MXPA99004653A

MXPA99004653A - Tiofenoles y fenoles substituidos utiles como agentes antioxidantes

Info

Publication number: MXPA99004653A
Application number: MXPA/A/1999/004653A
Authority: MX
Inventors: S Wright Paul; J Busch Steven; A Parker Roger; S Chen Kim; T Yates Mark
Original assignee: Aventis Pharmaceuticals Inc
Priority date: 1996-11-20
Filing date: 1999-05-19
Publication date: 2000-01-01

Abstract

La presente invención proporciona compuestos de fórmula (1), en donde X se selecciona a partir del grupo que consiste de (a), (b), (c), (d), (e) o (f);Y es un grupo tio, oxi o metileno;Z es hidrógeno o -C(0)-(CH2)m-Q-, en donde Q es hidrógeno o -COOH y m es un entero 1, 2, 3 o 4;R, es alquilo de C1-C6;y R2, R3 y R4 son cada uno independientemente hidrógeno o alquilo de CI-C6;o un estereoisómero del mismo;útiles para el tratamiento de aterosclerosis y desórdenes inflamatorios crónicos;para inhibir la expresión inducida por citocina de VCAM-1 y/o ICAM-I;para inhibir la peroxidación de lípido LDL;para disminuir el colesterol del plasma;y como aditivos químico antioxidantesútiles para prevenir el deterioro oxidativo en materiales orgánicos.

Description

TIOFENQLES Y FENOLES SUBSTITUI DOS ÚTI LES COMO AGENTES ANTIQXIDANTES ANTECEDENTES DE LA I NVENCIÓN La enfermedad de coronarias del corazón (CHD) sigue siendo la principal causa de muerte en los países industrializados. A pesar del descenso en mortalidad por CHD, la CHD todavía es responsable de más de 500, 000 muertes en Estados Unidos anualmente. Se estima que CHD, directa e indirectamente, cuesta a Estados Unidos más de $ 100 billones al año. La causa primaria de CH D es la aterosclerosis, una enfermedad caracterizada por el depósito de lípidos en la pared de vasos arteriales, resultando en un angostamiento de los pasajes de los vasos y en última instancia en el endurecimiento del sistema vascular. Se piensa que la aterosclerosis como se manifiesta en su complicación clínica mayor, la enfermedad isquémica del corazón, empieza con lesión locai al endotelio arterial seguido por la proliferación de células de músculo suave arterial de la capa media a la capa íntima junto con ei depósito de lípido y acumulación de células esponjosas en la lesión. Conforme se desarrol la la placa aterosclerótica, ocluye de manera progresiva más y más el recipiente sanguíneo y puede conducir, eventualmente, a isquemia o infarto. En consecuencia, es deseable proporcionar un método para inhibir la prog resión de aterosclerosis en pacientes con necesidad del mismo. La hipercolesterolemia es un factor de riesgo importante asociado con C H D Por ejemplo , en diciembre de 1 984, u n Panel de Conferencia de Desarrollo de Consenso de Salud del I nstituto Nacional concluyó que disminuir los niveles de colesterol del plasma (específicamente niveles sanguíneos de colesterol de lipoproteína de baja densidad) definitivamente reducirá el riesgo de ataques al corazón debido a CH D. Las lipoproteínas del suero son los portadores de lípidos en la circulación. Se clasifican de acuerdo a su densidad: quilomicras, lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL), lipoproteínas de baja densidad (LDL), y lipoproteínas de alta densidad (H DL). Las quilomicras participan principalmente en transportar los triglicéridos dietéticos y colesterol del intestino a tejido adiposo e híg ado. Las VLDL entregan de manera endógena triglicéridos sintetizados desde el hígado a tejido adiposo y otros tejidos. La LDL transporta colesterol a tejidos periféricos y regulan los niveles de colesterol endógeno en esos tejidos. La H DL transporta colesterol de tejidos periféricos al hígado. El colesterol de las paredes arteriales se deriva casi exclusivamente de LDL. Brown y Goldstein, Ann. Rev. Biochem . 52, 223 (1 983) ; Miller, Ann . Rev. Med. 31 , 97 (1 980) . En pacientes con niveles bajos de LDL, es raro el desarrollo de aterosclerosis. De acuerdo a esto, es deseable proporcionar un método para reducir el colesterol del plasma en pacientes con hipercolesterolemia o en riesgo de desarrollar hipercolesterolemia. Los niveles elevados de colesterol también están asociados con un número de estados de enfermedades, incluyendo restenosis, angina, arteriosclerosis cerebral, y xantoma. Es deseable proporcionar un método para reducir el colesterol del plasma en pacientes con, o en riesgo de desarrollar, restenosis, angina, arteriosclerosis cerebral, xantoma y otros estados de enfermedades asociados con niveles de colesterol elevados. La molécula de adhesión de célula vascular-1 (VCAM-1) y la molécula de adhesión ¡ntracelular-1 (ICAM-1) son moléculas de adhesión en la superfamilia de inmunoglobulinas que se sobre-regulan en células endoteliales vasculares y de músculo suave mediante citocinas, tales como, ¡nterleucina-1 (IL-1), ¡nterleucina-4- (IL-4) y factor de necrosis de tumor-a (TNF-a). A través de la interacción con el receptor de contador de integrina apropiado, VCAM-1 e ICAM-1 median la adhesión y la migración transendotelial de leucocitos en respuestas inflamatorias. Los inhibidores de VCAM-1 y/o ICAM-1 tienen aplicaciones terapéuticas para muchos tipos de desórdenes inflamatorios crónicos incluyendo aterosclerosis, asma, artritis reumatoide y diabetes autoinmune. Por ejemplo, la hibridación in situ y el análisis inmunohistoquímico de placas ateroscleróticas de pacientes demuestran un nivel incrementado de moléculas de adhesión (VCAM-1 e ICAM-1) cuando se compara con áreas sin enfermedad. O'Brien, K.D. et al., J. Clin. Invest. 92, 945-951 (1993); Davies, M.J. et al., J. Pathol. 171, 223-229 (1993); Poston, R.N. et al., Am. J. Pathol. 140, 665-673 (1992). Una dieta aterogénica induce la expresión de VCAM-1 en endotelio aórtico de conejo y células de músculo suave vascular dentro de ateromas. Poston, R.N. et al., Ibid.; Cybulsky, M.l. et al., Science 251, 788-791 (1991); Li, H. Et al., Arterioscler. Thromb. 13, 197-204 (1993). Considerando estos estudios previos, se cree que la expresión de VCAM-1 aumentada está asociada con iniciación y progresión de placas ateroscleróticas a través del reclutamiento de monocitos que circulan al área de la lesión. Adicionalmente, VCAM-1 también está involucrada como un mediador de otros desórdenes inflamatorios crónicos, tales como, asma, artritis reumatoide y diabetes autoinmune. Por ejemplo, se sabe que la expresión de VCAM-1 e ICAM-1 aumenta en asmáticos. Pilewski, J.M. et al., Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 12, 1-3 (1995); Ohkawara, Y. Et al., Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 12, 4-12 (1995). Adicionalmente, bloquear los receptores de integrina para VCAM-1 e ICAM-1 (VLA-4y LFA-1, respectivamente) suprimidas tanto las respuestas de fase temprana y tardía en un modelo de rata sensibilizada de ovalbúmina de respuestas alérgicas de vías respiratorias. Rabb, H.A. et al., Am. J. Respir. Care Med. 149, 1186-1191 (1994). También hay una expresión incrementada de moléculas de adhesión endoteliales, incluyendo VCAM-1, en la microvasculatura del sinovio reumatoide. Koch, A.E. et al., Lab. Invest. 64, 313-322 (1991); Morales-Ducret, J. et al., Immunol. 149, 1421-1431 (1992). Neutralizar anticuerpos dirigidos contra VCAM-1 o su receptor contador, VLA-4, puede retrasar el comienzo de diabetes en un modelo de ratón (ratones NOD), los cuales desarrollan espontáneamente la enfermedad. Yang, X.D. et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 91, 10494-10498 (1993); Burkly, L.C. et al., Diabetes 43, 523-534 (1994); Barón, J.L. et al., J. Clin. Invest. 93, 1700-1708 (1994). Los anticuerpos monoclonales para VCAM-1 también pueden tener un efecto benéfico en modelos animales de rechazo aloinjerto, sugiriendo que los inhibidores de la expresión de VCAM-1 pueden tener utilidad para prevenir el rechazo de transplantes. Orocz, C.G. et al., Immunol. Lett.32.7-12 (1992). VCAM-1 es expresada mediante células tanto como una forma unida a la membrana así como una forma soluble. Se ha mostrado que la forma soluble de VCAM-1 para inducir quimiotaxis de células endoteliales vasculares in vitro y estimular una respuesta angiogénica en córneas de rata. Koch, A.E. et al., Nature 376, 517-519 (1995). Inhibidores de la expresión de VCAM-1 soluble tienen valor terapéutico potencial para tratar enfermedades con un componente angiogénico fuerte, incluyendo crecimiento de tumor y metástasis. Folkman, J., y Shing, Y., J. Biol. Chem. 10931-10934 (1992). Los promotores tanto para VCAM-1 e ICAM-1 han sido clonados y caracterizados. Por ejemplo, ambos promotores contienen elementos de secuencias de DNA múltiples, los cuales pueden unirse al factor de transcripción, NF-kB. lademarco, M.F. et al., J. Biol. Chem. 267, 16323-16329 (1992); Voraberger, G. et al., J. Immunol. 147, 2777-2786 (1991). La familia de NF-kB de factores de transcripción es central en la regulación de varios genes sobre-regulados dentro de sitios de inflamación. La activación de NF-kB como un factor de transcripción, involucra la disociación de una subunidad inhibitoria, IkB, en el citoplasma. Las subunidades de NF-kB transubican al núcleo, se unen a elementos de secuencia de DNA específicos, y activan _la transcripción de varios genes, incluyendo VCAM-1 e ICAM-1. Colli?s T. et al.. Lab. Invest. 68. 499-508 (1993).

Se ha postulado que la regulación de la expresión del gene de VCAM-1 puede juntarse con tensión oxidativa a través de factores de regulación transcripcional o post-transcripcional sensibles a reducción-oxidación (redox) específicos. Los antioxidantes ditiocarbamato de pirolidina y N-acetilcisteína inhiben la expresión inducida por citocina de VCAM-1 , pero no de ICAM-1 en células endoteliales vasculares. Mauri, N . Et al. , J. Clin. I nvest. 92, 1 866-1 874 (1 993). Esto indicaría que la inhibición de la expresión de VCAM-1 mediante antioxidantes involucra algunos factores adicionales no involucrados en la regulación de la expresión de ICAM-1 . Los 2,6-di-alquil-4-silil-fenoles son descritos como agentes por Parker et al . en la patente estadounidense No. 5, 1 55, 250, emitida el 1 3 de octubre de 1992. Adicionalmente, los 2,6-di-alquil-4-silil-fenoles son descritos como agentes de disminución de colesterol de suero en la publicación internacional de PCT No. WO 95/1 5760, publicada el 1 5 de junio de 1 995. Sería ventajoso controlar la liberación de VCAM-1 y/o ICAM-1 , y tratar los efectos mediados de VCAM-1 y/o ICAM-1 . También sería conveniente controlar o tratar la inflamación crónica, sin la producción de efectos laterales concomitantes conocidos para acompañar el uso de esferoides anti-inflamatorios y agentes anti-inflamatorios no esteroidales.

BREVE DESCRIPCIÓN D E LA I NVENCIÓN La presente invención proporciona compuestos de la fórmula en donde X se selecciona del grupo que consiste de Y es tio, oxi o un grupo metileno; Z es hidrógeno o -C(O)-(CH2)m-Q, en donde Q es hidrógeno o -COOH y m es un entero 1 , 2, 3 o 4; R, es alq uilo de C^Ce; R2, R3 y R son cada uno independientemente hidrógeno o alquilo de o u n estereoisómero de los mismos. La presente invención también proporciona un método para inhibir la peroxidación de lípido LDL en un paciente con necesidad del mismo, comprendiendo administrar a dicho paciente una cantidad antioxidante efectiva de un compuesto de fórmula (1 ) . La presente invención proporciona además un método para disminuir el nivel de colesterol del plasma en un paciente con necesidad del mismo, mediante administración de una cantidad que disminuye el colesterol del plasma de un compuesto de fórmula (1 ). La presente invención proporciona además un método para inhibir la progresión de aterosclerosis y/o un método para tratar aterosclerosis en un paciente con necesidad del mismo, comprendiendo administrar al paciente una cantidad antiaterosclerótica de un compuesto de fórmula (1 ). La presente invención proporciona además un método para inhibir la expresión inducida por citocina de ia molécula de adhesión de célula vascular-1 y/o molécula de adhesión intercelular-1 en un paciente con necesidad del mismo, comprendiendo administrar al paciente una cantidad inhibidora efectiva de molécula de adhesión de célula vascular-1 y/o molécula de adhesión intercelular-1 de un compuesto de fórmula ( 1 ). La presente invención proporciona además un método para tratar un paciente afligido con una enfermedad inflamatoria crónica comprendiendo administrar al paciente una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de fórmula (1 ).

DESC RI PCIÓN DETALLADA DE LA I NVENCIÓN Como se usa en esta solicitud: a) la desig nación " — — — " se refiere a una ligadura que sobresale hacia delante del plano de la pági na . b) la desig nación " "" " se refiere a una ligadura que sobresale hacia atrás del plano de la página; c) la designación " " se refiere a una ligadura entre moléculas quirales o una ligadura entre moléculas quirales para la cual no está designada la estereoqu ímica. Como se usa en la presente, el término "alquilo de se refiere a un radical de hidrocarbilo saturado de configuración lineal, ramificada o cíclica hecha de uno a seis átomos de carbono. Están incluidos dentro del alcance de este término metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, butilo terciario, n-pentilo, n-hexilo, ciciohexilo y similares. El término "estereoisómeros" es un término general para todos los isómeros de las molécu las individuales que difieren solo en la orientación de sus átomos en espacio. Incluye isómeros de imágenes de espejo (enantiómeros) , isómeros geométricos (cis/trans) , e isómeros de compuestos con más de un centro quiral que no son imágenes de espejo del otro (diastereoisómeros). Los compuestos de fórmula (1 ) pueden prepararse al utilizar procedimientos y técnicas bien conocidos y apreciados por alguien de habilidad ordinaria en la técnica. En el Esquema A se expone un esquema sintético general para preparar compuestos de fórmula ( 1 ) , en donde todos los substituyentes, a menos que se indique de otra manera, son definidos previamente.

ESQU EMA A Acoplamiento Ib Y' = S U O Hal = cloro, bromo o yodo En general , un fenol de estructura 1 a puede prepararse al hacer reaccionar el apropiado alquil-4-mercaptofenol o alquilhidroquinona de estructura 2 (o derivados adecuadamente protegidos) con una base no nucleof ílicoa, tal como hidruro de sodio, carbonato de potasio, carbonato de ces io. h idróxido de sodio, hidróxido de potasio y sim ilares, y el apropiado haloalcano o haloalqueno de estructura 3, tal como el apropiado bromoa lcano, en u n solvente aprótico adecuado, tal como acetonitrilo, dimetilformam ida o dimetilacetamida, o en un solvente acuoso, tal como ag ua/2-butanona.

