MXPA99007509A - El uso de un inhibidor del nf-kappab para el tratamiento de los infartos - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere al tratamiento de la isquemia mediante la administración de inhibidores de la proteasoma, inhibidores de la vía de la ubiquitina, agentes que interfieren con la activación del NF-kB la vía de la ubiquitina-proteasoma, o mezclas de los mismos.

Description

EL USO OE UN TKHI3ID0R DEL NF-KAPPAB PARA EL TRATAMIENTO DE LÜS THARTOS CAMPO DE LA INVENCIÓN Esta invención se relaciona con el tratamiento de la isquemia y daño por reperfusión, incluyendo la prevención o reducción del tamaño del infarto después de la oclusión vascular.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Todos los tejidos son sensibles a la hipoperfusión y la carencia resultante de oxigeno, la isquemia. La isquemia prolongada dará como resultado daño cerebral. La magnitud del daño y el potencial para rescatar el tejido depende del grado y duración de la isquemia. Con periodos de isquemia prolongados, ocurre la muerte cerebral (infarto) y bajo esas condiciones el daño es irreversible. Por otro lado, las células moribundas o células objetivo de la muerta cerebral pueden ser rescatadas por tratamiento con fármacos, si se aplican en una forma oportuna. Los eventos isquémicos mayores de preocupación terapéutica incluyen, pero no se limitan a, ataques cardiacos y apoplejía o ataque. En el hombre, la apoplejía o ataque contribuye al 10% de todas las muertes prematuras, y de aquéllos que sobreviven al trauma, el 50% quedan severamente REF.: 31117 discapacitados. Únicamente una pequeña fracción, el 10%, de los pacientes recuperan realmente todas sus funciones . Más de 1,500,000 Estadounidenses sufren infartos al miocardio cada año. Aproximadamente la mitad de esos no sobreviven para llegar al hospital. Sin embargo, con la aceptación de la terapia trombolitica tal como el activador de la estreptocinasa o plasminógeno tisular (TPA) , el por ciento de sobrevivencia a un mes para pacientes que llegaron al hospital es tan alto como el 93.6% (Werns, S. W. Texbook of Interventional Cardiology, ed. Topol, E.J. WB Saunders; 1994, pp 142-153) . Lisando el coágulo rápidamente en el curso del infarto, el músculo y tejido isquémicos pueden ser salvados. Sin embargo, la reperfusión en y de sí misma conduce al daño tisular. El daño debido a la reperfusión puede ocurrir como resultado de uno o más de los siguientes eventos: la acidosis celular que conduce a una sobrecarga de calcio; cargas osmóticas intracelulares incrementadas de catabolitos que conducen al hinchamiento celular; radicales libres de neutrófilos y otras células inflamatorias. Los neutrófilos son observados en el miocardio reperfundido inmediatamente después de la reperfusión. Los monocitos/macrófagos aparecen dentro de 24 a 48 horas. La infiltración de neutrófilos es tres a cinco veces mayor en el miocardio reperfundido que en el miocardio isquémico, esta es iniciada por la adhesión de las células endoteliales, y ocurre dentro de los 10 minutos de la reperfusión. Los neutrófilos en y por si mismos pueden quedar atrapados en los capilares e impedir la reperfusión. Los neutrófilos intravasculares pueden bloquear hasta el 27% de los capilares, y se ha demostrado que están relacionados con un flujo sanguíneo regional disminuido (Forman et al., Actué Myocardial InfractLon, eds. Gersh et al. Elsevier: 1991, pp 347-370). Esto puede dar como resultado en fenómeno "sin reflujo", donde el flujo de sangre continúa disminuyendo después de la reperfusión. Se sabe que los neutrófilos deben adherirse primero por si mismos a la pared de las células endoteliales a través de interacciones con moléculas de adhesión. Una vez unido a la pared celular del vaso, los neutrófilos son forzados a continuación por si mismos entre las células endoteliales adyacentes y se mueven hacia el tejido cerebral, donde liberan citocinas citotóxicas. La expresión de tales moléculas de adhesión se incrementa después del daño celular, incluyendo la isquemia. Además, las paredes de las células endoteliales se vuelven más permeables a las células infiltrantes debido a la liberación de óxido nítrico (NO) . Los agentes que inhiben el movimiento (diapédesis) de lo neutrófilos de los vasos sanguíneos circundantes hacia el tejido dañado pueden ser de este modo .evaluados para permitir que las células moribundas en ese momento se recuperan del trauma isquémico. Existe la necesidad en la técnica de terapias efectivas para prevenir o reducir las consecuencias de la isquemia.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN En el primer aspecto, la presente invención está dirigida a un método para tratar la isquemia en un mamífero, el cual comprende administrar al mamífero una cantidad efectiva de un inhibidor de la activación del NF-?B. Los inhibidores de la activación del NF-?B preferidos se seleccionan del grupo que consiste de inhibidores de la proteasoma, inhibidores de la via de la ubiquitina, inhibidores de la fosforilación de la serina de la I?B- , y mezclas de los mismos. De manera preferible el agente se administra al mamífero después de la aparición de la oclusión vascular transitoria y antes de la inducción del daño isquémico permanente. En un segundo aspecto, la presente invención está dirigida a un método para prevenir o disminuir la severidad del daño debido a la reperfusión en un mamífero, el cual comprende administrar al mamífero una cantidad efectiva de un inhibidor de la activación del NF-?B. Los inhibidores de la activación del NF-?B preferidos se seleccionan del grupo que consiste de inhibidores de la proteasoma, inhibidores de la via de la ubiquitina, inhibidores de la fosforilación de la serina de la I?B-a, y mezclas de los mismos. En un tercer aspecto, la presente invención está dirigida a un método para prevenir, reducir el tamaño de, o disminuir la severidad del infarto en un mamífero, el cual comprende administrar al mamífero una cantidad efectiva de un inhibidor de la activación del NF-?B. Los inhibidores de la activación del NF-?B preferidos se seleccionan del grupo que consiste de inhibidores de la proteasoma, inhibidores de la via de la ubiquitina, inhibidores de la fosforilación de la serina de la I?B-a, y mezclas de los mismos. En las modalidades preferidas, el método de acuerdo a este aspecto de la invención previene o disminuye la severidad del infarto después de la oclusión de un vaso cerebral o un vaso cardiaco. En ciertas modalidades preferidas, el método previene la oclusión que da como resultado la apoplejía o ataque, o disminuye la severidad de la apoplejía o ataque resultante de la oclusión de un vaso cerebral. En un cuarto aspecto, la presente invención está dirigida a un método para tratar la isquemia o daño debido a la reperfusión, el cual incluye prevenir o disminuir la severidad del infarto en un mamífero, el cual comprende administrar al mamífero un adyuvante terapéutico, además de administrar un inhibidor de la activación del NF-?B. Los inhibidores de la activación del NF-?B preferidos se seleccionan del grupo que consiste de inhibidores de la proteasoma, inhibidores de la vía de la ubiquitina, inhibidores de la fosforilación de la serina de la I?B- , y mezclas de los mismos. Ciertos adyuvantes terapéuticos preferidos incluyen sin limitación, agentes tales como esteroides, los cuales inhiben, además, la activación del NF-KB O inhiben la expresión o acción de citocinas proinflamatorias o moléculas de adhesión celular; agentes los cuales actúan ya sea para reperfundir u oxigenar tejidos, tales como fármacos antiedema, trombolíticos tales como el TPA, estreptocinasa y urocinasa, polianiones tales como la heparina, anticoagulantes; y agentes que ayudan a la normalización de la temperatura. Los inhibidores de la activación del NF-KB preferidos inhiben la activación del NF-?B por la via de la ubiquitina-proteasoma. En ciertas modalidades preferidas, el inhibidor de la activación del NF-?B inhibe la fosforilación de la I?B-a. En ciertas modalidades preferidas, el inhibidor de la activación del NF-?B es un inhibidor de la proteasoma. De manera preferible, el inhibidor de la proteasoma se selecciona del grupo que consiste de peptidil aldehidos, ácidos borónicos, esteres borónicos, lactacistina y análogos de la lactacistina. En ciertas modalidades preferidas, el inhibidor de la activación del NF-?B es un inhibidor de la via de la ubiquitina.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La Figura 1 muestra la cascada de activación del NF-?B que conduce al daño por reperfusión, incluyendo el infarto. Se indican los puntos de intervención por los métodos de acuerdo a la invención. La Figura 2 muestra la vía de la ubiquitina-proteasoma. La Figura 3 está dirigida a la reducción del volumen del infarto después de la oclusión de la arteria cerebral media (MCA) mediante la administración del inhibidor de la proteasoma ácido N- (2-piracin) carbonil-L-fenilalanin-L-leucin borónico. La Figura 4 está dirigida a la reducción del tamaño del infarto, expresado como un porcentaje del hemisferio contralateral, mediante la administración del inhibidor de la proteasoma ácido N- (2-piracin) carbonil-L-fenilalanin-L-leucin borónico.

