylverbindingen en op 5 fosfortriesterintermediairen voor gebruik in de synthese van desoxy-en ribo-nucleinezuren (DNA en RNA).
Nucleinezuren kunnen onderverdeeld wórden in twee typen: a) m de desoxyribonucleïnezuren (DNA),:die de materiële basis vormen voor de genetische informatie van alle organismen; b) de ribonucleinezuren, 10 (RNA), die als boodschapper-, overdrachts- en ribosomaal RNA bekend zijn. DNA- en RNA-fragmenten zijn oligonucleotiden of polynucleotiden met een geringe lengte, bestaande uit ketens van nucleosiden die door een fosforzuurdiesterverbinding tussen de 3' -plaats van het ene nucleoside en de 5'-plaats van het andere nucleoside met elkaar 15 zijn verbonden.
Een veel gebruikte werkwijze voor het bereiden van polynucleotiden is de zgn. fosfortriestermethode ("phosphc- triester approach" zoals beschreven in Tetrahedron 34, 3143-3179 (1978)).
Een cruciale stap in de synthese van polynucleotiden via de 20 fosfortriestermethode is de fosforylering. Daarom spant de research zich in het bijzonder in met het zoeken naar nieuwe fosforylerende middelen, die niet alleen effectief en efficient, maar tevens selectief fosforyleren.
In het bijzonder is het voor de synthese van oligonucleotiden en 25 nucleinezuren van belang, dat fosforylerende middelen worden gevonden, waarmede nucleoside-fosfortriester intermediairen kunnen worden verkregen, zonder dat bij de vorming ervan ongewenste nevenreacties aan de base-delen guanine, adenine, cytosine, thymine of uracil plaatsvinden. De aldus gevormde nucleoside-fosfortriester intermediairen 30 dienen bovendien voor de vorming van 3'-5'-internucleotide fosfcr- 8102323 - Δ - f , * di e s terverbindingen geschikt te zijn, teneinde de synthese van poly-nucleotiden mogelijk te maken.
Aanvraagster heeft nu nieuwe fosforzuurderivaten gesynthetiseerd, waarvan is gebleken, dat zij uitstekend hydroxylverbindingen, in het 5 bijzonder 5'-beschermde d-nucleosiden, kunnen fosforyleren.
De in het laatste geval gevormde intermediairen (zie verbinding met formule 4 van het formuleblad) bleken zeer voorspoedig te reageren 2 met alcoholfuncties (R OH), in het bijzonder met alcoholfuncties, die normaal gebruikt worden voor de bereiding van waardevolle d-nucleoside 10 3'-fosfortriester intermediairen.
Bovendien is verrassenderwijze gebleken, dat bij de synthese van deze 3'-fosfortriesterderivaten de fosforylering zonder nevenreacties aan o. a. guanine, uracil en cytosine verloopt. Daarnaast is komen vast te staan, dat gevormde intermediairen (formule 4 van formuleblad) zeer goed 15 kunnen worden gebruikt voor de introductie van 3'-5'-internucleotide-bindingen.
Een verrassende ontdekking bijvoorbeeld bij de bereiding van dimeren of dinucleotiden, zoals volledig beschermd GpT is, dat de synthese ervan verloopt zonder enige nevenreactie of verkleuring van .
20 het reactiemengsel. Dit is daarom zo verrassend, omdat bij gebruikmaking van andere fosforylerende middelen dan de onderhavige fosfor-zuurderivaten, in vele experimenten betreffende de synthese van guanine bevattende DNA-fragmenten steeds, afhankelijk van de gevolgde fosfortriestermethode, vorming van nevenprodukten en verkleu-25 ring van het reactiemengsel is geconstateerd. (Zie bijvoorbeeld: - J.F.M. de Rooij, G. Wille-Hazeleger, J. Serdijn et al., Red. Trav.Chim.Pays-Bas, 98/53 (1979); - J. Stawinsky, T. Hozumi, S.A. Narang.et al., Nucleic Acids Res., 4_, 353 (1977); 30 - J.B. Chattopadhyaya and C.B. Reese, Tetrahedron Letters, 5059 (1979); - C.B. Reese and A. Ubasawa, Tetrahedron Letters 2265 (1980)).
-Daarnaast hebben inleidende experimenten aangetoond, dat bovenbeschreven werkwijze met succes kan worden toegepast bij de synthese van DNA- en RNA-fragmenten op een vaste drager.
35 De uitvinding heeft dan ook betrekking op fosforzuurderivaten 12 3 4 met formule 1 van het formuleblad, waarin R , R , R en R alkyl- 5 groepen met l-4C-atomen en/of waterstof zijn en waarin Z is. OR met R^ is alkyl of aryl of Z is een primaire of secundaire amine . Bi j voor- 1 2 3 4 5 keur zijn R , R , R en R waterstof en is Z gelijk aan OR , waarin 40 R^ is 2-ClCgH^. Morfolino (formule 6) is bijv. een geschikte groep Z.
8102323
ί V