U n fenol éster de estructura 1 b puede prepararse al acilar un fenol de estructura 1 a de acuerdo a técnicas de acilación estándar. Por ejemplo, un fenol de estructura 1 a se disuelve en un solvente aprótico adecuado, tal como, acetonitrilo, dimetilformamida o dimetilacetamida, o un solvente etéreo, tal como dietil éter o dioxano, y se trata con una base adecuada, tal como, trietilamina, N-metilmorfolina, hidróxido de sodio o hidruro de sodio. Entonces se adiciona un exceso de agente O-acilante a temperatura ambiente y la reacción se agita a temperatura ambiente durante 1 a 24 horas. Ejemplos de agentes O-acilantes son cloruro de acetilo, cloruro de propionilo, cloruro de monoetilsuccinilo, anhídrido succínico y similares. El producto se purifica entonces mediante técnicas bien conocidas en la técnica, tales como, métodos de extracción y cromatografía instantánea. Opcionalmente , puede realizarse un tratamiento adicional con una base adecuada, tal como hidróxido de sodio con subsecuente acidificación con un ácido adecuado, tal como ácido clorhíd rico, seguido por extracción y cromatografía instantánea, para proporcionar el fenol éster de estructura 1 b. Los materiales de inicio a usar en el procedimiento sintético general señalado en el Esquema A están fácilmente disponibles para alguien de habilidad ordinaria en la técnica. Por ejemplo , ciertos materiales de inicio de fenoles para varios compuestos de fórmula ( 1 ) en donde Z es azufre, tales como, 2,6-di-butil terciario-4-mercaptofenol y 2-butil terciario-4-mercaptofenol , se describen en las sig uientes patentes: patente estadounidense 3, 576, 883, patente estadoun idense 3 , 952,064, patente estado unidense 3,479 ,407 , patente estadounidense 4 , 975,467 , patente estadounidense 5, 1 55,250 y en ia solicitud de patente japonesa 73-28425. Otros materiales de inicio de fenoles para compuestos de fórmula (1 ) incluyen trimetilhidroquinona, butil terciario-1 ,4-hidroquinona, y 2, 5-di-butil terciariohidroquinona, los cuales están comercialmente disponibles. Los materiales de inicio de haloalcano y haloalqueno de estructura 3, tales como bromuro de (R)-(-)-citronelilo, bromuro de (S)-(+)-citronelilo, 1 -bromo-3,7-dimetiloctano, 1 -bromo-3-metilbutano, y 4-bromo-2-metil-2-buteno están comercialmente disponibles. En el caso especial donde X es la porción de las fórmulas: un intermediario apropiado de estructura 3 como se representa mediante las fórmulas (3a) o (3b) se prepara al adicionar cloruro de metanosulfoni lo a u na mezcla de 3-metil- 1 , 3-butanodiol o hidroxicitronelol , bromuro de litio , 2,4,6-colidina y dimetilformamida, al tiempo que se agita a temperatura ambiente. La mezcla se agita durante varios días, se diluye con agua y éter, y se extrae mediante técnicas bien conocidas en la técnica para proporcionar un intermediario de estructura (3a) o (3b) .

En aquellos casos donde la funcionalidad 1 -fenol de un compuesto de estructura 2 puede reaccionar con los compuestos de estructura 3 bajo las condiciones de la reacción, la funcionalidad 1 -fenol del compuesto de estructura 2 puede bloquearse con agentes bloqueadores de fenol estándares, los cuales son bien conocidos y apreciados en la técnica. La selección y utilización de grupos de bloqueo particulares son bien conocidos para alguien de habilidad ordinaria en la técnica. En general, los g rupos de bloqueo deben ser seleccionados de manera que protejan adecuadamente el fenol en cuestión durante los subsecuentes pasos sintéticos, y los cuales sean fácilmente removibles bajo condiciones que no provoquen degradación del producto deseado. Ejemplos de grupos protectores de fenol adecuados son éteres, tales como, metoximetilo, 2-metoxoetoximetiio, tetrahidro-piranilo, t-butilo y bencilo; silil éteres, tales como trimetilsililo y t-butildimetilsililo; esteres, tales como acetato y benzoato; carbonatos, tales como metilcarbonato y bencilcarbonato; así como sulfonatos, tales como, metanosulfonato y toluenosulfonato. En aquellos casos donde R1 y R2 son cada uno t-butilo, la reacción de Esquema A puede realizarse convenientemente sin bloqueo de la funcionalidad 1 -fenol. Los siguientes ejemplos presentan s íntesis normales como se describe en el Esquema A. Se entiende que estos ejemplos son solo ilustrativos y no pretenden limitar el alcance de la presente invención en ning u na manera . Como se usa en la presente , los siguientes término tienen los sig nificados indicados: "g" se refiere a g ramos ; "mol" se refiere a moles; "mmol" se refiere a milimoles; "L" se refiere a litros; "mi" se refiere a mililitros; "bp" se refiere a punto de ebullición" ; "°C" se refiere a grados Celsius; "mm Hg" se refiere a milímetros de mercurio; "mp" se refiere a punto de fusión; "mg" se refiere a miligramos; "µM" se refiere a micromolar; "µg" se refiere a microgramos; "h" se refiere a horas, "min" se refiere a minutos.

EJEMPLO 1 Fenol, 2.6-bisf 1 .1 -dimetiletil)-4-r(3.7-dimetil-6-octeniDoxi1-. (S)- (MDL 103,294) Mezclar 2,6-di-t-butil-1 ,4-hidroquinona (9.0 g , 40.5 mmol) , carbonato de potasio (5.6 g) , bromuro de S-(+)-citronelilo (8.9 g , 40.5 mmol, Aldrich) , y acetonitrilo (1 50 mi , desgasificado bajo argón) , calentar a reflujo y agitar durante cuatro días bajo atmósfera de argón . Diluir en frío la mezcla con agua y extraer con dietil éter. Lavar la capa de éter con agua y evaporar a sequedad para dar un aceite (14.5 g) . Destilar el aceite en un "kugelrohr". El material de inicio (2.5 g, 1 30°C, 0.1 mm Hg) puede recolectarse antes de la recolección de otras fracciones. U na fracción adicional recolectada (1 40- 1 65 = C, 0.1 m m Hg) da un aceite ( 1 1 .7 g) , el cual es seg uido por cromatografía en gel de sílice (cloroformo). La redestilación en un kugeirohr (135-150°C, 0.1 mm Hg) da un aceite amarillo claro (11.4 g). Anal. Caled, para C24H40O2: C, 79.94; H, 11.18 Encontrado: C, 80.55; H, 11.17.

EJEMPLO 2 Fenol, 2-(1.1-dimetiletil)-4-ff3.7-dimetil-6-octenil)oxi1-. (S)- (MDL 103,649) Mezclar t-butil-1-4-hidroquinona (4.2 g, 25.8 mmol, Aldrich), carbonato de potasio (3.5 g), bromuro de S-(+)-citronelilo, y acetonitrilo (150 mi, desgasificado bajo argón), calentar a reflujo y agitar durante cuatro días bajo atmósfera de argón. Diluir en frío la mezcla con agua y extraer con dietil éter. Lavar la capa de éter con agua y evaporar a sequedad para dar un aceite (7.9 g). Destilar'el aceite en un kugeirohr. El material de inicio (1.6 g, a 120°C, 0.1 mmH) puede recolectarse antes de recolectar las demás fracciones. Una fracción adicional recolectada (140-165°C, 0.1 mm H) da un aceite (5.8 g), el cual es seguido por cromatografía en gel de sílice (cloroformo). El aceite es redestilado en un kugeirohr (138-170°C, 0.1 mm Hg) seguido por cromatografía en gel de sílice (hexano-CH2CI2 3:1-1:1). Redestilar el producto resultante en un kugeirohr (140-150°C, 0.1 mmH) y redestilar un tiempo final (138-150°C, 0.1 mm Hg) para dar el compuesto del título (4.0 g). Anal. Caled para C2oH32O2: C, 78.89; H, 10.60 Encontrado: C, 79.51; H, 10.44 EJEMPLO 3 Fenol, 2-(1,1-dimetiletil)-4-r(3,7-dimetil-6-octenil)tiol-, (S)- (MDL 103,714) Mezclar 2-t-butil-4-mercaptofenol (8.0 g, 44 mmol), bicarbonato de potasio (4.4 g, 44 mmol), carbonato de potasio (0.1 g), bromuro de S-(+)-citronelilo (9.6 g, 44 mmol), e isopropanol (150 mi, desgasificado bajo argón), calentar a reflujo y agitar durante aproximadamente 0.5 h, bajo atmósfera de argón. Destilar el azeótropo de H2O»isopropanol y continuar para someter a reflujo la mezcla durante la noche durante aproximadamente 24 horas. Remover el solvente mediante destilación (baño de vapor). Diluir el residuo con H2O, acidificar con ácido clorhídrico conc. y extraer con dietil éter. Lavar la capa de éter con agua y salmuera y evaporar a sequedad para dar un aceite (16.2 g). Destilar el aceite en un kugeirohr. El material de inicio (3.5 g, 120°C, 0.25-0.2 mm Hg) puede recolectarse antes de recolectar las demás fracciones. Una fracción adicional recolectada (130-140°C, 0.1 mm Hg) da un aceite (9.7 g), el cual es redestilado (135-160°C, 0.1 mm Hg) para proporcionar un aceite incoloro (9.4 g). Anal. Caled, para C20H32OS: C, 74.94; H, 10.06; S, 10.01 Encontrado: C, 75.40; H, 10.19 EJEMPLO 4 Fenol, , 2.6-bisM,1-dimetiletil)-4-í(3,7-dimetil-6-octenintiol- (MDL 103,960) Agitar una mezcla de 2,6-di-t-butil-4-mercaptofenol (10.0 g, 41.9 mmol), bromuro de R-(-)-citronelilo (9.2 g, 8.3 mi, 41.9 mmol) e isopropanol (150 mi, desgasificado bajo argón) a temperatura ambiente bajo argón positivo. Adicionar bicarbonato de potasio (4.2 g, 41.9 mmol) y someter a reflujo la mezcla con agitación durante la noche. Permitir que se destile el isopropanol, adicionar acetonitrilo (-100 mi), someter a reflujo la mezcla de reacción durante aproximadamente 1 h y permitir que se destile el acetonitrilo. Diluir la mezcla de reacción con agua, acidificar con ácido clorhídrico conc. y extraer con dietii éter. Lavar la capa de éter con agua y salmuera, filtrar a través de gel de síl¡ce/Na2SO4 y evaporar a sequedad para dar un aceite amarillo claro (16.2 g). Destilar el aceite en un kugeirohr. Puede recolectarse una fracción de aceite amarillo (1.6 g, 120°C, 0.25-0.1 mm Hg) antes de recolectar las demás fracciones. Una fracción adicional recolectada (140-165°C, 0.1 mm Hg) da un aceite incoloro (13.9 g), el cual es redestilado en un kugeirohr (140-160°C, 0.1 mm Hg) para proporcionar un aceite incoloro (13.7 g). Anal. Caled, para C24H40OS: C, 76.53; H, 10.71 Encontrado: C, 76.42; H, 10.77 EJEMPLO 5 Fenol.2.6-bisM .1 -di metileti 0-4-1(3, 7-dimetiloctiDoxil- (MDL 104.102) Mezclar di-t-butil-1 ,4-hidroquinona (10.0 g, 45 mmol), bromo-3,7-dimetiloctano (10.0 g, 45 mmol), carbonato de potasio (6.22 g, 45 mmol) y acetonitrilo (200 mi, desgasificado bajo argón), calentar a reflujo con agitación bajo atmósfera de argón, y permitir que se destile el solvente hasta que la temperatura de la mezcla de reacción alcance 82°C Someter a reflujo la mezcla de reacción bajo argón durante unos tres días adicionales. Diluir en frío la mezcla con agua y extraer con dietil éter. Lavar la capa de éter con agua y evaporar a sequedad para dar un aceite (16.6 g). Destilar el aceite en un kugeirohr. El material de inicio (5.0 g, -65-110°C, 0.1 mm Hg) puede recolectarse antes de recolectar las demás fracciones. Una fracción adicional recolectada (135-155°C, 0.1 mm Hg) da un aceite (12.0 g), el cual es seguido por cromatografía en gel de sílice (cloroformo). El aceite es redestilado en un kugeirohr (138-170°C, 0.1 mm Hg) seguido por cromatografía en gel de sílice (CHCI3) para proporcionar un aceite (11.7 g). Redestilar el producto resultante en un kugeirohr (130-145°C, 0.1 mm Hg) para proporcionar un aceite (10.7 g) y redestilar un tiempo final (130-145°C, 0.1 mm Hg) para dar el compuesto del título (10.1 g). Anal. Caled, para C24H42O2: C, 79.50; H, 11.68 Encontrado: C, 80.24; H, 11.88 EJEMPLO 6 Fenol, 2-(1 ,1-dimetiletil)-4-r(3,7-dimetiloctil)oxil-. (MDL 104,191) Agitar una mezcla de 2-t-butil-hidroquinona (8.3 g, 0.05 mol) y dimetilacetamida (100 mi) bajo argón positivo en un baño de hielo. Adicionar hidruro de sodio (2.0 g, 60% de dispersión en aceite, 0.05 mol) y agitar la mezcla de reacción durante 1 h (y/o que la evolución de H2 haya parado). Adicionar 1-bromo-3,7-dimetiloctano (11.1 g, 0.05 mol) y permitir que la mezcla se caliente a temperatura ambiente. Permitir que se disuelva el precipitado que se forma (-3 h). Agitar la mezcla café obscuro a temperatura ambiente durante la noche, diluir con H2O y dietil éter. Extraer la capa de éter, lavar y evaporar a sequedad para proporcionar un producto semi-sóiido café (16.4 g). Destilar el producto semi-sólido café en un kugeirohr. El material de inicio (3.4 g, a 120°C, 0.1 mm Hg) puede recolectarse antes de recolectar las demás fracciones. Una fracción de producto recolectada (~130-155°C, 0.1 mm Hg) da un aceite (-6.5 g). Recolectar otra fracción de producto (150-185°C, 0.1 mm Hg) para dar un aceite (-4.1 g). Combinar las dos fracciones de producto (-6.5 g + -4.1 g) con una fracción de producto adicional de una corrida previa del mismo ejemplo (-4.6 g) y evaporar a sequedad para dar un aceite (-15.5 g). Purificar el aceite mediante cromatografía en gel de sílice levigando secuencialmente con hexano (500 mi), CCl :hexano (500 mi, 1:1) y CCI4 a un aceite de color paja (9.2 g). Destilar el aceite de color paja en un kugeirohr y recolectar el compuesto del título (7.9 g, 135-150°C, 0.1 mm Hg).