La Figura 5 está dirigida a la reducción del volumen del infarto mediante la administración del inhibidor de la proteasoma, 7-n-propil-clasto-lactacistin ß-lactona después de la oclusión de la arteria cerebral media (MCA) . La Figura 6 está dirigida a la reducción de la puntuación neurológica mediante la administración del inhibidor de la proteasoma, 7-n-propil-clasto-lactacistin ß-lactona, después de la oclusión de la arteria cerebral media (MCA) . La Figura 7 está dirigida a la reducción del volumen del infarto mediante la administración del inhibidor de la proteasoma, 7-n-propil-clasto-lactacistin ß-lactona. La Figura 8 está dirigida a la reducción de la puntuación neurológica mediante la administración del inhibidor de la proteasoma, 7-n-propil-clasto-lactacistin ß-lactona.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La invención se relaciona con el tratamiento de la isquemia y el daño debido a la reperfusión, el cual incluye prevenir, reducir el tamaño o disminuir la severidad del infarto después de la oclusión vascular. Las solicitudes de patente, patentes y referencias literarias citadas aquí indican el conocimiento en este campo y por lo tanto se incorporan aquí como referencia en su totalidad. En el caso de inconsistencias la presente descripción prevalecerá. Ahora, se ha descubierto de manera inesperada que la vía de la ubiquitina-proteasoma es un objetivo para tratar la isquemia y daño debido a la reperfusión, el cual incluye prevenir, reducir el tamaño o disminuir la severidad de los infartos después de la oclusión vascular, tal como ocurre durante un ataque cardiaco o apoplejía o ataque, y que los inhibidores de la activación del NF-?B via la via de la ubiquitina-proteasoma pueden proporcionar una terapia efectiva para esas condiciones. La invención proporciona métodos sorprendentemente efectivos para tratar la isquemia o daño debido a la reperfusión. Los inventores de la presente han descubierto que bloquear la función de la proteasoma reduce los efectos de la isquemia, tales como la reducción del tamaño del infarto después de la oclusión vascular. Esto puede ser efectuado por la inhibición directa de la proteasoma (mostrada con el ácido N- (2-piracin) carbonil-L-fenilalanin-L-leucin borónico y la 7-n-propil-clasto-lactacistin ß-lactona) o mediante el bloqueo de la ubiquitinación de las proteinas objetivo de la proteasoma tales como I?B-a. Se espera que cualesquier inhibidores que afecten la activación del NF-?B vía la vía de la ubiquitina/proteasoma en células eucarióticas sean efectivos en la prevención o tratamiento del infarto, incluyendo el infarto después de la oclusión vascular y de este modo están dentro del alcance de la presente invención. De acuerdo con la presente invención, el tratamiento de la isquemia, incluyendo el daño por reperfusión, prevención del infarto y reducción del tamaño o disminución de la severidad del infarto se logra administrando a un mamífero una cantidad efectiva de un inhibidor de la activación del NF-?B. Los inhibidores de la activación del NF-?B preferidos se seleccionan del grupo que consiste de inhibidores de la proteasoma, inhibidores de la vía de la ubiquitina, inhibidores de la fosforilación de la serina de la I?B-a, y mezclas de los mismos. En un primer aspecto, la presente invención está dirigida a un método para tratar la isquemia en un mamífero, el cual comprende administrar al mamífero una cantidad efectiva de un inhibidor de la activación del NF-KB. Todos los tejidos son sensibles a la falta de oxigeno (isquemia) resultante de la hipoperfus-ión. Eventos isquémicos mayores de preocupación terapéutica incluyen, pero no se limitan a, ataques cardiacos y apoplejía o ataque. La isquemia también puede afectar a otros tejidos, incluyendo al tejido retinal, hepático, renal, óseo, placentario y espinal. La isquemia prolongada da como resultado un daño celular, manifiesto, en el caso de la isquemia cerebral, como una disfunción neurológica. Los agentes actualmente utilizados para el tratamiento de la apoplejía o ataque están dirigidos a 1) revertir el fenómeno excitotóxico excesivo asociado con un episodio isquémico; o 2) incrementar el flujo de sangre hacia el tejido isquémico. El daño isquémico puede comúnmente resultar de, por ejemplo, una oclusión vascular tal como por un émbolo o trombo, hemorragia, casi ahogamiento y casi sofocación. Sin desear vincularse a alguna teoría, se cree que la isquemia causa una liberación masiva de aminoácido excitotóxico, glutamato, de los extremos nervioso presinápticos en el cerebro los cuales actúan sobre los receptores N-metil-D-aspartato (?MDA) sobre las células adyacentes. Una vez activados, los receptores del ?MDA permiten que entre un exceso de calcio a la célula, el cual a su vez activa un número de vías secundarias que finalmente conducen a la degradación de proteína celular y a la muerte celular. En la búsqueda de terapias efectivas, se han hecho esfuerzos por dirigir la liberación de glutamato presináptico (vía la estimulación del receptor K-opiáceo) , o bloqueo de la activación del receptor del ?MDA (ya sea directamente, con antagonistas del ?MDA, o indirectamente, con antagonistas de la glicina) . También han sido investigados los bloqueadores del canal de calcio e inhibidores de la calpaina. Aunque los fármacos individuales han mostrado actividad en situaciones preclínicas y clínicas, el beneficio es limitado debido a la velocidad a la cual ocurre la cascada, el tiempo tomado para administrar los fármacos, y la efectividad de la terapia. El único fármaco clínicamente utilizado para incrementar el flujo sanguíneo del activador del plasminógeno tisular (TPA) , el cual ayuda a la rápida solubilización de. los coágulos que son responsables del bloqueo del vaso. Aunque efectivos en un grado limitado en pacientes con apoplejía o ataque, previniendo realmente el sangrado, los fármacos similares al TPA pueden ser letales a aquellos pacientes que tienen hemorragia cerebral. Por lo tanto, el TPA no puede ser administrado hasta que se haya confirmado que el paciente tiene apoplejía o ataque en lugar de hemorragia. Para un paciente con apoplejía o ataque, el tiempo que ocurre para este análisis obviamente incrementa el lapso de tiempo de la isquemia y en consecuencia la cantidad de tejido salvable se reduce. Agentes tales como inhibidores de la activación del NF-KB que pueden actuar sobre el sistema de la cascada isquémica en sí no están limitados por tal periodo de diagnóstico prolongado, puesto que no son dañinos a pacientes con hemorragia cerebral. Los inhibidores de la activación del NF-?B preferidos inhiben la activación del NF-?B por la via de la ubiquitina-proteasoma. En ciertas modalidades preferidas, el inhibidor de la activación del NF-?B inhibe la fosforilación del I?B-a. En ciertas modalidades preferidas, el inhibidor de la activación del NF-?B es un inhibidor de la proteasoma. En tales modalidades la inhibición de la proteasoma es preferiblemente menor que la inhibición completa. De manera preferible, el inhibidor de la proteasoma se selecciona del grupo que consiste de peptidil aldehidos, ácidos borónicos, esteres borónicos, lactacistina y análogos de la lactacistina. En ciertas modalidades preferidas, el inhibidor de la activación del NF-?B es un inhibidor de la vía de la ubiquitina. El factor de la transcripción, NF-?B, es una membrana de la familia de la proteína Reí. La familia de la Reí de proteínas activadoras transcripcionales puede dividirse en dos grupos. El primer grupo requiere el procesamiento proteolitico, e incluye al pl05 y plOO, los cuales son procesados a p50 y p52, respectivamente. El segundo grupo no requiere el procesamiento proteolítico e incluye al p65 (Reí A), Reí (c-Rel) , y Reí B. El NF-?B comprende dos subunidades, p50 y un miembro adicional de la familia del gen de la Reí, por ejemplo, p65. El pl05 no procesado puede también asociarse con el p65 y otros miembros de la familia de la Reí. En la mayoría de las células, el heterodímero p50-pß5 está presente en forma inactiva en el citoplasma, unido al I?B-a. El complejo ternario puede ser activado por la disociación y destrucción de la I?B-a, mientras que el heterodímero pß5/pl05 puede ser activado mediante el procesamiento del pl05. La vía de la ubiquitina-proteasoma representa un papel esencial en la regulación de la actividad del NF-?B, siendo responsable tanto del procesamiento del pl05 al p50 y como para la degradación de la proteina inhibidora I?B-oc, (Palombella et al . , W095/25533) . Para ser objeto de la degradación por la proteasoma, la I?B-a debe experimentar primero fosforilación selectiva en los residuos de serina 32 y 36, seguida por la