NL1017852C2 - Recombinant nucleotidevolgorde welke codeert voor een gen. - Google Patents
Recombinant nucleotidevolgorde welke codeert voor een gen. Download PDFInfo
- Publication number
- NL1017852C2 NL1017852C2 NL1017852A NL1017852A NL1017852C2 NL 1017852 C2 NL1017852 C2 NL 1017852C2 NL 1017852 A NL1017852 A NL 1017852A NL 1017852 A NL1017852 A NL 1017852A NL 1017852 C2 NL1017852 C2 NL 1017852C2
- Authority
- NL
- Netherlands
- Prior art keywords
- nucleotide sequence
- sequence
- recombinant nucleotide
- gene
- recombination system
- Prior art date
Links
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims description 45
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 title claims description 24
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 title claims description 24
- 230000006798 recombination Effects 0.000 claims description 16
- 238000005215 recombination Methods 0.000 claims description 16
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 8
- 230000035897 transcription Effects 0.000 claims description 8
- 238000013518 transcription Methods 0.000 claims description 8
- 108010091086 Recombinases Proteins 0.000 claims description 7
- 102000018120 Recombinases Human genes 0.000 claims description 7
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 5
- 238000013519 translation Methods 0.000 claims description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 4
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 claims description 3
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 claims description 3
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 claims description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 108090000446 ribonuclease T(2) Proteins 0.000 claims 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 12
- FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 13-cis retinol Natural products OCC=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 102100031988 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 6 Human genes 0.000 description 8
- 108050002568 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 6 Proteins 0.000 description 8
- FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N Vitamin A Natural products OC/C=C(/C)\C=C\C=C(\C)/C=C/C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N 0.000 description 8
- FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N all-trans-retinol Chemical compound OC\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N 0.000 description 8
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 8
- 235000019155 vitamin A Nutrition 0.000 description 8
- 239000011719 vitamin A Substances 0.000 description 8
- 229940045997 vitamin a Drugs 0.000 description 8
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 4
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 4
- 101150036876 cre gene Proteins 0.000 description 4
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 4
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 4
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 3
- 108010051219 Cre recombinase Proteins 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 238000003782 apoptosis assay Methods 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000005522 programmed cell death Effects 0.000 description 3
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 3
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 210000001654 germ layer Anatomy 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 206010013700 Drug hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 108700007698 Genetic Terminator Regions Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 108091027981 Response element Proteins 0.000 description 1
- 206010042033 Stevens-Johnson syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010044223 Toxic epidermal necrolysis Diseases 0.000 description 1
- 231100000087 Toxic epidermal necrolysis Toxicity 0.000 description 1
- 229930003316 Vitamin D Natural products 0.000 description 1
- QYSXJUFSXHHAJI-XFEUOLMDSA-N Vitamin D3 Natural products C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@H](C)CCCC(C)C)=C/C=C1\C[C@@H](O)CCC1=C QYSXJUFSXHHAJI-XFEUOLMDSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 238000005842 biochemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 201000005311 drug allergy Diseases 0.000 description 1
- 108010052621 fas Receptor Proteins 0.000 description 1
- 102000018823 fas Receptor Human genes 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 108700039855 mouse a Proteins 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 150000004492 retinoid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 210000004927 skin cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003270 steroid hormone Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 235000019166 vitamin D Nutrition 0.000 description 1
- 239000011710 vitamin D Substances 0.000 description 1
- 150000003710 vitamin D derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229940046008 vitamin d Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/67—General methods for enhancing the expression
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2217/00—Genetically modified animals
- A01K2217/05—Animals comprising random inserted nucleic acids (transgenic)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2800/00—Nucleic acids vectors
- C12N2800/30—Vector systems comprising sequences for excision in presence of a recombinase, e.g. loxP or FRT
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2800/00—Nucleic acids vectors
- C12N2800/50—Vectors for producing vectors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
- C12N2830/008—Vector systems having a special element relevant for transcription cell type or tissue specific enhancer/promoter combination
Landscapes
- Genetics & Genomics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
, 1
Recombinant nucleotidevolgorde welke codeert voor een gen
De onderhavige uitvinding heeft betrekking op een recombinant nucleotidevolgorde welke codeert voor een gen.
Een algemeen probleem in de biotechnologie is het op een gewenste tijd en, in een meercellig organisme, op de ge-5 wenste plaats tot expressie brengen van het gen. Voor het tot expressie brengen van het gen staat het onder controle van een promotervolgorde, bij voorkeur onder controle van een in-duceerbare promoter.