EJEMPLO 7 Fenol, 2,6-bis(1 ,1-dimetil)-4-r(4-hidrox¡-3,7-dimetiloct¡0tiol-, (MDL 104.487) Paso a: Preparación de la estructura (3a) Mezclar hidroxicitronelol (10.0 g, 57.4 mmol), bromuro de lito (10.0 g, 111.5 mmol), 2,4,6-colidina (7.0g, 7.6 mi, 57.7 mmol) y dimetilformamida (100 mi) y agitar a temperatura ambiente. Adicionar cloruro de metanosulfonilo (6.6 g, 4.44 mi, 57.4 mmol) sobre aproximadamente cinco minutos y agitar la mezcla durante la noche a temperatura ambiente. Adicionar bromuro de litio adicional (5.0 g), cloruro de metanosulfonilo (4.4 mi) y 2,4,6-colidina (7.6 mi) y agitar la mezcla durante cuatro días. Diluir la mezcla con H2O y éter, extraer el lavado de la capa de éter con Cu(NO3)2 saturado y agua y evaporar a sequedad para proporcionar el compuesto del título como un aceite amarillo claro (8.7 g, 37 mmol).

Paso b: Preparación de MDL 104,487 Combinar el producto del ejemplo 7, paso a con una mezcla de 2,6-di-t-butil-4-mercaptofenol (8.8 g, 37 mmol), bicarbonato de potasio (3.7 g, 37 mmol) e isopropanol (100 mi) y calentar a reflujo. Continuar a reflujo con la mezcla durante una hora y permitir que el solvente se destile hasta que la temperatura de la mezcla de reacción alcance 82°C. Diluir la mezcla de reacción con H2O, acidificar con ácido clorhídrico conc. y extraer con dietil éter. Lavar la capa de éter con agua y salmuera, filtrar a través de gel de sílice(Na2SO4) y evaporar a sequedad para proporcionar un aceite (37.0 g). Destilar el aceite en un kugeirohr. El material de inicio (~100-130°C, 0.1 mm Hg) puede recolectarse antes de la recolección de las demás fracciones. Una fracción adicional recolectada (160-175°C, 0.1 m Hg) proporciona un residuo (13.8 g). Purificar el residuo mediante cromatografía en gel de sílice levigando secuencialmente con CCI , CCI4:CH2CI2 para obtener el compuesto del título como un aceite amarillo (10.6 g). Anal. Caled, para C24H42O2S: C, 73.04; H, 10.73 Encontrado: C, 73.19; H, 10.92 EJEMPLO 8 Fenol, 2,6-bis(1.1-dimetiletil)-4-r(3.7-dimetil-6-octeni0oxi1-, (R)- (MDL 104.535) Agitar una mezcla de 2,6-di-t-butil-1 ,4-hidroquinona (6.7 g, 30 mmol). bromuro de R-(-)-citronelilo (6.6 g, 6.0 mi, 30 mmol) y acetonitrilo (150 mi. desgasificado bajo argón) a temperatura ambiente y adicionar carbonato de potasio (4.2 g, 30 mmol). Calentar la mezcla a reflujo bajo argón positivo y someter a reflujo durante la noche. Someter la mezcla de reacción a reflujo unas 24 horas adicionales, adicionar yoduro de potasio y someter a reflujo durante -6 h adicionales. Enfriar la mezcla de reacción a temperatura ambiente, diluir con agua, acidificar con ácido clorhídrico conc, extraer con dietil éter, filtrar a través de gel de sílice/Na2SO4 y evaporar a sequedad para proporcionar un aceite (11.0 g). Destilar el aceite en un kugeirohr. Recolectar las fracciones (10.8 g, 120-130°C, 0.1 mm Hg y 150-180°C, 0.1 mm Hg) y redestilar aceite en el kugeirohr. Una fracción adicional recolectada (160-175°C, 0.1 mm Hg) proporciona un residuo (13.8 g). Recolectar el material de inicio (2.2 g, hasta 120°C, 0.1 mm Hg) y el compuesto dei título como un aceite amarillo claro (8.3 g, 135-150°C, 0.1 mm Hg). Anal. Caled, para C24H 0O2: C, 79.94; H, 11.18 Encontrado: C, 79.96; H, 11.10 EJEMPLO 9 Fenol, 2-(1,1-dimetileti -4-f(3,7-dimetil-6-octeniQoxi1-, (MDL 105,411) Agitar una mezcla de 2-t-butílhidroquinona (7.0 g , 42 mmol) , bromuro de R-(-)-citronelilo (9.2 g , 42 mmol) y acetonitrilo (1 50 mi, desgasificado bajo vacío) a temperatura ambiente. Adicionar carbonato de potasio (5.8 g , 42 mmol) y someter a reflujo la mezcla con agitación bajo argón positivo durante la noche. Adicionar yoduro de potasio (2.0 g) y continuar con el reflujo durante tres días. Enfriar la mezcla de reacción a temperatura ambiente, diluir con agua, acidificar con ácido clorhídrico conc. , extraer con dietil éter, filtrar a través de gel de sílice/Na2SO4 y evaporar a sequedad para proporcionar un aceite (1 3.0 g) . Destilar el aceite en un kugeirohr. Recolectar el material de inicio (1 .3 g , hasta 1 20°C, 0.1 mm Hg) . Una fracción adicional recolectada ( 140-170°C , 0.1 mm Hg) proporciona un residuo (8.9 g), el cual es redestilado, recolectado (7.5 g, 140-160°C , 0.1 mm Hg) y purificado usando cromatografía en gel de sílice levigando con CHCI3 para proporcionar el compuesto del título como un aceite amarillo claro (7.1 g). Anal. Caled , para C20H32O2: c, 78.89; H , 10.60 Encontrado: C, 79.73; H , 1 0.86 EJEMPLO 10 Fenol . 2, 5-bis(1 , 1 -dimetileti0-4-r(3.7-dimetil-6-octenil)oxil-, (S)- (MDL 1 07.059) Calentar a reflujo una mezcla de 2,5-di-t-butil-1 ,4-hidroquinona (11.1 g, 50 mmol), bromuro de S-(+)-citronelilo (11.0 g, 50 mmol), carbonato de potasio (6.9 g) y acetonítrilo (150 mi, desgasificado bajo argón) con agitación durante dos días. Adicionar dimetilformamida (-15 mi) y yoduro de sodio (-0.5 g) y continuar con el reflujo durante la noche. Enfriar la mezcla de reacción a temperatura ambiente, diluir con agua, acidificar con ácido clorhídrico conc., extraer con dietil éter, filtrar a través de gel de sílice/Na2SO y evaporar a sequedad para proporcionar un aceite (19.2 g). Mezclar el aceite con hexano. Filtrar el precipitado resultante. Evaporar a sequedad el filtrado y destilar el residuo en un kugeirohr. Recolectar el material de inicio (hasta 120°C, 0.1 mm Hg). Recolectar una fracción adicional (155-180°C, 0.1 mm Hg) para proporcionar un aceite (9.2 g), el cual es purificado usando cromatografía en gel de sílice (hexano:CH2CI2 : 4:1) y evaporado a sequedad para proporcionar un aceite pajizo claro (8.4 g). Redestilar el aceite pajizo claro en un kugeirohr para proporcionar el compuesto del título como un aceite (8.2 g, 150-165°C, 0.1 mm Hg). Anal. Caled, para C24H40O2: C, 79.94; H, 11.18 Encontrado: C, 80.68; H, 11.08 EJEMPLO 11 Acido butanoico, 2,6-bis(1 ,1-dimetileti0-4-r(3,7-dimetilocti0oxi1fenil éster Agitar una mezcla del producto del ejemplo 5 (4.9 g , 1 3.5 mmol) e hidruro de sodio (0.6 g de 60% en aceite, 1 5 mmol) en dimetilacetamida (1 00 mi) a temperatura ambiente durante 1 hora. Adicionar cloruro de monoetilsuccinilo (2.46 g , 1 5 mmol) a la mezcla de reacción con agitación. Agitar la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante la noche, entonces calentar a 90°C durante 2 horas y permitir que se enfríe. Diluir la mezcla con agua y extraer con éter. Lavar la capa de éter con agua y evaporar a sequedad para dar un residuo. Combinar el residuo con metanol (1 00 mi) y calentar a reflujo. Adicionar el hidróxido de sodio (1 .0 g en 20 mi de agua) y someter a reflujo la mezcla de reacción durante 30 minutos, entonces diluir con agua y permitir que se enfríe. Acidificar la suspensión acuosa con ácido clorhídrico conc. y extraer la mezcla con éter y tetrah idrofurano. Separar la capa orgánica y evaporar a sequedad para dar el compuesto del título, el cual es cristalizado a partir de hexano.

EJEMPLO 12 Acido acético, 2, 6-bis( 1 , 1 -dimetiletil)-4-f(3, 7-dimetil-6-octeni0oxilfenil éster, (S)- Agitar una mezcla del producto del Ejemplo 1 (6.02 g, 16.7 mol), hidruro de sodio (0.67 g de 60% en aceite, 16.7 mmol) y dimetilacetamida (50 mi) a temperatura ambiente durante 30 minutos. Adicionar lentamente cloruro de acetilo (2.6 g, 33.5 mmol) a la mezcla de reacción y continuar la reacción durante la noche. Diluir la mezcla de reacción con agua y éter, y separar las capas. Evaporar la capa de éter a sequedad para dar el compuesto del título crudo. Destilar en un kugeirohr seguido por recristalización para dar el compuesto del título.

EJEMPLO 13 Acido acético, 2-(1 ,1-dimetiletil)-4-f(3,7-dimetil-6-octeni0oxi1fenil éster Agitar una mezcla del producto del Ejemplo 9 (4.67 g, 15.3 mmol), trietilamina (3.04 g, 30 mmol) y éter (100 mi) a temperatura ambiente.

Adicionar lentamente cloruro de acetilo (2.4 g , 30 mmol) con agitación. Agitar la mezcla durante 4 horas y entonces diluir con agua. Separar las capas y evaporar la capa orgánica a sequedad para dar un residuo. Destilar el residuo en un kugeirohr para proporcionar el compuesto del título.

EJEMPLO 14 Acido propiónico, 2,5-bis(1 , 1 -dimetilet¡l)-4-í(3,7-d¡metil-6-octenil)oxilfenil éster, (S)- Agitar una mezcla del producto del Ejemplo 1 0 (7.21 g, 20 mmol), trietilam ina (2.53 g , 25 mmol) en éter (1 50 mi) a temperatura ambiente. Adicionar cloruro de propionilo (23 g, 25 mmol) y agitar la mezcla durante la noche . Adicionar agua y éter y separar las capas . La evaporación de la capa orgánica da un aceite, el cual se destila entonces en un kugeirohr. El residuo puede purificarse usando cromatografía en gel de sílice para proporcionar el compuesto del título.

EJEMPLO 1 5 Acido butírico. 2,6-bis(1 , 1 -dimetiletiO-4-r(3,7-dimetil-6-octeniQtio1feni éster Agitar una mezcla del producto del Ejemplo 4 (7.53 g , 20 mmol) , trietilam ina (2.53 g , 25 mmol) en éter (1 50 mi) a temperatura ambiente. Adicionar cloruro de butirilo (2.66 g , 25 mmol) y agitar la mezcla durante la noche. Adicionar agua y éter y separar las capas. La evaporación de la capa orgánica da un aceite, el cual se destila entonces en un kugeirohr. El residuo puede purificarse usando cromatografía en gel de sílice para proporcionar el compuesto del título.

EJEMPLO 16 Feno l , 2.3.6-trimetil-4-ff3.7-dimetil-6-octeni0oxi1 , (S)- Calentar a reflujo una mezcla de trimetilhidroquinona (10.0 g, 66 mmol, Aldrich Chemical Co., Milwaukee, Wl 53233), bromuro S-(+)-citronelilo (14.47 g, 66 mmol), carbonato de potasio (9.12 g, 66 mmol), yoduro de sodio (9.9 g), y acetonitrilo (150 mi) y agitar durante cinco días. Enfriar la mezcla, diluir con agua y éter y separar las capas. Evaporar la capa orgánica a sequedad para dar un aceite. Destilar el aceite en un kugeirohr. Purificar el residuo usando cromatografía en gel de sílice y redestilar para proporcionar el compuesto del título.

EJEMPLO 17 Fenol, 2,3,5-trimetil-4-r(3,7-dimetil-6-octenil)oxil-, (S)- La cromatografía del producto de reacción anterior del ejemplo 16 seguido por destilación produce el compuesto del título.

EJEMPLO 18 Fenol, 2,6-bis(1.1 -dimetileti0-4-r(3-metil-2-butenil)tiol-.

Preparar mediante el método del Ejemplo 4 usando 4-bromo-2-metil- 2-buteno (6.25 g, 41.9 mmol), Destilar en un kugeirohr para dar el compuesto del título. 10 EJEMPLO 19 Fenol, 2-(1 ,1-dimetiletil)-4-[(3-metilbutano)oxil- Preparar mediante el método del Ejemplo 6 usando 1-bromo-3- metilbutano (7.55 g, 0.05 mol). Destilar en un kugeirohr para dar el 20 compuesto del título.

EJEMPLO 20 Acido acético, 2,3,6-trimetil-4-f(3,7-dimetil-6-octenil)oxpfenil éster, (S)- "> Paso a: Preparación de 4-acetoxi-2,3,5-trimetilfenol Agitar una mezcla de trimetilhidroquinona (15.2 g, 0.1 mol), trietilamina (25.3 g, 0.25 mol) y éter (500 mi) en un baño de hielo. Adicionar lentamente cloruro de acetilo (19.6 g, 0.25 mol) con agitación, permitir que la reacción se caliente a temperatura ambiente durante una hora, entonces diluir con agua y separar las capas. Evaporar la capa de éter a sequedad. Disolver el diacetato resultante en metanol (300 mi). Adicionar hidróxido de amonio fuerte (11 mi) y agitar la mezcla a temperatura ambiente durante la noche. Destilar los solventes bajo presión reducida y disolver el residuo en éter. Lavar la capa de éter con agua y evaporar a sequedad. La recristalización a partir de hexano-éter produce 4-acetoxi-2,3,5-trimetilfenol (16.7 g, m.p. = 106-107°C).

Paso b: Preparación de ácido acético. 2,3,6-trimetil-4-f(3,7-dimetil-6- octeniQoxilfenil éster, (S)-: 20 Calentar a reflujo una mezcla de 4-acetoxi-2,3,5-trimeriIfenol (8.1 g, 41.7 mmol), bromuro de S-(+)-citronelilo (9.14 g, 41.7 mmol), bromuro de litio (3.6 g, 41.7 mmol), carbonato de potasio (5.8 g, 41.7 mmol) y acetonitrílo (150 mi) con agitación durante tres días. Enfriar la mezcla, diluir con agua, acidificar con ácido clorhídrico conc. y extraer en éter. "> Evaporar la capa de éter a sequedad para dar un residuo. Destilar el residuo en un kugeirohr seguido por cromatografía en gel de sílice para producir el compuesto del título.