ubiquitinación (Alkalay et al . , Proc. Nati. Acad. Sci. EUA 92: 10599 (1995); Chen WO97/35014). Una vez activado, el NF-?B se transloca al núcleo, donde representa el papel central en la regulación de un conjunto notablemente diverso de genes implicados en las respuestas inmune e inflamatoria (Grilli et al . , Interna tional Review of Cytology 143 : 1-62 (1993)). Por ejemplo, el NF-?B se requiere para la expresión de un número de genes implicados en la respuesta inflamatoria, tales como el gen del TNF-a y genes que codifican para las moléculas de adhesión celular E-selectina, P-selectina, ICAM, y VCAM (Collins, T., Lab. Invest . (1993) 68: 499 . El NF-?B también se requiere para la expresión de un gran número de genes de citocina tales como la IL-2, IL-6, factor estimulador de la colonia granulocitica, e IFN-ß. La oxido nítrico sintetasa inducible está también bajo el control regulador del NF-?B. Los inhibidores de la proteasoma bloquean la degradación de la I?B-a y la activación del NF-?B (Palombella et al . , W095/25533 publicada el 9/28/95; Traenckner, et al . , EMBO J. (1994) 13:5433). Los inhibidores de la proteasoma también bloquean la expresión inducida del TNF-a de las moléculas de adhesión de los leucocitos E-selectina, VCAM-1, e ICAM-1 (Read, et al . , Immuni ty (1995) 2:493). Esas moléculas de adhesión celular representan un papel critico en el apoyo de la migración de los leucocitos en la corriente sanguínea hacia sitios extravasculares de daño tales como el tejido isquémico. Aunque se pretende sirva a una función de reparación, el influjo resultante de células, particularmente neutrófilos, puede promover un daño debido a la liberación de citocinas que aceleran la muerta celular e indican a las células adicionales (por ejemplo, macrófagos) invadir el área. En un segundo aspecto, la presente invención está dirigida a un método para prevenir o disminuir la severidad del daño debido a la reperfusión en un mamífero, el cual comprende administrar a un mamífero una cantidad efectiva de un inhibidor de la activación del NF-?B. El daño debido a la reperfusión puede ocurrir como resultado de uno o más de los siguientes eventos: la acidosis celular que conduce a una sobrecarga de calcio; cargas osmóticas intracelulares incrementadas de catabolitos que conducen al hinchamiento celular; radicales librea de neutrófilos y otras células inflamatorias. Los inhibidores de la activación del NF-?B preferidos se seleccionan del grupo que consiste de inhibidores de la proteasoma, inhibidores de la via de la ubiquitina, inhibidores de la fosforilación de la serina de la I?B-a, y mezclas de los mismos. En un tercer aspecto, la presente invención está dirigida a un método para prevenir, reducir el tamaño de, o disminuir la severidad del infarto en un mamífero, el cual comprende administrar a un mamífero una cantidad efectiva de un inhibidor de la activación del NF-?B. Los inhibidores de la activación del NF-?B preferidos se seleccionan del grupo que consiste de inhibidores de la proteasoma, inhibidores de la vía de la ubiquitina, inhibidores de la fosforilación de la serina de la I?B-a, y mezclas de los mismos. En las modalidades preferidas, el método de acuerdo a este aspecto de la invención previene, reduce el tamaño o disminuye la severidad del infarto después de la oclusión de un vaso cerebral o un vaso cardiaco. En ciertas modalidades preferidas, el método previene la oclusión que resulta en la apoplejía o ataque, o reduce la severidad de la apoplejía o ataque resultante de la oclusión de un vaso cerebral. El más común de los ataques es el ataque trombótico, donde se cree que la oclusión de los vasos sanguíneos es causada por un tapón de plaquetas agregadas. Con frecuencia, esos tapones de plaquetas son liberados como émbolos del trombo plaquetario o plaquetas arteroescleróticas en la carótida mayor o vasos cerebrales. Los ataques trombóticos con frecuencia tienen el "tartamudeo" característico inicial en el cual un molesto déficit neurológico, con frecuencia reversible, inicial es seguido por un ataque reversible, más severo. El evento inicial con frecuencia revela obstrucción cerebrovascular transitoria por trombos plaquetarios, la cual es potencialmente reversible. En realidad, clínicamente, un ataque moderado puede ser visto como el extremo más lejano del espectro de los ataques isquémicos transitorios (TÍA) - un déficit neurológico reversible en el cual un vaso cerebral es ocluido transitoriamente con un trombo plaquetario embólico, el cual se desagrega posteriormente, permitiendo de este modo que se restablezca el flujo. Por lo tanto, es contemplada la administración de un agente como se describe aquí después de la aparición de la oclusión vascular transitoria por la presente invención. Otra forma importante de ataque es el ataque después de la hemorragia cerebral, como se discutió anteriormente. Se cree que los agentes descritos aquí tendrán un intervalo de eficacia amplio y la prevención, reducción del tamaño o disminución de la severidad de los infartos resultantes de una variedad de causas, incluyendo el ataque trombótico y el ataque después de la hemorragia cerebral. Como una materia práctica, la reducción del tamaño de infarto o disminución del severidad del infarto serán inferidas a partir de una reducción de los síntomas asociados con el infarto, incluyendo, sin limitación, síntomas neurológicos y síntomas de funcionamiento cardiaco. En un cuarto aspecto, la presente invención está dirigida a un método para tratar la isquemia o daño por reperfusión, incluyendo, sin limitación, la reducción del tamaño o disminución de la severidad del infarto de un mamífero, el cual comprende administrar al mamífero un adyuvante terapéutico, además de administrar un inhibidor de la activación del NF-?B. Los inhibidores de la activación del NF-?B preferidos se seleccionan del grupo que consiste de inhibidores de la proteasoma, inhibidores de la vía de la ubiquitina, inhibidores de la fosforilación de la serina de la I?B-a, y mezclas de los mismos. Ciertos adyuvantes terapéuticos preferidos incluyen, sin limitación, agentes tales como esteroides los cuales inhiben, además, la activación del NF-?B o inhiben la expresión o acción de citocinas proinflamatorias o moléculas de adhesión celular; agentes los cuales actúan ya sea para reperfundir u oxigenar tejidos, tales como fármacos antiedema, trombolíticos tales como el TPA, estreptocinasa y urocinasa, polianiones tales como la heparina, anticoagulantes; y agentes que ayudan a la normalización de la temperatura. Los agentes que inhiben la acción de las citocinas o moléculas de adhesión celular incluyen, sin limitación, anticuerpos, o un derivado de anticuerpo, los cuales pueden ser, de manera más preferible, un anticuerpo monoclonal, un anticuerpo humano, un anticuerpo humanizado, un anticuerpo de una sola cadena, un anticuerpo quimérico, o un fragmento de anticuerpo de unión de antigeno. El uso de cualquiera de los agentes discutidos o descritos aquí en combinación con cualquier otro agente o agentes utilizados en el tratamiento de la apoplejía o ataque o infarto al miocardio se contemplan mejor dentro del alcance de la presente invención. En la presente descripción, se utilizarán las siguientes definiciones. "Tratamiento" significará la prevención o disminución del daño isquémico o daño debido a la reperfusión, incluyendo la prevención del infarto o reducción del tamaño o disminución de la severidad del infarto, incluyendo sin limitación el infarto después de la oclusión vascular. Cualquier alivio de cualesquier síntomas del infarto debidos al tratamiento utilizando cualquier inhibidor de la proteasoma, o inhibidor de la ubiquitina, o agente que interfiera en la activación del NF-?B vía la vía de la ubiquitina-proteasoma está dentro del alcance de la invención. El término "mamíferos" pretende incluir a los humanos . "Inhibidores de la activación del NF-?B" o "inhibidores de la activación del NF-KB" significará cualquier sustancia que inhiba la activación del NF-?B vía la vía de la ubiquitina-proteasoma, e incluirán cualesquier sustancias que 1) inhiban la proteasoma o actividad de la misma; 2) inhiban la ubiquitinación de la I?B-a o pl05; o 3) inhiban la fosforilación de la I?B-a o pl05. "Inhibidor de la vía de la ubiquitina" significará cualquier sustancia que inhiba directa o indirectamente la ubiquitinación o la transferencia de la ubiquitina a las proteínas. Los ejemplos no limitantes de inhibidores de la via de la ubiquitina incluyen a aquéllos descritos en 'Berleth et al., Biochem . 35 (5) ;1664-1671, (1996). Se conocen inhibidores de la fosforilación de la I?B-a (Chen, Cell 84 : 853 (1996)).