De uitvinding heeft eveneens betrekking op het gebruik van bovengenoemde fosforzuurderivaten als f osforylerende middelen.
De uitvinding betreft ook een werkwijze voor het bereiden van bovengenoemde fosforzuurderivaten. Deze werkwijze wordt gekenmerkt 5 door het feit, dat men een verbinding met formule 2 waar X is Cl laat 12 3 4 reageren met een verbinding met formule 3, waarin R =R =R =R is waterstof.
De uitvinding betreft daarnaast een werkwijze voor het fosfory-leren van een hydroxyl verbinding, waarbij men de hydroxylverbinding 10 laat reageren met onderhavige fosforzuurderivaten. Bij voorkeur laat men een mono'sacharide met onderhavige fosforzuurderivaten reageren. Aangezien de uitvinding van bijzonder belang is in de nucleïnezuur-chemie zal men nucleosiden, nucleotiden of polynucleotiden bij voorkeur met onderhavige fosforzuurderivaten fosforyleren.
15 In het bijzonder zijn nucleosiden of 3' _^ 5' polynocleotiden waarvan de 5'-hydroxyIgroep en 3*-hydroxylgroep beschermd zijn, geschikt om 4· met de onderhavige fosforzuurderivaten gefosforyleerd te worden.
Meer geschikt zijn nucleosiden en 3' _^ 5' polynucleotiden, van het bovengenoemde type, waarvan nog andere eventueel aanwezige reactieve 20 groepen beschermd zijn.
Zeer geschikt zijn DNA- of RNA-fragmenten, die een vrije hydroxylgroep bevatten. Een RNA-fragment met vrije 5'- en 3'-hydroxyIgroepen is hiervan een voorbeeld.
De uitvinding heeft eveneens betrekking op de gefosforyleerde 25 verbindingen verkregen volgens de hiervoor besproken werkwijzen.
De uitvinding strekt zich tevens uit tot een werkwijze voor het
bereiden van fosfortriesterderivaten met formule 5, waarin B is T
An ' DFA
(Thymine), C (door anisoyl beschermd cytosine), G (door difenyl-
Bz acetyl beschermd guanidine), A (door benzoyl beschermd adenine) of 3 30 ’ een op andere wijze beschermde purine of pyrimidine base en R is t-butyldimethylsilyl of een andere de 5'OH-groep beschermde groep, waarbij men een verbinding met formule 4 laat reageren met een 2 2 alcohol R OH, waarbij R is CH^CH^CN, CH^CBr^ 4-nitrofenylethyl of 5-chloor-8-quinolyl.
35 Deze fosforyleringsreacties wordt bij voorkeur uitgevoerd in aanwezigheid van een tertiaire base in het bijzonder in aanwezigheid van pyridine of N-methyl imidazool. N-methyl imidazool verdient boven pyridine de voorkeur omdat deze tertiaire base de snelheid van de fosforylering vier maal meer blijkt te versnellen dan pyridine.
8102323 < -5 - 4 -
Gefosforyleerde 5'-beschermde d-nucleoside intermediairen met formule 3 4 behoren tevens tot de uitvinding, waarbij R een de 5'OH-groep beschermende groep en bij voorkeur t-butyldimethyIsily1 is.
De uitvinding heeft verder betrekking op een werkwijze voor de 5 bereiding van polynucleotiden, waarbij 3'-5' internucleotide fosfor-triesterverbindingen worden verkregen, waarbij de eerdergenoemde gefosfory leerde intermediairen met formule 4 worden gebruikt.
In het bijzonder is de uitvinding gericht op polynucleotiden verkregen met behulp van de eerdergenoemde werkwijze, waarbij de voorkeur 10 wordt gegeven aan beschermde RNA- en DNA-fragmenten.
De hier genoemde werkwijze wordt bij voorkeur uitgevoerd in aanwezigheid van een vaste drager, zoals cellulose, polystyreen, polyacrylamide of silica.
De uitvinding zal nader worden toegelicht aan de hand van de 15 volgende voorbeelden.
* i * * · .
81 0 2 3 2 3 ¥ >
Voorbeeld I
Bereiding van m-chloorfenylfosforodi-i-hydroxy.'.benzo triazolidaat.
1 m mol m-chloorfenylfosforodichloridaat (formule 2, waarin X is Cl 6 en R =2-ClH_H.) werd toegevoegd aan een geroerde oplossing van 2 m mol 6 4 5 1-hydroxy benzotriazool (HOBT) in 5 ml. droog tetrahydrofuraan (THF) in aanwezigheid van 2 m mol pyridine. Het reactiemengsel werd gedurende 1 uur op 20°C gehouden. Uit de hoeveelheid gevormd pyridinium- HCl-zout kon worden geconcludeerd dat de reactie volledig was verlopen.
31 P NMR-analyse gaf signaal te zien bij £>=-8.31 p.p.m. ten opzichte van 10 extern fosforzuur (d.w.z fosforzuur in apart buisje).
Voorbeeld II·
Fosforylering van 5*-t-butyldimethylsilylthymidine met m-chloorfenyl-fosforodi-1-hydroxy. benzotriazolidaat tot een fosfotriester intermediair.