Een probleem is dat er in de praktijk vaak ook on-10 controleerbare, lage expressie ("leaky" expressie) optreedt van het gen wanneer de promoter niet is geïnduceerd.
De onderhavige uitvinding beoogt dit probleem te verminderen en volgens voorkeursuitvoeringen in wezen uit te sluiten.
15 Daartoe wordt de recombinant nucleotidevolgorde vol gens de uitvinding gekenmerkt doordat deze codeert voor een gen dat een tussen twee exonen gelegen intron bevat, welk intron een eerste, tweede en derde volgorde bevat, de eerste en derde volgorde herkenningsvolgorden zijn voor een recombina-20 tiesysteem dat recombinatie mogelijk maakt, en de tweede volgorde ten minste een eerste verstorende volgorde omvat gekozen uit de groep bestaande uit i) een transcriptie-terminatievolgorde voor transcriptie, en ii) een vreemd exon dat optioneel een tweede verstorende volgorde bevat gekozen 25 uit a) een transcriptie-terminatievolgorde voor transcriptie, b) een stop-codon voor translatie, en c) een leesraam-verschuivende volgorde, dan wel de complementaire volgorde daarvan.
Een dergelijk construct heeft als voordeel dat zo 30 het gen ongewenst wordt afgelezen, dit door één of meer van de hier genoemde maatregelen niet leidt tot een functionele ribonucleotidevolgorde en in het bijzonder een functioneel eiwitproduct van het gen. Met de recombinant nucleotidevolgorde volgens de uitvinding is het mogelijk om een eukaryoot 35 organisme of cel op een gewenst moment permanent te veranderen.
f10178 5? 2
Volgens de uitvinding kan de recombinant nucleotide-volgorde een RNA of DNA volgorde zijn. De wijze waarop de volgorde is verkregen, bijvoorbeeld middels synthese of genetische manipulatie, doet niet ter zake. Ook de complementaire 5 volgorde wordt volgens de uitvinding omvat, aangezien daar een sensevolgorde van kan worden gemaakt met de volgens de uitvinding te bereiken voordelen.
Het gen kan niet alleen een eukaryoot gen zijn, doch ook een prokaryoot gen.
10 In de onderhavige uitvinding wordt onder een vreemd exon verstaan een exon dat niet of, zo dit toch het geval is, niet op die plaats in het gen dat codeert voor een functionele ribonucleotidevolgorde of functioneel eiwit wordt aangetroffen. Het vreemde exon wordt volgens de uitvinding middels 15 algemeen bekende recombinatietechnieken in het gen ingébracht. Niet ter zake kundigen wordt verwezen naar Sambrook et al. Molecular cloning, a laboratory manual, 2e druk, Cold Spring Harbor, New York 1989.
Bij voorkeur staat het gen onder controle van een 20 weefsel-specifieke promoter. Het intron kan zich in een regulerende volgorde, zoals een promotervolgorde, van het gen bevinden, doch bij voorkeur in een door transcriptie afgelezen deel van het gen, en met de meeste voorkeur in het open leesraam.
25 Dit maakt de recombinant nucleotidevolgorde volgens de uitvinding bij uitstek geschikt voor toepassing in eukaryote organismen, zoals zoogdieren en in het bijzonder de mens, waarbij voor diverse toepassingen, zoals medische toepassingen, een uitermate hoog niveau van controle over het (inge-30 brachte) gen vereist is.
Bij voorkeur is het recombinatiesysteem een recombi-natiesysteem dat ten minste twee door verschillende genen gecodeerde eiwitten omvat, waarbij ten minste een van de verschillende genen onder controle staat van een extern stimu-35 leerbare promoter.
Hierdoor wordt bevorderd dat "leaky" expressie van het recombinatiesysteem niet leidt tot excisie van het intron en daarmee, in geval van "leaky" expressie van het gen of on- * Ü l ( o o ^ 3 der invloed van de eerder genoemde weefsel-specifieke promoter, tot expressie van het gen. De (ten minste) twee eiwitten kunnen de subeenheden zijn van één eiwit dat het gehele re-combinatie-systeem is.
5 Bij voorkeur bevat de recombinant nucleotidevolgorde de recombinant nucleotidevolgorde tevens een tweede gen, of complementaire volgorde daarvan, coderend voor een eiwit van het recombinatiesysteem of een subeenheid daarvan.