"Inhibidor de la proteasoma" significará cualquier sustancia que inhiba directa o indirectamente la proteasoma o la actividad de la misma. Los ejemplos no limitantes de inhibidores de la proteasoma para utilizarse en la presente invención incluyen aldehidos peptídicos (Stein et al . , WO 95/24914 publicada en Septiembre 21, 1995; Siman et al . , WO 91/13904 publicada en Septiembre 19, 1991; Igbal et al . , J. Med. Chem . 38 :2276-2211 (1995)), ácidos borónicos peptídicos (Adams et al . , WO 96/13266 publicada en Mayo 9, 1996; Siman et al . , WO 91/13904), lactacistina, y análogos de lactacistina (Fenteany et al, Proc. Na ti . Acad. Sci EUA (1994) 91 : 3358; Fenteany et al , WO 96/32105, publicada el 10/17/96) . Los aldehidos peptídicos inhibidores de la proteasoma para utilizarse en la presente invención preferiblemente son aquellos descritos en Stein et al . WO 95/24914 publicada en Septiembre 21, 1995 o Siman et al . WO 91/13904 publicada en Septiembre 19, 1991, ambas incorporadas por lo tanto aqui como referencia en su totalidad. Los compuestos de ácido o éster borónico para utilizarse en la presente invención son preferiblemente aquellos descritos en Adams et al . WO 96/13266 publicada en Mayo 9, 1996 o Siman et al . , WO 91/13904, ambas de las cuales se incorporan por lo tanto aqui como referencia en su totalidad. De manera más preferible, el compuesto de ácido borónico para utilizarse en la presente invención se selecciona del grupo que consiste de: ácido N- (4-morfolin) carbonil-ß- (1-naftil) -L-alanin-L-leucin borónico, ácido N- (8-quinolin) sulfonil-ß- (1-naftil) -L-alanin-L-alanin borónico, ácido N- (2-piracin) carbonil-L-fenilalanin-L-leucin borónico, y ácido N- (4-morfolin) carbonil- [ O- (2-piridilmetil) ] -L-tirosin-L-leucin borónico. La lactacistina y compuestos análogos de la lactacistina para utilizarse en la presente invención son preferiblemente aquéllos descritos en Fenteany et al , WO 96/32105, publicada el 10/17/96, por lo tanto incorporada aquí como referencia en su totalidad. De manera más preferible, el análogo de la lactacistina se selecciona de la lactacistina, ciasto-lactacistin ß-lactona, 7-etil-cIasto-lactacistin ß-lactona y 7-n-propil-clasto-lactacistin ß-lactona son las utilizadas por los métodos de la invención. De manera más preferible el análogo de la lactacistina es la 7-n-propil-clasto-lactacistin ß-lactona .