15 lm mol 5'-t-butyldimethylsylilthymidine werd toegevoegd aan een geroerde oplossing van 1/1 m mol m-chloorfenylfosforodi-1-hydroxy. .benzotriazolidaat in 5 ml. THF. Na 30 minuten bij 20°C gaf TLC-analyse (CHCl^rMeOH, 92:8/ v/v) aan, dat het uitgangsprodukt geheel in het gewenste intermediair was omgezet.
3 20 Hydrolyse van het gevormde intermediair met formule 4, waarin R is t-butyldimethylsilyl, B is thymine en R* is 2-ClHgH^ met waterig triethylamine, gevolgd door concentratie, gaf na precipiteren met petroleum-ether, een vaste stof.. Analyse van de verbinding met ^PNMR spectroscopie liet zien een signaal bij £Γ·=~7.11 p.p.m. ten op-25 zichte van extern fosforzuur.
Voorbeeld III
Reacties van het in voorbeeld II gevormd intermediair met alcohol-2 functies (R OH).
30 in onderstaande tabel worden een aantal alcoholfuncties aangegeven 3 waarmee het intermediair met formule 4, waarin R is t-butyldimethyl-1 silyl en R is 2-ClHgH^ blijkt te kunnen reageren.‘
In de tabel worden tevens de reactieomstandigheden en de opbrengsten vermeld.
8102323
» V
- 6 -
TABEL
Omstandigheden gebruikt bij de bereiding van3'fosfortriester (formule 5) a) 2
Exp. No. Verbinding 4 Alcohol(R QH) Tertiaire Tijd Opbr.
(1.1 mmol) (2.0 mmol) base (uren) (%) 5 1. B=T R^-CÏ^CH^CN pyridine'"*^ 3.5 95 2. B=CAn R2=-CH CBr_ pyridine ^ 3.5 75 DPA 2 ^ ^ b) 3. B=G R ^CH^CBr^ pyridine 3.5 77 4. B=ABz R2=-CH CBr pyridine ^ 3.5 78 2 ^ 3 c) 5. B=T R=4-nitro- N-methyl- 1.0 88 fenylethyl imidazool 2 c) 10 6. B^T r =5-chloor- N-methyl- 1.0 64 8-quinolyl imidazool a) 3 R =t-butyldimethylsilyl.
U V
'Aan een oplossing van 4 in THF (5 ml.) werd droog pyridine (2 ml.) toegevoegd.
* c) 15 Aan een oplossing van 4 in THF (5 ml.) werd droog N-methylimidazool (4 mmol) toegevoegd.
Het blijkt dat de meeste alcoholf uncties, die normaal gebruikt worden voor de bereiding van waardevolle d-nucleoside 3' -fosfortriester inter-20 mediairen met formule 5, gemakkelijk kunnen worden gefosforyleerd in het bijzonder in aanwezigheid van tertiaire basen als pyridine of N-methylimidazool. N-methylimidazool blijkt verrassenderwijze de snelheid van de fosforylering vier maal meer te vergroten dan pyridine.
25
Voorbeeld IV
Bereiding van dimeer of het dinucleotide TpT.
Aan een geroerde oplossing van fosfotriester:intermediair met formule 3 1 4, waarin Β is thymine, R is t-butyldimethylsilyl en R is 2-ClCgH^, 30 verkregen door behandeling van 1.0 mmol 5'-t-butyldimethylsilylthymi-dine met 1,1 mmol m-chloorfenylfoforodi-l-hydroxy'ienzotriazolidaat onder omstandigheden als volgens voorbeeld II, werd toegevoegd 1.0 mmol 3'-0-difenylacethylthymidine. Na 15 minuten werd 4 mmol N-methylimidazool toegevoegd en werd het reactiemengsel op 20°C gehouden.
35 TLC-analyse, na 45 minuten, liet zien dat de reactie volledig was verlopen. Na opwerken en zuivering van het ruwe produkt middels korte kolorachromatografie (zie B.J. Hunt en W. Rigby, Chem.Ind. 1868 (1967)) werd 0.93 mmol van het volledig beschermde dimeer TpT verkregen.
De dimeren ApT, CpT, GpT werden op analoge wijze verkregen in op-40 brengsten van ongeveer 80%.
8102323 - 7 - . .
Verwijdering van alle beschermende groepen in de dimeren middels oximaat behandeling, gevolgd door fluoride-ion-en tenslotte waterige ammonia behandeling, zoals beschreven in respectievelijk "Nucleic
Acids Res.", 8, 2039 (1980) door J.B. Chattopadhyaya en C.B. Reese, 5 "J. Am. Chem.Soc. 97, 7332 (1975) S.A. Narang c.s. en Reel. Trav.
Chim. Pays-Bas, 98, 53 (1979) J.F.M. de Rooij c.s., verschafte de over- korastige onbeschermde dimeren, die slechts 3'-5'-fosfordiesterverbin- 31 dingen bevatten, hetgeen bevestigd werd middels P NMR alsook HPLC-analyse in combinatie met een enzymatische afbraakprocedure waarbij 10 de enzymen slangegif- en milt-fosfordiesterase werden gebruikt.
Voorbeeld V ' Bereiding van üpü.
1 M.mol 5*-O-levulinoy1-2'-0-(4-methoxytetrahydropyranyl)-uridine liet 15 men reageren met 1,1 m.mol m-chloorfenylfosforodi-l-hydroxy benzotria-zolidaat en 1,0 m.mol 2',3'-O-methoxymethylene-uridine onder omstandigheden als gebruikt bij de synthese van d-nucleoside volgens vóórheel IV, met dien verstande, dat bovendien 4 m.mol pyridine werd toegevoegd. Na opwerken en zuiveren werd 0,82 m.mol UpU verkregen.
8102323