Aldus wordt een enkele recombinant nucleotidevolgor- 10 de verschaft welke zowel het onder gecontroleerde omstandigheden tot expressie te brengen gen bevat alsmede de middelen voor excisie van het intron. Een dergelijk recombinant nucleotidevolgorde kan zeer goed worden gebruikt als vector voor genetische manipulatiedoeleinden. De recombinant nucleotide- 15 volgorde bevat bij voorkeur de volledige genetische code voor het recombinatiesysteem.
Bij voorkeur zijn de eerste en derde volgorden door een recombinase erkende volgorden.
Recombinase is zeer geschikt als recombinatiesys- 20 teem.
Tenslotte heeft de uitvinding betrekking op een werkwijze voor het genetisch modificeren van een eukaryote cel, hierdoor gekenmerkt, dat een recombinant nucleotidevolgorde wordt toegepast volgens de uitvinding.
25 Derhalve codeert het tweede gen voor de recombinase, of een subeenheid daarvan.
De uitvinding zal thans worden toegelicht aan de hand van het volgende voorbeeld.
VOORBEELD
30 Constructie van een vector voor spatieel-temporeel gecontroleerde expressie van een gen.
Een mogelijke vector volgens de uitvinding, aangeduid als Loxmid, is opgebouwd uit bestaande genetische vectoren en in de literatuur beschreven genetische elementen. In 35 een vector, pUC18 of pUC19, wordt een aantal additionele, zeldzame herkenningsplaatsen voor restrictie-endonucleasen geïntroduceerd. Deze plaatsen zijn van belang voor latere kloneringstappen Met deze gemodificeerde vector(en) worden ^ W £__ 4 twee "ouderlijke" vectoren gemaakt, de een pDAD genaamd met de coderende sequentie voor een recombinase of een subeenheid daarvan (bijvoorbeeld Cre recombinase) onder de controle van een induceerbare promoter; bijvoorbeeld een met tetracycline 5 induceerbare, of met een respons element voor vitamine A, vitamine D of een ander steroid-hormoon. Het Cre gen en haar induceerbare promoter wordt geflankeerd door restrictieplaat-sen die de klonering in de uiteindelijke Loxmid vergemakkelijken. De andere "ouderlijke" vector (pMOM genaamd) wordt 10 zodanig geconstrueerd dat deze een gen bevat bestaande uit de coderende sequentie voor het gen van interesse, met daarin een al dan niet natuurlijk intron, onder de controle van een weefselspecifieke promoter; het intron zal, tussen twee her-kenningsplaatsen voor het recombinase dat in de andere vector 15 is gekloneerd, bijvoorbeeld een transcriptie-terminatie-volgorde bevatten voor transcriptie, of een stopcodon voor translatie, een leesraamverschuivende nucleotiden-volgorde, of een combinatie daarvan. Een derde vector wordt geconstrueerd (de Loxmid, ofwel lxCHILD) met daarin specifieke klone-20 ringplaatsen waarin enerzijds de coderende sequentie voor een recombinase onder de controle van een induceerbare promoter wordt geplaatst, en anderzijds het gewenste gen onder de controle van de weefselspecifieke promoter.
Alle kloneringstappen worden uitgevoerd met behulp 25 van klassieke moleculair-biologische technieken, ondersteund door computer-assisted vector design, zoals bij de gewone ter zake kundige welbekend.
De resulterende vector (Loxmid genaamd) kan worden gebruikt om in een gespecificeerd weefsel of celtype genex-30 pressie te induceren op de door de onderzoeker gewenste tijd. Zo kan in het Loxmid Cre worden gekloneerd onder de controle van een promoter die transcriptie aandrijft onder invloed van vitamine A, en kan Fas ligand worden gekloneerd onder de invloed van de keratinocyt-specifieke K14 promoter. Fas ligand 35 is door de aanwezigheid van transcriptie- en/of translatie-terminerende sequenties in het intron niet actief; deze sequenties liggen tussen herkenningsplaatsen voor het Cre recombinase .