Los agentes descritos aquí pueden ser administrados por cualquier ruta, incluyendo intradérmica, subcutánea, oral, intraarterial o intravenosamente. De manera preferible, la administración será por la ruta intravenosa. De manera preferible la administración parenteral puede proporcionarse en un bolo o por infusión. La concentración de un compuesto descrito en una mezcla farmacéuticamente aceptable variará dependiendo de varios factores, incluyendo la dosis del compuesto a ser administrado, las características farmacocinéticas de los compuestos empleados y la ruta de administración. Cantidades efectivas de los agentes para el tratamiento de la isquemia o daño debido a la reperfusión fluctuarían ampliamente entre aproximadamente 10 µg y aproximadamente 50 mg por Kg de peso corporal de un mamífero receptor. El agente puede ser administrado en una sola dosis o en dosis repetidas. Los tratamientos pueden ser administrados diariamente o de manera más frecuente dependiendo de un gran número de factores, incluyendo la salud total de un paciente, y la formulación y ruta de administración de los compuestos seleccionados. El compuesto descrito puede ser administrado en cualquier momento antes, durante, o después de la aparición de la isquemia. En ciertas modalidades preferidas, el agente es administrado después de la aparición de la isquemia, pero suficientemente temprano para revertir el daño a algunos o todos los tejidos afectados. De manera preferible, el agente es administrado en menos de 12 horas, de manera más preferible menos de 6 horas y de manera aún más preferible en menos de aproximadamente 3 horas después de la aparición del evento isquémico. El tratamiento puede iniciarse antes, durante o después de la reperfusión del tejido isquémico. En muchos casos, el tiempo de reperfusión no puede ser determinado exactamente, pero se prefiere que el tratamiento sea antes, durante o inmediatamente después de la reperfusión para prevenir o disminuir las consecuencia dañinas adicionales que puedan resultar de la reperfusión. En el caso de que un coágulo induzca un episodio isquémico, pueden administrarse fármacos tales como el TPA, los cuales rompen el coágulo, para reducir el taño tisular potencial. Una vez dosificado, el fármaco actúa rápidamente para remover el bloqueo vascular y, por lo tanto, determinarse el tiempo al cual finalice el evento isquémico. En una modalidad preferida, el inhibidor de la activación del NF-?B se administra al mismo tiempo o inmediatamente después del fármaco que disuelve el coágulo. En ciertas otras modalidades preferidas, el inhibidor de la activación del NF-?B se administra antes de la aparición de la isquemia. La aparición de la isquemia puede ser predicha en el caso de ciertos procedimientos médicos, tales como procedimientos quirúrgicos. En otra modalidad preferida, el compuesto descrito se administra justo antes de o inmediatamente después de la liberación de la isquemia e inicio de la reperfusión durante tal procedimiento médico (por ejemplo, procedimientos de angioplastia) . Los siguientes ejemplos pretenden ilustrar mejor ciertas modalidades preferidas de la invención y no son de naturaleza limitante.