Claims (21)

1. Fosforzuurderivaten met formule 1 van het formuleblad, waarin R , R , 3 4 R en R alkylgroepen met l-4C-atomen en/of waterstof zijn en waarin 5 5’ Z is OR met R is alkyl of aryl of Z is een primaire of secundaire 5 amine. 1 2
2. Fosforzuurderivaten volgens conclusie 1 met het kenmerk, dat R =R = 3 4 5 5 R =R is waterstof en Z is OR , waarin R is 2-C1C.H.. 6 4
3. Fosforzuurderivaten volgens conclusie 1 of 2 met het kenmerk, dat de fosforzuurderivaten worden gebruikt als fosforylerende middelen.
4. Werkwijze voor de bereiding van fosforzuurderivaten volgens conclusie 1 of 2 met het kenmerk, dat men een verbinding met formule 2 15 laat reageren met een verbinding met formule 3.
5. Werkwijze volgens conclusie 4, met het kenmerk dat men een verbinding met formule2 waarin X = CL laat reageren met een verbinding 12 3 4 met formule 3 waarin R =R =R =R is waterstof. 20
6. Werkwijze voor het fosfory leren van een hydroxyl verbinding met het kenmerk dat men de hydroxylverbinding laat reageren met fosforzuurderivaten volgens conclusie 1 of 2.
7. Werkwijze volgens conclusie 6, met het kenmerk, dat de hydroxyl verbinding een monosacharide of een derivaat daarvan is.
8. Werkwijze volgens conclusie 7, met het kenmerk, dat de hydroxylverbinding een nucleoside, nucleotide of polynucleotide is. 30
9. Werkwijze volgens conclusie 8, met het kenmerk, dat de hydroxylverbinding een nucleoside of een 3' 51-polynucleotide is, dat een vrije 51-hydroxylgroep en een beschermde 3'-hydroxylgroep bevat, en waarvan andere eventueel aanwezige reactieve groepen beschermd 35 zijn.
10. Werkwijze volgens conclusie 8, met het kenmerk, dat de hydroxylverbinding een nucleoside of een 3’ 5'-polynucleotide is, dat een vrije 3'-hydroxylgroep en een beschermde 5'-hydroxylgroep 8102323 - 9 - - bevat en waarvan andere eventueel aanwezige reactieve groepen beschermd zijn.
11. Werkwijze volgens conclusie 6, met het kenmerk, dat de hydroxy1- 5 verbinding een DNA- of RNA-fragment met een vrije hydroxyIgroep is.
12. Werkwijze volgens conclusie 11, met het kenmerk, dat de hydroxyl-verbinding een RNA-fragment met vrije 5'- en 31-hydroxylgroepen is.
13. Gefosforyleerde verbinding verkregen met de werkwijze volgens een of meer van de conclusies 6-12.
14. Werkwijze voor het bereiden van fosfotriesterderivaten met formule 5, waarin B is T, C^, G°FA, ABZ of op andere wijze beschermde 15 purine of pyrimidine base en R^ is t-butyldimethylsilyl of een andere de 5 *OH-groep beschermende groep, waarbij men een verbinding 2 2 met formule 4 laat reageren met een alcohol R OH waarbij R is CH^CH^CN, CH^CBr^, 4-nitrofenylethyl of 5-ehloor-8-quinolyl. 20
15. Werkwijze volgens conclusie 14 met het kenmerk, dat de reactie wordt uitgevoerd in aanwezigheid van pyridine of N-methylimidazool.
16. Werkwijze volgens conclusie 14 met het kenmerk, dat N-methylimida- 25 zool wordt gebruikt.
17. Gefosforyleerde 5'-beschermde d-nucleoside intermediairen met for- 3 jnule 4, waarin R is een de 5‘OH-groep beschermende groep en bij voorkeur een t-butyldimethylsilyl. 30
18. Werkwijze voor de bereiding van polynucleotiden waarbij 3'-5' internucleotide fosfotriesterbindingen worden verkregen met het kenmerk, dat daarbij gefosforyleerde 5'-beschermde d-nucleoside intermediairen volgens conclusie 17 wordt gebruikt. 35
19. Polynucleotiden in het bijzonder beschermde RNA- en DNA-fragmenten verkregen met behulp van de werkwijze volgens conclusie 18.
20. Werkwijze volgens conclusie 18 met het kenmerk, dat een vaste 8102323 drager wordt gebruikt.
21. Polynucleotiden in het bijzonder beschermde RNA- en DNA-fragmenten verkregen met behulp van de werkwijze volgens conclusie 20. t 8102323 1 . . · JK V ^ N N-0— P-O-N N Z R1^^R4 R2 R3 R2 R3 3 2 - H r2yVn^ x-r*. iV-/ 0R' R4 i» ‘ i r3°^/ OvJ R3n B ' . V> 0 |l| I 1 Λ 0= p-O-N N V ö T 6 -H VO 8102323
NL8102323A 1981-05-12 1981-05-12 Fosforzuurderivaten, werkwijze ter bereiding daarvan, alsmede werkwijze voor het fosforyleren van organische hydroxylverbindingen en fosfortriesterintermediairen voor gebruik in de synthese van desoxy- en ribo-nucleinezuren (dna en rna). NL8102323A (nl)