Los siguientes compuestos pueden prepararse mediante procedimientos análogos a aquéllos descritos antes en los Ejemplos 1-20: Fenol, 2,6-dietil-4-[(3,7-dimetil-6-octenil)oxi]-, Fenol, 2,6-dietíl-4-[(3,7-dimetil-6-octenil)oxi]-, (S)-Fe?ol, 2,6-diet¡l-4-[(3,7-dimetil-6-octenil)oxi]-, (R)-Fenol, 2,6-dietil-4-[(3,7-dimetil-6-octenil)tio]-, Fenol, 2,6-dietil-4-[(3,7-dimetil-6-octenil)tio]-, (S)-Fenol, 2,6-dietil-4-[(3,7-dimetil-6-octenil)tio]-, (R)-Fenol, 2,6-dietil-4-[(3,7-dimetiloctil)oxi]-, Fenol, 2,6-dietil-4-[(7-hidroxi-3,7-dimetiloctil)oxi]-, Fenol, 2,5-dietil-4-[(3,7-dimetil-6-octenil)oxi]-, Fenol, 2,5-dietil-4-[(3,7-dimetil-6-octenil)oxi]-, (S)-Fenol, 2,5-dietil-4-[(3,7-dimetii-6-octenil)oxi]-, (R)-Fenol, 2,5-dietil-4-[(3,7-dimetil-6-octenil)tio]-, Fenol, 2,5-dietil-4-[(3,7-dimetil-6-octenil)tio]-, (S)-Fenol, 2,5-dietii-4-[(3,7-dimetil-6-octenil)tio]-, (R)-Fenol, 2,5-dietil-4-[(3,7-dimetiloctil)oxi]-, Fenol, 2,5-dietil-4-[(7-hidroxi-3,7-dimetiloctil)oxi]-, Fenol, 2,6-dipropil-4-[(3,7-dimetil-6-octenil)ox¡]-, Fenol, 2,6-dipropil-4-[(3,7-dimetil-6-octenil)ox¡]-, (S)-Fenol, 2.5-dipropil-4-[(3,7-dimetii-6-octenil)oxi]-, (R)-Fenol, 2.5-dípropil-4-[(3.7-dimetil-6-octenil)tio]-, Fenol, 2,6-diisopropil-4-[(3,7-dimeíil-6-octenil)tio]-, (S)- Fenol, 2,6-diisopropil-4-[(3,7-dimetiI-6-octenil)tio]-, (R)- Fenol, 2,5-diisopropil-4-[(3,7-dimetiloctil)oxi]-, Fenol, 2,5-diisopropil-4-[(7-hidroxi-3,7-dimetiloctil)oxi]-, Fenol, 2,3,6-trimetil-4- [(3,7-dimetil-6-octenil)oxi]-, Fenol, 2,3,6-trimetil-4- [(3,7-dimetil-6-octenil)oxi]-, (R)- Fenol 2,3,6-trimetil-4- [(3,7-dimetil-6-octenil)tio]- Fenol, 2,3,6-trimetil-4- [(3,7-dimetil-6-octenil)tio]-, (S)- Fenol, 2,3,6-trimetil-4- [(3,7-dimetil-6-octenil)tio]-, (R)- Fenol, 2,3,6-trimetil-4- [(3, 7-d i metil octil) oxi]-, Fenol, 2,3,6-trimetil-4- [(7-hidroxi-3,7-dimetiloctil)oxi]-, Fenol, 2,3,5-trimetil-4- [(3,7-dimetil-6-octenil)oxi]-, Fenol 2,3,5-trimetil-4- [(3,7-dimetil-6-octenil)oxi]-, (R)- Fenol 2,3,5-trimetil-4- [(3,7-dimetil-6-octenil)tio]- Fenol, 2,3,5-trimetil-4 [(3,7-dimetil-6-octenil)tio]-, (S)- Fenol 2,3,5-trimetil-4 [(3,7-dimetil-6-octenil)tio], (R)- Fenol 2,3,5-trimetíl-4- [(3,7-dimetiIoctil)oxi]-, Fenol 2,3,5-trimetil-4- [(7-hidroxi-3,7-dimetiloctil)oxi]-, Fenol 2,5-bis(1,1-dime tiletil)-4-[(3-metil-2-butenil)tio]-, Fenol 2-(1 ,1-dimetiletil )-4-[(3-metil-2-butenil)tiol], Fenol 2,6-bis(1,1-dime tiletil)-4-[(3-metilbutil)oxi], Fenol 2,5-bis(1 ,1-dime t¡letil)-4-([(3-metilbutil)ox¡]-, Fenol 2.6-bis(1 ,1-dime tiletil)-4-[(3-hidroxi-3-metibutil)oxi]- Acido acético, 2,6-bis(1 ,1-dimetiletil)-4-[(3,7-dimetii-6-octenil)oxi]fenil éster.

Acido acético, 2,6-bis(1 ,1-dimetiletil)-4-[(3,7-dimetil-6-octenil)oxi]fenil éster, ( ?)- Acido acético, 2,6-bis(1 ,1-dimetiletil)-4-[(3,7-dimetil-6-octenil)tio]fenil éster, Acido acético, 2,6-bis(1 ,1-dimetiletil)-4-[(3,7-dimetil-6-octenil)tio]fenil éster, (S)- Acido acético, 2-(1 ,1-dimetiIetil)-4-[(3,7-dimetil-6-octenil)tio]fenil éster, (R)- Acido acético, 2,5-bis(1 ,1-dimetilet¡l)-4-[(3,7-dimetiloctil)oxi]fenil éster, Acido acético, 2,3,6-trimetil-4-[(7-hidroxi-3,7-dimetiloctiI)oxi]fenil éster, Acido propiónico, 2,6-bis(1 ,1-dimetiletil)-4-[(3,7-dimetil-6-octenil)oxi]fenil éster, Acido propiónico, 2,6-bis(1 ,1-dimetiletil)-4-[(3,7-dimetil-6-octenil)oxi]fenil éster, (R)-Acido propiónico, 2,6-bis(1,1-dimetiletil)-4-[(3,7-dimetil-6-octenil)tio]fenil éster, Acido propiónico, 2,6-bis(1 ,1-dimetiIetil)-4-[(3,7-dimetil-6-octenil)tio]fenil éster, (S)- Acido propiónico, 2-(1 ,1-dimetiletil)-4-[(3,7-dimetil-6-octenil)tio]fenil éster, (R)- Acido propiónico, 2,5-bis(1 ,1-dimetiletil)-4-[(3,7-dimetiloctil)oxi]fenil éster, Acido butírico, 2,3,6-trimetil-4-[(7-hidroxi-3,7-dimetiloctil)oxi]fenil éster, Acido butírico, 2,6-bis(1 ,1-dimetiletil)-4-[(3,7-dimetiI-6-octenil)oxi]fenil éster.

Acido butírico, 2,6-bis(1 ,1-dimetiIetil)-4-[(3,7-dimetil-6-octenil)oxi]fenil éster, (R)- Acido butírico, 2,5-bis(1 ,1-dimetiletil)-4-[(3,7-dimetil-6-octenil)tio]fenil éster, Acido butanoico, 2,6-bis(1 ,1-dimetiletil)-4-[(3,7-dimetil-6-octenil)tio]fenil éster, (S)- Acido butanoico, 2-(1 ,1-d¡metiletil)-4-[(3,7-dimetil-6-octenil)tio]fenil éster, (R)- Acido butanoico, 2,5-bis(1 ,1 -dimetiletil)-4-[(3,7-dimetiloct?l)oxi]fenii éster, Acido butanoico, 2,3,6-trimetil-4-[(7-hidroxi-3,7-dimetiloctil)oxi]fenil éster.

Un esquema sintético general para preparar compuestos de fórmula (1), en donde Z es metileno, se expone en el Esquema B, en donde todos los substituyentes, a menos que se indique de otra manera, son como se definió previamente.

ESQU EMA B paso a l) Mg le Hal - cloro, bromo o yodo Id En general, un fenol de estructura 1 c puede preparase de acuerdo al Esq uema B en un proceso de dos pasos. En el paso a, el apropiado hal oalcano o haloalqueno de estructura 3 se hace reaccionar con metal de magnesio en un solvente aprótico adecuado, tal como etil éter, con el fin de formar la sal de haluro de mag nesio. La sal de haluro de magnesio (reactivo de Grignard) se hace reaccionar entonces con el apropiado alquil-4-hidroxi-benzaldehído de estructura 4 (o un derivado adecuadamente protegido) para dar el alcohol de estructura 5. En el paso b, el alcohol de estructura 5 puede reducirse al fenol deseado de estructura 1 b mediante una variedad de técnicas y procedimientos de reducción que son bien conocidos y apreciados en la técnica. Por ejemplo, el alcohol de estructura 5 puede reducirse por medio de una reducción de Birch al reaccionar con sodio en amoniaco l íquido. Un fenol éster de estructura 1 d puede prepararse al acilar un fenol de estructura 1 c de acuerdo a técnicas de acilación estándares, como se describió previamente en el Esquema A. Los materiales de inicio para usarse en los procedimientos sintéticos generales señalados en el Esquema B están fácilmente disponibles o pueden prepararse fácilmente de acuerdo a técnicas y procedimientos estándares. Donde fueron necesarios para prevenir reacciones laterales no deseadas, puede bloquearse la funcionalidad 1 -fenol del alquil-4-hidroxi-benzaldeh ído de estructura 4 en el Esquema B antes de la reacción de Grig nard con un agente bloqueador de fenol estándar, como se describió previamente en el Esquema A. El sig uiente ejemplo presenta una síntesis típica como se describe en el Esquema B. Se entiende que este ejemplo solo es ilustrativo y no pretende limitar el alcance de la presente invención en ninguna manera.

EJEMPLO 21 Fenol, 2.3,6-trimetil-4-(4.8-dimetil-7-nonenil)-. (R)- Paso a: Mezclar virutas de magnesio (240 mg , 1 0 mmol) y etil éter anhidro bajo una atmósfera inerte. Adicionar una solución de bromuro de S-(+)-citronelilo (2.1 9 g, 10 mmol) en etil éter anhidro. Agitar hasta que el metal de magnesio se disuelva. Adicionar una solución de 2, 3, 5-trimetil-4-hidroxibenzaldehído (1 .7 g, 10 mmol) en etil éter anhidro. Agitar hasta que la reacción se complete. Enfriar la mezcla de reacción a 0°C y adicionar la solución de cloruro de amonio saturada. Separar la capa de éter, lavar con agua y secar (MgSO4) . Evaporar al intermediario apropiado de estructura 5 y purificar mediante cromatografía en gel de sílice.

Paso b: Mezclar metal de sodio (520 mg , 22.6 mmol) y amoniaco l íq uido (1 3 m i) . Adicionar a esta solución, mediante adición en forma de gotas, una sol ución del intermediario del Ejemplo 19, paso a (3.04 g , 1 0 mmol) en alcohol etílico (0.5 g) y etil éter (5 mi). Después de que desaparece el col or azul , adicionar con cu idado agua ( 1 3 mi) , extraer con etil éter, secar (MgSO4), y evaporar el solvente. Purificar el residuo mediante cromatografía en gel de sílice para producir el compuesto del título. De manera alternativa, los compuestos de fórmula (1 ) en donde Z es metileno, pueden prepararse de acuerdo al procedimiento expuesto en el Esquema C, en donde todos los substituyentes, a menos que se indique de otra manera, son como se describió previamente.

ESQUEMA C le Hal = cloro, bromo o yodo En general, un fenol de estructura 1 b puede prepararse al hacer reaccionar primero el apropiado haloalcano o haloalqueno de estructura 3 con metal de magnesio en un solvente aprótico adecuado, tal como etil éter, con el fin de formar la sal de haluro de magnesio. La sal de haluro de magnesio (Reactivo de Grignard) se hace reaccionar entonces con el apropiado alquil-4-hidroxi-bencilhaluro de estructura 6 (o un derivado adecuadamente protegido) para dar el fenol deseado de estructura 1 c. Un fenol éster de estructura 1 d puede prepararse al acilar un fenol de estructura 1 c de acuerdo a las técnicas de acilación estándares, como se describió previamente en el Esquema A. Los materiales de inicio a usar en los procedimientos sintéticos generales señalados en el Esquema C están fácilmente disponibles o pueden prepararse fácilmente de acuerdo a técnicas y procedimientos estándares. Por ejemplo, la preparación de 3,5-dimeti-4-acetox¡-bencilbromuro se describe en Tetrahedron 33, 3097-103 (1 977). El 3, 5-dimetil-4-acetoxi-bencilbromuro puede convertirse al material de inicio fenólico correspondiente mediante procedimientos hidrolítícos estándares.

Donde sea necesario prevenir reacciones laterales no deseadas, puede bloquearse la funcionalidad 1 -fenol del alquil-4-hidroxi-bencilhaluro de estructura 6 en el Esquema C antes de la reacción de Grignard con un ag ente bloqueador de fenol estándar, como se describió previamente en el Esquema A. Los siguiente ejemplos presentan la síntesis normal como se describe en el Esquem a C. Se entiende que estos ejemplos sólo son ilustrativos y no pretenden limitar el alcance de la presente invención en ninguna manera.

EJEMPLO 22 Fenol, 2,6-dietil-4-(4,8-dimetil-7-noneni0-, (R)- Mezclar virutas de magnesio (240 mg , 1 0 mmol) y etil éter anhidro bajo una atmósfera inerte. Adicionar una solución de bromuro de S-(+)-citronelilo (2.1 9 g, 1 0 mmol) en etil éter anhidro. Agitar hasta que el metal de magnesio se disuelve. Adicionar una solución de 4-bromometil-2,6-dietilfenol (2.43 g, 10 mmol) en etil éter anhidro y someter a reflujo la mezcla hasta que la reacción se complete. Vaciar sobre una mezcla de hielo/ácido clorhídrico y separar las capas. Lavar la capa etérea con agua, secar (MgSO ) y evaporar para dar el compuesto del título, el cual se purifica mediante cromatog rafía en gel de sílice.

EJEMPLO 23 Acido acético, 2, 6-dietil-4-r(4, 8-dimetil-7-nonenil)-, (R)- Agitar una mezcla del producto del Ejemplo 20 (6.05 g, 20 mmol), trietilamina (2.53 g, 25 mmol) en éter (150 mi) a temperatura ambiente. Adicionar cloruro de acetilo (1.96 g, 25 mmol) y agitar la mezcla durante la noche. Adicionar agua y éter y separar las capas. La evaporación de la capa orgánica da un aceite, el cual es destilado en un kugeirohr. La cromatografía en gel de sílice (cloroformo) da el compuesto del título.