; * 71 r ς o 5
De promoter voor Cre bindt aan de nucleaire retinoid acid binding receptor, dat op zijn beurt weer wordt geactiveerd door vitamine A. Wanneer nu het Loxmid wordt ingebracht in gekweekte, prolifererende epidermale huidcellen (zogenaam-5 de keratinocyten) zal het Cre recombinase alleen maar tot expressie komen wanneer aan het medium vitamine A wordt toegevoegd. Tengevolge van Cre expressie zullen de terminator sequenties worden verwijderd uit het intron van Fas ligand, hetgeen weer tot gevolg heeft dat transcriptie en vervolgens 10 translatie van het intacte Fas ligand plaatsvindt onder invloed van de K14 promoter die endogeen actief is in keratinocyten. Wanneer actief Fas ligand wordt aangemaakt tengevolge van vitamine A toediening in de kweek, zal er massaal geprogrammeerde celdood (apoptose) optreden in keratinocyten. Fas 15 ligand induceert namelijk via haar receptor Fas, die in keratinocyten tot expressie komt, een gecoördineerde cascade van biochemische reactie die kunnen leiden tot celdood, en zal in een kweekmodel, zoals hier beschreven, aanleiding geven tot geprogrammeerde celdood ("apoptose") van keratinocyten.
20 Wanneer ditzelfde Loxmid wordt ingebracht in de kiemlijn van muizen (om transgene muizen te creëren) kan in theorie de geprogrammeerde celdood in gang gezet worden in de basale of kiemlaag van de muizenepidermis (aannemende dat de gekozen genetische elementen actief zijn in de muis) wanneer 25 vitamine A wordt toegediend. Indien vitamine A systematisch wordt toegediend, zal apoptose nog steeds slechts plaatsvinden in de kiemlaag, aangezien dat de enige laag is waar de K14 promoter actief is. Hoewel Fas ligand dan slechts in een aantal cellen tot expressie komt, zal het toch leiden tot een 30 mogelijk levensbedreigende situatie omdat de muis de opperhuid zal verliezen, hetgeen leidt tot uitdroging en infecties. In mensen komt soms een vergelijkbare aandoening voor die bekend staat als toxische epidermale necrolyse. Deze ziekte is geassocieerd met geneesmiddelenallergie. Derhalve 35 kan de transgene muis voor deze menselijke ziekte model staan. Wanneer echter vitamine A plaatselijk, dat wil zeggen op de huid, wordt toegediend, zal slechts op de plaats van toediening apoptose plaatsvinden. Daarmee is de transgene - 1017852 6 muis een model bij onderzoek naar bijvoorbeeld therapie voor brandwonden. Uiteraard kunnen ook andere genen dan Fas ligand gebruikt worden in het Loxmid, en het Loxmid, afhankelijk van het modelorganisme, aangepast worden. Zo kan het worden ge-5 bruikt in basaal wetenschappelijk onderzoek naar genfunctie en genregulatie in celkweek, of als therapeuticum in gentherapie .
1017852
Claims (8)
1. Recombinant nucleotidevolgorde welke codeert voor een gen dat een tussen twee exonen gelegen intron bevat, welk intron een eerste, tweede en derde volgorde bevat, de eerste en derde volgorde herkenningsvolgorden zijn voor een recombi- 5 natiesysteem dat recombinatie mogelijk maakt, en de tweede volgorde ten minste een eerste verstorende volgorde omvat gekozen uit de groep bestaande uit i) een transcriptie-terminatievolgorde voor transcriptie, en ii) een vreemd exon dat optioneel een tweede verstorende volgorde bevat gekozen 10 uit a) een transcriptie-terminatievolgorde voor transcriptie, b) een stop-codon voor translatie, en c) een leesraam-verschuivende volgorde, dan wel de complementaire volgorde daarvan.
2. Recombinant nucleotidevolgorde volgens conclusie 15 1, met het kenmerk, dat het gen onder controle staat van een weefsel-specifieke promoter.
3. Recombinant nucleotidevolgorde volgens conclusie 1 of 2, met het kenmerk, dat het recombinatiesysteem een re-combinatiesysteem is dat ten minste twee door verschillende 20 genen gecodeerde eiwitten omvat, waarbij ten minste een van de verschillende genen onder controle staat van een extern stimuleerbare promoter.
4. Recombinant nucleotidevolgorde volgens een der voorgaande conclusies, met het kenmerk, dat de recombinant 25 nucleotidevolgorde tevens een tweede gen bevat, of complementaire volgorde daarvan, coderend voor een eiwit van het recombinatiesysteem of een subeenheid daarvan.
5. Recombinant nucleotidevolgorde volgens een der voorgaande conclusies, met het kenmerk, dat de recombinant 30 nucleotidevolgorde voor het volledige recombinatiesysteem codeert .
6. Recombinant nucleotidevolgorde volgens een der voorgaande conclusies, met het kenmerk, dat de eerste en derde volgorden door een recombinase herkende volgorden zijn.
7. Recombinant nucleotidevolgorde volgens conclusie ' ' - - ' £ o 6, met het kenmerk, dat het tweede gen codeert voor de recom-binase, of een subeenheid daarvan.