Priority Applications (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
NL8102323A NL8102323A (nl) 1981-05-12 1981-05-12 Fosforzuurderivaten, werkwijze ter bereiding daarvan, alsmede werkwijze voor het fosforyleren van organische hydroxylverbindingen en fosfortriesterintermediairen voor gebruik in de synthese van desoxy- en ribo-nucleinezuren (dna en rna).
CA000402631A CA1202253A (en) 1981-05-12 1982-05-10 Phosphorylating agent and process for the phosphorylation of organic hydroxyl compounds
US06/376,510 US4503233A (en) 1981-05-12 1982-05-10 Phosphorylating agent and process for the phosphorylation of organic hydroxyl compounds
DE8282200564T DE3263508D1 (en) 1981-05-12 1982-05-10 Phosphorylating agent and process for the phosphorylation of organic hydroxyl compounds
AT82200564T ATE13300T1 (de) 1981-05-12 1982-05-10 Phosphorylierungsmittel und verfahren zur phosphorylierung organischer hydroxylverbindungen.
EP82200564A EP0064796B1 (en) 1981-05-12 1982-05-10 Phosphorylating agent and process for the phosphorylation of organic hydroxyl compounds
JP57079833A JPS57203094A (en) 1981-05-12 1982-05-12 Phosphorylating agent of organic hydroxyl compound and phosphorylation