Los siguientes compuestos pueden prepararse mediante procedimientos análogos a aquéllos descritos antes en los Ejemplos 21-23: Fenol, 2,6-bis(1 1 -dimetilet iill))-4-(4,8-dimetiI-7-nonenil)-, Fenol, 2,6-bis(1 1 -dimetilet iill))-4-(4,8-dimeti!-7-nonenii)-, (R)-, Fenol, 2,6-bis(1 1 -dimetilet iill))-4-(4,8-dimetiI-7-nonenil)-, (S)- Fenol, 2,6-bis(1 1 -dimetilet iill))-4-(4,8-dimetilnonil)-, Fenol, 2,6-bis(1 1 -dimetilet iill))-4-(4,8-dimetilnonil)-, (R)-, F Feennooll,, 22,,66--bbiiss((11 ,1 1- -ddiimmeettiilleett ¡iilll))-4-(4,8-dimetilnonil)-, (S)-Bencenoctanol, 3,5-bis(1 ,1-dimetiletil)-4-hidroxi-a,a,e-trimetil-, Bencenoctanol, 3,5-bis(1 ,1-dimetiletil)-4-hidroxi-a,a,e-trimetil-, (R)-Bencenoctanol, 3, 5-bis (1 ,1-dimetiletil)-4-hidroxi-a,a,e-tri metil-, (S)-, Fenol, 2, 5-bis (1 , 1 -di etil etil)-4-(4,8-d imeti l-7-nonenil)-, Fenol, 2.5-bis (1 ,1 -dimetiletil)-4-(4,8-dimetil-7-nonenil)-, (R)- Fenol, 2,5-bis(1 ,1-dimetiletiI)-4-(4,8-dimetil-7-nonenil)-, (S)-, Fenol, 2,5-bis(1 ,1-dimetiletil)-4-(4,8-dimetilnonil)-, Fenol, 2,5-bis(1 ,1 -dimetiletil)-4-(4,8-dimetilnonil)-, (R)-, Fenol, 2,5-bis(1 ,1-dimetiletil)-4-(4,8-dimetilnonil)-, (S)-, Bencenoctanol, 3,6-bis(1,1-dimetiletil)-4-hidroxi-a,a,e-trimetil-, Bencenoctanol, 3,6-bis(1,1-dimetiletil)-4-hidroxi-a,a,e-trimetil-, (R)-, Bencenoctanol, 3,6-bis(1 ,1-dimetiletil)-4-hidroxi-a,a,e-trimetil-, (S)-, Fenol, 2-(1 ,1-dimetiletil)-4-(4,8-dimetil-7-noneil)-, Fenol, 2-(1 ,1-dimet¡Ietil)-4-(4,8-dimetil-7-nonenil)-, (R)-, Fenol, 2-(1 ,1-dimetiletil)-4-(4,8-dimetil-7-noneil)-, (S)-, Fenol, 2-(1 ,1-dimetiletil)-4-(4,8-dimetílnonil)-, Fenol, 2-(1 ,1-dimetiletil)-4-(4,8-dimetilnonil)-, (R)-, Fenol, 2-(1 ,1-dimetiletil)-4-(4,8-dimetilnonil)-, (S)-, Bencenoctanol, 3-(1,1-dimetiletil)-4-hidroxi-a,a,e-trimetil-l Bencenoctanol, 3-(1,1-dimetiletil)-4-hidroxi-a,a,e-trimetil-, (R)-, Bencenoctanol, 3-(1,1-dimetiletil)-4-hidroxi-a,a,e-trimetil-, (S)-, Bencenoctanol, 4-(acetoxi)-3, 5-bis (1 ,1-dimetiletil)-a,a,e-trimetil-, Bencenoctanol, 4-(acetoxi)-3, 5-bis (1 , 1-d imeti leti I) -a,a,e-tri metil-, (R)-, Bencenoctanol, 4-(acetoxi)-3, 5-bis (1 , 1-d imeti letl I )-a,a,e-tri metil-, (S)-, Bencenoctanol, 4-(acetoxi)-3,5-bis(1 ,1 -d imeti leti l)-4-(4,8-d imeti I-7-nonenil)-, Bencenoctanol, 4-(acetoxi)-3,5-bis(1 ,1 -di metil etil )-4-(4,8-di metí I-7-nonenil)-, (R)-, Bencenoctanol, 4-(acetoxi-3, 5-bis (1 , 1-dimetiletil)-4-(4,8-dimetil-7-nonenil)-, (S)-.

Se entiende que los compuestos de fórmula (1 ) pueden existir en varias formas estereoisoméricas. Se pretende que todas las formas estereoisoméricas, las cuales son consistentes con las fórmulas estructurales anteriores, como se interpreta de acuerdo con convenciones estándares para expresar estructura estereoisomérica, están incluidas dentro del alcance de la presente invención. Los compuestos preferidos de fórmula (1 ) son aquéllos en los cuales Z es hidrógeno, acetílo o succinilo, de preferencia hidrógeno; R^ es metilo o butilo terciario; R2 y R3 son independientemente cada uno, metilo o butilo terciario; R es hidrógeno o metilo. Los compuestos más preferidos son: Fenol, 2,6-bis(1 , 1 -dimetiletil)-4-[(3,7-dimetil-6-octenil)oxi]-, (S)-, Fenol 2-(1 , 1 -d¡metiletil)-4-[(3,7-dimetil-6-octenil)ox¡]-, (S)-, Fenol 2-(1 , 1 -dimetiletil)-4-[(3,7-dimetil-6-octenil)tio]-, (S)-, Fenol 2,6-bis( 1 1 -dimetileti l)-4-[(3,7-dimetil-6-octenil)tio]-, Fenol 2,6-bis(1 1 -dimetileti l)-4-[(3,7-dimetiloctil)tio]-, Fenol 2,6-bis(1 1 -dimetileti l)-4-[(7-hidroxi-3,7-dimetiloctil)tio]-, Fenol 2,6-bis( 1 1 -dimetileti l)-4-[(3,7-dimetil-6-octenil)oxi]-, y Fenol 2, 5-bis(1 1 -dimetileti l)-4-[(3,7-dimetil-6-octenil)ox¡]-, (S)- Como se usa en la presente, el término "paciente" se refiere a un animal de sangre caliente o mam ífero, el cual está en necesidad de tratam iento para una enfermedad inflamatoria crónica, aterosclerosis, hipercolesterolemia , o el cual está en necesidad de inhibir la expresión inducida por citocina de molécula de adhesión de célula vascular-1 y/o molécula de adhesión intercelular-1 . Se entiende que los conejillos de Indias, perros, gatos, ratas, ratones, hámsters, conejos y primates, incluyendo humanos, son ejemplos de pacientes dentro del alcance del significado del término. La aterosclerosis es un estado de enfermedad caracterizado por el desarrollo y crecimiento de lesiones o placa aterosclerótícas. La identificación de aquellos pacientes que están en necesidad de tratamiento para aterosclerosis se encuentra dentro de la capacidad y conocimiento de alguien de habilidad ordinaria en la técnica. Por ejemplo, los individuos que están ya sea sufriendo de aterosclerosis clínicamente significativa, o quienes están en riesgo de desarrollar aterosclerosis clínicamente sig nificativa, son pacientes en necesidad de tratamiento para la aterosclerosis. Un médico clínico de habilidad ordinaria en la técnica puede determinar fácilmente, mediante el uso de pruebas clínicas, examinación física e historial médico/familiar, si un individuo es un paciente en necesidad de tratamiento para aterosclerosis. Una cantidad antiaterosclerótica efectiva de un compuesto de fórmula ( 1 ) es una cantidad, la cual es efectiva para inhibir el desarrollo o crecim iento de aterosclerosis en un paciente en necesidad del mismo. Como tal , se entiende que el tratamiento exitoso de un paciente para aterosclerosis incluye disminuir, interrumpir, detener o parar de manera efectiva , el desarrollo o crecimiento de la lesión o placa aterosclerótica, y no indica necesariamente una total eliminación de la aterosclerosis. Adem ás , aquéllos de habilidad ordinaria en la técnica entienden y aprecian que el tratamiento exitoso para la aterosclerosis puede incluir profilaxis para prevenir la formación de lesión o placa aterosclerótica. Se sabe que la peroxidación del lípido LDL, tal como las porciones de ácidos grasos insaturados de colesteril esteres de LDL y fosfolípidos facilita el depósito de colesterol en macrófagos, los cuales subsecuentemente se depositan en la pared del vaso y se transforman en células esponjosas. La identificación de aquellos pacientes, quienes están en necesidad de inhibición de peroxidación de lípido LDL se encuentra dentro de la capacidad y conocimiento de alg uien de habilidad ordinaria en la técnica. Por ejemplo, aquellos individuos que están en necesidad de tratamiento para aterosclerosis, como se definió antes en la presente, también son pacientes que están en necesidad de la inhibición de la peroxidación del lípido LDL. Una cantidad antioxidante efectiva de un compuesto de fórmula (1 ) es una cantidad la cual es efectiva para inhibir la peroxidación del lípido LDL en la sangre de un paciente. La hipercolesterolemia es un estado de enfermedad caracterizado por niveles de colesterol de suero o de colesterol de LDL, los cuales están elevados por una cantidad clínicamente sig nificativa sobre aquéllos considerados normales por aquéllos de habilidad ordinaria en la técnica. La identificación de esos pacientes, quienes están en necesidad de tratamiento por hipercolesterolemia, se encuentra dentro de la capacidad y conocimiento de alguien experto en la técnica. Por ejemplo, individuos que tienen niveles de colesterol de suero o niveles de colesterol LDL, como se determina mediante pruebas de laboratorio cl ínico, los cuales están su bstancial y crónicamente elevados sobre aquéllos considerados normales por aquéllos de habilidad ordinaria en la técnica, son pacientes en necesidad de tratamiento para hipercolesterolemia. A manera de ejemplo adicional, individuos que están en riesgo de desarrollar hipercolesterolemia también pueden ser pacientes en necesidad de tratamiento para hipercolesterolemia. Un médico clínico experto en la técnica puede identificar fácilmente, mediante el uso de pruebas clínicas, examinación física e historial médico/familiar, aquéllos pacientes que están sufriendo de hipercolesterolemia y aquéllos que están en riesgo de desarrollar hipercolesterolemia y de esta manera, determinar fácilmente si un individuo es un paciente en necesidad de hipercolesterolemia. El término "enfermedad inflamatoria crónica" se refiere a enfermedades o condiciones caracterizadas mediante inflamación persistente en la ausencia de un patógeno microbiano o irritante identificable. Las enfermedades inflamatorias para las cuales el tratamiento con un compuesto de fórmula ( 1 ) será particularmente útil incluyen: asma, inflamación crónica, artritis reumatoide, diabetes autoinmune, rechazo de transplante y angiogénesis de tumor. Una "cantidad terapéuticamente efectiva" de un compuesto de fórmula (1 ) es una cantidad la cual es efectiva, sobre la administración de dosis simple o m últiples al paciente, para proporcionar el alivio de síntomas asociados con enfermedades inflamatorias crónicas. U na "cantidad inhibidora de molécula de adhesión de célula vascular-1 y/o molécula de adhesión de cél ula intercelular-1 efectiva" de un compuesto de fórmula (1 ) es una cantidad , la cu al es efectiva, sobre administración de dosis simple o múltiple al paciente, para proporcionar alivio de síntomas asociados con condiciones mediadas por molécula de adhesión de célula vascular-1 y/o molécula de adhesión intercelular-1 . Como se usa en la presente, "alivio de síntomas" de una enfermedad inflamatoria crónica o condiciones mediadas de molécula de adhesión de célula vascular-1 se refiere a disminuir en severidad sobre lo esperado en la ausencia de tratamiento, y no indica necesariamente una eliminación total o cura de la enfermedad. También se pretende que el alivio de síntomas incluya la profilaxis. Para determinar la cantidad o dosis terapéuticamente efectiva, la cantidad o dosis de antioxidante efectiva, la cantidad o dosis que disminuye el colesterol del plasma, la cantidad o dosis antiaterosclerótica efectiva o la cantidad inhibidora efectiva de VCAM-1 y/o ICAM-1 de un compuesto de fórmula (1 ), el médico encargado considera un número de factores, incluyendo, pero no limitando a: la especie dei mamífero; su tamaño , edad y salud general ; la enfermedad específica involucrada; el grado de o complicación o la severidad de la enfermedad; la respuesta del paciente individual; el compuesto particular administrado; el modo de administración ; las características de biodisponibilidad de la preparación ad ministrada; el modo de administración; las características de biodisponibilidad de la preparación administrada; el modo de ad m inistración ; las características de biodisponibilidad de la preparación administrada; el régimen de dosis seleccionado; el uso de medicación co ncomitante; y otras circunstancias relevantes. Una cantidad terapéuticamente efectiva, una cantidad efectiva de antíoxidante , una cantidad que dismi nuye el colesterol del plasma, una cantidad antiaterosclerótica efectiva o una cantidad inhibidora efectiva de VCAM-1 y/o ICAM-1 de un compuesto de fórmula (1 ) variará generalmente de aproximadamente 1 miligramo por kilogramo de peso corporal por día (mg/kg/día) hasta aproximadamente 5 gramos por kilogramo de peso corporal por día (g/kg/día). Se prefiere una dosis diaria desde aproximadamente 1 mg/kg hasta aproximadamente 500 mg/kg . Los compuestos de esta invención son inhibidores de la expresión VCAM-1 y/o ICAM-1 . Se cree que los compuestos de esta invención ejercen su efecto inhibitorio a través de la inhibición de la sobre-regulación de VCAM- 1 y/o I CAM-1 por citocinas y evitan o proporcionan con ello el alivio de síntomas para enfermedades inflamatorias crónicas, incluyendo asma, inflamación crónica, artritis reumatoide, diabetes autoinmune y similares; aterosclerosis e hipercolesterolemia. Sin embargo, se entiende que la presente invención no está limitada por ninguna teoría particular o mecanismo propuesto para explicar su efectividad en una aplicación de uso final. Para efectuar el tratamiento de un paciente, puede administrarse un compuesto de fórmula (1 ) en cualquier forma o modo, el cual haga biodispon ible el compuesto en cantidades efectivas , incluyendo rutas orales y parenterales . Por ejemplo, el compuesto puede administrarse de manera oral , subcutánea, intramuscular, intravenosa, transdérmica, intranasal , rectal y sim il ares. Generalmente se prefiere la administración oral . Alg uien experto en la técnica de preparar formulaciones puede seleccionar fácilmente la forma adecuada y modo de administración depend ie ndo del estado de enfermedad a ser tratado, la etapa de la enfermedad y otras circunstancias relevantes. Remington's Pharmaceutical Sciences, 1 8a Edición, Mack Publishing Co. (1 990). Un compuesto de fórmula (1 ) puede administrarse en la forma de composiciones farmacéuticas o medicamentos, los cuales se hacen al combinar un compuesto de fórmula ( 1 ) con portadores o excipientes farmacéuticamente aceptables, cuya proporción y naturaleza se determinan mediante la ruta de administración elegida, y práctica farmacéutica estándar. Las composiciones farmacéuticas o medicamentos se preparan en una manera bien conocida en la técnica farmacéutica. El portador o excipiente puede ser un material sólido, semi-sólido o líquido, el cual puede servir como un veh ículo o medio para el ingrediente activo. Los portadores o excipientes adecuados son bien conocidos en la técnica. La composición farmacéutica pueden adaptarse para uso oral o parenteral y pueden administrarse al paciente en la forma de tabletas, cápsulas, supositorios, solución , suspensiones o similares. Las composiciones farmacéuticas pueden adm inistrarse oralmente, por ejem plo, con un diluyente inerte o con un portador comestible. Pueden estar encerradas en cápsulas de gelatina o ser comprimidas en tabletas.