8. Werkwijze voor het genetisch modificeren van een eukaryote cel, met het kenmerk, dat een recombinant nucleoti-5 devolgorde wordt toegepast volgens een van de conclusies 1-7. ~j O '/
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| NL1017852A NL1017852C2 (nl) | 2001-04-17 | 2001-04-17 | Recombinant nucleotidevolgorde welke codeert voor een gen. |
| AU2002307630A AU2002307630A1 (en) | 2001-04-17 | 2002-04-17 | Recombinant nucleotide sequence coding for a gene |
| PCT/NL2002/000252 WO2002083909A2 (en) | 2001-04-17 | 2002-04-17 | Recombinant nucleotide sequence coding for a gene |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| NL1017852 | 2001-04-17 | ||
| NL1017852A NL1017852C2 (nl) | 2001-04-17 | 2001-04-17 | Recombinant nucleotidevolgorde welke codeert voor een gen. |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NL1017852C2 true NL1017852C2 (nl) | 2002-10-29 |
Family
ID=19773243
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NL1017852A NL1017852C2 (nl) | 2001-04-17 | 2001-04-17 | Recombinant nucleotidevolgorde welke codeert voor een gen. |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| AU (1) | AU2002307630A1 (nl) |
| NL (1) | NL1017852C2 (nl) |
| WO (1) | WO2002083909A2 (nl) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2018096356A1 (en) * | 2016-11-28 | 2018-05-31 | Horizon Discovery Limited | Methods for conditional gene knock-out |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE19650714A1 (de) * | 1996-12-06 | 1998-06-10 | Melchner Harald Von Prof Dr | Genfallen-Konstrukt zur Identifizierung und Isolierung von Genen |
| WO1998027207A1 (en) * | 1996-12-18 | 1998-06-25 | Targeted Genetics Corporation | Recombinase-activatable aav packaging cassettes for use in the production of aav vectors |
| DE19834430A1 (de) * | 1998-07-30 | 2000-02-03 | Harald Von Melchner | Selbstdeletierende Vektoren für die Krebstherapie |
| WO2001005961A1 (en) * | 1999-07-14 | 2001-01-25 | Clontech Laboratories, Inc. | Recombinase-based methods for producing expression vectors and compositions for use in practicing the same |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1134287A1 (en) * | 2000-03-08 | 2001-09-19 | Universite De Geneve | A system to control the expression of a given gene using another gene that encodes a polypeptide with recombinant activity |
-
2001
- 2001-04-17 NL NL1017852A patent/NL1017852C2/nl not_active IP Right Cessation
-
2002
- 2002-04-17 WO PCT/NL2002/000252 patent/WO2002083909A2/en not_active Application Discontinuation
- 2002-04-17 AU AU2002307630A patent/AU2002307630A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE19650714A1 (de) * | 1996-12-06 | 1998-06-10 | Melchner Harald Von Prof Dr | Genfallen-Konstrukt zur Identifizierung und Isolierung von Genen |
| WO1998024918A1 (de) * | 1996-12-06 | 1998-06-11 | HÖLZER, Dieter | Genfallen-konstrukt zur identifizierung und isolierung von genen |
| WO1998027207A1 (en) * | 1996-12-18 | 1998-06-25 | Targeted Genetics Corporation | Recombinase-activatable aav packaging cassettes for use in the production of aav vectors |
| DE19834430A1 (de) * | 1998-07-30 | 2000-02-03 | Harald Von Melchner | Selbstdeletierende Vektoren für die Krebstherapie |
| WO2001005961A1 (en) * | 1999-07-14 | 2001-01-25 | Clontech Laboratories, Inc. | Recombinase-based methods for producing expression vectors and compositions for use in practicing the same |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| FORLINO A ET AL: "USE OF THE CRE/LOX RECOMBINATION SYSTEM TO DEVELOP A NON-LETHAL KNOCK-IN MURINE MODEL FOR OSTEOGENESIS IMPERFECTA WITH AN ALPHA1(I) G349C SUBSTITUTION VARIABILITY IN PHENOTYPE IN BRTLIV MICE", BIOLOGICAL CHEMISTRY, XX, XX, vol. 274, no. 53, 31 December 1999 (1999-12-31), pages 37923 - 37931, XP001020393, ISSN: 1431-6730 * |
| INDRA ARUP KUMAR ET AL: "Temporally-controlled site-specific mutagenesis in the basal layer of the epidermis: Comparison of the recombinase activity of the tamoxifen-inducible Cre-ERT and Cre-ERT2 recombinases", NUCLEIC ACIDS RESEARCH, IRL PRESS LTD., OXFORD, GB, vol. 27, no. 22, 15 November 1999 (1999-11-15), pages 4324 - 4327, XP002144711, ISSN: 0305-1048 * |