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
NL8102323A NL8102323A (nl) 1981-05-12 1981-05-12 Fosforzuurderivaten, werkwijze ter bereiding daarvan, alsmede werkwijze voor het fosforyleren van organische hydroxylverbindingen en fosfortriesterintermediairen voor gebruik in de synthese van desoxy- en ribo-nucleinezuren (dna en rna).
NL8102323 1981-05-12

Publications (1)

Publication Number Publication Date
NL8102323A true NL8102323A (nl) 1982-12-01

Family

ID=19837493

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NL8102323A NL8102323A (nl) 1981-05-12 1981-05-12 Fosforzuurderivaten, werkwijze ter bereiding daarvan, alsmede werkwijze voor het fosforyleren van organische hydroxylverbindingen en fosfortriesterintermediairen voor gebruik in de synthese van desoxy- en ribo-nucleinezuren (dna en rna).

Country Status (7)

Country Link
US (1) US4503233A (nl)
EP (1) EP0064796B1 (nl)
JP (1) JPS57203094A (nl)
AT (1) ATE13300T1 (nl)
CA (1) CA1202253A (nl)
DE (1) DE3263508D1 (nl)
NL (1) NL8102323A (nl)

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NL8102323A (nl) * 1981-05-12 1982-12-01 Unilever Nv Fosforzuurderivaten, werkwijze ter bereiding daarvan, alsmede werkwijze voor het fosforyleren van organische hydroxylverbindingen en fosfortriesterintermediairen voor gebruik in de synthese van desoxy- en ribo-nucleinezuren (dna en rna).
US4482708A (en) * 1982-08-09 1984-11-13 Nguyen Nicolas C 3', 5'-Dinucleoside phosphates of 5,6-dichloro-1-β-D-ribofuranosyl-1-benzimidazole and methods of making and using the same
USRE34069E (en) * 1983-08-18 1992-09-15 Biosyntech Gmbh Process for the preparation of oligonucleotides
DE3329892A1 (de) * 1983-08-18 1985-03-07 Köster, Hubert, Prof. Dr., 2000 Hamburg Verfahren zur herstellung von oligonucleotiden
US5254691A (en) * 1990-10-29 1993-10-19 Fuji Photo Film Co., Ltd. Phosphorylating agent and method for forming phosphodiester bond using the same
JP2673605B2 (ja) * 1990-10-29 1997-11-05 富士写真フイルム株式会社 リン酸化剤およびそれを用いたホスホジエステル結合形成法
EP2551273A4 (en) * 2010-01-20 2013-10-16 Univ Tokyo PHOSPHORYLATION REAGENT