Para el fin de la adm inistración terapéutica oral , puede incorporarse un compuesto de fórmula ( 1 ) con excipientes y usarse en la forma de tabletas, trociscos, cápsulas, el íxires, suspensiones, jarabes , obleas, gomas de mascar y similares. Estas preparaciones deben contener al menos 4% de un compuesto de fórmu la ( 1 ) , el ingrediente activo, pero pueden variarse ? depend iendo de la forma particular y pueden estar, convenientemente, entre 4% hasta aproximadamente 70% del peso de la unidad. La cantidad del ingrediente activo presente en composiciones es tal, que se obtendrá una forma de dosificación de unidad adecuada para la administración. Las tabletas, pildoras, cápsulas, trociscos y similares también pueden contener uno o más de los siguientes auxiliares: ligantes, tales como celulosa microcristalina, goma de tragacanto o gelatina; excipientes, tales como almidón o lactosa, agentes desintegrantes tales como, ácido alg ínico, Primogel, almidón de maíz y similares; lubricantes, tales como estearato de magnesio o Sterotex; abrillantadores, tales como dióxido de silicio coloidal; y pueden adicionarse agentes endulzantes, tales como, sacarosa o sacarina, o agentes saborizantes tales como, menta, salicilato de meti lo o saborizante de naranja. Cuando la forma de dosificación de unidad es una cápsula , puede contener, además de materiales del tipo anterior, un portador líquido, tal como polietilen glicol o un aceite graso. Otras formas de unidad de dosificación pueden contener otros diversos materiales, los cuales modifican la forma física de la unidad de dosificación, por ejem plo, como recubrimientos. De esta manera, las tabletas o pildoras pueden recubrirse con azúcar, laca, u otros agentes de recubri m iento entérico. U n jarabe puede contener, además del ingrediente activo, sacarosa como un agente end ulzante y ciertos conservadores, tinturas y colorantes, y sabores. Los materiales usados para preparar estas d iversas composiciones deben ser farmacéuticamente puros y no tóxicos en las cantidades usadas. Para el fin de la administración parenteral , u n com puesto de fórmula ( 1 ) puede incorporarse en una solución o suspen sió n . Estas preparaciones deben contener ai menos 0.1 % de un compuesto de la invención, pero pueden variarse para estar entre 0.1 y aproximadamente 50% del peso de la misma. La cantidad del ingrediente activo presente en tales composiciones es tal, que se obtendrá una dosificación adecuada. Las soluciones o suspensiones también pueden incluir uno o más de los sig uientes auxiliares, dependiendo de la solubilidad y otras propiedades de un compuesto de fórmula (1 ): diluyentes estériles, tales como, agua para inyección, solución salina, aceites fijos, polietilenglicoles , giicerina, propilenglicol u otros solventes sintéticos; agentes antibacterianos, tales como alcohol bencílico o metil parabeno; antioxidantes, tales como ácido ascórbico o bisulfito de sodio; agentes quelantes, tales como ácido etilen diaminotetraacético; amortiguadores tales como, acetatos, citratos o fosfatos y agentes para el ajuste de toxicidad tales como, cloruro de sodio o dextrosa. La preparación parenteral puede encerrarse en ampolletas, jeringas desechables o frascos de múltiples dosis hechos de vidrio o plástico.

EJ EMPLO 24 Porcentaje de inhibición de la expresión inducida por citocina de VCAM-1 e ICAM- 1 por antioxidantes fenólicos seleccionados en células aórticas de músculo suave humanas o células endoteliales de venas umbilicales humanas en proliferación Platinar células endoteliales de venas umbilicales humanas en proliferación (HUVEC) o células aórticas de m úscu lo suave humanas (HAS MC) de Clonetics (San Dieg o , CA) sobre placas de 96 cavidades en 1 00 µl de medio por cavidad a 20,000 células por cm2. Mantener los cultivos en medio de crecimiento (EGM o SMGM2, Clonetics, San Diego, CA) durante dos días antes de la adición de citocinas o medicamentos. Adicionar citocinas más o menos compuestos durante 20 a 24 horas antes del análisis para los niveles de moléculas de adhesión. Adicionar factor de necrosis de tumor (Genzyme, Cambridge, MA) a cultivos a 500-1000 unidades/ml para estimular la expresión de ICAM-1 . Adicionar interleucina-4 (GIBCO-BRL, Gaitherburg, MD) a cultivos a 100-200 pg/ml para estimular la expresión de VCAM-1 . (Hacer adiciones al transferir 1 00 µl de citocinas más compuestos diluidos serialmente en una placa de 96 cavidades separada en las placas conteniendo las células. No intercambiar el medio en los cultivos antes de la adición de los efectores) . Remover el medio de cultivo, y lavar las monocapas dos veces con solución salina amortiguada de Hanks (HBSS) a temperatura ambiente. Adicionar el anticuerpo primario (VCAM-1 anti-humana de Upstate Biotechnology, I nc. , Lake Placid , NY o ICAM-1 anti-humana de Im munotech, Inc. , Westbrook, ME) a cada cavidad (1 µg/ml en HBSS más 5% de suero de ternera recién nacida, G I BCO-BRL, Gaitersburg , MD) e incubar a 37°C durante 1 h. Lavar las cavidades dos veces con H BSS, entonces adicionar 1 00 µl de una dilución 1 /1 000 de IgG anti-ratón de cabra conjugada con peroxidasa de rábano picante (BíoRad, Hercules, CA) a cada cavidad . Parar la reacción después de que se desarrolla el color azu l mediante la adición de 50 µl de H2S04 1 N . Medir la absorbancia a 450 nm con un lector de placa.

La Tabla 1 resume la capacidad de los compuestos seleccionados de esta invención para inhibir VCAM-1 e ICAM-1 usando células aórticas de músculo suave humanas (HASMC) . En estos experimentos, las células se coincubaron con interleucina-4 para estimular la expresión de VCAM-1 y con factor-alfa de necrosis de tumor para estimular la expresión de ICAM-1 .

TABLA 1 I nhibición de VCAM-1 e ICAM-1 en células aórticas de músculo suave humanas (HASMC) Comp. No. VCAM- 1 ICAM-1 (MDL No.) (% inh. 50 µM)* (% inh. 50 µM)@ 1 03,960 33.9+6 0+1 2 1 04, 1 91 42.9±7 22±0 1 04, 535 26.4+14 (1 0+5) * Promedio de tres corridas @ Promedio de dos corridas, los números en paréntesis representan valores negativos La Tabla 2 resume la capacidad de varios compuestos de esta invención para inhibir de manera selectiva VCAM- 1 o para inhibir tanto VCAM-1 como ICAM-1 , usando células endotelíales de venas umbilicales human as en proliferación (HUVEC) . En estos experimentos, las células fueron coincubados con factor-alfa de necrosis de tumor junto con los compuestos indicados alrededor de 20 a 24 h antes de ensayar la expresión de moléculas de adhesión de superficie celular.

TABLA 2 I nhibición de VCAM-1 y/o I CAM-1 en células endoteliales de venas umbilicales humanas (HUVEC) Comp. No. VCAM- 1 ICAM-1 (MDL No.) (% inh. 50 µM) * (% inh. 50 µM)@ 1 03, 960 25.7 9.5 104, 191 34.3 70.5 1 04,535 (2.5) 1 1 .5 * Promedio de tres corridas, los números en paréntesis representan valores negativos @ Promedio de dos corridas La actividad in vivo de estos compuestos también pueden valorarse en otros modelos de inflamación predichos que involucran niveles de VCAM- 1 elevados. U no de tales modelos para enfermedades respiratorias, tales como asma, es un modelo sensibilizado a la ovalbúmina. Kung, T.T. et al. , I nt. Arch . Allergy I mmunol. 1 05, 83-90 (1 994) . Este modelo de inflamación pulmonar es mediada por Ig E e involucra eosinofilia (como lo hace el humano asmático) . El fluido de lavado alveolar bronq uial (BAL) obtenido de los anímales experimentales puede valorarse por un número de parámetros, incluyendo la expresión de moléculas de adhesión solubles y acu m u lación de leucocitos. La expresión de moléculas de adhesión puede valorarse mediante inmunohistoqu ímica dentro de los tejidos, especialmente el pulmón , de animales experimentales. El efecto de los compuestos reclamados debe ser suprimir la sobre-regulación de la expresión de VCAM-1 e inhibir la acumulación de eosinófilos en el fluido BAL. Los inhibidores podrían probarse en un modelo de rata de artritis auxiliar, el cual se ha mostrado previamente que responde a anticuerpos monoclonales de anti-ICAM-1 . ligo, Y. et al. , J . Immunol. 147, 41 67-41 71 (1 991 ) . En este modelo, la expresión de moléculas de adhesión debería ser valorada en los miembros (articulaciones) de ios animales experimentales. Para diabetes autoinmune, uno podría probar los compuestos por su capacidad de retrasar el inicio o prevenir la transferencia adoptiva de la enfermedad en el modelo de ratón NOD. Heinke, E.W. et al . , Diabetes 42, 1 721 -1730 (1 993) ; Barón, J . L. et al. , i. Clin. Invest. 93, 1700-1708 (1994). Adicionalmente, uno puede monitorear el nivel de expresión de VCAM-1 en los tejidos (por ejemplo, páncreas), así como monitorear el desarrollo de diabetes en el animal experimental. El potencial terapéutico para rechazo de transplantes puede valorarse al monitorear la supervivencia de aloinjertos cardiacos (corazones de Balb/c transplantados en receptores C3H/He). Isobe, M. et al. , J . I mmunol. 1 53, 581 0-581 8 (1 994). La administración in vivo de anticuerpos monoclonales anti-VCAM-1 y anti-VLA-4 induce la inmunosupresión de aloinjertos cardiacos y antígenos solubles en este modelo de ratón. Los efectos de los compuestos en la metástasis de tumor y angiogénesis puede evaluarse en un n úmero de modelos. Estos pueden incluir los modelos de melanoma M24met (humano) y B 1 6 (m urino) para metástasis experimental . Fidler, I .J . , Cáncer Res. 35. 21 8-224 (1 975) ; Meuller, B. M. et al. , Cáncer Res. 51 . 21 93-21 98. La actividad de los compuestos puede valorarse por su efecto sobre el número de metástasis de pulmón que se desarrollan, así como su efecto sobre la expresión de VCAM-1 en el pulmón, como se describió antes para el modelo respiratorio de ratón. Un modelo para evaluar compuestos anti-angiogénicos los cuales pueden usarse para probar los compuestos, involucra monitorear la respuesta vascular a una mezcla de factores angiogénicos mezclados con proteínas de membrana de basamento inyectadas subcutáneamente en ratones. Passsaniti, A. et al. , Lab. Invest. 67, 519-528 (1992). La angiogénesis se registra mediante el número de recipientes reclutados en el "matrigel" y por el contenido de hemoglobina de los geles. La expresión de moléculas de adhesión y acumu lación de leucocitos puede determinarse mediante métodos inmunohistoquímicos como en todos los ejemplos anteriores.

EJEMPLO 25 Efectos hipocolesterolémicos y antioxidantes de los compuestos de fórmula (1 ) en conejos blancos de Nueva Zelanda, hembras, a I i mentados co n colesterol A. Protocolo experimental Realizar cinco experimentos independientes en la siguiente manera. Cada estudio tiene un grupo de control y 1 -5 g rupos tratados con el compuesto MDL (N = 5 por grupo). Alimentar blancos de Nueva Zelanda, hem bras (H azelton , -2.0-2.3 kg) con alimento para conejo enriq uecida con 0.2% de colesterol (Purina #5322) con o sin 0.4% de compuesto MDL. Solubilizar los compuestos MDL en etanol 1 00% . Rociar el alimento con las mezclas de MDL y permitir que se sequen durante la noche en una capucha de humo químico. Rociar el alimento de control con etanol. Alimentar a los conejos con 1 00 gramos de alimento por día durante 7 días (0.6% MDL 103,491 fueron alimentados durante 14 días); tener agua disponible ad libitum . En el día 7, hacer sangrar a los conejos (-2 mi) (con ayuno durante la noche) de una vena marginal de la oreja. Someter a eutanasia a los conejos mediante una sobredosis de dióxido de carbono. Registrar el peso corporal total y del hígado en gramos. Registrar el alimento como gramos»d ía"1«conejo"1. Usar alícuotas de suero fresco para químicas clínicas, determinación de colesterol de lipoproteína, substancias reactivas de ácido tiobarbitúrico (TBARS) y concentraciones de compuesto y metabolitos en el suero. Congelar los hígados (alícuotas de -5 g ramos) a -20°C para determinación de concentración de compuesto y metabolitos en un momento posterior.

B. Químicas clínicas Permitir que la sangre se coagule a temperatura ambiente d urante 30 minutos. Obtener suero después de la centrifugación durante 10 min a 5°C a 3000 rpm en una centrífuga Beckman GPKR con un rotor GH . Analizar mediante un autoanalizador COBAS MI RA (Roche Diagnostics) usando reactivos diag nósticos de Roche para colesterol total (CHOL, conjunto # 44334) y triglicéridos (TG , conjunto # 441 20) . Calcular el colesterol y los trig licéridos como mg/dl.

C. Ensayo de TBARS TBARS son una indicación cualitativa de la oxidación de los lípidos en una muestra. En este ensayo inician la oxidación de los l ípidos del suero con CuSO4, resultando en la formación de aldehidos, tales como, malondialdeh ído (MDA) . Sobre la incubación con ácido tiobarbitúrico, la absorbancia de los aldehidos puede detectarse a 530-540 nm. Los valores de TBARS, los cuales fueron menores que los valores de suero de control, incican la capacidad relativa de un compuesto para inhibir la oxidación. Medir como sigue: mezclar 50 µl de suero con 50 µl de solución salina al 0.9%o y 400 µl de una solución de CuSO4 5 mM e incubar a 37°C durante 5 h. Parar las reacciones mediante la adición de 1 .0 mi de ácido tricloroacético al 20%. Adicionar entonces 1 .0 mi de ácido tiobarbitúrico al 0.67%o en hidróxido de sodio 0.05 N , mezclar e incubar las muestras durante 30 min a 90°C. Centrifugar las muestras brevemente para peletizar el material sin disolver, y transferir los sobrenadantes a una placa de microtítulo de 96 cavidades. Medir las absorbancias a 540 nm, usando un lector de microplaca Biotek modelo EL33. Los nmoles de MDA producidos se calcula a partir de una curva estándar de 0 a 1 0 nmoles de M DA preparada a partir de malonaldeh ído bis(dimetilacetal) . Comparar las muestras de suero de conejos tratados con muestras de suero de conejos de control que no recibieron ning ún compuesto M D L.

D . Cuantificación por HPLC de la concentración de compuesto y metabolitos en suero e h ígado Determinar las concentraciones de suero e hígado de los compuestos padres y los metabolitos, bisfenol y difenoquinona, mediante HPLC de fase inversa usando un sistema Waters 990 Powerline. Homogeneizar los hígados (1 gramo) con 5.0 mi de PBS, pH 7.4, usando un homogeneizador de tejido Polytron en ajuste 5 durante 20-30 segundos. Extraer homogeneizados de suero o hígado como sigue: adicionar 100 µl ya sea de suero u homogeneizado a 2.0 mi de dietil étepetanol (3: 1 ) al tiempo que se agita el tubo como torbellino. Tapar los tubos de muestra y centrifugar durante 10 min a 5°C a 3500 rpm en una centrífuga Beckman GPKR con un rotor GH 3.7. Transferir los sobrenadantes a tubos limpios y secar bajo N2. Reconstituir las muestras con 200 µl de acetonitrilo:hexano:acetato de amonio 0.1 M (90:6.5: 3.5, en vol.). I nyectar 1 00 µl sobre una colum na de Waters Deltapak C1 8-300Á, y levigar con una fase móvil de 83% de acetonitrilo: 1 7% de agua a una velocidad de flujo de 1 .5 ml/min. Registrar las absorbancia a las longitudes de onda de 240, 254 y 420 nm. Calcular las concentraciones del compuesto a partir de cantidades conocidas de compuestos padres auténticos después de la corrección por recuperación. Calcular las concentraciones como µg/ml de suero y µg/g de hígado .