| UTOMO AHMAD R H ET AL: "Temporal, spatial, and cell type-specific control of Cre-mediated DNA recombination in transgenic mice.", NATURE BIOTECHNOLOGY, vol. 17, no. 11, November 1999 (1999-11-01), pages 1091 - 1096, XP002186984, ISSN: 1087-0156 * |
| ZHANG YONG ET AL: "Induction of the antigen receptor expression on B lymphocytes results in rapid competence for signaling of SLP-65 and Syk.", EMBO (EUROPEAN MOLECULAR BIOLOGY ORGANIZATION) JOURNAL, vol. 17, no. 24, 15 December 1998 (1998-12-15), pages 7304 - 7310, XP002186985, ISSN: 0261-4189 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2002083909A3 (en) | 2002-12-27 |
| WO2002083909A2 (en) | 2002-10-24 |
| AU2002307630A1 (en) | 2002-10-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Greenblatt | RNA polymerase II holoenzyme and transcriptional regulation | |
| Cotsarelis et al. | Towards a molecular understanding of hair loss and its treatment | |
| Winter et al. | Prolyl 4-hydroxylase is an essential procollagen-modifying enzyme required for exoskeleton formation and the maintenance of body shape in the nematode Caenorhabditis elegans | |
| Elgin | Chromatin structure and gene activity | |
| Gao et al. | Targeting gene expression to the head: the Drosophila orthodenticle gene is a direct target of the Bicoid morphogen | |
| Vachon et al. | Homeotic genes of the Bithorax complex repress limb development in the abdomen of the Drosophila embryo through the target gene Distal-less | |
| Greenwood et al. | Progression of the morphogenetic furrow in the Drosophila eye: the roles of Hedgehog, Decapentaplegic and the Raf pathway | |
| Jones et al. | DVR-4 (bone morphogenetic protein-4) as a posterior-ventralizing factor in Xenopus mesoderm induction | |
| Weiner et al. | Dedicated epithelial recipient cells determine pigmentation patterns | |
| Zhou et al. | Characterization of the transvection mediating region of the abdominal-B locus in Drosophila | |
| Kokoza et al. | Transcriptional regulation of the mosquito vitellogenin gene via a blood meal-triggered cascade | |
| Wagner et al. | Psoriasis: what we have learned from mouse models | |
| Ashe et al. | Dpp signaling thresholds in the dorsal ectoderm of the Drosophila embryo | |
| Kraut et al. | Spatial regulation of the gap gene giant during Drosophila development | |
| Tawe et al. | Angiogenic activity of Onchocerca volvulus recombinant proteins similar to vespid venom antigen 5 | |
| Frumkin et al. | A chicken caudal homologue, CHox-cad, is expressed in the epiblast with posterior localization and in the early endodermal lineage | |
| Lim et al. | Alternative splicing of the fibronectin EIIIB exon depends on specific TGCATG repeats | |
| Lunde et al. | The knirps and knirps-related genes organize development of the second wing vein in Drosophila | |
| DiLeone et al. | An extensive 3′ regulatory region controls expression of Bmp5 in specific anatomical structures of the mouse embryo | |
| Liang et al. | Functional interactions between nucleoporins and chromatin | |
| Porcu et al. | The human β globin locus introduced by YAC transfer exhibits a specific and reproducible pattern of developmental regulation in transgenic mice | |
| Casares et al. | Regulation of the infraabdominal regions of the bithorax complex of Drosophila by gap genes | |
| DiLeone et al. | Efficient studies of long-distance Bmp5 gene regulation using bacterial artificial chromosomes | |
| Müller-Röver et al. | Overexpression of Bcl-2 protects from ultraviolet B-induced apoptosis but promotes hair follicle regression and chemotherapy-induced alopecia | |
| Bradshaw et al. | A long-range regulatory element of Hoxc8 identified by using the pClasper vector. |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD2B | A search report has been drawn up | ||
| SD | Assignments of patents |
Owner name: MULTIGEN INTERNATIONAL B.V. |
|
| SD | Assignments of patents |
Owner name: MULTIGEN HOLDING S.A. |
|
| VD1 | Lapsed due to non-payment of the annual fee |
Effective date: 20051101 |