EJEMPLOS Ejemplo 1 Métodos Se anestesiaron seis ratas Sprague Dawley macho (300 g) con haloetano y se sometieron a oclusión de la arteria cerebral media (MCA) utilizando un filamento de nylon durante 2 horas. Posteriormente, se removió el filamento y ocurrió la reperfusión del tejido infartado durante 24 horas antes de que la rata fuese sacrificada. La tinción de secciones o cortes coronarios (2.0 mm x 7-8) con cloruro de trifeniltetrazolio (TTC) tomadas a través del cerebro se evaluaron bajo condiciones ciegas utilizando el análisis de imagen para determinar el tamaño del infarto. El infarto también se expresó como un porcentaje del hemisferio contralateral (no infartado) para proporcionar una indicación de que tanto del hemisferio ipsilateral (infartado) fue realmente dañado por el procedimiento. Debido al edema presente en el hemisferio infartado, con frecuencia es imposible determinar directamente el porcentaje del hemisferio ipsilateral que ha sido dañado.

Régimen de Dosificación Las ratas se les dieron inyecciones de bolos iv (1.0 mL/kg) de vehículo (PEG 200 al 10%/solución salina; n = 3) o ácido N- (2-piracin) carbonil-L-fenilalanin-L-leucin borónico (0.03 mg/kg; n = 3) a los 30 minutos, 2 horas, y 6 horas después del inicio de la oclusión.