E. Separación y cuantificación por HPLC de n iveles de colesterol de subfracción de lipoproteínas Separar las fracciones de lipoproteínas (lipoproteína de muy baja densid ad . VLDL, lipoproteína de baja densidad , LDL y li poproteína de alta densidad . H DL) en u na columna de Sepharose 6H R (1 x 30 cm, Pharmacia) unida a un sistema de HPLC Waters Powerline. Inyectar suero (50 µl) sobre la columna y levigar con solución salina amortiguada con fosfato, pH 7.4, a una velocidad de flujo de 0.5 ml/min . Adicionar el reactivo de colesterol (Roche Diagnostics, conjunto # 44334, diluido con 20 mi de agua y entonces con 20 mi de solución salina al 0.9%) a 0.2 ml/min al levigante post columna e incubar en una bobina de reacción PFTE Kratos tejida (Applied Biosystems) a 37°C durante 5 min. Medir la absorbancia a 500 nm . Las subfracciones de lipoproteínas se cuantifican como sigue: (colesterol de suero total) x (% de área bajo la curva para cada subfracción) Las Tablas 3 y 4 a continuación, presentan los datos resumidos de los experimentos individuales de este procedimiento de prueba.

TABLA 3 Efectos hipocolesterolémicos y antixidantes de los compuestos de fórmula (1 ) en conejos blancos de Nueva Zelanda, hembras, alimentados con colesterol como un porcentaje de control MDL# % Ali- Peso Iw/bw Col total LDL HDL TRIG TBARS dieta mentó corp. 1 03 , 294 0.4 1 03% 1 00% 1 05% 94% 82% 1 92% 1 97% 35% N = 5 conejos/grupo; con ayuno durante la noche Los conejos fueron alimentados por 7 días % d ieta = (peso de compuesto MDL/peso de alimento) x (1 00) Los datos en la Tabla 3 se normalizaron como sigue: % Control = (Media, grupo tratado/Media, gru po de control) x (100) Alimento = gramos comidos por d ía por conejo Peso corp. = Peso corporal en gramos LW/BW = (peso de hígado/peso corporal en gramos) COL = colesterol total mg/dl LDL = colesterol de lipoproteína de baja densidad mg/dl H DL = colesterol de lipoprotína de alta densidad mg/dl TRIG = triglicéridos, mg/dl TBARS = substancias reactivas de ácido tiobarbitú rico, expresadas como nmol de MDA TABLA 4 Concentración de medicamento y metabolitos en suero e hígado de conejo MDL# % dieta Suero Hígado Padre Bis Quin Padre Bis Quin 1 03, 294 0.4 1 9.8 0 0 77 0 0 N = 5 conejos/grupo; con ayuno durante la noche Los conejos se alimentaron por 7 días % dieta = (peso de compuesto MDL/peso de alimento) x (100) Los datos en la Tabla 4 se presentan como Medias (N = 5) y no han sido normalizados para valores de control. Suero Padre = concentración de compuesto padre como µg/ml de suero Suero Bis = concentración de bisfenol como µg/m l d e suero Suero Qui n = concentración de dífenoquinona com o µg/m l de suero H ígado Padre = concentración de compuesto padre como µg/g de hígado H ígado Bis = concentración de bisfenol como µg/g de h ígado H ígado Quin = concentración de difenoquinona como µg/g de hígado EJEMPLO 26 Medición de actividad de antioxidante y biodisponibilidad de compuestos de fórmula (1 ) mediante clasificación in vivo en ratas Sprague-Dawley macho A. Protocolo experimental Un experimento normal consiste de 4-6 grupos de ratas (N = 5 por grupo) siendo 1 grupo un control el cual no recibe ningún compuesto MDL y siendo tratados los demás grupos con 0.3% de compuesto MDL. Algunos de los com puestos son , ya sea repetidos a 0.3% o evaluados nuevamente a la dosis menor de 0. 1 %. A ratas Sprague-Dawley, macho, caseras, 50-1 00 g , (Harían Laboratories, Indianapolis, I N) en grupos de 5, se les proporcionó agua ad libitum y alimento para roedor de Purina (#5002) con o sin compuesto M DL como una mezcla dietética durante 4 días. Hacer las mezclas dietéticas (0.3%) al mezclar 1 .2 gramos de un com puesto MDL con 400 g ramos de al imento para roedor de Purina (#5002) . Mezclar el compuesto M DL con aproximadamente 50 gramos de alimento usando un mortero. Esto se adiciona al resto del alimento y se mezcla durante 3 horas en una mezcladora rotatoria. En la mañana del d ía 5, anestesiar a las ratas sin ayuno con dióxido de carbono, y recolectar sangre mediante pu nción cardiaca. Sacrificar a las ratas mediante dislocación cervical.

Registrar pesos corporales y pesos de hígado en gramos. Registrar el consumo de alimento como gramos»d ía"1«rata"1. Las muertes se registran como mortalidad. Usar alícuotas de suero fresco para químicas clínicas, mediciones de substancias reactivas de ácido tiobarbitúrico (TBARS) y dienos conjugados. Congelar al ícuotas de suero (-0.5 mi) e hígado completas a -20°C para la determinación de la concentración de com puesto y metabolitos en un momento posterior.

B. Qu ímicas clínicas Permitir que la sangre se coagule a temperatura ambiente durante 30 minutos. Obtener suero después de la centrifugación durante 1 0 min a 4°C a 3000 rpm en una centrífuga Beckman J-6M/E con un rotor JS-4.2 Analizar el suero fresco mediante un autoanalizador COBAS MI RA S (Roche Diagnostics) usando reactivos diagnósticos de Roche para las siguientes mediciones de química clínica: fosfatasa alcalina (ALP, conjunto # 44553) , alanina transaminasa (ALT, conjunto # 42375) , aspartato am inotransferasa (AST, conjunto # 42381 ), colesterol total (CHOL, conjunto # 44334) , trig licéridos (TG , conjunto # 441 20) , y glucosa (GLU , conjunto # 44558). Calcular ALP, ALT, y AST como unidades/l. Calcular colesterol, triglicéridos y glucosa como mg/dl.

C. Cuantificación por H PLC de compuesto de concentración de metabolitos en suero e h ígado Determinar las concentraciones de suero e h ígado del compuesto pad re y los metabol itos , bisfenol y difenoquinona , mediante HPLC de fase inversa usando un sistema Waters 990 Powerline. Homogeneizar hígados (muestras de 1 gramo) con 5.0 mi de PBS, pH 7.4, usando un homogeneízador de tejido Polytron en ajuste 5 durante 20-30 segundos. Extraer homogeneizados de suero o h ígado como sigue: adicionar 100 µl ya sea de suero u homogeneizado a 2.0 mi de dietil étepetanol (3: 1 ) al tiempo que se agita el tubo como torbellino. Tapar los tubos de muestra y centrifugar durante 10 min a 5°C a 3500 rpm en una centrífuga Beckman GPKR con un rotor GH 3.7. Transferir los sobrenadantes a tubos limpios y secar bajo N2. Reconstituir las muestras con 200 µl de acetonitrilo: hexano:acetato de amonio 0.1 M (90:6.5:3.5, en vol.). Entonces, inyectar 1 00 µl sobre una columna Waters Deltapak C1 8-300 A, y levigar con una fase móvil de 83% acetonitr¡lo: 1 7% agua a una velocidad de flujo de 1 .5 ml/min . Registrar las absorbancias a las longitudes de onda de 240, 254 y 420 nm. Calcular las concentraciones de los compuestos a partir de cantidades conocidas de compuestos padres auténticos después de la corrección por recuperación . Calcular las concentraciones como µg/ml. Calcular las concentraciones como µg/ml de suero y µg/g de hígado.

D. Ensayo de substancias reactivas de ácido tiobarbitúrico (TBARS) En este ensayo, la oxidación de los lípidos del suero se inicia con CuSO4, resultando en la formación de aldehidos, tales como malond ialdeh ído (MDA) . Sobre la incubación con ácido tiobarbitúrico, la absorbancia de los aldeh idos puede detectarse a 530-540 nm . Como se declara en el ejemplo previo. Los valores de TBARS, los cuales son menores que los valores de suero de control indican la capacidad relativa de un compuesto de prueba para inhibir la oxidación de l ípidos en una muestra. Medir TBARS como sigue: mezclar 100 µl de suero con 400 µl de una solución de CuSO4 5 mmol e incubar a 37°C durante 3 h. Parar las reacciones mediante la adición de 1 .0 mi de ácido tricloroacético al 20%. Entonces adicionar 1 .0 mi de ácido tiobarbitúrico al 0.67% en hidróxido de sodio 0.05 N, mezclar e incubar las muestras durante 30 min a 90°C. Centrifugar las muestras brevemente para peletizar el material sin disolver, y transferir los sobrenadantes a una placa de microtítulo de 96 cavidades. Medir las absorbancias a 540 nm usando un lector de microplaca Biotek modelo EL31 1 . Los nmoles de MDA producidos de M DA se calculan a partir de una curva estándar de 0 a 1 0 nmoles de MDA preparada a partir de malonaldehído bis(dimetilacetal). Las muestras de suero de ratas tratadas se comparan con muestras de suero para ratas de control que no recibieron ningún compuesto MDL.

E. Determinación de dieno conjugado La fase de retardación de dienos conjugados es otro indicador de la oxidación de lípidos. Los l ípidos expuestos para formar Cu++ dienos conjugados que absorben luz ultravioleta en el rango de 230 a 235 nm . La fase de retardación de formación de dieno da una indicación de la cantidad de oxidación de los lípidos. U na fase de retardación mayor que las muestras de control indica la inhibición de la oxidación . Determinar la fase de retardación de dienos conjugados usando u n espectrofotómetro Varian DMS200 (ajustado con u na temperatura constante , cam biador de muestras de 5 tubos) a 30°C. Adicionar veinte (20) µl de suero combinado de tubos conteniendo 3.0 mi de solución salina amortiguada con fosfato, pH 7.5, y mezclar. Medir la absorbencias de todos los tubos y ajustar a la línea de base de instrumento a cero, usando la muestra de absorción más baja. A continuación, adicionar 100 µl de CuSO 1 mmol y mezclar inmediatamente. Registrar la absorbancia de cada tubo en intervalos de 2 min durante un periodo de 840 min. Capturar los datos y transferir a una hoja de cálculo de Microsoft EXCEL®, donde las curvas son suavizadas y se obtienen diferenciales. Determinar tiempos de retardación matemáticamente como minutos. Las muestras de suero combinado (N = 5); los datos presentados son los valores medios de 2 determinaciones. Comparar las muestras de suero de ratas tratadas con muestras de suero de ratas de control que no recibieron ningún compuesto de MDL. Las Tablas 5, 6 y 7 a continuación presentan datos resumidos de los experimentos individuales de este procedimiento de prueba. La Tabla 5 presenta mediciones de las químicas de suero en las ratas macho Sprag ue-Dawley, la Tabla 6 presenta los parámetros animales y la Tabla 7 proporciona las concentraciones de medicamento o metabolitos tanto en el suero como el hígado.

TABLA 5 Efectos antioxidantes de compuestos de fórmula (1 ) en ratas macho Sprague-Dawley como un porcentaje de control MDL no. % ALP AST ALT COL GLUC TRIG TBARS DIENO dieta CONJ. (min) 103,294 0.3 124% 88% 132% 102% 103% 56% 18% ND* 103,649 0.3 74% 82% 119% 89% 101% 143% 29% 375 103,714 0.3 111 % 104% 120% 90% 95% 122% 21% ND 103,960 0.3 125% 102% 117% 113% 110% 80% 24% 363 104,102 0.3 101% 82% 114% 100% 98% 127% 71% 229 104,191 0.3 81 % 146% 149% 109% 106% 112% 20% 708 104,487 0.3 137% 124% 129% 127% 92% 108% 87% ND 104,535 0.3 151% 94% 108% 103% 112% 60% 11% ND 105,411 0.3 76% 87% 122% 105% 96% 100% 29% 400 107,059 0.3 118% 140% 116% 89% 96% 35% 78% 201 *N D = no determinado N = 5 ratas por grupo % de dieta = (peso de compuesto M DL/peso de alimento) x (1 00) Dieno conj. = fase de retardación de dieno conjugado en minutos (Media de 2 determinaciones de muestras combinadas, N = 5) Los datos en la Tabla 5 , excepto por dienos conjugado y porcentajes de dieta , h an sido normalizados como sigue: % co ntrol = (med ia, g rupo tratado/media, grupo de control) x (1 00) ALP = fosfatasa alcali na , U/ml AST = aspartato aminotransferasa, U/ml ALT = alanina aminotransferasa, U/ml COL = colesterol total, mg/dl TG = triglicéridos, mg/dl GLU = glucosa, mg/dl TBARS = substancias reactivas de ácido tiobarbitúrico, expresadas como nmoles de MDA TABLA 6 Parámetros de animales como un porcentaje de control MDL No. % dieta alimento Peso corp. Iw/bw Mortalidad 103,294 0.3 108% 101% 129% 0% 103,649 0.3 95% 94% 111 % 0% 103,714 0.3 102% 103% 121% 0% 103,960 0.3 105% 100% 130% 0% 104,102 0.3 92% 97% 121% 0% 104,191 0.3 76% 92% 126% 0% 104,487 0.3 90% 95% 150% 0% 104,535 0.3 95% 102% 119% 0% 105,411 0.3 95% 101% 114% 0% 107,059 0.3 95% 95% 107% 0% N = 5 ratas/grupo % dieta = (peso de compuesto MDL/peso de alimento) x (100 = Los datos en la Tabla 6 han sido normalizados de acuerdo a la fórmula presentada en la Tabla 5.