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NL8102323A (nl) * 1981-05-12 1982-12-01 Unilever Nv Fosforzuurderivaten, werkwijze ter bereiding daarvan, alsmede werkwijze voor het fosforyleren van organische hydroxylverbindingen en fosfortriesterintermediairen voor gebruik in de synthese van desoxy- en ribo-nucleinezuren (dna en rna).

Also Published As

Publication number Publication date
US4503233A (en) 1985-03-05
CA1202253A (en) 1986-03-25
EP0064796B1 (en) 1985-05-15
ATE13300T1 (de) 1985-06-15
EP0064796A3 (en) 1983-01-05
EP0064796A2 (en) 1982-11-17
DE3263508D1 (en) 1985-06-20
JPS57203094A (en) 1982-12-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US5552538A (en) Oligonucleotides with cleavable sites
US5367066A (en) Oligonucleotides with selectably cleavable and/or abasic sites
EP1795536A1 (en) Phosphoramidite compound and method for producing oligo-rna
US6593088B1 (en) Reversible photocoupling nucleic acid and phosphoroamidite
EP0305201B1 (en) Protected biotin derivatives
NL8102323A (nl) Fosforzuurderivaten, werkwijze ter bereiding daarvan, alsmede werkwijze voor het fosforyleren van organische hydroxylverbindingen en fosfortriesterintermediairen voor gebruik in de synthese van desoxy- en ribo-nucleinezuren (dna en rna).
CA2254065A1 (en) Nucleoside derivatives with photoliable protective groups
Grøtli et al. Solid-phase synthesis of branched RNA and branched DNA/RNA chimeras
EP2017282A1 (en) Method of capping oligonucleic acid
US4419509A (en) Process for de-cyanoethylating blocked nucleotides
US5412088A (en) 6-O-substituted guanosine derivatives
US4426517A (en) Process for de-cyanoethylating blocked nucleotides
CA2554618A1 (en) Ribonucleic acid compound and method of liquid-phase synthesis of oligonucleic acid compound
US6579976B2 (en) Process for producing 2′,3′-diethyl substituted nucleoside derivatives
US7820810B2 (en) Process for the synthesis of 2′-O-substituted purine nulceosides
Matulic‐Adamic et al. A Practical Synthesis of 3′‐Thioguanosine and of Its 3′‐Phosphoramidothioite (a Thiophosphoramidite)
EP0787740A2 (en) Coupling unit of (6-4)photoproduct, process for preparing the same, process for preparing oligonucleotide containing (6-4) photoproduct by using the same and process for preparing DNA containing (6-4) photoproduct by using the same
Sekine et al. Synthesis of oligoribonucleotides by use of 4, 4', 4"-tris (acyloxy) trityl groups for protection of the 6-amino group of adenosine.
JPH05320122A (ja) オリゴヌクレオチドの化学的合成法
Wang et al. Synthesis of 2′-Substituted Sulfide-Linked Dinucleotides
EP0075392A1 (en) Process for de-cyanoethylating blocked nucleotides
JP2000198796A (ja) 核酸誘導体の製造方法
JPH06345794A (ja) ヌクレオシド又はヌクレオチド誘導体
Banda et al. Synthesis of 2-(5-azido-5-deoxy-< img src='/image/spc_char/beta. gif'border= 0>-D-ribofuranosyl)-4-methyl-5-nitro-1, 2, 3-triazole
JPH072846A (ja) テトラヒドロフルフリルアルコール誘導体

Legal Events

Date Code Title Description
A1B A search report has been drawn up
BV The patent application has lapsed