Resultados El volumen del infarto diminuyó del 62% sobre el hemisferio ipsilateral en los animales tratados (Figura 1) . Esto refleja una disminución en el daño total del hemisferio del 19% al 2% (Figura 2) .

Ejemplo 2 Métodos Se anestesiaron ratas Sprague Dawley macho (250-240 g) con haloetano y se sometieron a oclusión de la arteria cerebral media (MCA) utilizando un filamento de nylon durante 2 horas. Posteriormente, se removió el filamento y ocurrió la reperfusión del tejido infartado durante 24 horas antes de que la rata fuese sacrificada. Inmediatamente después fue extraído el filamento, los animales fueron evaluados utilizando un sistema de puntuación neurológica. Las puntuaciones neurológicas se expresaron sobre una escala de 0 a 10, con el 0 representando una ausencia de déficit neurológico y el 10 representando un déficit neurológico severo. 24 horas después y antes del sacrifico, los animales fueron evaluados una segunda vez utilizando el mismo sistema de puntuación neurológica. La tinción de secciones o cortes coronarios (2.0 mm x 7-8) con cloruro de trifeniltetrazolio (TTC) tomadas a través del cerebro se evaluaron bajo condiciones ciegas utilizando el análisis de imagen para determinar el tamaño del infarto.

Régimen de Dosificación A las ratas se les dieron inyecciones de bolo iv (1.0 mL/kg) de vehículo (propilen glicol al 50%/solución salina; n = 8) o 7-n-propil-clasto-lactacistin ß-lactona (0.1 mg/kg; n = 6) a las 2 hora después del inicio de la oclusión.

Resultados En lo animales tratados con 7-n-propil-clasto-lactacistin ß-lactona, el volumen del infarto diminuyó en un 70% (Figura 5) . Todos los animales tuvieron una puntuación neurológica de lO±O inmediatamente después de las dos horas del episodio isquémico. A las 24 horas, las ratas tratadas con vehículo tuvieron una puntuación media de 8.7±0.6, mientras que las ratas tratadas con una sola dosis de 0.1 mg/kg de 7-n-propil-clasto-lactacistin ß-lactona tuvieron una puntuación media de 5.5±1 (Figura 6). Esos datos representan una mejora neurológica del 40% para los animales tratados con fármaco.

Conclusión La 7-n-propil-clasto-lactacistin ß-lactona proporciona una protección significativa tanto en el grado del déficit neurológico como el daño del cerebro infartado.

Ejemplo 3 Métodos Se anestesiaron ratas Sprague Dawley macho (250-240 g) con haloetano y se sometieron a oclusión de la arteria cerebral media (MCA) utilizando un filamento de nylon durante 2 horas. Posteriormente, se removió el filamento y ocurrió la reperfusión del tejido infartado durante 24 horas antes de que la rata fuese sacrificada. Inmediatamente después fue extraído el filamento, los animales fueron evaluados utilizando un sistema de puntuación neurológica. Las puntuaciones neurológicas se expresaron sobre una escala de 0 a 10, con el 0 representando una ausencia de déficit neurológico y el 10 representando un déficit neurológico severo. 24 horas después y antes del sacrifico, los animales fueron evaluados una segunda vez utilizando el mismo sistema de puntuación neurológica. La tinción de secciones o cortes coronarios (2.0 mm x 7-8) con cloruro de trifeniltetrazolio (TTC) tomadas a través del cerebro se evaluaron bajo condiciones ciegas utilizando el análisis de imagen para determinar el tamaño del infarto.

Régimen de Dosificación A las ratas se les dieron inyecciones de bolo iv (1.0 mL/kg) de vehículo (propilen glicol al 50%/solución salina; n = 8) o 7-n-propil-clasto-lactacistin ß-lactona (0.3 mg/kg; n = 7) a las 2 hora después del inicio de la oclusión. A dos grupos adicionales de ratas se les dieron inyecciones de bolo iv (1.0 mL/kg) de 7-n-propil-clasto-lactacistin ß-lactona a los 0 minutos, 2 horas, y seis horas después del inicio de la oclusión. Un grupo (0.1 mg/kg x 3; n = 6) recibió 0.1 mg/kg a cada uno de esos tiempos, mientras que otro grupo (0.3 mg/kg x 3; n = 7) recibió 0.3 mg/kg a cada uno de los tres puntos de tiempo.

Resultados En los animales tratados con una sola dosis de 7-n-propil-clasto-lactacistin ß-lactona, el volumen del infarto disminuyó en un 50% (Figura 3) . El volumen del infarto no disminuyó significativamente en cualquiera del grupo con una dosis de 0.1 mg/kg x 3 o el grupo con una dosis del 0.3 mg/kg x 3 (Figura 7) .