Alimento = gramos comidos por día por rata Peso corp. = peso corporal en gramos LW/BW = (peso de hígado/peso corporal en gramos) Mortalidad = muertes por grupo TABLA 7 Concentración de medicamento y metabolitos en suero e hígado de rata MDL % dieta Suero Hígado No. Padre Bis Quin Padre Bis Quin 103,294 0.3 21.7 0 0 64.6 0 0 103,649 0.3 1.4 0 0 0 0 0 103,714 0.3 2.7 0 0 0 0 0 103,960 0.3 8.7 0 0 47.3 39.4 0 104,102 0.3 32.8 0 0 481 0 0 104,191 0.3 6.9 0 0 16.1 0 0 104,487 0.3 4.1 0 0 3.8 11.5 0 104,535 0.3 16.3 0 0 60.3 0 0 105,411 0.3 1.1 0 0 0 0 0 107,059 0.3 0 0 0 0 0 0 Los datos en la Tabla 7 se presentan como Promedios (N = 5) y no han sido normalizados a valores de control. Suero Padre = concentración de compuesto padre como µg/ml de suero Suero Bis = concentración de bisfenol como µg/ml de suero Suero Quin = concentración de difenoquinona como µg/ml de suero H ígado Padre = concentración de compuesto padre como µg/g de hígado Hígado Bis = concentración de bisfenol como µg/g de hígado Hígado Quin = concentración de difenoquinona como µg/g de hígado EJEMPLO 27 Efectos antiateroscleróticos de compuestos de fórmula (1 ) en conejos blancos de Nueva Zelanda, hembras, alimentados con colesterol A. Protocolo experimental Conducir cuatro experimentos independientes. Cada experimento tiene un grupo de control y 1 -5 grupos tratados con compuesto MDL (N = 5 por grupo) . Alimentar conejos blancos de Nueva Zelanda, hembras, (Hazelton , -2.0-2.3 kg) alimento para conejo enriquecido con 1 % de colesterol (Purina #5322) con o sin 0.4% de un compuesto MDL. Solubilizar el compuesto M DL en 1 00% de etanol, rociar sobre el alimento y secar durante la noche en una capucha de humo químico. De manera alternativa, los compuestos MDL pueden incorporarse en el alimento para conejo de Purina. El alimento de control es rociado con etanol. Alimentar a los conejos con 1 00 gramos de alimento por día durante 70 días y permitir que esté disponible el agua ad libitu m . Los conejos (con ayuno durante la noche) se hacen sangrar (-2 mi) de una vena marginal de la oreja periódicamente para monitorear los niveles de colesterol de suero. Someter a eutanasia a los conejos en el día 70 mediante sobredosis de dióxido de carbono. Registrar los pesos del h ígado y corporales totales en g ramos. Registrar el consumo de alimento com o gramos»día"1. Usar alícuotas de suero fresco para qu ímicas clínicas, determinación de colesterol de lipoproteínas, concentraciones de substancias reactivas de ácido tiobarbitúrico (TBARS) y compuesto y metabolitos en suero. Congelar los hígados (alícuotas de -5 gramos) a -20°c para determinación de concentración de compuesto y metabolitos en un momento posterior. Disecar las aortas inmediatamente después de que se mata cada conejo. Cortar la aorta del arco ascendente a la bifurcación iliaca después del desbridamiento del tejido adiposo externo. Almacenar las aortas durante la noche en solución salina amortiguada con fosfato, pH 7.4, a 4°C hasta el desbridamiento final. Cortar la aortas abiertas longitudinalmente y manchar con Suda IV. Después del manchado , fijar en plano las aortas y cuantificar las áreas de lesiones sudanofílicas después de capturar una imagen de manera electrónica.

B. Qu ímicas clín icas Permitir que la sangre se coagule a temperatura ambiente durante 30 minutos. Obtener suero después de la centrifugación durante 1 0 min a 5°C a 3000 rpm en una centrífuga Beckman GPKR con un rotor GH 3.7.

Analizar el suero fresco mediante un autoanalizador COBA M I RA S (Roche Diagnostics) usando reactivos diagnósticos de Roche para colesterol total (CHOL, conjunto # 44334) y triglicéridos (TG, conju nto # 441 20). Calcular el colesterol y los triglicéridos como mg/dl.

C Ensayo de TBARS I niciar la oxidación de los lípidos del suero con CuSO4 para formar aldeh idos, tales como, malondialdehído (MDA) . Sobre la incubación con ácido tiobarbitúrico, detectar la absorbancia de los aldehidos a 530-540 nm. Medir las TBARS como sigue: mezclar 50 µl de suero con 50 µl de solución salina al 0.9% y 400 µl de una solución de CuSO4 5 mmol e incubar a 37°C durante 5 h. Parar las reacciones mediante la adición de 1 .0 mi de ácido tricloroacético al 20%. Adicionar 1 .0 mi de ácido tiobarbitúrico al 0.67% en hidróxido de sodio 0.05 N, mezclar e incubar las muestras durante 30 min a 90°C. Centrifugar las muestras brevemente para peletizar el material no disuelto y transferir los sobrenadantes a una placa de microtítulo de 96 cavidades. Medir las absorbancias a 540 nm usando un lector de microplaca Biotek modelo EL31 1 . Los nmoles de MDA producidos se calculan a partir de una curva estándar de 0 a 1 0 nmoles de MDA preparada de malonaldheído bis(dimetilacetal). Comparar las muestras de suero de los conejos tratados con las muestras de suero de los conejos de control que no recibieron ningún compuesto.

D. Cuantificación por H PLC de concentración de compuesto y metabolitos de suero e hígado Determinar las concentraciones de suero e hígado de compuestos padres y los metabolitos, bisfenol y difeno-quinona, mediante H PLC de fase inversa usando un sistema Waters 990 Powerline. Homogeneizar los hígados (1 gramo) con 5.0 mi de PBS, pH 7.4, usando un homogeneizador de tej ido Polytron en ajuste 5 durante 20-30 seg undos. Extraer homog eneízados de suero o h ígado como sigue: Ad icionar 1 00 µl ya sea de suero u homogeneizado a 2.0 mi de dietil éter:etanol (3: 1 ) al tiempo que se agita el tubo como torbellino. Tapar y centrifugar los tubos de muestra durante 1 0 min a 5°C a 3500 rpm en una centrífuga Beckman GPKR con un rotor GH 3.7. Transferir los sobrenadantes a tubos limpios y secar bajo N2. Reconstituir las muestras con 200 µl de acetonitrilo: hexano:acetato de amonio 0.1 (90:6.5: 3.5, por vol.). Entonces, inyectar 100 µl sobre una columna Waters Deltapak C1 8-300 A, y levigar con una fase móvil de 83% acetonitrilo: 1 7% agua a una velocidad de flujo de 1 .5 ml/min. Registrar las absorbancías a las longitudes de onda de 240, 254 y 420 nm . Calcular las concentraciones de los compuestos a partir de cantidades conocidas de compuestos padres auténticos después de la corrección por recuperación. Calcular las concentraciones como µg/ml de suero y µg/g de hígado.

E. Separación y cuantificación por HPLC de niveles de colesterol de subfracción de lipoproteína Separar las fracciones de lipoproteínas de VLDL, LDL y H DL en una columna de Sepharose 6H R (1 x 30 cm, Pharmacia) unida a un sistema Waters Powerline H PLC. I nyectar 50 µl de suero sobre la columna y levigar con solución salina amortiguada con fosfato, pH 7.4, a una velocid ad de flujo de 0.5 ml/m in. Adicionar el reactivo de colesterol (Roche Diagnostics, conjunto #44334, diluido con 20 mi de agua y entonces 20 mi de solución salina al 0.9%) a 0.2 ml/min al levigante de post co lumna e incubar en una bobina de reacción PFTE Kratos tejida (Applied Biosystems) a 37°C durante 5 min . Medir la absorbancia 500 nm . Cu antificar las subfracciones de lípoproteína como sig ue: (colesterol de suero total) x (% de área bajo la curva para cada subfracción) .

Además, los compuestos de fórmula (1 ) pueden usarse como aditivos antioxidantes qu ímicos en materiales orgánicos sometidos normalmente a deterioro oxidativo, tal como, por ejemplo, goma, plásticos, grasas, productos de petróleo y similares. En general , una cantidad conservadora de un compuesto de fórmula (1 ) , el cual es suficiente en concentración para inhibir el deterioro oxidativo del material a ser protegido, se mezcla con el material sometido a oxidación. Generalmente, la cantidad conservadora de un compuesto de fórmula ( 1 ) variará desde aproximadamente 0.01 % hasta aproximadamente 1 .0% en peso.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto de la fórmula en donde X se selecciona del grupo que consiste de

Y es un grupo tio, oxi o metileno; Z es hidrógeno o -C(0)-(CH)m-Q, en donde Q es hidrógeno o -COOH y m es un entero 1, 2, 3 o 4; Ri es alquilo de Ci-Ce; y R2, R3 y R4 son cada uno independientemente hidrógeno o alquilo de Ci-Cß; o un estereoisómero del mismo. 2. Un compuesto de la reivindicación 1 , en donde Ri es metilo o butilo terciario; R2 y R3 son cada uno independientemente hidrógeno, metilo o butilo terciario; R4 es hidrógeno o metilo; y Z es hidrógeno, acetilo o succinilo.

3. Un compuesto de la reivindicación 1 , en donde X se selecciona dei grupo que consiste de

4. Un compuesto de la reivindicación 3, en donde Z es hidrógeno, acetilo o succínilo; Ri es metilo o butilo terciario; R2 y R3 son cada uno independientemente hidrógeno, metilo o butilo terciario; R4 es hidrógeno o metilo.

5. Un compuesto de la reivindicación 4, en donde Z es h idrógeno.

6. Un com puesto de la reivindicación 1 , en donde Z es -C(0)-(CH2)m-Q, en donde Q es hidrógeno o -COOH y m es un entero 1 , 2, 3 o 4.

7. Un compuesto de la reivindicación 6, en donde R-¡ es metilo o butilo terciario; R2 y R3 son cada uno independientemente hidrógeno, metilo o butilo terciario; y R4 es hidrógeno o metilo.

8. Un compuesto de acuerdo a la reivindicación 2, en donde Z es tio.

9. Un compuesto de acuerdo a la reivindicación 2, en donde Z es oxi.

10. Un compuesto de la reivindicación 1, en donde el compuesto es Fenol, 2,6-bis(1 ,1-dimetiletil)-4-[(3,7-dimetil-6-octenil)oxi]-, (S)-.

11. Un compuesto de la reivindicación 1, en donde el compuesto es Fenol, 2-(1 ,1-dimetiletil)-4-[(3,7-dimetil-6-octenil)oxi]-, (S)-.

12. Un compuesto de la reivindicación 1, en donde ei compuesto es Fenol, 2-(1,1-dimetiletil)-4-[(3,7-dimetil-6-octenil)t¡o]-, (S)-.

13. Un compuesto de la reivindicación 1, en donde el compuesto es Fenol, 2, 6-bis(1 , 1-dimetileti l)-4-[(3,7-dimetil-6-octenil)tio]-.

14. Un compuesto de la reivindicación 1, en donde el compuesto es Fenol, 2,6-bis(1 ,1-dimetiletil)-4-[(3,7-dimetiIoctil)oxi]-.

15. Un compuesto de la reivindicación 1, en donde el compuesto es Fenol, 2-(1 ,1-dimetiletil)-4-[(3,7-dimetiloctil)tio]-.

16. Un compuesto de la reivindicación 1, en donde el compuesto es Fenol, 2,6-bis(1,1-dimetiletil)-4-[(7-hidroxi-3,7-dimetiloct¡l)tio]-.

17. Un compuesto de la reivindicación 1, en donde el compuesto es Fenol, 2,6-bis(1,1-dimetiletil)-4-[(3,7-dimetil-6-octenil)oxi]-, (R)-.

18. Un compuesto de la reivindicación 1, en donde el compuesto es Fenol, 2-(1 , 1-dimetileti I) -4-[(3,7-d¡meti l-6-octen i l)oxi]-.

19. Un compuesto de la reivindicación 1, en donde el compuesto es Fenol, 2.5-bís(1 ,1-dimetiletil)-4-[(3,7-dimetil-6-octenil)oxi]-, (S)-.

20. Un método para inhibir la progresión de aterosclerosis en un paciente con necesidad del mismo, comprendiendo administrar al paciente una cantidad anti-aterosclerótica efectiva de un compuesto de la reivindicación 1 .

21 . Un método para tratar un paciente para aterosclerosis, comprendiendo administrar al paciente una cantidad anti-aterosclerótica efectiva de un compuesto de la reivindicación 1 .

22. Un método para inhibir la peroxidación de colesterol LDL en un paciente con necesidad del mismo, comprendiendo administrar al paciente una cantidad antioxidante efectiva de un compuesto de la reivindicación 1 .

23. Un método para disminuir el nivel de colesterol del plasma en un paciente con necesidad del mismo, comprendiendo administrar al paciente una cantidad que disminuye el colesterol del plasma de un compuesto de la reivindicación 1 .

24. Un método para inhibir la expresión inducida por citocina de la molécula de adhesión de célula vascular-1 y/o molécula de adhesión intercelula-1 en un paciente con necesidad del mismo, comprendiendo administrar al paciente una cantidad inhibidora efectiva de molécula de adhesión de célula vascular-1 y/o molécula de adhesión intercelular de un compuesto de la reivindicación 1 .

25. Un método para tratar un paciente afligido con una enfermedad crónica inflamatoria, comprendiendo administrar al paciente una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la reivindicación 1 .

26. U n método de acuerdo a la reivindicación 25, en donde la enfermedad inflamatoria es asma.

27. Un método de acuerdo a la reivind icación 25, en donde la enfermedad inflamatoria es inflamación crónica .

28. Un método de acuerdo a la reivindicación 25, en donde la enfermedad inflamatoria es artritis reumatoide.

29. U n método de acuerdo a la reivindicación 25, en donde la enfermedad inflamatoria es diabetes autoinmune.

30. U n método de acuerdo a la reivindicación 25, en donde la enfermedad inflamatoria es rechazo de transplante.

31 . U n método de acuerdo a la reivindicación 25, en donde la enfermedad inflamatoria es angiogénesís de tumor.

32. Un compuesto de la reivindicación 1 para usarse como una substancia farmacéutica activa.

33. El uso de un compuesto de la reivindicación 1 para la preparación de una composición farmacéutica para inhibir la progresión de aterosclerosis.

34. El uso de un compuesto de la reivindicación 1 para la preparación de una composición farmacéutica para tratar aterosclerosis.

35. El uso de un compuesto de la reivindicación 1 para la preparación de una composición farmacéutica para inhibir la peroxidación de colesterol LDL.

36. El uso de un compuesto de la reivindicación 1 para la preparación de una composición farmacéutica para disminuir el nivel de colesterol del plasma .

37. El uso de un compuesto de la reivindicación 1 para la preparación de una composición farmacéutica para inhibir la expresión inducida por citocina de molécula de adhesión de célula vascular y/o molécula de adhesión intercelular-1 .

38. El uso de un compuesto de la reivindicación 1 para la preparación de una composición farmacéutica para una enfermedad inflamatoria crónica.

39. Un uso de acuerdo a la reivindicación 38, en donde la enfermedad inflamatoria es asma.

40. Un uso de acuerdo a la reivindicación 38, en donde la enfermedad inflamatoria es inflamación crónica.

41 . Un uso de acuerdo a la reivindicación 38, en donde la enfermedad inflamatoria es artritis reumatoide.

42. Un uso de acuerdo a la reivindicación 38, en donde ia enfermedad inflamatoria es diabetes autoinmune.

43. U n uso de acuerdo a la reivindicación 38, en donde la enfermedad inflamatoria es rechazo de transplante.

44. Un uso de acuerdo a la reivindicación 38, en donde la enfermedad inflamatoria es angiogénesis de tumor. RESU M EN La presente invención proporciona compuestos de fórmula (1 ), en donde X se selecciona a partir del grupo que consiste de (a), (b), (c), (d), (e) o (f) ; Y es un grupo tio, oxi o metileno; Z es hidrógeno o -C(O)-(CH2)m-Q, en donde Q es hidrógeno o -COOH y m es un entero 1 , 2, 3 o 4; Ri es alquilo de C^Ce; y R2, R3 y R4 son cada uno independientemente hidrógeno o alquilo de o un estereoisómero del mismo; útiles para el tratamiento de aterosclerosis y desórdenes inflamatorios crónicos; para inhibir la expresión inducida por citocina de VCAM-1 y/o I CAM-1 ; para inhibir la peroxidación de lípido LDL; para disminuir el colesterol del plasma; y como aditivos quím ico antioxidantes útiles para prevenir el deterioro oxidativo en materiales orgánicos.