Todos los animales tuvieron una puntuación neurológica de ÍO±O inmediatamente después de las dos horas del episodio isquémico. A las 24 horas, las ratas tratadas con vehículo tuvieron una puntuación media de 8.7±0.6, mientras que las ratas tratadas con una sola dosis de 0.3 mg/kg de 7-n-propil-cIasts-lactacistin ß-lactona tuvieron una puntuación media de 4+1 (Figura 4). Esos datos representan una mejora neurológica del 60% para los animales tratados con fármaco. No se observó una mejora significativa en la puntuación neurológica en cualquiera del grupo con una dosis de 0.1 mg/kg x 3 o el grupo con una dosis de 0.3 mg/kg x 3 (Figura 8) .

Conclusión La 7-n-propil-cZasto-lactacistin ß-lactona proporciona protección significativa tanto en el grado del déficit neurológico como el daño del cerebro infartado. Aunque lo anterior se refiere a modalidades particulares, deberá comprenderse que la presente invención no se limita a éstas. A aquellos expertos en la técnica se les ocurrirá que pueden hacerse varias modificaciones a las modalidades descritas y que tales modificaciones pretenden estar dentro del alcance de la presente invención, la cual es definida por las siguientes reivindicaciones.

Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (24)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones:

1. El uso de un inhibidor de la activación del NF-?B seleccionado del grupo que consiste de inhibidores de la proteasoma, inhibidores de la vía de la ubiquitina, agentes que interfieren con la activación de un NF-KB via la via de la ubiquitina-proteasoma, y mezclas de los mismos para la preparación de un medicamento para tratar el daño isquémico en un mamífero.

2. El uso de un inhibidor de la activación del NF-?B seleccionado del grupo que consiste de inhibidores de la proteasoma, inhibidores de la via de la ubiquitina, agentes que interfieren con la activación de un NF-KB via la vía de la ubiquitina-proteasoma, y mezclas de los mismos para la preparación de un medicamento para tratar el daño debido a la reperfusión después de la isquemia en un mamífero.

3. El uso de un inhibidor de la activación del NF-?B seleccionado del grupo que consiste de inhibidores de la proteasoma, inhibidores de la vía de la ubiquitina, agentes que interfieren con la activación de un NF-?B vía la vía de la ubiquitina-proteasoma, y mezclas de los mismos, para la preparación de un medicamento para prevenir, reducir el tamaño o disminuir la severidad del infarto resultante de la isquemia o daño debido a la reperfusión en un mamífero.

4. El uso de acuerdo con la reivindicaciones 1-3, donde la isquemia es el resultado de la oclusión vascular.

5. El uso de acuerdo con la reivindicación 4, donde la oclusión es la de un vaso cerebral.

6. El uso de acuerdo con la reivindicación 4, donde la oclusión es la de un vaso cardiaco.

7. El uso de acuerdo con la reivindicación 1-3, donde el uso previene o disminuye la severidad del ataque.

8. El uso de acuerdo con la reivindicación 1-3, donde el uso previene o disminuye la severidad del ataque resultante de la oclusión del vaso cerebral.

9. El uso de acuerdo con la reivindicación 6, donde el uso previne o disminuye la severidad el infarto al miocardio resultante de la oclusión de un vaso cardiaco.

10. El uso de acuerdo con la reivindicación 1-3, donde el inhibidor de la activación del NF-?B es un agente que inhibe la fosforilación de la I?B-a.

11. El uso de acuerdo con la reivindicaciones 1-3, donde el inhibidor de la activación del NF-?B comprende un inhibidor de la proteasoma.

12. El uso de acuerdo con la reivindicación 11, donde el inhibidor de la proteasoma es un peptidil aldehido.

13. El uso de acuerdo con la reivindicación 11, donde el inhibidor de la proteasoma es un ácido peptidil borónico o éster peptidil borónico.

14. El uso de acuerdo con la reivindicación 11, donde el inhibidor de la proteasoma es un análogo de la lactacistina.

15. El uso de acuerdo con la reivindicación 13, donde el inhibidor de la proteasoma es el ácido N- (2-piracin) carbonil-L-fenilalanin-L-leucin borónico.

16. El uso de acuerdo con la reivindicación 14, donde el inhibidor de la proteasoma es la 7-n-propil-clasto-lactacistin ß-lactona.

17. El uso de acuerdo con las reivindicaciones 1- 3, donde el inhibidor de la activación del ?F-KB se administra al mamífero menos de 12 horas después de la aparición de la isquemia.

18. El uso de acuerdo con las reivindicaciones 1-3, donde el inhibidor de la activación del ?F-?B se administra al mamífero menos de 6 horas después de la aparición de la isquemia.

19. El uso de acuerdo con las reivindicaciones 1- 3, donde el inhibidor de la activación del NF-?B se administra al mamífero antes de la aparición de la isquemia.

20. El uso de acuerdo con las reivindicaciones 1-4, que comprende, además, administrar un segundo agente.

21. El uso de acuerdo con las reivindicaciones 21, donde el segundo agente se selecciona del grupo que consiste de inhibidores de la activación del NF-KB, agentes los cuales inhiben la expresión o acción de citocinas proinflamatorias o moléculas de adhesión celular; agentes los cuales actúan para reperfundir u oxigenar tejidos, agentes los cuales ayudan a la normalización de la temperatura.

22. El uso de acuerdo a la reivindicación 21, donde el segundo agente se selecciona del grupo que consiste de esteroides, fármacos antiedema, trombolíticos, fármacos solubilizadores de coágulos, polianiones y anticoagulantes.

23. El uso de acuerdo con la reivindicación 22, donde el segundo agente comprende un fármaco trombolítico o solubilizador de coágulos.

24. El uso de acuerdo a la reivindicación 24, donde el fármaco trombolítico solubilizador de coágulos comprende activador del plasminógeno celular.